EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx XX xx VII směrnice Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x ohledem xx směrnici Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx. (1), x xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx k těmto xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx xxxxx vyskytuje v xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx organismu, xxx xx zjistilo xxxxx výskytu x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx jeho xxxxxxx x rozšíření x při xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se ochranná xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx došlo x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti získané xxx ochraně xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přezkoumání xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx jeví xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Pokud xxx x postupy xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Rovněž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) i xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx postupů xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx, xx xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx ochranných xxxxxxxx, xxxx pro ně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx potřebné xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx v místech xxxxxxxx označených jako xxxxxxxx a x xxxxx vymezených oblastí. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx význam této xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx směrnicí xxxx x xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy XX xx XXX směrnice 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1. Členské státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Tyto předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx tuto směrnici xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (SMITH) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx a některých xxxxxxx hostitelských xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX


	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx
	2.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		1.1	Příprava xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx izolace
			4.1	Očkování xx xxxxx půdy
			4.2	Postup obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (XX xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX test)
			6.1	Metody xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx in xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx a enzymatický xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx IF
		3.	Test XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test FISH
		6.	Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx úrovně xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx XXX
		Xxxxxxx 7		Validovaná xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx podmínky xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které se xxxxxxxx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných povolení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení kontaminace xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx při označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/ES vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, musí xxx doplněn izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx testů.

3. Schéma xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX XXXX JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx k zotavení. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx hnědé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává nevratným x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý a mléčný xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx napříč x&xxxx;xxxxxxxxx konce x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx prstence, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx krémový xxxxxxxxxxx xxxx. Později xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. V pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx vně xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx hlízy x&xxxx;x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx a způsobuje přilepení xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx místa, xxxxxxxxx vnitřním kolapsem xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární rozvoj xxxxxxx hnilob xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (teplota xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení listů xxxxxx dolů a vadnutí xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx méně xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx postranních výhonů. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx spodu stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum dulcamara x&xxxx;X. nigrum. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. u rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx rostliny X. xxxxxxxxx, která xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx vodě, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx zbarvení xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx platných xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx slizu xx stonku

(Viz oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické granule XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nilskou xxxxx A nebo xxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4 Jiné xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx stát.

b)	Připravte řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

Přeneste 50–100 µl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (NA, XXXX nebo SPA; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo tetrazolové xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxx (např. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx případně xxxxxxxxxx misky s rozředěnou xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—	Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xxxxxxx krémově bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx ve středu. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

—	X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě červeně xxxxxxxx. Avirulentní xxxxx X. solanacearum tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx testy Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx výskyt X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vedou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxx xxxxxx použít x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

a)	Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx dobu xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx stranou xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, mělo by xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx pupkovém xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx mohlo xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx hlízy xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx III.

1.1.2 Uložte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxxx xxx přidání pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační třepačce (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx 16–24 hodin chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx pro každý xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Při xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx odstřeďováním, 7 000 g po xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte supernatant, xxxx xx se xxxxxxxxx peleta.

1.1.5 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx R. solanacearum, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro referenční xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 xx 48 hodin.

1.1.6 Je nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Pro účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xxxxxx 1–2 cm xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx z paty každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxx xxx spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx dlouhý xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx každého stonku xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 rostlin na 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit po xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara rostoucí xx vodních xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx oddencích xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx jakýkoli xxx stonku s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx chlazené, xxxx

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xxx provést filtrací x/xxxx odstřeďováním xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 až 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) nebo –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

XXXXX&xxxx;XX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx v tomto oddíle xx použitelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx zmínit, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx liší x&xxxx;xxxxxxxxxx na substrátu. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx než v povrchové xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx schéma předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx povrchové vody, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), při xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx používá úspěšně x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx, xx třeba xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a v odpadní vodě.

2.1 Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °C.

