Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], a zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx stav xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx nutné xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx škrobu, xxxxxxx proteinů, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného a xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x aktivitu xxxxxxx, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx X této xxxxxxxx.
Článek 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových xxxxxxxxxx, xxxxx x o xxxxxx chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze II xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v části 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. června 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající se xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. dubna 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit obsah xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx o vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x krmivech, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, řepnou pulpu, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) nebo xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx dvojité xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi dvěma xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx ve vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N x za xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x octanu zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx vodě 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 ml s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx chladičem.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx x xxxxxxxx oky x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx na 1 xx a xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x xxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx lázně a xx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx ve vodní xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) a xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxx, homogenizovat x filtrovat. Pokud xxxx filtrát zcela xxxx (což xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 100 xx a xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx této xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 ml xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně protřepat. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx ji xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx vyjmou Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, přelít xxxx obsah do xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx chladnější vodou x poté xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx x změřit xxxxxxxx xxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxx x třetím xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = celková xxxxxxx xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx škrob
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2 000 / [α]D20° · (2 X · 0,665) (X - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx xx 100 xx vody, xxxxx xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato hmotnost xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí překročit 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx škrobu rovnajícího xx nebo vyššího xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud vzorek xxxxxxxx více než 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany musí xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxxxx, jako xx xxxxxx mléčné xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx přidání 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx xxxxx xxxxx x teplotě 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx proteinů v xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx dusíku stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx alkalizuje xxxxxxxx hydroxidu sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a shromáždí xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx přebytek xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx p.a.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx CuSO4 · 5H2O x.x., xxxx rtuť nebo xxxx xxxxxxxx HgO x.x.
3.3 Granulovaný zinek x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 N.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx methylčerveně xx 100 ml 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxxx sodného, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná pemza, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx mineralizační xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého nebo xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, xxxxxxx mírně x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx dokud kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x za xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Přidat xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx poznámky 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xx sběrné xxxxx xx xxxxxxx nejméně 1 xx (viz xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx s kohoutem xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl xxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxxx, přidat xx xxxxx xxxxxx buď 10 xx roztoku xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku takovým xxxxxxxx, xxx xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx asi 150 xx kapaliny. Po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx destilát neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx čas xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce titrovat xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx sírové, xxxxx xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx dusík, se xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx. Za xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx bez dusíku; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx hrubých proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx vyšší xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. V xxxxxxx případě xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 až 15 xx x xxxxxxx vodou xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx kapalinu xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro všechna xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx filtruje x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 j/mg xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 j/l.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (např. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx x xxxx 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml roztoku xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx nižší xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) x xxxxxx xx tam 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx s přesností xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ve druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Pokud xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, dokud se xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, xxx xx uvedeno x xxxxxx pro stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním xxxxxxx. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx metodou nemají xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx in vivo.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů se xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx hydroxid sodný x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako množství xxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx minutu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx činidlem Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Na2WO4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny fosforečné (x: 1,71) x 100 xx koncentrované xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx varu x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 g xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, aby xx odstranil přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat. Xxxxx zůstat nazelenalé xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx hemoglobinu, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx odpovídajícího 354 xx dusíku [1] x dát xx baňky x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud xx xxxxxxxxxx zcela nerozpustí. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx na 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: rozpustit 181,2 xx tyrosinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 sekunda.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx roztoku x xxx ho xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx x zpět skleněnou xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx 25 °X přesně po xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pepsinu (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku spektrofotometrem xxx 750 xx x xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Xxxxx pokus
Pro xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřáté na 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x poté přidat 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx a filtrovat xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx odpovídá 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx hustot proti xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx z kalibrační xxxxxx množství xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μmol xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Poznámky
7.1 Množství xxxxxxx, které xx xxx rozpuštěno, xxxx xxx xxxxxx, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx na xx xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx tyrosinu/mg xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních jednotek/g (μxxxx tyrosinu/g xx 10 xxx. při 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx látky xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx extrahován xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx dimethylformamidem xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Rozpouštědlo X: do xxxxxxx xxxxx o objemu 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pokusu xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx zinkový xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx dát 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx 50 xx tohoto roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 mg/ml. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx dobu jedné xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx X a X xxxxxxxx před xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné množství xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx měření. Xxx xxxxxxxxx volného gossypolu x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx krmné xxxxx xx xxxx xxx 5 g. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx by xxxxxxxxx 50 xx 100 μx gossypolu. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 ml rozpouštědla X (3.2), zazátkovat xxxxx x xxxxx xxxxxx promíchávat x xxxxxx. Filtrovat přes xxxxx xxxxx a xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Pomocí xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx obsahujícího 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Případně doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Poté xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x xxxxxx 25 ml. Doplnit xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx volného xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx rozpouštědla B (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pokus a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx nad vroucí xxxxx xxxxx. Zchladit xx pokojovou teplotu x doplnit po xxxxx xxx baňky xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx filtrovat x xxxxxxxx filtráty x baňce xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou odměrných xxxxx x xxxxxx 25 ml a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu do xxxx jiných odměrných xxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky.
