Xxxxxxxx směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady 70/373/XXX ze dne 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxx mají potvrdit xxxxxxxxxx xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;
vzhledem x tomu, že xx xxxxx stanovit xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx se stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx provedených x xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx o xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx členskými xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx nebo musí xxx za takový xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu si xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX ROBENIDINU
1,3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) amino]guanidin hydrochlorid
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx okyseleným xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxx na koloně x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se a xx vhodný xxxxx xx upraví xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx fázi xxxxxx XX detektoru.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx 500 xx odměrné xxxxx xx oměří 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: kyselý, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x protřepává xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx rozpustí xx xxxx (pro HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx x promíchá.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x xxxxxxxxx, xxxx 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (pro XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Mobilní xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx draselného (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu sodného (3.7.).
Xxxxxxxxx se xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x kyselém methanolu (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx se po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po značku xxxxxxx fází (3.8) x promíchá. Xxxxx xx xxxxx aluminiovou xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx souboru 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μx/xx robenidinu. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx z tmavého xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx průměr 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx třepačka
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx detektorem x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx v xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx xxxxxx nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxxxx XX/X xxxx podobný)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxx xxxxx xxxxxxx použito xxxx xxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xx xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), do xxxxxxx bylo přidáno xxxxxx množství robenidinu, xxxx xx xx xxxxxx. K xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 ml x proudu dusíku. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx xxxx této xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx by xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx přibližně 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x, přidá xx 100 ml xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xx třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes filtr xx skleněných xxxxxx (4.5) a xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx vloží xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, pokud xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx prostředí. Oxid xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx napipetuje 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2). Xxxxxx xxxxxx se xxxx x xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se z xxxxxx xxxxxx xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx za xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx teplotě 40xX odpaří xx xxxxx v rotační xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 ml xxxxxxx baňky. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx roztoky xx xxxxxxx do xxxxxxx baňky. Xxxxx xx doplní po xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx část xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx opakovaným nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx nástřiků a xxxxx xx výšky (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxx odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxxxxxx xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Výpočet x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx píků x xxxxxxx xxxxxx se xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μg/ml xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxxxxx může xxx potvrzena opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx vzorku se xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx robenidinu podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx extraktu. Xxxx píku x xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x standardu xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxx danou rozlišovací xxxxxxxxxx detekčního xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx délce xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx spektra xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx dosaženo některého x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
Společenství xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx dvanáct xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx v reprodukovatelnosti
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x oblast použití
Tato xxxxxx xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 x. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx vody.
3.6 Xxxxx XX-120 (Na), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx katex xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx v 500 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx na xxxxx xxxxx. Po xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 ml xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 ml methanolu x vysuší xxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx uskladňuje x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: čistý methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 mg, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 ml odměrné xxxxx xx odpipetuje 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx a promíchá.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 ml odměrných xxxxx se xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní fází (3.3) a zamíchá. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx připravovat xxxxx xxxx jejich použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná xxxxxx (250 x 15 xx) vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 HPLC zařízení xxxxxxxx XX detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μx xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx bez xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx methylbenzochát ani xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, jaké xx xxxxxxxx ve vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), promíchá xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxx, jako xx xxxxxx, x xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x mechanicky xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx přes xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxx xxxxxxx, obsahující 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx přidá 25 xx filtrátu, který xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx v bodu (5.2). Xxxx se xx nálevky přidá 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx opakuje xx xxxxx dalšími 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx spojí s xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx zazátkuje a xxxx extrakt se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.3) xx vloží xxxxxx xx skelné xxxx. Xxxxxxxx se suspense x 5 g xxxxxxxxxx katexu x x 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Přebytečná kyselina xx xxxxxxx xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx a kolona xx promývá vodou xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx methanolu (3.2) x nechá xx xxxxx xx k xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx kolonu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx získaný xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx kolonu. Xxxxxxx xx xxxxx stéci xx x xxxxxxx xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx z xxxxxx 150xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx jímá xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx xxxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxxx nálevky. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) a 130 ml xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx xxxx jedné xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx se xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a tyto xxxxxxxx xx smísí x prvním xxxxxxxxx x baňce x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 ml odměrné xxxxx. Xxxxx s xxxxxxx xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x promíchá. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx HPLC (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxx indikativně. Xxxxx být použity xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxx:
- xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: směs xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx nástřikem kalibračního xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx ploch xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x změří xxxxx (plochy) píků xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μg/ml.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, jaký xxx xxxxxx pro kalibrační xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx porovnání spektra xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx xxxxxxxxxxx přidáním xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx vzorku.
Mělo xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem xxx xx xxxxxxx množství, xxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx přibližně 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx musí být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x nepřesností xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 nm;
b) xxx xxxxxx délce mezi 220 x 350 xx se nesmí xxxxxx spektra zkoušeného xxxxxx a standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx chromatogramu xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx kritéria je xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % absorbance xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, vrcholu x xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx lišit od xxxxxxxxx v xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx dosaženo, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není dosaženo xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx přesáhnout 10 % vzhledem x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx vzorek musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx koeficient opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx