EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/ES

xx xxx 12. června 2006,

kterou xx xxxx přílohy xxxxxxxx Rady 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, x xxxxxxx článek 12 uvedené xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxx. sepedonicus (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx stále vyskytuje x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a prováděla xx xxxxxxxx opatření za xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx několika xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	V důsledku xxxxxx xxxxxx se xxxx xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, jsou xxxxxxxxxxx jak x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) a polymerázová xxxxxxxx xxxxxx (PCR), xxx i zlepšení různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx zjišťování x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, jsou xxx xx vypracovány xxxxxxxx xxxxxxxx pro: xxxxxx xxxxxxxx testovaných xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx potvrzené xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a příslušné xxxxxxxx xxxxxxx, opatření, xxxxx xxxx xxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx prohlášena za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx odpovídajícími xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice vstupuje x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx unie.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx je xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 12. xxxxxx 2006.

Za Komisi

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, s. 2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx et xx. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Spieckermann xx Kotthoff) Davis xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro různé xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx a kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx v dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci Xxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx negativní, pak xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx Cms.

Z xxxx důvodu xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být doplněn xxxxxxx patogenu, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní kontroly x&xxxx;xxxxx sérii testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx bezpříznakových rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx nebo se xxxxxx s příznaky xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx infekci xxxxxx rostou, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých pletiv xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx sýrové xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko pupkové xxxxx a mohou xx xxxxxxxx xxxxx na xxxx prstenec. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx k druhotnému xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx vede x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Použijte xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx oschnout xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx vyžadován) pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx xx vzorku xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xx provádět XXX test xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně.

Pokud xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo xx xx xxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx a měly xx být xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx v 4–10 °C) xx do ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výkrojků x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx bránit zjištění xxxxxxxxxxx bakterie způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx s dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250 mm; sterilovaný xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Pokud xx být xxxxxx XXX xxxx, doporučuje xx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5 Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, aniž xx xx rozvířila peleta.

3.1.6 Resuspendujte xxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx 500 µl pro xxxx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx referenční xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí x&xxxx;xxx xxxxxxx na XX xxxxx a všechny xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, měly xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx populace, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 cm xx xxxxxx strany každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx následujících xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx dobu 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením částí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx není možné, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo maximálně 24 hodin při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx části. Jednu xxxxxxxx udržujte během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx IF xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX test a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx pro dokončení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pro každou xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx je stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxx. Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx extraktech. V případě xxxxxxx může být xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx skladovaných xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 okénky o průměru xxxxxxx 6 mm.

Proveďte test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro větší xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx zvyšte) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) nad xxxxxxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx protilátek.

V případě xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v suchém xxxx xx co možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX testu:

i)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. V první xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx pracovní xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx oddílu 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. ii)

	Pracovní xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx papír. Pokryjte xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx ředěním protilátek. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx okénku xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx množství použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém papíru xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v úvahu.

Při podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Výsledek XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 × 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx považuje xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. TEST XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový test xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86 °C.

Jako negativní xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo PD 406) v 0,01 M fosfátového xxxxx (PB) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíčka s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního materiálu xxxxxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx každého xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky a odstřeďujte xx dobu 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μl 96&xxxx;% xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 minut.

5.1.4 Odstřeďujte xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (v 0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. V případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Prázdné	Prázdné	Prázdné	Vzorek 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx sušičkou sklíček xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Tris-HCl, 50 xX XXXX, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx roztát. Xxxxx xxxxxx xxxxx pokryjte xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx do demineralizované xxxx, xxxxx jednou, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 mM Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx pokaždé xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Předinkubujte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4 Připravte xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl na 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx po xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx na xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6 Přikryjte xxxxx xxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l sterilní vody (Xxxxx xxxx water = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167 ml 3x hybmix a 833 ml XXX). Xxxxxxxxxxxxx každou x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx krycí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx v kádince s 1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx sklíček xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx UPW x&xxxx;xxxxxxx xx na xxxxxxxxx xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) musí být xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v okénkách testovacích xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, neberte v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx z jakékoli kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX test xxxx xxxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, je xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx do vzorku xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány s negativním xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti a přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte validovaná XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte vhodná xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;XXX) xx xx mělo xxxx zacházet jako x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx jasné, jestli xxxxx k přenosu DNA.

PRC xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste zabránili xxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx enzymatických reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [pH 8,0]) xx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100 µl xxxxxxxxxx extrakt ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lyzozymu xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X po dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1 ml 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na ledu xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500 µl 80&xxxx;% etanolu (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut při 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx etanol.

14.	Nechte xxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX (např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Kit) xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného protokolu (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu DNA xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX barvením x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx x) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx po obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx s neštěpenou x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX primerů (oddíl 9.3).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, pokud xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx získán xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx více negativních xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx k extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx základní konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx lilku jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx rostliny xx fázi 2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx napětí buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxxx na stonek xxxx děložními lístky x&xxxx;xxxxxx pravým listem xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí sterilního xxxxxxxx xxxxxxxx šikmý xxxxx xxxxxx xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx začněte xx peletové kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx sterilní vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4 Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx méně než 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx známé xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx možno x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx sterilním xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx dobu xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C a optimální xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx ve skleníku xxxx růstové xxxxxx xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx je vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx před xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx mohl přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. dnem prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Počítejte xxxxxxxx vykazující příznaky. X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx ochablost. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, tím větší xx naděje na xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx vnímavější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv xxxxx. Xxxxx k nim Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx způsobit xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx podobné xxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je zčernání xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxx xxxxxx vadnou celé xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx za xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx a stonků xxxxx vejcoplodého dezinfikujte xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX na xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a potvrďte xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, z těchto xxxxxxx xxx izolovat bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, xx je X. x. subsp. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou patogenity (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx z pletiv vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx izolace xxxxx x&xxxx;xxxxxx pletiva xxxxx xxxx stonku (oddíl 3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx a vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx hlízy nebo xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u nichž xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF/PCR složených xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx ml X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx by se xxxx před použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx rozetřít 100 µl x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90 mm – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx roztěrů.

Poznámka:

Alternativním xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx nástrojem a následné xxxxxxx téhož nástroje xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční kontrola xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx miskami x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx počítáním po 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx jsou xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubujte xxx teplotě 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx roste xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx během 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx jsou smetanově xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte zkoušku xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx použití xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě potřeby xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně xxxxxxxx xxxx nepřítomné v C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx inkubovat xxx 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) testy	Inertní xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx při 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza xxxxxx	– xxxx slabá
Tolerance 7 % NaCl	–
Tvorba xxxxxx	–
Xxxxxxxx katalázy	+
Tvorba X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– nebo slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2 IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx XX (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX postup (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxx, jestliže XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx xx xxxxxxxx vodě (Ultra xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxx lázni xxx teplotě 100&xxxx;°X xx xxxx 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx potřeby můžete xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx čerstvě připraveného XxXX do xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze potom xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Boer, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4 FISH xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx FISH xx pozitivní, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx pro xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. v rozmezí 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3 Inkubujte xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7.8), xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 týdny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx se xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Rozdrťte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx xxxx 3–5 xxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Station de Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx prostřednictvím slabě xxxxxxxx xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx slupkou, o které xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx proto xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx proveďte xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, FISH x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx bramborových xxxx xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx pufr xx fyziologickém roztoku (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 k pufru xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx v okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx jamkami x
	x	=	xxxxxx xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x atd.)

3.

Vypočítejte počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus

a) Obecná xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem a minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = YGM)

Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) v 96 % xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Po přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx při skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2 g
D-manit	5 g
K₂HPO₄	2 g
KH₂PO₄	0,5 g
MgSO₄.7H₂O	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 M NaOH, xxxxxxxxxxxx v 50 % xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1&xxxx;xxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované protokoly x&xxxx;xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx s interní PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx ggg xxx gaa xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx xxx gtt xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx ctg xxx xxx -3′
Xxxxxx NS-8-R	5′- xxx xxx xxx xxx cct xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu z interní XXX kontroly 18S xXXX = 377 xx (xxxx NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 µl
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx NS-7-F (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx pro PCR

Postupujte xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 cyklů:	ii)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °C (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 minut xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx xx), xxx) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX po inkubaci xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Acetát XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

(1) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX bude xxxxx xxxx optimalizace koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx cat xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx přibližně 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

iv)	Poznámka: Alternativní fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx EUB 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx voda XXX	50,1	200,4
3x hybmix	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Během xxxxxxx chraňte před xxxxxx slunečním zářením xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přepichujte xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 dní) xx sterilního xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (1)

Roztok xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx vody.

Smíchejte xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	300 ml

Pevné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v misce. Xxxxxxx do vody x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx a uložte.

Ředění: 1:10 pro přípravu xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx a nechejte xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx methods xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, R. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains using xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx detection xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx potato. XXXX Bull., č. 17, 1987, xx. 1–10.

8.	Jansing, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx of x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. appl. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. A determinative xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Lelliott, X. X. a P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in potato xxxxxx. XXXX Bull., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx spacer region xxx xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, B., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Specific detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ssp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, C. S., 1959. Xxxxxxxxxxx studies xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Corynebacteria. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Exp. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, A. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 pp.

21.	Skerman, X. X. D., 1967. A guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, D.E., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx xx test xxxxxxxxxxxxxxxx between laboratories: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. R.; Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx xx vyšetřovacím xxxxx (vyšetřovacích xxxxxxx) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx potvrzeno nebo xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxx xxxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx vyšetřovací test/y, xxxx. imunofluorescenční sklíčka, a

—	všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a vhodným způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx organismu

nejméně xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupu xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě produkce xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx období, xxx se xxxxx xxxx xxxxxxxx označené xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx místě xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx a dezinfekcí xxxxxx xxxxxxxx a staveb,

—

v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vztah x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, které xxxx označeny za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x), a u nichž se, xxxxxx výsledek xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx, zamoření xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, alespoň:

—	název xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) a v případě xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z jiného xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, v němž xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx státu/státům informace xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx a kopie xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx provedeného k zjištění xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a u sadbových brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx oblasti, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx nacházejí se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s potvrzeným/i xxxxxxxx/x, xxxxx xx Komise xxxxxxxx vyžádá.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx schváleném místě xxx likvidaci odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostřednictvím přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx prokázáno, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx opatření x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx zlikvidovat xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx vhodná xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx dotyčných xxxxxxxxx států xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, v nichž se xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxx, xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx nevyžaduje xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx xxxxxxx xxxxx manipulovat xxxxx v případě, že xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx využití nebo xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx metodami pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Opatření, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo či xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, pro xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx povolena xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a sklizené hlízy xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

—

ve xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx příslušném xxxxxxxx cyklu, který xxxx činit alespoň xxx xxxx, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx brambory, se xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx sadbu nebo xxxx konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx pěstitelských xxx následujících xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, a

—	pozemek se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx období upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx produkce na xxxxx nebo konzumní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx ostatních polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, xx xxxxxx spojené x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se žádné xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx osivo nebo xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx mohou xxxxxxxx xxxxx xxxx konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx smí xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány xx xxxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx těch, xxxxx xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx buď xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roku následujícího xx označení xxxxxxxx xx xxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx xxxxxxx brambory, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx nebo jako xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx případně přítomných xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx I;

c)	neprodleně xx xxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xx xxxxxx následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxxx xxx produkci xxxxxxx vyčistí a dezinfikují xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

d)

v jednotkách xxxxxxxx produkce, xxx xx možné úplně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx žádné hlízy, xxxxxxxx ani xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a na xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty a dezinfekce xxxxxxxxx jednotky a veškerého xxxxxxxx a dokud následně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, členské xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx používány x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx hlízami xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx k výsadbě xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx oblasti xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx po sklizni xxxxxxxxx brambory na xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx zásobami sadbových xxxxxxx od nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xx náhradu všech xxxxx xxxxxxxxx brambor xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující ustanovení, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx slupek) x xxxx xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx a jiného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx likvidací xx xxxxxx schváleném místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx prostředí, xxxx. prosáknutím na xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx xxxxxx.

ii)

Xxxxxx odpad: xxxx likvidací musí xxx xxxxxx odpad xxxxxxxxxx na povrchu xxxxx částice podroben xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx. i).

Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx likvidací, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx způsobem podléhajícím xxxxxxxx schválení a pod xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx půdou. Xxxxxxxxxxx těchto opatření xx xxxx oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx se použijí xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx partií.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.