Třetí Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice;
vzhledem k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Komise x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] a 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných působením xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx I xxxx směrnice.
Obecná ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x xxxxxxx X této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx jde x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, xxxxxxxx x virginiamycinu x xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, x výjimkou xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx metody xxxxxxx x příloze XX xxxx směrnice.
Článek 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA I
1. STANOVENÍ XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x krmivech, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx pulpu, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (xxxx. xxxxx x moučka z xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx druhém xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x filtraci xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený známým xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x ledové kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, d: 0,948 xxx 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení celkové xxxxxxx xxxxxx (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx dalších 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do vroucí xxxxx lázně x xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx xx zabránilo xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx vodní xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) a xxxx jednu minutu xxxxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx vodou, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (xxx je xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova roztoku X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx optickou rotaci xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, dát ho xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku stát xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxx doby xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx xx zkušební xxxxxx xxxxx xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), homogenizovat a xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx protřepat. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x ponořit xx xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx baňku x xxxxx lázně, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x změřit xxxxxxxx rotaci, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx ve 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx ve 100 xx vody, xxxxx xx při xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx mění podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 g xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí překročit 0,4 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx než 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx zředěné kyseliny xxxxxx.
7.2 X případě xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 minut xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x pokračovat v xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x odměřeném xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx zinek x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx ve 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x přesností xx 1 xx x xxx xx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx katalyzátoru (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého xxxx xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x několik granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, nejprve mírně x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí organických xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx se xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx xxxxxxx granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 N (3.6) x závislosti na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx destilační aparatury x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx kapaliny xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx nejméně 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, xxxxxx do xxxxx xxxxxx xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx se xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx asi 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx času xxxxxxxxx xxxxx sběrné xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx množství kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx normalitě xxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx žlutou.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x to bez xxxxxx, který má xxx analyzován. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez dusíku; 1 x acetanilidu xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx vyšší než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x destilací. X xxxxxxx případě xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx ztrát.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx má být xxxxxxxx nalita xx xxxxxx baňky, xxxxxx xx 10 až 15 ml x xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx bezprostředně před xxxxxxxxxx baňky xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx kapalinu po xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x roztokem xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX PEPSINEM X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů rozpustných xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx dusíku xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 j/mg pepsinu; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx přílohy x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx x xxxx 3 metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx aparatura podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx a dát xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 500 xx. Xxxxxx 450 xx roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Vložit xxxxx xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), zchladit xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x dát xx xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx xxxx. Pokud xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x silném xxxx, dokud xx xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx roztok xxxx x bezbarvý (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Slepý pokus
Provést xxxxx pokus za xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Odečíst xxxxx kyseliny sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx slepého xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx zkušebním xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx souvislost se xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx odtučněny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °C).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx rozpustných pepsinem x kyselinou chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx ošetří xx stanovených xxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx chlorovodíkové. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx se měří xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx odečte x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, které za xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx minutu takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % roztok (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Přidat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), připojit xxxxx xx zpětný xxxxxxx, xxxxx do varu x xxxxxxxx roztok x xxxxxx xxxx xx dobu 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 ml xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx o objemu 1 l, xxxxxxx xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Xxxxxx hemoglobinu: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx o xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx zcela nerozpustí. Xxxxxxx xxxxxx x xx protřepávání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Standardní xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) a doplnit xx xxxxxxx litru xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 ml. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, přesnost: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.1 x promíchat xxx xxxxxx xxxxxx xxx x xxxx skleněnou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx při 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (doba x xxxxxxx musí xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx slepý xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx trichloroctové (3.4) předehřáté na 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx tyčinkou x xxxxxx zkumavku přesně 10 xxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Kalibrační xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Doplnit xxxxx xxxxxxxxxxx roztokem xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μmolech, které xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech xxxxxxxx xx 1 mg x za jednu xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx takové, xxx xxxx xxx konečném xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx příbuzné látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky obsahují. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx obsahu je 20 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přeměněn xx gossypol-dianilin, jehož xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo B: xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx octové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx týden.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx přes zinkový xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok gossypolu X: xx odměrné xxxxx x objemu 250 xx xxx 27,9 mg octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 ml 50 xx xxxxxx roztoku x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx jedné xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem B (3.3). Koncentrace xxxxxxxxx x xxxxx roztoku xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx A x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx směsi xx může být 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx alikvotní část 10 xx xxxxxxxx; xxxx by obsahovat 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Pro xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, aby xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx gossypolu.