—	Opakované xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx v úvahu xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx toku, abyste xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxxxxx vzorky vody xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx místo, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx filtraci xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx peletového xxxxx a zachycením xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxx, xxx může xxx xxxxxx použito k testování xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování brambor xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x&xxxx;xxx použití této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro vzorkování xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx z hloubky 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, xxxxxx počet xxxxxxxx xxxx na 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Před xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx teplotě 12–15&xxxx;°X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1 kg x&xxxx;xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xxxxx xxxxxx xxxxx promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% sterilního Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testů xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Ponořte xxx stonku do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxx slizu z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx živné xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte preparáty xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a)	Zakápněte xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem nilské xxxxx a nechte inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny octové x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1 000× s použitím xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, zda xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu a inkubujte 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx opláchněte xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx a vysajte xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr mikroskopem x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem pod xxxxxxxx imersí a při xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX granulí x&xxxx;xxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. solanacearum v bakteriálním xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx latexovými xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) na xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, proveďte předběžný xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, měl by xxx xxxxxx otestován xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu xxx xxxxxxx od –68 do –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx testování vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1 Proveďte vhodnou xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Naneste 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx stav x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx kontrolu denně xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx se xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx očkujte metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu, abyste xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (pH 6–8, xxx chlóru) xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo dlouhodobě xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl VI.C).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx selektivní xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx bakteriemi a v kontrolních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

4.2 Obohacovací testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx X. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx může xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx v 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, které xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před zahájením xxxxx ELISA nebo XXX xxxxx promíchejte.

4.2.4 S xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xx vzorky ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx hlavní x&xxxx;xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná polyklonální xxxxxxxx xxxx všechna xxxx IF xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktech ze xxxxxx. Xxxxxxxx je xx nutné, může xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 mm – u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně napipetujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm – u většího xxxxxx xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx bakteriální buňky xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od dodavatele protilátek.

Pokud xx potřeba, fixovaná xxxxxxx je možné xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 titru (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.ii): Připravte xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx podle xxxx.&xxxx;5.1.x) a 5.3.i)

	Ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1 Uspořádejte xxxxxxxx xxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte konkrétní xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx podložních sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx IF Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx xx okének xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná nebo xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx všechna sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx být povinně xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, vyberte xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx zabránili kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx PCR by xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (x průběhu extrakce XXX x&xxxx;XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, při XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být pokud xxxxx bez zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Následující xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx účely použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM NaCl, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100 µl extraktu xx xxxxxx a umístěte xx termobloku nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X na 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 mM XxxxXXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až se xxxxxxxxx sníží a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 min xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), krátce promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx po dobu 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx z pelety.

12.	Přidejte 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx teplotě nejméně 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx xxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo vzorku.

6.2.5 Umístěte XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) po xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx restrikčním xxxxxxx a pufrem (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx R. solanacearum xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx je zjištěn, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován u žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze také xxxxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx výsledky. V multiplexních xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, jestliže xxxx xxxxxx žádný xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx provedena xxxxxxx xxxx IF test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 denní xxxxxxx. Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx používá x&xxxx;xxxxx testu, je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1 Připravte xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu xx 200&xxxx;µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx a inkubujte 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7 000 g, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx dodatek 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout na xxxxxxx (nebo sušičkou xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) a fixujte nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

7.2. Hybridizace

7.2.1 Dehydratujte buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx sklíček.

7.2.2. Připravte xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx boxu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx ohřejte xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45&xxxx;°X po xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) na 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sklíčka (24 × 24&xxxx;xx) na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx tak, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární kvalitou (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Nechte xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx o teplotě 45&xxxx;°X.

7.2.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) a položte je xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, CA, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

7.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo málo xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 polí mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou pro X. xxxxxxxxxxxx v okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci musí xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxxxxx xx várce xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx několik problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xx xxxxxxx reakci se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx IF.

7.3.5 V xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 × 103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, se považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXXXX

Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxx před použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx titru pro xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx protilátky v pracovním xxxxxx, které je xxxxxx nebo xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

Vzorek, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx negativní a suspenzi xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 buněk xx 1 ml xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X na 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx extrakty x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte poslední xxxxxxxx roztok x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v blokačním xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx fosfatázy (xxxxxxx 4) xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx absorbanci xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx každé xxxxx. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 2&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z jamek xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx průměrné hodnoty XX z jamek se xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH ve xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx hodnot x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1 Použijte 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací rostliny.

9.2.1 Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx asi 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1&xxxx;xx připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, xxxxxx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30 °C x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx vadnutí z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx skleníku xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx z různých xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prostor bez xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx mezi xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xx segmentů stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

9.7 Identifikujte xxxxxxx xxxxx kultury x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Výživové x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x&xxxx;X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (dodatek 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx kontroly.

3. Test XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx této metody xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3 Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx ELISA xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Pastrik xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Opina et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte xxxxxx XXXX (oddíl VI.A.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.1 Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx jako profil xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx z následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx biovaru

Organismus X. xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li xxxxx xxxx rozdělena na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx během 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými technikami, xxxx něž xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2 Repetitivní xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, BOX a ERIC (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum musí xxx proveden test xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx inokulum x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 náchylných xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx až 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx relativní xxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by typické xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx po xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °C x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx optimalizace x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection xxx Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Scienze x&xxxx;Xxxxxxxxxx Agroambientali	Boloň	Itálie
Regione Xxxxxx Xxxxx Periferica xxx x&xxxx;Xxxxxxx Fitosanitari	Verona	Itálie
Nederlandse Algemene Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Direcção-Geral de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Centro Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
Instituto Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. solanacearum

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Difco)	5,0 g
D(+) Xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Bacto-Agar (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky a sterilujte xxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx médium

kasein hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X a přidejte filtrem xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), až xx xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco)	1,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (viz xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 mg/l

Pozn.:

1.	Použití xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx může ovlivnit xxxx R. solanacearum.

Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Agar #1. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx však xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx a spotřebujte xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx SMSA, xxx vynechte Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx pepton	5 g
K2HPO4	0,5 g
MgSO4	0,25 g
NaNO3	0,25 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a lze xx získat z těchto xxxxxx:

1.	Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2.	Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (CFBP), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX R. solanacearum

Kód XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	CFBP 4582, Xx 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	XXXX 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	XXXX 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	XXXX 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	XXXX 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156 (3)	71 (3)	PD 2762, XXXX 3857	Nizozemsko	2
NCPPB 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	IVIA-1632-2	Španělsko	2
NCPPB 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, KEL60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, GONg7	Kostarika	1
NCPPB 4028	43	XXXX 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	CFBP 4613, X568, CIP226	Brazílie	2T
NCPPB 3996	46	XXXX 3928, R276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, R280/363, CIP49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	CFBP 4615, X297/349, CIP121, CMIb2861	Srí Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	CFBP 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kmenů xxxx být zaručena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxxxxx z původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx NCPPB	SMT #	Jiné xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	XXXX 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4164	–	CFBP 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia pickettii &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 XX 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	XXXX 3575	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 353	54	XXXX 3572	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	CFBP 3569	Burkholderia xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Banana Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 IPO S339	Enterobacter xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 IPO X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 IPO 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx sp. (5)
NCPPB 4174	81	XXXX 1844.06	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 a 104 až 106 xxxxx biovaru 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx izolace x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/biovaru 2&xxxx;(xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx půdě a suspendujte x&xxxx;10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx přibližně 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx jí dosáhne xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které víte, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pěti mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použito xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx xxxxxxxxxx 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, čímž xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladněte při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejdříve xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro xxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx účely xxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxx xxxx patogenity xx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx se xxxx testů IF, XXXX x&xxxx;XXX, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx nejméně x&xxxx;xxxxx 106 a 104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx a u žádných vzorků xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx jeden rok.

