Plné znění - 32006L0063

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou se xxxx xxxxxxx II xx VII xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX ze dne 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.  (1), a xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

vzhledem x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx a xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí bramboru x xxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx té xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x kromě xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx přezkoumání xxxxxxxx technických ustanovení xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx jeví xxxx nezbytné přezkoumat x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx zahrnuta zlepšení xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x metody xxxxxxxxxx a identifikace xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx brambor, xx xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx xxxxxxx v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x x xxxxx vymezených oblastí. Xxxxx xxxx byly xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx rajče, s ohledem xx význam xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Opatření stanovená xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského výboru.

XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1.   Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx těchto předpisů x srovnávací xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x touto směrnicí.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Tyto předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx stanoví členské xxxxx.

2.   Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, s. 1.

---

PŘÍLOHA

PŘÍLOHA II

SCHÉMA XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX SOLANACEARUM (SMITH) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx různé postupy, xxxxx se týkají:

i)	diagnózy xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX

	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx při xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx zjištění a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XX test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx řetězové reakce (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx imunoanalýzy XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX ELISA (xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmene
			7.1	Stanovení biovaru
			7.2	Genomická xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		A)	Komerčně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx zahrnovat použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx karanténních podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx xx znázorněno v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx v testování podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx a dále, v případě xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly v každé xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX NEBO XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1.   Příznaky (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1   Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny při xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx vadnutí zůstávají xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx také k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx se x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx překrojit napříč x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx začne prýštit xxxxx krémový bakteriální xxxx. Později se xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Na xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární rozvoj xxxxxxx hnilob bakteriálního x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2   Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx příznivých xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx úplným odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3   Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X nebo xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. u rostliny X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx slizu, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, a to i při xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.   Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx dostačující. Použijte xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2   Test xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx súdánskou xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4   Jiné xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), test FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vláken xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx nebo jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění suspenze.

c)

Přeneste 50–100 µx suspenze x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX nebo XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. — Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx krémově bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, často x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy R. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. — X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx vzorku xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx na testování vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx pro zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

a)	Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro odstranění xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx mytí xx vhodný (není xxxx xxxxxxxxx) zvláště x&xxxx;xxxxxxx, když je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx výkrojky vodivých xxxxxx na pupkovém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznutí xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx řezu hlízy xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xx xxxx xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a potom by xxxx být hlízy xxxxxxxx v chladu (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx nádob xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx je v nádobě xxx přidání xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4 hodiny xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C xxxx 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (např. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo drcením x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním sáčku xx xxxxx použití (xxxx. silný polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx každý xxxxxx použili čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při xxxxx XXX zabraňte xxxxxxx XXX na nádobách xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. U testu XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 minut při xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), filtr xxxxxx xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4   Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx supernatant, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx během testování xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

1.1.6   Je xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To platí xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

2.1   Příprava xxxxxx

Xxxx.: Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx sazenice x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx nad spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx díly xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx potenciální plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo oddencích xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Silene xxxx, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X této fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxx stranou xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxxxx xxxxx stonku jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxx zpracujte xxxxxxx xxxxx v pevném maceračním xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle není xxxxx, ale xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Xxxxx díl xxxxxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2   Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx použitelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxx xxxx a rovněž xxxx xxx použito x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vody. Je xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Zatímco níže xxxxxxx schéma předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu se xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx po provedení xxxxxxxx čistícího postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx bráno x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem k tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a v odpadní xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx vody x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30&xxxx;xx pod xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30 ml. Xxx intenzivním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3&xxxx;xx xxxxxxx toku x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3   Je-li xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx při teplotě 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a resuspendujte xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím xxxxxx x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a zachycením filtrátu. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx zpracování brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

2.   Metody pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx je použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx může xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování brambor xxxx xxxx z odpadní xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx třeba xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití této xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1   Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg půdy xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (nebo x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte počet xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a kanalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1 kg x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2   Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx nebo kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1.   Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízněte xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx xxxxxx do xxxxxxxx s čistou vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo ze 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB negativním xx.

3.	Xxxxxx xx uschnout x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pozorování xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx sklíčka 1 % xxxxxx roztokem nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete kapkou xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, zda jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou černí:

a)	Zakápněte xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx a vysajte xxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxx xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx modročerné zbarvení XXX granulí v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami buněk.

3.   Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. červenými buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) se řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxx následujícím xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx půdu

Pozn.: Xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, abyste zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte xxxxx xxxxxxxxxxx selektivní živnou xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx konkurenci nebo xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx otestován xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů ze xxxxxx lze xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx použitelná x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxx xxxxxxxxx ředění xx suspenze 106 xxx/xx virulentního kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené šarže xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx být xxxx xxxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx otestována xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s cílem xxxxxxxx, aby všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx vyloučeny. Naneste 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Po 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx stav a pak xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx živné půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx s vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx očkujte xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx půdu, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, xxx chlóru) xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X) a test xxxxxxxxxx (xxx oddíl VI.C).

Interpretace výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx negativní, xxxxxxxx xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx i ke zředění xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx organismů, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu může xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx k rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1   U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100 µl extraktu xx vzorku xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx bujónu (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx připravte xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx živné xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx teplotě 27 xx 30 °C x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx kultuře x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX xxxxx promíchejte.

4.2.4   S xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli dokázané xxxxxxxxxxxxx v dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Titr xx definován jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx je xx nutné, xxxx xxx úspěšně proveden xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxx vzorky fixovány xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3 B, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test vzorků.

5.1   Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx řada může xxx použita xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx by xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v pufru XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx podle xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako předtím (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4.   Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx vodní imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Buňky s neúplným xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. solanacearum.

5.4.4   Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5   Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5). Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u vzorků, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, a sice xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx jako hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx jen tehdy, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx vzorků extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli došlo x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, xxx XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste zabránili xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx použít pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx účely xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a)   Metoda xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx termobloku nebo xxxxx lázně s teplotou 95&xxxx;°X na 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5 min. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx při 15 000 g po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx etanol z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx stát při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx použití xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx supernatantu obsahujícího XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vzorku xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém nehrozí xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3   Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx extraktu XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx xxxxx protokolů XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž zdroj XXX xxxx byl xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx vzorku.

6.2.5   Umístěte XXX mikrozkumavky xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3.   Analýza xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx směsi xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2   Detekujte xxxxxxx XXX obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3   V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx shodným restrikčním xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx fragmenty elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx PCR specifický xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx je xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk R. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx suspenzi obsahující 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) x&xxxx;0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenu xxxx xxxxxx referenčního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx používá x&xxxx;xxxxx xxxxx, xx xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200&xxxx;µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout na xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

7.2.   Hybridizace

7.2.1   Dehydratujte buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx po xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; viz xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx zahřáté vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 l 1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Nechte xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte inkubovat xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) a položte je xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím sklíčkem (24 × 60 mm).

7.3.   Hodnocení XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky zjištěny (xxx okénka sklíčka) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx a nejsou pozorovány x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolách.

8.   Testy ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Obohacení xxxxxx před použitím xxxxx ELISA může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx setkat s nezdarem xxxxx konkurenci jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxx xxxx stejné xxxx u titru xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx suspenzi 105 xx 106 buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx xxxxx destičce xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzi 105 až 106 xxxxx na 1 ml x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleny na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx kontrolního materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorku(ů).

Validované xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně silného xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx roztok x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx protilátek x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx předtím (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek a vymyjte xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx pufru xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) s obsahem 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx jamky. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx dobře vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 2&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) z jamek xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx než dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorcích xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci nebo xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx přidaný do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx v dodatku 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100 µl xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.1   Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx méně než 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2   Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a peletovým xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–30 °C x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx skleníku xxxx vegetační komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo k vzájemné xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože xx mohli přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx test IF/PCR/izolace xx složeném xxxxxx xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, proveďte zřeďovací xxxxxxx (bod 4.1).

9.7   Identifikujte všechny xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro každý xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx při 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX metodu (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

3.   Test XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx nepoužívejte xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1   Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx poloviční x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v uzavřených xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (oddíl VI.A.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0 2OH, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li xxxxx xxxx rozdělena xx xxxxxxxx destičky x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx meso-inositolu	+	–	+
Využití X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2   Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Van xxx Xxxx et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X a 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) a sekvenováním 16X xXXX (Xxxxxxx et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx a k potvrzení xxxxxxxxx xxxxxx identifikovaných xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx xx stonku xxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

“

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)  Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)  Použijte xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx produkt PCR xx podobnou xxxxxxxx, xxxx xx očekávaná xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx testů, ale xxxxxx znám xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Research XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx mohou xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X a NS-6-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pletiva pupkových xxxxx xxxx bramboru xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX může vyžadovat xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

---