Xxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], a xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [3] již stanovily xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx na stav xxxxxxx provedených prací xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze X této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x stanovení x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx chlortetracyklinu, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, se použijí xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. dubna 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x krmivech, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx za tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická rotace xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx se xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx známým xxxxxxxx udává obsah xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N x za přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) ethanolu. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx na 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx způsobem, aby xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx X) (viz xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Přidat 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx vroucí xxxxx lázně x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx i xx vložení baňky xxxxxxx lázeň xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx vyjmuta x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách vyjmout xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X x II, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx x přidat xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x ponořit xx xx xxxxxx vodní xxxxx. Přesně po 15 minutách xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx chladnější xxxxx x xxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x II (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx a změřit xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]D20°
kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx druhy xxxxxx a směsi xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx rotace xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % a 1 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx více xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx jako uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, jako xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní lázně x teplotě 50 °X. Nechat vychladnout x pokračovat v xxxxxxx, jak je xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx alkalizuje xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx přebytek se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X p.a., xxxx rtuť nebo xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx ve 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 g xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx a xxx xx do xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 g xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx občasného xxxxxxxxxxxx, xxxxx hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx přidat 250 xx 350 ml xxxx, aby xx xxxxxxx xxxxx rozpustily; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx poznámky 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ponořit konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 cm (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx buď 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx titrovat xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) v xxxxxxxxxx xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x to xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx xxxx mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx musí provést xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx má být xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 xx a xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x pomalu xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 této xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 metody pro xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx roztoku (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx a xxx xx do xxxxxxx xxxxx o objemu 500 xx. Přidat 450 ml roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx je xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) x xxxxxx xx tam 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx rysku xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x přesností xx 1 mg x dát ho xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx pěna, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, dokud xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx xxxxxx xxxx x bezbarvý (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), udržovat var xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx stejného postupu, xxx xxx vzorku, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx stanovených podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se měří xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx metody uvolní xx minutu xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových skupin, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s kulatým xxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), připojit xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx do xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx lithného (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 minut, xxx xx odstranil přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 1 l, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx nazelenalé xxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx o xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud se xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x rozředit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1 x promíchat asi xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx konci. Nechat xxxxxxxx ve vodní xxxxx xxx 25 °X přesně xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx optické xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) a za xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 xx x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x poté xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx získaného podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 ml alikvotního xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou hustotu xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxxxxx hustot xxxxx xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X se xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření získána xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx tyrosinu/g za 10 min. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxx směsích, které xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx buď směsí xxxxxxxxxxxx a hexanu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, jehož xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové kyseliny xxxxxx x 50 xx vody. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo X: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o objemu 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx týden.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik měsíců x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x objemu 250 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml 50 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku je 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx stát xx xxxx jedné xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx B: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx A x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x relativně velkou xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx filtrátu; xxxx by xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 a 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza xx xx měla xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx je xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 ml rozpouštědla X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx filtr x xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do dvou xxxxxxxxx baněk (X x X) x xxxxxx 25 ml xxxxxx alikvotní části xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem X (3.2) na 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (D) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxx xxxxx pokus od xxxxxxx hustoty roztoku xxxxxx (= upravená xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodě 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x přidat 10 xx rozpouštědla X (3.3). Současně připravit xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o objemu 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x doplnit xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx filtrovat x zachytit xxxxxxxx x baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou odměrných xxxxx o xxxxxx 25 xx a 2 ml xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx o xxxxxx 25 xx. Doplnit xx 25 ml xxxxx xxxxx baňky x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx dvou xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx stát xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx stanovených podmínek xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx volného nebo xxxxxxx xxxxx gossypolu xx vzorku xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm · · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. X každé xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé baňky xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty proti xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.2.2 Celkový gossypol
Připravit 6 odměrných xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série na 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x odpovídajícími roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx pro obsah xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x hodnotami standardních xxxxx, x to xxx fluorescencí v XX xxxxxx (vysoký xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 objemově. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: řídit xx xxxxxx podle xxxx 3.1. x 3.2. metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxx na agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043B) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV lampa xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx asi 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx použití kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx roztoky (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 xxx, xx možné použít xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx nacházejí xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx na xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 a 5.3) x extraktu (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx nutné, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX lampou žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxxxx xxxxx xx kultivační xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx na jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx uvedeny zde. Xxxx hodnoty xx xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX CHLORTETRACYKLINU, XXXXXXXXXXXXXXX X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx nižší xxx 5 xxx xxxxx být určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx než 50 xxx se xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx vyšších xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx suspenzi xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx borité, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se xxxx x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny borité |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) ethanol.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx oxytetracyklinu-HCL na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μg tetracyklinu-HCL xx 1 ml x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní než 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx fosfátovým pufrem (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxx xxxxxx koncentraci X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx s cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku nebo xx jeho xxxxxxx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 až 10 x 20ti xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx xx xxxxx, xxxxxxx pH xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx použití 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xX xx 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx pufru, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1 postupným xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, S1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (U8, U4,U2, X1). Každá miska xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx asi 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx této rovnice:
(U1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 -U2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení obsahu XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x TC xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx kterého xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se xxxxx 1,5 až 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx při 37 °X. Skladovat kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Zároveň připravit xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 hodin před xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx subkulturou x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx bazálního xxxxx (4.1) a xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx sterilních xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx logaritmické fáze (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx koncentrace odpovídá 400 xx 500 μx CTC-HCL, OTC-HCL xxxx TC-HCL xx 1 xx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Oxytetracyklin x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x extraktu
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, aby xxxxxxx série koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx které xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se k xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx postupuje xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 0,6 μg XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx extrakt (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL nebo XX-XXX na 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx kyvetě xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (obecně 2h30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx při 590 xx, xxxxxxx fotometr xx xxxxxxx xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu obsahu xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx rozdílů x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x raději 5 xx xxxxxx.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační křivku xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx methanolovým xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a přidat 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může v xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách xx xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx stanovení [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, odebrat xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μg oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu nejméně 8 děr o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx asi xxx 28 až 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x interferenci, obě xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - S1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x poté xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx ze zkumavky xx šikmým xxxxxx (3.1) xx použití 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx s xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší možné, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx zóny. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX na7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Čistý methanol.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 až 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztok fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx premixy x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, a xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= U8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx extrakt xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) upravené xx xX 8 při 48 až 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx průměru xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °C.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx virginiamycin x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx filtraci xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx deskách x bazálním médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx virginiamycinu xxxxxxxx možné, xxx xxxxx zřetelné inhibiční xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg virginiamycinu xx 1 xx. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) za použití xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx směsi (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx vyšším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 xx roztoku (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx zředit směsí (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1, xxx xx uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx obsahovat čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové velikosti, xxx bylo možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx noc xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Pokud nedošlo x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x označení xxxxxxxxxxx xxx standardních roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx LUFA xxxxxxxx xxxxxxxxx růst xxx X. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx xxx použito xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného složení x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.