Plné znění - 32006L0063

XXXXXXXX XXXXXX 2006/63/XX

xx xxx 14. července 2006,

xxxxxx se xxxx přílohy XX xx XXX xxxxxxxx Xxxx 98/57/ES x xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx al.

XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,

x ohledem na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,

x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 98/57/XX xx dne 20. xxxxxxxx 1998 x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.  (1), x xxxxxxx xx článek 11 xxxxxxx xxxxxxxx,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx z významných xxxxxxxxx škodlivých xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx vyskytuje v xxxxxxxxx xxxxxxx Společenství.

(3)

Xxxxxxxx 98/57/XX stanovila podrobná xxxxxxxx, která mají xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx proti xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx x při zjištění xxxxxxx xx zabránilo xxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx eradikace.

(4)	Xx xx xxxx došlo x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X důsledku xxxxxx xxxxxx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x aktualizovat xxxxxxxx xxxxxxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxx 98/57/XX.

(6)

Xxxxx xxx x postupy xxxxxxxxxx x identifikace, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenční xxxxxxxxxxx (FISH). Rovněž xxxx xxxxxxxx zlepšení xxxxxx polymerázové řetězové xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx xxxxxxx technických xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinách, xxx xx xxxxxxx, ve xxxx a xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx ochranných xxxxxxxx, xxxx pro xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx potvrzeného xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx zamořených xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx je xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx označených jako xxxxxxxx x v xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx předpisy xxx xxxxx, x xxxxxxx xx význam této xxxxxxxx jako hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx rostlinolékařského xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx II xx VII xxxxxxxx 98/57/XX xx nahrazují xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 2

1.   Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxx 2007 xxxxxxx x zveřejní xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x srovnávací tabulku xxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx použijí od 1. xxxxx 2007.

Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.

2.   Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropské xxxx.

Xxxxxx 4

Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xx.&xxxx;xxxx.&xxxx;X&xxxx;235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

---

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, XXXXXXXX A IDENTIFIKACI XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX (XXXXX) XXXXXXXX ET AL.

OBLAST XXXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx se xxxxxx:

x)	xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a některých xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx rostlin rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx).

XXXXX

	Xxxxxx xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx postupového xxxxxxxx
	1.	Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx hniloby a bakteriálního xxxxxxx (X. solanacearum) x&xxxx;xxxxxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky.
	3.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
		2.1	Xxxxxxxx vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění a identifikaci X. solanacearum xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. solanacearum x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx stonku
		2.	Detekce xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)
		3.	Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx na xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx xxxxxxxxxxx
		5.	Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (IF xxxx)
		6.	Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx metody
			6.2	Polymerázová xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx xxxxxxxx XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx (XXXX xxxx)
		8.	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ELISA
			a)	Nepřímé xxxxx ELISA
			b)	DASI XXXXX (xxxxxxxxxx enzymová imunoanalýza XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx
		2.	Xxxx XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)
		7.	Metoda xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx XXX
	X.	Xxxxxxxxxxx xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx podílející se xx optimalizaci a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné xxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. solanacearum
		Dodatek 3		X)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 4		Xxxxx xxx xxxxxxxxx postupy
		Dodatek 5		Xxxxxxxxx úrovně kontaminace xxx testech XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx test XXXX
		Xxxxxxx 8		Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx
		Xxxxxxxxxx

XXXXXX XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx pro přípravu testovaných x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Seznam xxxxxxxxxx, které se xxxxxxxx xx optimalizaci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx orgány xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xx uvedeno v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a musí být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) a musí xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx schématu. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX vyžaduje xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx bramboru s podezřením x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx a v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze dvou xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx v diagramu 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že čistá xxxxxxx je R. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx podezřelý.

Screeningové xxxxx a izolační testy xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

ODDÍL II

PODROBNÉ XXXXXX PRO XXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM X&xxxx;XXXXXXX XXXXXXXX A V ROSTLINÁCH BRAMBORU, XXXXXXX XXXX XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX VADNUTÍ

1.   Příznaky (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main)

1.1   Příznaky x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a uhynutím xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý a mléčný xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x&xxxx;xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx a podélně xxxx xxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V pokročilejších xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxx od pupkového xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, lehce xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx vnitřním xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxxx 25&xxxx;°X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx nebo celé xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21&xxxx;°X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx stonku se xxxx tvořit xxxxx xxxxx postranních výhonů. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx spodu xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx vylučují xxxxx xxxxxxxx vodivá pletiva xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x&xxxx;X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x&xxxx;xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25&xxxx;°X nebo není xxxxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxx (xxxx. x&xxxx;xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx jako x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky a kořeny xx vodě, mohou xxxxxxxxx vnitřní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x&xxxx;xx x&xxxx;xxx xxxxxxx příznaků vadnutí.

2.   Rychlé xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.1)

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx A nebo súdánskou xxxxx (Xxx xxxxx&xxxx;XX.X.2).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

(Xxx oddíl VI.A.3)

2.4   Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), testy XXXXX (xxx oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx XXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxx

x)

Xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z cévního xxxxxxxx xxxxx bramboru xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

c)

Přeneste 50–100 µl xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX nebo SPA; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x)

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X. — Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx vytvářejí virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxxx formy R. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx. — X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující výskyt X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1.   Podrobné metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1   Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx vedou x&xxxx;xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx vzorky s méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx na testování vzorků x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X xx xxxx xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx všech xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x)

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden PCR xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx na vzduchu. Xxxxx postup mytí xx vhodný (není xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

1.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx čistého x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu nebo xxxx na zeleninu xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na pupkovém konci x&xxxx;xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xxxxxx xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx stranou xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx vizuální xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xx xxxx uchovávat xx dobu xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a potom by xxxx xxx hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10 °C) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx uchovány podle xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x&xxxx;xxxxxxx, xx nádoby xxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx prostředky x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx zpracujte jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě nižší xxx 24&xxxx;°X nebo 16–24 xxxxx xxxxxxxx, xxxx

x)

xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx x&xxxx;xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Učiňte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx rozlití během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX xxxxxxxx přenosu XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxx použití x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4–10 °C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (~10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

1.1.4   Zahustěte xxxxxxxxxxx xxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X a odstraňte supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx peleta.

1.1.5   Resuspendujte peletu x&xxxx;1,5&xxxx;xx peletového xxxxx (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Přidejte xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) x&xxxx;500&xxxx;µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx zbývající xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (měsíce). Extrakty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx boxu s doručením xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly a vzorky X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx odděleně, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx xxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (viz oddíl VI.A.9)

2.   Podrobné xxxxxx xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1–2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx hned nad xxxxxx země.

Rostliny x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxxxx: čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem odeberte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx uříznutým xxxx nad xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx z každého výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem nebo xxxxxxxxxxxxx nůžkami odeberte 1&xxxx;xx xxxxxx díl x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx nad úrovní xxxx. U lilku potměchuti (X.&xxxx;xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx odeberte 1–2 cm díly xx&xxxx;xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx nejméně 10 xxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx xx xxxx rok x&xxxx;xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Xxxx 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx pilosa, Cerastium xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx alba, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx stranou xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx odděleně (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx dezinfikujte části xxxxxx 70 % xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vysušte xxxxx xxxxxxx. Xxxxx zpracujte xxxxx xxxxxx jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

a)	Buďto zalijte xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 xx./xxx) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xx 24 °C nebo 16–24 xxxxx chlazené, xxxx

x)

xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního pufru (xxxxxxx 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uložte xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě na 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Xxxxx díl xxxxxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a druhý díl xxxxxxxxxx v 10–25 % (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx v příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx XXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1.   Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx v tomto oddíle xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx povrchové xxxx a rovněž může xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx zmínit, xx očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xxx v povrchové xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 103 xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx v odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx vodě bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx nižší. X&xxxx;xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by mělo xxx xxxxx v úvahu xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx negativních xxxxxxxx. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xx se xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx použití x&xxxx;xxxxxxxxx mapování v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě xx nejspolehlivější x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx teplota xxxx překračuje 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a geografii xxxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxx patogenu xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx vody x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

2.1.1   Na xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30&xxxx;xx xxx xxxxxxxx x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 500&xxxx;xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí vzorky x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3&xxxx;xx xxxxxxx toku x&xxxx;xxxxxxxxx, že xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10 °C) x&xxxx;xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx teplotě 4–10&xxxx;°X, xxxxxx xxxxxxxx xxx usazeninou x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) x&xxxx;xxxxxxxxx promytím filtru x&xxxx;5–10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a zachycením filtrátu. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx obvykle xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x&xxxx;xxxxxx odpadní xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2   Testování

Viz postupový xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx dodatcích.

ODDÍL V

1.   Schéma xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

2.   Metody pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx popsané x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx kalu x&xxxx;xxxxxxx xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx mohou xxxxxxxxxx v přirozeně infikovaných xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx spolehlivosti všech xxxxxxxxx negativních xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Nejspolehlivějším xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu x&xxxx;xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx sledování, zda xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx použití xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

2.1   Příprava xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Na jeden xxxxxx xxxxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx x&xxxx;xxxxxx 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, zvyšte xxxxx xxxxxxxx xxxx na 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx uchovejte xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkem 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx celkový xxxxx xxxxxxxxxxx kalu. Xxxx xxxxxxxxxx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx vzorky 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx kalu xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60–150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xx xxxx 2&xxxx;xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02 % sterilního Xxxxx-20 a 10–20 x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx v příslušném dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX XXX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. SOLANACEARUM

A.   DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1.   Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Ponořte xxx stonku do xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ze 48 hodinové kultury xx živné xxxx XXXX nebo XXX (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x&xxxx;xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3.	Xxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx plamenem, abyste xxxxxxx xxxxxxxx.

4.	Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx nilskou xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pozorování xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a)	Zakápněte xxx sklíčka 1&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx nilské xxxxx a nechte xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxx xxxxxxxxx kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx krycí xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450&xxxx;xx pod xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx xxxxxxxxx 600× xx 1&xxxx;000× x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx nebo xxxxx imersi.

g)	Pozorujte, xxx xx objeví na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx fluorescence. Také xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a)	Zakápněte xxxxxxx sklíčka 0,3 % xxxxxxxx súdánské xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu a inkubujte 10 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

b)	Odstraňte xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x)	Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xylol xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte v digestoři.

d)	Zakápněte xxxxxxx 0,5&xxxx;% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx přebytečnou xxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

f)	Zkoumejte xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx imersí a při xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx zbarvení XXX granulí v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. červenými buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3) xx řiďte xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx kapky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5 µl xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxx

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxx.: Než xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx zajistili xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx selektivní xxxxxx xxxx, xxxx. SMSA (xx xxxxx Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx konkurenci nebo xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu xxx teplotě xx –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx desetinné xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připravte xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené šarže xxxxxxxxxx živné xxxx xx xxxx být xxxx jejím použitím x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx testujte xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

4.1.1   Proveďte xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx 50–100 µx xxxxxxxx xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

4.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx stav a pak xxxxxxxxxx xxxxxxxx denně xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX jsou mléčně xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx.: Xxxxx xx na xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a nefluidní xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, x&xxxx;xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

4.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx izolované kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4   Uchovávejte xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6–8, xxx chlóru) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx vhodném ochranném xxxxx xxx teplotě –68 až –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X) a test patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx k inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx způsobem xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx(1:100). Xx xxxx xxxxx poznamenat, že xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx izolace organismu X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx obtížná. Xxxxx xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx xx vzorku xx 10&xxxx;xx obohaceného xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100&xxxx;µx x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C v třepané xxxx statické xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

4.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx zahájením xxxxx XXXXX nebo XXX dobře xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx vzorky ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou novou xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže je xx xxxxx, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7&xxxx;000&xxxx;x x&xxxx;xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx vzorky xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, a nepovinně x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 až –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx možností xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx použít xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, pokud xxxxx x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

5.1   Připravte xxxxxxx k testování jedním x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx postupů:

i)

Pro xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nízkým množstvím xxxxxxxxx xxxxxx: Xxxxxxxxxxx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx množství xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

ii)

Pro xxxx pelety: Připravte xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx na teplotu 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v suchém xxxx xx nezbytně krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka by xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), ostatní 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 titru (X/2), xxxx (X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx ředění (PŘ) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.   Příprava xxxxxxx xx xxxx podle xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx resuspendované xxxxxx
(X = titr)	T/2	T/4	T/2	T	2T	◻	Dvojnásobné xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx vzorek 2
	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx odst. 5.1.ii) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx/xxxxxxxxxx
	1/1	1/10	1/100	xxxxxxx	xxxxxxx	◻	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx podložní xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxxxxx xxxxx testovací okénko xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, řiďte se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x&xxxx;xxxxxxx opláchněte xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxx XX Tween (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx pokryjte xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx sklíčka zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Opláchněte x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx každého xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

5.4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx vodní xxxxxx xxx zvětšení 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. U vzorků x&xxxx;xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovnímu xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxx při xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x&xxxx;xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx&xxxx;5.3.

5.4.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i)

Při zjištění xxxxx fluoreskujících xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx poli x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 5). Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx u vzorků, xxx xx xxxxx typických xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5&xxxx;× 103. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx další testování.

ii)	Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx pro vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 buněk xx 1&xxxx;xx resuspendované xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jen xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx R. solanacearum xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální citlivosti x&xxxx;xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijte schválená xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx možno, xxxxxxx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx PCR xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a PCR) xx xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli došlo x&xxxx;xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

—	extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx ve vodě x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx možno, při XXX použijte také XXX extrahovanou x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Abyste zabránili xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravujte xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být pokud xxxxx bez xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro tento xxxx, jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxx popsané pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

Test xxxxxxxxxxx materiálu proveďte xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

K purifikaci xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxx použití xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 6.

a)   Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1.	Xxxxxxxxxxx 220&xxxx;µx lyzátového pufru (100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Eppendorfovy xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx a umístěte xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx s teplotou 95&xxxx;°X na 10 min.

3.	Vložte xxxxxxxxxxxxx na 5&xxxx;xxx. xx ledu.

4.	Přidejte 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx třepáním x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X po xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20 min xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx xxxx do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X), xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a inkubujte na xxxx xx xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 minut xxx teplotě 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% etanolu (–20&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15 000 g po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx xxxxxx uschnout xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX xxxxxxx.

15.	Xxxxxxxxxxxxx peletu x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx stát xxx xxxxxxxx teplotě nejméně 20 minut.

16.	Skladujte xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx použití xxx XXX.

17.	Xxxxxxxxx bílou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a použijte 5&xxxx;µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA z kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR v prostředí, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3   Přidejte xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25&xxxx;µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxx XXX xxxx byl xxx, xxxxx byl xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (xxxxxxx&xxxx;6).

6.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx x&xxxx;3&xxxx;µx nanášecího xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxx gelu x&xxxx;Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) při 5–8 X/xx. Xxxxxxxx vhodný XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 xx.

6.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx DNA xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5&xxxx;xx/x) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx zkontrolujte pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx teplotě x&xxxx;xxxx xxxxxxx restrikčním xxxxxxx a pufrem (xxx xxxxxxx 6). Rozdělte xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX je negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx vícenásobné PCR x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx předpokladu, že xxxx amplifikován u žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním testu x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx PCR nasvědčuje xxxxxxxx reakce, jestliže xxxx získán xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že očekávaný xxxxxxxx je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx podezření xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxx FISH xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx IF test. Xxxx xx FISH xxxx provede jako xxxxx vyšetřovací xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 103–104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx proveden x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx používejte alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. solanacearum xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Připravte xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxxxxxx test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxxx et al. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxx 7&xxxx;xxxxx na 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx peletu xx 200&xxxx;µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7 000 g, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a resuspendujte peletu x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01X XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 X&xxxx;XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx –20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1   Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

Xxxxxx 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2
okénko 1	xxxxxx 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2
xxxxxx 6	xxxxxx 7	okénko 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx sklíčko 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X) x&xxxx;xxxxxxx nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx den. Sklíčka xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a v suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50&xxxx;%, 80&xxxx;% a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx vzduchem x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45&xxxx;°X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxx 7) xx 8&xxxx;xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9&xxxx;x&xxxx;10; viz xxx.7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka necháte xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4   Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24&xxxx;xx) na xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Umístěte sklíčka xx&xxxx;xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx hybridizace po xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx teplotě 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx 1&xxxx;x&xxxx;xxxx s molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 l 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx a 958 ml xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechte xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6   Sejměte xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx sklíček.

7.2.7   Spláchněte nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X

7.2.8&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

7.2.9   Ponořte xxxxxxx krátce do XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) a položte xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx xxxxxxx xxxxxxx (např. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxx sklíčko zakryjte xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 × 60 mm).

7.3.   Hodnocení XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630× xxxx 1&xxxx;000× xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx. S filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx morfologii s morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx odchylné. Prohlížejte xxxxxx napříč dvěma xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

7.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx opakován. Xx může nastat x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH s sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X úvahu xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, pokud xxxx při xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx a nejsou xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx fluoreskující buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx než 5&xxxx;×&xxxx;103 typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx pozorovány x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx použít xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx obohacení x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx se xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx homologického xxxxx X. solanacearum a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx homologického xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx v solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx použijte xxxxxxxxx xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, s příměsí 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2&xxxx;X&xxxx;x&xxxx;X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx destičce xxxxxxxx standardní suspenzi 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx k testování.

Standardizované pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro xxxxx test, jsou xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test XXXXX (Xxxxxxxx Smith xx&xxxx;xx., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100&xxxx;°X xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx topném xxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xxxx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx poslední xxxxxxxx roztok v jamce xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx a nechte xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.).

8)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Přidejte 100&xxxx;µx xx každé jamky x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

9)	Xxxxxxx xxxxxxxx z jamek a vymyjte xxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4).

10)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx substrátového alkalického xxxxxxx fosfatázy (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechte inkubovat x&xxxx;xxxxx při pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-XXXXX

1)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx nebo 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190 µl xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx rovněž xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Nechte xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3)	Jamky xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx specifických xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190 µl xx každé xxxxx. Xxxxxx xxxx 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;XXX. Přidejte 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Připravte xxxxxx 1&xxxx;xx p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Inkubujte x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx při 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže průměrná xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x&xxxx;xxxxx se xxxxxxxx vzorky je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX u negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH získané x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnoty XX z jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx OH ve xxxxx negativních kontrolních xxxxxxxx jsou xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx ELISA x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx byl i inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 až 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 až –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx rajčete (xxxx. xxxxxxxxx Moneymaker nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8&xxxx;xxxx xxxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx třetího xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx a vyvíjejí xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulujte xxxxxx xxxxxxx hned xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (přibližně 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx mezi xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx začnete x&xxxx;xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx.

9.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx a peletovým xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny od xxxxxxxxx rostlin, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační komory xxxx, x&xxxx;xxxxxxx omezeného xxxxxxxx, zajistěte přísnou xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx z různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při hnojení, xxxxxxxx, prohlížení x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx činnostech xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx skleník xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx mezi vzorky.

Hledejte xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx.

9.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx&xxxx;XX.X).

9.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx 3&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx segmentů stonků xxxxxxxx 1&xxxx;xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx všechny xxxxx xxxxxxx s podezřením xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou být x&xxxx;xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx bakteriemi X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.   Výživové a enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Stead (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx	Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (X/X)	X+/X–
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Kovacse	+
Redukce xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % XxXx	+
Xxxx x&xxxx;2&xxxx;% NaCl	–
Arginin-dihydrolázová aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1   Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx provádění xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx.

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx hodnota xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx suspenzi xxxxxxxxx 106 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v ohřívacím xxxxx xxxx vařící vodní xxxxx při 100&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xxxxxx. Xxxxxx xxxxx být xxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3   Použijte xxxxxxxxx postupy PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx amplikonů xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (xxxx. Xxxx xx&xxxx;xx. (1993); Pastrik x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx xx&xxxx;xx. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5.   Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) s nejméně 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.   Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.1   Pěstujte xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FAP je xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1 2OH x&xxxx;18:1&xxxx;2XX a absence 16:0&xxxx;3XX xxxxxxxxx xx Ralstonia xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx biovaru

Organismus R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx biovarů na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx biovaru xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx očkováním do xxxxx půdy s čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx při teplotě 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200&xxxx;µx na 1&xxxx;xxxxx), zbarvení xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx po xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Xxxxxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	+
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–
Xxxxxxxx	–	–	+	+	–

Xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

	Xxxxxx 2X (xxxxxxx xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2T (tropické xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx&xxxx;(1)	xxxxx	xxxxx	xxxxxx

7.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx něž patří:

7.2.1   Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX s využitím xxxxxxx XXX, BOX x&xxxx;XXXX (Xxxxx et al., 1995; Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Van xxx Xxxx xx&xxxx;xx., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx k diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;(xxxxxxx 1, 2X x&xxxx;2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Taghavi xx&xxxx;xx., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (TEST XXXXXXXXXX)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx xxxxxxx 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

3)

Xxxxxx inkubovat xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx typické xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5)

Xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx xxxxxxx xx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxxx kolonií pro X. xxxxxxxxxxxx.

“

---

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx .

(3)  Použijte xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx reagující xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (IF x/xxxx XXXXX) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx xxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx podobnou xxxxxxxx, xxxx xx očekávaná xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx primerů XXX-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx pouze x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxx.

(7)&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Research PTC 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx xxx rovněž xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Použití extrakční xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX může xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx reagencií.

(12)  Metoda byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) a Gibco XXX.

---