Analýza xx xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx baňky se xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx baněk (X x B) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 10 ml rozpouštědla X (3.2) xx xxxx jiných odměrných xxxxx (X x X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx rysku baňku (X) směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok se xxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx vzorku (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus xx xxxxxxx hustoty roztoku xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx rozpouštědla X (3.3). Současně xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát 10 až 15 xxxxx, xxxx filtrovat x zachytit xxxxxxxx x baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx baněk. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx uvedeno x bodě 5.2. X xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx celkového xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodě 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx vzorku se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1 250 / X1%1xx ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, xxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x bodě 5.2
p = zkušební vzorek x g
a = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx dvě xxxxx po xxxx xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. X každé xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxx, směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu x xxxxxxxxx.
Xxxxxx pipetou 2 xx xxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx baněk xxxxx xxxxx xx 25 ml xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx hustotu standardní xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x odpovídajícími roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx množství gossypolu (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx od 500 xx 750 xxx,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X IDENTIFIKACE XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v porovnání x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx jsou stanovena x xxxxxxxxxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x hodnotami xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX světle (vysoký xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 ml |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
Xxxxxxxxx rodičovských xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: řídit xx xxxxxx podle xxxx 3.1. a 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 UV lampa xxx stanovení xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx standardních xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx UV xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 5 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se nacházejí xxxxxxxxx v této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat supernatant x xxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx papíru. Poté xxxxxxx na xxxxx 0,01 ml referenčních xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx vlhkost; pokud xx to xxxxx, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) pro xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 hodina 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX lampou žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. cereus (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxxxx xxxxx na kultivační xxxxxx. Po xxxx xxxxxxxx kontaktu xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx na jinou xxxxxx x kultivačním xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotika xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx uvedeny xxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x jeho vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx menší xxx xxxxxxxx normálních sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 ppm xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx než 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení CTC x směsí xxxxxxxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx stanovení OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx antibiotická aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx XXX, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Difúze xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx použití 2 až 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 ml kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotiky největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 ml na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx modře |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx na pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx sírové xxx 2 X.
4.9 Směs xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardní pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě zásobního xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) v množstvích xxxxxxxxx v tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx (4.3) podle xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xxxxx překročit 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx obsahu antibiotika xx vzorku nebo xx xxxx výrobní xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 g 20xx xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX nižší xxx 3; pokud xx to nutné, xxxxxxx xX xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové zeleně (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx U8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx bazální médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x miskách za xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Každá miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx velikosti, xxx xxxx možné xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 hodin xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací proti xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx koncentracích xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx rychlejší xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx obsahu XXX x XX směsí xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se poté xxxxx a jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx antibiotikum. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx K 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx přeočkovat xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx noc xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx ve zkumavce xxxxx v xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx přenést xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx vodní xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 až 2h).
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx v chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX na 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x zkušebního xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx směsi (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rysku fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat xxx 100 xx xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx stanovení xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx interpolace xxxxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) do dvou xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit extrakt (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx tohoto xxxxxxx xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat na xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx vodní xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx při 590 xx, přičemž fotometr xx nastaví na 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx rozdílů x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx fotometrických propustností xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx propustnosti xxxxxxxx. Xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- difúzí xx agaru -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx použité xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx pH xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní látku (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μg oleandomycinu xx 1 ml (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat v xxxxxxxx médiu nejméně 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 mm. Vypočítat xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx budou paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, a xxxx xx extrahuje methanolem. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu na xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx pH 7,0. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce a xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx suspenze xxxxxxx xX na7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 mg xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx atd.).
Nechat xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tylosinu 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx obsahy nižší xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X a rozpustit xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, S2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (U8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx má xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx inhibičních zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - X1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx na xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit tuto xxxxxxxx x cílem xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 xx. Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, její xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro různé xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 48 až 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda ad 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg virginiamycinu xx 1 ml. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Výrobky x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx nebo xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 xx roztoku (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1, xxx je uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x čtyř koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu.
Za tímto xxxxxx vybrat misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx stejnoměrné vrstvy x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o průmětu 200 xx a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat misky xxxx xxx při 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 -X1 - X2 - S4 - X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx stejné výsledky.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx standardních roztoků (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx v Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Kmen xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a dávající xxxxxx výsledky.