Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x založení Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední kontroly xxxxx, xxxxx jde x xxxxx aflatoxinu X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x obilovin, xxxxxxxx mouka, bramborová xxxxx x škrob. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx se filtruje x xxxx alikvotní xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto roztoku xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo fluorimetricky xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx být xxxxxxxxx stanoveným postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není stanoveno xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx chloroformu (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x zkontrolovaný, xxx xx xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 a X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x objemu 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx silikagel. Xxxx xxxxxxxx aktivovat xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla na xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx o xxxxxx 10 ml, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X bod 1)
Rozmělnit xxxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 g xxxxxxxxxxx a homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml vody x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx skelné xxxx (3.9), xxxxxxx trubici xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxx přidat po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx klesnout až x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu nechat xxxxxxxx klesnou xx x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx postupu xxxx xx xx, xxx rychlost průtoku xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx eluát.
Odpařit xxxxx do sucha xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 ml xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Tenkovrstvá chromatografie
Na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx xx xxxxxx hrany x x xxxxxxxxx po 2 xx xxxx xxxxxx standardních roztoků x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx ve tmě xx xxxxxxx xxxxxxx x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit ve xxx x poté xxxxxx desku XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx 10 ml xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Pokud xx intenzita fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx délce 443 nm. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxx provádět xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx A x X (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud pásek xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx ve tmě x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) a xxxxxx tyto znaky:
a) Xxxxxxxx se modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve směru X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x migrační xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx A ve xxxxx I (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx C) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S · X · X / X · X
xxx:
X a X xxxx příslušné objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu B1 x mikrogramech na 1 kg xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku nebo xxx 348 nm x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx roztok xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx xx dobu xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx viditelná xxxxx xxxxx xxxxxx x x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx by neměla xxx znatelná xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx obsahy xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx vyšší xxx 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x krmivech, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx chromatografií xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx a acetonitrilu. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx se podrobí xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx známým množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, předem xxxxxxxxx chloroformem, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým proudem xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx musí xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx s nasycenou xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx UV xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x X. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx procházejí těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat skvrnu xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx průsečíku dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx asi 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx standardního xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn je xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx se xxxxxxxx x xxxx X xx první desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X takových xxxxxxxxx xxxx být analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. rozdíl mezi xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxx, xx odhaduje xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu B1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μg/kg;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
