Animace načítání

Stránka se připravuje...

Přihlásit se Registrovat se
28 428 právních předpisů

Další údaje zde

Technická podpora

Poskytujeme technickou podporu zdarma

Zavolejte nám

+420 777 717 492

Plné znění - 32006L0063

  1. Úvodní strana
  2. Právní předpisy EU
  3. Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Chci získat výhodný přístup

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/ES

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx II xx VII směrnice Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x ochraně xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.  (1), x xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)

Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx a xxxxxxx xx Ralstonia solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (dále xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)

Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje x xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se zjistilo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx jeho xxxxxxx a xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx ochranná xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)

Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxx xx ochranných xxxxxxxx.

(5)

X xxxxxxxx tohoto xxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxx přezkoumat x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnice 98/57/ES.

(6)

Pokud xxx x postupy xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx zapracována moderní xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx technických xxxxx současných xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách, než xx xxxxxxx, ve xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x technické xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx ně xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx uchování xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, prvky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx x v xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx rajče, x xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx organismu.

(8)

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Přílohy II xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1.   Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x zveřejní xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro dosažení xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Komisi xxxxx těchto xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x touto xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2.   Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx v oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx xx vyhlášení x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato směrnice xx určena členským xxxxxx.

X Xxxxxxx dne 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX SOLANACEARUM (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx:

x)

xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii)

zjištění Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx a půdy,

iii)

identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH

Obecné xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;X:

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.

Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.

Xxxxxx pro zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx nevykazujících příznaky.

3.

Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX:

Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx bakteriálního xxxxxxx

1.

Xxxxxxxx

2.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

3.

Xxxxxx při xxxxxxx

4.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XXX:

1.

Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1

Xxxxxxxx xxxxxx

1.2

Xxxxxxxxx

2.

Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích rostlin xxxxxxxx, rajčete nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

2.1

Xxxxxxxx vzorků

2.2

Testování

ODDÍL IV:

1.

Schéma xxx zjištění a identifikaci X. solanacearum xx xxxx

2.

Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

2.1

Příprava vzorků

2.2

Testování

ODDÍL V:

1.

Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.

Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.1

Xxxxxxxx xxxxxx

2.2

Xxxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX:

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum

A.

Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx

1.

Xxxx xxxxxx xx xxxxxx

2.

Xxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

3.

Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

4.

Xxxxxxxxxx izolace

4.1

Očkování na xxxxx xxxx

4.2

Xxxxxx xxxxxxxxxxx

5.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx)

6.

Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce (XXX xxxx)

6.1

Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

x)

Xxxxxx podle Pastrika (2000)

x)

Xxxx xxxxxx

6.2

Xxxxxxxxxxxx řetězová xxxxxx

6.3

Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

7.

Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (FISH xxxx)

8.

Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX

x)

Xxxxxxx xxxxx XXXXX

x)

XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)

9.

Xxxxxxx

X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

1.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx

2.

Xxxx IF

3.

Test XXXXX

4.

Xxxx XXX

5.

Xxxx XXXX

6.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

7.

Metoda xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

7.1

Xxxxxxxxx biovaru

7.2

Genomická xxxxxxxxxxx

7.3

Xxxxxx XXX

X.

Xxxxxxxxxxx xxxx

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx podílející xx xx optimalizaci a validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxx 2

Živné xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx 3

A)

Komerčně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

X)

Xxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx testovací postupy

Dodatek 5

Xxxxxxxxx úrovně kontaminace xxx testech XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxx XXXX

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxxxx podmínky xxxxxxx x&xxxx;xxxxx

Xxxxxxxxxx

XXXXXX PRINCIPY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx protokolů, je x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx obsahují xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx karanténu xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné zjištění xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx příprava pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx uplatněno xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx uvedeno x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx schéma pro xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, izolaci patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx detekční xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx resuspendované xxxxxx zahrnutý jako xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, rostlin rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx infekce v polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, přičemž x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným x&xxxx;xxxxx kolapsem x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx bramboru xx xxxxx překrojit xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx žlutého xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx se xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx vně xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a způsobuje xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx kolapsem xxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx původu.

1.2   Příznaky x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se během xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx a vadnutí xx jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx stonku xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx nasáklé xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx cévního systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivá xxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3   Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. u rostliny X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x&xxxx;xx i při xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testů:

2.1   Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Viz xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx IF (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)

Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx validované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx případně xxxxxxxxxx misky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx universální xxxxx xxxx vytvářejí virulentní xxxxxxx R. solanacearum xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, nepravidelné a fluidní xxxxxxx, xxxxx s charakteristickými xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

—

X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou popsány x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1.   Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je k dispozici xxxxx množství xxxx

—

Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx na testování xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)

Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2–30&xxxx;°X po dobu xx 2&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx být proveden xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx zeleninu xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx konci každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Opatrně vyřízněte xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky omezte xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, mělo xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx pupkovém xxxxx Xxxxxxx naříznuté xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xx měly xxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx uchovány xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)

Buďto zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x&xxxx;xxxxxxxxx maceračním xxxxx xx jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Pozn.: Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx procesu. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx přístroji. X&xxxx;xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx na jedno xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4   Zahustěte bakteriální xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500 µl xxx R. solanacearum, 500&xxxx;µx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (měsíce). Extrakty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. To platí xxx sklíčka XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2   Testování

Postupové diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských rostlin

2.1   Příprava xxxxxx

Xxxx.: Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 xx xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx dlouhý 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx dlouhý xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx xxxx xx&xxxx;xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o počtu nejméně 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx potenciální plevelnou xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Pelargonium xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx populace R. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica dioica.

Pozn: X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% etanolem x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx stonku xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxxxx zalijte xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxx zpracujte drcením xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (např. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, xxxxxx xxxxx stonků x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a druhý xxx xxxxxxxxxx v 10–25 % (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx případné xxxxx testování.

2.2   Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx IF (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1.   Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma detekce xxxxxxx v tomto oddíle xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx ve vzorcích povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx je ovlivňována xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx je xxxxxx mnohem xxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx vody, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx nižší. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), při nichž xxxxx xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx citlivosti testovacího xxxxxxxx xx mělo xxx xxxxx v úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx mapování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx vodě.

2.1   Příprava xxxxxx

Xxxx.:

—

Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě xx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx době xxxxx výše uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—

Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx účinky xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx toku, xxxxxx xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, které by xxxxx výskyt patogenu xxxxxxx.

—

Xxxxxxxx vzorky xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx pod hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Při xxxxxxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená velikost xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 hodin.

2.1.3   Je-li xxxxxxx, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)

Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4).

x)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 xx peletového xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx filtrátu. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u vzorků xxxxxxx xxxx, protože zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx je použitelné xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx k testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx kalu z odpadní xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx třeba xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx je vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx unikne nízký xxxxxx zamoření pozornosti.

2.1   Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx půdy xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx v mřížce 7&xxxx;× 7 m). Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x&xxxx;0,3&xxxx;xx. Před xxxxxxxxxx uchovejte xxxxxx xxx teplotě 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx kalu. Xxxx testováním xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx nebo xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) po xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02 % xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může napomoci xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx v teplotě 4 °C.

2.2   Testování

Postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX R. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1.   Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx stoncích xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: uřízněte xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z přeříznutých cévních xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.

Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum a případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.

Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

4.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx modří xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)

Xxxxxxxxx xxx sklíčka 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a nechte inkubovat 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)

Xxxxxxxxx xxxxxx 8 % vodním xxxxxxxx xxxxxxxx octové x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)

Krátce xxxxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)

Xxxxx navlhčete xxxxxx xxxx a přiložte xxxxx xxxxxxx.

x)

Xxxxxxxxx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx pod olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x)

Xxxxxxxxx, zda xx objeví na XXX granulích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx morfologie buněk xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

b)

Odstraňte xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým papírem.

c)

Ponořte xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)

Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (w/v) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx savým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí sklíčko.

f)

Zkoumejte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)

Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace buněk X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v extraktech x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx latexovými xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx řiďte následujícím xxxxxxxx:

x)

Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x)

Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1   Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx půdě růst xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou bude xxxxx xxxxxx. Metoda xx však xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx od –68 do –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx desetinné ředění xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx xx měla být xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx otestována xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx s cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx vyloučeny. Xxxxxxx 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx každé xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx zkontrolujte xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx zbarvení ve xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx médiu tvoří xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3   Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx očkujte xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx izolované kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx krátkodobě ve xxxxxxxx vodě (pH 6–8, xxx chlóru) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx dlouhodobě xx vhodném ochranném xxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C xxxx lyofilizované.

4.1.5   Proveďte identifikaci xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X) a test patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx očkováním na xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx negativní, xxxxxxxx xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakterie xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Tímto způsobem xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických organismů, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1   U xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx předem xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. U obohacovacího xxxxx ELISA xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx způsobem jako xx vzorky xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test použit xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Jestliže xx xxxx IF xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Doporučuje xx určit xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X v glycerolu. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx fixovány xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx s homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) by xx xxxx xxxxx možností xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

5.1   Připravte xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6 mm – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx napipetujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx na xxxxxxx 40 až 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 minut xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95&xxxx;% xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx nezbytně krátkou xxxx (maximálně 3&xxxx;xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

5.3   Postup XX

x)

Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x):

Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (T/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)

Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx):

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx v pufru XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.   Příprava sklíčka xx test xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

1/100

1/1

1/1

1/1

1/1

◻

Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

(X = titr)

T/2

T/4

T/2

T

2T

◻

Dvojnásobné ředění xxxxxxxx/xxxxxxxxxx

Xxxxxx 1

1

2

3

4

5

Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx vzorek 2

6

7

8

9

10

Obrázek 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

Xxxxxxxx ředění antitiséra/protilátky

1/1

1/10

1/100

prázdný

prázdný

◻

Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxx 1

1

2

3

4

5

Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2

6

7

8

9

10

5.3.1   Uspořádejte podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx musí xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjte ponořením xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx IF Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx IF. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Pečlivě xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

5.3.4   Umístěte sklíčka xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx konjugátu FITC, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx odstraňte xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s glycerolem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého okénka x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx vodní imersí xxx xxxxxxxx 500× xx 1 000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx IF opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V peletách x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx a morfologií v titru xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 mikroskopovém xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii)

Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx pro vzorky, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 × 103 xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, a sice xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx úplná.

Využití xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte xxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx kontrolou.

Používejte xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX test xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—

extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—

xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—

alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—

xxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—

xxxxx možno, xxx XXX použijte xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez zeminy. X&xxxx;xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxx enzymových xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.

Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5&xxxx;xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.

Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.

Xxxxxxxx 80 µl xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50&xxxx;xx lysozymu/na 1&xxxx;xx 10 mM TrisHCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.

Xxxxxxxx 220 µl xxxxxxx Xxxx DNA® A (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.

Xxxxxxxx 500 µl xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8.

Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxx Eppendorfovy mikrozkumavky.

10.

Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx na xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.

Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.

Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.

Xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.

Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.

Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xx xxxxxxx při XXX.

17.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx odstředěním a použijte 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xxx test XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (oddíl VI.A.6). Připravte xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní vodě).

6.2.2   Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3   Přidejte xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl PCR xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx xxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx testování, a spusťte xxxxxx optimalizovaný program XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxxx xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5–8 X/xx. Použijte xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2   Detekujte xxxxxxx DNA obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx mutagenem.

6.3.3   V obarveném x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u zkoumaného vzorku xxxxxxx, ale je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků (v xxxxxxx vícenásobné XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx mít podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx získán xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco ze xxxxxx pozitivní xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vyšetřovací test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Používejte xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx být xxxxx možno xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxxx samostatná xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx u vzorku(ů).

7.1.   Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz xxxxxxx 7).

7.1.2   Napipetujte 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx po dobu 7&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

7.1.3   Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7 000 g, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X PB (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2 různé xxxxxx na jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% etanolu. X&xxxx;xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

Vzorek 1

Xxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx 2

xxxxxx 1

xxxxxx 2

xxxxxx 3

okénko 4

xxxxxx 5

Xxxxxx 1

Xxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx 2

okénko 6

xxxxxx 7

xxxxxx 8

xxxxxx 9

xxxxxx 10

Xxxxx sklíčko 1

Xxxxx sklíčko 2

7.1.6   Nechte xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx a pokračovat v hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

7.2.   Hybridizace

7.2.1   Dehydratujte buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx box x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °C po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; xxx xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4   Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) xx xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a nechte proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou) a 1 l 1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6   Sejměte xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx sklíček.

7.2.7   Spláchněte nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx a nechte xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) a položte xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx sklíčko zakryjte xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60 mm).

7.3.   Hodnocení XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× pod olejovou xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx R. solanacearum xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx úhlech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum v okénkách xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx u pozitivního xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx opakován. Xx může xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx ve várce xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx okénka sklíčka) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx hlíz x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx reakci xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx buňky pozorovány xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 mikroskopovém poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 ml resuspendované xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii)

Výsledek FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, XXX xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je obohacení x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, při kterém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxx nebo xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a suspenzi xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 buněk xx 1&xxxx;xx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, aby byly xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

Standardizované pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx používají xxx xxxxx test, jsou xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995)

1)

Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °C na 4&xxxx;xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx topném xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)

Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) a promíchejte.

3)

Nakapejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx přes xxx při teplotě 4&xxxx;°X.

4)

Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5 minut.

5)

Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx je titr).

6)

Přidejte 100&xxxx;µx do xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)

Xxxxxxx roztok xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)

Xxxxxxxxx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 µl xx xxxxx jamky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)

Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)

Přidejte 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a odečítejte xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)

Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx nebo 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidejte xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)

Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)

Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v PBS (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx xxxxx jamky. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)

Xxxxx xxxxxxx xxxxx vypláchnete xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6)

Xxxxxxxxx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného alkalickou xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 2&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)

Xxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá xxx xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) z jamek xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx došlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. solanacearum na 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx viz x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx do xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.1   Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx děložní xxxxx a první xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx asi 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx z injekční xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxxx suspenzí 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx a peletovým xxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4&xxxx;xxxxx xxx teplotě 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx místech skleníku xxxx xxxxxxxxx komory xxxx, v případě xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přísnou xxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxx pozornost tomu, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxxx a/nebo xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte izolaci (xxxx.&xxxx;XX.3) a identifikujte xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx segmentů xxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx rostliny, který xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx zřeďovací xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx biotestu jsou xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx být x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé referenční xxxxx xxx každý xxxxxxxxx test (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

–

Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

+

Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)

X+/X–

Xxxxxxxxxx aktivita

+

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse

+

Redukce xxxxxxxxx

+

Xxxxxxx xxxxxxx

+

Xxxx při 40&xxxx;°X

–

Xxxx x&xxxx;1&xxxx;% NaCl

+

Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx

–

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita

–

Zkapalnění xxxxxxxx

–

Xxxxxxxxx xxxxxx

–

Xxxxxxxxx xxxxxxxx

–

Xxxxxxxx xxxxxx

–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1   Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

3.   Test XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx pouze 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický test.

3.1   Připravte xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 ml x&xxxx;1X XXX (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3   Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4.   Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx sterilní xxxx (XXX = ultra xxxx water).

4.2   Ohřívejte 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím bloku xxxx vařící vodní xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx R. solanacearum (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx et al. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx et al. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx stejnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5.   Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx v UPW.

5.2   Použijte metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx případně známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx biovaru

Organismus R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx biovarů na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx očkováním xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Je-li xxxxx xxxx rozdělena xx xxxxxxxx destičky x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxx

1

2

3

4

5

Xxxxxxx:

Xxxxxxx

–

+

+

–

+

Xxxxxxx

–

+

+

–

+

X (+) Cellobiosa

–

+

+

–

+

Mannitol

–

–

+

+

+

Sorbitol

–

–

+

+

–

Dulcitol

–

–

+

+

–

Dodatečné xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů xxxxxxx 2

Xxxxxx 2X

(xxxxxxx xxxxxxxx)

Xxxxxx 2X

(Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)

Xxxxxx 2T

(tropické xxxxxxx)

Xxxxxxx xxxxxxxxx

–

+

+

Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx

+

–

+

Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx

–

–

+

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)

xxxxx

xxxxx

xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2   Repetitivní sekvenční XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x&xxxx;XXXX (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Van xxx Wolf et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; viz xxxxxxx 6) lze xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx do xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X a 2T) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et al., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1)

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur k testování x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)

Xxxxxxxxxx 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx listů (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx by typické xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako patogenní xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm nad xxxxxx xxxxxxxxx. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx suspense zřeďovacím xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx&xxxx;(2)

Xxxxx

Xxxx

Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxx x&xxxx;Xxxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx

Xxxxxx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx

Xxxxxx

Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx

Xxxx

Xxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx

Xxxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx de Xxxxx

Xx Xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxx Xxxxxxxxxx

Xxxxxx

Xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxx

Xxxxxx

Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxxxxx xxx x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx

Xxxxxx

Xxxxxxxxxxx Algemene Xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx

Xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx

Xxxxxçãx-Xxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx

Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xx Investigaciones Xxxxxxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxxxxx

Xxxxxxx Xxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx pro izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)

23,0&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx voda

1,0 l

Rozpusťte xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)

5,0&xxxx;x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)

5,0&xxxx;x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)

10,0&xxxx;x

Xxxxx-Xxxx (Difco)

15,0 g

Destilovaná xxxx

1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx

20,0&xxxx;x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco)

5,0 g

K2HPO4

0,5 g

MgSO4.7H2O

0,25 g

Bacto-Agar (Difco)

15,0 g

Destilovaná xxxx

1,0&xxxx;x

xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx hydrolyzát (Xxxxx)

1,0&xxxx;x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)

10,0&xxxx;x

Xxxxxxxx

5,0&xxxx;x

Xxxxx-Xxxx (Difco)

15,0 g

Destilovaná xxxx

1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx xx&xxxx;xxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx půdy

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx)

1,0&xxxx;x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)

10,0&xxxx;x

Xxxxxxxx

5,0&xxxx;xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2)

15,0 g

Destilovaná xxxx

1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xx 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx získali xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci:

Krystalová xxxxxx (Sigma)

5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx P1004)

600 000 X&xxxx;(xxxxxxxxx 100&xxxx;xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)

1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25&xxxx;xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Sigma X-3175)

5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Sigma X-3032)

825 U (přibližně 0,5&xxxx;xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)

50 mg/l

Pozn.:

1.

Použití xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

2.

Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X&xxxx;xxxxxxx případě xxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx o 1–2 xxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx a skladujte roztoky xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1 měsíce.

Misky x&xxxx;xxxxxx xx xxxx být xxxx xxxxxxxx zbaveny xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx podrobena kontrole xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxx x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid.

Upravená živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx

10&xxxx;x

Xxxxxxxxxx pepton

5 g

K2HPO4

0,5 g

MgSO4

0,25 g

NaNO3

0,25 g

Destilovaná xxxx

1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx 50 °C.

Přidejte xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx kultury xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole (tabulka 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemnému xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné a lze xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.

Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx vědecká laboratoř Xxxx, UK.

2.

Sbírka kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Wageningen, Nizozemsko.

3.

Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1   Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX

XXX

#

Xxxx xxxx

Xxxx xxxxxx

Xxxxxx

XXXXX 4153

6

XXXX 4582, Xx 3020, XXXX11

Xxxxx

2

XXXXX 4154

10

XXXX 4585, 550, XXXX21

Xxxxxxx

2

XXXXX 3857

12

XXXX 4587, Pr 1140, XXXX26

Xxxxxx

2

XXXXX 1584

23

XXXX 4598, XXXX49

Xxxx

2

XXXXX 2505

24

CFBP 4599, XXXX50

Xxxxxxx

2

XXXXX 4155

26

XXXX 4601, 502, XXXX55

Xxxxxx

2

XXXXX 4156 (3)

71 (3)

PD 2762, XXXX 3857

Nizozemsko

2

NCPPB 4157

66

XXXX 15.59

Xxxxxxx

2

XXXXX 4158

39

XXXX 4608, Port 448, XXXX80

Xxxxxxxxxxx

2

XXXXX 4160

69

XXXX-1632-2

Xxxxxxxxx

2

XXXXX 4161

76

B3B

Německo

2

NCPPB 325

41

XXXX 2047, XXX60-1, X842

XXX

1

XXXXX 3967

42

XXXX 4610, X285, GONg7

Kostarika

1

NCPPB 4028

43

XXXX 4611, X303/571, XXX310, XXX205

Xxxxxxxx

2

XXXXX 3985

44

XXXX 4612, X578, XXX312

Xxxx

2X

XXXXX 3989

45

XXXX 4613, R568, CIP226

Brazílie

2T

NCPPB 3996

46

XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225

Xxxx

3

XXXXX 3997

47

XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x

Xxxxxxxxx

3

XXXXX 4029

48

XXXX 4615, X297/349, CIP121, XXXx2861

Xxx Xxxxx

4

XXXXX 4005

49

XXXX 4616, X470

Xxxxxxxx

4

XXXXX 4011

50

XXXX 4617, X288, XXxxx2

Xxxx

5

Xxxx.: Spolehlivost xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx zaručena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xx xxxxxxxxx z původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných bakterií k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX

XXX

#

Xxxx xxxx

Xxxxxxxxxxxx

XXXXX 4162

51

XXXX 1954

Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)

XXXXX 4163

52

XXXX 1538

Xxxxxxxxxxx marginalis xx. xxxxxxxxxx &xxxx;(4)

XXXXX 4164

–

XXXX 2227

Xxxxxxxxxxxx cepacia &xxxx;(5)

XXXXX 4165

–

XXXX 2459

Xxxxxxxxx pickettii &xxxx;(5)

XXXXX 4166

58

CFBP 3567

XXX Xx1150

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)

XXXXX 4167

60

XXXX 4618

XX 2778

Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)

XXXXX 1127

53

XXXX 3575

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx &xxxx;(4)

XXXXX 353

54

XXXX 3572

Burkholderia caryophylli &xxxx;(4)

XXXXX 945

55

CFBP 3569

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)

XXXXX 3708

56

CFBP 3574

Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)

XXXXX 3590

57

XXXX 3573

Xxxxxxxxxxxx plantarii &xxxx;(4)

XXXXX 3726

59

XXXX 3568

Xxxxxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium &xxxx;(4) &xxxx;(5)  (6)

NCPPB 4168

61

XXXX 4619

IPO X339

Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)

XXXXX 4169

62

IPO 1695

Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)

XXXXX 4170

63

XXXX 4621

XXX X306

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)

XXXXX 4171

64

XXXX 4622

XXX 1693

Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)  (5)

NCPPB 4172

65

XXX 1696x

Xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)

XXXXX 4173

–

XX 2318

Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)

XXXXX 4174

81

XXXX 1844.06

Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xx možné xxxxxx ze xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx všech testů.

Mražené xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 103 xx 104 x&xxxx;104 xx 106 buněk xxxxxxx 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a PCR xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) x&xxxx;106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx k pozitivní xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48hodinovou kulturu xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx rasy 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx z pupkových xxxxx 200 hlíz x&xxxx;xxxxxxxx odrůdy x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, o které víte, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx pupkové xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;900&xxxx;µx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Přeneste 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx kontaminovaných mikrozkumavek xxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx označte.

Připravte xxxxxxx xxxx 100 µl xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx získáte 9&xxxx;xxxxx téhož kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx dalšího xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx organismu X. solanacearum v kontrolních xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX proveďte xxxxxxxx XXX z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx testů XX a FISH xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx série xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx IF, XXXX a PCR, organismus X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx nejméně x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Dodatek 4

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx (50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xx2XXX4 (xxxxxxx)

4,26&xxxx;x

XX2XX4

2,72&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx pomocné xxxxxx:

Xxxx

Xxxxxxxx (/x)

Xxxxxx Lubrol

protisrážlivý prostředek (7)

0,5 g

Silikonový xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)

1,0&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx prostředek

1,0 g

Polyvinylpyrrolidone-40000 (PVP-40)

Váže xxxxxxxxxx XXX

50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx a ředění extraktů x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx zahuštění do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4.12X2X

2,7&xxxx;x

XxX2XX4.2X2X

0,4&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx IF xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX (10 xX roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx2XXX4.12X2X

2,7&xxxx;x

XxX2XX4.2X2X

0,4&xxxx;x

XxXx

8,0&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx voda

1,0 l

Rozpusťte xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 xxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx xxxxx XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxx/xxxxxx xx xxxxxxxx sklíčko ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx2XXX4.12X2X

3,2&xxxx;x

XxX2XX4.2X2X

0,15&xxxx;x

Xxxxxxxx

50&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxx xxxx

100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx2XX3

6,36&xxxx;x

XxXXX3

11,72&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx

80,0&xxxx;x

XX2XX4

2,0&xxxx;x

Xx2XXX4.12X2X

29,0&xxxx;x

XXx

2,0&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX

100&xxxx;xx

10&xxxx;% Xxxxx 20

5&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxx xxxx

895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10X XXX

10,0&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)

2,0&xxxx;x

10&xxxx;% Xxxxx 20

0,5&xxxx;xx

Xxxxxx xxxxx

0,5&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx voda

doplnit xx 100 ml

3.5   Roztok pro xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx

97&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxx xxxx

800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx XXx xxxxxxxx xX na 9,8.

Doplňte xx 1&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx dvě 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml roztoku.

4.   Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx2XX3

1,59&xxxx;x

XxXXX3

2,93&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2– 7,4

XxXx

80,0&xxxx;x

XxX2XX4.2&xxxx;X2X

4,0&xxxx;x

Xx2XXX4.12X2X

27,0&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1&xxxx;000&xxxx;xx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X PBS

50 ml

10 % Xxxxx 20

5&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxx voda

950 ml

4.4   Substrátový xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx

100&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxx xxxx

900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX a FISH pozitivních xxxxx

1.

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2.

Xxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = c × X/x

xxx

X

=

xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx sklíčku x&xxxx;xxxx xxxxxx

x

x

=

xxxxxx pole xxxxxxxxx

x = πi2/4G2K2

kde

i

=

koeficient xxxx (xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx typu xxxxxxx)

X

=

xxxxxxxxxx xxxxxx (1 nebo 1,25)

X

=

xxxxxxxx objektivu (100×, 40× atd.)

3.

Vypočtěte xxxxx xxxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1 000/y × X

xxx

x

=

xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx

x

X

=

xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelnou xxxxxxx xxx 103 xx 104 buněk X. solanacearum na 1&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx žádné xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx panelu vybraných xxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx et al. (1993)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer OLI-1

5′-GGG XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxx xxxxxx X-2

5′-XXX XXX XXX XXX TCC XXX XXX AGT-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie

Množství v reakci

Konečná xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx UPW

17,65 µl

10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 mM XxXx2)

2,5&xxxx;µx

1X (1,5 xX XxXx2)

Xxxx dNTP (20mM)

0,25 µl

0,2 xX

Xxxxxx XXX-1 (20 µX)

1,25&xxxx;µx

1µX

Xxxxxx Y-2 (20 µX)

1,25&xxxx;µx

1µX

Xxx polymerasa (5X/µx)&xxxx;(8)

0,1&xxxx;µx

0,5 X

Xxxxxxxx vzorku

2,0 µl

Celkové xxxxxxxx:

25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:

x)

2 xxxxxx při 96 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx:

xx)

20 xxxxxx xxx 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx)

20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)

xx)

30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx:

x)

10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx)

xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1

5′-xxx xxx xxx xxx xxx ggg x&xxxx;-3′

Xxxxxxxx primer Xx-2

5′-xxx xxx xxx aca xxx xxx ttg xx -3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX

16,025&xxxx;µx

10X xxxx PCR (9)

2,5 µl

1X (1,5 xX XxXx2)

XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)

0,25&xxxx;µx

0,1&xxxx;%

Xxxx xXXX (20xX)

0,125&xxxx;µx

0,1 xX

Xxxxxx Xx-1 (10 µX)

0,5&xxxx;µx

0,2 µX

Xxxxxx Xx-2 (10 µX)

0,5&xxxx;µx

0,2 µX

Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)

0,1&xxxx;µx

0,5 U

Množství vzorku

5,0 µl

Celkové xxxxxxxx:

25,0&xxxx;µx

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:

x)

5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx:

xx)

30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx)

30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)

iv)

45 xxxxxx při 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx:

x)

5 xxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx extenze)

vi)

ponechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) a iv).

2.4   Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx a 96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XX-1-X

5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′

Xxxxxxxx xxxxxx RS-1-R

5′-CCC XXX XXX XXX XXX XXX X-3′

Xxxxx primer XX-5-X

5′-XXX TTA XXX XXX XXX ACG XXX G-3′

Reverzní xxxxxxXX-6-X

5′-XXX XXX CAG XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (sada xxxxxxx XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX

12,625&xxxx;µx

10X pufr XXX&xxxx;(10) (15 xX XxXx2)

2,5&xxxx;µx

1X (1,5 mM XxXx2)

XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)

0,25&xxxx;µx

0,1&xxxx;%

Xxxx xXXX (20mM)

0,125 µl

0,1 mM

Primer XX-1-X (10µM)

2,0 µl

0,8 µX

Xxxxxx XX-1-X (10µX)

2,0&xxxx;µx

0,8 µM

Primer XX-5-X (10µX)&xxxx;(11)

0,15&xxxx;µx

0,06 µM

Primer XX-6-X (10µM) (11)

0,15 µl

0,06 µX

Xxx xxxxxxxxxx (5U/µl) (10)

0,2 µl

1,0 X

Xxxxxxxx xxxxxx

5,0&xxxx;µx

Xxxxxxx xxxxxxxx:

25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx:

x)

5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx:

xx)

30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx)

30 xxxxxx při 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)

xx)

45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx:

x)

5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx)

xxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

3.4   Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx vytvářejí xxxxxxxx polymorfizsmus délky xxxxxxxxxxxx fragmentů s enzymem Xxx X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °C.

4.   Protokol XXX specifický xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X

5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3′

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X

5′-XXX AGT XXX XXX AGA XXX X-3′

Xxxxxxxx primer Xx-3-X

5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Rs-1-F/Rs-1-R = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

x)

Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX

12,925&xxxx;µx

10X pufr XXX&xxxx;(12)

2,5&xxxx;µx

1X (1,5 xX XxXx2)

XXX (xxxxxx X) (10&xxxx;%)

0,25&xxxx;µx

0,1&xxxx;%

Xxxx x-XXX (20xX)

0,125&xxxx;µx

0,1 xX

Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)

2&xxxx;µx

0,8 µX

Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)

2&xxxx;µx

0,8 µX

Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(12)

0,2&xxxx;µx

1 X

Xxxxxxxx xxxxxx

5,0&xxxx;µx

Xxxxxxx množství:

25,0 µl

b)

Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

Xxxxxxxxx

Xxxxxxxx v reakci

Konečná xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX

14,925&xxxx;µx

10X pufru XXX&xxxx;(13)

2,5&xxxx;µx

1X (1,5 xX XxXx2)

XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)

0,25&xxxx;µx

0,1&xxxx;%

Xxxx xXXX (20xX)

0,125&xxxx;µx

0,1 xX

Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)

1&xxxx;µx

0,4 µX

Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)

1&xxxx;µx

0,4 µM

Taq polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)

0,2&xxxx;µx

1 U

Množství vzorku

5,0 µl

Celkové xxxxxxxx:

25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Proveďte xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx:

x)

5 xxxxx při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx:

xx)

30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx)

30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (hybridizace primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx DNA)

iv)

45 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx:

x)

5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)

xx)

xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 I) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x&xxxx;XXX R. solanacearum xxxxxx primerů Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10&xxxx;% xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx

5&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)

50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)

3,5&xxxx;xx

Xxxxxxxxxxxx modř (5.1)

300&xxxx;µx

Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx)

6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Acetát -EDTA (XXX), xX 8,0

Xxxx

48,40&xxxx;x

Xxxxxx xxxxxxxx octová

11,42 ml

EDTA (xxxxxxxx xxxx)

3,72&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx voda

1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxx xx 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Invitrogen nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované reagencie xxx test FISH

1.   Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc-3′

Nespecifická eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC 5′-gct gcc xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXXX. XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)

Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX a míchání na xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 M fosfátového xxxxx (PB; pH 7,0) a 5 kapek 1N XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx papírky a případně xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX NEPOUŽÍVEJTE MĚŘIČ XX.]

xxx)

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X do dalšího xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Xxxxxx

XxXx

2,7 X

Xxx-XXx

60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx filtrací x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)

15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1X Xxxxxx

Xxxxxxxxxxxx sodný (XXX)

0,01&xxxx;%

Xxxxxxxx

30&xxxx;%,

Xxxxx XXX 338

5 xx/μx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX-2

5 xx/μx

Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dva xxxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxxx 90 μl xxxxxxxxxxxxxx roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, A PROTO XXXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.   Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx:

1

4

6

8

10

Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda

23,1

92,4

138,6

184,8

231,0

3x xxxxxx

30,0

120,0

180,0

240,0

300,0

1&xxxx;% SDS

0,9

3,6

5,4

7,2

9,0

Formamid

27,0

108,0

162,0

216,0

270,0

Sonda XXX 338 (100 ng/μl)

4,5

18,0

27,0

36,0

45,0

Sonda XXX-1 nebo XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)

4,5

18,0

27,0

36,0

45,0

Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)

90,0

360,0

540,0

720,0

900,0

Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světlocitlivými oligosondami x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X.

Xxx xxxxxxx chraňte xxxx přímým xxxxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx2XXX4

8,52&xxxx;x

XX2XX4

5,44&xxxx;x

Xxxxxxxxxxx xxxx

1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx dobu 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do pasterizovaného xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxx xxxxxxxxx s plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxx xxxx naočkováním xxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx dne

14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx

Xxxxxxx

xxxxx: 21 xx 24&xxxx;°X

xxxxx: 14 až 18 °C

Vhodná xxxxxx xxxxxxx

‚Xxxxxxxxxx‘

Xxxxxx xxxxxx xxxxx

‚Xxxxx Beauty‘

Dodavatelé:

viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

LITERATURA

1.

Amann, R.I., X. Xxxxxxxx and X.X. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing of xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, phylogenetic and xxxxxxxxxxxxx studies xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172: 762-770.

2.

Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20&xxxx;Xxxx&xxxx;1998 xx xxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. Xxxxxxxx Journal of xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3.

Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Roux, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx identification xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105; 373-380.

4.

Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.

Xxxx, D., Barlow, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx length xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx xxx the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6.

Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, J., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, D.E. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7.

Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. In: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8.

Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9.

Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Nydegger, X. xxx De Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.

Xxx, S., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, S. Xxxxxx, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.

Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx and xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12.

Xxxxx, J.D. 1991. Xxxxx- and xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.

Xxxxxx, X. 1954. The relationship xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.

Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.

Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16.

Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Cubero, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enrichment improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx molecular xxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17.

Xxxxx, X.X., Fulbright, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx of phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx and strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx and XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.

Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xanthomonas xxxxxxxxxx xx. vesicatoria. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., F. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, T.-H Xx, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, M. Fegan, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Pac. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.

Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx R. solanacearum xx xxxxxx tubers by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.

Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Sequence analysis xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X ribosomal xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.

Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.

Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, J.P.W. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25.

Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X.&xxxx;xxx Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.

Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.

Xxxxxxx, M., Hayward, X.X., Xxx, X.X., Xxxxx, X.&xxxx;1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx syzygii, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, E., Xxx Beckhoven, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. In: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) pp. 44-49.

29.

Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Smith, N., Xxxxx, D.E. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.

Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Detection of X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

XXXXXXX&xxxx;XXX

1.

Xx xxxxx xxxxxxxxx podezření x&xxxx;xxxxxxx organismu, xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) provedený(é) xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných v příloze II xxxxxx(x) xxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx, xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat:

—

všechny xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx vzorkované xxxxxxxx,

—

xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) test(y), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx umožní x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx/Xxxxxxxx hlíz xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

2.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx organismu xx xxxxx zadržet x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx konzervovat xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx oznámení xxxxx čl. 5 odst. 2:

—

materiál xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—

xxxxxx napadeného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxx, xxx xx to xxxxxx,

x

—

xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech xxxxxxxx:

x)

xxxxx xxxxxxxx,

—

xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí nebo xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx klonově xxxxxxxx rostlinám bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—

na xxxxx xx pěstují rostoucí xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx stejného zdroje xxxx xxxxxxxx rajčat, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xx xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx vzrostlé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxx úřední xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

xx xxxxx xx pěstují rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bramboru nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zamořených xxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxx míst xxxxxxxx, xxx dochází xx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xx xxxxx xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx používá povrchová xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx organismem,

—

na xxxxx xx k zavlažování nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx zdroje, xxxxx se používá xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx produkce, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na zamoření xxxxxxxxxx,

—

xxxxx jsou nebo xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)

xxxxxxxxx xxxx použitá pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx se xxxxxxxxx zamoření organismem.

PŘÍLOHA V

1.

Prvky, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, který xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) xxxxxxxxxx za xxxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vazbou xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx nářadí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx nebo xxxx společného xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx) byl xxxxxxxx na tomto xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem x&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx výše,

—

veškeré xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx kontejnery, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jejich xxxxx x&xxxx;xxxxxxx ostatní xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx zamořený podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx styku s předměty xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx dezinfekcí,

—

jako xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x), v případě xxxxxxx xx hlízy xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, resp. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, třebaže xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx, xx zamoření xx xxxxxxx klonové xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Může xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx ověření xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx,

—

xxxxx (místa) produkce xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx voda, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bod ii),

—

uvedený rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx zaplavených xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxx, xxx xxxx xxx zohledněny xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xxx), zahrnují:

i)

v xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx)

—

xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx rostlinný materiál,

—

společnou xxxxxxxx a použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx voda, xxxxxxxx xx nebo bylo xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (označených) za xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x případech xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx iv), xxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx xx):

—

xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx, xx nichž xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové vody xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxx které(á) xx xxxxx povrchovou xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—

xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx zamořenou,

—

vodní objekty, xxxxx mají xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xx:

—

xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxxxx hostitelským xxxxxxxxx z čeledi lilkovitých.

3.

Oznámení, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx poté, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx metod uvedených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x xxxxxxx:

x)

xxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)

xxx (konzumní, xxxxxxx, xxx.) a případně xxxxxxxxx xxxxxxx;

—

x xxxxxx jméno xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kategorii,

—

aniž jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezřelého výskytu x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx stát, xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx státu (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx státu (xxxxxxxx xxxxxx) potřebné xxxxxxxxx podle čl. 5 xxxx.&xxxx;3, xxxx.:

x)

xxxxx odrůdy dané xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx;

x)

xxxxx a adresu xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx;

x)

xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)

velikost xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)

xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxxxx registrační xxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx oznámení x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx neprodleně oznámí Xxxxxx.

4.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx které xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx čl. 5 odst. 2, xxxx obsahovat toto:

po xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx případu:

a)

datum xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)

xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za účelem xxxxxxxxxxxx zdroje a možného xxxxxxxxx xxxxxxxx včetně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx;

x)

xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)

xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, včetně počtu xxxx xxxxxxxx a u brambor xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, kategorii;

e)

podrobnosti o vymezení xxxx, včetně xxxxx xxxx produkce, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx;

x)

xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx a rozsahu označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)

xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx označenou xxxx xxxxxxxxx, osvědčení předepsaná x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/XX a číslo xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, xxx. X.2.2 směrnice 2000/29/XX;

x)

xxxx xxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx), xxx xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

1.

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—

xxxxxxx jako xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx úpravě, xxxxx vyloučí riziko xxxxxxx xxxxxxxxx,

xxxx

—

xxxxxxx na xxxxxx schválené skládce xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx,

xxxx

—

xxxxxxx,

xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s přímým x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx do zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx zařízeními xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx alespoň xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—

xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx a jejich odůvodnění xx oznamují Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx státům.

Jakýkoli xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx možnostmi xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx metodami xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

2.

Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx členského xxxxx (států), xxx xxxxxx vzájemném informování xx xxxxxx zajištění xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx souhlasem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx mají balit xxxx xxxxxxxxxxx, s ohledem xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx uvedená x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx odrážce, xxxxxxxx:

x)

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx použity jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, již xxxxxxxx xxx přímou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx zařízením pro xxxxxxxxx xxxxxx. S bramborami xxxxxxxx k pěstování lze xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx a dezinfekci,

nebo

—

budou xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx zpracování x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce alespoň xxxxxxxxxxxxx dopravních xxxxxxxxxx,

xxxx

—

xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx udělení xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx,

xxxx

—

xxxxxxx xxxxxx způsoby xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx souhlasu xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.

Vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxx předmětů xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx provádějí pod xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx členských států.

4.

Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx v zóně xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx iv) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx ii):

a)

na xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx plodin xxxxxxxxxx xx zamořenou xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx), xxx:

x)

xxxxx xxxxxxx čtyř pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxxxxx opatření x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx rostlin plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx,

x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—

xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx bramboru,

—

rostliny x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—

x uvážením xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—

xxxxxxxx druhu Brassica, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx brambor a rajčat, xxxxxxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx v předchozí xxxxxxx, x&xxxx;xx podmínky, že xxxx xxxx shledáno xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx následující pěstitelské xxxx xxxx pěstováním

—

v xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxx pouze produkce xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx a rajčat budou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupem xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—

x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx roky, xxxxx xx mají pěstovat xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1:

xxxx

xx)

xxxxx pěti xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx prohlášení xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—

xxxxx učiněna xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx výskyt xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx,

x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx nízkým xxxxxxx xxxx intenzivní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx porostů xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nehostitelských xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx sklizňovém xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odrážce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xx poli xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx rostoucí xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dva následující xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx:

—

x případě brambor xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxxx, xxxxx testovány xxxxxxxx xxxxx přílohy XX;

x)

xx xxxxx xxxxxxx polích xxxxx xxxxxxxx prohlášeného xx zamořené x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx přesvědčily, že xxxxxx xxxxxxx s planě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx a ostatními xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx včetně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx označeném xxxxxxxx;

—

xxx nebudou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx hlízy xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxx,

xxxx

—

x případě xxxxxxxxxxxx xxxx mohou být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx semen, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx,

—

xx xxxxxx pěstitelském xxxx, xxxxx následuje po xxxx prohlášeného zamoření,

—

v xxxxxxx bramboru xxxxx xxxxxxxxx pouze úředně xxxxxxxxxxxxx sadbové xxxxxxxx xxxx sadbové brambory xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx sadbu xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxx xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx z rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiných xxxxxxx xxxxxxxx, než xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx rajčete,

—

nejméně xx xxxxxx pěstitelském xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené,

—

v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx sadbové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx brambor buď xx produkci sadbových xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x případě xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx semen, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES nebo xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxx xxx úředním xxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedených xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx sadby xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx,

—

x každém pěstitelském xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx úřední xxxxxxxxx xxxxxxx a u každého xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx sklizené xxxxx xxxxxxxx postupem podle xxxxxxx XX;

x)

xxxxx xx xxxxxxxxxx místa xxxxxxxx xx zamořené podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a týkající xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3,

—

xxxxx zavedeny xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx prevence xxxxx šíření xxxxxxxxx;

x)

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), xxx xx možné xxxxx vyměnit xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx, rostliny xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx ani xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx xxxxxxxx s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vyloučení organismu x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a očisty x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a veškerého vybavení, x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx k produkci xxxxxxx xxxx rajčat xx příslušných xxxxxx,

x

—

xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx úředně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx nebo mikrorostlin xxxxxxxxx z testovaných zdrojů,

—

u xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx požadavky směrnice 2000/29/XX xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, z rostlin xxxxxxx vyprodukovaných x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolou,

—

budou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx programy zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

4.2

Xx vymezené xxxx, xxxx budou dotčena xxxxxxxxxx uvedená v bodu 4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)

xxxx xxxxxxxx, xx xxxxx po xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat, xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxx 3;

x)

xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx prohlášení x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx):

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx zařízeními, xx xxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo rajčata xxxx xx s nimi xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, které smluvně xxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx produkce xxxxxxx xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx kultury xxxxxxxx používána výlučně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx brambory, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx sklizni xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sadbovými x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx sadbovými a konzumními xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxxx pěstování xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/ES, xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx úřední xxxxxxxxx, u všech xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;2&xxxx;xxxx.&xxxx;1;

xx)

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) nebo xx xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx možného xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxx X&xxxx;xxxx 2:

—

xxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, včetně xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx vodních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx příslušných xxxxx stanovených x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx kontroly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx xxxxxx používání xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx zákaz xxxx xxx přezkoumán xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx každoročního xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (o xxxxxxxx) xxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx povoleno, z úřední xxxx, xxx zavlažování x&xxxx;xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx,

—

xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx výpusti xxxxxxxx xxxxxx, zavedou xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx pevného xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, ve kterých xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem;

c)

případně xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxx sadbových xxxxxxx v rámci xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx schválené xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpadu xxxxx přílohy XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, aby bylo xxxxxxxxx jakékoli xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

x)

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx odpad (včetně xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxxxx související x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, kamenů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) xx odstraní xxxxx:

—

xxxxx uložením xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, odkud xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx organismu do xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx zemědělské xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxx xxx přemístěn přímo xx skládku xx xxxxxxxx podmínek izolace, xxx xxxxxxxxx žádné xxxxxx xxxxxx odpadů,

nebo

—

spálením,

nebo

—

jinými xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx opatření xxxx xxx oznámena Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podroben xxxxxxxx xxxx sedimentaci xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pevných xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx&xxxx;x).

Xxxxxxxx xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxx:

—

xxxxxxxx xxxxxxxxx xx 60&xxxx;°X uvnitř xxxxxx xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx

xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx způsobem, xxx kterém nehrozí xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xx xxxxx xxxxxx do xxxxx xx zemědělskou xxxxx xxxx vodními xxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxx použity x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx půdy. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx ošetření xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Komisi.

Možnosti xxxxxxx x&xxxx;xxxx příloze xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, odstraněním x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (rod 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx ELISA) s polyklonálním xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR xx podobnou xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6)  Pravděpodobnost xxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxx, ale xxxxxx xxxx pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pupkových xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx metod izolace XXX může xxxxxxxxx xxxx provedení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.