EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/XX

xx xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx přílohy xxxxxxxx Rady 93/85/XXX x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 93/85/XXX xx dne 4. xxxxx 1993 (1) x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxx „organismus“).

(2)	Organismus xx stále vyskytuje x xxxxxxxxx částech Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx ochranu xxxxx organismu, aby xx zjistilo xxxxx xxxxxxx a stanovil xxxxxx xxxxxxxxx, předešlo xx xxxx xxxxxxx a rozšíření x xxx xxxxxxxx výskytu xx zabránilo jeho xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx jeho xxxxxxxxx.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx praktické xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx týkajících se xxxxxxxxxx opatření.

(5)	V xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, jsou xxxxxxxxxxx jak v poslední xxxx vyvinuté xxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx o technické prvky xxxxxxxxxx opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisy xxx: xxxxxx xxxxxxxx testovaných xxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti oznamování xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a příslušné xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, která xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, a ve xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx,

XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx přijmou x xxxxxxxx nejpozději xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx dosažení xxxxxxx x xxxxx směrnicí. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Tyto xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx vstupuje x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx vyhlášení v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Komise

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;X

XXXXXX TESTU XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX KROUŽKOVITOSTI BRAMBORU, XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vzorcích hlíz xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx;

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx).

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, validovaná činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a budou xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx rostlin.

Testovací xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx chybám, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 93/85/XXX, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx postupových diagramech.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx Xxx a musí být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx v testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx negativní, xxx xxxxxx není považován xx infikovaný Xxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx čl. 4 odst. 2 definován jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté kultury X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

1. PREZENTACE XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx v hlízách bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti

Postup xxxxxxxxx je xxxxx xxx hlízy a rostliny xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx identifikaci kultury X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není dostačující x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX PŘÍZNAKŮ XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx klimatických xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx poli zjistí xxx zřídkakdy x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx jsou příznaky xxxxxx xxxx se xxxxxx s příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje listů. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx rostou, x&xxxx;xxxx xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx pupku. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Prvním xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx zabarvení xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx při jemném xxxxxxxxx hlízy vystupují x&xxxx;xxx xxxxxxx sýrové xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx a příznaky xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. S postupem xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxx xx x&xxxx;Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx k druhotnému xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vnitřních xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx popsaný bramborový xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Omyjte xxxxx. Použijte vhodné xxxxxxxxxxx prostředky (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx oschnout xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx ve vzorku xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx má provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku xx xxxxxxxx konci každé xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky omezte xx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, mělo by xx provést vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx naříznutí xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx a měly xx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx x&xxxx;4–10&xxxx;°X) xx xx ukončení xxxxx testů. Všechny xxxxx xx xxxxxx (xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx) by měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do nepoužitých xxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxx nádoby xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, uchovávejte xx v nádobě bez xxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx třepačce (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx dobu 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (např. Xxxxxx xxxx Ultra Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Bioreba, 150 mm × 250&xxxx;xx; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za použití xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby pro xxxxx vzorek bylo xxxxxxx čerstvě sterilizované xxxxx (nože) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxxxxx xx drcení x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx použití.

3.1.4 Dekantujte supernatant. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g po xxxx 15 minut (nebo 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx xxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aniž by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.6 Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx xxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx –86&xxxx;°&xxxx;X&xxxx;(xxxxxx). Extrakty xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7 Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx testy.

3.2 Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx zjištění latentních xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1–2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx přímo nad xxxxxxxx země.

Části stonků xxxxxx dezinfikujte etanolem 70&xxxx;% a okamžitě xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

3.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) xx xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po dobu 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx rozdrcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex). Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx části stonků x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx teplotě.

3.2.3 Po xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx purifikace xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.4–3.1.6.

3.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhou xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě –68 xx –86 °C (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX XXXX

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se jako xxxxxx vyšetřovací xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, ale méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití vhodného xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xx měly xxx XX titr alespoň 1:2000. Během testu xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxx xxx prováděn xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Glycerol lze xx xxxxxx odstranit xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut při 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x&xxxx;xxxxx srovnávacím xxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu x&xxxx;xxxxxxx podle dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx (vzorků).

