EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/56/ES

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS xx xxx 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto důvodům:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx xx., původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx xxxxxxxxx jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření xx xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx vývoje xx xxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v přílohách směrnice 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx postupy, xxxx xx fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH) a polymerázová xxxxxxxx xxxxxx (PCR), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx potřebné pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx oznamování xxxxxxxx potvrzené xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a příslušné xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x xx vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená touto xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a srovnávací xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Tyto předpisy xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx vyhlášení v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx unie.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx je xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Markos XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. SEPEDONICUS (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a kontrolních materiálů xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx a všechna opatření xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx být uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na infekci Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s podezřením z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx patogenu, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx je X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx sérii xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX VYŠETŘENÍ XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx sezóny. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být příznaky xxx kontrole xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované listy xxxxx i přes infekci xxxxxx xxxxxx, i když xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx a dokonce xxxxxx xxxxx eventuálně odumřít. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx naleznete xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx cévních na xxxxxxxx konci xxxxx xxxx mít nepatrně xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Prvním dobře xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx sýrové xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx mohou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují na xxxxxxx xxxxx praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poškození x&xxxx;xxxxxxx vnitřních dutin x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxxxxxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede k zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně použít x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx níže uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy oschnout xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx v případě, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx výkrojky vodivého xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xx provést vizuální xxxxxxxxx této hlízy xx xxxxxxxxx hlízy xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by měly xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx v nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx skladování xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (přibližně 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx po xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx za použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxx použit XXX test, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte jej xxx pomalým odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě xxxx 4–10 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx na C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx účely. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx extraktu, zajistěte xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a vzorky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí x&xxxx;xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a všechny testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx dezinfikujte etanolem 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle následujících xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte xxxxx xxxxxx jedním z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx zalijte části xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx částí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher nebo Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (měsíce), xxxxx xx nutné xxxxx testování.

4. IF XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx použít XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx prokázána jeho xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx vyšetřovací test XX xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx používán jako xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx mít XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx prováděn xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx často není xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 2.2).

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx mikroskopická xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx o průměru xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15 µl – xxx větší xxxxxx objem zvyšte) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx měřené standardní xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka před xxxxxx použitím skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx co xxxxx xxxxxxxxx dobu (maximálně 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx IF xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx v IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 písm. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na test xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) nebo komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx imersí při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (mimo xxxxxx sklíček) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Výsledek XX je pozitivní x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx povinné další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx IF testu xx negativní pro xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml (xxxx. kmen NCPPB 4053 nebo XX 406) v 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíčka s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx všechny eubakterie xxxxxxxx ve vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Wullings x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx v 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx a inkubujte xxxx noc xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μl 96 % xxxxxxx. Promíchejte protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut na 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 M PB (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx sklíčko, x&xxxx;xx neředěný a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (v 0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X po xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx množství 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu opakovat, xxxxxxxxx etanol odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění na xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	okénko 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	okénko 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Sigma X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento roztok xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx lyzozymu x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom ponořte xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 μl xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 v pufru (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, pH 7,4) do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% etanolu xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační peci xxx teplotě 55&xxxx;°X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl na 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx po xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx plotnu xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6 Přikryjte každé xxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx sklíčka do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx při teplotě 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l sterilní vody (Xxxxx pure water = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167 ml 3x hybmix x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Předinkubujte každou x&xxxx;xxxx ve xxxxx xxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx dobu 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák sklíček xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx XXX a položte xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každé xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH testu

5.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx pro fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx být lepší xxx u pozitivního kontrolního xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, neberte v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, ačkoli xxxxxx xxxx xxxxx xxx x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx testu XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx použití FITC xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx kontrolách a nejsou xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx pravděpodobně infikované Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX TEST

Principy

Použije-li se XXX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx, které byly xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx přednost metodě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci vzorku xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx možno xxxxxxxxxx při provádění XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx být xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

X purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml.

2.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o teplotě 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku xx 5&xxxx;xxx. do ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Easy XXX® xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X xx dobu 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně míchejte xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut při 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx při xxxxxxx –20 °C až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx xx mohly xxxxxx, pokud by xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx validovaného protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx roztok xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v prostředí, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx sterilní xxxx UPW, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx smíchané x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Používejte xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 bp xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) po xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (krátké vlnové xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech nových xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod UV xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx typický xxx X. x. xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx z negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx s druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus tvořících xxxxxxx na x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx celý xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx rostliny xx fázi 2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx níže popsané xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx vzorek.

7.2 Před xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx pravým listem xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2 Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx peletové kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku inokulujte xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 G). Xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 xx 106 buněk na 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pokud xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.3 xxxx 7.4).

7.7 Inkubujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx je xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny pro xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx místa zajistěte xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx a jiné xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx komory xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx přenášet xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx druhý.

7.8 Pravidelně počínaje 8. dnem xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků. Počítejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, tím větší xx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx k nízkým xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx i populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zejména Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od případů xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jelikož xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx celé xxxxxxxx. Xxxxxx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxxxx k izolaci za xxxxxxx částí pletiva xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin (macerace xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx IF nebo XXX xx šťávě x&xxxx;xxxxx a izolujte na xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx oddíl 8). Xxxxxx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx stát, že X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx infekce dokonce x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx test XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodná (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. XXXXXXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx patogenity (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx je izolace xxxxx z pelety pletiva xxxxx xxxx stonku (oddíl 3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxx xxx xxxxx xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx a vhodného ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx ze xxxxx xxxx bramboru xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxx IF/PCR složených xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx třeba xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx na ml X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx každou nově xxxxxxxxxxx dávku selektivního xxxxx xx xx xxxx před použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx z neředěné bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kvůli náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že bakterie xx xxxxxxx v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 až 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Petriho misky x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx misku s agarem xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx téhož xxxxxxxx xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, a tím xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo následnou xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx XXX xxxxx; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx jsou xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na jedno x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (složení xxxxxxx v dodatku 5):

živný xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx solemi.

Inkubujte xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu maximálně 10 xxx.

X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxxx, obvykle tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx klenuté xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx typických xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další testování.

8.2.3 Identifikujte xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. sepedonicus xxxxx metod Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx se xxxx inkubovat při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx provádět xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx provádět z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx oxidační
Aktivita xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	+
Hydrolýza xxxxxx	– xxxx slabá
Tolerance 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx H2S	–
Využití xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx glycerol	–
Kyselina x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2 IF xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxx xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xx dosaženo, jestliže XX titr kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx ml ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx teplotě 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx při teplotě –16 xx –24 °C xx xx xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

d)	Identifikace X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;5).

x)	Xxxx XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxx xx profil podezřelé xxxxxxx identický x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx se však xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. X&xxxx;X. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx v UPW.

b)	Proveďte test xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX TEST (XXXX PATOGENITY)

Pro konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus a pro xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx izolované látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3 Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx (oddíl 7.7). U čistých xxxxxx by mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxxx, které po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.8), xx se měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx považována za xxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nanesením xx XXXX a YPGA (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx dobu 3–5 xxx xxx teplotě 21–23&xxxx;°X a sledujte vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährungssicherheit	Vídeň x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro vyšetření xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-hodinovou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 nebo XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600 nm.

Odstraňte xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, že xxxx napadena X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx proto xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx části x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx proveďte xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxxxx 106 a 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx skladovat xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Užitečné mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP-40)	Vázání xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 mM fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX test

2.1 Pufry xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se používá x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

(1) Pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx jednoho xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx a
	s	=	plocha xxxx objektivu

s = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx okuláru)
		K	=	tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx salts xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx média x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx v zásobě xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) v 96 % xxxxxxxxx, amphotericin X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx B sulfát x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 buněk X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx PSA-1	5′- xxx xxx gtg xxx xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -X	5′- xxx xxx gat gtt xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx tga xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx cct xxx xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primerů).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx z interní XXX xxxxxxxx 18S xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx následujícího programu:

1 xxxxxx:	x)	3 minuty při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (prodlužování xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 sekund xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xx)	30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 minut při xxxxxxx 72 °C (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx možná xxxxx modifikace xxxxx xxxxx ii), iii) xx), x), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 bp a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %)	3,5 ml
Bromfenolová xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Xxxx Acetát XXXX (TAE) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Gold) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním xxxx xxxxxx metodami xxxxxxx XXX bude xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Cms XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- gct xxx xxx xxx xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx přibližně 60 °C x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX a zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; pH 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (sterilizovaný xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx XXX 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Pozn.: Xxxxxxxxxxx všechny roztoky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Během xxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx slunečním zářením xxxx elektrickým světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přepichujte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx pěstovat xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, pokud je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Doetsch, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2 g krystalové xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx destilované xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx rozetřete xxxxxx tloučku v misce. Xxxxxxx xx vody x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem krystalové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Lugolovým xxxxxxx roztokem a nechejte xxxxxxx po dobu xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx rot xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx batches of xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and preliminary xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis of Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. V: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx EC method xxx xxx xxxxxxxxx xx latent ring xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Diseases and Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Klement X.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. X. Hayward, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Lelliott, X. X. x&xxxx;X. W., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Corynebacterium xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) xx potato xxxxxx. EPPO Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Xx, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842.

15.	Mills, D., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx subtraction xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Pastrik, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, C. S., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx xxxxxxxxxxxx to xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx BIO-PCR xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. D., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22.	Smith, X. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, P. H. X. xxx X. X. Collins, 1974. X&xxxx;xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx cellular fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx, xxx který xxx ve vyšetřovacím xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady,

dokud není xxxx xxxxxxx postup xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

2.

X případě potvrzení xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

PŘÍLOHA III

1.

Pro xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x xxxx x&xxxx;xxxxx produkčního systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x), xxxxxx těch, xxxxx užívají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele,

—

hlízy nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx v předchozí xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx místě/ech xxxxxxxx xxxxx období, xxx xx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) nacházely x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v první odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, nebo xxxxxx jednotky, a jakékoli xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle čl. 5 odst. 1 písm. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx s jakýmikoli xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx a dezinfekcí xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž se, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mohl xxx negativní, xxxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobné xxxxxxxx ke klonové xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxx provést xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce.

2.

Pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití zásob xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx následovně:

—

Bezprostředně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy, xx xxxxxxx metod xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx odrůdy xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx riziko xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo do xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx stát, x&xxxx;xxxx xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx např.:

—	název xxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx potřeby, xxxx popřípadě xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx popis xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx produkce x&xxxx;xxxxx partií x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a u sadbových xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx nacházejí xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Komise xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx organismu, nebo

—	likvidace xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, že x&xxxx;xxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná opatření, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného se xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem odpovědných xxxxxxxx subjektů dotyčných xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxx, xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, v místě s vhodným xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—	jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx zpracovatelskému xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx likvidaci odpadu x&xxxx;xxxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel, nebo

—	jiné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, a že xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se rozumí xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx pod kontrolou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx

x)

—

xxxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx zamoření,

—	se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo či xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx plodiny, xxx xxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu;

—

v xxxxxx xxxxxxxxxx období xxxxxxx následujícím xx xxxxxx upřesněném v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx sobě jdoucích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a ostatních planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je povolena xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx I;

—

ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po období xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx činit xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx mají pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx použijí xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx označení xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření na xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx se xxxxxxx a udržuje xxxxx xxxx jako xxxxx xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx výsadbou xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx produkce xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx ostatních xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepěstují, xxxx

—	xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx jako konzumní,

—

v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx po označení xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a které xx xxxxxxx pod xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, a to buď xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roku následujícího xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx případně přítomných xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx úřední testování xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx produkci xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby a pomocí xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a dezinfekce xxxxxxxxx jednotky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, členské xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx brambor, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxx xxxxxxx xxx pěstitelských xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu zařízení, xx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx skladují xxxxxxxxxx xxxxx nebo xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx používanou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx porostů bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx použita jen xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxx brambory xx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxx uvnitř oblasti xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxxx dobu.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx a jiného odpadového xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném místě xxx xxxxxxxxx odpadu, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx žádné zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx organismu; xxxx opatření xx xxxxxxxx Xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

xx)

Xxxxxx odpad: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx částice xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx písm. x).

Xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, tak xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx xxxxx mohl xxxxxx do styku xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxxxx členským státům x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx použijí xxxx xx odpad xxxxxxx s manipulací, likvidací x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.