EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx se xxxx přílohy XX xx XXX směrnice Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX ze xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), x xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus se xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx státech xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx výskytu x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx se zabránilo xxxx rozšíření x xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx za xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Od té xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x postupech zjišťování x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx toho xxxxxxxxx zkušenosti xxxxxxx xxx xxxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Pokud xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX) i xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v jiných xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx xxxxxxx, ve xxxx a xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, která xx xxxxx provést v místech xxxxxxxx označených xxxx xxxxxxxx x x xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx toho byly xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx VII směrnice 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zněními v xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1. Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx členskými státy xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Za Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA TESTU XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx a některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a v rostlinách xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx stonku
		2.	Detekce granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx na xxxxx půdy
			4.2	Postup xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx purifikace XXX
				x)	Xxxxxx podle Pastrika (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx hybridizace in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné půdy xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx xxxxxx kontaminace xxx xxxxxxx IF x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat použití xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, selektivní xxxxxxx) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx a musí být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx se xxxxxxxxxx v testování podle xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí v hlízách xxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý je xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je R. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek pouze x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy xxxx umožnit detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx infekce x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů směrem x&xxxx;xxxxxxx rostliny při xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx k zotavení. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx možné sliz xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svisle xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx krémový bakteriální xxxx. Později xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx hnědým x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx od pupkového xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx méně xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx tvořit větší xxxxx postranních výhonů. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního systému. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. u rostliny X. xxxxxx rostoucí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, která xx xxxxxx a kořeny xx vodě, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3 Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx oddíl VI.A.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx universální xxxxxx půdu (NA, XXXX nebo SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx universální živné xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx R. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, často x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, které jsou xxxxx xxxxxxx xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového média x&xxxx;xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metody xxx zjištění a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz

—	Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup mytí xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích příliš xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx konci každé xxxxx, tak xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx stranou všechny (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, mělo xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx hlízy xx pupkovém xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx xxxx uchovávat xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx mohlo xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny hlízy xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx části xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx používány, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním sáčku xx jedno xxxxxxx (xxxx. silný polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx nože (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10 °C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 hodin.

1.1.6 Je nezbytně xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx dlouhý 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny z pole xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx postranní xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx uříznutým xxxx nad xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. X&xxxx;xxxxx potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx díly xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx nejméně 10 xxxxxxx na 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara rostoucí xx vodních xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské plevelné xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica dioica.

Pozn: X této fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte části xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v pevném maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, xxxxxx xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx teplotě na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má trvat 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xxx provést xxxxxxxx x/xxxx odstřeďováním popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (v/v) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx) xxx případné xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx zmínit, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx se liší x&xxxx;xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem více x&xxxx;xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Zatímco níže xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat odpadní xxxx po provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. sedimentace nebo xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx bráno x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx k tomu, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx jara, léta x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx výskyt patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx vody x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxx obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx rovněž xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx usazeninou a resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte filtraci xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a zachycením filtrátu. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx malý počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx a popis testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

2. Metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx je použitelné xxx xxxxxxx patogenu xx vzorcích xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx zpracování brambor xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě nebo xxxx xx třeba xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším testem xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, ale x&xxxx;xxx použití této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx jeden xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počet xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4 °C.

2.2 Testování

Postupový xxxxxxx a popis testů xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízněte xxxxxx právě nad xxxxxx země. Xxxxxxx xxx stonku do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte roztěr xxxxxxxxxxxxx slizu z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX nebo XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx kmenu biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x&xxxx;xxxxxx PHB negativním xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a)	Zakápněte xxx sklíčka 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 minutu xxx pokojové xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou nebo xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, zda xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx a inkubujte 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xylol xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

f)	Zkoumejte xxxxxxxx roztěr mikroskopem x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx modročerné zbarvení XXX granulí v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace buněk X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v extraktech x&xxxx;xxxxxx s příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx suspense xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx se x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx tuto metodu xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 jednotek xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živnou xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx schopných xx xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx konkurenci xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktů ze xxxxxx lze xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx virulentního kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx se vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené šarže xxxxxxxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx inkubovat při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Po 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx se rozvine xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx s vnitřními pruhy xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx a nefluidní nebo xxx xxxxxxxx fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx očkujte xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, xxx chlóru) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx při teplotě –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx identifikaci xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx oddíl VI.C).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx selektivní média xx negativní, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

4.2 Obohacovací testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Je však xxxxx poznamenat, že xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100 µl extraktu xx xxxxxx do 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx xxxxxx připravte xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. U obohacovacího xxxxx ELISA xxxx xxx použit větší xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx živné půdy).

4.2.2 Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xxxxx promíchejte.

4.2.4 S xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx hlavní x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek R. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx určit xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, může xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx fixovány xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým kmenem xxxx xxxxx referenčním xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

ii)

Pro xxxx pelety:

Připravte xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx ve zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx nezbytně krátkou xxxx (maximálně 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.i): Připravte xxxx dvojnásobných xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), ostatní 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (T) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v pufru XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx jako předtím (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Zkoumejte xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx titru protilátky xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx xxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li se xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX a PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx předtím testován xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA ze xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, xxx XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx být pokud xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5 min. xx ledu.

4.	Přidejte 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 mM TrisHCl, xX 8,0) a inkubujte xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl roztoku Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 min xxx xxxxxxx 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx do xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 minut.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx ve směsi XXX xxxxx vzorku.

6.2.5 Umístěte XXX mikrozkumavky xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx testování, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Použijte vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX je negativní, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je zjištěn, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx u žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR nasvědčuje xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx povinný screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do extraktů xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx s pozitivními kontrolními xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém extraktu, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní materiál, xxxxx se používá x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7 minut xxx 7 000 g, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X PB (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx na jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	okénko 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Krycí xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) a fixujte nad xxxxxxxx.

X této fázi xx xxxxx postup xxxxxxxx a pokračovat x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a v suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx etanolové řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx ohřejte xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 45&xxxx;°X po xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4 okénka, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Umístěte sklíčka xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechte proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a umístěte xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7.2.7 Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x hybmixem xxx xxxxxxx 45 °C

7.2.8 Přemístěte xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetujte 5–10 μx krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60 mm).

7.3. Hodnocení XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx nejsou pozorovány xxxxx nebo xxxx xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx nastat x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx pozitivní buňky x&xxxx;xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx několik xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxx xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx xxxxxxx než x&xxxx;xxxxx IF.

7.3.5 V xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx FISH testu xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx použít xxxxx jako volitelný xxxx xxxxx testů XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx xxxx použitím xxxxx ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle doporučení xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 xx 106 xxxxx na 1 ml x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xx xxxxxx k testování.

Standardizované pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx extraktu. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx jamky xxxxxxx xxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx roztok x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5 minut.

5)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx do každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx v pravidelných 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Připravte xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do každé xxxxx a nechte xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v substrátovém pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX u negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX je pozitivní, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX z jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx OH ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx tvořících kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx viz x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx asi 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci.

9.4 Nechte xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–30 °C x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx skleníku xxxx vegetační komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx škůdců, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx složeném xxxxxx xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, proveďte zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx s podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je negativní, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, metodami Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx při 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (oddíl VI.A.5).

2.4 Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr IF xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

3. Test XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx sérologický xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4. Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx mohou být xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx postupy PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů specifických xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx profil xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx případně známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx rozdělen xx biovarů xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy s čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx něž xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s využitím xxxxxxx XXX, BOX a ERIC (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16S xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum o hustotě xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx ze 24 až 48 xxxxxxxxxx kultur x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx izolaci xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx inkubovat 48 xx 72 hodin xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx optimalizace x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	10,0 g
Dextróza	5,0 g
Bacto-Agar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), až do xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2)	15,0 g
Destilovaná voda	1,0 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, abyste získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Sigma X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032)	825 U (přibližně 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. solanacearum.

Místo Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Oxoid Agar #1. V takovém xxxxxxx xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx však xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na 2 500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx s médiem xx xxxx xxx xxxx použitím zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5 dnech xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená živná xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro živnou xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx standardní xxxxxxxxxx materiál xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxx xx získat x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka patogenních xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany rostlin (XX), Wageningen, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	XXXX 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, EURS55	Belgie	2
NCPPB 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Nizozemsko	2
NCPPB 4157	66	XXXX 15.59	Francie	2
NCPPB 4158	39	XXXX 4608, Port 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	B3B	Německo	2
NCPPB 325	41	XXXX 2047, XXX60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	CFBP 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, CIP310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, SEQ225	Peru	3
NCPPB 3997	47	CFBP 4614, R280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, CIP121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	XXXX 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2 Referenční panel XXX sérologicky nebo xxxxxxxxx příbuzných bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Bacillus xxxxxxxx (4)
NCPPB 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx cepacia &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	XXXX 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Ralstonia xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4)
NCPPB 3708	56	CFBP 3574	Xxxxxxxxxxxx glumae (4)
NCPPB 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	XXXX 3568	Banana Xxxxx Disease Bacterium &xxxx;(4) (5) (6)
NCPPB 4168	61	XXXX 4619 XXX X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	CFBP 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696x	Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 103 až 104 a 104 xx 106 buněk xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx rasy 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a suspendujte x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, abyste získali xxxxxxxx hustotu přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx zakalenou suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx dřeň z pupkových xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které víte, xx xx prosta X. solanacearum.

Zpracujte pupkové xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx kontaminovaných mikrozkumavek xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky. Xxxxx nekontaminované mikrozkumavky xxxxx použity xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx díly 100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx téhož xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx účely xxxxx PCR xxxxxxxx xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX a FISH xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx testů XX, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxxxx být xxxxxxxx xx xxxxx rok.

1. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pletiv xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx pomocné xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx zahuštění xx xxxxx pelety odstředěním.

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k oplachování podložních xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr s glycerolem, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte pH x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických molekul, xx možné jako xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2 Desetinásobný roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (musí xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	doplnit xx 100 ml

3.5 Roztok xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxxx xx 1 l destilovanou xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx roztoku.

4. Pufry xxx xxxxx testu XXXX ELISA

4.1 Potahovací pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	950&xxxx;xx

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení koncentrace XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx na sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 v závislosti xx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku
a	F	=	faktor xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenů (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX AGC TTG XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx Y-2	5′-CCC XXX XXX GCC TCC XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	17,65 µl
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx Y-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx při 94&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 sekund při 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx ggg x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx primer Xx-2	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ttg xx -3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Finální koncentrace
Sterilní XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx mohou být xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
35 cyklů:	ii)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx extenze)
	vi)	ponechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 bp.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1 Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GGC XXX XXX T-3′
Přímý primer XX-5-X	5′-XXX TTA AAG XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX TGC XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X pufr PCR (10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)	0,2 µl	1,0 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx teplotě 4 °C.

Pozn.: Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z DNA X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx I nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut xxx teplotě 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-NTP (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	14,925&xxxx;µx
10X pufru XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx pro biovary 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Xxxxxx -EDTA (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované reagencie xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx OLI-1-CY3 5′-ggc agg xxx caa xxx xxx ccc-3′

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx gcc xxx xxx agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNĚTE. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) na zhruba 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Paraformaldehyd xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1N XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1N XXx. Zkontrolujte pH xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE MĚŘIČ XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx roztok přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a autoklávováním)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (SDS)	0,01 %
Formamid	30 %,
Sonda XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx dvakrát) xx xxxxxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, A PROTO POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Xxxxxxxx	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Xxxxx EUB 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx všechny xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx elektrickým světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přesaďte xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxx xxxx naočkováním xxxxxxxxx xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24&xxxx;°X xxxxx: 14 xx 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

LITERATURA

1.	Amann, X.X., X. Xxxxxxxx and X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.	Anon. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx control of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx and application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Immunosorbent Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Potato Xxxxxx. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Barlow, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, J.K. and Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. In: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for International Xxxxxxxxxxxx Research, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, S., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX technique. X. Phytopathology 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx pathogenicity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Rudolph, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16.	Lopez, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.	Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Differentiation of xxxxxxx structure by xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Opina, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Timmis. 1997. X novel xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx PCR amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx internal xxxxxxxx xxxxxxx. European Journal xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23.	Schaad, X. 2001. Laboratory guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, M. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.	Xxxxxxx, M., Hayward, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx syzygii, and xxx blood disease xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx 16S xXXX gene sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Der Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Feuillade, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx disease: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5’ xxxxxxxx TaqMan xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx fluorescent xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xx xxxxx případech podezření x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y) xxxxxxxxx(x) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx vyvrácení xxxxxxxx(x) uvedenou metodou xx xxxxx čeká, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—	všechny xxxxxxxxxx hlízy, a pokud xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx screeningový(é) xxxx(x), xxxx. imunofluorescenční sklíčka a

—	všechny xxxxxxxxx podklady xxxxx xxxx xxxx uvedený xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx umožní v případě xxxxxxx použít xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx způsobem konzervovat xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx klonově xxxxxxxx rostlinám bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx stejného zdroje xxxx xxxxxxxx rajčat, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx úřední xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx organismu,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx produkce, včetně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx dochází ke xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx podezření na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx zamořená xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxx xxxx je podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx pole xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, který byl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx xxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—

xxxxx (místa) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vazbou xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx), xxxxxx xxxxxxxx xxxx, na kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx společně xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (místech) produkce xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx období, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) byl xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx odrážky,

—	prostory, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx výše,

—

veškeré xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladovací xxxxxxxx xxxx jejich xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx mohly xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxx xx styku s předměty xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx očistou xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx klonovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx rostlinnému xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) prohlášen xx xxxxxxxx, a u nichž, xxxxxxx xxxx vyšetřeny xx xxxxxxxxxx s negativním výsledkem, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vazby xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlíz nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, kde xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx vypěstovaný xx xxxxxx xxxxxxxxxxx povrchovou xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, jež xxxx xxx zohledněny xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), zahrnují:

v xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv)

—	blízkost x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál,

—	společnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx produkce, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx rostlinného materiálu xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx xxxx xxxx xxxxxx odtoku xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bod ii),

ii)

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx iv), kde xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové vody xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx které(á) xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx(x) xxx zaplaveno(a),

—	každá xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx hostitelským xxxxxxxxx z čeledi lilkovitých.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec čl. 5 odst. 2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, sadbové, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx požadavky na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx oznámí xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx rostlinolékařského xxxx xxxx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu, xxxx případně xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx neprodleně oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx obsahovat toto:

po xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx případu:

a)	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zdroji (zdrojích) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx a u brambor xxxxx partií s udáním xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx označena jako xxxxxxxx, xxx jsou xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti o určení xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx každou xxxxxxx xxxx partii xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xx) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, podle xxxxxxx xxxxxxxxx v příloze V, xxxxx A, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), jak xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro zvířata xx tepelné xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do životního xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx půdy xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxxxx xx xxxxx být použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přímým x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxx schválenými xxxxxxxxxx xxx likvidaci xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx neexistuje xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx a dezinfikování alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možnostmi xxxx vzniklý z výše xxxxxxxxx možností xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy VII této xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v kterémkoliv okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení k odstraňování xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

bramborové xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx xxx přímou xxxxxxx a použití bez xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx jen xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx určené xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx dodávku xx xxxxxxxxxxxxxxxx závodu x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních prostředků, nebo

—	budou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx, pokud nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx úředním subjektem,

ii)

jiné xxxxxxxxx xxxxxx včetně xxxxxx a listové tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx likvidace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx) a písm. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na poli xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx čtyř pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

nebudou xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx, že xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor je xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx podle přílohy II,

—	v sklizňovém xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a po příslušném xxxxxxxx cyklu, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx prohlášení xxxxx produkce xx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx letech xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, anebo xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx nebo intenzivní xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx brambor nebo xxxxxx, které následuje xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx jiné planě xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx xxxxxxx polích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx příslušné xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx označeném xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě bramborových xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v případě xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, pouze xxx produkci xxxxx,

—

xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx bramboru budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové brambory xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx produkce, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě rajčete xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx rozmnožovány xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen a vypěstovaných xxx úřední xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx na produkci xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx za xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx pouze xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx semen, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx xxx odstranění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a jiných xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx organismu x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx období se xxxxxxxxx xxxxxx prohlídky xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx úředně xxxxxxx sklizené xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XX;

xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá strojní xxxxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx produkce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodu 3,

—	xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx kontroly nad xxxxxxxx zavlažování a postřiku, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx prevence xxxxx xxxxxx organismu;

na xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx xx xxxxx xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx pěstovány xxxxx xxxxx bramboru, rostliny xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx ani jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a osiva xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxx jednotku x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vyloučení organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelského xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxx certifikované xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx xxxx mikrorostlin xxxxxxxxx z testovaných xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx rostliny rajčat xxxxxxxxxxxx vegetativně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx státy:

a)	musí zajistit, xx ihned xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx strojní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo rajčata xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, spolu se xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx stroje pro xxxxx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx kultury xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx a aby xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bodu iii), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx manipulaci xx xxxxxxxxxx sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami xx xxxxx xxxxxxxxx v zóně xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pěstování rostlin xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, nebo, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, u všech xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) xxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx možného xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—	xxxxxxx xx xxxxxxxx termínech xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx a případných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx podle příslušných xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx a jiné xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx používání xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, xxx je to xxxxxx. Tento xxxxx xxxx být přezkoumán xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) odvoláno, xxxxxxxx xx příslušné orgány xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx není xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx vody, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, x&xxxx;xxxxxx xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxxxxx xxxx použity xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí výskyt xxxxxxxxx a jeho xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx zamořeny výpusti xxxxxxxx xxxxxx, zavedou xx úřední kontroly xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx balících xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx porostů sadbových xxxxxxx v rámci xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přílohy XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu:

bramborový x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, kamenů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx schválené skládce xxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx organismu xx xxxxxxxxx např. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx s vodními xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx zemědělské xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx skládku za xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: před xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxx obsahující suspendované xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo sedimentaci xx xxxxxx odstranění xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné částice xxxx xxx odstraněny xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně na 60&xxxx;°X uvnitř xxxxxx xx xxxx alespoň 30 minut xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx a kontrolovaným xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx, xx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx oznamují xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx spojený x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. solanacearum xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx xxxxxxx xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx OLI-1 x&xxxx;X-2 (viz dodatek 6).

(6) Pravděpodobnost xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx účely xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metody.

(8) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx a pufr mohou xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F a NS-6-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pupkových xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metod izolace XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx reagencií.

(12) Metoda byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

(13) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.