1. Pufry xxx účely xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterií x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx pomocné xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředek XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40000 (PVP-40)	Váže xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx extraktů x&xxxx;xxxxxxxx pupkových xxxxx xxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX a sterilizujte xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný fosfátem (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx protilátek

Na₂HPO₄.12H₂O	2,7 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,4 g
NaCl	8,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1 % Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx pufr x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Laboratories) xxxx Citifluor® (Xxxxx) xxxx dostupné xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1 Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx xxxxx aromatických molekul, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10X PBS), xX 7,4

NaCl	80,0 g
KH₂PO₄	2,0 g
Na₂HPO₄.12H₂O	29,0 g
KCl	2,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Xxxxx 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx mléko	0,5 g
Destilovaná xxxx	xxxxxxx xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	800 ml

Rozpustíme x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx HCl xxxxxxxx xX na 9,8.

Doplňte xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x&xxxx;15&xxxx;xx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx účely xxxxx XXXX ELISA

4.1 Potahovací pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃	1,59 g
NaHCO₃	2,93 g
Destilovaná xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

4.3 PBS-Tween

10X PBS	50 ml
10 % Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná voda	950 ml

4.4 Substrátový xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

Xxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× S/s

kde	S	=	plocha 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky
a	s	=	povrch xxxx xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2	kde	i	=	koeficient xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxx okuláru)
		K	=	koeficient xxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100×, 40× atd.)

Vypočtěte počet xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx
x	X	=	xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a reagencie XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx extraktu.

Předběžné xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ukázat žádné xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx panelu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kmenů (viz xxxxxxx 3).

1. Protokol PCR Xxxx et al. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1	5′-XXX XXX AGC TTG XXX CCT XXX-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Y-2	5′-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 288 bp

1.2 Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx xXXX (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx polymerasa (5U/µl) (8)	0,1 µl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	2,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	2 xxxxxx xxx 96&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 sekund při 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)
	iv)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Ava XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2	5′-xxx xxx xxx xxx xxx gtc xxx xx -3′

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 bp.

2.2 Reakční směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(9)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx Xx-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx xxx 68 °C (hybridizace xxxxxxx s templátovou XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx I po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GGC AGA XXX T-3′
Přímý xxxxxx XX-5-X	5′-XXX TTA XXX XXX XXX ACG XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX ACC XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx NS).

3.2 Reakční směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx PCR (10) (15 xX MgCl2)	2,5 µl	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

3.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
	iii)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund při 72&xxxx;°X (xxxxxxx kopie)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční enzymová xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′
Xxxxxxxx primer Xx-1-X	5′-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX GCA AGA XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Rs-1-F (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)	0,2&xxxx;µx	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx množství:	25,0 µl

Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx XXX&xxxx;(13)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	1 µl	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µM
Taq polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx reakce xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové DNA)
35 xxxxx:	xx)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (denaturace templátové XXX)
	xxx)	30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (syntéza xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř	5 g
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (redestilovaná)	6,2 ml

6. Pufr 10X Xxxx -Acetát -XXXX (XXX), xX 8,0

Tris	48,40 g
Ledová xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (disodium xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx caa xxx xxx ccc-3′

Nespecifická eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx agg xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: USTALOVAČ XX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX JEDOVATÝ. XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx ultračisté xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpouští po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (PB; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx HCl xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx xx 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
Xxxxxxxx	30&xxxx;%,
Xxxxx XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi.

Počet xxxxxxx:	1	4	6	8	10
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 nebo XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx oligosondami x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx slunečním xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °C xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx listy (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku a rajčete xx měly xxx xxxx naočkováním xxxxxxxxx xx skleníku x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24 °C noční: 14 xx 18 °C
Vhodná xxxxxx rajčete	‚Moneymaker‘
Vhodná xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxx, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/EC xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.	Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx the identification xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx that specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx potato xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7.	Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification of x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, A.C., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, X.X. (1988) X detection xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx some xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx appearance on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx the diagnosis xx bacterial xxxxxxxx xx plants. Blackwell xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, C.T. and Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting to xxxxxxx xxxxxxxx Xanthomonas xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., F. Tavner, X. Holloway, X.-X Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. A novel xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence analysis xxx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX amplification xx 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. European Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Robinson-Smith, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Young, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, J.J., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx disease xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Elphinstone, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29.	Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Smith, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx automated and xxxxxxxxxxxx flourogenic 5’ xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, J.D. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx rot of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx případech xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y) provedený(é) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) xxxxxxxxx a na xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx metodou xx xxxxx xxxx, xx třeba zadržet x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dokud xxxx výše xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2:

—	xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx nebo lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx je xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) bodu x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech xxxxxxxx:

xxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxx se xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zdroje xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx zjištěna xxxxxxx organismem,

—	na nichž xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx byla xxxxxxx úřední kontrola x&xxxx;xxxxxx podezření xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné rostlinám xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xx kterých bylo xxxxxxxx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zamořených xxxx produkce, včetně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx nebo prostřednictvím xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem xxxx xx podezření na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx ze xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx s místy xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx zamořená organismem xxxx u nichž xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx nebo xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx podezření xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx postřik xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx organismem.

PŘÍLOHA V

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), zahrnují:

—	uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) bodu xx) xxxxxxxxxx za xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) produkce x&xxxx;xxxxxxxxx produkční vazbou xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, na xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx společného xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) produkce xxxxx xxxxxxxxx odrážky xxxx xxxxxxxx v takovém xxxxx (místech) produkce xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx produkce podle xxxxx odrážky,

—	prostory, ve xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx produkce xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx výše,

—

veškeré xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladovací xxxxxxxx nebo jejich xxxxx a všechny xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx označeným xx zamořený xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx v předchozí odrážce xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxx xxxxxxxx xxxxxxx a testování podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx se sesterským xxxx rodičovským xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxxxxxxxx za xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx pravděpodobným. Xxxx xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (místa) xxxxxxxx uvedeného xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zaplavených xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx zamoření.

Prvky, jež xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

x případech xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv)

—	blízkost k jiným xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

—

místa xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx xxxx, jestliže xx xxxx bylo xxxxxx odtoku povrchové xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) produkce, xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

ii)

v případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv), kde xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx(x) by xxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nádrž, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx zamořenou,

—

vodní xxxxxxx, xxxxx mají xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx zamořenou, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx toku a průtoku xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) a případně xxxxxxxxx xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx kterém xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinného materiálu x&xxxx;xxxxx členském xxxxx (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), ihned xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 odst. 3, xxxx.:

x)	xxxxx odrůdy xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx doručení xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxx rajčat;

e)	kopii xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a kopii xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

Xxxxxxxx dodatečné xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx xxxx:

xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx potvrzení xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxxxxx zdroje x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx (zdrojích) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx zdroje, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, osvědčení xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 odst. 1 bodu xx) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), jak xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx zařízeními xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx prostředků,

nebo

—	jiná xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx oznamují Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx členským xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedenými možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možností se xxxx xxxxxxxx odstranit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx daného xxxxxxxxx xxxxx (států), xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx mají xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx použity jako xxxxxxxx brambory určené xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bez xxxxxxxxx, na xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a pro xxxxxx a okamžitou xxxxxxx xx zpracovatelského závodu x&xxxx;xxxxxxx zařízením xxx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxx xxxxxxx některými xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx partie xxxxxx xxxxxx a listové tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx nehrozí xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx xx provádějí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx v čl. 6 odst. 4, xxxxx přijmou xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) a písm. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx xx):

xx xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx), xxx:

xxxxx xxxxxxx xxxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx pěstovány:

—	hlízy xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx rajčete,

—	s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx hrozí xxxxxx přežití xxxxxxxxx,

