Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x olachindoxu x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 70/373/EHS za xxx 20. července 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x přistoupení Xxxxxxxx, Xxxxxx x Švédska, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx kontroly, xxx xxxxxx splňují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx jejich xxxxxxx x složení, xx xxxxxxx za xxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a analýzy xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x tomu, že xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 o xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxx xxxx být xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. listopadu 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x krmivech [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx druhá xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [8], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/EHS [9], xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx jiné x xxx zjišťování xxxxxx tuku; xx xx xxxxxx uvedené xxxxxx upravit;
vzhledem x xxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx těchto látek;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx pro krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxx olachindoxu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx uvedených x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx částí B xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Uvědomí x nich neprodleně Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Způsob xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Úř. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Úř. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST A
Stanovení xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda slouží xx stanovení xxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx) x vázaných (xxxxxxx vázané x xxxxx) xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx použitelná xxx xxxx aminokyseliny: cyst(e)in, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, kyselinu glutamovou, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x nemůže xxxx x aminokyselin xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx X x X. Xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
2. Princip
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné xxxxxxxxxxxxx xx extrahují zředěnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx makromolekuly xx srážejí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx filtrací. Zfiltrovaný xxxxxx xx upraví xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx při 570 nm.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx aminokyselinách. Xxxx(x)xx a methionin xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Tyrosin xx xxxx stanovovat x hydrolyzátech xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx aminokyseliny xxxxxxx x xxxx 1 xxxxx být xxxxxxxxxx buď v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx kyseliny xxxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dvojsíranem xxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx mravenčí, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx xxxxx
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx
3.7 kyselina xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx sodný, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (thiodiglykol)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx nebo xxxx sloučenina xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 1; xxxxx sloučeniny xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Vysuší xx ve xxxxx xxx X2X5 nebo X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx do 1 litru.
3.18 hydroxid xxxxx, roztok c = 1 xxx/x:
40 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx kyseliny mravenčí x fenolu:
Smíchá se 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 x xxxx x xxxxx xx 4,73 x xxxxxx (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 x xxxxxx/x:
X 492 ml XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) a xxxxxx xx xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, c = 6 xxx XXx/x x přídavkem 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) se xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, přidá xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) x xxxxxx xxxxx na 1 litr (3.7 x 3.9 xx xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-xxxxxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxxx xx vodě x xxxxxx vodou na 1 xxxx.
3.23 oxidační xxxx (kyselina permravenčí – xxxxx):
X malé xxxxxxx xx xxxxxx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) s 4,5 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx v xxxxx 1 hodinu xxx 20–30 °C, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx ochladí x xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx zamezit kontaktu x kůží x xxxxxxxx ochranný xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x = 0,2 xxx Xx+/x, xX 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx vody se xxxxxxxx 19,61 g xxxxxxxxx sodného (3,8), 5 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) a 16,50 ml XXx (3.7). xX se xxxxxx na 2,20. Xxxxxx se xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx připravované xxxxx xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin. Xxxx xxxxxxx xx nutno xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xxx obdržet x xxxxxxxx připravené.
3.27.2 zásobní xxxxxxxxxx základní xxxxxx xxxxxxxx cysteové a xxxxxxxxxxxxxxxx, x = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx cysteové (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx (3.16.3) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx odměrné xxxxx x doplní xx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx (3.27.1) xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx vnitřního xxxxxxxxx, xxxx. norleucinu, x = 20 μmol/ml
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tlumivém xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxx na 250 xx x xxxxxx xx po značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μl xxxxxxxx xxxxxxxx x methioninsulfonu x x = 10 nmol/50 μx x ostatních aminokyselin
Ve 100 xx xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx sodného (3.10) x 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Přidají xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 ml zásobního xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx se používá. xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx převede xx 50 xx odměrné xxxxx, doplní xx xxxxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje xx xxx xxxxxxx xxx 5 °C nejdéle 3 xxxxxx.
Xxx také xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxx 5.3.3.1 a xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx roztok xx xxxxxxxxxx podle 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °C xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 nádoba x xxxxxxxxxxxxxxxx skla o xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx, Schott) xxx xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x tepelnou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX xxxx (xxx desetinná xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx filtr (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 xxxxxxxxxx aminokyselin xxxx zařízení XXXX x iontoměničovou xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x fotometrickým xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx oddělení xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek. Průtok xxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stálostí průtoku ± 0,5 % xx xxxx zahrnující xxxxxxxxxx kalibraci x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx možno xxxxxx v xxxxxxx, xx hydrolyzát vykazuje xxxxxxxxxxx sodíkových iontů x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x oxidačního xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určitých xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx hydrolyzát xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselinu x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx kyseliny xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx má xxxxxxxx xx xxxxx xxx teplotě nejvýše 40 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek se xxxxxx xxxxxx xxx, xxx prošel sítem x xxx 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx vlhkostí xx xxxx před mletím xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X xxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx petroletherem (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x krmivech x v xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx příslušné množství (1–5 x) upraveného xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 minut na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Po xxxxxxx sedimentu xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx přidá 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx tak, xxx se odstranila xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx o obsahu 100 xx, xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx velikosti a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Použije-li xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx standardu (3.27.3) xx xxxxxxx 100 xx odstředěného xxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx xxxx 5.4 – xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Stanovení celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,2 xx:
- xx xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx hydrolýzu (5.3.2.3) xxxx
- do xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx sodíku nebo
- xx nádoby x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) (pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx část xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 mg x xxxxx vlhkosti xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, xxxxx xx xxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxxx (3.23) x promíchá xx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx/xxxxxx xx uzavře i xx lžící xxxxxxxxxxxxx xxxxx x vloží xx x x xxxxx s xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x ponechá se xxx 16 xxxxx. Xx 16 hodinách xx vyjme x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx přidáním 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 se xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) xxx, aby neulpěl xxxxx vzorek xx xxxxxxx nádoby ani xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx hydrolýzy xx pokračuje podle 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků
Do xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 ml xxxx 250 ml (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) xx odváží 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) s přesností xx 0,2 xx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 mg. Xxxxxxx xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) x smíchá xx xx xxxxxxx. Xxxx xx postupuje xxx podle 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx hydrolýza
Ke směsi x xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 nebo 5.3.2.2) xx xxxxxxx 3 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxx do xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 5 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xx x xxxxxx lázni. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 uzavřená xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx xx sušárny (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx narůstání xxxxx (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) a xxxxxxx k výbuchu, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx. Nádoba se xxxxxxxxx. Xx uplynutí xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (4.3) 23 xxxxx. Xx skončení hydrolýzy xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx. Baňka xx nechá xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx postupu při xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx kádinky x obsahu 250 xx nebo xx xxxxx s kulatým xxxx o obsahu 250 ml.
Dále xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx toleranci x xxxxxx má xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx úpravě xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), vyžadující xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx aminokyselin xxxxxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do hydrolyzátu 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního základního xxxxxxx (3.27.3).
Do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 kapky 1-xxxxxxxx (3.15).
Na rotační xxxxxxx (4.7) xx xxxxx objem xx 5-10 xx za xxxxx při 40 °X. Pokud by xx xxxxx náhodou xxxxxx xxx 5 xx, hydrolyzát je xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx analýzu xxxxx.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx připravené xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 17 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.17), xx stálého xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pod 40 °X.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) s xxxxxxxxx xX se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx a xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24). Xxxxxxxx se xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °C.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx ionexové xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx provést xxxxx nebo automaticky. Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx nastřikovalo stejné xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xxxxxxxxx standardu. Xxxxxx xxxxx sodíku x xxxxxxxxxxxxxx by xxx xxx x xxxxxxxxxxxx roztocích x x roztocích vzorků xx možná xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx závisí hlavně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x analytického xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx se ředí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) tak, xxx xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx aminokyselin se xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx typu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ionexu. Zvolený xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x od xxxxxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx aminokyselin, xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxx k vrcholu xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx xx použitém xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxx sedla x xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx překrývajících xx xxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx přesahovat 2:10 (pokud xx xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, threonin x xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx). Xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxx 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx píků xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x x xx xx vzorku.
g xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = A × X × XX × X / B × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxx: D / X
X = xxxxxx xxxx hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx kalibračního standardního xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nebo x xxxxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx váha xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x μxxx/xx
X = xxxxxxxx navážky xxxxxx (x) (korigovaná xx původní xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
X = xxxxxxx objem xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x ml xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx a xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx stanoví xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx vypočítávají xx xxxx xxxxxx (C6H12N2O4S2, XX 240,30) x xxxxxxxx MV 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxx oxidovaného xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx XX methioninu: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx zjišťuje po xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx volných xxxxxxxxxxxx (5.2) xx vypočítá xxxxx tohoto vzorce:
F = 100 ml × (10 ml + 5 xx) / 10 xx × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Vyhodnocení xxxxxx
Xxxx metoda byla xxxxxxxxxx porovnáním xx xxxxxxxxxxx úrovni x xxxx 1990 xxx xxxxxxx čtyř různých xxxxx (xxxxx xxxx xxx prasata, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a standardních xxxxxxxx uvedeny v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx brojlery |
9,31 n = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 n = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Opakovatelnost
Opakovatelnost xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx dána xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní odchylka (Xx) opakovatelnosti x xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 n = 15 |
0,10 n = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 x = 16 |
2,06 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
2,7 n = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 n = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx zkoušek xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 n = 17 |
0,30 n = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 x = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 x = 17 |
7,0 n = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 n = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
3,8 n = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 n = 17 |
3,0 n = 15 |
|
Premix |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx referenčních xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx certifikovaných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, jsou-li x xxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx x rozdílům xxxx analyzátory aminokyselin xx se xxxx xxxxxxx koncentrace kalibračních xxxxxxx standardů aminokyselin (xxx 3.27.4 a 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx doporučené.
Lineární xxxxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, aby xx xxxxxxx ploch xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx xx x analýze xxxxxxxxxxx xxxxxxx zařízení pro xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Při xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx obsahujících xxxx xxx 1 % xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, doplňková xxxxxx) xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx postup.
ČÁST X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx řídí xxxxx xxxxxxxx Rady 136/66/EHS xx dne 22. xxxx 1996.
Podle xxxxx x xxxxxxx krmiva xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx postupů:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx tuky
Tato xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx rostlinného xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx okruhu xxxxxxx B.
1.2 Xxxxxx X – celkový xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxx všechny krmné xxxxx. Xxxxxxx xx xxx všechny materiály, x xxxxx xxxx xxxxx xxx úplně xxxxxxxxxx xxx předchozí xxxxxxxxx (xxxx. lepky, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx podrobeny xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxxxx X, xxx xxxxxxxx X, je xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx vysuší a xxxxx.
2.2 Xxxxxx X
Xxxxxx xx zahřívá x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Směs xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxx zpracuje xxxxx xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxx xxx 1 x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, xxxxxxx
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 mol XXx/x
3.4 xxxxxxxxx prostředky, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Extrakční xxxxxxxx, se xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), refluxní xxxxxxxx xx měla xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx xxxxxx. X xxxx bez xxxxxx by měla xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Extrakční xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx v petroletheru, x xxxxxxxxx x xxxxxxx x požadavky xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx horkovzdušná xxxxxxxx xx 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx extrakční patrony xx naváží 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx tuku.
Patrona xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) a xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Petroletherový xxxxxxx xx jímá xx suché, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx se oddestiluje, xxxxxx v baňce xx suší 1,5 xxxxxx v xxxxxxx (4.3). Xxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx, xxx se xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx tuku xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx váženími xxxx být menší xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 300 ml xx odváží 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx (xxx bod (8,2) a přidá xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky pemzy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx x xxxx xx xx xxxx xxxxx hodiny. Xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxx usazování částeček xxxxxx xx stěnách xxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx tuku. Xxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx dojitý filtrační xxxxx xxxxxxx tuku. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxx neutrální xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx petroletherem xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx sklo x xxxx se půldruhé xxxxxx x horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx tuku. Xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x třetího xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorku.
7. Opakovatelnost
Rozdíl xx výsledcích dvou xxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx přesáhnout:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx hodnotě, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Poznámky
8.1 U xxxxxxx x vysokým xxxxxxx olejů x xxxx, které xx xxxxxxx drtí nebo xxxxx xxxxxxxxxx odebrat xxxxxxxxxx homogenní vzorek, xx xxxxxxxxx následujícím xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx a xxxxxx xx x 10 xxxx x xxxx xxxxx bezvodého xxxxxx xxxxxxx (3.2). Extrahuje xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx 500 xx petroletherem (3.1) x promíchá xx. 50 xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx suché, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, obsahující xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, baňka xx xxxxxx a xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx se xxxxxxxx jako xxxxxxxx xx vzorku pomocí xxxxxxxxxxxxx vzorce:
(10 a + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx extrakci x xxxxxxx
8.2 U xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx obsah xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvýšit xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx domácí xxxxxxx, xxxxx mají xxxxxx obsah xxxx, xx xxxx před xxxxxxxxxx a extrakcí xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx použít horká xxxx xxxxx vody xxxxxxx.
8.5 X xxxxxxxxx xxxxx se musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx 1,5 hod. Xx však xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vysoušení, xxxxx může vést x xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxx použít x mikrovlnnou xxxxxx.
8.6 Xxx obsahu xxxx xxx 15 % xx doporučuje xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxxxx extrakci xxxxx postupu X. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx xx xxxxx krmiva a xxxxx xxxx v xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ OLACHINDOXU
(2-[N-2-(hydroxyethyl)karbamoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxx x methanolu. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx účinnou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx reverzní xxxx xx xxxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 methanol
3.2 xxxxxxxx, pro HPCL
3.3 xxxx, pro XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx látka: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, X 851
3.5.1 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxx, 250 μg/ml
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx xx 0,1 xx a xxxxx xxx 190 xx xxxx. Baňka xx xxxxxxx xx 20 xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Po xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx roztok xxxxxxx xx laboratorní xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x uschovává x xxxxxxxxxx. Tento xxxxxx xx musí xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx přenese xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 a 20,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.2). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx (3.4) po xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx xxxxxxxxxxx xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx lázeň
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 zařízení XXXX x proměnnou xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo x xxxxxxxxxx diodového xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, xxxxxxx X18, 10 μx, nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx filtry x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světle xxxx x xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx na výtěžnost xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, které odpovídá xxxx obsahu xx xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml x xxxxxx xx odpaří xx xxx 0,5 xx. Xxxxx xx 50 x modelového xxxxxx, řádně se xxxxxxxx x xxxxx xx 10 xxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxx několikrát promíchá. Xxxx xx přejde x extrakci (5.2).
Poznámka:
Pro xxxxx této xxxxxx xx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx zkoušený xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x přesností xx 0,01 x. Xxxxxxx xx do xxxxxxx baňky o xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x xxxxx se xxxxxx xx xxx xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Xxxxx xx 410 xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Xxxxx xx xxxxx x ultrazvukové xxxxx, xxxx xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx složeným xxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxx xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 20 xx, xxxxxx se vodou xx značku x xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx přefiltruje membránovým xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Poznámky). Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx HPLC
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx xxxx doporučené, xxxxx xxx použity xxxx podmínky, xx xxxxxxxxxxx, že dávají xxxxxxxxxx výsledky.
analytická kolona (4.3.1)
xxxxxxx fáze (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx xxxxxxxx: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxx, že se xxxxxxxxxx nastříkne xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) obsahující 2,5 μg/ml, až xx xxxxxxx konstantních xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Kalibrační xxxx
Xxx každý kalibrační xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx výšky (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) píků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x příslušných xxxxxxxxxxx x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Roztok vzorku
Provede xx xxxxxxx nástřiků xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx stejného xxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx roztoků x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx x roztoku vzorku xx zjistí koncentrace x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x v xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = x × 1 000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přídavkem (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx využitím detektoru x diodovým polem, xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μx/xx olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt xxxxxx (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx olachindoxu nalezeného x xxxxxxxx vzorku.
S xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x zředění xxxxxxxx xx mělo xxxxx xxx ke xxxxxxx xxxxx píku xxxxxxxxxxx. Xxxxx píku x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx x rozmezí ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx olachindoxu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xx vyhodnocují xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx vlnové xxxxx mezi 220 x 400 nm xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného vzorku x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 nm se xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx zkoušeného vzorku xxxxx od xxxxxxxxx x této částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx xxxxxxx píku.
Není-li xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx splněno, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx potvrzena.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
X xxxxx XX byl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 laboratoří xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiva xxx selata, včetně xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
vzorek 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
CVR (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx obsah (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
Sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
SR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx ověřena pro xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx extraktu (5.2) xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx kuličky.
[2] Pokud xx má xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxx pemzy xx xxxxxxxx xxxxxxx.