Dvanáctá směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx xx xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx o kvalitě x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx vzorků a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx používání xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx provedených x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx popsané x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Neprodleně o xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx xxxxx musí obsahovat xxxxx na xxxx xxxxxxxx nebo musí xxx za xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
Xxxxxx 3
Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských společenství.
V Xxxxxxx xxx 17. prosince 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x oblast xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovení obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 mg/kg.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x kolony methanolem, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx pomocí xxxxxxx xxxx. Obsah xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx účinnou kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxxx xxxxx xx oměří 4,0 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), xxxxxx se xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Molekulární xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx perličky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, průměr xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx přibližně 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x dihydrogen xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, nebo 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx po značku x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 ml roztoku xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx filtrem 0,22 μm (4.6.) x roztok xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 mg xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxx methanolu (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem x xxxxxxxx se. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx souboru 50 xx odměrných xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Doplní xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx těsně xxxx použitím.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Vnitřní xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx odparka
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx polem, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx xxxxxx xxxx xxxxxxx.
4.5 Filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx filtry 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx je xxxxxxx xx světlo. Proto xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx použito xxxx nádobí z xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, zda neobsahuje xxxxxxxxx xxx jiné xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou modelového xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx je xx xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 mg/kg xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx deseti xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx xxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx vzorek x nemělo xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x xxxxxxxxxxxxx xxxx (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx xx xxxxx. Potom se xxxxx xxxxxxxxxxx přes xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx použije x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx vaty x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Naváží xx 11,0 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hlinitého (3.5) x nasype se xx kolony, xxxxx xxxxx x minimální xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx. Oxid xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx setřese xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx napipetuje 5,0 xx připraveného xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx x xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx nechá řádně xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx eluuje xxxxxx 100 ml methanolu (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 ml za xxxxxx x eluát xx xxxx do 250 ml baňky x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x při xxxxxxx 40xX xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx rozpustí xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxx xx přidají xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doplní xx xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx použije xxx vlastní HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou uvedeny xxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxxxxx x jiné xxxxx povedou xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, až do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx nástřiků a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx získá xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx nebo ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μg/ml.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx x určí xx průměrná hodnota xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X průměrných xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml odečtením x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx v μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx může xxx potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožňuje porovnání xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx s přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx xx být obdobné xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by se xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx robenidinu podle xxxxxxxx xxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx robenidinu x naředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx maximální xxxxxxxx xxxxxx i standardu xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx spektra x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a sestupu xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx ostatních x xxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx mezi spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx x těchto xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kruhový xxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx krmiv pro xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx nebo peletovaných. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Výtěžnost (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Sr = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx přečištěn dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx pak xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví xx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (X20 c. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 g iontoměniče xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x za stálého xxxxxxx se xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx papírový xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx vody a xxxxx 250 ml xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx propláchne xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx uskladňuje v xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: xxxxx methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx standardní látky (3.7) x přesností 0,1 xx, rozpustí xx xx 100 xx xxxxxxx baňce x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx odměrné xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx se xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx mobilní xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx roztoky mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx jejich použitím.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 mm x 4 xx, C – 18, 10μx xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx přítomen xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v obdobném xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx xx xxxxxx. X xxxxxxxxxxx na xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx do 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.7.1), promíchá xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, jako xx xxxxxx, a při xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Erlenmeyerovy baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x připraveného xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 g. Přidá xx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Roztok xx xxxxxxxxx xxxx papírový xxxxx a filtrát xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 ml roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále se xx nálevky přidá 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x třepe xx dobu xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vrstvy separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx odpustí xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Extrakce vodné xxxx xx xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 40 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx s xxxxxx extraktem v xxxxx x kulatým xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se rozpustí x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Chromatografie výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx kolony (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx skelné xxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxx hladinu xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx do xxxxxx xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá se xxxxx až x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu xx xxxxxxx napipetuje získaný xxxxxxx (5.3). Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 5 až 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx také převede xx xxxxxx. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, aby xxxxxx nepřesahoval 5 xx za xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx. Methylbenzochát se xxxxxx x xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxx xx xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx přidá 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx dichlormethanu (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx nechají fáze xxxxxxxxxxx. Nižší (dichlormethanová) xxxxxx se odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx se smísí x xxxxxx extraktem x baňce x xxxxxxx dnem.
Extrakt dichlormethanu xx odpaří xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx převede do 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxx a promíchá. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes membránový xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx xxxxxxx HPLC (5.6).
5.6 Analýza xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: směs xxxxxxxxx a xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx každý xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx provede několik xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků proti xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx vzorku (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, jaký xxx xxxxxx pro kalibrační xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota výšky (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x přídavkem
Extrakt xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného methylbenzochátu xx xxx xxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx pouze xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx přidané xxxxxxxx, xxx xx množství xxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx píku x polovině xxxxxxxxx xxxxx musí xxx xx xxxxxxxxx 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx vyhodnocovány xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx musí být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x diodovým xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx ostatních xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, jestliže jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 až 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx methylbenzochátu mezi 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti