EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

kterou xx mění xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Rady 93/85/XXX xx xxx 4. října 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx důvodům:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx brambory je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx., původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx stále xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx organismu, aby xx xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx jeho xxxxxxxxx a prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx jeho xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx při ochraně xxxxx organismu vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx vývoje xx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxx a aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx v přílohách xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx xx fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX) a polymerázová xxxxxxxx reakce (PCR), xxx x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx prvků xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jsou xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy pro: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxxxx xxxxxxxx potvrzené xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, která xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená touto xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/EHS xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx přijmou x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými státy xxxx obsahovat odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz učiněn xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Komisi znění xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx předpisů, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice vstupuje x xxxxxxxx třetím xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.

X Bruselu dne 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Markos XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Smith) Xxxxx xx al. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (C. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx a kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx laboratoří, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první screeningový xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx Xxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 směrnice 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční schéma xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného vodivého xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx považován za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2. VIZUÁLNÍ VYŠETŘENÍ XX PŘÍTOMNOST PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx poli zjistí xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx až xx xxxxx sezóny. Kromě xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx s příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx xxxxxxxxxx listy xxxxx i přes infekci xxxxxx rostou, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx místech xx omezený. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx spodní části xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx naleznete xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pletiva xxx měknutí v okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx v tomto xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s červenohnědými okraji. X&xxxx;xxxxxxxx době xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 hlíz xx 1 test. Intenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Použijte vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Tento xxxxxx mytí je xxxxxxxx užitečný (xxxx xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx v případě, že xx xx vzorku xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx izolace.

3.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci každé xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a testujte xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx korkovatět xx xxxx 2 dnů při xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx nádoby znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x&xxxx;xxxxxx xx dobu maximálně 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Schnutí x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků a růst xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; sterilovaný xxxxxxx) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx vzorek xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxxxxx xx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx pomalým odstředěním (xxx maximálně 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx mezi 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µm), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500 µl xxx xxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7 Je nezbytně xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo kontaminaci. Xx xxxxx i pro xxxxxxx na XX xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx zahradnických nůžek xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 xx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx dezinfikujte etanolem 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx papírem.

Shromažďujte části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3 Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx lze xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx vyšetřovací test XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx používán jako xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test by xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx skladovaných xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx ve stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často není xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx podle xxxxxxx 2, a nepovinně v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx alikvotní části xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx mikroskopická xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx s 10 okénky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl – pro xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx stejné množství xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx okénka x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší okénka xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte kapky xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx lze potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx dobu (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX testu:

i)	Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx pracovní xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxxxx 4.1 písm. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Pokryjte xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx ředěním protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Umyjte ponořením xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Tween (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký papír. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7 Napipetujte 5–10&xxxx;µx 0,1M fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny do xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a kolem xxxxxx. U vzorků s žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 polí mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené v určeném xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx pozitivní buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx reagující saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Výsledek XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx nejméně 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24 nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx PD 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx dobu 8 minut xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx noc při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8 minut na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající roztok xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	okénko 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6 Nechte sklíčka xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx obsahující 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Sigma X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx roztok xxx skladovat, xxx xxx by xx xxxxx jednou zmrazit x&xxxx;xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xxxxxxxx xxxxx lyzozymu 50 μx proteinázy X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 minuty. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x hybmixu (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx v hybridizační peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4 Připravte xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte po xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte xxxxxxx xx horkou xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx přes xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure xxxxx = UPW), 1 l 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x hybmix a 833 ml XXX). Předinkubujte xxxxxx x&xxxx;xxxx ve vodní xxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx podložní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx při teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka krátce xx XXX a položte xx na xxxxxxxxx xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx být xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru a částí xxxxxx se xxxxx xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Nutné je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. m. subsp. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, abyste xxxxxxxxx kontaminaci vzorku xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxx kontaminaci, připravte xxxxxxxxx kontroly v odděleném xxxxxxxxx než vzorky, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx metodou XXX, uvedenou v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [pH 8,0]) xx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o teplotě 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x&xxxx;10 xX Tris HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx DNA® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X pro xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C a odstraňte x&xxxx;xxxxxx etanol.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15 000 g po dobu 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx stát nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou usazeninu xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (např. Xxxxxx XXxxxx Plant Kit) xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx purifikaci XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v prostředí, xxx nehrozí kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit xxx počátečním xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi DNA x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte vhodný xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 minut, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx gelu a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx podezření na xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx vodě, ale x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, pokud xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx původně xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx použít i na xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a poskytují xxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení nebezpečí xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx dodatek 8.

7.1 Rozdělte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx metod (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx pouze rostliny xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx zajistili úplné xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25 lilků xx vzorek.

7.2 Před inokulací 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx nezalévejte, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx děložními xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx šikmý xxxxx xxxxxx xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký přibližně xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx sterilní vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx méně xxx 23 X). Vzorek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxx xxxxxxxx 105 až 106 buněk xx 1&xxxx;xx známé xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C a optimální xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx zamezili xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx i růstové komory xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx druhý.

7.8 Pravidelně xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Počítejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. x. subsp. xxxxxxxxxxx působí x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx vzhled. Nekrotická xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx žlutý okraj. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a E. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx var. foveata, xxxxx i populace saprofytických xxxxxxxx. Zejména Erwinia xxxxxxxxxxxx může způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx velmi xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx celé xxxxxxxx. Xxxxxx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx test rozliší X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx (macerace xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX xx šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxxxx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Identifikujte xxxxx kultury podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx stát, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx infekce dokonce x&xxxx;xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. SUBSP. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx xxxxx ji xxxxxxxx z pletiv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx izolace X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx použití selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx ze xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx by xxx provedena podle xxxxxx 3.1.3.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx desetinná xxxxxx suspenze 106 xxx na xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4053 xxxx XX 406). Abyste vyloučili xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly naprosto xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90 mm – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx objem xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx rozetření xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx pelety na xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx téhož xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, tento xxxxxx xx závěr xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx miskami x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx kolonií xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx třech xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním po 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných C. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx podobné X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (složení xxxxxxx v dodatku 5):

živný xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

agar x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonií X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx zaručení čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech.

V případě potřeby xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx testy

Zjistěte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Xxxxxx (1987).

Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx by měla xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx provádět za xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7 % NaCl	–
Tvorba xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxx, jestliže XX xxxx kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx suspenze xxxxx v uzavřených mikrozkumavkách x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx xxx teplotě –16 až –24&xxxx;°X xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx specific xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx jsou xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx stejné reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. m.subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx xxxxx (Smith x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx izolované látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24 °C xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx se xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

10.4 Izolujte x&xxxx;xxxxxxx s příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2&xxxx;xx nad místem xxxxxxxxx. Rozdrťte a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx ze suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx teplotě 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-Geral xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Diagnóstico de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 nebo XX 406] xx xxxxxxxxx médiu MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx buněk xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600 nm.

Odstraňte xxxxxxx xxxxxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x&xxxx;xxxxx slupkou, x&xxxx;xxxxx xx jisté, že xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

Zpracujte xxxxxxx xxxxxxxx jako obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx proto opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx xxxxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx extrakci

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 g
Polyvinylpyrrolidon-40 000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx resuspenzi x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 min.

2. Pufry xxx IF test

2.1 Pufry xxx IF (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXX), pH 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2.2 IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček xx XX testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v jednom xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha xxxxxxx xxxx na sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxxx a
	s	=	plocha xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx okénku a
	F	=	zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Yeast extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte pH xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °C xx dobu 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v zásobních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% ethanolu, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 buněk C. x. xxxxx. sepedonicus xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx s interní PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- ctc xxx xxx xxx xxx gaa aa-3′
Primer XXX -R	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx ata xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Primer XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx cct acg xx -3′

Předpokládaná velikost xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z interní XXX kontroly 18X xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer PSA-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µM
Primer XXX-X (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx NS-8-R (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta při xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx teplotě 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program je xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) xx), x), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	50 ml

2.2 Nakládací xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Tris Xxxxxx XXXX (XXX) pufr, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před použitím xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metodami izolace XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Cms XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx gca xxx xxx tgc xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 kapek 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX MĚŘIČ XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx jej xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 mM (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx dvojmo 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx sensitivní xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne:		14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24 °C,
	noc:	15 °C.

Vhodné xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981) (1)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu amonného x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx rozetřete xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx do xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené nádobě xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte a uložte.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a nechte působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95&xxxx;% etanolu tak xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx a vysušte savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx methods xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx XX xxxxxx xxx xxx detection xx xxxxxx ring xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. a K. Rudolph, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx scheme xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, X. X. a P. W., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. et Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Pastrik, K. -X. a R.A. Rainey. 1999. Identification and xxxxxxxxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by multiplex XXX xxxx coamplification xx host DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Hennesy, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx using the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. a A. X. L. Akkermans, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx testech) xxxxx metod xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx být xxxxxxxxx potvrzeno xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, které xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx možno rostliny, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx výluh x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx není xxxx uvedený xxxxxx xxxxx ukončen.

Zadržení hlíz xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

2.

X xxxxxxx potvrzení xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx v odstavci 1, a

—	vzorek xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo rostliny, a

—	izolované xxxxxxx organismu

nejméně xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo rostliny xxxxxxxxx v místě xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a),

—	místo/a xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), včetně xxxx, xxxxx užívají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx rostliny označené xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx zařízení, vozidlo, xxxxxxxx, xxxxx, nebo xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxx přijít do xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, které se xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx předměty xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxx sesterský xxxx xxxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx rostlinám, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx negativní, zamoření xxxx jako pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx nebo xxxxxxx xxx xxxxxxx testování xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx zohlednit tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx brambory nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx odrůdy xxxxxx brambor,

—	druh/typ (konzumní, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx členského xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx stát, v němž xxx xxxxxx potvrzen, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx státu/státům xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx např.:

—	název xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele a příjemce,

—	datum xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx všech xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx zamoření,

—	stručný popis xxxxxxxxx provedeného k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx xxxx produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx a u sadbových brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx zamořená, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Komise xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx zemědělskou xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná opatření, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx označených za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx států xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx souhlasem odpovědných xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx určených ke xxxxxxxx, balených xxx xxxxxx dodávku x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx nevyžaduje změnu xxxxx, v místě s vhodným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx určenými x&xxxx;xxxxxxxxx xxx ve xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx v případě, xx xx tak xxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx likvidaci odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx a dezinfekci předmětů xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx se xxxxxxx pod xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxx státy xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx plodiny, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, je povolena xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx postupem xxxxx přílohy X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po příslušném xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx použijí buď xx sadbu xxxx xxxx konzumní brambory x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř pěstitelských xxx následujících po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx xx xxxxxxx a udržuje xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx;

—

x prvním sklizňovém xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, že xxxx xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx v průběhu xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

b)

na xxxxx ostatních polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, že xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx produkce jiných, xxx těch, xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných sadbových xxxxxxx, buď xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx brambory,

—

v každém xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx každém xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a dezinfikují xxxxx xxxxxxx a pomocí xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x jednotkách xxxxxxxx xxxxxxxx, kde xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx substrát,

—

se xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx xxxxxx produkce xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na odstranění xxxxxxxxx a na odstranění xxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx přinejmenším xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty a dezinfekce xxxxxxxxx jednotky a veškerého xxxxxxxx a dokud xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx udělen souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx brambor,

—	se brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx brambor, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx bodu 3;

x)

xxxxxxxxxx xx označení zamoření x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx období:

—	zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx skladují xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, jakož x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx porostů xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx po xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx článku 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zásobami xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx systému očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx zásobami xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx program xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx zlikvidují xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx prostředí, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx na místo x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby nehrozilo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi a ostatním xxxxxxxx státům.

xx)

Tekutý xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx xxxxxx odpad xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. x).

Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx po xxxx xxxxxxx 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx způsobem podléhajícím xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx kontrolou, xxx xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx do styku xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx těchto opatření xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx xx odpad xxxxxxx s manipulací, likvidací x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.