4.1 Připravte xxxxxxx xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – pro větší xxxxxx objem xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Druhou řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší okénka xxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) nad xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V případě xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxx skladovat xxxxxxxx v suchém xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx xxx být xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle oddílu 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx) a oddílu 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

4.3.2 Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx ponořením xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Pečlivě xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost xxxxxx osušením.

4.3.4 Umístěte xxxxxxx xx vlhký papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xx dobu 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx předtím (4.3.3).

Opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1X fosfátového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx IF testu:

4.4.1 Prohlížejte xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx zkoumejte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx&xxxx;4).

4.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx být při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx lepší. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci pufru xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítejte počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5&xxxx;× 103 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 buněk X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24 nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x&xxxx;0,01 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku.

Proveďte xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

Následující xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx fixační xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

5.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte a inkubujte xxxx xxx při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 M PB x&xxxx;50 μl 96&xxxx;% xxxxxxx. Promíchejte protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X po dobu 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, odstraňte supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01 X&xxxx;XX (viz xxxxxxx 3).

5.1.5 Kápněte 16&xxxx;µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx vzorky xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx a zředěný 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx odstředěním x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 M PB (zamíchejte xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění na xxxxxxx FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

okénko 6	okénko 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx a hybridizace

5.2.1 Připravte roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, ale xxx xx se xxxxx jednou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μl xxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx místo xxxxxxxx 50 μx proteinázy X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2&xxxx;xX XxXx2, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx a inkubujte xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx dobu alespoň 10 xxxxx.

5.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x&xxxx;45 μl xx 1&xxxx;xxxxxxx a předinkubujte xx xxxx 5&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 4 okének na xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6 Přikryjte xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhké xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l sterilní vody (Xxxxx xxxx water = UPW), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx XXX) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x hybmixu (167&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx krycí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx držák xxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) do každé xxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1 Prohlížejte xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních buněk) xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxxx&xxxx;9.4) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. U vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, neberte v úvahu.

5.3.3 Při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx morfologií a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx a při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx jasně fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx používá jako xxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používejte xxxxxxxxxx XXX činidla x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx DNA. PCR xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k přenosu XXX.

XXX xxxx by měl xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	suspenze 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty z umytých xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní vzorky.

Připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx cílové XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX XXXX [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx extrakt xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx xxxx 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. do ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x&xxxx;10 xX Tris HCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx začne xxx stejnoměrně viskózní.

7.	Přidejte 500&xxxx;µx chloroformu a míchejte xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po dobu 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X pro xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1 ml 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx dobu 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po xxxx 20 minut xxx 4 °C a odstraňte x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxxxx xx 15 000 g po dobu 10 minut xxx 4&xxxx;°X, xxxxxx zachovejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX speed xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx vody (UPW) x&xxxx;xxxxxx stát xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx upotřebení xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním x&xxxx;xxx XXX xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX (např. Qiagen XXxxxx Xxxxx Kit) xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx prokázalo, xx xxxx při purifikaci XXX z kontrolních vzorků xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Připravte xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx xx xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním testování, x&xxxx;xxxxxxxx vhodně optimalizovaný xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1 Rozdělte xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (TAE) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 V na xx. Používejte xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) xx xxxx 30–45 minut, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx gelu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx s vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními primery: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován s daným xxxxxxx).

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx a vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx s C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (příprava viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 nebo 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx xxxx popsané xxxxxxx potřeba 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx snížilo xxxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a pipetou xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx pravým xxxxxx xxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx proveďte šikmý xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 průměru xxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vazelínou x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxx xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx a pokud xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx bramboru (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18–24 °C. Inkubujte xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx je xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx je 21&xxxx;°X. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx růstové xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx místa xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx chráněny před xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx z jednoho vzorku xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, zesvětlí. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, tím xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx vnímavější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx ní.

Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx hlízy. Xxxxx x&xxxx;xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx i populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx Erwinia xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx listech x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Jiné xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus, jelikož xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx celé xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, mělo xx xxxxx k izolaci xx xxxxxxx částí pletiva xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx listů x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Proveďte xxxx XX xxxx XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx oddíl 8). Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9). Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

7.10 Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx stát, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX na xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx je test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 a 10).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx rostliny pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx rostlin xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol nejsou xxxxxxxx zjištěny.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, xx X.&xxxx;x. subsp. sepedonicus xx zjištěn x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX X. X. XXXXX. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx izolována, následně xxxxxxxxxxxxxx (viz oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx je X. x.. xxxxx. xxxxxxxxxxx náročný xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx z pletiv vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx ji xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx z pelety xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) xxxxxxx. Xxxxx izolace X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxxx xxx pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.1.3.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, připravujte xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Testujte xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx vzorek/vzorky.

8.1 Selektivní xxxxxx na xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx části xx vzorku resuspendované xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx vejcoplodého xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podmínkám Cms x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že bakterie xx xxxxxxx v infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx vzorku, x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (xxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (hokejek) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx rozetření počátečních 100&xxxx;µx alikvotní xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx misku x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, tento xxxxxx xx závěr zopakujte x&xxxx;xxxxx miskou, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx efektu xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 21–23 °C.

8.1.4 Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7 a nakonec 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxx inokulaci lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx pěstovat na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 5):

živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, obvykle xxxxx xxxxxxx zabarvené xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx v průměru 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxx (viz oddíl 10).

9. IDENTIFIKACE

Identifikujte xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě potřeby xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1 Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx obecně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx v C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxx xxxxx Xxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Xxxxxxx (2001), Xxxxxx (1987).

Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx růstu, xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx provádět x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37 °C	–
Aktivita xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx želatiny	–
Kyselý xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk/ml x&xxxx;xxxxx xx IF (dodatek 3).

x)	Xxxxxxxxx série dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxx XX xxxxxx (oddíl 4).

d)	Pozitivního xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxx, jestliže XX titr kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX test

a)	Připravte suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx xx xx xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx teplotě 100&xxxx;°X xx xxxx 4&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxxxx potřeby můžete xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Li x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x&xxxx;xxx., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX stejné velikosti x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxxxx XXXX (oddíl 5).

c)	Test XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

a)	Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx xxxxxx postup XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c)

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx suspenzi přibližně 106 buněk na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx z 3-denních kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

10.2 Naočkujte 5–10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxxxx&xxxx;7.3 nebo 7.4).

10.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx by mělo xxxxx 2&xxxx;xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, které po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.8), xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 týdny xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale nepřesahujících 25&xxxx;°X (dodatek 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx příznaky infekce xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx formu C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2&xxxx;xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Diagnóstico de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-hodinovou kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 až 2&xxxx;×&xxxx;108 xxx/xx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx x&xxxx;xxxxx slupkou, x&xxxx;xxxxx xx jisté, xx xxxx napadena X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus do xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x&xxxx;XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx zjištěn v nejméně 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a nesmí xxx zjištěn x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX silikonový xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém roztoku (XXX), pH 7,2)

Tento pufr xx používá x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček xx IF testy x&xxxx;xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O	3,2 g
NaH₂PO₄.2H₂O	0,15 g
Glycerol	50 ml
Destilovaná xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1.	Vypočítejte xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (C).

C = x&xxxx;× X/x

Xxx	X	=	xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx a
	s	=	plocha xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 121&xxxx;°X xx dobu 15 min.

Médium x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = YGM)

Kvasničný xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO4.H₂O	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Baktoagar (Xxxxx)	18&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 litru xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx médií x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx x.&xxxx;1)	16,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;(Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Xx autoklávování x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: Xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte v zásobních xxxxxxxxx následovně: nalidixic xxxx v 0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx v 50 % xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3&xxxx;xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103 až 104 xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo vykazovat xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx XXX-1	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx aa-3′
Primer XXX -R	5′- xxx xxx xxx xxx xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- gag xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3′

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX = 377 xx (xxxx NS- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 µl
10x PCR xxxx&xxxx;(1) (15 mM XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx d-nTP (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XXX-X (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxxxxx XX-8-X (10 µM) (2)	0,1 µl	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/µl) (1)	0,2 µl	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový objem	25,0 µl

1.3 Reakční xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 xxxxx:	x)	30 xxxxxx xxx teplotě 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)
	vi)	30 xxxxxx xxx teplotě 62&xxxx;°X (připojení primerů)
	vii)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (prodlužování kopie)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (závěrečná xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro použití x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx modifikace xxxxx xxxxx ii), xxx) xx), x), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX amplifikované x&xxxx;XXX X. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bgl XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx získané x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 xx x&xxxx;220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx nakládacího pufru

2.1 Bromfenolová xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx modř (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Tris Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx pufr	48,4 g
Ledová xxxxxxxx octová	11,42 ml
EDTA (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

(1) Metody xxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx homogenizační metody x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. x) x&xxxx;6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná činidla xxx FISH Xxxx

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01:	5’- xxx cgg xxx gca xxx xxx xxx xxx -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHUJTE. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx rozpustí po xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX xx 7,0 přidáním 1ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE MĚŘIČ XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx použití.

iv)	Poznámka: Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96&xxxx;% etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 xX (xX 7,4)
EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx až 1x, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx EUB 338	5 xx/μx
xxxxxx XXXXX301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Xxx každé sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx voda XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Vysejte semena xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx sterilního xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Přepichujte xxxxxxxxx s plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 až 24 °C,
	noc:	15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Tom“,
	„Rima“,
	„Balsas“.

Dodavatel: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2 g krystalové xxxxxxx x&xxxx;20&xxxx;xx 95&xxxx;% xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8 g šťavelanu xxxxxxxx x&xxxx;80&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	300 ml

Pevné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx v uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, vysušte na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx omyjte xxx xxxxxxx vodou.

4.	Zalijte Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

6.	Odbarvujte xxxxxx xx kapkách xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx pod xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx safraninovým xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 10&xxxx;x.

9.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx papírem.

Grampozitivní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the detection xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 pp.

2.	Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx for xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Xxxx, X. x&xxxx;Xxxxxxx, F., 1953. Xxx taxonomic significance xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains using xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic and Xxxxxxx Microbiology 14; 335–345.

7.	Xxxxx, J. D. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in potato. XXXX Bull., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. x&xxxx;X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx a semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10.	Klement Z.; Xxxxxxx, X&xxxx;x&xxxx;X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, R. X., 1966. The plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bacteria. X. xxxx. Bact., 29, 114–118.

12.	Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Hayward, 1966. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470–489.

13.	Lelliott, R. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. et Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx RNA xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842.

15.	Mills, X., Xxxxxxx, X., X. x&xxxx;X., X. Hanus, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx xxxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx studies xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx XXX-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. B. X., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx identification xx xxx genera of xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22.	Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, P. H. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X&xxxx;xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuwenhoek, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx and some xxxxx Pseudomonas spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. a A. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx situ xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx komerčně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx xxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek, x&xxxx;xxxxxxxxxx těchto metod xx mělo xxx xxxxxxxxx potvrzeno xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx hlízy, které xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající výluh x&xxxx;xxxxxxxxx připravený materiál xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. imunofluorescenční xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxx případné xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx a vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1, x

—	xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, a

—	izolované xxxxxxx organismu

nejméně xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx určení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, xxxxx/x mají x&xxxx;xxxxx produkčního systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx označeným xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x), xxxxxx xxxx, xxxxx užívají xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v místě/ech xxxxxxxx xxxxxxxx/xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx místě/ech xxxxxxxx během období, xxx xx xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce,

—	provozovny xxxxxxxxxx brambory x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených v odrážkách xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, vozidlo, xxxxxxxx, xxxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx předměty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx stavbami xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx vztah k hlízám xxxx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), a u nichž se, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx mohl xxx negativní, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ke klonové xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, kde se xxxxxxx brambory xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx a použití xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, za xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxx/xxx (konzumní, xxxxx xxx.) x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx kategorie sadbových xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z jiného xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, musí xxxxxxx stát, x&xxxx;xxxx xxx výskyt xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako xxxx.:

—	xxxxx xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx/xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx v případě xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx.

