EPIS® Právní systém | Plné znění

XXXXXXXX KOMISE 2006/63/XX

xx xxx 14. xxxxxxxx 2006,

kterou se xxxx xxxxxxx XX xx XXX směrnice Xxxx 98/57/XX x xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx.

KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,

x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,

s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 98/57/XX xx dne 20. xxxxxxxx 1998 o xxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx. (1), x zejména xx xxxxxx 11 xxxxxxx směrnice,

xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:

(1)	Xxxxxx x významných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx x rajčata xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxxxxx (xxxx xxx „xxxxxxxxxx“).

(2)	Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx částech Xxxxxxxxxxxx.

(3)

Směrnice 98/57/XX stanovila xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx přijata x xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx rozšíření, xxxxxxxx xx jeho xxxxxxx x xxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(4)	Xx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxx pokroku x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x xxxxxxxxx zjišťování x identifikace organismu x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx technických ustanovení xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

(5)	X xxxxxxxx tohoto xxxxxx xx xxxx xxxx nezbytné přezkoumat x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v některých xxxxxxxxx směrnice 98/57/ES.

(6)

Xxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xx zapracována xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (FISH). Rovněž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx polymerázové xxxxxxxx xxxxxx (XXX) x xxxxxxxx různých xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a identifikace xxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, než xx xxxxxxx, xx xxxx x xxxx.

(7)

Xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xx xxxxxxxxxxx zlepšené xxxxxxxx xxx: xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxx každého potvrzeného xxxxxxx organismu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxx v místech xxxxxxxx označených xxxx xxxxxxxx a v xxxxx vymezených xxxxxxx. Xxxxx toho byly xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx, s ohledem xx význam této xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

(8)	Xxxxxxxx stanovená xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:

Xxxxxx 1

Xxxxxxx XX xx XXX xxxxxxxx 98/57/XX xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.

Xxxxxx 2

1. Xxxxxxx státy xxxxxxxxxx do 31. března 2007 xxxxxxx x zveřejní xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx oznámí Xxxxxx xxxxx xxxxxx předpisů x srovnávací xxxxxxx xxxx těmito xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx od 1. xxxxx 2007.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Způsob odkazu xx stanoví xxxxxxx xxxxx.

2. Xxxxxxx xxxxx neprodleně xxxxx Komisi znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx 3

Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx.

Xxxxxx 4

Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.

X Xxxxxxx xxx 14. xxxxxxxx 2006.

Xx Xxxxxx

Xxxxxx XXXXXXXXX

xxxx Xxxxxx

(1) Úř. věst. L 235, 21.8.1998, x.&xxxx;1.

XXXXXXX

XXXXXXX&xxxx;XX

XXXXXX XXXXX XXX XXXXXXXX, ZJIŠTĚNÍ X&xxxx;XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXX SOLANACEARUM (XXXXX) XXXXXXXX XX&xxxx;XX.

XXXXXX PŮSOBNOSTI XXXXXXXX TESTU

Předložené xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx týkají:

i)	diagnózy xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx)	xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete x&xxxx;xxxxxx hostitelských rostlin, xxxx a půdy,

iii)	identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum).

OBSAH


	Obecné xxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramu
	1.	Detekční xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (R. xxxxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx hostitelských xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
	2.	Xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských rostlinách xxxxxxxxxxxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí
	1.	Příznaky
	2.	Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx
	3.	Xxxxxx xxx xxxxxxx
	4.	Xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XXX:	1.	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx
		1.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		1.2	Xxxxxxxxx
	2.	Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky
		2.1	Příprava vzorků
		2.2	Testování
ODDÍL IV:	1.	Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;X:	1.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxx
	2.	Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx
		2.1	Xxxxxxxx xxxxxx
		2.2	Xxxxxxxxx
XXXXX&xxxx;XX:	Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx a identifikaci X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx
		1.	Xxxx xxxxxx xx xxxxxx
		2.	Xxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)
		3.	Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx
		4.	Xxxxxxxxxx xxxxxxx
			4.1	Xxxxxxxx na xxxxx xxxx
			4.2	Xxxxxx obohacování
		5.	Imunofluorescenční xxxx (XX test)
		6.	Test xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX xxxx)
			6.1	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX
				x)	Xxxxxx podle Xxxxxxxx (2000)
				x)	Xxxx xxxxxx
			6.2	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
			6.3	Xxxxxxx produktu XXX
		7.	Xxxx xxxxxxxxxxxxx hybridizace xx xxxx (FISH test)
		8.	Testy xxxxxxxx imunoanalýzy XXXXX
			x)	Xxxxxxx xxxxx ELISA
			b)	DASI ELISA (xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXXXX)
		9.	Xxxxxxx
	X.	Xxxxxxxxxxxxx testy
		1.	Nutriční x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx test
		2.	Test XX
		3.	Xxxx XXXXX
		4.	Xxxx XXX
		5.	Xxxx XXXX
		6.	Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)
		7.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
			7.1	Xxxxxxxxx xxxxxxx
			7.2	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx
			7.3	Xxxxxx PCR
	C.	Konfirmační xxxx
		Xxxxxxx 1		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx
		Xxxxxxx 2		Živné půdy xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx
		Xxxxxxx 3		A)	Komerčně xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx
				X)	Xxxxxxxx kontrol
		Dodatek 4		Pufry xxx xxxxxxxxx xxxxxxx
		Xxxxxxx 5		Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;XXXX
		Xxxxxxx 6		Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx PCR
		Dodatek 7		Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxx XXXX
		Xxxxxxx 8		Pěstitelské podmínky xxxxxxx a lilku
		Literatura

OBECNÉ XXXXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx činidla x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;1.

Xxxxxxx protokoly obsahují xxxxxxxx karanténního organismu x&xxxx;xxxxx zahrnovat xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx úředními xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx s činidly x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení kontaminace xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných vzorků. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v čl. 4 odst. 2 směrnice 98/57/XX, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů provedených xx vzorku, jak xx znázorněno x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx infekci R. xxxxxxxxxxxx a musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx) x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxx 98/57/XX xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

XXXXXXX POSTUPOVÉHO XXXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx vadnutí (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x&xxxx;xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx selektivní živné xxxx a v případě pozitivního xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2. Schéma pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 3), x&xxxx;xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx R. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 103 xx 104 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

XXXXX&xxxx;XX

XXXXXXXX XXXXXX XXX ZJIŠTĚNÍ XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX V HLÍZÁCH XXXXXXXX X&xxxx;X&xxxx;XXXXXXXXXX BRAMBORU, XXXXXXX XXXX JINÝCH XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX S PŘÍZNAKY XXXXX XXXXXXX XXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx)

1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx a objevují xx hnědé nekrózy. Xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx kolapsem a uhynutím xxxxxxxx. Z cévních svazků xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx svisle xx vody xx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx překrojit napříč x&xxxx;xxxxxxxxx konce a podélně xxxx pupkový xxxxx. X&xxxx;xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx hnědého zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx krémový bakteriální xxxx. Později se xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx xxxx rozšířit xx&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a z oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, lehce xxxxxxxx postižená xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx infekce xx xxxxxxx sekundární xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx u rajčete

Rostlina xxxxxxx. Prvním viditelným xxxxxxxxx je povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx kolem 25&xxxx;°X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx málo dní xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo celé xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx úplným odumřením. Xx xxxx příznivých xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °C) rostlina xxxxx nevadne, xxx xx stonku se xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx postranních xxxxxx. Xx možné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx systému. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx vylučují hnědě xxxxxxxx vodivá xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx sliz.

1.3 Příznaky u jiných xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25&xxxx;°X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x&xxxx;xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u rostliny xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx a kořeny xx vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X&xxxx;xxxx cévních xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže xx řez stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a to i při xxxxxxx příznaků xxxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testů:

2.1 Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx oddíl VI.A.1)

2.2 Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx (PHB)

Charakteristické xxxxxxx XXX v buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku nilskou xxxxx X&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl VI.A.2).

2.3 Sérologické xxxxxxxxxxx testy

(Viz xxxxx&xxxx;XX.X.3)

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx xxxxx

Xxxxxxx vhodnými rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5), xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7), xxxxx XXXXX (viz oddíl VI.A.8) x&xxxx;xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6).

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx při xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxxx vrstvu xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx vláken xxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx je x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxx 5–10 xxxxx xxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx 50–100 µx suspenze x&xxxx;xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (NA, XXXX xxxx XXX; xxx xxxxxxx 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx xxxxxxx 2). Xxxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx 2–6 xxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

—

Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx, často x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx krémově xxxx.

—	X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx x&xxxx;xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x&xxxx;xxxx VI.B.

ODDÍL III

1. Podrobné metody xxx xxxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

1.1 Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

—

Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství hlíz xx vzorku xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx

—	Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 200 hlíz.

—	Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx být rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx, Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

x)	Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2–30&xxxx;°X po dobu xx 2 týdnů před xxxxxxxxxx xx podporu xxxxxxx xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx hlízy. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx proveden PCR xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx hlízy xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup mytí xx xxxxxx (xxxx xxxx xxxxxxxxx) xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, když je xx vzorcích příliš xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být xxxxxxxx xxxx PCR xxxx xxxxx izolace.

1.1.1 Pomocí xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx slupku na xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx konci x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky omezte xx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx stranou xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s podezřelými xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx konci Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx příznaky xx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2&xxxx;xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke zkorkovatění (xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxx xx xxxx být hlízy xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (4–10&xxxx;°X) xx xxxxxxx karanténních xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

1.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x&xxxx;xxxxxxx, že nádoby xxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxxx xx x&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx zalijte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C nebo 16–24 hodin chlazené, nebo

homogenizujte xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx (xxxx. silný polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150&xxxx;xx × 250&xxxx;xx, sterilovaný xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxx.: Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zajistěte, xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x&xxxx;xxxxxx. Xxx testu XXX zabraňte xxxxxxx XXX xx&xxxx;xxxxxxxx nebo x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx. U testu XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx drcení v sáčcích xx jedno xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxx xxxxxxx.

1.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, pročistěte xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 g po dobu 10 minut při xxxxxxx 4–10 °C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40–100 µx), filtr omyjte xxxxxxxxx (~10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

1.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15&xxxx;xxxxx (xxxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4–10&xxxx;°X a odstraňte xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

1.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxxxx 500&xxxx;µx xxx X. solanacearum, 500&xxxx;µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x&xxxx;500&xxxx;µx xxx referenční xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10–25&xxxx;%&xxxx;(x/x) k 500 µl xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx a uložte xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (týdny) xxxx –68 xx –86&xxxx;°X (měsíce). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 4–10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte přepravu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

1.1.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxxxx testy.

1.2 Testování

Postupové diagramy x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

XX test (viz xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (viz xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.9)

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx&xxxx;xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.: Xxx účely xxxxxxx latentních xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x&xxxx;xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

2.1.1 Do xxxxxxxx sterilní nádoby xxxxxx 1–2 xx xxxxxx kousky stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kousek xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z pole xxxx xxxxxxxx: čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postranní xxxxxxx x&xxxx;xxxxx rostliny xxxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx xxxxxx xxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U lilku xxxxxxxxxx (X.&xxxx;xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 1–2 xx díly xx&xxxx;xxxxxx pod vodou xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky representativní xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1&xxxx;xxxxxxxxxx místo xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a podzimu, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx u víceleté Xxxxxxx dulcamara rostoucí xx vodních tocích. Xxxx známé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Xxxxxx stramonium x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx&xxxx;xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, které mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2/Race 3&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Cerastium xxxxxxxxxx, Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx, X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx xxxxxx.

Xxxx: X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX).

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 70&xxxx;% xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx zpracujte xxxxx xxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50–100 ot./min) 4&xxxx;xxxxxx xxx teplotě xx 24&xxxx;°X xxxx 16–24 hodin chlazené, xxxx

xxxxx zpracujte xxxxxxx xxxxx v pevném xxxxxxxxxx xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (xxxxxxx 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex). Není-li xx xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx 24 xxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, dekantujte xxxxxxxxxxx.

2.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pročišťování extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xxx xxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx&xxxx;XXX. 1.1.3 xx 1.1.5.

2.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový extrakt xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx 4–10&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;10–25&xxxx;% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X (xxxxx) xxxx –68 až –86&xxxx;°X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

2.2 Testování

Postupové xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx testů x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx najdete x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.4)

Xxxx XX (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.5)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6)

Xxxx FISH (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.7)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx&xxxx;XX.X.8)

Xxxxxxx (xxx oddíl VI.A.9)

ODDÍL IV

1. Schéma xxx zjištění x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k testování xxxxxx odpadní xxxx xx zpracování brambor x&xxxx;xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx substrátu. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx více x&xxxx;xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor a odpadní xxxx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma předpokládá xxxxxxx asi 103 xxxxx/xxxx povrchové vody, xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx čistícího postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx k tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v povrchové xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx jeho xxxxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx v odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxx.:

—	Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15&xxxx;°X.

—	Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v různé xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

—	Xxxxxxx x&xxxx;xxxxx účinky xxxxxxx dešťů x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxx značnému xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

—	Xxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xxxxxxxx vzorky xxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30&xxxx;xx xxx hladinou x&xxxx;2&xxxx;x&xxxx;xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování a odpadní xxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xxxxx bude obsahovat 2&xxxx;xxxxxxxxx dílčí xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx nejméně 30&xxxx;xx. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xxxxxxx nejméně 3&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx na každé 3&xxxx;xx xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx přepravujte x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxx (4–10&xxxx;°X) a testujte xx 24 hodin.

2.1.3 Je-li xxxxxxx, může být xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxxxx 30–50 ml xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10&xxxx;xxxxx (xxxx 7&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4–10&xxxx;°X, slijte kapalinu xxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v 1 ml xxxxx (xxxxxxx 4).

x)	Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx xxxx 0,45&xxxx;µx) x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x&xxxx;5–10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, které xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

2.2 Testování

Viz postupový xxxxxxx a popis testů x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

XXXXX&xxxx;X

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx pro xxxxxxxx a identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v půdě

Principy

Platné detekční xxxxxx xxxxxxx v tomto xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu z odpadní xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxx sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v polní xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x&xxxx;xxx xxxxxxx této xxxxxx unikne xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx

2.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními principy xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Na jeden xxxxxx shromážděte 0,5 xx 1&xxxx;xx xxxx xx 60 míst x&xxxx;0,3&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxx 10–20 xx (xxxx v mřížce 7&xxxx;× 7&xxxx;x). Je-li xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, zvyšte počet xxxxxxxx míst xx 120 v 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12–15&xxxx;°X. Xxx xx zpracování xxxxxxx a kanalizace navzorkujte xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx dobře promíchejte.

2.1.2 Rozptylte xxxxx xxxxxx 10–25 x&xxxx;xxxx xxxx kalu xxxxxxx třepačkou (250 xx./xxx) v 60–150 ml xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4) xx dobu 2&xxxx;xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02&xxxx;% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10–20 g sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

2.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxxxxxxxx udržujte xxxxxxxx v teplotě 4&xxxx;°X.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx dodatku.

ODDÍL VI

OPTIMALIZOVANÉ XXXXXXXXX PRO XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXXX X. SOLANACEARUM

A. DIAGNOSTICKÉ X&xxxx;XXXXXXXX TESTY

1. Test na xxxxx slizu xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxx xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Ponořte xxx xxxxxx do xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx vodou. Xxxxxxxx, xxx xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1.	Připravte xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (xxxxxxx 2) na mikroskopické xxxxxxx.

2.	Xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a případně xxxxxxxxx kontrolní roztěr x&xxxx;xxxxxx XXX negativním xx.

3.	Xxxxxx je xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx plamenem, xxxxxx xxxxxxx fixovali.

4.	Obarvěte xxxxxxxxx xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx černí x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže uvedeného xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1&xxxx;% xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a nechte inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55&xxxx;°X.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxx 8&xxxx;% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxx xxxxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxx navlhčete kapkou xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450&xxxx;xx xxx olejovou xxxx vodní xxxxxx xx zvětšením 600× xx 1&xxxx;000× s použitím xxxxxxxxx pro olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx v procházejícím normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xx morfologie buněk xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,3&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X&xxxx;x&xxxx;70&xxxx;% etanolu x&xxxx;xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx barvicí xxxxxx a krátce opláchněte xxxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, odsajte přebytečnou xxxx xxxxx papírem.

c)	Ponořte xxxxxxx krátce xx xxxxxx a vysajte savým xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xylol xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 % (x/x) xxxxxx roztokem safraninu x&xxxx;xxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Upozornění: safranin xx zdraví xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a pracujte x&xxxx;xxxxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx 1 000x.

g)	Pozorujte, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy

Aglutinace xxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx s příznaky je xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx xxxxxxx 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3) xx xxxxx xxxxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx řiďte xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

x)	Xxxxxxxxx xxxxx suspense xxxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5&xxxx;µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x)	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx a heterologního xxxxx.

x)	Xxxxxxxxx, xxx xx v pozitivních xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx po xxxx 15 sekund objeví xxxxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx izolace

4.1 Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxx metodu xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijte řádně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, např. XXXX (xx znění Xxxxxxxxxxx xx&xxxx;xx., 1996; viz xxxxxxx 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx schopných na xxxxx půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx konkurenci nebo xxxxxxxx, měl xx xxx vzorek otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v glycerolu xxx xxxxxxx od –68 xx –86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 106 xxx/xx virulentního xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx jejím xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx kultivaci xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxx (xxxxxx).

4.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx vyloučeny. Naneste 50–100 µl xxxxxxxx xxxxxx na 1&xxxx;xxxxx xxx každé ředění.

4.1.2 Nechte xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Po 48 hodinách xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xxxxxxxxxx kontrolu xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, ploché, nepravidelné x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xx 3&xxxx;xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Pozn.: Xxxxx se na xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

4.1.3 Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx rozetřete xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx, abyste xxxxxxx izolované kolonie (xxx xxxxxxx 2).

4.1.4 Uchovávejte xxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (xX 6–8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx při xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

4.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (viz xxxxx&xxxx;XX.X) x&xxxx;xxxx patogenity (xxx xxxxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6&xxxx;xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a v kontrolních xxxxxxxx xxxx nalezeny xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testy

Použijte xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx xxxxxxx&xxxx;2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxx a zvýšení citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx(1:100). Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx neúspěšné x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X&xxxx;xxxxxx xxxxxx může xxx izolace xxxxxxxxx X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, protože xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

4.2.1 U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. U obohacovacího xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 µl x&xxxx;1,0&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

4.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

4.2.3 Před xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX xxxxx xxxxxxxxxxx.

4.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx testech.

Pozn.: Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit lepších xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

Postup

Použití xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx v dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (viz internetová xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx XX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx v pracovních xxxxxxxx blízkých nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx je xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xx vzorcích uchovaných xxx teplotě –68 xx –86&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxx může xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1&xxxx;xx pufru (xxxxxxx 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7 000 g x&xxxx;xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx sklíčka plamenem.

Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxxxxx 3&xxxx;X, x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx infikované xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X) xx xx xxxx xxxxx možností xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Použijte xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx, xxxxx možno x&xxxx;10&xxxx;xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6&xxxx;xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

Xxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetujte odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxx. Xxxxx xxxx může xxx použita jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx)

Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15&xxxx;µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6&xxxx;xx – x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx kapičky při xxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45&xxxx;°X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60&xxxx;°X), xxxxxxxx, 95&xxxx;% etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, fixovaná xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v suchém boxu xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XX

x)	Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.x): Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2&xxxx;xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4&xxxx;xxxxx&xxxx;(X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (T) a dvojnásobek xxxxx&xxxx;(2X).

xx)	Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x&xxxx;xxxx.&xxxx;5.1.xx): Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.x) x&xxxx;5.3.x)

	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
	1/100	1/1	1/1	1/1	1/1	◻	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety
(T = xxxx)	X/2	X/4	X/2	X	2X	◻	Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx/xxxxxxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx xxxxxx 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

Xxxxxxx 2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx.&xxxx;5.1.xx) x&xxxx;5.3.xx)

	Xxxxxxxx xxxxxx antitiséra/protilátky
	1/1	1/10	1/100	prázdný	prázdný	◻	Desetinné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx 1
Xxxxxx 1	1	2	3	4	5
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2
Xxxxxxxx vzorku 1&xxxx;xxxx xxxxxx 2	6	7	8	9	10

5.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx xxxxxx xxxxxx musí xxx nejméně stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

5.3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18–25&xxxx;°X).

5.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjte xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x&xxxx;xxxxx XX Xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx XX. Zabraňte xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

5.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18–25&xxxx;°X).

5.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxx xxxxxxx (5.3.3).

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.3.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx (xxxxxxx 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx tekutiny xx xxxxxxx okénka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx sklíčko.

5.4. Vyhodnocení XX&xxxx;xxxxx

5.4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx testovací xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx s filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500× xx 1&xxxx;000×. Xxxxxxxxx xxxxxx ve dvou xxxxxxxx kolmých průměrech x&xxxx;xxxxx obvodu. X&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx obarvené x&xxxx;xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx IF opakován (xxxx.&xxxx;XX.X.5).

5.4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx.

Xxx podezření x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx pro přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx bramboru x&xxxx;xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

5.4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.

5.4.5 Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx morfologií xxxxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5&xxxx;× 103. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a je xxxxxxx další testování.

ii)	Výsledek XX testu xx xxxxxxxxx pro vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 × 103 buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování podle xxxxxxxxxxx diagramu, aby xxxx analýza úplná.

Využití xxxx xxxxxx v celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, xx-xx požadována specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxx.: Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 103&xxxx;xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx zabránili xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX x&xxxx;XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s konečnými xxxxxx, aby xxxx xxxxx, jestli došlo x&xxxx;xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem,

—	kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a DNA xx xxxxxx,

—	xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

—	xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx kterých byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz xxxxxxx 3&xxxx;X);

—	xxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz xxxxxxx&xxxx;3&xxxx;X);

—	xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx z pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v odděleném xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx&xxxx;xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;3.

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používejte xxxx popsané xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3).

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx různé metody xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla optimalizována xxx účely xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx v dodatku 6.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1.	Napipetujte 220&xxxx;µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 mM Xxxx-XXx (xX 8,0), 1&xxxx;xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

2.	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xxxxxxxx xx vzorku x&xxxx;xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně s teplotou 95&xxxx;°X xx 10&xxxx;xxx.

3.	Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx 5&xxxx;xxx. xx xxxx.

4.	Xxxxxxxx 80&xxxx;µx xxxxxxxxx roztoku lysozymu (50&xxxx;xx xxxxxxxx/xx 1&xxxx;xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X xx dobu 30 xxxxx.

5.	Xxxxxxxx 220&xxxx;µx xxxxxxx Xxxx XXX® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při teplotě 65&xxxx;°X xx xxxx 30 xxxxx.

6.	Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxx Easy DNA® X&xxxx;(Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchejte xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx chloroformu x&xxxx;xxxxxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8.	Xxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx odstřeďte xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx dobu 20&xxxx;xxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

9.	Xxxxxxxx xxxxx fázi xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10.	Xxxxxxxx 1&xxxx;xx 100 % xxxxxxx (–20&xxxx;°X), krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xx xxxx po xxxx 10&xxxx;xxx.

11.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx.

12.	Xxxxxxxx 500&xxxx;µx 80&xxxx;% xxxxxxx (–20&xxxx;°X) a promíchejte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13.	Xxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000&xxxx;x&xxxx;xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X, xxxxxxxxxx peletu x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx.

14.	Xxxxxx peletu uschnout xx vzduchu xxxx x&xxxx;XXX odparce.

15.	Resuspendujte peletu x&xxxx;100&xxxx;µx sterilní XXX x&xxxx;xxxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16.	Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx –20&xxxx;°X xx xx xxxxxxx při XXX.

17.	Xxxxxxxxx xxxxx sraženinu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx 5&xxxx;µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xxx xxxx XXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx metody

Jiné metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 103 xx 104 patogenních xxxxx na 1&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX

6.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx testované xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek 5&xxxx;µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl PCR xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx xxxxxxx 6).

6.2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxx týž xxxxx XXX xxxx byl xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

6.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx. Naneste xxxxxxx 12&xxxx;µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx s 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxx gelu v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5–8 X/xx. Xxxxxxxx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

6.3.2 Detekujte xxxxxxx DNA obarvením x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30–60 xxxxx xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;X&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302&xxxx;xx) xxxxxxxxxxx xxxx hledejte xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xxxxxxxxxxxxx.

6.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální xxxxxxx x&xxxx;xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx (xxx xxxxxxx 6). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a porovnejte x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx u zkoumaného vzorku xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;(xxxxxxxx) xxxxx xx xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX (xxxxxxx 6).

Xxxx.: Xxx xxx podezření xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx pozitivní kontroly xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx&xxxx;xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, že očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx více xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx x&xxxx;xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx se FISH xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx test x&xxxx;xx xxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx: Používejte xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxxxxx 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 103–104 buněk R. xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je možné xxx xxxxxxx provést x&xxxx;xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx při xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X nebo –68 xx –86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován na X. solanacearum x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxx suspenzi obsahující 105 xx 106 xxxxx na 1&xxxx;xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz xxxxxxx 3) v 0,01M xxxxxxxxxx pufru (XX) xx 3–5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního xxxxx X. solanacearum, xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože zbarví xxxxxxx eubakterie přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx, je xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 3 bodu X.

Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx(x).

7.1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1998).

7.1.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx roztok (xxx xxxxxxx 7).

7.1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx po dobu 7&xxxx;xxxxx xx 7&xxxx;000&xxxx;x.

7.1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

7.1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx 7&xxxx;xxxxx xxx 7&xxxx;000&xxxx;x, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;75&xxxx;µx 0,01M XX (xxx xxxxxxx 7).

7.1.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx 16&xxxx;µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx použijete 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x&xxxx;xx neředěný x&xxxx;xxxxxxx 1:100&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxx 10 µl (x&xxxx;0,01 M PB). Zbývající xxxxxx vzorku (49&xxxx;µx) xxxx být uložen xxx teplotě –20&xxxx;°X xx xxxxxxx 1&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96&xxxx;% xxxxxxx. X&xxxx;xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a přidejte stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxxxxx protřepáním).

Obrázek 7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

Vzorek 1	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxx 2

xxxxxx 1	okénko 2	xxxxxx 3	xxxxxx 4	xxxxxx 5
Xxxxxx 1	Prázdný	Prázdný	Prázdný	Vzorek 2

xxxxxx 6	xxxxxx 7	okénko 8	xxxxxx 9	xxxxxx 10
Xxxxx xxxxxxx 1			Xxxxx sklíčko 2

7.1.6 Nechte xxxxxxx uschnout na xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X) a fixujte xxx xxxxxxxx.

X této fázi xx možné xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

7.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx

7.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50&xxxx;%, 80 % x&xxxx;96&xxxx;%, xxxxxxx xx xxxx 1&xxxx;xxxxxx. Osušte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx.

7.2.2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx vlhkou xxxxxxxxx komoru xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, xxxxxxx 7). Xxxx xxxxxxxx ohřejte xxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °C xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 μl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx.7.1) na každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka xxxxxxx xxxxxxx (3 a 8).

7.2.4 Přiložte xxxxx xxxxxxx (24 × 24 mm) xx xxxxx a poslední 4&xxxx;xxxxxx, x&xxxx;xx tak, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Umístěte xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5&xxxx;xxxxx v troubě xxx xxxxxxx 45&xxxx;°X x&xxxx;xxxxx.

7.2.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx 3&xxxx;xxxxxxx obsahující 1&xxxx;x&xxxx;xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1&xxxx;x&xxxx;1x xxxxxx (334&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;666&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x&xxxx;1&xxxx;x&xxxx;1/8x xxxxxxx (42&xxxx;xx 3x xxxxxx x&xxxx;958&xxxx;xx vody x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx 45 °C.

7.2.6 Sejměte xxxxx sklíčka x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7.2.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx nadbytek xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;1x xxxxxxxx xxx teplotě 45 °C

7.2.8 Přemístěte xxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

7.2.9 Ponořte xxxxxxx krátce xx XXX (xxxx. Milli X&xxxx;xxxxx) x&xxxx;xxxxxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 5–10 μx krycího xxxxxxx (např. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého okénka x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 × 60&xxxx;xx).

7.3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

7.3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sklíčka xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630× xxxx 1&xxxx;000× pod olejovou xxxxxx. S filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Použitím filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx.&xxxx;XX.X.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých úhlech x&xxxx;xxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

7.3.2 Hledejte xxxxx fluoreskující xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xxxxxxx x&xxxx;xxxxx.

7.3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

7.3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX s sebou xxxx několik xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxx reakci se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx o velikosti x&xxxx;xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxx mnohem xxxx častěji xxx x&xxxx;xxxxx XX.

7.3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;X xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx velikostí x&xxxx;xxxxxxxxxx.

7.3.6&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

Xxxxxxxx FISH testu xxxx platné, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. solanacearum x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadněte xxxxxxxx počet typických xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx&xxxx;(xxxxxxx&xxxx;4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 × 103 xxxxxxxxx buněk xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx&xxxx;xxxx xxx 5&xxxx;×&xxxx;103 xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx)

Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

8.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx ELISA

Princip

Testy XXXXX xxx použít xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx testů XX, XXX nebo XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx citlivost. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxx před použitím xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x&xxxx;xxxxxxxx xxxxx konkurenci xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxx x&xxxx;xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx negativní x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xxxxxxxx jako vzorky xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky použijte xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx otestovány xxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx 103 xx 104 xxxxx xx 1&xxxx;xx biovaru 2&xxxx;X. solanacearum (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx xxxxxxx 2 A a B). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx, xxx byly xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx materiály, které xx používají pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx v dodatku 3&xxxx;xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx protokoly XXXXX.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx test XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1)	Xxxxxxxx 100–200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4&xxxx;xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2)	Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4) x&xxxx;xxxxxxxxxxx.

3)	Xxxxxxxxx 100&xxxx;µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx při teplotě 37&xxxx;°X xxxx přes xxx xxx teplotě 4&xxxx;°X.

4)	Xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx. Xxxxxxx xxxxx třikrát xxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4) a nechte xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx.

5)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). X&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je xxxx).

6)	Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 1&xxxx;xxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxxxx roztok protilátek x&xxxx;xxxxx a vymyjte je xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8)	Připravte xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx inkubovat 1&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

9)	Vylijte xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx a vymyjte xxxx xxxxxxx (bod 4).

10)	Přidejte 100&xxxx;µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do každé xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 405&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx imunoglobulinu x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX&xxxx;9.6 (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 200&xxxx;µx do xxxxx xxxxx. Nechte xxxxxxxxx xxx teplotě 37&xxxx;°X&xxxx;4&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2)	Xxxxx třikrát xxxxx xxxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

3)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (xxxxxxx 4).

4)	Připravte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;XXX (dodatek 4) x&xxxx;xxxxxxx 0,5&xxxx;% xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX) x&xxxx;xxxxxxxx 190&xxxx;µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxx stát 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

5)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (xxxxxxx 4).

6)	Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v PBS. Přidejte 190&xxxx;µx do xxxxx xxxxx a nechte inkubovat 2&xxxx;xxxxxx xxx xxxxxxx 37&xxxx;°X.

7)	Xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (xxxxxxx 4).

8)	Xxxxxxxxx roztok 1&xxxx;xx p-NPP/ml alkalické xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx 4). Přidejte 200&xxxx;µx xx každé xxxxx. Xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x&xxxx;xxxxx probíhá při xxxxxxxxxx xxx 405 x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x&xxxx;xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx hodnot x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA v pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx x&xxxx;xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

9.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 103 xx 104 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xx přidaný xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx výsledkem (xxxxxxxx viz v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx při xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx použít xx extrakty, které xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx –68 xx –86&xxxx;°X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x&xxxx;Xxxxxxx (1988):

9.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx testovací laboratoře) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x&xxxx;xxxxxxx 8 nebo xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. až 3. xxxxx až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Příznaky x&xxxx;xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

Rozdělte 100&xxxx;µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx listy pomocí xxxxxxxxx s podkožní jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

9.2.2 Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx 5–10&xxxx;µx) xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxx xxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx 1&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx přibližně 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xxxxxxx x&xxxx;xxxxx kapky resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxxx xxx sterilní xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx stříkačky.

9.3 Stejnou xxxxxxxxx nainokulujte 5&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx 4) jako xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxx pozitivní a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, abyste xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

9.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25–30&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx zavlažováním, abyste xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Abyste xxxxxxxxx kontaminaci, xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistěte xxxxxxx xxxxxxx. Musejí-li xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx blízko xxxx, xxxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Při hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx věnujte xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx skleník nebo xxxxxxxxx prostor bez xxxxxxx škůdců, protože xx mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledejte xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxxx a/nebo krnění.

9.5 Z infikovaných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxx.&xxxx;XX.3) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (bod VI.B).

9.6 Jestliže xxxxx 3 týdnů nejsou xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx složeném xxxxxx xx segmentů stonků xxxxxxxx 1 cm z každé xxxxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, proveďte xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx&xxxx;4.1).

9.7&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s podezřením xx R. xxxxxxxxxxxx (xxx&xxxx;XX.X).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx xxxxx být x&xxxx;xxxxxx rostlin znovu xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx rostliny xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx u pozitivních kontrolních xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx infikovány xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXXXX XXXXX

Xxxxxxxxxxxxx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Test	Očekávaný výsledek
Produkce xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx	–
Xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx	+
Xxxx xxxxxxx/xxxxxxxxxx (O/F)	O+/F–
Katalázová xxxxxxxx	+
Xxxxxxxxx xxxx podle Xxxxxxx	+
Xxxxxxx xxxxxxxxx	+
Xxxxxxx citrátu	+
Růst xxx 40&xxxx;°X	–
Xxxx v 1 % NaCl	+
Růst x&xxxx;2&xxxx;% XxXx	–
Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita	–
Zkapalnění xxxxxxxx	–
Xxxxxxxxx škrobů	–
Hydrolýza xxxxxxxx	–
Xxxxxxxx xxxxxx	–

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF

2.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxx XX (xxxxxxx 4).

2.2 Připravte xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx antiséra (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XX xxxxxx (xxxxx&xxxx;XX.X.5).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XX je pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXXX

Xxxx.: Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx test.

3.1 Připravte xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;1X PBS (xxxxxxx 4).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx metodu ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. solanacearum.

3.3 Test XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX získaná x&xxxx;xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx XXX

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx water).

4.2 Ohřívejte 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx při 100 °C 4 minuty. Xxxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx teplotě –16 až –24&xxxx;°X xx xxxxxxx použití.

4.3 Použijte xxxxxxxxx postupy PCR x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx&xxxx;xx. (2002); Xxxxxxxx xx&xxxx;xx. (1999); Xxxxx xx&xxxx;xx. (1997), Xxxxxx et al. (1999).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x&xxxx;xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

5. Test XXXX

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx v UPW.

5.2 Použijte metodu XXXX (xxxxx&xxxx;XX.X.7) x&xxxx;xxxxxxx 2&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxxxxx 7).

5.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x&xxxx;xxxxxxx a pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28&xxxx;°X.

6.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže je xxxxxx podezřelé kultury xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin: 14:0&xxxx;3XX, 16:0&xxxx;2XX, 16:1&xxxx;2XX x&xxxx;18:1&xxxx;2XX x&xxxx;xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

7.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx kmenu použitím xxxxx z následujících metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxx&xxxx;3).

7.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx rozdělen xx xxxxxxx xx xxxxxxx schopnosti xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x&xxxx;Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;96 xxxxxxx (200&xxxx;µx xx 1&xxxx;xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

	Xxxxxx
	1	2	3	4	5
Xxxxxxx:
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
Xxxxxxx	–	+	+	–	+
X (+) Cellobiosa	–	+	+	–	+
Mannitol	–	–	+	+	+
Sorbitol	–	–	+	+	–
Dulcitol	–	–	+	+	–

Dodatečné xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

	Xxxxxx 2A (světově xxxxxxxx)	Xxxxxx 2X (Xxxxx a Kolumbie)	Biovar 2X (xxxxxxxx xxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxxxxx	–	+	+
Xxxxxxx xxxx-xxxxxxxxx	+	–	+
Xxxxxxx X&xxxx;xxxxxx	–	–	+
Xxxxxxxxxxxx aktivita (1)	nízká	nízká	vysoká

7.2 Genomická variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx několikerými xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

7.2.1 Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Cook xx&xxxx;xx., 1989).

7.2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x&xxxx;xxxxxxxx primerů XXX, XXX a ERIC (Xxxxx xx&xxxx;xx., 1995; Xxxxx et al., 1995).

7.2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx et al., 1998).

7.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; xxx xxxxxxx 6) xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1&xxxx;(xxxxxxx 3, 4&xxxx;x&xxxx;5) x&xxxx;xxxxxxx 2 (biovary 1, 2X a 2T) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno analýzou XXXX (Xxxx xx&xxxx;xx., 1989) x&xxxx;xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Taghavi et al., 1996).

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXXXXXXXXXX XXXX (XXXX XXXXXXXXXX)

Xxxx xxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. solanacearum xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1)	Xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx 106 xxxxx xx 1&xxxx;xx ze 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2)	Inokulujte 5&xxxx;xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx fázi 3&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx.&xxxx;XX.X.9).

Xxxxxx xxxxxxxxx xx 2&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 25–28&xxxx;°X a vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx půdy. U čistých xxxxxx by typické xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxx být xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum.

4)	Hledejte xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx izolaci z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2&xxxx;xx xxx xxxxxx inokulace. Rozmělněte x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (xxxxxxx 4). Xxxxxxxx izolaci xx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxxx pokud možno xx xxxxxxxxxx živné xxxx (xxxxxxx 2), x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx protokolů

Laboratoř (2)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x&xxxx;Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Protection des Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx des Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxx di Xxxxxxx x&xxxx;Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxx Xxxxx Periferica per x&xxxx;Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxx xx Xxxxxxçãx das Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxxx University xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxx xxxx xxx izolaci x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

a) živné xxxx pro xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Xxxxx)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx	20,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx)	5,0&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4.7X2X	0,25&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x
xX 7,2–7,4

Xxxxxxxxx složky x&xxxx;xxxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx hydrolyzát (Xxxxx)	1,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;x
Xxxxx-Xxxx (Difco)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx a sterilujte x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Ochlaďte na 50&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50&xxxx;xx na litr.

b) Validované selektivní xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx, 1994 xx znění Elphinstone xx&xxxx;xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco)	1,0 g
Bacto-Pepton (Xxxxx)	10,0&xxxx;x
Xxxxxxxx	5,0&xxxx;xx
Xxxxx-Xxxx (Difco) (xxx xxxx. 2)	15,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx teplotě 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxx na 50 °C x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok následujících xxxxxx, abyste xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Sigma)	5 xx/x
Xxxxxxxxx-X-xxxxxx (Xxxxx X1004)	600&xxxx;000 U (přibližně 100&xxxx;xx)/x
Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125)	1&xxxx;250 X&xxxx;(xxxxxxxxx 25 mg)/l
Chloramfenikol (Xxxxx X-3175)	5 mg/l
Penicilín-G (Xxxxx X-3032)	825 X&xxxx;(xxxxxxxxx 0,5&xxxx;xx)/x
2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	50 xx/x

Xxxx.:

1.	Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V takovém xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x&xxxx;1–2 xxx déle x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a rozptýlenější při xxxxxxx Xxxxx-Xxxx.

3.	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500&xxxx;X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx růstu Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx a skladujte xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4&xxxx;°X v temnu x&xxxx;xxxxxxxxxxx xx 1&xxxx;xxxxxx.

Xxxxx x&xxxx;xxxxxx xx měly xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace.

Zabraňte xxxxxxxxxx xxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx po 2&xxxx;xx 5&xxxx;xxxxx xxx xxxxxxx 28&xxxx;°X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxxx Bacto-Agar x&xxxx;2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

Xxxxxxxxx	10&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxx	5&xxxx;x
X2XXX4	0,5&xxxx;x
XxXX4	0,25&xxxx;x
XxXX3	0,25&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;x

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 xxxxx x&xxxx;xxxxxxxx na 50&xxxx;°X.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx buď x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) nebo během xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a lze xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx:

1.	Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (NCPPB), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2.	Sbírka xxxxxx xxxxx ochrany rostlin (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3.	Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (CFBP), Ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1 Referenční panel xxxxxxxxxxx bakteriálních kultur XXX X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxx xxxxxx	Xxxxxx
XXXXX 4153	6	XXXX 4582, Pr 3020, XXXX11	Xxxxx	2
XXXXX 4154	10	XXXX 4585, 550, XXXX21	Xxxxxxx	2
XXXXX 3857	12	CFBP 4587, Xx 1140, XXXX26	Xxxxxx	2
XXXXX 1584	23	CFBP 4598, XXXX49	Xxxx	2
XXXXX 2505	24	CFBP 4599, XXXX50	Xxxxxxx	2
XXXXX 4155	26	CFBP 4601, 502, XXXX55	Xxxxxx	2
XXXXX 4156&xxxx;(3)	71&xxxx;(3)	XX 2762, XXXX 3857	Nizozemsko	2
NCPPB 4157	66	XXXX 15.59	Xxxxxxx	2
XXXXX 4158	39	XXXX 4608, Xxxx 448, XXXX80	Xxxxxxxxxxx	2
XXXXX 4160	69	XXXX-1632-2	Xxxxxxxxx	2
XXXXX 4161	76	X3X	Xxxxxxx	2
XXXXX 325	41	XXXX 2047, KEL60-1, X842	XXX	1
XXXXX 3967	42	XXXX 4610, X285, XXXx7	Xxxxxxxxx	1
XXXXX 4028	43	CFBP 4611, X303/571, XXX310, XXX205	Xxxxxxxx	2
XXXXX 3985	44	XXXX 4612, X578, XXX312	Xxxx	2X
XXXXX 3989	45	XXXX 4613, R568, XXX226	Xxxxxxxx	2X
XXXXX 3996	46	XXXX 3928, X276/355, XXX72, XXX225	Xxxx	3
XXXXX 3997	47	XXXX 4614, X280/363, XXX49, XXX0131x	Xxxxxxxxx	3
XXXXX 4029	48	XXXX 4615, X297/349, XXX121, XXXx2861	Xxx Xxxxx	4
XXXXX 4005	49	XXXX 4616, X470	Xxxxxxxx	4
XXXXX 4011	50	CFBP 4617, X288, XXxxx2	Xxxx	5

Xxxx.: Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx zaručena xxxxx x&xxxx;xxxxxxx, že xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

Xxx XXXXX	XXX #	Xxxx xxxx	Xxxxxxxxxxxx
XXXXX 4162	51	CFBP 1954	Xxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4163	52	XXXX 1538	Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxx (4)
NCPPB 4164	–	XXXX 2227	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4165	–	XXXX 2459	Ralstonia xxxxxxxxx &xxxx;(5)
XXXXX 4166	58	CFBP 3567 XXX Xx1150	Xxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 4167	60	XXXX 4618 PD 2778	Xxxxxxxxx xx. &xxxx;(4)
XXXXX 1127	53	CFBP 3575	Xxxxxxxxxxxx andropogonis (4)
NCPPB 353	54	XXXX 3572	Burkholderia caryophylli &xxxx;(4)
XXXXX 945	55	XXXX 3569	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3708	56	XXXX 3574	Xxxxxxxxxxxx xxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3590	57	XXXX 3573	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx &xxxx;(4)
XXXXX 3726	59	CFBP 3568	Banana Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx &xxxx;(4) (5) &xxxx;(6)
XXXXX 4168	61	XXXX 4619 XXX X339	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4169	62	XXX 1695	Xxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4170	63	XXXX 4621 XXX X306	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx &xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4171	64	XXXX 4622 XXX 1693	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)
XXXXX 4172	65	XXX 1696a	Pseudomonas xx.&xxxx;(4)
XXXXX 4173	–	XX 2318	Xxxxxxxxxxxxxx xx.&xxxx;(5)
XXXXX 4174	81	XXXX 1844.06	Flavobacterium xx.&xxxx;(4) &xxxx;(5)

x)&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx je možné xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXXXX.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 103 až 104 x&xxxx;104 xx 106 xxxxx biovaru 2&xxxx;X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx serologických a PCR xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx standardy x&xxxx;xxxxxxx izolace a testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) s 106 xxxxxxx xx 1&xxxx;xx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pletiv PCR/IF x&xxxx;XXXX

Xxxxxxxxxx 48xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx rasy 3/xxxxxxx 2&xxxx;(xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx půdě x&xxxx;xxxxxxxxxxx x&xxxx;10 xX fosfátovém xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2&xxxx;× 108 xxx xx 1&xxxx;xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600&xxxx;xx.

Xxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx s bílou xxxxxxx, x&xxxx;xxxxx víte, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;10&xxxx;xx.

Xxxxxxxxx 10 sterilních 1,5&xxxx;xx mikrozkumavek s 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx 100 µl xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky. Xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xxxx použito jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 100&xxxx;µx xx sterilních 1,5&xxxx;xx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxx 9&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx –16 xx –24&xxxx;°X xx xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx xxxxx xxxxx XXX xxxxxxxx xxxxxxxx DNA z pozitivních x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxx xxxxx XX a FISH xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xx xx xxxx xxxxx XX, XXXX a PCR, xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx 106 x&xxxx;104 xxxxx/xx u pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 4

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xx jeden xxx.

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx xxxxx extrakce

1.1 Extrakční xxxx (50 mM xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx homogenizací xxxx třepáním.

Na2HPO4 (xxxxxxx)	4,26&xxxx;x
XX2XX4	2,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx složky, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (/x)
Xxxxxx Lubrol	protisrážlivý xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XX	Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx&xxxx;(7)	1,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx prostředek	1,0 g
Polyvinylpyrrolidone-40000 (XXX-40)	Xxxx xxxxxxxxxx XXX	50&xxxx;x

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx extraktů x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx konců xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx dobu 15 xxxxx.

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx xxx XX xxxx

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx IF (10 xX xxxxxx chloridu xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxx

Xx₂XXX₄.12X₂X	2,7&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,4&xxxx;x
XxXx	8,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, zkontrolujte xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

2.2 Pufr XX-Xxxxx

Xxxxx pufr se xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx 0,1&xxxx;% Xxxxx 20 xx pufru XX.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx tekutina/roztok xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X	3,2&xxxx;x
XxX₂XX₄.2X₂X	0,15&xxxx;x
Xxxxxxxx	50&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	100&xxxx;xx

Xxxxx xxxxxxx např Xxxxxxxxxxx® (xxxxxxxxxx Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx) xxxx xxxxxxxx xx xxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	6,36&xxxx;x
XxXXX₃	11,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00&xxxx;x

Xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxx pH x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx siřičitan xxxxx (0,2&xxxx;%).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10X XXX), xX 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XX₂XX₄	2,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	29,0&xxxx;x
XXx	2,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,0&xxxx;x

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;XXX-Xxxxx

10X XXX	100&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5 ml
Destilovaná xxxx	895&xxxx;xx

3.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr (xxxx xxx čerstvě připraven).

10X XXX	10,0&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44)	2,0&xxxx;x
10&xxxx;% Tween 20	0,5&xxxx;xx
Xxxxxx xxxxx	0,5&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	doplnit xx 100&xxxx;xx

3.5&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxx xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	97&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	800&xxxx;xx

Xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx HCl xxxxxxxx xX xx 9,8.

Doplňte xx 1 l destilovanou vodou.

Přidejte 0,2&xxxx;x&xxxx;XxXx2.

Xxxxxxxxx xxx 5&xxxx;xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) v 15 ml roztoku.

4. Pufry xxx účely xxxxx XXXX ELISA

4.1 Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃	1,59&xxxx;x
XxXXX₃	2,93&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1&xxxx;000&xxxx;xx

Xxxxxxxxx xxxxxx a zkontrolujte pH 9,6.

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;10X fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2– 7,4

XxXx	80,0&xxxx;x
XxX₂XX₄.2&xxxx;X₂X	4,0&xxxx;x
Xx₂XXX₄.12X₂X	27,0&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1 000 ml

4.3 PBS-Tween

10X XXX	50&xxxx;xx
10&xxxx;% Xxxxx 20	5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx voda	950 ml

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx	100&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxx xxxx	900&xxxx;xx

Xxxxxxxxx a nastavte xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

Stanovení koncentrace XX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1.	Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v 1 okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c × X/x

xxx	X	=	xxxxxx 1&xxxx;xxxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxx
x	x	=	xxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x = πx2/4X2X2	xxx	x	=	xxxxxxxxxx xxxx (xxxx se x&xxxx;xxxxxxx 8–24 x&xxxx;xxxxxxxxxx xx typu xxxxxxx)
		X	=	xxxxxxxxxx xxxxxx (1 xxxx 1,25)
		X	=	xxxxxxxx objektivu (100×, 40× xxx.)

Xxxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluorescenčních buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X&xxxx;× 1&xxxx;000/x × X

xxx	x	=	xxxxx resuspendované xxxxxx x&xxxx;xxxxxx okénku
a	F	=	faktor xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx XXX

Xxxx.: Xxxxxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 103 xx 104 xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1&xxxx;xx vzorkového xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx ukázat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX Xxxx xx&xxxx;xx. (1993)

1.1 Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx OLI-1	5′-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3′
Reverzní xxxxxx Y-2	5′-CCC XXX XXX GCC TCC XXX AGG XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum = 288 xx

1.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	17,65&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(8) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx2)
Xxxx dNTP (20xX)	0,25&xxxx;µx	0,2 xX
Xxxxxx XXX-1 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxxxxx X-2 (20 µX)	1,25&xxxx;µx	1µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(8)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx vzorku	2,0 µl
Celkové xxxxxxxx:	25&xxxx;µx

1.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx:	x)	2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)
35 xxxxx:	xx)	20 xxxxxx při 94&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	20 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	30 xxxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	10 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

1.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x&xxxx;Xxxxxx (2000)

2.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer Xx-1	5′-xxx xxx xxx xxx gcg xxx x&xxxx;-3′
Xxxxxxxx primer Xx-2	5′-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553&xxxx;xx.

2.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025&xxxx;µx
10X xxxx PCR (9)	2,5 µl	1X (1,5 xX MgCl₂)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 µM)	0,5 µl	0,2 µX
Xxxxxx Ps-2 (10 µX)	0,5&xxxx;µx	0,2 µM
Taq xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(9)	0,1&xxxx;µx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx
Xxxx.: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200 x&xxxx;xxxxxxxxxxx Gibco Taq Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x&xxxx;xxxx xxxxx být xxxxxx použity xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (denaturace templátové XXX)
35 cyklů:	ii)	30 sekund xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 68&xxxx;°X (hybridizace xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 xxxxxx při 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Pozn.: Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x&xxxx;xx).

2.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx X&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x&xxxx;96 xx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx&xxxx;xx., 2002)

3.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX GCA GAG XXX CAT TA-3′
Reverzní xxxxxx XX-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3′
Přímý xxxxxx XX-5-X	5′-XXX XXX AAG XXX TTG XXX XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X	5′-XXX XXX XXX ACC XXX XXX XXX XXX-3′

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů XX).

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,625&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(10) (15 xX XxXx2)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 mM MgCl₂)
BSA (xxxxxx X) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx XX-1-X (10µX)	2,0&xxxx;µx	0,8 µM
Primer XX-1-X (10µM)	2,0 µl	0,8 µX
Xxxxxx XX-5-X (10µM) (11)	0,15 µl	0,06 µX
Xxxxxx XX-6-X (10µX)&xxxx;(11)	0,15&xxxx;µx	0,06 µX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/µx)&xxxx;(10)	0,2&xxxx;µx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

3.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx xxx 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 xxxxxx:	x)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx syntéza)
	vi)	nechte xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx cyklu xx), xxx) a iv).

3.4 Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací z DNA X. solanacearum vytvářejí xxxxxxxx polymorfizsmus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Xxx X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65&xxxx;°X.

4.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX TA-3′
Reverzní xxxxxx Xx-1-X	5′-XXX AGT CAC XXX AGA XXX X-3′
Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R	5′-TTC XXX GCA XXX XXX CTC-3′

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

Reagencie	Množství x&xxxx;xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	12,925&xxxx;µx
10X xxxx XXX&xxxx;(12)	2,5&xxxx;µx	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx V) (10&xxxx;%)	0,25&xxxx;µx	0,1&xxxx;%
Xxxx x-XXX (20xX)	0,125&xxxx;µx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	2&xxxx;µx	0,8 µX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µM)	2 µl	0,8 µM
Taq xxxxxxxxxx (5U/µl) (12)	0,2 µl	1 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx Biovar 3/4/5

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	14,925&xxxx;µx
10X xxxxx PCR (13)	2,5 µl	1X (1,5 xX XxXx₂)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 µl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxxxxx Xx-3-X (10 µX)	1&xxxx;µx	0,4 µX
Xxx polymeráza (5X/µx)&xxxx;(13)	0,2&xxxx;µx	1 U
Množství xxxxxx	5,0&xxxx;µx
Xxxxxxx xxxxxxxx:	25,0&xxxx;µx

4.3&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx&xxxx;xxxxxxx 1/2- x&xxxx;xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus:	i)	5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
35 xxxxx:	xx)	30 xxxxxx při 95&xxxx;°X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)
	xxx)	30 xxxxxx xxx 58&xxxx;°X (xxxxxxxxxxx primerů x&xxxx;xxxxxxxxxxx XXX)
	xx)	45 sekund xxx 72&xxxx;°X (xxxxxxx xxxxx)
1 cyklus:	v)	5 xxxxx xxx 72&xxxx;°X (konečná xxxxxxx)
	xx)	xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4&xxxx;°X.

Xxxx.: Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x&xxxx;xx).

4.4&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx Bsm X&xxxx;xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65&xxxx;°X. Produkty XXX vzniklé amplifikací x&xxxx;XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x&xxxx;Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř	5 g
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	50&xxxx;xx

5.2&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86&xxxx;%)	3,5&xxxx;xx
Xxxxxxxxxxxx xxxx (5.1)	300 µl
Destilovaná xxxx (xxxxxxxxxxxxx)	6,2&xxxx;xx

6.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxx 10X Xxxx -Acetát -EDTA (XXX), xX 8,0

Xxxx	48,40&xxxx;x
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx	11,42&xxxx;xx
XXXX (xxxxxxxx xxxx)	3,72&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Před xxxxxxxx xxxxx na 1X.

Xxxxxx xxxxxxxx na xxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validované xxxxxxxxx xxx test XXXX

1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx XXX-1-XX3&xxxx;5′-xxx agg xxx caa xxx xxx xxx-3′

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX&xxxx;5′-xxx gcc xxx xxx xxx xxx-3′

2.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXXXX XX PARAFORMALDEHYD, KTERÝ XX XXXXXXXX. POUŽIJTE XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X&xxxx;XXXXXXXXX.]

x)	Xxxxxxxx 9&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxx (XXX) xx&xxxx;xxxxxx 60&xxxx;°X x&xxxx;xxxxxxxx 0,4&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx xxxxxxxxx po xxxxxxx 5&xxxx;xxxxx 1X XxXX a míchání xx xxxxxxxxxx míchačce.

ii)	Upravte xX xx 7,0 xxxxxxxx 1&xxxx;xx 0,1 X&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxx (PB; xX 7,0) x&xxxx;5&xxxx;xxxxx 1X XXx. Xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a případně xxxxxxx XXx xxxx XxXX. [UPOZORNĚNÍ: V ROZTOKU X&xxxx;XXXXXXXXXX-XXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXX XX.]

xxx)	Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22&xxxx;µx x&xxxx;xxxxxxxxx chráněný před xxxxxxx při teplotě 4&xxxx;°X do xxxxxxx xxxxxxx.

3.&xxxx;&xxxx;&xxxx;3X Hybmix

NaCl	2,7 X
Xxx-XXx	60 xX (pH 7,4)
XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxxx)	15 xX

Xxxxxx na 1X, xxxxx potřeby.

4. Hybridizační roztok

1X Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxx (SDS)	0,01 %
Formamid	30 %,
Sonda XXX 338	5 xx/μx
Xxxxx XXX-1 nebo OLI-2	5 xx/μx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx 1. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx dvakrát) xx xxxxxxxx 90 μx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX JE VELMI XXXXXXXX, X&xxxx;XXXXX POUŽIJTE XXXXXXXX A UČIŇTE XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1.&xxxx;&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx sklíček:	1	4	6	8	10
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	23,1	92,4	138,6	184,8	231,0
3x xxxxxx	30,0	120,0	180,0	240,0	300,0
1&xxxx;% SDS	0,9	3,6	5,4	7,2	9,0
Formamid	27,0	108,0	162,0	216,0	270,0
Sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxx XXX-1 nebo XXX-2 (100&xxxx;xx/μx)	4,5	18,0	27,0	36,0	45,0
Xxxxxxx xxxxxxxx (μx)	90,0	360,0	540,0	720,0	900,0
Xxxx.: Xxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxxxxxx oligosondami x&xxxx;xxxxx při xxxxxxx –20&xxxx;°X. Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.&xxxx;&xxxx;&xxxx;0,1X xxxxxxxxx pufr, pH 7,0

Xx2XXX4	8,52&xxxx;x
XX2XX4	5,44&xxxx;x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Rozpusťte složky, xxxxxxxxxxxx xX x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121&xxxx;°X xx xxxx 15&xxxx;xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a rajčete

Zasejte xxxxxx rajčete (Lycopersicon xxxxxxxxxx) nebo lilku (Xxxxxxx xxxxxxxxx) do pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (10 xx 14 xxx) xx pasterizovaného pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a rajčete xx měly xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxx xxx	14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx nebo xxxxx
Xxxxxxx	xxxxx: 21 xx 24 °C noční: 14 až 18&xxxx;°X
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx	‚Xxxxxxxxxx‘
Xxxxxx xxxxxx xxxxx	‚Xxxxx Xxxxxx‘
Xxxxxxxxxx:	xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

LITERATURA

1.	Amann, X.X., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx xxxxx cells for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172: 762-770.

2.	Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx al. Xxxxxxxx Journal of xxx European Communities X235, 1-39.

3.	Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx the identification xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105; 373-380.

Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Cambra, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Uses a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5.	Xxxx, D., Barlow, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6.	Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx potato xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7.	Englebrecht, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8.	Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9.	Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx De Lindo, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10.	Ito, S., X. Ushijima, X. Xxxxx, X. Tanaka, X.&xxxx;Xxxxxx-Xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 146; 379-384.

11.	Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and some xxxx on xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Bulletin 18, 343-351.

12.	Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13.	Xxxxxx, A. 1954. Xxx relationship xx pathogenicity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx on x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14.	Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15.	Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16.	Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, B., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. In: X.X. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17.	Xxxxx, X.X., Fulbright, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx PCR. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18.	Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19.

Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X.&xxxx;Xxxxxxxxx, X.&xxxx;Xxxxx, A.C. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Timmis. 1997. X xxxxx xxxxxx for development xx species and xxxxxx-xxxxxxxx XXX probes xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20.	Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx R. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21.	Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X.&xxxx;2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer region xxxx internal positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22.	Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx antibodies to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23.	Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24.

Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx partial 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25.	Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Holderness, M. and Xxxxxxx, G.S. 1995. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 in Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26.	Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27.	Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, X.X., Xxxxx, M. 1996. Analysiss xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx blood xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28.

Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, X., Xxx Beckhoven, J.R.C., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X.&xxxx;1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Western Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Bacterial xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) pp. 44-49.

29.	Xxxxxx, S.A., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5’ xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30.	Xxxxxxxx, X.X., A.R. van Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Akkermans. 1998. Xxxxxxxxx of X.&xxxx;xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.

PŘÍLOHA III

Ve xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx, kdy xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x) xxxxxxxxx(x) xx uvedeném xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX xxxxxx(x) pozitivně a na xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx(x) uvedenou xxxxxxx xx ještě xxxx, xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, x&xxxx;xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx zbývající xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx připravený xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx(x) xxxx(x), xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx testování/Zadržení xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

X případě xxxxxxxxx xxxxxxx škodlivého xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do jednoho xxxxxx od xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 2:

—	materiál uvedený x&xxxx;xxxxxxxx&xxxx;1,

—	xxxxxx xxxxxxxxxx materiálu xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výluhem x&xxxx;xxxx xxxx rostlin, xxx je xx xxxxxx, x

—	xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxx xxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx x) x&xxxx;xxxxxxxxx případech zahrnují:

místa xxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxx rostlinám bramboru, x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxx, xxxxx pocházejí xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx rajčat, x&xxxx;xxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxx organismem,

—	na xxxxx xx xxxxxxx rostoucí xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xx které byla xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx,

—	xx xxxxx xx pěstují rostoucí xxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx produkce, xx kterých xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx organismem,

—	na xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx v sousedství xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, včetně xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx dochází ke xxxxxxx xxxxxxxx a vybavení xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx dodavatele,

—	na xxxxx xx k zavlažování xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx z jakéhokoli zdroje, x&xxxx;xxxxxxx xx potvrdilo xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xx nichž xx k zavlažování nebo xxxxxxxx používá xxxxxxxxx xxxx ze xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx s místy produkce, xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx organismem xxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxx xxxx xxxx zaplavena xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xx)	xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx (xxxx) xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx místo (xxxxx) xxxxxxxx, u kterých xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;X

Xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xxx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xxx), xxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) prohlášeno xx xxxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx&xxxx;xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxx za zamořený xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx), včetně xxxxxxxx xxxx, xx kterých xx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx používají xxxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxxxx materiál xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx předchozí odrážky xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx rostlinný materiál xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. a) xxxx ii) xxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx podle xxxxx odrážky,

—	prostory, ve xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxx uvedených x&xxxx;xxxxxxxxx xxxx,

—

xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a všechny xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx obalového xxxxxxxxx, které xxxxx xxxxxx xx styku x&xxxx;xxxxxxxx materiálem xxxxxxxxx xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx nebo přišel xx xxxxx s předměty xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx dezinfekcí,

—

jako xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx x), x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx sesterským xxxx xxxxxxxxxxx klonovým xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx xx rostliny, xxxxx vyrostly xx xxxxxxxx osiva jako xxxxxxx rostlinný materiál, xxxxx xxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxx, xxxxxxx xxxx vyšetřeny na xxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx obměna xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx zamořených a klonálně xxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxx (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

—	xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x&xxxx;xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx, jež xxxx být zohledněny xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx) x&xxxx;xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) bodu xxx), xxxxxxxx:

x xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx iv)

—	blízkost x&xxxx;xxxxx xxxxxx produkce, xx xxxxx se pěstuje xxxxxxx rostlinný xxxxxxxx,

—	xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx partií xxxxxxxxx brambor,

—	místa xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx nebo postřikování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx (míst) xxxxxxxx, xxxxxxxxxx (označených) xx xxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxx&xxxx;xx),

xx)

x xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. a) xxxx iv), kde xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx ii):

—	místo (xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, na nichž xx uvedený xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx povrchové vody xxxxxxxxxx za zamořenou xxxx xxxxx(x) xx xxxxx povrchovou xxxxx xxxxx(x) xxx xxxxxxxxx(x),

—	xxxxx xxxxxxxxxx zavodňovací nádrž, xxxxx má spojitost x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx prohlášenou xx xxxxxxxxx,

—

xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, s přihlédnutím xx:

—	xxxxx xxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx,

—	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx, xx které xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxxxxxx:

—

xxxxx xxxx, co xx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxx laboratorním testováním xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX:

—

x brambor:

a)	jméno odrůdy xxxxxx;

x)	xxx (xxxxxxxx, xxxxxxx, xxx.) x&xxxx;xxxxxxxx kategorii xxxxxxx;

—	x xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxx,

—

xxxx xxxx xxxxxxx požadavky na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;4&xxxx;xxxx.&xxxx;3, xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx se xxxxxx potvrdil, pokud xx riziko xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinného xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx státu (x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx), ihned xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx státům) xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx&xxxx;xx.&xxxx;5 odst. 3, xxxx.:

x)	xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx;

x)	xxxxx x&xxxx;xxxxxx odesílatele x&xxxx;xxxxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat;

d)	velikost xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxx xxxxxx;

x)	xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx rostlinolékařského xxxx, xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx pěstitele xxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx oznámení x&xxxx;xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxx těchto informací xx neprodleně xxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx pododstavec xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;2, xxxx xxxxxxxxx toto:

po xxxxxxxxx xxxxx šetření x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx:

x)	xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

x)	xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx zamoření včetně xxxxxx uskutečněného xxxxxx xxxxxx;

x)	xxxxxxxxx o identifikovaném xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx počtu xxxx produkce x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxx a v případě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx;

x)	xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxx, xxxxxx počtu xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx označena xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxx v zóně;

f)	podrobnosti x&xxxx;xxxxxx xxxxxxx zdroje, xxxxxx xxxxx a umístění xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx označení/zákazu xxxxxxxxxxx;

x)	xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;13 xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx ii) xxxxxxxx 2000/29/XX x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx k přepravě, xxxxx xxxxxxx uvedeného x&xxxx;xxxxxxx&xxxx;X, xxxxx X, xxx. X.2.2 xxxxxxxx 2000/29/XX;

x)	xxxx xxxxxx informace, které xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (ohnisek), xxx xxxx xxxxxxxx požadované Xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XX

Xxxxxxxx uvedená x&xxxx;xx.&xxxx;6. xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxxxxx:

—	xxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx riziko xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx xx xxxxxx schválené skládce xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx úniku xxxxxxxxx xx životního xxxxxxxxx, xxxx. průsakem xx xxxxxxxxxx xxxx xxxx kontaktem x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xxxx

—	xxxxxxx, xxxx

—

xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx a okamžitým xxxxxxxxx do zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a se systémem xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxx xxxxxxxx, pokud bylo xxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx odůvodnění xx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx uvedenými možnostmi xxxx xxxxxxx z výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx neškodně xxxxxxxxx xxxxxx schválenými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX&xxxx;xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxx použití xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle čl. 6 odst. 2 pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx daného členského xxxxx (xxxxx), xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx okamžiku x&xxxx;xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx subjektu členského xxxxx, x&xxxx;xxxx xx xxxxxxxx xxxx balit xxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx uvedená v první x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx:

xxxxxxxxxx xxxxx:

—

xxxxx použity jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spotřebě, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xx místě x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx. X&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx lze xx stejném xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx,

xxxx

—	xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xx zpracovatelského xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a dezinfekce xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dopravních prostředků, nebo

—	budou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné riziko xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx úředním xxxxxxxxx,

xx)

xxxx xxxxxxxxx xxxxxx včetně xxxxxx x&xxxx;xxxxxxx tkáně:

—	budou xxxxxxx, xxxx

—	xxxxxxx jinými xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, a s podmínkou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx subjektem.

3.	Vhodné metody xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;3&xxxx;xxxxxxxx xxxxxx a případnou xxxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx zjistitelné xxxxxx šíření xxxxxx xxxxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx členských států.

4.	Soubor xxxxxxxx, xxxxxxxxx x&xxxx;xx.&xxxx;6&xxxx;xxxx.&xxxx;4, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx v zóně vymezené xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx) x&xxxx;xxxx. x) xxxx xxx), xxxxxxxx:

4.1

Xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx prohlášena za xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) xxxx ii):

na xxxx xxxx xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx produkcí plodin xxxxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx xx), tak:

během xxxxxxx xxxx pěstitelských xxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx zamořené:

—	budou xxxxxxx xxxxxxxx k odstranění xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a rajčat, x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx, x

—

xxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo bramboru,

—	rostliny x&xxxx;xxxxx xxxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—	xxxx hostitelské xxxxxxxx,

—	xxxxxxxx druhu Xxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně hrozí xxxxxx xxxxxxx organismu,

—	plodiny, x&xxxx;xxxxxxx prokazatelně xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx v předchozí odrážce, x&xxxx;xx xxxxxxxx, že xxxx xxxx shledáno xxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx hostitelských rostlin xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx během úředních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nejméně xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx

—	x xxxxxxx brambor xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx brambor,

—	v xxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx&xxxx;xxxxxxx&xxxx;XX,

—	x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a rajčat, xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedeném v předchozí xxxxxxx x&xxxx;xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxx, xxxxx xx mají xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx úřední xxxxxxx xxxxx čl. 2 odst. 1:

nebo

ii)

během pěti xxxxxxxxxxxxx let xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx:

—	xxxxx učiněna opatření, xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx a rajčete x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx organismu xxxxxx xxxxxxx z čeledi xxxxxxxxxxx, x

—

x xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zjištěného xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx s častým nízkým xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx porostů xxxx x&xxxx;xxxxxxxxx pěstováním xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx dvou xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx šíření xxxxxxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxx planě xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roky xxxx xxxxxxxxxx:

—	x xxxxxxx xxxxxxx xxxx povolena xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxxx hlízy, xxxxxxxx xxxxxxxx rajčete, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx II;

na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx produkce prohlášeného xx xxxxxxxx a s podmínkou, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxxxx rostlinami bramboru x&xxxx;xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx plevelů x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxxx:

—

x&xxxx;xxxxxxxxxxxx roce xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx;

—	xxx nebudou pěstovány xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxx xxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx

—	x případě xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx konzumních brambor,

—	v případě xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pěstovat rostliny xxxxxxx ze xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, xxxxx xxx produkci plodů,

—

ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx po xxxx xxxxxxxxxxxx zamoření,

—

v xxxxxxx bramboru budou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx sadbové brambory xxxx xxxxxxx brambory xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx hnědé hniloby x&xxxx;xxxxxxxxx pod úředním xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1 x&xxxx;xx xxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx,

—

x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx semen, xxxxx odpovídají požadavkům xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstované x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx vyprodukovaných z výše xxxxxxxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx která xxxx uvedena x&xxxx;xxxx&xxxx;4.1, x&xxxx;xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xx xxxxxx pěstitelském xxxx xx prohlášení místa xxxxxxxx xx xxxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx brambory xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx brambor buď xx produkci sadbových xxxxxxx xxxx konzumních xxxxxxx,

—	x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx odpovídají xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxx pěstované xxx xxxxxxx dohledem x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx rostlin, x&xxxx;xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx na produkci xxxxx,

—

x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx odstranění xxxxxxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx rostoucích xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx/xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx úřední prohlídky xxxxxxx x&xxxx;x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx úředně xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XX;

xxxxx po xxxxxxxxxx xxxxx produkce xx xxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx.&xxxx;x) bodu ii) x&xxxx;xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roce:

—	veškerá xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxxx a týkající xx xxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxxx metod, xxx xx uvedeno x&xxxx;xxxx 3,

—	xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a postřiku, xxxxxx zákazu xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx;

xx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx čl. 5 odst. 1 písm. x) xxxx ii), xxx xx možné xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx:

—

xxxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxx bramboru, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx osivo xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx, xxxxx nebyla xxx jednotku s chráněnou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx veškerého xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx, kompletní změny xxxxxxxxxxx média x&xxxx;xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx dané xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx vybavení, x&xxxx;xxxxx nebyl následně xxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat xx xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	xxx xxxxxxxx xxxxxxx, bude xxxxxxx xxxxxx certifikované xxxxx xxxxxxx nebo xxxx-xxxx nebo mikrorostlin xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxx,

—	x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxx z osiva, xxxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx 2000/29/XX xxxx, pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxx vypěstovaných xxx xxxxxx kontrolou,

—	budou xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxx programy zavlažování x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxxxx.

4.2

Xx xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx uvedená v bodu 4.1, xxxxxxx xxxxx:

x)	xxxx zajistit, xx xxxxx xx xxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat, xxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikována xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx je uvedeno x&xxxx;xxxx 3;

ihned x&xxxx;xxxxxxx xx tři pěstitelské xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx:

xx)

xxxxxxxx xxxx vymezená zóna xxxxxxxxx podle xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx xx):

—	xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx rajčata xxxx xx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx, xxxxx smluvně xxxxxxxxx stroje pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rajčat,

—

vyžadují, xxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxx xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx výlučně xxxxxxxxxxxxx sadba xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pod xxxxxx kontrolou x&xxxx;xxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxx v místech xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. x) xxxx&xxxx;xxx), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx oddělenou xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx bramborami xx xxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxx xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx mezi manipulací xx xxxxxxxxx a konzumními xxxxxxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx z osiva, xxxxx odpovídá xxxxxxxxxx xxxxxxxx 2000/29/XX, nebo, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx úřední xxxxxxxxx, u všech rostlin xxxxxxx x&xxxx;xxxxx xxxxxxx xxxx,

—	xxxxxxx xxxxxx průzkum xxxxx čl. 2 odst. 1;

bb)

jestliže xxxx xxxxxxxxx voda xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx.&xxxx;5&xxxx;xxxx.&xxxx;1&xxxx;xxxx. c) xxxx xx) xxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx organismu podle xxxxxxx V bodu 2:

—	xxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx průzkum, včetně xxxxxx xxxxxx povrchové xxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx z čeledi lilkovitých x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx v příloze II xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x&xxxx;xxxx xxxxxxx,

—

xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx prohlášené xx xxxxxxxxx xxx zavlažování xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin organismu, xxx xx xx xxxxxx. Xxxxx zákaz xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z řečeného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a prohlášení (x xxxxxxxx) xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx není xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx, xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx, z úřední xxxx, xxx xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxx použity xxxxxx schválené xxxxxxxxxxx, xxxxx vyloučí xxxxxx xxxxxxxxx a jeho xxxxxx,

—	xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx odpadu x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx manipuluje x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem;

c)	případně xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxx.

XXXXXXX&xxxx;XXX

Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přílohy XX xxxxxxxx&xxxx;1&xxxx;xxxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx jakékoli zjistitelné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx:

xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxxx xxxxxx a rajčat) a jiný xxxxx odpad xxxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx (xxxxxx xxxx, xxxxxx x&xxxx;xxxxxx xxxxxxxx) se odstraní xxxxx:

—

xxxxx uložením xx xxxxxx xxxxxxxxx skládce xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxxxx xxxx. prosáknutím xx zemědělské půdy xxxx xxxxxxxxx x&xxxx;xxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxx být používány xxx zavlažování zemědělské xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xx skládku xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx nehrozilo xxxxx xxxxxx ztráty xxxxxx,

xxxx

—	xxxxxxxx, xxxx

—	xxxxxx xxxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx organismu; xxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx Xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx,

xx)

xxxxxx xxxxx: xxxx likvidací xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx odstranění xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx částice xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx pododstavce i).

Následně xxxx xxx tekutý xxxxx xxxxx:

—	xxxxxxxx xxxxxxxxx na 60&xxxx;°X xxxxxx objemu xx xxxx xxxxxxx 30 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx

—

xxxxxxxxx xxxxx úředně xxxxxxxxx a kontrolovaným způsobem, xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xx by xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx zemědělskou půdou xxxx vodními xxxxxx, xxxxx by xxxxx xxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx způsobu xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x&xxxx;Xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx v této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a zpracováním xxxxxxxxxx xxxxxx.

“

(1)&xxxx;&xxxx;Xxx Lelliott x&xxxx;Xxxxx (1987).

(2) Kontakty: xxx xxxxxxxxxxx stránka .

(3) Použijte xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxx 2&xxxx;(xxx 3).

(4)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kmen x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX x/xxxx ELISA) x&xxxx;xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(5)&xxxx;&xxxx;Xxxx, xx kterého xxx x&xxxx;xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR xx podobnou velikost, xxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx OLI-1 x&xxxx;X-2 (xxx xxxxxxx&xxxx;6).

(6)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxx x&xxxx;xxxxxx v Indonésii.

(7) Pro účely xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

(8)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx polymerázy Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) a Gibco XXX.

(9)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Elmer (AmpliTaq) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Xxxx.: Původně xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 s polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx.

Xxxxxx Elmer XxxxxXxx a pufr xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx&xxxx;xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(10)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Taq xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(11)&xxxx;&xxxx;Xxxxxxxxxxx xxxxxxx NS-5-F x&xxxx;XX-6-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx homogenizační xxxxxx x&xxxx;xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx&xxxx;XX.X.6.1.x)). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxx izolace XXX xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

(12)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

(13)&xxxx;&xxxx;Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x&xxxx;Xxxxx XXX.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Plné znění - 32006L0063

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu. Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.

Na co čekáte? Nečekejte už ani minutu.
Získejte přístup na tento text ještě dnes. Kontaktujte nás a my Vám obratem uděláme nabídku pro Vás přímo na míru.