EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. června 2006,

xxxxxx xx xxxx přílohy xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. října 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx důvodům:

(1)	Jedním x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx je Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx jen „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx ochranu xxxxx organismu, aby xx zjistilo místo xxxxxxx a stanovil rozsah xxxxxxxxx, předešlo se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx jeho xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx v poznatcích x xxxxxxxx a postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a kromě xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx několika xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx opatření.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx vývoje xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx a aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx jak v poslední xxxx xxxxxxxx postupy, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx prvky xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx vypracovány xxxxxxxx předpisy pro: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx prohlášena xx xxxxxxxx, a ve vymezených xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx směrnice 93/85/XXX xx nahrazují xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 31. xxxxxx 2007 právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx. Neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi těmito xxxxxxxx a touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Tyto předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx třetím xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx je xxxxxx členským xxxxxx.

X Bruselu xxx 12. xxxxxx 2006.

Xx Komisi

Markos XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, s. 2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI XXXXXXXX, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Smith) Xxxxx xx al. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, validovaná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a budou xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx nutné xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx povolení xxxxxxxx úředními orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 93/85/XXX, naznačuje pozitivní xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx Xxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí se xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx není xxxxxxxxx xx infikovaný Cms.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční schéma xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru vykazujících xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je určen xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx z výskytu xxxx typickými příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx testy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx testů.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy a často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx omezené xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i když xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Tím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx postižené xxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxx části xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx naleznete xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx cévních xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxx mít nepatrně xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx svazků x&xxxx;xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx sýrové xxxxx. Xxxxx exsudát xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx část prstence, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko pupkové xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx okraji. X&xxxx;xxxxxxxx době xx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poškození x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx vede x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu výkladu xxxxxxxx. Postup xxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Použijte vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx oschnout xx vzduchu. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx xxxxxxxxx) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xx ve xxxxxx xxxxxx zeminy a jestliže xx xx provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci každé xxxxx. Opatrně xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové části x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti dejte xxxxxxx a testujte xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx by xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx této xxxxx xx naříznutí hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky by xxxx korkovatět xx xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a měly xx být xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (při x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) by měly xxx uchovány podle xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x případě, že xxxx nádoby znovu xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx vyčištěny a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového konce xxxxxxxx, xxxxx to xxxx možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx skladování xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx jedním z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx rozdrcením x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx; sterilovaný xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Učiňte bezpečnostní xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxxxxxxxx, aby xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby nebo xxxxx zařízení. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx jej xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo vakuovou xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10 °C a odstraňte xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx na C. x. subsp. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx účely. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a ke zbývající xxxxx vzorku, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a vzorky X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo kontaminaci. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus se xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 xx xx xxxxxx strany každého xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xxxxxx xxxxxxxxxxxx etanolem 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx papírem.

Shromažďujte xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po dobu 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením částí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx nebo maximálně 24 hodin při xxxxxxxx teplotě.

3.2.3 Po xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx polovinu xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx jako hlavní xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx XX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx proti xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx řadu protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxx. Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxx xxx prováděn xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx není xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2, x&xxxx;xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C) xx se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Používejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx okénky, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xx test jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro xxxxx xxxxxx objem xxxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 do xxxxxxx okénka. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

ii)

Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxxx měřené standardní xxxxxxxx (xxx okénka x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx je xxxxxx 15 µl – xxx větší okénka xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2 Vysušte kapky xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx teplotě 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů protilátek.

V případě xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx co možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) a dvojnásobný xxxx (2T).

ii)	Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(XX) xxxxxxxxxx v IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 písm. x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx ředění antiséra/protilátky
Vzorek 1
Vzorek 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx na vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte sklíčka xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx okénka pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx jako předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka a přiložte xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumejte xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX opakován (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx okéncích xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx sklíček.

4.4.3 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx a morfologií v titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopovém xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 buněk na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se považuje xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx není xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx vyšetřovací test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx v glycerolu při xxxxxxx –16 až –24 xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx PD 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x&xxxx;3–5xxxxx xxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu xxxxx xxxxxxx 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx dobu 8&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μl 96&xxxx;% xxxxxxx. Promíchejte protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 4&xxxx;°X po xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 M PB (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (v 0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. V případě, xx je xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxxx etanol xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X&xxxx;XX (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx na xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	okénko 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	okénko 7	xxxxxx 8	okénko 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Krycí xxxxxxx 2

5.1.6 Nechte sklíčka xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad plamenem.

V xxxx fázi je xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx před prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx skladovat, xxx xxx by xx xxxxx jednou zmrazit x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx ponořte xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx jednou, x&xxxx;xxxxxx filtračním papírem.

Alternativně xxxxxxxx xxxxx lyzozymu 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 mM Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) do xxxxx xxxxx a inkubujte při xxxxxxx 37&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

5.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxx sklíčka uschnout xx xxxxxxx v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx inkubační xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v hybridizační peci xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μx na 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte po xxxx 5 minut při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °C x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxx xx 4&xxxx;xxxxxx na xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6 Přikryjte xxxxx xxxxxxx 2 krycími sklíčky (24 × 24&xxxx;xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxx vlhké komory x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx noc x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X v temnu.

5.2.7 Připravte 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx vodní xxxxx při teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x&xxxx;1x xxxxxxxx při teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx promývacího roztoku 1/2 hybmix x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx sklíčka xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a celé xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx FISH xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Použitím xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) musí být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků, xxx nejsou pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx v okénkách testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx být test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx povrchu sklíček.

5.3.4 Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx obsahují méně než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX test jako xxxxxx screeningový test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Pro dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx by měli xxxxxxxx zkušení laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx biologii, aby xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx se mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx ve xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx být xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky.

Připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

X purifikaci cílové XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX dispozici x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx podle Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku na 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx lyzozymu xx 1&xxxx;xx v 10 xX Tris XXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

6.	Přidejte 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx míchejte xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče do xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx a míchejte xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx stane homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X pro oddělení xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mezifáze.

9.	Přeneste xxxxx fázi do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500 µl 80&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx při 4&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut při xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte při xxxxxxx –20&xxxx;°X až xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx usazeninu xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX použijte 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1b) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX (např. Qiagen XXxxxx Xxxxx Xxx) xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx stejně xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx reakční směs xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl amplifikované xxxxxxx směsi DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího pufru (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 V na xx. Xxxxxxxxxx vhodný xxxxxx XXX, např. 100 bp ladder.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) xx xxxx 30–45 minut, xx použití vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s tímto mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální teplotě x&xxxx;xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou xxxxxxxxxxx gelu a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx negativní, xxxxx amplikon typický xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX s rostlinnými xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx s druhou xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření na xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx s C. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx získán žádný x&xxxx;xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na x&xxxx;xx xxxxxxx k extraktům ze xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx očekávat xxx xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx použít x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx testované xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z oddílu 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 listů xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 dny nezalévejte, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx stonek xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx sterilního xxxxxxxx proveďte šikmý xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx kapky.

7.3.3 Zakryjte xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx mezi rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pokud xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;4) stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx po xxxx xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24&xxxx;°X. Xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vlhkosti (70–80&xxxx;%) a zalévejte je xxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Buňky X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °C. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx jasně xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Pokud xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx věnujte maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové komory xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx počínaje 8. xxxx prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx může xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx vzhled. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vždy neodumírají; xxx déle trvá xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xx naděje na xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx vnímavější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx listů a nebo xxxxxx xxxx xx.

Xxxxxxx xxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx z pletiv hlízy. Xxxxx k nim Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx carotovora xxxxx. xxxxxxxxxx a E. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Zejména Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx velmi podobné xxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus. Jediným xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx se xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin (macerace xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX nebo XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx (xxx oddíl 8). Můžete xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podezřelé x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou po 4&xxxx;xxxxxxx pozorovány žádné xxxxxxxx, proveďte test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx biotestu:

Platných xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, z těchto xxxxxxx xxx izolovat bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx nejsou xxxxxxxx zjištěny.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX C. X. XXXXX. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx, že xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, následně xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou patogenity (xxxxx&xxxx;10). Ačkoliv xx X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx izolace C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xx stonků rostliny.

Izolace xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx bramboru xxxx částí stonků x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx mají být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Testujte xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramborové xxxxxx se obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x&xxxx;xxxx, že xxxxxxxx xx obvykle v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90 mm – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx objem xxxxxxxxxxx), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx postupem xx xxxxxxxxx počátečních 100&xxxx;µx alikvotní části xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxx s agarem xxxxxxx xxxxxxxxx a následné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx druhou xxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxx xxxxxx xx závěr xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx zředění.

8.1.3 Inkubujte xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx kolonií podobných X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci lilku xxxxxxxxxxxx a/nebo následnou xxxxxxxxxxxx by se xxxx xxxxxxxx na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, tj. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx médií: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

agar x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx glukózy,

agar x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx dobu xxxxxxxxx 10 dní.

C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx klenuté xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10&xxxx;xxx. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx čistoty.

U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Typické xxxxxxx jsou smetanově xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx vyklenuté, xxxxxxxxx xxxxxx, s rovnými okraji x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 mm.

Jednoduché Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) může xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx další xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) a proveďte xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx nejméně xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxx Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Anonym (1987).

Xxxxxxx xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21&xxxx;°X a po xxxxx xxxxx by xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Testy	Očekávaný xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) testy	Inertní xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx slabá
Tolerance 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx ze xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk/ml x&xxxx;xxxxx xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX postup (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxx, jestliže XX xxxx kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx water = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx lázni xxx teplotě 100&xxxx;°X xx dobu 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx můžete xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze potom xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; xxx xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx a kol., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

d)	Identifikace X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx velikosti x&xxxx;xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4 FISH xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 xxxxx na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (oddíl 5).

c)	Test FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx postup XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 Iso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Anteiso X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxx (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10. KONFIRMAČNÍ XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované látky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). U čistých xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 týdnů nastat xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx příznivých xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky infekce xxxxxxxxxxx části stonku 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx a suspendujte x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 mM fostátového xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx MTNA x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), inkubujte xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx typických xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Diagnóstico xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx kulturu xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx v 10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Toho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx slupkou, x&xxxx;xxxxx xx xxxxx, xx xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx desetinná ředění x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx alikvotní části x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5 ml, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx teplotě –16 xx –24&xxxx;°X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx X. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test proveďte xxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x&xxxx;XXXX testy xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn x&xxxx;xxxxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx zjištěn v žádné x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx dobu 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX test

2.1 Pufry xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Tento pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2.2 IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, pH 7,6

Tento xxxx se používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX testy x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace IF x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v jednom xxxxxxxxxxx poli (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha jednoho xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx jamkami a
	s	=	plocha xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x atd.)

3.

Vypočítejte xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx Xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx živný agar xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx xxxx 20 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Yeast peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121 °C xx dobu 15 min.

Médium x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktem x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = YGM)

Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO4.H₂O	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Baktoagar (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilizujte 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115 °C xx dobu 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
Xxxxx	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX₄.&xxxx;X₂X	0,015&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Sigma) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a ochlazení xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx antibiotika: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Sigma) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v zásobních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx v 50 % ethanolu, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103 xx 104 buněk C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx nemělo vykazovat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1 Oligonukleotidní xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx gtg ggg xxx gaa aa-3′
Primer XXX -X	5′- xxx xxx xxx gtt xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx gca xxx xxx xxx acg xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX kontroly 18S xXXX = 377 xx (sada XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx NS-8-R (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 minuta při xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx teplotě 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX matrice)
	vi)	30 xxxxxx při xxxxxxx 62&xxxx;°X (připojení primerů)
	vii)	1 xxxxxx při teplotě 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) xx), x), vi) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX amplifikované x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (bidestilát)	6,2 ml

3. Pufr 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (TAE) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (xxxxx xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Gold) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 písm. x) x&xxxx;6.2). Při použití xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX bude xxxxx xxxx optimalizace koncentrací xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx FISH Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01:	5’- xxx xxx xxx xxx cat xxx tgc acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXXXX RUKAVICE X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx přibližně 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 přidáním 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxxx xX indikačním xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [UPOZORNĚNÍ: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx prachem při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% xxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx EUB 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 ng/μl

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 μx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx lehké sensitivní xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20 °C. Xxxxx xxxxxxx chraňte před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx vejcoplodého

Vysejte semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do xxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx sterilního pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne:		14 hodin xxxx přirozená xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:	„Xxxxx Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpusťte 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx draselný	2 g
Destilovaná xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx společně rozetřete xxxxxx tloučku v misce. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% xxxxxx	100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte pod xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx minuty.

5.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx vodou x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. G., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, J. D. x&xxxx;X. Xxx Vaerenbergh. Xxx interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx potato. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx of x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10.	Klement X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Lelliott, X. X. x&xxxx;X. W., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) xx potato xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837–842.

15.	Mills, D., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Phytopathology, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. x&xxxx;X.X. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687–693.

17.	Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Sechler, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx XXX-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide for xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; St. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. X., 1967. A guide to xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralstonia solanacearum xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Collins, 1974. X&xxxx;xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Wullings, B. X.; xxx Beuningen, X. R.; Xxxxx, X. D. x&xxxx;X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

PŘÍLOHA II

1.

Při xxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx ve vyšetřovacím xxxxx (vyšetřovacích xxxxxxx) xxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx potvrzeno nebo xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, které xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx není xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx testování xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kontaminace xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, které/á xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx nebo xxxxxxxxx označeným xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), včetně xxxx, xxxxx užívají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zařízení x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx v takovém/vých xxxxx/xxx xxxxxxxx xxxxx období, xxx se xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, vozidlo, xxxxxxxx, xxxxx, xxxx xxxxxx jednotky, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx přijít xx xxxxx s hlízami xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx předměty xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a staveb,

—

v důsledku xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vztah x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž xx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx organismus xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx jako pravděpodobné xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx stanovení xxxxxxx rozšíření podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx zohlednit xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx míst xxxxxxxx, kde xx xxxxxxx brambory nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor.

3.

Oznámení uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx pododstavci jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx metod stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (xxxxxxxx, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx riziko xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx členských xxxxx xxxx xx xxxxxx členského xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, v němž xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx informace xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxx xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx a příjemce,

—	datum xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx pasu xxxx xxxxxxx číslo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx provedeného x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx stupně xxxxxxxxxxx xxxxxx vzorků,

—	informace x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx předpokládaném xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx o rozsahu xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx a u sadbových brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx oblasti, xxxxxx xxxxx míst xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně kontrolovaná xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx zemědělskou xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, xx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx související s výše xxxxxxxx nebo vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx nebo vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx informování xx účelem zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx souhlasem odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx, v nichž xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx zařízení k likvidaci xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx nevyžaduje změnu xxxxx, x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. S brambory xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx v případě, xx xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému zpracování, x&xxxx;xxxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx s vhodným zařízením xx xxxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, že nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx metodami xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektů xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, xxxxx xxxx členské státy xxxxxxx xxxxxx vymezené xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx za zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx označeném za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) buď

i)

—

během xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx následujícím xx xxxxxx xxxxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, a pod podmínkou, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx jdoucích xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx, je xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx konzumních xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx testují xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

—

xx xxxxxxxxxx období xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx činit xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx xxxx pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx sadbu nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx ladem xxxx xxxx stálá xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, že xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx planě xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx konzumní xxxxxxxx a sklizené xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xx xxxxx ostatních xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx úřední subjekty xxxx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx planě rostoucími xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx označeném xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy, rostliny xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepěstují, xxxx

—	xx certifikované sadbové xxxxxxxx xxxxx pěstovat xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx pěstují xxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx, která xxxx uvedena x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx buď xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx, xxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx planě xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) x&xxxx;xx prvním následujícím xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx metod xxxxx xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné úplně xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx osivo, xxxxx nebyla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx včetně přinejmenším xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednotky a veškerého xxxxxxxx a dokud následně xxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx souhlas x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zařízeních, xxxxx xxxx xxxxxxxxx v souvislosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx kontrolu xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jakož i prostory, xxxxx pronajímají pro xxxxxxxxxxx používanou k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této oblasti xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx sadba nebo xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolou, a aby xx xx sklizni xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, která byla xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nakládání xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx mezi nakládáním xx xxxxxxxx sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx program xx náhradu xxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx XX odstavce 1 musí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx bylo vyloučeno xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Bramborový xxxxx (xxxxxx vyřazených xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx slupek) a jiný xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx půdy, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném místě xxx likvidaci xxxxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím na xxxxxxxxxxx xxxx. Odpad xxxx xxx přemístěn xxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

ii)

Tekutý xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx pevných částic. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být likvidovány xxxxx písm. x).

Pevný xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60 °X x xxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx podléhajícím xxxxxxxx schválení x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou půdou. Xxxxxxxxxxx xxxxxx opatření xx xxxx oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xx odpad xxxxxxx s manipulací, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.