Plné znění - 32006L0063

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

ze xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou xx xxxx xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES o xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 98/57/XX xx xxx 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.  (1), x xxxxxxx xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx x rajčata xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx bramboru a xxxxxxxxxxxxx vadnutí bramboru x xxxxxxx (dále xxx „organismus“).

(2)	Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 98/57/XX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx rozsah rozšíření, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx zjištění xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx se ochranná xxxxxxxx za xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx té xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x postupech zjišťování x identifikace xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx zkušenosti získané xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx xx jeví xxxx nezbytné xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx opatření xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx zapracována xxxxxxx xxxxxxxx metoda xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XXXX). Rovněž xxxx zahrnuta xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx současných xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xx brambor, xx xxxx x xxxx.

(7)

Pokud xxx x xxxxxxxxx xxxxx ochranných opatření, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: způsob xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx vysledování xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, podrobnosti xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx zamořených oblastí, xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx xxxxxxx v místech xxxxxxxx označených jako xxxxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx některé xxxxxxxx xxx xxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx této xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismu.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx VII xxxxxxxx 98/57/XX se nahrazují xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1.   Členské státy xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro dosažení xxxxxxx x xxxxx směrnicí. Xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx xxxxx těchto předpisů x xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí xx 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

2.   Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx věstníku Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

---

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX PRO XXXXXXXX, XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (SMITH) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXX TESTU

Předložené schéma xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin,

ii)	zjištění Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin bramboru, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx x&xxxx;xxxx,

xxx)	xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH

	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a v rostlinách xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx testy
	3.	Postup xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx testy X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL V:	1.	Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum v půdě
		2.1	Příprava xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci R. solanacearum
	A.	Diagnostické x&xxxx;xxxxxxxx testy
		1.	Test xxxxxx xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx xx xxxxx půdy
			4.2	Postup obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (XX test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx řetězové reakce (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx purifikace XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová řetězová xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx PCR
		7.	Test xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx XXXXX
			x)	XXXX XXXXX (xxxxxxxxxx enzymová imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx PCR
		5.	Test XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx test
		Dodatek 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx protokoly x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Validovaná xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské xxxxxxxx xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxxxx postupy za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a jiným xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;2&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX, naznačuje pozitivní xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx podle xxxxxx schématu. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx infikovaný X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx patogenity.

ODDÍL I

POUŽITÍ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx selektivní xxxxx xxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx screeningového testu xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx a izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx testů.

3.   Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX XXXXXXXX XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX NEBO XXXXXX XXXXXXXXXXXXX ROSTLINÁCH X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX HNILOBY XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx bramboru. Raná xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx se rozpozná xxxxxxxx listů směrem x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx v noci xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx a mléčný xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné sliz xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx stonku svisle xx vody se x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx fázi xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx prstence, xx xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx krémový bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení stává xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx vně od pupkového xxxxx xxxxx a z oček xxxx vytékat xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx přilepení xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx místa, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx příznivých podmínek xxx patogena (teplota xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení listů xxxxxx dolů x&xxxx;xxxxxxx xx jedné straně xxxxxxxx nebo celé xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro patogena (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx postranních výhonů. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx jsou dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

1.3   Příznaky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx podmínek xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx a kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx vnitřní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx, a to i při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použijte xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické granule XXX x&xxxx;xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku nilskou xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4   Jiné xxxxx

Xxxxxxx vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testy xxxx xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva z cévního xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx nebo jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50mM xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx řadu xxxxxxxxxxxxxxx ředění suspenze.

c)

Přeneste 50–100 µl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. — Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, často s charakteristickými xxxxxxxxxx ve středu. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx. — X Xxxxxxxxx tetrazolového média x&xxxx;xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Avirulentní formy X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxx XX.X.

XXXXX&xxxx;XXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx testů na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky x&xxxx;xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 xxxx.

—	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X po dobu xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx vhodné desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Nechte xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx viditelné xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx minimum (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx všechny (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx je odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx měly xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx s podezřelými xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx výkrojky x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx znovu používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to možné, xxxxxxxxxxx je v nádobě xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z pupkových xxxxx zpracujte jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Stomacher xxxx Xxxxxxx, 150 mm × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Pozn.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx použili xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (ostří) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx supernatant. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistěte xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx omyjte xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidejte sterilní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x&xxxx;xx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24 °C (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a rozmrazení se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx boxu x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx sklíčka IF x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX xxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

2.   Podrobné xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx sterilní nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx z paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx skleníku: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx spojením x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx stonku xxxx nad xxxxxx xxxx. X&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě xxxxxxxx 1–2 cm díly xx&xxxx;xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo xxx xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci je xxxxx xxxxxxx xx xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx známé hostitelské xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx bramboru, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxx xxxxxx populace X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Tussilago xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální xxxx). Xxxxx stranou xxxxxxxx xxx xxxxxx s příznaky x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (viz xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx části xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte savým xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16–24 hodin chlazené, xxxx

x)

xxxxx zpracujte drcením xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě xx 24 hodin.

2.1.3   Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xxx xxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx popsaném x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1.   Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx detekce a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx v tomto xxxxxx xx použitelné x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx může xxx xxxxxxx k testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxx, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu selektivní xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx více x&xxxx;xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx schéma předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx podstatně nižší. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx získání negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx se toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu v povrchové xxxx, xx třeba xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx v období xxxxxxxx jara, léta x&xxxx;xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx xxxx, abyste xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx a odpadní xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Doporučená velikost xxxxxx xx 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx vodního xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, že přítoky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte v chladu x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) a testujte xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxx (xxxxxxx 4).

b)	Proveďte xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;5–10 ml peletového xxxxx a zachycením filtrátu. Xxxx xxxxxx je xxxxxx pro velké xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1.   Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Je však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx rozptýlených xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v úvahu omezenou xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx sledování, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na jeden xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1&xxxx;xx půdy xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxxx počet xxxxxxxx xxxx xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12–15 °C. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) v 60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) po dobu 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x&xxxx;10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx testování udržujte xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx.

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. XXXXXXXXXXXX

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXX XXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: uřízněte xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxx stonku xx xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxxx, xxx se xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1.	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx ze 48 hodinové kultury xx živné xxxx XXXX xxxx SPA (xxxxxxx 2) xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx súdánskou xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx opláchněte xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% vodním xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d)	Krátce xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx pro olejovou nebo xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx objeví xx XXX granulích jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx sklíčka 0,3 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a krátce xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx xxxxxx do xxxxxx a vysajte savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx zdraví škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

f)	Zkoumejte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx světlem pod xxxxxxxx xxxxxx a při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx modročerné xxxxxxxx XXX xxxxxxx v buňkách X. solanacearum x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami buněk.

3.   Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum v bakteriálním xxxxx nebo v extraktech x&xxxx;xxxxxx s příznaky je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx řiďte následujícím xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky suspense xxxxxxxx xxxxxxxxxx a bakteriálního xxxxx (přibližně 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c)	Pozorujte, xxx se v pozitivních xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Pozn.: Než xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, např. SMSA (xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; xxx xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx schopných xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx by xxx vzorek otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná x&xxxx;xxx extrakty, xxxxx xxxx uchovány v glycerolu xxx xxxxxxx xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx suspenze 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx vyhnuli xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx odděleně od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X každé xxxx připravené šarže xxxxxxxxxx živné půdy xx měla xxx xxxx xxxxx použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx způsobem jako xxxxxx (vzorky).

4.1.1   Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx extraktu xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6&xxxx;xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a po 3 dnech xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx krvavě xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx s vnitřními pruhy xxxx spirálami (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, zcela xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx částečně fluidní, x&xxxx;xxxxx obtížně rozeznatelné xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx půdu, xxxxxx xxxxxxx izolované kolonie (xxx dodatek 2).

4.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxxx xxxx dlouhodobě xx vhodném xxxxxxxxx xxxxx při teplotě –68 až –86&xxxx;°X xxxx lyofilizované.

4.1.5   Proveďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) a test xxxxxxxxxx (xxx oddíl VI.C).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx negativní, jestliže xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xx předpokladu, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

4.2   Obohacovací testy

Použijte xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Wilbrink (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx ze xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Tímto xxxxxxxx xxxxx i ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx(1:100). Je xxxx xxxxx poznamenat, že xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx být neúspěšné x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1   U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx extraktu xx vzorku xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), který xx předem xxxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx baněk. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx bujónu (xxxx. 100&xxxx;µx v 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx půdy).

4.2.2   Nechte xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C v třepané xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

4.2.3   Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xxxxx promíchejte.

4.2.4   S xxxxxxxxxx xxxxxxx zacházejte xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zvyšování xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX jako xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Použijte validovaný xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx při testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná polyklonální xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během testování xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, může xxx úspěšně proveden xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –68 xx –86 °C x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (xxxxxxx 4), 15minutovým xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx peletového pufru. Xxxxx xx není xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx plamenem.

Připravte xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) by se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu: Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx množství (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – u většího okénka xx množství větší x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx. Xxxxxxxx napipetujte xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x&xxxx;xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx pelety: Připravte desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx. Napipetujte xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhá řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx na xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.i): Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx mít 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy sklíčka xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.   Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
(X = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx okénko xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx postupem:

5.3.2   Podložní xxxxxxx xxxxxxxxx na vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx pokojové teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) a následně x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx být stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx pufru x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4.   Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. To xx může xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx části xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

5.4.4   Uvažujte xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s typickou xxxxxxxxx a morfologií x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x)

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5). Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxx xx počet typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x&xxxx;xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx)	Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxx xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx a vzorek se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se xxxx XXX jako xxxxxx screeningový xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné testování xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 103 až 104 xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx PCR (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx možnost kontaminace xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x&xxxx;XXX) by xx mělo xxxx xxxxxxxx jako s konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;XXX xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, při XXX xxxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx než xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx být pokud xxxxx bez zeminy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx purifikace DNA

Používejte xxxx xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3).

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx proveďte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx xxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a)   Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx lyzátového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x&xxxx;xxxxxxxx 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchejte třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx Easy XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vzorek xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx fází a vytvoření xxxxxxxx xxxxxxxxx při 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 min xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10.	Přidejte 1&xxxx;xx 100&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte na xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x&xxxx;xxxxxxxxx etanol x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) a promíchejte překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx a odstraňte xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte xxxxxx x&xxxx;100&xxxx;µx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx použití při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX pro xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2   Připravte xxxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx do xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl PCR xxxxxx podle protokolů XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX xxxx byl xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx rozdělte elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12 µl xxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (xxxxxxx 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2   Detekujte xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) po xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx např. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx velikosti x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným restrikčním xxxxxxx a pufrem (viz xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x&xxxx;xxxxxxxxxx gelu a pozorujte xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx u všech pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků (x xxxxxxx vícenásobné XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován u žádného xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx primerů XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx mít podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je získán xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx získán xxxxx xx xxxx amplikonů.

V xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření na xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx IF test. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými extrakty, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx negativní xxxxxxxx používejte xxxxxxxxx xxxx extraktu xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx testován xx X. solanacearum s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (např. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx extraktu, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxx testu, xx xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx xxxx kontrolního xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorku(ů).

7.1.   Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1   Připravte xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx xx 7 000 g.

7.1.3   Odstraňte xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 hodin předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X PB (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx použijete 2&xxxx;xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10&xxxx;µx (x&xxxx;0,01 M PB). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49&xxxx;µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraňte xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stejné xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
xxxxxx 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	okénko 5
Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
okénko 6	xxxxxx 7	xxxxxx 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx xxxxxxx 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx a pokračovat v hybridizaci xxxxx den. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80&xxxx;% x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného boxu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Před xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx okénka xxxxxxx xxxxxxx (3 x&xxxx;8).

7.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx sklíčka (24 × 24 mm) na xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hybridizace xx xxxx 5 hodin x&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx a 666 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx ve vodní xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6   Sejměte xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7.2.7   Spláchněte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x hybmixem xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

7.2.9&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxxx nadbytečnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo podobný) xx každého xxxxxx x&xxxx;xxxx sklíčko xxxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx s mikroskopem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630× xxxx 1 000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein isothiokyanat (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnejte xxxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx v pravých xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx než u pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, kdy všechna xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu sklíčka.

7.3.4   Specifičnost xxxxx XXXX s sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx použití rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 typických buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou pro X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx použít xxxxx xxxx volitelný xxxx xxxxx testů XX, PCR nebo XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX je obohacení x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Obohacení xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx ELISA může xxxxxx citlivost testu, xxx může se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx ve vzorku.

Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx druhotných konjugátů xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx u titru komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx jste xxxxxxx xxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném roztoku xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xxxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx srovnání výsledků xx každé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test ELISA (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4&xxxx;xxxxxx xx vodní xxxxx xxxx xxxxxx xxxx může x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx výsledků).

2)	Přidejte stejné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx do každé xxxxx mikrotitrační destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je titr).

6)	Přidejte 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 1&xxxx;xxxxxx při xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx je xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Přidejte 100 µl xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b)   DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx inkubovat xxx teplotě 37 °C 4 až 5&xxxx;xxxxx nebo 4&xxxx;°&xxxx;X xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4). Přidejte 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx ředění specifických xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v PBS (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) a přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx každé xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

8)	Připravte xxxxxx 1&xxxx;xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx vzorky je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních vzorcích xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

9.   Biotest

Pozn.: Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x&xxxx;xxxxxxx 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx čerstvě připraveného xxxxxxxx ze vzorku x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, které xxxx uchovány x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx fázi xxxxx xxxxxxx listů x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx méně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx testovací rostliny.

9.2.2   Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx rostlinu xxxx xxxxx prsty x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi děložní xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx udělejte příčný xxx asi 1 cm xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx kapky resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx řez xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 buněk xx 1 ml připravenou xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pufrem (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, abyste xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, xxxxxx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx vadnutí x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, držte xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx, v případě xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx proveďte xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx xxxxx být x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

B.   IDENTIFIKAČNÍ XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrňte xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Určete xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu	–
Poly-β-hydroxybutyrátové xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx aktivita	+
Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx při 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx xxxxxx	–
Xxxxxxxxx eskulinu	–
Produkce xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2   Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

2.3   Použijte XX metodu (oddíl VI.A.5).

2.4   Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 ml x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. solanacearum.

3.3   Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx kultury xx xxxxxxx xxxxxxxxx v porovnání x&xxxx;xxxxxxxx z pozitivní kontroly.

4.   Testy XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx přibližně 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx vařící xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxx postupy XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik a Maiss (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Opina xx&xxxx;xx. (1997), Weller xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx stejnou velikost x&xxxx;xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentů jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

5.   Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2   Použijte xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX je xxxxxxxxx, jestliže je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu použitím xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx provedeného xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx biovaru

Organismus R. xxxxxxxxxxxx je rozdělen xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx et al., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx lze úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdy x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx během 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx žlutou x&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx fenotypů biovaru 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx)	Xxxxxx 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2   Genomická variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx několikerými xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX a ERIC (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) lze xxxxxx k diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4 a 5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k testování x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx ve xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (viz xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx při xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx xxxx. U čistých xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx izolaci x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxxx izolaci xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx kolonií xxx X. solanacearum.

“

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)  Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)  Potencionální xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx v některých laboratořích xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx primerů XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx dodatek 6).

(6)  Pravděpodobnost xxxxxxx reakce xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx znám xxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx účely xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx mohou xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx koncentracích.

(10)  Metoda byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-5-X x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx extrakční xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxx izolace XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

---