Dvanáctá xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx dne 17. xxxxxxxx 1993,
kterou se xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx odběru vzorků x xxxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xx xxxxxx kontroly krmiv, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Společenství xxx xxxxx vzorků x xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství;
vzhledem x tomu, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxx xxx používání xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx provedených x xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx se obsahu xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 30. xxxxxxxxx 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Komisi.
Tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx musí xxx za xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 17. xxxxxxxx 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
PŘÍLOHA
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 mg/kg.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Extrakt se xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem xxxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxx x kolony xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxx xx upraví xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 ml xxxxxxx xxxxx se xxxxx 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (P20c, 1,18 x/xx), doplní xx xx značku methanolem (3.1.) x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3A, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 mm perličky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx hlinitý: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx chromatografii
100 x oxidu hlinitého xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx x protřepává xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x dobře xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok x = 0,025 mol/l
3,4 x dihydrogen xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ve xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, doplní xx xx značku x promíchá.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, nebo 8,95 g xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (pro HPLC) x 1000 ml xxxxxxx baňce. Xxxxxx xx po značku x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx acetonitrilu (3.3.),
250 xx xxxx (xxx XXXX),
50 xx roztoku xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-chlorbenziliden) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx xx 30 mg xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x xxxxxxxxx 0,1 xx. Xxxxxxxx xx x kyselém methanolu (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx stejným rozpouštědlem x promíchá xx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) do 250 xx xxxxxxx baňky, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8) x xxxxxxxx. Baňka xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx x uloží x xxxxx.
3.9.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx odměří 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 a 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx tyto xxxxxxx xx připravují xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x tmavého xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Zařízení xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detektorem x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx náplní nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (Whatman XX/X nebo xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Membránové xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx je xxxxxxx xx světlo. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx nádobí x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 mg/kg xx do 250 xx Erlenmeyerovy xxxxx xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx xx xxxxx 0,5 xx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx minutách xx může xxxxx x xxxxxxxx (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel této xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx krmivo xxxxxxxxx xxxx jako xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 15 g xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 g, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx na třepačce (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx do 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního síta (3.4), xxxxxxxxx x xxx minut se xxxxx. Potom xx xxxxx přefiltruje přes xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento roztok xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx kolony s xxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) xx xxxxx xxxx zátka ze xxxxxx xxxx a xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 g připraveného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x nasype se xx xxxxxx, xxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx konec kolony.
5.3.2 Xxxxxxx vzorku
Na xxxxxxxxxxx xxxxxx xx napipetuje 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx o stěnu xxxxxx x xxxxxxx xx nechá xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx eluuje xxxxxx 100 xx methanolu (3.1) při xxxxxxxxx xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx roztok xx xx redukovaného xxxxx x při teplotě 40xX xxxxxx do xxxxx x rotační xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 ml xxxxxxx baňky. Xxxxx xx xxxxxxxxxx vypláchne 1 – 2 xx mobilní xxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doplní po xxxxxx mobilní xxxx x promíchá xx. Xxxxxxxxx část zfiltruje xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Tento xxxxxx xx xxxxxxx xxx vlastní HPLC xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
mobilní xxxx (3.8),
průtoková rychlost: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, xx do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.9.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx proti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxx objem xxxxxxxx xxxxxx, jako xxx xxxxxxxxx x xxxx xx průměrná xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.4.2).
x = (c × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x přídavkem xxxxx využitím xxxxxxxxx x xxxxxxxx polem, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx robenidinu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x přídavkem
K xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vhodného množství xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx je předpokládaný xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx xx xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx v xxxxxxxx jeho maximální xxxxx musí být xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor s xxxxxxxx polem se xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx záznam xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx částí spektra x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx je dosaženo, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
x) xxx vlnové délce xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx a sestupu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % relativní xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx píku.
Jestliže xxxx xxxxxxxx některého x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího výsledku xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 mg/kg.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx krmivo |
Pelety |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = variační xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx odchylka x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx v reprodukovatelnosti
2. XXXXXXXXX METHYLBENZOCHÁTU
(2-methyl-7-benzyl-oxy-6-butyl-1,4-dihydro-4-oxychinolin-3-karboxylát)
1. Xxxx x xxxxxx použití
Tato xxxxxx slouží x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxx mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx chromatografií, x xxxxxxxx pak xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) a xxxx (xxx XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se xxxx 0,22 μx xxxxx (4.5.) x odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx).
3.4 Xxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx σ = 2 %
20 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové σ = 10 %
100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20 x. 1,18x/xx) xx rozředí x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx XX-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx v 500 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3,5) x za stálého xxxxxxx se xxxxxxx x varu xx xxxxx desce. Xx xxxxxxxxxxx se kyselina xxxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxx xx sníženého xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx xxxx x xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Xxxxx xx xxxxxxxxxx dalšími 250 ml methanolu x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxxxxxx xxxxx. Vysušený xxxxx xx uskladňuje v xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: čistý xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx standardní látky (3.7) s xxxxxxxxx 0,1 mg, rozpustí xx xx 100 xx odměrné xxxxx x roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx a xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx odměrných xxxxx xx odpipetuje 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) x zamíchá. Xxxx xxxxxxx mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Rotační xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx x nádržkou x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx XX xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx polem
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 mm x 4 mm, C – 18, 10μm xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Membránové filtry 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo bez xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx rušivé xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx xxxxxxx xxxx výtěžnosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, jaké je xxxxxxxx ve xxxxxx. X fortifikaci xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx xx x xx 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx je xxxxxx, x xxx xxxx analýze by xxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx xxxxxx xxxxxxxxx 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Roztok xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xx extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, který xxx xxxxxx postupem xxxxxxxx v bodu (5.2). Xxxx se xx xxxxxxx xxxxx 100 xx dichlormethanu (3.1) a xxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vrstvy separovat x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) se odpustí xx 500 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx s xxxxxx extraktem v xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), baňka xx zazátkuje x xxxx extrakt xx xxxxxxx xxx chromatografii x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx vaty. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx katexu a x 50 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx směs xx xxxxxx do skleněné xxxxxx a nechat xxxxxx. Přebytečná xxxxxxxx xx odpustí až xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx neutrální xx xxxxxxxxx xxxxx. Potom xx xx xxxxxx xx nalije 50 xx methanolu (3.2) x xxxxx se xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje získaný xxxxxxx (5.3). Baňka x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a výplach xx také xxxxxxx xx kolonu. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx x povrchu xxxxxx. Kolona se xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina se xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxx xx jímá xx 250 ml Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 xx xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx přidá do xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx dělící xxxxxxx přidá 300 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe xx xx xxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx fáze xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx odpustí xx 500 ml xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxx vodné xxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a tyto xxxxxxxx se smísí x prvním xxxxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx dichlormethanu xx xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok se xxxxxxxxxxxxx převede xx 10 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 až 2 xx xxxxxxxxx x opět xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxx po značku xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx indikativně. Xxxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx stejným xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- vlnová délka xxxxxxxxx: 265 xx,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μl.
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx každou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vynesením xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx píků proti xxxxxxxxxxxx kalibračních xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx se nastříkne xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx stejný xxxxx, jaký byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (mg/kg) xx xxxxxx xx xxxxxxx podle tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace methylbenzochátu x roztoku vzorku x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Identita
Identita xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, který xxxxxxxx porovnání spektra xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μx/xx xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx fortifikuje přidáním xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxxxxxxx xx být podobné xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx pouze xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx jak xx přidané xxxxxxxx, xxx xx množství xxxxxxxxxxxxxxx xx zředěném xxxxxxxx. Šíře xxxx x polovině maximální xxxxx xxxx být xx přibližně 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku i xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x diodovým polem xx xxxxx plus/minus 2 nm;
b) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná maxima x jestliže xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxx píku xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxx xxxxx spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx nepřesahuje nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx ve vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx analytu xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % vzhledem k xxxxxxxxxx výsledku xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx mezi 4 a 20 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
Xxxxxxxxxx |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Xx (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx