Plné znění - 32006L0056

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx al.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx různé postupy, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, které xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx karanténu rostlin.

Testovací xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení kontaminace xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (IF nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx v testování podle xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx důvodu xx xxxxxxxxx XX test xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 směrnice 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx je určen xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx biologickém principu, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogenu, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx není dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX PŘÍTOMNOST XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx příznaky xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx až xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být příznaky xxx xxxxxxxx na xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx omezené xx okraje xxxxx. Xxxxx infikované listy xxxxx i přes xxxxxxx xxxxxx rostou, x&xxxx;xxxx xxxx v infikovaných místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné snímky xxxx xxxxxxxx naleznete xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx cévních na xxxxxxxx konci hlízy xxxx mít nepatrně xxxxxx zbarvení než xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x&xxxx;xxx sloupky xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony bakterií. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné příznakům xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx době se x&xxxx;Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx hnije s prstencem xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poškození x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx dutin x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx řady xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3.   PŘÍPRAVA XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný bramborový xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx v případě, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx xx provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Poznámka:

Všechny xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dejte xxxxxxx a testujte odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx korkovatět xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx v 4–10 °C) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do nepoužitých xxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového konce xxxxxxxx, pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx v nádobě bez xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx a růst xxxxxxxxx v průběhu skladování xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v mixéru (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxx použit XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx použití.

3.1.4   Dekantujte xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5   Zahustěte xxxxxxxxxxx frakci odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx C. x. subsp. sepedonicus, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) nebo xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxxxx během testování xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 až 48 hodin.

3.1.7   Je nezbytně xxxxx, aby xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx platí x&xxxx;xxx xxxxxxx na XX xxxxx a všechny testy.

3.2   Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 cm xx xxxxxx strany každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx papírem.

Shromažďujte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °C xxxx xx xxxx 16–24 hodin chlazené, anebo

b)

okamžitě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx lze xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx jako xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx další vyšetření xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky proti xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dochází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat v pracovním xxxxxx (WD) v blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx xxx prováděn xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktech. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, a nepovinně v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx mikroskopická xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 okénky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx (vzorků).

4.1   Připravte xxxxxxx xx test xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících okének x&xxxx;xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µl – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhou řadu xxx použít jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) nad xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx v suchém xxxx xx co možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX testu:

i)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx resuspendované pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

4.3.1   Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2   Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Umyjte ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhký papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx sklíčka. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx s žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx v určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx lepší. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se může xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3   Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx reagující saprofytické xxxxxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety (dodatek 4). Výsledek XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx xx považuje xx negativní. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte validované xxxxxxxxxx specifické xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontroly připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx ml (xxxx. xxxx NCPPB 4053 xxxx XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1   Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96&xxxx;% xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 v 50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Sigma X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, pH 8,0). Xxxxx roztok xxx skladovat, xxx xxx xx se xxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX CaCl2, pH 7,4) xx každé xxxxx a inkubujte při xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x&xxxx;45 μx xx 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx každého xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7   Připravte 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l sterilní vody (Xxxxx xxxx water = XXX), 1 l 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx každou x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince s 1x xxxxxxxx při teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx UPW a položte xx na filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1   Prohlížejte xxxxxxx ihned x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx imerzí. S filtrem xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx u pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3   Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x&xxxx;XX testu.

5.3.5   V úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

i)

Výsledky XXXX testu jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 buněk X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte validovaná XXX činidla x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. XXX xxxx by měli xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX ze xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	pokud xxxxx xxxxxxxxxx xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [pH 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxxxx extrakt xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Tris XXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X xx dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100 µl Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně míchejte xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7.	Přidejte 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx a vytvoření xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500 µl 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15 000 g po dobu 10 minut xxx 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu v 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b)   Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Kit) xx xx mohly xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2   Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx také interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3   Přidejte do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx PCR xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1   Rozdělte xxxxxxxxx PCR elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx směsi XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx l) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou xxxxxxxxxxx xxxx a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx pod UV xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, pokud xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx získán xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx l ml xxxxxxx k extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx měly xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx testované xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2   Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx napětí buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rostlinu xxxx xxxxx prsty a pipetou xxxxxxxx na stonek xxxx děložními xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2   Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx asi 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx začněte xx peletové xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx mezi rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx vodní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx možno x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké vlhkosti (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx růstové komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx zajistěte xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole a jiné xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vzorku xx druhý.

7.8   Pravidelně počínaje 8. dnem xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx vyvinutí xxxxxxxx, xxx větší xx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx listů x&xxxx;xxxx xxxxxx před ní.

Vadnutí xxxxx také způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx hub xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv hlízy. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a E. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx chrysanthemi, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx velmi xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus. Jediným xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx chrysanthemi. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Můžete také xxxxxxxxx Gramovo barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx viz 3.1.3). Xxxxxx listů a stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx IF xxxx XXX xx šťávě x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) média (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Identifikujte xxxxx kultury podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, proveďte test XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx je xxxx xxxxxxxxx, měla by xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, z těchto xxxxxxx xxx izolovat xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx nejsou xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx testované xxxxxxxx xxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX C. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx přerůst rychle xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx je izolace xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety z pupkové xxxxx hlízy nebo xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je třeba xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla by xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxxxxx vyloučili xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx na médium

8.1.1   Ze 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx podmínkám Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx roztěrů.

