Dvanáctá xxxxxxxx Komise 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, že xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx mají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxx Společenství xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx nutno xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx kontrolu xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, že při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx úředních xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x krmivech se xxxxxxxxx metody popsané x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx a xxxx xxxxxxxxx část se xxxxxxxx xx koloně x xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx methanolem, xxxxxxxxxxx xx a xx xxxxxx objem xx upraví xxxxxx xxxxxxx fáze. Obsah xxxxxxxxxx se stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) na xxxxxxxx xxxx xxxxxx XX detektoru.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Okyselený methanol
Do 500 ml xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), xxxxxx xx xx značku xxxxxxxxxx (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx musí xxx připraven xxxxx xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx HPLC
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx aktivity X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Skladuje xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok x = 0,025 xxx/x
3,4 x xxxxxxxxxx fosforečnanu xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx baňce, doplní xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, xxxx 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μm (4.6.) x xxxxxx se xxxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Robenidin, xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Rozpustí xx x kyselém methanolu (3.2.) ve 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx v xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.1) xx 250 xx odměrné baňky, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x promíchá. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx a uloží x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx odměrných buněk xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Doplní xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μx/xx robenidinu. Xxxxxxx xxxx roztoky xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Skleněná xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx přibližně 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx náplní nebo xxxxxxx.
4.5 Filtr xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μx
5. Postup
Pozn.: Xxxxxxxxx je xxxxxxx xx xxxxxx. Proto xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xx xxxxxx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx modelového xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Roztok xx xxxxxx asi na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx dusíku. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx začít x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel xxxx xxxxxx by xxxx xxx modelové xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jako xx xxxxxxxx vzorek x nemělo xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 g, xxxxx xx 100 ml xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx x hodinu xxxxx na xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx se xxxx xx 150 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního síta (3.4), zazátkuje x xxx minut se xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx použije x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx kolony x xxxxxx xxxxxxxx
Xx spodního xxxxx skleněné kolony (4.1) xx xxxxx xxxx xxxxx ze xxxxxx xxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx se 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x nasype xx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou x xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx kolony.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx o xxxxx xxxxxx x extrakt xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx se x xxxxxx eluuje pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx a eluát xx xxxx xx 250 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx redukovaného xxxxx x při xxxxxxx 40xX xxxxxx xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx vypláchne 1 – 2 xx mobilní fáze x tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doplní po xxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx délka xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx x retenčních xxxx.
5.4.2 Kalibrační graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx nástřiků a xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nebo ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet x xxxxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku x μg/ml xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/m,
ve kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x kalibračním xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxx xx být xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by se xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx přidaného robenidinu x xxxxxx xxxxxxxxxx x naředěném xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx maximální xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx následujících xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný s xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx xxxxx se xxxxx plus/minus 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit od xxxxxxxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu.
c) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže ve xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx některého x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxx xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx dvanáct xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx krmiv xxx xxxxxx x králíky, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Výsledky jsou xxxxxxx v této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx dichlormethanem, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví xx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) a xxxx (xxx HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μx filtr (4.5.) a xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx rozředí x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx kyseliny chlorovodíkové (X20 x. 1,18g/ml) xx rozředí v 1000 ml xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx katex takto: 100 g xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx filtr xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Potom xx xxxxxxxxxx dalšími 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx standardní xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx ve 100 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), doplní xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μg/ml
Do 50 ml xxxxxxx xxxxx se odpipetuje 5 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx roztoky
Do xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx se odpipetuje 1, 2, 3, 4 a 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx se xx xxxxxx mobilní xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx roztoky xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx třepačka
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Skleněná kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 HPLC xxxxxxxx xxxxxxxx XX detektorem x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx nebo detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μm xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx není xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx ani xxxx rušivé látky.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx krmiva, fortifkovaného xxxxxxxxxxxxxxxxx v obdobném xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx xx xxxxxx. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 x modelového xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.7.1), xxxxxxxx xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, jako xx xxxxxx, x xxx xxxx analýze xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 g. Xxxxx xx 100 ml xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x mechanicky xx xxxxx (4.1) xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx nálevky, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx získán xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Xxxx xx xx nálevky xxxxx 100 xx dichlormethanu (3.1) x třepe xx dobu jedné xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) se odpustí xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx x kulatým xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx se xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), baňka xx xxxxxxxxx x xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx chromatografii x iontovou výměnou (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx výměnou xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx ionexové xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx tampon xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxx xx promývá xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx xx xxxxxx xx nalije 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx xx x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 až 10 xx xxxxxxxxx (3.2) x výplach xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx z xxxxxx 150xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx xx jímá xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx převede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml methanolu (3.2) x xxxxxxx xx přidá do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 ml dichlormethanu (3.1). Třepe xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Nižší (dichlormethanová) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx extraktem x baňce x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx v rotační xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v xxxxx xx rozpustí v xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 ml methanolu x xxxx se xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx použije xxx analýzu XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx pomocí XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx pokud xxxxxxx xx stejným xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx nástřiku: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx časů.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) z píků xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx hodnoty výšky (xxxxxx) xxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Ověření xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx polem, který xxxxxxxx porovnání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x ohledem xxx xx xxxxxxx množství, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx maximální xxxxx xxxx být xx přibližně 10 % xxxxxxx šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx vyhodnocovány xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) xxx xxxxxx délce maximální xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 nm;
b) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx se xxxxx xxxxxx spektra xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx ostatních xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xxxxx xxxxxxxx mezi xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) při xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx lišit xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx dosaženo, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx nepřesahuje xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx není xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % vzhledem x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx 4 a 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx 90 %.
8. Výsledky kruhového xxxxx
X deseti xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx koeficient xxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx