EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX XXXXXX 2006/56/ES

ze xxx 12. xxxxxx 2006,

xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 93/85/EHS x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 93/85/XXX xx xxx 4. října 1993 (1) x xxxxxxx proti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxx 12 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx k těmto důvodům:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx organismů škodlivých xxx brambory je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx al. xxxxx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx al., původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Organismus xx stále xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Směrnice 93/85/XXX stanovila podrobná xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx zjistilo místo xxxxxxx a stanovil xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx výskytu a rozšíření x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx jeho eradikace.

(4)	Od xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a postupech xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx organismu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX.

(6)	Xxxxx jde o postupy xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx jak v poslední xxxx vyvinuté postupy, xxxx je fluorescenční xxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (PCR), xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.

(7)

Xxxxx xxx o technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, která xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, která xxxx prohlášena za xxxxxxxx, x xx xxxxxxxxxx xxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxxxxxxxxxxxxxx výboru,

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx xxxxxxxx 93/85/XXX xx xxxxxxxxx odpovídajícími xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxx x xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí. Xxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx a touto směrnicí.

Tyto xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými státy xxxx obsahovat odkaz xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx stanoví členské xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx dnem xx vyhlášení v Úředním xxxxxxxx Evropské unie.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským státům.

X Bruselu dne 12. xxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Markos XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 259, 18.10.1993, x.&xxxx;2.

PŘÍLOHA I

SCHÉMA XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXXXXXX MICHIGANENSIS (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. XXXXXXXXXXX (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i)	diagnózy xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx;

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin bramboru;

iii)	identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (X. x. xxxxx. sepedonicus).

OBECNÉ ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx podílely na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a budou zahrnovat xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx a musí být xxxxxxxx druhý screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podezření x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován xx infikovaný Cms.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx čl. 4 odst. 2 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 93/85/XXX xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX DIAGRAMU

1.1 Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na diagnostickém xxxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Pozitivní výsledek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a následně, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx testy a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

&xxxx;

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

&xxxx;

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXX XXXXXXXXX XX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se příznaky xx xxxx zjistí xxx zřídkakdy x&xxxx;xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx poškození. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hniloby; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku omezené xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx postižené xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní části xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní lístky, xxxxx x&xxxx;xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy x&xxxx;xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx naleznete xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost pletiva xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx systému, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx než xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a stav, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx sýrové xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové části. X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx objevují xx xxxxxxx hlízy praskliny, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx době se x&xxxx;Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx. Druhotná xxxxxxx xxxx bakteriální infekce xxxx příznaky maskovat x&xxxx;xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady příznaků xxxxxxxxx na internetové xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

3. PŘÍPRAVA VZORKŮ

3.1 Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1&xxxx;xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx více xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx s méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx metod xx xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx použít xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx (není xxxx vyžadován) pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx ve xxxxxx xxxxxx zeminy x&xxxx;xxxxxxxx xx má provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx vyřízněte xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxx s podezřelými příznaky xxxxxxxxxxx kroužkovitosti dejte xxxxxxx a testujte xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx, xxxx by xx provést xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxx uchovávány x&xxxx;xxxxxxxxx (xxx v 4–10 °C) xx xx xxxxxxxx xxxxx testů. Xxxxxxx xxxxx ve xxxxxx (xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx) by měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XX.

3.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx do nepoužitých xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx vyčištěny a dezinfikovány xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, v chladu xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx pokojové teplotě xxxxxxxxx 24&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx a růst xxxxxxxxx v průběhu xxxxxxxxxx xxxx bránit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx z pupkového xxxxx jedním z následujících xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po dobu 4&xxxx;xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx xx xxxx 16–24 xxxxx chlazené, nebo

b)

homogenizujte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Bioreba, 150&xxxx;xx × 250 mm; xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xx použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxx vzorek xxxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX test, xxxxxxx přenosu XXX xx xxxxxx nebo xxxxx zařízení. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx jedno použití x&xxxx;xxxxxxx zkumavky na xxxxx xxxxxxx.

3.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3).

3.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě xxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx by xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 3). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx pro xxxx xx X. x. xxxxx. sepedonicus, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25 % (v/v) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchejte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx –86 ° C (měsíce). Extrakty xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7 Je nezbytně xxxxx, aby se xx všemi xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i pro xxxxxxx xx XX xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx o velikosti 1–2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70&xxxx;% x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx části xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

3.2.2 Zpracujte části xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxx části xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního pufru (xxxxxxx 3) a třepejte x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx/xxx) po xxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx po dobu 16–24 hodin xxxxxxxx, xxxxx

x)

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Pokud xx není xxxxx, xxxxxxxxx části stonků x&xxxx;xxxxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 minut, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.4–3.1.6.

3.2.5 Rozdělte xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx 2&xxxx;xxxxxx xxxxx. Jednu xxxxxxxx udržujte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx), xxxxx je nutné xxxxx testování.

4. IF TEST

Princip

Doporučuje xx xxxxxx IF xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se jako xxxxxx vyšetřovací xxxx XX xxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx IF xxxx používán jako xxxxxx vyšetřovací xxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx protilátky xxxxx xxxxxxxxxxxx kmeni X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus x&xxxx;xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Nezpracované polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly mít XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat v pracovním xxxxxx (XX) v blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxxx validované xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx by xxx být prováděn xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx –68 až –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx lze xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 2.2).

Xxxxxxxxx oddělené xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo x&xxxx;xxxxx srovnávacím kmenem X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dodatku 2, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24&xxxx;°X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetujte xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

xx)

Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředění (1/10 x&xxxx;1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém pufru. Xxxxxxxxxxx xxxxxx standardní xxxxxxxx (xxx okénka x&xxxx;xxxxxxx 6&xxxx;xx xx xxxxxx 15&xxxx;µx – xxx větší okénka xxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 a každého xxxxxxx do řady xxxxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx nebo pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxx pokojové teplotě xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Fixujte xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X) xxx xxxxxxxx xxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxxx podle zvláštních xxxxxx dodavatelů protilátek.

V případě xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v suchém xxxx xx xx možná xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx).

Xxxxxx XX xxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v oddílu 4.1 xxxx. x): Xxxxxxxxx sadu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. X&xxxx;xxxxx jamce xx xxx xxx xxxx 1/2 (T/2), x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx&xxxx;(X) a dvojnásobný xxxx (2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x&xxxx;xxxxxx 4.1 xxxx. xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (WD) xxxxxxxxxx x&xxxx;XX&xxxx;xxxxx. Pracovní xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1 xxxx. x) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. x)

	Xxxxxx resuspendované pelety
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1 nebo xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx&xxxx;xxxxxx 4.1 písm. xx) x&xxxx;xxxxxx 4.3 xxxx. xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Duplikát xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

4.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky na xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx nemáte xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

4.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

4.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx dobu 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 3) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx dobu 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

4.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx&xxxx;(4.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx:

4.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a kolem xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx v určeném xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2 Pozorujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x&xxxx;xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou morfologií x&xxxx;xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus.

4.4.4 Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx v titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx výsledku XX&xxxx;xxxxx:

x)

Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 × 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5&xxxx;× 103 xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické pro X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24 nebo –68 xx –86 °C.

Jako negativní xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx xx ml (xxxx. xxxx XXXXX 4053 nebo XX 406) x&xxxx;0,01 M fosfátového xxxxx (PB) z 3–5denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem jako x&xxxx;xxxxxx/x.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx bramborového extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1998):

5.1.1 Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

5.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx dobu 8&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

5.1.3 Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Protřepejte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96&xxxx;% xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxx 5.1.2 x&xxxx;50 μx 0,01 X&xxxx;XX x&xxxx;50 μx 96&xxxx;% xxxxxxx. Promíchejte protřepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxx 30–60 xxxxx.

5.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx po xxxx 8&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx supernatant x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 75 µl 0,01 M PB (xxx xxxxxxx 3).

5.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno sklíčko, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (v 0,01 X&xxxx;XX). Zbývající roztok xxxxxx (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx množství 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 M PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 6	okénko 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	okénko 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

5.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx

5.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10&xxxx;xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x&xxxx;10&xxxx;xx pufru (100 xX Xxxx-XXx, 50 xX EDTA, pH 8,0). Tento xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 50 μx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx lyzozymu 50 μx xxxxxxxxxx X&xxxx;40–400 μx.xx–1 x&xxxx;xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2&xxxx;xX XxXx2, pH 7,4) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 minut.

5.2.2 Sušte xxxxx ve stupňovaných xxxxxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu v držáku xxxxxxx.

5.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x hybmixu (xxxxxxx 7). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X xx dobu alespoň 10 minut.

5.2.4 Připravte hybridizační xxxxxx (xxxxxxx 7) x&xxxx;45 μl na 1&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5 Umístěte sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx xx každého xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxxxx/xxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6 Přikryjte xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxx sklíčky (24 × 24 mm) xxx, aby xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

5.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx xxxx (Xxxxx pure xxxxx = XXX), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx a 666 ml UPW) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/2x xxxxxxx (167&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;833&xxxx;xx XXX). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx podložní sklíčka xx držáku xxxxxxx.

5.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

5.2.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx krátce xx XXX x&xxxx;xxxxxxx xx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx vzorku zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx&xxxx;9.4) xxxx být xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, pozorujte xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být lepší xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxxx. Xx se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx a částí xxxxxx xx mohou xx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často než x&xxxx;XX xxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu FISH:

i)

Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx v žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx pravděpodobně infikované Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX XXXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx IF xxxx. Xxxxx se XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech laboratořích xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxx validovaná XXX xxxxxxx a protokoly. Xxxxxxx přednost xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PRC xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující negativní xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

—	alikvotní xxxxx resuspendovaných pelet, x&xxxx;xxxx xxx přidán X. m. subsp. xxxxxxxxxxx (příprava xxx xxxxxxx 2),

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

—	xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako vzorek (xxxxxx).

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x&xxxx;xxxxxxx 6.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220 µl xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [pH 8,0], 1&xxxx;xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx do xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx o teplotě 95&xxxx;°X xx dobu 10 xxxxx.

3.	Xxxxxx mikrozkumavku na 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx lyzozymu xx 1&xxxx;xx x&xxxx;10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a inkubujte xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx Xxxx XXX® roztok X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl Xxxx XXX® xxxxxx X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), silně xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx a míchejte xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx homogenní.

8.	Odstřeďujte xx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 xxxxx xxx 4&xxxx;°X xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1 ml 100&xxxx;% etanolu (–20 °C), xxxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11.	Xxxxxxxxxxx na 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20 °C) x&xxxx;xxxxxxxxxxx převracením mikrozkumavky.

13.	Odstřeďujte xx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx 4&xxxx;°X, peletu xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX xxxxx xxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu v 100 µl xxxxxxxx xxxx (UPW) x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou usazeninu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx XXX použijte 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX (xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx) xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx purifikaci XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované vzorky x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2 Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3 Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx.

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs PCR x&xxxx;xxxxxxxx stejnou xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX namísto xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX mikrozkumavky xx xxxxxxxx termocykleru, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) do 2,0&xxxx;% (x/x) agarózového xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X&xxxx;xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx XXX barvením x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx (0,5&xxxx;xx xx l) xx xxxx 30–45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3 V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx, např. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx pod UV xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx amplikon xxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s rostlinnými xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx&xxxx;9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření na xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx na kontaminaci, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx na x&xxxx;xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx původně xxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx, které byly xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx X. x. subsp. sepedonicus xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx xxxxx by xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o pěstování xxx xxxxxxx&xxxx;8.

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 3.1.6 xxxx 3.2.5 mezi xxxxxxxx xxxxx jednou x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.3 xxxx 7.4). Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx&xxxx;2–3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx zajistili xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15–25&xxxx;xxxxx xx xxxxxx.

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx inokulací 1&xxxx;xx 2&xxxx;xxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx buněk.

Inokulace xxxxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx lístky x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx proveďte xxxxx xxxxx dlouhý xxx 1,0&xxxx;xx a hluboký přibližně xxxx 2/3 xxxxxxx xxxxxx, řez začněte xx xxxxxxxx xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

7.4 Inokulace injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx inokulujte xxxxx nad xxxxxxxxx xxxxxx pomocí injekční xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xxxxxxxx xxxx rostliny xxxxx.

7.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 5 rostlin vodní xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxx xxxxxxx X. m. subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx z přirozeně infikovaných xxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;4) xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 nebo 7.4).

7.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.3 xxxx 7.4).

7.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx xx 4&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 18–24 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a vysoké xxxxxxxx (70–80&xxxx;%) x&xxxx;xxxxxxxxx je xxx, aby xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx a negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, anebo xxx xxxxxxxxxx místa zajistěte xxxxxx oddělení mezi xxxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx před xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx 8. xxxx prověřujte xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx tmavozelené xxxx xxxxxxxx, xxx než xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx déle xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, tím xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx vnímavější k nízkým xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxx rostliny, xxxxx xx nezbytné používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx před xx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxx hlízy. Xxxxx x&xxxx;xxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx může způsobit xxxxxxxx na xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx velmi podobné xxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx je zčernání xxxxxx v případě xxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Můžete xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx.

7.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxxxx k izolaci xx xxxxxxx xxxxx pletiva xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxxxxx xxx 3.1.3). Xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx vejcoplodého dezinfikujte xxxxxxx 70&xxxx;%&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx XX xxxx XXX xx xxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx (xxx xxxxx&xxxx;8). Můžete xxxx xxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (dodatek 9). Identifikujte xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

7.10&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx xxxx, xx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce dokonce x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx až 4&xxxx;xxxxx. Xxxxx nejsou po 4&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX/XXX na složeném xxxxxx částí xxxxxx x&xxxx;xxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx (selektivní) xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;9&xxxx;x&xxxx;10).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxxxxx výsledků xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, z těchto rostlin xxx xxxxxxxx bakterie x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx zjištěny.

Biotest je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxxxxx, že X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx u pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx infikovány X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus.

8. IZOLACE X. X. XXXXX. SEPEDONICUS

Poznámka:

Diagnóza xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx izolována, xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x&xxxx;xxxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;10). Xxxxxxx xx X. x.. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx organizmus, xx možno xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxx&xxxx;3.1.6 xxxx 3.2.5) náročná. Xxxxx xxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z pupkové xxxxx hlízy nebo xx xxxxxx rostliny.

Izolace xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx lilku vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx výsledek x&xxxx;xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;7.10). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.1.3.

Jako pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx PD 406). Xxxxxx vyloučili xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx mají být xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx před xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx/xxxxxx.

8.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx

8.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx 100&xxxx;µx alikvotní části xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx desetinásobné ředění x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx x&xxxx;xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, že xxxxxxxx xx obvykle x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 xx 1/10 000 xx MTNA xxxxxx xxxx NCP-88 xxxxxx (xxxxxxx 5) (pokud xxxxxxxxx Petriho xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 90&xxxx;xx – xxx jiné velikosti xxxxx xxxxx přizpůsobte), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx (xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx misku x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx téhož xxxxxxxx xx xxxxxx misku x&xxxx;xxxxxx, xxxxx postup xx závěr xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx miskou, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.

8.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X.

8.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx a počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx 5, 7&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx 10 xxxxx.

8.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by se xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; inokulace x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx po 3–5 xxxxx.

8.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx na xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx: (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

agar z kvasničné xxxxxxxxx xxxxxxx,

xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X–24&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

C. m. xxxxx. sepedonicus roste xxxxxx, xxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxxxxx klenuté xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx během 10 dní. (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

8.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx rozetřete xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx zlepšuje. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx okraji x&xxxx;xxxxxxx mají x&xxxx;xxxxxxx 1–3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo xxxxxxx (xxxxxxx&xxxx;9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;9) x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;10).

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomné xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;X. x. subsp. sepedonicus xxxxx xxxxx Lelliotta x&xxxx;Xxxxxx (1987), Xxxxxxxx x&xxxx;xxx. (1990), Schaada (2001), Xxxxxx (1987).

Veškerá xxxxx by xx xxxx xxxxxxxxx při 21&xxxx;°X x&xxxx;xx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxx inokula ze xxxxxxxxx živného agaru. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx z kultur x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxx	Xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxx xxx 37&xxxx;°X	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxxxx	– xxxx xxxxx
Xxxxxxxxx 7&xxxx;%&xxxx;XxXx	–
Xxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxx X2X	–
Xxxxxxx xxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx	– xxxx slabý
Kyselina x&xxxx;xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx	–
Xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 9)	+

9.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx/xx v pufru xx IF (xxxxxxx 3).

x)	Xxxxxxxxx xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c)	Proveďte XX postup (xxxxx&xxxx;4).

x)	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XXX).

x)

Xxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 minut. X&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxx buněk xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx teplotě –16 xx –24 °C xx do xxxxxxx.

x)	Xxx xxxxxxxxxxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxx xxxxxxxxx použijte xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz xxxxxxx 4; Xx x&xxxx;xx Xxxx, 1995; Xxxxx x&xxxx;xxx., 1997; Xxxxxxx a Rainey, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x)	Xxxxxxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXX xxxx

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk na xx x&xxxx;XXX.

x)	Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (oddíl 5).

c)	Test FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x)	Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21&xxxx;°X (+/–&xxxx;1°).

x)	Xxxxxxxx vhodný postup XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x)

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 Xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 Iso, 16:0 x&xxxx;17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Curtobacterium, Arthrobacter x&xxxx;Xxxxxxxxxxx také obsahují xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X&xxxx;xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;xxxxxxx 1–5&xxxx;%. U C. x.xxxxx. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5&xxxx;%.

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXX

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 buněk xx xx v UPW.

b)	Proveďte xxxx xxxxxxxx podle (Xxxxx x&xxxx;xxx., 2001).

10. KONFIRMAČNÍ TEST (XXXX PATOGENITY)

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx diagnózy X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X.&xxxx;x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx xx x&xxxx;3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 5–10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxxxx&xxxx;7.3 xxxx 7.4).

10.3 Inkubujte xxx teplotě 18–24&xxxx;°X xxx dostatečném xxxxxx x&xxxx;xxxxxx relativní vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;7.7). X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx (xxx oddíl 7.8), xx xx měly xxxxxxxxx xx 3&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale nepřesahujících 25&xxxx;°X (xxxxxxx 8). Xxxxxxxx xx xx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx s příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2&xxxx;xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x&xxxx;XXXX (xxxxxxx 5), xxxxxxxxx xx xxxx 3–5 xxx xxx xxxxxxx 21–23&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx vznik xxxxxxx typických pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Protection xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Norwegian Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx za xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Diagnóstico xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 72-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene C. x. xxxxx. sepedonicus [XXXXX 4053 xxxx XX 406] xx xxxxxxxxx xxxxx MTNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxxx pufru, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx buněk xxxxxxxxx 1&xxxx;xx 2 × 108 xxx/xx. Xxxx obvykle xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 xx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z produkce odrůdy x&xxxx;xxxxx slupkou, x&xxxx;xxxxx xx jisté, xx xxxx xxxxxxxx X.&xxxx;x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxxxxx jako xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1,5&xxxx;xx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx opatřete xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5&xxxx;xx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x&xxxx;XXXX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x&xxxx;XXX musí být X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 106 a 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Pufry xxx xxxxxxxxx postupy

OBECNÉ: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4 (bezvodý)	4,26 g
KH2PO4	2,72 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X po xxxx 15&xxxx;xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(1)	0,5&xxxx;x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx&xxxx;(1)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX-40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 g

1.2 Peletový pufr (10 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx z výkrojků x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém roztoku (XXX), xX&xxxx;7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx pH a sterilizujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15&xxxx;xxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx sklíček.

Přidejte 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 x&xxxx;xxxxx xxx IF.

2.3 Fostátový pufr x&xxxx;xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx okénka sklíček xx IF xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;XXXX pozitivních xxxxx

1.	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x&xxxx;× S/s

Kde	S	=	plocha xxxxxxx xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx jamkami a
	s	=	plocha xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8–24 xxxxx xxxx xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx xxxxxxxxx (100x, 40x xxx.)

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované pelety x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x
	X	=	xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 5

Xxxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus

a) Obecná xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx Xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná voda	1,00 l

Rozpusťte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 min.

Živný dextrózový xxxx (Nutrient dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;% D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 115&xxxx;°X xx dobu 20&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx 121&xxxx;°X xx dobu 15&xxxx;xxx.

Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0&xxxx;x
X(+)xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5&xxxx;x
X₂XXX₄	0,25&xxxx;x
XX₂XX₄	0,25&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,1&xxxx;x
XxXX4.X₂X	0,015&xxxx;x
XxXx	0,05&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,005&xxxx;x
Xxxxxxxxx (Difco)	18 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 0,5 xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při 115&xxxx;°X xx xxxx 20 xxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x&xxxx;XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 g
K₂HPO₄	0,25 g
KH₂PO₄	0,25 g
NaCl	0,05 g
MgSO₄.7H₂O	0,1 g
MnSO₄. H₂O	0,015 g
FeSO₄.7H₂O	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xX xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (při 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx) a ochlazení xx 50&xxxx;°X xxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06&xxxx;x, nalidixic xxxx 0,002&xxxx;x, xxxxxxxxxxxx X&xxxx;0,01&xxxx;x.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5&xxxx;xx/xx) x&xxxx;96&xxxx;% xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Sigma) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23&xxxx;x
Xxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2&xxxx;x
X-xxxxx	5&xxxx;x
X₂XXX₄	2&xxxx;x
XX₂XX₄	0,5&xxxx;x
XxXX₄.7X₂X	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, upravte xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 50&xxxx;°X přidejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: Polymyxin X&xxxx;xxxxxxxx (Sigma) 0,003 g, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008&xxxx;x, Xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2&xxxx;x.

Xxxxxxxxxxx rozpusťte x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;0,01 X&xxxx;XxXX, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;50&xxxx;% xxxxxxxx, xxxxxxxxx X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3&xxxx;xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxx xxx skladování x&xxxx;xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx se skupinou vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx PCR xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx PSA-1	5′- ctc xxx xxx ggg xxx xxx xx-3′
Xxxxxx XXX -R	5′- xxx xxx gat xxx xxx ctt xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxx XX-7-X	5′- xxx xxx ata xxx xxx xxx tga xxx -3′
Xxxxxx XX-8-X	5′- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxxx).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x&xxxx;xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX = 377 xx (xxxx XX- xxxxxxx).

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725&xxxx;µx
10x XXX xxxx&xxxx;(1) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-xXX (20 xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Primer XXX-X (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µX
Xxxxxx XX-7-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µM
Primer XX-8-X (10 µX)&xxxx;(2)	0,1&xxxx;µx	0,04 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/µx)&xxxx;(1)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 µl
Celkový xxxxx	25,0&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxx PCR

Postupujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx:	x)	3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)
10 xxxxx:	xx)	1 xxxxxx při xxxxxxx 95&xxxx;°X (denaturace DNA xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
25 cyklů:	v)	30 xxxxxx xxx teplotě 95 °C (xxxxxxxxxx DNA matrice)
	vi)	30 xxxxxx při xxxxxxx 62&xxxx;°X (připojení xxxxxxx)
	xxx)	1 xxxxxx xxx teplotě 72&xxxx;°X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	xxxx)	5 xxxxx při xxxxxxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx použití jiných xxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), iii) xx), v), xx) x&xxxx;xxx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx restriktivním xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx specifického xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx	5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	50&xxxx;xx

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1)	300&xxxx;µx
Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10x Xxxx Xxxxxx XXXX (XXX) xxxx, xX 8,0

Xxxxxxx xxxx	48,4&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (sodná xxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxx použitím xxxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7 X&xxxx;x&xxxx;XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;6.1 xxxx. a) x&xxxx;6.2). Při použití xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX Test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01:	5’- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx acg -3’
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX:	5’- xxx gcc xxx cgt xxx xxx-3’

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXXXX RUKAVICE X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX PRACOVAT X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx pure water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4 g paraformaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxx xX na 7,0 xxxxxxxx 1xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X&xxxx;(XX; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx a v případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X&xxxx;XXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx)	Xxxxxxxxxxxx roztok přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx chráněný xxxx xxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx	2,7 X
Xxxx-XXx	60 mM (xX 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a autoklávovaný)	15 xX

Xxxxxx až 1x, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX)	0,01&xxxx;%
xxxxxx EUB 338	5 xx/μx
xxxxxx CMSCY301	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx:&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxx XXX	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Pozn.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx lehké xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20 °C. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄	8,52&xxxx;x
XX₂XX₄	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx semena xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do sterilního xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx:		14 xxxxx xxxx přirozená délka xxx, xxxxx xx xxxxx;
Xxxxxxx:	xxx:	21 xx 24&xxxx;°X,
	xxx:	15&xxxx;°X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého:	„Black Xxxxxx“,
	„Xxxx Xxx“,
	„Xxxx“,
	„Xxxxxx“.

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981)&xxxx;(1)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxx 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxxx 0,8&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx amonného x&xxxx;80&xxxx;xx destilované xxxx.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx	1&xxxx;x
Xxxxx xxxxxxxx	2&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	300&xxxx;xx

Xxxxx xxxxx xxxxxxxx rozetřete xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xx vody x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X	2,5&xxxx;x
95&xxxx;% etanol	100 ml

Zamíchejte a uložte.

Ředění: 1:10 xxx přípravu xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx zahřátím.

2.	Zalijte xxxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx a nechte xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx.

3.	Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx a vysušte xxxxx xxxxxxx.

6.	Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95&xxxx;% xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7.	Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx.

8.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx působit 10 s.

9.	Opláchněte xxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, gramnegativní xxxxxxxx xx zbarví xxxxxxxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1.	Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Commission xx the European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2.	Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213–218.

3.	Xxxxxxx, I. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx tubers. XXXX Xxxx. 14 (2), 147–152.

4.	Doetsch, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. V: Manual xx methods xxx xxxxxxx bacteriology, Xxxxxxxx Xxxxxxx for Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21–23.

5.	Hugh, X. x&xxxx;Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. J. Xxxx., 66, 24–26.

6.	Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335–345.

7.	Xxxxx, X. X. x&xxxx;X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxx ring xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx potato. XXXX Xxxx., x.&xxxx;17, 1987, xx. 1–10.

8.	Xxxxxxx, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Physiological capabilities xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal xx Xxxxx Diseases xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590–601.

9.	Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K a D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11.	Xxxxxxxx, X. A., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bacteria. X. appl. Xxxx., 29, 114–118.

12.	Lelliott, X. X., E. Xxxxxxx x&xxxx;X. C. Xxxxxxx, 1966. A determinative scheme xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Bact., 29, 470–489.