Poznámka:

Alternativním xxxxxxxx xx rozetření počátečních 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx misku s agarem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nástroje xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx zopakujte x&xxxx;xxxxx xxxxxx, a tím xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx v temnu při xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4   Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo následnou xxxxxxxxxxxx by se xxxx pěstovat xx XXX médiu; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx provést xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, tj. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

agar x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

8.2.2   Znovu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx barvy xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx v průměru 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx testování.

8.2.3   Identifikujte xxxxxxxxx kultury (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Klementa x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Veškerá xxxxx xx xx xxxx inkubovat při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx testy se xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Testy	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxx	Xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx škrobu	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx salicínu	–
Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx/xx v pufru xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx série xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku nebo xxxxx xxxxx lázni xxx teplotě 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xx použití.

c)	Pro xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus specific xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX stejné xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx postup XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z těchto kyselin, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. m.subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

10.2   Naočkujte 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3   Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). U čistých xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 týdnů xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 týdny xxx xxxxxxxxx příznivých xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se po 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována za xxxxxxxxx formu C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fostátového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xx XXXX a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

---

---

---

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxx (vyšetřovacích testech) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto xxxxx xx mělo xxx xxxxxxxxx potvrzeno xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: — xxxxxxx xxxxx, které xxxx součástí xxxxxx, x&xxxx;xxxxx možno xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x — xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx ukončen. Zadržení hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x — xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x — xxxxxxxxx xxxxxxx organismu nejméně xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx kontaminace xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx: — xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a), — místo/a xxxxxxxx, které/á xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx označeným xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx užívají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, — xxxxx xxxx xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx během období, xxx xx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě produkce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, — xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx z míst xxxxxxxx xxxxxxxxx v odrážkách xxxx, — xxxxxxxx xxxxxxxx, vozidlo, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x), — xxxxxxxx hlízy nebo xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a staveb, — v důsledku xxxxx xxxxxxxxx v článku 6 hlízy xxxx rostliny, které xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx k hlízám xxxx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx výsledek xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx souvislosti. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a klonově příbuzných xxxx nebo xxxxxxx xxx provést xxxxxxxxx xxxxx, x — xxxxx/x produkce hlíz xxxx xxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, kde xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, — xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: — Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx: — xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor, — druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx atd.) a v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. — Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných členských xxxxx xxxx xx xxxxxx členského xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx států, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx oznámit dotčenému xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako např.: — název xxxxxx partie brambor, — název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, — xxxxx xxxxxxx xxxxxx brambor, — objem/velikost xxxxxxx partie xxxxxxx, — xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx číslo rostlinolékařského xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx. — Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx případě: — datum xxxxxxxxx zamoření, — stručný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx, — xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx, — xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a u sadbových xxxxxxx xxxxxxxxx, — xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx, která nebyla xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx nacházejí se x&xxxx;xxxx xxxxxxx, — xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx: — xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx — xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx — xxxxxxx, xxxx — xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dodávky xx xxxxxxxxxxxxxx závod x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že x&xxxx;xxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx — xxxx opatření, xxxxx bylo prokázáno, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům. Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V této směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx hlíz xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxxxxxx států xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx: — xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx a použití, xxxxx nevyžaduje změnu xxxxx, v místě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx na likvidaci xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze ve xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxx — xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx odvozových xxxxxxx, xxxx — xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xx xxxxxxx schválení výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx a dezinfekci předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx rozumí xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod kontrolou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx produkce xxxxxxxxxx xx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x): x) xx xxxx označeném xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx x) — xxxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření, — se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, x — xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu; — v xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod podmínkou, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx postupem xxxxx přílohy X; — xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx příslušném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx alespoň xxx roky, pokud xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx xx) — xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx označení xxxxxxxx — xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x — xxxxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx; — x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx brambor následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx při úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxx xxxxxxxx pěstitelských xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, je xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X; x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucími xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx: — x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, rostliny xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx — xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, — x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx pod xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 4.1, a to xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory, — alespoň xx dobu třetího xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, — x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor postupem xxxxx přílohy I; c) neprodleně xx xxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xx prvním následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a dezinfikují xxxxx potřeby a pomocí xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3; x) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, — xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx a dokud xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx brambor, — se xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx z minihlíz xx mikrorostlin získaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: x) xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx bodu 3; b) neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx pěstitelských xxxxxx: — xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx skladují xxxxxxxxxx hlízy xxxx xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, jakož x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, — xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx oblasti xxxx použita xxx xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx podle článku 5 odst. 1 písm. x), — xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx uvnitř xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zásobami xxxxxxxxx xxxxxxx xx nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx zásobami xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, — xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; x) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xx náhradu xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu:

x)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx odpad související x xxxxxxxxxx (včetně půdy, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx: — xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxx x xxxxxx být izolován xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx — xxxxxxxx, xxxx — xxxxxx opatřeními, pokud xxxx prokázáno, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

xx)

Tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx likvidovány xxxxx xxxx. x). Pevný xxxxx musí xxx xxxxx: — xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, nebo — xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a pod xxxxxx kontrolou, tak xxx nehrozilo xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, že xx xxxxx xxxx xxxxxx do xxxxx xx xxxxxxxxxxx půdou. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx na odpad xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxx.