Plné znění - 32006L0063

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

xxxxxx se xxxx přílohy XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX o xxxxxxx proti Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX ze dne 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.  (1), a xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx vadnutí bramboru x rajčete (dále xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx podrobná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata v xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x při zjištění xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx za účelem xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx zapracována xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x metody xxxxxxxxxx x identifikace xxxxxxxxx v jiných xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx xxxxxxx, ve xxxx x xxxx.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx oblastí, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx x x xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx předpisy xxx rajče, s ohledem xx význam této xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx směrnicí xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX směrnice 98/57/XX xx nahrazují xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1.   Členské xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2.   Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

---

(1)  Úř. věst. L 235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

---

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete a některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX

	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx rostlin bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxxxxx a identifikaci X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx půdy
			4.2	Postup obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx purifikace XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (FISH xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné půdy xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx testovací xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx úrovně kontaminace xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx podmínky xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx úředními orgány xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx musí zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx při označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje pozitivní xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových diagramech. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není považován xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx a izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX V HLÍZÁCH XXXXXXXX A V ROSTLINÁCH XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1.   Příznaky (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx hnědý x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx sliz xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx stonku svisle xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx konce x&xxxx;xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx fázi xx xxxxxxx pozná podle xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika xxxxxxxx začne xxxxxxx xxxxx krémový bakteriální xxxx. Xxxxxxx se xxxxx zbarvení stává xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx vně od pupkového xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx vytékat bakteriální xxxx a způsobuje přilepení xxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx sekundární xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx příznivých podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení listů xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo celé xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx méně xxx 21&xxxx;°X) rostlina xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx postranních výhonů. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx nasáklé pruhy xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny bramboru xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, která xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a to x&xxxx;xxx xxxxxxx příznaků vadnutí.

2.   Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v buňkách R. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A nebo súdánskou xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3   Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx vrstvu xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx hlízy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a nechte 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

c)

Přeneste 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx metodou zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx inkubovat 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. — Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx vytvářejí xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní máslovité xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. — X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx SMSA jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. solanacearum tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující výskyt X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1   Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vedou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx popsaný níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Nechte hlízy xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (není xxxx vyžadován) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx nebo jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx xxxxx izolace.

1.1.1   Pomocí čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx viditelné vodivé xxxxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx výkrojky vodivých xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx všechny (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx je odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, mělo xx xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx takové hlízy xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx měly xxxxxxxxx xx xxxx nejméně 2&xxxx;xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx to možné, xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx teplotě nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4 hodiny xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (např. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx mixéru existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx rozlití xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Zajistěte, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při testu XXX xxxxxxxx přenosu XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx přístroji. U testu XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zkumavek na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4   Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

1.1.5   Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, xxxxxxxxx přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2   Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

2.1   Příprava xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. solanacearum se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx založen xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx skleníku: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx rostliny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx na 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx bude xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara rostoucí xx vodních tocích. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Silene xxxx, X. nutans., Tussilago xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx fázi xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxx zpracujte drcením xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (např. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex). Xxxx-xx xx možné, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx díl xxxxxxxxxx v 10–25 % (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2   Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx nutné zmínit, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem více x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx v povrchové xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx detekce x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), při xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu v povrchové xxxx, xx třeba xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vodě.

2.1   Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové vodě xx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu účinky xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

2.1.1   Na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorky vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx pod xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Při xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx odeberte vzorky x&xxxx;xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx pro každé xxxxxxxxxx místo, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3   Je-li xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx vzorky při 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 minut (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X, xxxxxx kapalinu xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 ml peletového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků odpadní xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2   Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

2.   Metody pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx vzorcích xxxx, xxx xxxx být xxxxxx použito k testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování xxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě nebo xxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx polní xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 12–15&xxxx;°X. Xxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2   Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x&xxxx;60–150 xx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných hostitelských xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: uřízněte xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xx živné půdě XXXX nebo XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx uschnout x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx sklíčka xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx mikroskopická xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem nilské xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Zakápněte xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny octové x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 minutu xxx pokojové xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, xxx xx objeví xx XXX granulích xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Také xxxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a)	Zakápněte xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx súdánské xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr mikroskopem x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx imersí x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx latexovými částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx se x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1   Očkování na xxxxxx půdu

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx tuto metodu xxxxxx, xxxxxxxx předběžný xxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx znění Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx schopných na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, kolonie X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx vzorek otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx od –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx způsobem xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1   Proveďte vhodnou xxxxxxxx ředění s cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Naneste 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX jsou xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, kruhové, zcela xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu, abyste xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, xxx chlóru) xxx pokojové teplotě x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx vhodném ochranném xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C xxxx lyofilizované.

4.1.5   Proveďte identifikaci xxxxxxxxxxx kultur (viz xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, za předpokladu, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

4.2   Obohacovací testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx i ke zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xxxx xxx izolace organismu X. xxxxxxxxxxxx z obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx pro test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx testu PCR xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx připravte xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. U obohacovacího xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx v 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx lepších xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Doporučuje xx určit titr xxx každou novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx a použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX nejméně 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx titr.

Test xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Jestliže je xx xxxxx, může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx xxxxx referenčním xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx se xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s více xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx xxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v řadě. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx: Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – u většího xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx sklíčko buď xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60 °C), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx ve zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx ředění (PŘ) xxxxxxxxxx v pufru XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx xx navlhčený xxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

5.3.4   Umístěte xxxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx pufru x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) nebo xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx zvětšení 500× xx 1&xxxx;000×. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx zkontrolujte pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5   Interpretace výsledků xxxxx IF:

i)

Při xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5). Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u vzorků, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx povinně xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly PCR (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu extrakce XXX x&xxxx;XXX) xx xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx a DNA ze xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx pokud xxxxx xxx zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx termobloku nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5 min. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X po xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

9.	Přeneste xxxxx xxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80 % etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °C, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx UPW x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX jako xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, a spusťte xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (xxxxxxx 6) při 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX marker, např. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (v xxxxxxx vícenásobné XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxxx velikosti a (případně) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x&xxxx;xxxxxx sadou xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx podezření xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx získán žádný xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx negativních xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx a je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx IF xxxx. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Používejte xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 103–104 buněk X. xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného referenčního xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2   Napipetujte 100&xxxx;µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx po xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

7.1.3   Odstraňte xxxxxxxxxxx a rozpusťte peletu xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx použijete 2&xxxx;xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µl (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6   Nechte xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x hybmix, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx a nechte xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 45 °C

7.2.8   Přemístěte xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

7.2.9   Ponořte xxxxxxx krátce xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx je xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou vlhkost xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetujte 5–10 μx krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× pod olejovou xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. solanacearum v okénkách xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může nastat x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx pouze fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x)

Xxxxxxxx FISH testu xxxx xxxxxx, pokud xxxx při xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, odhadněte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se považují xx pravděpodobně infikované Xxx. Xxxxx je xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8.   Testy XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze použít xxxxx jako volitelný xxxx kromě testů XX, PCR nebo XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx homologického kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx testování xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxx nebo xxxxxx xxxx u titru xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx destičce xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 ml x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx používají xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx může x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat vznik xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X nebo xxxx xxx při teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx předtím (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte absorbanci xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx do každé xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx nebo 4 ° C xx dobu 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do dvou xxxxx xx každé xxxxxxxx. Nechte inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx každé jamky. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) z jamek xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx se xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v negativním extraktu xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx OH ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný do xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx s rovnocennou citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx pěstování xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Příznaky x&xxxx;xxxxx jsou xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx xxxx než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx list.

Sterilním xxxxxxxxx xxxxxxxx příčný xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx přibližně 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx a peletovým xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci.

9.4   Nechte xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30 °C x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, držte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech skleníku xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx je vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx škůdců, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx mezi vzorky.

Hledejte xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx složeném vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže testovací xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx et al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1   Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v pufru XX (xxxxxxx 4).

2.2   Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (oddíl VI.A.5).

2.4   Test XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

3.   Test XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx této metody xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1   Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3   Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx hodnota výsledku xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx poloviční v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4.   Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2   Ohřívejte 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Seal et al. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Boudazin xx&xxxx;xx. (1999); Opina et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5.   Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2   Použijte metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.   Analýza xxxxxxxx kyselin (FAP)

6.1   Pěstujte xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx z následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx schopnosti xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx a tří hexosových xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx očkováním xx xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx trehalosy	–	+	+
Využití meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx něž patří:

7.2.1   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2   Repetitivní sekvenční XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX a ERIC (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Cook et al., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx izolaci z rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx selektivní živné xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

“

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)  Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)  Použijte xxxx standardní referenční xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx testech (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx v některých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx OLI-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx znám pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx metody.

(8)  Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx BRL.

Pozn.: Původně xxxxxxxxxxxxxx pro termocykler XX Research PTC 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) a Gibco BRL.

(11)  Koncentrace xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx extrakční xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx metod xxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

---