Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, že uvedená xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX xx dne 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že opatření xxxx xxxxxxxx jsou x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x obsah xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx přípravy xxxxxx x analýze, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Členské xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ AFLATOXINU X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x těchto xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx, obiloviny a xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx B (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x reziduum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu aflatoxinu X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran sodný, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a zkontrolovaný, xxx je xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok pro xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace jsou xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx tak, xxx xx získala stejná xxxxxxxxx fluorescence x xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), chromatografický tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Skládané xxxxxxxxx papíry, Schleicher x Schüll x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická trubice (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Rotační xxxxxxx odparka, x xxxxxx x xxxxxx 500 ml x xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 minutu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x poté xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx záření xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 na xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Odměrné xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Poznámky", část X bod 1)
Rozmělnit xxxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x oky x velikosti 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 xx xxx 50 g xxxxxxxxxxx a homogenizovaného xxxxxx. Přidat 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Zazátkovat, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx vaty (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx xx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx přidat 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) se 100 xx n-hexanu (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx k hornímu xxxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx. Přidat 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx xx xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx za xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) při xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx chloroformu (3.2) nebo směsi xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx po 2 xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného podle xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx rozpouštědla xx xxxx provést xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) na xxxxx a musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 xxx xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx a xxxx xxxxxx desku XX xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X případě xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx získaná překrytím xxxxxxxx xxxx standardní xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx intenzita fluorescence 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx jejich xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx identity aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 se xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x modré xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx podle schématu xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx xx desku xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: objem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx stříkat kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x šířce 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, přičemž zbytek xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 minut xx xxx, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nenasycenou atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx tanku a xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx tmě x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx se modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx pocházejí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx popsány v xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku extraktu xxxxxxxxxx v xxxx X. Poloha xxxxxx xxxxx vychází xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 od xxxx X ve xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x bodu X) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx A xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x Y xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = konečný xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx na 1 kg xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve skvrně xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx x měření;
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 xx 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx chloroformový xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxx 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce při 4 °C, xx xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx aflatoxinu X1 na 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodu 5.4. Xxx XX xxxxxx by měla xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx xxxxxx a x xxxxx původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx obsahy od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx a jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Eluát se xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx xxxxxx množstvím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Chloroform xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodu 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx koloně |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx musí mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] ve tmě xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x chromatografického tanku x nechat oschnout 15 minut xx xxx x xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.15.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx oschnout xx xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx xxxxxxx 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx UV světlem, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, C, X x X. Načrtnout xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx procházejí těmito xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx úhel x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat skvrnu xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx v xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxx B x X. Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x nanést xx xxx X (viz xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx, který xxx xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a k xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx chromatogram XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx x ze standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx aflatoxinu X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx extraktu s xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxx roztok 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx délce 365 xx x xxxxxx xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx extraktu xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity skvrny xxxxxxxx s intenzitou xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
C. POZNÁMKY XXXXXXXX XX METOD X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx přípravě podle xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 až 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být analytické xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx dvěma xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μg/kg xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