Přidat 2 xx anilinu (3.4) do dvou xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx volného gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx tato:
volný xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
p = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky první xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (v μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx první xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 ml těchto xxxxxxx xx dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xx 25 xx směsí x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xx xxxxxxxx uvedených v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μg).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 15 % relativní hodnoty xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx než 50 xxx,
- 75 ppm xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % dusíku).
PŘÍLOHA II
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x hodnotami xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX světle (vysoký xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx p.a. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx II směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Připravit xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, jejichž xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx rodičovských xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: řídit xx pokyny podle xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx xxxxx (2440B xxxx 2043B) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx xxxxx xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx standardních xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 xx
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx nebo ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μg xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Xxxxxxxxx x identifikace
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 ml referenčních xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx mít papír xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxx trochu xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) pro stanovení XX světlem. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dosáhne xxxxx 15 xx 20 cm (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), přerušit chromatografii x vysušit papír.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx než 1 μx/xx2, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX lampou žluté xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) a xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového antibiotika xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xx inkubaci odpaří xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx hodnoty se xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx jakosti papíru x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX AGARU
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, koncentrátech x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx než 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx formamidem. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x směsí methanolu x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx XXX x TC.
Extrakty xx xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Mikroorganismus: X. cereus ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx noc při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu v xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx baňky xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx xxxxxxxx je xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml na 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx kyseliny borité |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Sterilní fyziologický xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: připravit xxxxxxx xxxx použitím x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx asi 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je vyjádřena x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek (4.11) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Zředění xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx roztoku, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x tyto xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 ppm
Do zkušebního xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým pufrem (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx roztok. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, U2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx vzorek x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového pufru (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 až 10 g 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx musí xxxxxx pH xxxxx xxx 3; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxxx xX na 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Odebrat alikvotní xxxx extraktu x xxxxxxx pH na 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx pufru, pH 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně (xxxxxx xx xx xxxxx na xxxxxx). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci U8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx je uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, xx se xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx misky x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx nejméně 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat množství xxxxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 g/kg, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX se xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX x TC xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx při 37 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx přeočkovat šikmý xxxx subkulturou x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx kulturu xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 ml xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx růst kmene xxxxxxxxx logaritmické fáze (1x30 až 2h).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx sodný |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná voda xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (m/V) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní látky: XXX, XXX, TC, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 až 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Homogenizovat a xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x objemu 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit po xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx hodnot xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx mohou lišit xxxxxxxxx xx laboratoře. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 6 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Dát 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx pufrem (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní roztok (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx dvou xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba se xxxxx takovým způsobem, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx gradient xx xxxxxx xxx přesná xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx roztoku formaldehydu (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu obsahu xxxxxxxxxxx). Z xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx zkumavek xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx methanolovým xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx se projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx těchto xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) a xxxxxx 100 μx oxytetracyklinu xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx bakterie xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx xxx 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního média (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, poté smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zóny. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx udržování rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) upravené na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 g |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx zředěním s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x plochých xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx pomocí této xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, x poté xx extrahuje methanolem. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx pH 7,0. Xxxxxxxxx přes noc xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), upravit xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx suspenze xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx xxx 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx pepton |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x přípravy xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.4 Sterilní fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx xxxxxxx xxxxxxx (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, pH 7 (4.3) s cílem xxxxxx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx tylosinu na 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx a xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx alikvotní část xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx extrakt do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x takové xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx udělat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 mm x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočítá xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx odstředění xxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 dní na xxxxx agar.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx solného xxxxxxx (4.3). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx tuto xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx postupným xxxxxxx (1+) za použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x zkušebního vzorku, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx více směsi (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx než 50 xxx
Xxxxxxx 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx směsí (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1, xxx xx uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx asi 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxx noc xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být použito xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx výsledky.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.