—	xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x prvním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, xx xxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během úředních xxxxxxxxx provedených xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx pěstitelské xxxx před xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxx produkce xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx rostliny rajčete xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx mají pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, bude xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během pěti xxxxxxxxxxxxx let následujících xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx:

—	xxxxx učiněna xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých, a

—

v xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx trav x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v dalších xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx riziko xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx specifikovaném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx a s podmínkou, xx na xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx jiné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxxx xxxxxxxx prohlídek xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx produkce xxxxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx rostliny xxxxxxx, xxxxx testovány xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX;

xx xxxxx ostatní polích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx spojené s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a ostatními planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně plevelů x&xxxx;xxxxxx lilkovitých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxxx xxx xxxxxxxx plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx prohlášeného xxxxxxxx,

—

x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx pouze úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx buď xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx rajčete xxxxx být xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx semen a vypěstovaných xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx která xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx pěstitelském roce xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxxx z úředně certifikovaných xxxxxxxxx brambor xxx xx produkci sadbových xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	x případě xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx rostliny rajčete xxxxxxxxxxx ze xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX nebo xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx buďto xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx na produkci xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx organismu a v příslušných xxxxxx/xxxxxxxxxx období se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx úředně xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx II;

ihned xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu xx) x&xxxx;xx prvním xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxx produkce x&xxxx;xxxxxxxx xx produkce brambor x&xxxx;xxxxxx budou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dezinfikována xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx patřičné xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii), xxx je xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx pěstovány žádné xxxxx bramboru, rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny organismu xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxx xxx jednotku x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zavedena xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelského xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní změny xxxxxxxxxxx média a očisty x&xxxx;xxxxxxxx dezinfekce dané xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vybavení, x&xxxx;xxxxx xxxxx následně xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx xxxx xxxxxx xx příslušných xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx brambor, bude xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx rajčat xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxx požadavky směrnice 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou,

—	budou xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx zajistit, xx xxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx v takových xxxxxxxxxx, která jsou xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxxx vyčištěna x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodných metod, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx tři xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx následují xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx zóna xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv):

—	zajistí xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, skladují xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xx s nimi xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxx smluvně xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxx zóně xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx vypěstovaná xxx xxxxxx xxxxxxxxx a aby xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx zařazených xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu iii), xxxx xx sklizni xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou manipulaci xx sklizenými xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx z osiva, xxxxx odpovídá xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, nebo, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx, u všech rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx byla xxxxxxxxx voda prohlášena xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) nebo je xxxxxxxxxx za xxxxx xx xxxxxx možného xxxxxx organismu podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, včetně xxxxxx vzorků xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx zdrojích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx případy,

—

zavedou xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin organismu, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxx být přezkoumán xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx každoročního xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, jestliže xx příslušné orgány xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, může xxx povoleno, z úřední xxxx, pro xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx použity xxxxxx xxxxxxxxx technologie, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx výpusti xxxxxxxx odpadu, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx likvidací xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx kterých xx xxxxxxxxxx s uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx období.

PŘÍLOHA VII

Úředně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a rajčaty (xxxxxx xxxx, kamenů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se xxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx uložením xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxx půdy xxxx kontaktem s vodními xxxxxx, xxx by xxxxx xxx používány xxx zavlažování xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx ztráty odpadů,

nebo

—	spálením, nebo

—	jinými xxxxxxxxxx, xxxxx prokazatelně xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx Komisi x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx suspendované xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx odstranění xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx pododstavce i).

Následně musí xxx tekutý odpad xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X xxxxxx objemu xx dobu xxxxxxx 30 minut xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx a kontrolovaným způsobem, xxx kterém nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko, xx xx odpad xxxxxx do xxxxx xx zemědělskou půdou xxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx použity k zavlažování xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx ošetření xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx příloze xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx standardní referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4) Potencionální xxxxxxx xxxxxxxxx kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, ze xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx laboratořích xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (viz xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx extrakční xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X a NS-6-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx pupkových xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx izolace XXX může vyžadovat xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.