Xxxxx směrnice Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy pozměněnou xxxxx x xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx podle xxxxx odběru vzorků x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze dne 20. prosince 1974 [8] již stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx sedmou xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Komise 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části týkající xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx v příloze xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxxxxx X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, xxxxx, babassu xxxxx a kukuřičné xxxxxx, obiloviny x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje chloroformem. Xxxxxxx xx filtruje x jeho alikvotní xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ve stanoveném xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX světlem xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx stanoveným postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx stanoveno xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, xxx xx získala stejná xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x nenasycenou atmosférou;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Skládané xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx a 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x objemu 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx připraví takto (xxxxxxx xxxxxxxx stačí xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, zazátkovat a xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx a poté xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná, aby xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx takovým způsobem, xxx xxxx prošel xxxxx x oky x xxxxxxxxx 1 xx (v souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x přefiltrovat xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx xxxxxx 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx odstranily vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, a xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx povrchu xxxxxx síranu sodného.
Smíchat 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx kolony. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx k hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx xxx 50 °X. Reziduum kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx doplnit objem xx 2 ml xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxx xx 2 xx tyto xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx ve xxx xx použití jednoho x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx jakostního standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x xxxx xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a xxxx xxxxxx desku XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V případě xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx přes standardní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx než xxxxx skvrna. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μl extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxxxx B1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 se xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx z modré xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxx provádět xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx přímky rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx k vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx X x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x nechat xxxxxxxx pět minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx body A x X (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx pásek xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, a xxxx vysušit desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozpouštědla (3.18.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x vymezující linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Objevení se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány v xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Poloha xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 od xxxx X xx xxxxx I (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx aflatoxinu X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx X ve xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrn xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X xx xx měly xxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx příslušné xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 x mikrolitrech (3.16) x extraktu, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný objem xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, x xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x testování xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) při 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx chloroformový xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 pro xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je asi 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx při 4 °X, xx xxxxx xx xxxx xxxx týdnů.
7.2 Testování xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Při XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx obsahy xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx citrusovou pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx ve směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx xxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známým množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 a3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx standardního xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x chromatografického tanku x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx x při xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx standardního roztoku X, C, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx směry. Průsečík X těchto xxxxxx xxxxxx místo, xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx v bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B a X. Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx je uvedeno x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx dvěma přilehlými xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x nanést xx xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- fluorescence xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx xxxxx desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení se xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx podle těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity fluorescence xxxxx extraktu x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x poté znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx měření
Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx skvrnách xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX SE XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku, xx odhaduje xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