13.	Xxxxxxxx, R. X. x&xxxx;X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Skapt. xx Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6&xxxx;(2), 101–106.

14.	Li, X. x&xxxx;X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Reaction xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837–842.

15.	Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., W. x&xxxx;X., X. Hanus, 1997. Specific detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx of three xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853–861.

16.	Xxxxxxx, X. -X. a R.A. Xxxxxx. 1999. Identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx chain reaction-based xxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687–693.

17.	Xxxxxxx, K.-H., 2000. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155–165.

18.	Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx xxxxxxxxxxxx to xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19.	Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, A. x&xxxx;Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095–1100.

20.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Schaad [Xxxx.]. – 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21.	Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X&xxxx;xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22.	Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, X.X., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of plant xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx. sepedonicus. European Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 107 (7), 739–748.

23.	Xxxxxx, X. H. X. xxx X. X. Collins, 1974. X&xxxx;xxxxx xx test xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Antonie xxx Xxxxxxxxxxx, 40, 481–527.

24.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx cellular xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281–295.

25.	Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. a A. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546–4554.

(1)&xxxx;&xxxx;Xxxxx se xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxx každém xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, pro xxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X&xxxx;xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx metod xx xxxx xxx xxxxxxxxx potvrzeno xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx součástí xxxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou součástí xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx/x, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx podklady,

dokud xxxx xxxx xxxxxxx postup xxxxx ukončen.

Zadržení xxxx xxxxxx případné testování xxxxx.

2.

X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxx v odstavci 1, a

—	vzorek xxxxxxxxxx materiálu xxxxx xxxxxxxxxxxx naočkovaného xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxx, x

—	xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

xxxxxxx do xxxxxxx měsíce xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xxx xxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. b) je xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxx xxxx rostliny xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxx/x xxxxxxxx, které/á xxxx x&xxxx;xxxxx produkčního systému xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), xxxxxx těch, xxxxx xxxxxxx společné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—

hlízy nebo xxxxxxxx pěstované x&xxxx;xxxxx/xxx xxxxxxxx uvedeném/ých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx nacházející xx x&xxxx;xxxxxxx/xxxx xxxxx/xxx xxxxxxxx během období, xxx xx hlízy xxxx xxxxxxxx označené xx zamořené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx z míst xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx, sklad, xxxx xxxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx s hlízami nebo xxxxxxxxxx označenými xx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předměty vyjmenovanými x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxx a dezinfekcí xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx,

—

x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;6&xxxx;xxxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxxxx, které xxxx označeny za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x), x&xxxx;x&xxxx;xxxxx se, xxxxxx xxxxxxxx testů xx xxxxxxxxxx mohl xxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx příbuzných xxxx xxxx rostlin xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x

—	xxxxx/x produkce hlíz xxxx rostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx rozšíření podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx brambory xxxx xxxx xxxxxxxxxxx rostliny,

—	společná xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxxxx:

—	xxxxx odrůdy xxxxxx brambor,

—	druh/typ (xxxxxxxx, xxxxx atd.) a v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

—

Xxxxx xxxxx riziko xxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxxxx členského státu/jiných xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxx xxxxxx potvrzen, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx/xxxxxx informace xxxxxxxx ke xxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;3, jako např.:

—	název xxxxxx xxxxxx brambor,

—	název x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxx xxxxxx brambor,

—	objem/velikost xxxxxxx partie xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx registrační xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx a kopie xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx.

—

Xx ukončení všech xxxxxxxxx, v každém případě:

—	datum xxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a možného rozšíření xxxxxxxx, xxxxxx stupně xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,

—	xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxx zamoření,

—	podrobnosti o rozsahu xxxxxxxxxx zamoření, xxxxxx xxxxx míst produkce x&xxxx;xxxxx xxxxxx s uvedením xxxxxx a u sadbových brambor xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx nacházejí xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx/x xxxxxxxx/x, xxxxx xx Komise xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx tepelné úpravě, xxxxx xxxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xx xxxxxx schváleném xxxxx xxx xxxxxxxxx odpadu, x&xxxx;xxxx xxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx půdu, nebo

—	spálení, nebo

—

průmyslové xxxxxxxxxx prostřednictvím přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx závod x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxx prokázáno, že x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx vozidel,

nebo

—	jiná opatření, xxxxx bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxxxx; tato xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedeného xx xxxx xxxxxxxxxxx úředně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X&xxxx;xxxx směrnice.

2.

Vhodné xxxxxxx nebo vhodná xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx označených za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx dohledem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx vzájemném xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx souhlasem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx mají balit xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx zařízení x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

—

xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx dodávku a použití, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx s vhodným xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx. S brambory xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze ve xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx v případě, xx xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxxx použití xxxx konzumních xxxxxxx xxxxxxxx k průmyslovému xxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxx pro přímé x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx

—	xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

3.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xx xxxxxx xxxxxx metody, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx organismu, x&xxxx;xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

4.	Xxxxxxxx, která xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx uvnitř xxxxxxxx xxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) a uvedené x&xxxx;xx.&xxxx;7&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxxxxx:

4.1

X xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x):

x)

xx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) buď

i)

—

během nejméně xxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xx přijmou xxxxxxxx xx odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a ostatních xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xx xxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx planě rostoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx;

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx po xxxxxx upřesněném v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xxx xxxxxxxxx, xx xxxx bylo xxx xxxxxxxx kontrolách x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx dvou xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a sklizené xxxxx xx testují postupem xxxxx xxxxxxx I;

—

ve xxxxxxxxxx xxxxxx brambor xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx v předchozí odrážce x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx činit alespoň xxx xxxx, xxxxx xx mají pěstovat xxxxxxx brambory, se xxxxxxxx použijí buď xx sadbu xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1; xxxx

xx)

—

xxxxx čtyř xxxxxxxxxxxxx xxx následujících xx xxxx označení xxxxxxxx

—	xx xxxxxxx opatření xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x

—	xxxxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxx jako stálá xxxxxxxx s častým xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x prvním sklizňovém xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx upřesněném x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx, a pod xxxxxxxxx, xx pole xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx let xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx a sklizené hlízy xx xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxxx X;

x)

xx xxxxx ostatních polích x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x&xxxx;xxx podmínkou, xx xxxxxxxxx úřední xxxxxxxx xxxx přesvědčeny, xx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx odstraněno:

—

v pěstitelském xxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se žádné xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx osivo xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny nepěstují, xxxx

—	xx certifikované sadbové xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx se xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory nebo xxxxxxx brambory, které xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx nepřítomnost xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xx pěstují xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx produkce jiných, xxx xxxx, která xxxx xxxxxxx v bodu 4.1, x&xxxx;xx buď xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx brambory,

—	alespoň xx xxxx třetího xxxxxxxxxxxxx roku xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx pod úřední xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxx nebo jako xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxx poli se xxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx zamoření xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce se xxxxxxx stroje x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx produkci xxxxxxx vyčistí a dezinfikují xxxxx xxxxxxx a pomocí xxxxxxxxxxx metod podle xxxx 3;

x)

x jednotkách xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxxxxx xxxxx hlízy, xxxxxxxx xxx xxxxx, xxxxx xxxxxx produkce xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstranění xxxxxxxxx x&xxxx;xx odstranění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a veškerého xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx následně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx udělen xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xx xxxxxxxx xxxxxxx z certifikovaných xxxxxxxxx xxxxxxx nebo z minihlíz xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx.

4.2

Xxxx xxxx xxxxxxx opatření xxxxx xxxx 4.1, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxxxxxxx po označení xxxxxxxx xx veškeré xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx potřeby x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx 3;

x)

xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xx dobu xxxxxxx xxx pěstitelských období:

—	zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xx s těmito xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx i prostory, xxxxx pronajímají xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, aby k výsadbě xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx xxxx použita xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx xxxxxxxxx, a aby xx xx sklizni xxxxxxxxx brambory na xxxxx vypěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byla xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x),

—	xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx uvnitř oblasti xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx od nakládání x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx brambor,

—	provádí úřední xxxxxxx podle čl. 2 odst. 1;

c)	vytvoří x&xxxx;xxxxxxx potřeby xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx brambor xx přiměřenou xxxx.

XXXXXXX X

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxx odpadu xxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxx 1 xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vyloučeno xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

i)

Xxxxxxxxxx odpad (xxxxxx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxxxx xxxxxx) a jiný xxxxx xxxxx související x xxxxxxxxxx (včetně xxxx, xxxxxx a jiného odpadového xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxx xxxxx:

—	xxxxx likvidací xx xxxxxx schváleném místě xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx prostředí, xxxx. prosáknutím xx xxxxxxxxxxx půdu. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxx x xxxxxx xxx izolován xxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxxxx a ostatním xxxxxxxx státům.

xx)

Xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx účelem xxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx pevné xxxxxxx xxxx být likvidovány xxxxx xxxx. i).

Xxxxx xxxxx musí xxx xxxxx:

—	xxxxxxxx minimálně xx 60 °X v jádře xx xxxx alespoň 30 xxxxx před xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxx xx styku xx xxxxxxxxxxx půdou. Xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0056

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.