—

Xx ukončení xxxxx xxxxxxxxx, v každém xxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxxxxxxx odběru xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx, xxx nacházejí se x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x ohniskem/y, xxxxx xx Xxxxxx xxxxxxxx vyžádá.

PŘÍLOHA IV

1.

Úředně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v čl. 7 odst. 1 jsou:

—	použití xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx závod x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx, u kterého xxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx prokázáno, xx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx zbývající xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx vzniklý x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx V této xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx označených xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx států při xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx odpovědných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, zahrnuje:

—

jejich xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx ke xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, v místě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx xxxxxxx místě xxxxxxxxxxx xxxxx v případě, že xx xxx děje xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx zpracování, x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx dodání xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx využití xxxx xxxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx organismu, a že xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx a dezinfekci xxxxxxxx xxxxxxxxx v čl. 7 odst. 3 se xxxxxx xxxxxx metody, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxx v čl. 7 odst. 4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx produkce xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x):

x)

xx xxxx označeném xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) buď

i)

—

během xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx roce xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxxx alespoň xxxx xx sobě xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx shledáno prostým xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

—

xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx po příslušném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx sadbu nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx úřední xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1; xxxx

xx)

—

xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx označení zamoření

—	se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx planě rostoucích xxxxxxx bramboru a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx organismu, a

—	pozemek se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx jako stálá xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx pole xxxx při úředních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx pěstitelských xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy X;

x)

xx xxxxx xxxxxxxxx polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx produkce, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, že xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami organismu xxxx xxxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, rostliny xxx xxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx, xxxx

—	xx certifikované xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx jako xxxxxxxx,

—

x xxxxxx pěstitelském roce xxxxxxxxxxxx xx označení xxxxxxxx xx xxx xxxxx pouze certifikované xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx brambory, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx pěstují xxx xxxxxx kontrolou xx xxxxxxx produkce xxxxxx, xxx těch, xxxxx xxxx uvedena x&xxxx;xxxx 4.1, x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xxxx konzumní brambory,

—	alespoň xx xxxx třetího xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx sázejí xxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x každém xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx přílohy I;

c)

neprodleně xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx a skladovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při produkci xxxxxxx vyčistí a dezinfikují xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx podle xxxx 3;

x)

x xxxxxxxxxx xxxxxxxx produkce, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pěstební xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx nebyla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx sledovaným xxxxxxxxx na odstranění xxxxxxxxx a na odstranění xxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx jednotky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx xxxxxxxxxxx úředními xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx brambory xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx sadbových xxxxxxx xxxx z minihlíz xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zdrojů.

4.2

Aniž xxxx xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po označení xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx prostory x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx používány x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, vyčistí x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

b)

neprodleně xx xxxxxxxx zamoření x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx zařízení, xx kterých xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy nebo xx s těmito hlízami xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx k produkci xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vypěstovaná pod xxxxxx kontrolou, a aby xx xx xxxxxxx xxxxxxxxx brambory xx xxxxx vypěstované v místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxx podle xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zásobami xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami, nebo xxxxxxxxx xxxxxxx očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx zásobami sadbových x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

x)	xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx sadbových xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené metody xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxx IV odstavce 1 musí xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení, xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x xxxx xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx nehrozí žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx, xxxx. prosáknutím na xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxx xx místo x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx opatřeními, pokud xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Komisi x xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xx xxxxxx likvidace xxxxxx pevných částic. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxx písm. x).

Pevný xxxxx xxxx být xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60 °X v jádře xx xxxx alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx způsobem xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx mohl xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx musí oznámit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx se použijí xxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.