Xxxxx směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o přistoupení [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jakosti x složení krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/EHS xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX xx dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x obsah xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/EHS xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 1. března 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Úř. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 v těchto xxxxxxxx: xxxxxxxxxx olejná, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, bramborová xxxxx x škrob. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx ztěžují xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 se stanoví x chromatogramu xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs chloroformu (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x acetonitrilu (3.6). Xxxx koncentrace xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx tak, xxx xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx fluorescence x xxxx aflatoxinů.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx atmosférou;
3.18.5 Chloroform (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx x. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Rotační xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx o xxxxxx 500 ml a xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o objemu 500 ml, se xxxxxxxxxxx zátkami.
4.7 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 mm, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx množství xxxxx xxx pět xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky, xxxxxx 60 xx xxxx, zazátkovat x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi na xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx uschnout na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx při 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou vyhovující, xxxxx vykazují xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx X1 na xxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx lampy xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku (xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx prošel xxxxx s xxx x xxxxxxxxx 1 xx (x souladu x doporučením XXX X 565).
5.2 Extrakce
Do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x křemeliny (3.14), 25 ml xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou (4.2) a xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx zátku x xxxx xxxx xx xxxxxx vaty (3.9), xxxxxxx trubici xx do xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x síranu xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx povrch xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx opatrně xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 ml extraktu xxxxxxxxx podle xxxx (5.2) se 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Přidat 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx klesnou až x hornímu povrchu xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 ml xx xxxxxx a xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 ml xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11) v xxxxxxx vakuové odparce (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Reziduum xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a acetonitrilu (3.6).
5.4 Tenkovrstvá chromatografie
Na xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx od xxxxxx xxxxx a x odstupech po 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k tomu 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx tmě xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx rozpouštědel (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) na xxxxx a musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x xxxx xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x nesmí být xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx fluorescence 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 se xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx vlnové xxxxx 365 nm x emisní xxxxx 443 xx. Množství xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx kyselinou sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxx xxx UV xxxxxxx xxxxxx z xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx pracovní xxxxxxx xx musí xxxxxxxx xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Nanesení xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx A: objem xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 nm xxxxxxxxxx B1,
- x xxxxxx X x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx k vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o šířce 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx X x B (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx papírem. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx vzduchu při xxxxxxxx teplotě.
Poté se xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx ve xxxxx II, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Interpretace chromatogramu
Pozorovat xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx znaky:
a) Xxxxxxxx xx modré xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Poloha těchto xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx X xx xxxxx X (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x dále migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – hemiacetalu xx xxxx A xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
6.1 Xx základě vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx příslušné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x mikrolitrech (3.16) a xxxxxxxx, xxxxx xx stejnou xxxxxxxxx fluorescence;
S = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x ohledem na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x měření;
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx optickou hustotu (X) při 363 xx x případě xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x případě roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx koncentraci aflatoxinu X1 v xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx směsi xxxxxxx x acetonitrilu..
Ve xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x cílem získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx roztok skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx po xxxx xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by neměla xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx analytik, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx absolutní hodnoty xxx xxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx vyšší než 50 μg/kg.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx, které xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a residuum xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky xxxxxxxxx xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s nenasycenou xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx xx uvedeno x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx schématu xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- v xxxx X: 20 μx vyčištěného extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x bodu D: 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx standardního xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx inertního xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx na obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout xxxxx x chromatografického xxxxx x nechat oschnout 15 xxxxx ve xxx x při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 cm x chromatografickém xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Ozářit xxxxxxxxxxxx UV xxxxxxx, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx od xxxxx (4.9). Určit xxxxxx modrých xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, C, X x E. Načrtnout xxx pomyslné přímky, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx a svírají xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx přímek xxxxxx xxxxx, kde xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X (obrázek 1). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxx xxxx být x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx B x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x extraktu xxxxxx se xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx xx schématu xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, který byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodu 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x ověřit xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrývají,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx roztoku. V xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx změří fluorimetrem (4.12) xxx excitační xxxxxx xxxxx 365 xx a xxxxxx xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz bod 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 metody A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX SE METOD X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx se xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx vyjádřeny jako xxxxxxxx neodtučněného xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx xxxx laboratořemi xx xxxxxxxx xxxxxx, xx odhaduje xx:
± 50 % střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
