Xxxxx Směrnice Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], x xxxxxxx xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Stálého výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxxxx xxxxxxx, se provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx X této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx i o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s výjimkou xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx o vysoké xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné skrojky xxxx listy, bramborovou xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx je vzorek xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx vzorek extrahuje 40 % ethanolem. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x filtraci se xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) ethanolu. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx I: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x kulatými xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení celkové xxxxxxx xxxxxx (X xxxx S) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx x dát xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do vroucí xxxxx lázně x xx xxxx prvních xxx minut xxxxx x pravidelně xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx vyjmuta x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně po 15 minutách xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 ml xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx vodou, homogenizovat x xxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxx zcela xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova roztoku X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx ho xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx silně protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx ji xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x XX (3.4), doplnit xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx a změřit xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx uvedeno v xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx v krmných xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx ve 100 xx xxxx, xxxxx xx při tloušťce 200 xx optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx německé xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx rovnajícího xx nebo vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx než 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zničeny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx sušené xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx ji xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx přebytek xx xxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5H2O x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Kyselina sírová 0,5 N.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx ve 100 ml 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxx (viz poznámky 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 g vzorku x přesností na 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx rtuti nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve mírně x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx stěn xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx vychladnout.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 ml xxxx, xxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Přidat xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 N (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx indikátoru methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ponořit konec xxxxxxxx do kapaliny xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, xxxxxx do xxxxx rovněž buď 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx alkalická, pokračovat x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx lakmusový xxxxxxx xxxxx, xx xx destilát neutrální. Xxxxx destilace čas xx času xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx dojde ke xxxxxxxx xx žluta, xxxxx přidat přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu sodného 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx xxxxxx, dokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za účelem xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx slepý pokus (xxxxxxxxx x titrace), x xx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx analyzován. Za xxxxxx kontroly správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx p.a. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx dusíku; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Poznámky
7.1 Xx xxxxx použít některé xxxxxxxxx, které vyžadují xxxxxxx mezi mineralizací x destilací. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx má být xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 až 15 ml x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, přidat hydroxid xxxxx bezprostředně před xxxxxxxxxx baňky na xxxxxxx x pomalu xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky tak, xxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx x části 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx v xxxx 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu hrubých xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx aparatura xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX suspenze xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx vodní xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s přesností xx 1 xx x dát ho xx xxxxx destilační xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná pro xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a uvést xx xxxx. Pokud xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Snížit xxxxx x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx roztok čirý x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxxx postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny sírové xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx získané xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX PEPSINU
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx kyselinou trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se měří xxx 750 nm x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxxxx metody xxxxxx xx minutu takové xxxxxxxx hydroxyarylových skupin, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx má xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající optické xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx zbarveného stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx dvoulitrové xxxxx s xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 ml koncentrované xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx lithného (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx brómu. Xxxxx xx dobu 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx zůstat nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 mg dusíku [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx nerozpustí. Xxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) a doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 ml. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx xxxxxx xxx x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx konci. Nechat xxxxxxxx xx vodní xxxxx při 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (doba x teplota xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý filtr.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxxx, xxx ho do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 nm x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx kyseliny trichloroctové (3.4) předehřáté xx 25 °X, homogenizovat x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx tyčinkou x xxxxxx zkumavku xxxxxx 10 xxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx v bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 ml alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx referenčním xxxxxxxx xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx optickou hustotu xxx xx uvedeno x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 mg x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx vzorce:
Jednotky na xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx takové, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx volný gossypolu, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx ledové kyseliny xxxxxx a 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo B: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud optická xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x vyloučením xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx činidlo xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx před xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu ve xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx neměl xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 x. Xx xxxxxxx případů je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 ml xxxxxxxx; xxxx xx obsahovat 50 xx 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 až 200 μx gossypolu.
Analýza xx xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx teplotě xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx baňce xx xxxxxxxxxx hrdlem. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt nálevku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 ml xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx. Xxxx doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx roztok se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (D) x (X). Zahřívat 30 xxxxx nad vroucí xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s referenčním xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx pokus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx rozpouštědla B (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné odměrné xxxxx x objemu 50 ml. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxx baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 ml x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx jiných odměrných xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 minut xxx xxxxxx vodní lázní, xxx se vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x xxxx 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx se může xxxxxxx buď na xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx optická xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1cm = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1 250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx dvě xxxxx xx pěti xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Doplnit xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, aby se xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx po xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xx podmínek xxxxxxxxx v bodě 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty proti xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx baněk x objemu 50 xx. Do xxxxx xxxxx přidat xxxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé baňky xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx o 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx obsah xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx směsí x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml anilinu (3.4). Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx gossypolu xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx od 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický obsah: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX II
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Rf x hodnotami xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx fluorescencí x XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném B. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx I: směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx II xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-pikolinu: 20/10/3 objemově. Připravit xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Udržování rodičovských xxxxx, xxxxxxxx suspenze xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium chloridu x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx papírovou chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) fosfátovým xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx předpokládaný xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx možné xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx směsí (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx papíru xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml referenčních xxxxxxx (5.2 a 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx dobré oddělení xxxx mít papír xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx to nutné, xxxxxx xxxxxx vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX světlem. Když xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x vysušit papír.
7.2 Xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením pod XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx bioautografií
Nalít kultivační xxxxxx (3.10), které xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx na kultivační xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx doby. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx kultivačním médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx měnit xxxxx jakosti xxxxxx x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX CHLORTETRACYKLINU, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX AGARU
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx methanolu x kyseliny chlorovodíkové xxx stanovení XXX x TC.
Extrakty xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx CTC, OTC xxxx TC xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. cereus. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx spór
Smýt xxxxxxxx ze zkumavky xx šikmým xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi xx Xxxxxxx baňky obsahující 300 ml kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se xxxx x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx na pH 4,5 za xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx je vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μg chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), do xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx pufru (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx a xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx podle xxxx 5.1 připravit xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x tyto koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) x množstvích xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx fosfátovým pufrem (4.3) xxxxx odkazů x tabulce x xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo dekantovat xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný obsah x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx jeho výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx xx nutné, xxxxxxx pH xx 3 (x minerálních xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xX xx 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci U8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, S1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx o průměru 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 hodin xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (XX) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx rychlejší xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x TC xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx kultivačního média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx kterého xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxx x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 až 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx. Xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx subkulturou a xxxxxxxxx přes noc xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x asi 2 xx bazálního xxxxx (4.1) x xxxx přenést suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx kmene xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx v chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 až 500 μx CTC-HCL, XXX-XXX xxxx XX-XXX na 1 ml. Tento xxxxxx xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Přidat xxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních sérií x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat standardní xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do dvou xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx roztoku xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 ml (= 0,24 μx) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx zkumavek xxxx xxx provedeno v xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx ve vodní xxxxx, jejíž xxxxxxx xx mícháním xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2h30 xx 3x). Poté xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) do xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx nastaví xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx propustnosti extraktu. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x xx xxxxxxx x přítomnosti tetracyklinů. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx odstředění xx extrakt xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem odebraným x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes noc xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního média (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 dní xxx 28 až 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, ale ještě xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx stanovení [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) s xxxxx xxxxxx koncentraci oleandomycinu 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx roztoku (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx sestávajících se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s dokonale xxxxxx hliníkovým xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - S1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxx x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění se xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každý xxxxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx suspenze xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách s xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze xxxxxxx xX na7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 p.a. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Čistý xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx xxxxxxx sušárně (5 mm rtuti). Xxxxxxx 10 až 50 xx xx xxxxxxx baňky, rozpustit x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) s xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu na 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x homogenizovat 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx získat předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití směsi (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v rotačním xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) upravené na xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 děr x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx přes xxxx xxx 35 až 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x krmivech, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx bakterie xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx xx pomoci 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, její xxxxxxxxxxx xx jeden týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 obsahující 1 μx virginiamycinu na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) za xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x zkušebního xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Odstředit xxxx xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x odpařit xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx xxxx směsi (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx filtrovat, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a U1, xxx je xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, S2, S1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat čtyři xxxxxxxxxxx standardního roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx skleněných xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noc xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - S4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx aktivita x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné výsledky.
[3] Xxxx xxxxx slouží x xxxxxxxx inhibičních xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný v Xxxxx podle LUFA xxxxxxxx rychlejší růst xxx S. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající stejné xxxxxxxx.
[12] Může být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.