Xxxxxx směrnice Xxxxxx
xx xxx 31. července 1981,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(81/715/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx Aktem x xxxxxxxxxxx Řecka, a xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX [2], 71/393/XXX [3], 72/199/XXX [4], 73/46/XXX [5], 74/203/XXX [6], 75/84/XXX [7], 76/372/XXX [8] a 78/633/XXX [9], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 30. července 1981, xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx; xx xxxx xx xx xxxx provedených xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, že opatření xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední kontrolu xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xx provádějí xxxxxxxx popsanými x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1981. Xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 31. xxxxxxxx 1981.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxx
xxxxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[4] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[5] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[6] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[7] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[8] Xx. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[9] Úř. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXX X XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXX
1. ÚČEL X ROZSAH XXXXXXX
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx/xx (2 ppm). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xx stanovení xxxxxxx xxxxxx.
2. XXXXXXX
Xx směsi xxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx vzorek. Xxxxxxx xx xxxxxxxx. Jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx subtilis. Xxxxxx xx dokáže xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx inhibičních xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx za xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX XXXXXXXX XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Uchovávání xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.1) v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx x xxxx xxx xx při 30 °C inkubuje. Xxxxxxx xx uchovává x chladničce xxx xxx 4 °C x xxxxx měsíc xx znovu naočkuje.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [1]
Xxxxxxx kultura x xxxxxxxx médiu (3.1) xx xxxxx 2-3 xx xxxxxxxx vody. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), a xx xxxx 3 až 5 xxx se xxxxxxxx xxx 30 °X. Po kontrole xxxxxx xxxx pod xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx 15 xx ethanolu (4.2) x xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx xxxxxxxx xxxx xxx uchována minimálně 5 xxxxxx xxx 4 °C.
4. XXXXXXXXXX XXXXXX A XXXXXXX
4.1 Xxxxxxxxxx médium [2]
xxxxxx |
6,0 x |
xxxxxxx |
4,0 x |
xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3,0 x |
xxxxxx extrakt |
1,5 x |
xxxxxxx |
1,0 x |
xxxx |
15,0 g |
voda |
1000 xx |
xX 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
4.2 Xxxxxxx 20 %-xx (x/x): 200 xx xxxxxxxx xx zředí 800 xx xxxx.
4.3 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,18–1,19.
4.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, 2M.
4.5 Fosfátový xxxx 0,1 M:
dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx, XX2 XX4: 13,6 x
xxxx: 1000 xx
xX xxxxxxx xx 4,5.
4.6 Směs xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3): 65/32,5/2,5 (x/x/x)
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx
5. XXXXXXXXXX ROZTOKY
Přesně xxxxxxxx xxxxxxxx asi 10 mg xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7) xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) a xxxxx pufrem xxxxxx, xxx vznikl xxxxxxxx xxxxxx obsahující 100 μx xxxxxxxxxx v 1 xx. Xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxx x xxx 4 °C, xxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxx 7 dní.
5.1 Xxx xxxxxxxxxx premixy
Z tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rozřeďováním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X8 |
4 μx/xx |
X4 |
2 μx/xx |
X2 |
1 μx/xx |
X1 |
0,5 μx/xx. |
5.2 Xxx xxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fosfátovým xxxxxx xxxxxxxxxxx roztoky:
S8 |
2,0 μx/xx |
X4 |
1,0 μx/xx |
X2 |
0,5 μx/xx |
X1 |
0,25 μg/ml. |
6. XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX XXXXXXX
6.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx množství 10 xx vzorku, xxxxx xxxxxxxx 10-100 xx xxxxxxxxxx, se x xxxxxxx baňce x xxxxxx 100 xx mechanicky xxxxxxxx x 60 xx xxxxx (4.6) xx xxxx 15 minut. Xxxxxxx xX se xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (4.3) na xxxxxxx 2. Směsí (4.6) xx doplní objem x xxxxxxxxxxxx se. Xxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx přes xxxxxx filtrační xxxxx (xxxx. Xxxxxxx x. 1) x prvních 5 xx xxxxxxxx xx sleje. Odebere xx xxxxxxx xxxx x xX xx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (4.4) upraví xx xxxxxxx 4,5. Tento xxxxxx xx zředí xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5), xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx avoparcinu 4 μx/xx ( = U8).
Z tohoto xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 2 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 1 μx/xx) x X1 (xxxxxxxxx obsah: 0,5 μg/ml).
6.2 Xxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 50 x xx xxxxx xx 100 ml xxxxx (4.6) a xx dobu 30 xxxxx xx mechanicky xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx odstředěním (x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx). Poměrná xxxx xxxxxxx extraktu xx xxxxxxx (viz. xxxxxxxxxxx xxxxxxx) x xxxxxxx pH se xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (4.4) xxxxxx xx 4,5. Tento roztok xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4,5), xxx xx získal roztok X8 (xxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx).
X xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (1+1) xxxxxxxxxx pufrem (4.5) xxxxxxxx xxxxxxx X4 (xxxxxxxxx xxxxx: 1,0 μx/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 μx/xx) x U1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 μx/xx).
Xxxxxxxxx xxxxx avoparcinu (xx/xx) |
5 |
7,5 |
10 |
15 |
20 |
40 |
Xxxxxxxx vzorku x x (± 0,1 x) |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
50 |
Xxxxx xxxxx (4.6) x ml |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
Objem xxxxxxx xxxxxxxx (xx) |
20 |
15 |
20 |
15 |
20 |
10 |
Xxxxxxxx xxxxx (xx): X8 |
25 |
25 |
50 |
50 |
100 |
100 |
Xxxxxxxxx obsah X8 x μx/xx |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
xxxxx. 2 |
2 |
2 |
7. XXXXXX XXXXX
7.1 Xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) xxx xxxxxxx 50–60 °X. Xxxxxxxxxxx pokusy xx xxxxxxx xx zkušebním xxxxxx (4.1) xx xxxxxxx množství xxxxxxx, xxxxx vykáže xx xxxxx největší xxx xxxxx xxxxx inhibiční xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx avoparcinu.
7.2 Xxxxxxxx misek
Test se xxxxxx jako xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, S4, X2, X1) x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xx xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx bezpodmínečně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x extraktu. X xxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby bylo xxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx xxxxxxxxxxxx prostředí xxxxxxx osm otvorů x průměru 10-13 xx x xxxxxxxxxx xxxxxx minimálně 30 xx. Xxxx by xxx být prováděn xxxxxxxxx na xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xx skleněné xxxxx, xx kterou xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 20 xx x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 7.1, xxx xx vytvořila xxxxxx silná xxxxxxxxx 2 xx (60 xx na xxxxx x průměru 200 xx). Xxxx, co xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx, do xxxxxxx se pipetou xxxxxx přesné množství xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx otvor, xxxxx xxxxxxx xxxxxx). Xxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx minimálně xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx dobu 16 xx 18 xxxxx xxx 30 °X.
8. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx se změří x xxxxxxxxx na 0,1 xx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxx hodnoty zanesou xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxx nejpříhodnější xxxxxx, vypočítané xxxx. xxxx uvedeným xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx (XX) xx stanoví xxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorce:
a) XX = 7X8 + 4X4 + X2 – 2S1 / 10
Nejvhodnější bod xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (XX) xx xxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
XX = 7X8 + 4S4 + X2 – 2X1 / 10
Xxxxxx xxx xx stanoví xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, xxxxxxx xx xx xxxx uvedených xxxxxx xxxxxx U1, X2, X4 x X8 xxxxxxx X1, X2, S4 x X8.
Xxxxxxxxxx xxxxxxx XX x XX xx xxxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx obou xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx XX x XX x získání xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx extrakt.
Pokud xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxx xx hodnoty (XX-XX) a (XX-XX) xxxxxxxxxxx více než x 10 % xx střední hodnoty.
Pokud xxxxxx xxxxxx rovnoběžné, xx možné xxxxxxxx xxx X1 x X1 xxxx X8 x X8. Pak xx xxxxxxx SL, XX, XX a XX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx obdržely alternativní xxxxxxxxxxxx přímky:
a ) XX = 5X1 + 2S2 − X4 / 6 |
nebo |
5S2 + 2X4 − X8 / 6 |
b ) XX = 5X4 + 2X2 − X1 / 6 |
xxxx |
5X8 + 2S4 − S2 / 6 |
Xxxxx xx provede xxx xxxxxxx UL x XX. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx zkontroluje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx xxxx stanoveny xx xxx xxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, vypočítá xx xxxxxxxxxx relativní aktivity (xxx X) pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
(x) xxx X = (X1+ U2+ X4+ X8 – X1 – X2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ X8+ X4+ X8 – X1 – X2 –
Xxx 3 úrovně
(d) log X = (X1+ X2+ X4 – X1 – X2 – S4) × 0,401 / X4+ X4 – U1 – X1
xxxx
x´) log X = (U2+ X4+ X8 – X2 – X4 – S8) × 0,401 / X8+ X8 – X2 – X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx aktivita х xxxxxxxxx aktivita.
Pokud xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rozsah xxxxxx 0,5–2,0, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx roztoků. Xxxxx není xxxxx xxxxxx relativní aktivitu x xxxxxxx požadovaných xxxxxx, výsledek xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, a xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx do protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx není xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx rovnoběžné, xxxxxxx xx xxxxxxxx. Pokud xx xxx pak xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx považovat xx xxxxxxxxxxxx.
9. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx jedné a xxxx zkoušce xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:
- 2 xx/xx absolutní hodnoty xxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 xx 10 xx/xx,
- 20 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx obsahu 10 xx 25 mg/kg,
- 5 xx/xx absolutní xxxxxxx xxx obsahu 25 xx 50 xx/xx,
- 10 % xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx obsahu nad 50 mg/kg.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXX SODNÉHO XXXXXX X XXXXXXXX KULTIVAČNÍM XXXXX
1. XXXX X XXXXXX XXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx premixech. Xxxxxx xxxxxxx stanovitelnosti xx 10 xx/xx (10 xxx) [3].
2. PRINCIP
Vzorek xx xxxxxxxxx 90 %-xxx xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx naočkovaném xxxxxxxxxxxxxxx Bacillus xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibičními xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika. Citlivost xxxxxxx je snížena xxxxxxxxxxx sodných iontů.
3. XXXXXXXXXXXXXXX: XXXXXXXX SUBTILIS XXXX 6633 (XXXX 8054)
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx médium (4.1) x šikmých xxxxxxxxxx xx naočkuje xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx subtilis x xxxx noc xx xxxxxxxx při 30 °X. Xxxxxxx xx uchovává x xxxxxxxxxx xxx xxx 4 °C x xxxxx xxxxx se xxxxx xxxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx [4]
Xxxxxxx xxxxxxx xx agaru (3.1) x šikmé xxxxxxxx xx xxxxx 2-3 ml sterilní xxxx. Touto xxxxxxxx xx naočkuje Rouxova xxxxx, xxxxx xxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), x xx xxxx 3 xx 5 xxx xx xxxxxxxx xxx 30 °X. Po xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx mikroskopem xx xxxxxxx přidá xx 15 xx ethanolu (4.3) a xxxxxxxxxxxxx xx. Xxxx suspenze xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx 5 měsíců xxx 4 °X.
4. XXXXXXXXXX MÉDIUM X XXXXXXX
4.1 Xxxxxxxxxx médium [5] |
|
xxxxxxx |
10,0 x |
xxxxxxxxxx extrakt |
3,0 x |
xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
glukóza |
1,0 x |
xxxx (podle kvality) |
10,0-20,0 x |
xxxx |
1000 xx |
xX 6,5 (xx xxxxxxxxxxx) |
|
4.2 Zkušební xxxxxx |
|
xxxxxxx |
10,0 g |
kvasnicový extrakt |
2,5 x |
xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, X2XXX4 |
0,69 x |
xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, XX2XX4 |
0,45 x |
xxxx (xxxxx kvality) |
10,0-20,0 x |
xxxx |
1000 ml |
pH 6,5 (xx sterilizaci) |
4.3 Xxxxxxx 20 %-xx (v/v): 200 xx ethanolu xx xxxxx 800 xx xxxx.
4.4 Xxxxxxxx, xxxxxxx.
4.5 Methanol 90 %-xx (x/x): 900xx xxxxxxxxx (4.4) se xxxxx 100 xx xxxx.
4.6 Xxxxxxxx 50 %-xx (x/x): 500ml xxxxxxxxx (4.4) xx xxxxx 500 ml xxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx (alcoa F, 20 xxxx; xxxxxxxxx xxxxxxx XX1: F. Xxxxxxxxx and Co., xxxx xxxxxxxxxx).
4.8 Standardní xxxxxxxxx: monensin sodný x známé xxxxxxxx (xxxx xxxx získatelný x International Xxxxxxxxxx xxx Boilogical Standards, Xxxxxxx Veterinary Laboratory, Xxxxxxxxx, Xxxxxx KT15 3XX, Velká Xxxxxxxx).
5. XXXXXXXXX
5.1 Xxxxxxx rotační xxxxxxx x 250xx xxxxxxx xxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx: 25 xx, délka: 400 xx, x xxxxxxx x xxxxxxx 2 xx na xxxxxx xxxxx.
5.3 Skleněná trubička xxx chromatografii, xxxxxxx xxxxxx: 11 mm, xxxxx: xxxxxxxxx 300 xx, x otvorem x průměru 2 xx xx xxxxxx xxxxx.
6. STANDARDNÍ ROZTOKY
Přesně xxxxxxxx xxxxxxxx asi 10 mg standardní xxxxxxxxx (4.8) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx (4.4) x xxxxxx, xxx vznikl xxxxxxx xxxxxx x obsahem xxxxxxxxx sodného 800 μx/xx. Xxx uchování x xxxxxxxx láhvi x při 4 xX, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 2 xxxxx.
X tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X8 |
8 μx/xx |
X4 |
4 μx/xx |
X2 |
2 μx/xx |
X1 |
1 μx/xx. |
7. XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX ROZTOKU
7.1 Xxxxxxxx
7.1.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx x xxxxxxxxx 2,0 mg xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx methanolu (4.5), xxxxxxx minut xx xxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxx xx zředí 50 %-ním xxxxxxxxxx (4.6), xxx bylo xxxxxxxx očekávané xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.2 Xxxxxx, u xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx nižší xxx 50 xxx
Xxxxxx o xxxxxxxxx 10 až 20 g xx xxxxx x 100 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx protřese a xxxxx ustát.
Vatová zátka xx xxxxxx xx xxxxxxxx trubičky (5.2) x za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xx výše 75–80 mm xxxxxx xxxxxxxx (4.7).
Xxxxxxx se xxxxxxx na xxxxxxx xxxxx hlinitého x xxxxxxx xx filtrát. 30 xx xxxxxxxx xx xxxxx 50 xx vody. Hned xxxx xx xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx (4.6), xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 8 μx/xx ( = X8).
7.1.3 Xxxxxx u xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx 50 ppm (xxxxxx xxxxxxx 10 xxx)
Xxxxxx x hmotnosti 10 xx 20 x se přidá x 100 ml 90 %-xxxx xxxxxxxxx (4.5), 15 xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx 20 xxx xx xxxxxxx 40 xx zbytku; pro 10 ppm xx xxxxxxx 80 xx. Xxxxxx xx xxxxxx xx vakuu při xxxxxxx nepřesahující 40 °X v rotačním xxxxxxx (5.1). Zůstatek xx xxxxxxxx x 10 xx 90 %-xxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx trubičky (5.3) x xx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx 75–80 xx oxidem xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx zbytku xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x filtrát xx xxxxxxx. Kolona se xxxxxxx 10 xx 90xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xx odpaří xx xxxxx xxx xxxxxxx nepřesahující 40 °X v xxxxxxx xxxxxxx (5.1). Zůstatek xx xxxxxxxx v 10 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.4) a xxxxxx xx doplní xxxxx xx 20 xx. Xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4000 xx/xxx. Xxxx xxxx xx xxxxx 50 %-ním xxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxxx očekávané koncentrace xxxxxxxx sodného 8 μx/xx ( = X8).
7.2. Xxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxx U8 xx xxxxxxxxx rozřeďováním (1 + 1) 50 %-xxx xxxxxxxxxx (4.6) xxxxxxxx xxxxxxx U4 (xxxxxxxxx xxxxx: 4 μx/xx), X2 (očekávaný xxxxx: 2 μg/ml), X1 (očekávaný xxxxx: 1 μx/xx).
8. XXXXXX XXXXX
8.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxx médium (4.2) xx xxxxxxxx suspenzí xxxx (3.2) xxx 50 až 60 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx se xxxxxxxxx médiem (4.2) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx vykáže xx možná xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx zóny s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx sodného.
8.2 Příprava xxxxx
Xxxx xx xxxxxx xxxx difúzní xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx koncentračních xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x testovacího xxxxxxx (X8, U4, U2, X1). Xx každou xxxxx xxxx být xxxxxxxx bezpodmínečně xxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxx x extraktu. Z xxxx xxxxxx musí xxx xxxxx takové xxxxxxx, xxx xxxx xxxxx vytvořit xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx média xxxxxxx osm xxxxxx x xxxxxxx 10-13 xx s xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 30 xx. Xxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxx jsou vyrobeny xx xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx je xxxxxxx hliníkový nebo xxxxxxxx kroužek x xxxxx 20 mm x xxxxxxx 200 xx.
Xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx média (4.1) xxxxxxxxxxxx xxxxx 8.1, xxx se vytvořila xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2 xx (60 xx na xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxx co xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx, xx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx přesné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx xx xxxxx, xxxxx xxxxxxx otvoru). Xxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx minimálně čtyřikrát, xxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
8.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx 18 hodin xxx 35 xx 37 °X.
9. XXXXXXXXXXX
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxx x přesností xx 0,1 mm. Xxx každou xxxxxxxxxxx xx střední xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, přičemž xx xxxxxx logaritmus koncentrace xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxx standardní roztok xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx. xxxx uvedeným xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxx bod pro xxxxxxxx úroveň standardního xxxxxxx (XX) se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
x) XX = 7X1 + 4X2 + X4 – 2X8 / 10
Xxxxxxxxxxxx xxx xxx nejvyšší xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XX) xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorce:
b) XX = 7X8 + 4X4+ X2 + 2X1 / 10
Xxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxx, přičemž xx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx dosadí X1, X2, X4 x U8 xxxxxxx X1, S2, X4 x X8.
Xxxxxxxxxx hodnoty XX a XX xx zanesou xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx bodů vznikne xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx XX x XX x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx.
Xxxxx se nevyskytují xxxxxx faktory, měly xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxx považovat xx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx (XX-XX) x (XX-XX) neodchylují více xxx x 10 % od xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxx X1 x X1 xxxx X8 x X8. Xxx se hodnoty XX, XX, XX x XX určí xxxxxx následujících xxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx přímky:
a) XX = 5X1 + 2X2 – X4 / 6 xxxx 5X2 + 2X4 – X8 / 6
b ) XX = 5S4 + 2X2 − X1 / 6 xxxx 5X8 + 2X4 − X2 / 6
Xxxxx se xxxxxxx pro xxxxxxx XX a XX. X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx, xxxxx byly stanoveny xx tří úrovní, xx měly xxx xxxxxxxxxxx do protokolu x xxxxxxx.
Xxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx (log X) xxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxx 4 xxxxxx
x) xxx X = (U1+ X2+ X4+ U8 – X1 – X2 – X4 – X8) × 0,602 / X4+ X8+ X4+ S8 – X1 – X2 – S1 – X2
Xxx 3 úrovně
d) xxx X = (X1+ U2+ X4 – X1 – X2 – X4) × 0,401 / X4+ X4 – X1 – X1
xxxx
x) xxx X = (X2+ U4+ X8 – X2 – X4 – X8) × 0,401 / X8+ S8 – X2 – S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx х xxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxx relativní xxxxxxxx xxxx mimo xxxxxx xxxxxx 0,5–2,0, test xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v rozsahu xxxxxxxxxxxx hodnot, výsledek xx xxxxx považovat xx přibližný, a xx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx do xxxxxxxxx x analýze.
Pokud xxxx možné xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx. Xxxxx se xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xx xxxxx výsledek xxxxxxxxx xx neuspokojivý.
10. XXXXXXXXXXXXXX
Xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxx jednoho xxxxxxxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx neměly překračovat:
- 20 % vyšší xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx monensinu xxxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 mg/kg xxxxxxxxx hodnoty při xxxxxx 25 xx 50 mg/kg,
- 10 % vyšší hodnoty xxxxxxxx xxx xxxxxx xxx 50 xx/xx.
[1] Xxxxx xxx použity xxxx metody, které xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sporovou xxxxxxxx.
[2] Může být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] 1 xx monensinu xxxxxxx xxxxxxxx 1000 jednotkám XX.
[4] Mohou xxx xxxxxxx jiné metody, xxxxx vytvoří xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx spór.
[5] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx složení, xxxxx xxxxxxxxx stejné xxxxxxxx.