Xxxxx Směrnice Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx proteinů, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx působením xxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x aktivitu xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, se provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí nejpozději xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx obsahují řepné xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (např. xxxxx x moučka z xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx optická xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx rotace xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx obsah xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací za xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové kyseliny xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu prvních xxx minut silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 minutách vyjmout xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx S’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx baňku xxxx xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx protřepat. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x ponořit xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jak xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: pšeničný škrob
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx druhy xxxxxx x směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xx 100 xx vody, která xx při tloušťce 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx hmotnost xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx nebo vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud xxxxxx xxxxxxxx více než 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx mléčné xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, ponořit xx xx 30 minut xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx mokra. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx xxxxxxx XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx nebo xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Indikátor xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 ml 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Nasycený roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 g xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x několik granulí xxxxx (3.13), promíchat xxxxx baňky. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx stěn baňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x za stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 ml xxxx, xxx se xxxxxxx zcela rozpustily; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx indikátoru methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx aparatury x ponořit konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx sběrné baňce xx xxxxxxx nejméně 1 cm (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxx 10 ml roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx sodného (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Pokud je xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx do žluta, xxxxx přidat přesně xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce titrovat xxxxxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, dokud xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx slepý xxxxx (xxxxxxxxx x titrace), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx analyzován. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °C; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 g xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx xxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 až 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Pokud xxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx nálevku x xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Metoda je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx v souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx x xxxx 3 metody xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx inkubátor xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura podle Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx a dát xx xx xxxxxxx xxxxx o objemu 500 xx. Přidat 450 xx roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, dokud xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x bezbarvý (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxxxx pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx za xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx bez xxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Odečíst xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx xxx 10 % musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx rozpustných pepsinem x kyselinou chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stanovených podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx sodný x činidlo Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx měří xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx minutu takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx zbarveného stejným xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 g xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x udržovat xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Nechat xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 1 x, xxxxxxx xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Před použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx metody odpovídajícího 354 xx xxxxxx [1] x dát xx xxxxx x xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx, dokud se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x doplnit xx jednoho xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 pH xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx pohyby xxx x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx filtrátu, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx hydroxidu sodného (3.5) x za xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx na 25 °X, homogenizovat x poté xxxxxx 1,0 xx roztoku xxxxxxx získaného podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx tyčinkou a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx hustotu xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx z kalibrační xxxxxx xxxxxxxx tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Množství xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx touto xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 min. xxx 35,5 °X).
5. STANOVENÍ XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu a xxxxxxxx xxxxxxxx látky x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx směsích, které xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx extrahován za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx stanovení celkového xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-amino-1-propanolu, 8 xx ledové kyseliny xxxxxx x 50 xx vody. Xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost tohoto xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes xxxxxxx xxxxx x vyloučením xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx skladuje v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x zazátkované xxxxx x hnědého xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml dát 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit a xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x doplnit po xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x doplnit xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx před xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu xx xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx volného gossypolu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx krmné xxxxx xx může xxx 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 ml xxxxxxxx; xxxx by xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 g, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx měla xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx promíchávat v xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx xxxxx se xxxxxxxxxx hrdlem. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí pipety xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx pro měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x xxxxxx 25 xx. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (X) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx hodnoty vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx gossypolu xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné odměrné xxxxx x xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx baňky 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx lázní. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx obě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 až 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x zachytit xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx a 2 ml filtrátu xxxxxxx pokusu do xxxx xxxxxx odměrných xxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxxx roztoky.
Přidat 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx obsah gossypolu xx vzorku se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, stanovená xxx xx xxxxxxx x bodě 5.2
p = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx porovnáním s xxxxxxxxxxxxxx roztoky referenční xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx proti xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx baněk x xxxxxx 50 xx. Xx první xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku gossypolu X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx do dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série xx 25 ml xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx druhé série 2 ml xxxxxxx (3.4). Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah gossypolu xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X IDENTIFIKACE XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hodnot Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx x XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 g |
|
Destilovavná xxxx ad |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx II xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx podle xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx a tetracyklinu xxxxxx na xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich x Xxxxxxx papír (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx standardních xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x cílem získat xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx předpokládaný xxxxx antibiotika nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x použít xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx na 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx papír 0,01 xx referenčních xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx mít xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 cm (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit chromatografii x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx ozářením xxx XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), které xx předem xxxxxxxx X. cereus (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx v kultivačním xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx hodnoty Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx uvedeny zde. Xxxx xxxxxxx se xxxxx mírně měnit xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx menší než xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX AGARU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx je 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Princip
U xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, vody x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení CTC x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, OTC xxxx TC na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném X. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat B. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx a přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx šikmý agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 až 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co byla xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x homogenizovat. Tato xxxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx na xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které umožní xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx použitím a xxxxxxx na pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové asi 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (d: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: CTC, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx standardní xxxxxxxx xxxxxx S8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx. Zředění xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 připravit xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx rovné xxxx nižní xxx 50 ppm
Do zkušebního xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x tabulce s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 a X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx obsah x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy vyšší xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 až 10 g 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce musí xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx xx xxxxx, xxxxxxx xX na 3 (u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xX na 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové zeleně (xxxxxx se xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx U8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx se xxxxxxx x miskách za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U každého xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 -U2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx na xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx vzorek xxxxxxxx směsí acetonu, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxx XXX x XX směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se poté xxxxx a jejich xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx aureus X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx při 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 hodin před xxxxxxxx xxxxxxxxxx šikmý xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v asi 2 ml xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx vodní lázni xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 xx 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na základě xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Tento xxxxxx se skladuje x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xxxx 250 ml xxx 1 až 2 x zkušebního xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx rysku xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Oxytetracyklin x tetracyklin
Do odměrné xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx postupuje xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx a xx xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Zředit xxxxxxx (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Dát 1 xx tohoto xxxxxxx do dvou xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx zkumavky (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx provedeno v xxxxxx, ale xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, jejíž xxxxxxx xx mícháním xxxxxxx xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (obecně 2h30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx další růstu xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx při 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx nastaví na 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím antibiotika. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní hodnoty.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. xxxxxx, X 250 XX [8] (rezistentní vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. cereus xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x přidat 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx přes noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx při 28 xx 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) poté, xx byla mikroskopicky xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nejméně 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách se xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx různé použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního roztoku xxxxxxxxx zředěním x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Příprava misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kroužkem x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, v závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + U2 + U4 + X8 - S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit tylosin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx ošetří xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx stanoví měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) upraveného xx xX 7,0. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování rodičovského xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, pH 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs fosfátového xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx vakuové sušárně (5 mm rtuti). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx na 1 ml.
Poté připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, a xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx část xxxxx (4.7) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití směsi (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx extrakt xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx pro stanovení (4.1) upravené xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby bylo xxxxx udělat v xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 mm a x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx přes xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx proti průměru xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 - X2 - X4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do zkumavky xx šikmým agarem x xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 35 °C. Skladovat xxxxxxx v chladničce x přeočkovat xxxxxxx 14 dní na xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, poté smýt xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx asi 75 % světelnou propustnost xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x bazálním médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx zřetelné inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Kultivační xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) obsahující 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx postupným ředěním (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 ml xxxx více směsi (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít pro xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noc při 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 -X1 - X2 - S4 - S8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx médium podobného xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[3] Xxxx amido xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx kruhy).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné výsledky.
[11] Xxxx být použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.