Xxxxx směrnice Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k xxxx, xx uvedená xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze dne 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] a 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx části xxxxxxxx xx přípravy vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX AFLATOXINU X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx obsah aflatoxinu X1 x xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx přítomny xxxxxx xxxxx, xxxxx ztěžují xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x jeho alikvotní xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx x reziduum se xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 se stanoví x chromatogramu pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Identita xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo skelná xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) kyselina sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Silikagel X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x acetonitrilu (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/voda: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papíry, Schleicher x Xxxüxx č. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, s xxxxxx x xxxxxx 500 xx x xxxxxxx xxxx.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx o xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 mm, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx se vytvořila xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx lampy ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx takovým způsobem, xxx celý xxxxxx xxxxx s oky x velikosti 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx xxx 50 g xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou (4.2) x přefiltrovat xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx nebo xx skelné xxxx (3.9), naplnit xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, a xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx vzduchové xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx přidat 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx k hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx nechat xxxxxxxx klesnou xx x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx tohoto postupu xxxx xx xx, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx xx xxxxxx x xxx xxxxxx nevyschla. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) xxx teplotě xxxxx než 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 xx xx xxxxxxx chloroformu (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx od xxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxx xx 2 xx tyto xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k tomu 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Xxxxx xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a musí xx ověřit, zda xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 při xxxxxxxx zcela odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx a xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se interpoluje. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence skvrn xxxxxxxxxx X1 se xxxx fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 nm x xxxxxx délce 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx porovnáním xxxxxx xxxxxxxx fluorescence x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxx xxx XX zářením xxxxxx x xxxxx xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní postupy xx musí xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx na obrázku 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx dvěma xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: objem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx podle bodu 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx desku x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx stříkat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) na xxxxx x xxxxx 2,5 xx, který xxxxxxx body X x B (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, a xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx vzduchu při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx oschnout pět xxxxx xx xxx x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx tyto xxxxx:
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) a xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, přičemž obě xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, jaké xxxx popsány x xxxx b), pocházejících xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v bodu X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x migrační xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (xxxxxx xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x bodu X) x xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx od xxxx A ve xxxxx II (stejná xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx základě vizuálních xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a extraktu, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, v mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve skvrně xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx na xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx xxxxxxx spektrofotometru (4.11).
Xxxxxx optickou xxxxxxx (X) při 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxx 348 xx x případě roztoku xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná xxxxxx x cílem získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je asi 0,1 μx/xx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce při 4 °C, xx xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μl xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x místě původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxx aflatoxinu B1 x krmivech, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx objemu chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx buď xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xxxxxxxxxxxxx x krmiv xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx vata.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodu 7 xxxxxx A.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Postup
|
5.1 Příprava xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 metody X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx každé strany), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat oschnout 15 xxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě xx xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx desku x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx a při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (podle schématu xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x X. Xxxxxxxxx xxx pomyslné xxxxxx, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx xxxxxxxx skvrnu xxxxxxxxxx X1 pocházející x extraktu vzorku xxxxxxxxxx x bodu X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx A (viz xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného extraktu xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx podle xxxx 5.3, x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX světlem (4.9) x xxxxxx zda:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 z xxxxxxxx x xx standardního xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn je xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx se vyvinula x bodu X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx podle těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx skvrn X, X a X xxxxxxxxxxxx roztoku. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx s intenzitou xxxxx C, D x E xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Potvrzení xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz bod 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx bod 6 metody X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx A.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX XX XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 odtučnit xxxxxxxxxxxxx (x. v. 40 xx 60 °X).
X takových případech xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx stejného xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu B1 x 10 μx/xx xx xx 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx základě xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx než 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
