Xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
kterou xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv
KOMISE EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Společenství xxx úřední xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx nařízením (XXX) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx se xxxxxx kontroly krmiv, xxxxx xxxx potvrdit xxxxxxxxxx podmínek předepsaných xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků a xxxxxxxxxxxx metod Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xx xxxxx stanovit xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx látek xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx této xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, že při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx kontrol xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x methylbenzochátu x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx popsané x příloze xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. xxxxxxxxx 1994. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx za takový xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Tato směrnice xxxxxxxx v platnost xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 17. prosince 1993.
Za Xxxxxx
Xxxx Steichen
člen Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a oblast xxxxxxxxxx
Xxxx metoda slouží xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx v krmivech. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje okyseleným xxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxxx xx xxxxxx x oxidem hlinitým. Xxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx objem xx upraví pomocí xxxxxxx fáze. Xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxxx methanol
Do 500 xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx 4,0 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) x promíchá. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxxxx.
3.3 Acetonitril, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 mesh (1,6–2,5 mm perličky xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, průměr xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx xxxxxxx: xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Zazátkuje xx x protřepává xx přibližně 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Dihydrogen xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, roztok x = 0,025 mol/l
3,4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7 Hydrogen xxxxxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 0, 025 xxx/x
3,55 g xxxxxxxxx (nebo 4,45 x xxxxxxxxx, nebo 8,95 x dodekahydrátu) xxxxxxxx fosforečnanu sodného xx xxxxxxxx xx xxxx (xxx XXXX) x 1000 ml xxxxxxx baňce. Xxxxxx xx po značku x xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx vody (xxx XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.6.),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x xxxxxx xx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx látka
Čistý xxxxxxxxx: 1.3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μx/xx:
Xxxxxx se 30 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx (3.9.) x přesností 0,1 xx. Rozpustí xx x xxxxxxx methanolu (3.2.) xx 100 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx x promíchá se. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx folií a xxxxx x temnu.
3.9.2 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx standardní xxxxxx: 12 μx/xx
Xxxxxx xxx 10,0 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.1) xx 250 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx fází (3.8) x promíchá. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx buněk xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.2.). Doplní xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxx. Xxxx roztoky xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Skleněná xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, vybavená xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, délka 250 xx.
4.2 Ruční xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii (HPLC) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx x diodovým polem, xxxxxxxxxx x xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C18, 10 μx náplní nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (Whatman XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx. Proto xxxx xxx xxx xxxxx úkonech xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Xx xxxxxx xxxxxxx test xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx robenidinu, xxxx xx xx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 3 ml xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.1.). Xxxxxx xx xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 xx x xxxxxx dusíku. Xxxxx xx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx a xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx začít x xxxxxxxx (5.2.).
Pozn.: Xxx účel xxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxx stanovitelné xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží xxxxxxxxx 15 g upraveného xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x, přidá xx 100 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) x xxxx xxxxx filtrátu xx xxxx do 150 xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxx xx 7,5 x molekulárního síta (3.4), zazátkuje x xxx xxxxx xx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx přefiltruje xxxx xxxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxx
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx hlinitým
Do xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx kolony (4.1) se xxxxx xxxx zátka xx xxxxxx xxxx x xxxxxx se skleněnou xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx xx xx xxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx prodlevou v xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx se napipetuje 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx pipety xx xxxx x xxxxx xxxxxx a extrakt xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx z xxxxxx eluuje xxxxxx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx baňky x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xx redukovaného xxxxx x xxx xxxxxxx 40xX xxxxxx xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.3). Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 ml mobilní xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx převede xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx mobilní xxxx x tyto xxxxxxx xx přidají xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx mobilní fází x promíchá xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μm xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC)
5.4.1 Parametry
Následující xxxxxxxx jsou xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxxxxx i xxxx xxxxx povedou xx xxxxxxx výsledkům:
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxxxxx,
xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 317 xx,
xxxxx xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx xxxxxxxx 3,6 μx/xx, až xx xxxxxxxx konstantních xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) xx provede xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxx (xxxxxx) píků pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx ploch xxxx proti odpovídajícím xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků x μg/ml.
5.4.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx x určí xx průměrná xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx odečtením x kalibračního xxxxx (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml,
m = xxxxxxxx navážky xxxxxx v xxxxxxx.
7. Xxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx analýzy xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx využitím detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx extraktu xxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (3.9.3) obsahujícím 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx vhodného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx xx se xxxxxx pouze xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx přidaného robenidinu x xxxxxx xxxxxxxxxx x naředěném xxxxxxxx. Xxxx píku v xxxxxxxx xxxx maximální xxxxx musí xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Detektor xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx záznam xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx systému. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného vzorku x xxxxxxxxx zaznamenaný xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního analytu.
c) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 a 350 xx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a sestupu xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx sledovaných xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx některého x xxxxxx kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. nejvyššího xxxxxxxx xxx xxxxxx robenidinu xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx testu
Společenství xxxxxxxxxxxxx kruhový test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiv pro xxxxxx a xxxxxxx, xxxxxxx xxxx peletovaných. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx v této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (mg/kg) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
CVr (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
XX (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxx methanolového xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx přečištěn xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Obsah methylbenzochátu xx xxxxxxx xx xxxxxxxx fází vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 Xxxxxxx fáze XXXX
Xxxx xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro XXXX) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx xx přes 0,22 μm filtr (4.5.) a odplyní (xxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 ml xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (X20 c. 1,18x/xx) xx xxxxxxx x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx použitím xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx: 100 x xxxxxxxxxxx xx rozmíchá x 500 xx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x xx xxxxxxx xxxxxxx xx zahřívá x xxxx na xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx kyselina xxxxxxxxx. Filtruje xx xxxx xxxxxxxx filtr xx xxxxxxxxx tlaku. Xxxxx se propláchne xxxxxxx xxxx 500 xx vody a xxxxx 250 xx xxxxxxxxx (3.2). Potom xx xxxxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxxxxxxx x vysuší prosáváním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx.
3.7 Standardní xxxxx: xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Základní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx, 500 μx/xx
Xxxxxx se 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 mg, rozpustí xx xx 100 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx značku a xxxxxxxx.
3.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx methylbenzochátu 50μx/xx
Xx 50 xx xxxxxxx xxxxx xx odpipetuje 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx methylbenzochátu (3.7.1), xxxxxx xx xxxxxxxxxx (3.2) po xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx série 25 ml xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx fází (3.3) x xxxxxxx. Xxxx roztoky mají xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 x 10 μx/xx methylbenzochátu. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx těsně xxxx xxxxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxx (250 x 15 xx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 XXXX zařízení xxxxxxxx UV xxxxxxxxxx x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx xxxx detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: 300 xx x 4 xx, X – 18, 10μm xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Membránové xxxxxx 0,45μx
5. Postup
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx není přítomen xxx methylbenzochát ani xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx x obdobném xxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx xxxxx xx 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.7.1), xxxxxxxx se x po 10 xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Pozn.: Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx analýze xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 20 g připraveného xxxxxx x přesností 0,01 g. Přidá xx 100 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx xxxxx (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx přidá 25 xx filtrátu, xxxxx xxx získán xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx (5.2). Dále se xx nálevky xxxxx 100 xx dichlormethanu (3.1) x xxxxx xx dobu jedné xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx opakuje xx xxxxx xxxxxxx 40 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x tyto xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx x kulatým xxxx. Extrakt xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 xx xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Příprava ionexové xxxxxx
Xx dolního xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx xxxxxx xx skelné xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 x xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x nechat xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x kolona xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx eluát xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xx do xxxxxx xx nalije 50 xx methanolu (3.2) x nechá se xxxxx xx x xxxxxxx ionexu.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx získaný xxxxxxx (5.3). Xxxxx x kulatým dnem xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 až 10 ml xxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxx xx také xxxxxxx xx xxxxxx. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx x xxxxxxx xxxxxx. Kolona se xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx xx xxxxxx. Xxxxxxxx kapalina se xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx z xxxxxx 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) a xxxxx se jímá xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx (5.4.2) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Dále xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx roztoku kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx x potom xx nechají xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx. Extrakce xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxxx dalšími 70 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxx se xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x baňce s xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx x rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx v xxxxx xx rozpustí x xxxxxxxxx 5 ml xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx roztok xx xxxxxxxxxxxxx převede do 10 xx xxxxxxx xxxxx. Baňka x xxxxxxx xxxx se xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x opět xx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX (5.6).
5.6 Xxxxxxx xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx parametry xxxxx xxxxxxx xx stejným xxxxxxxxx:
- xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx fáze: xxxx xxxxxxxxx x xxxx,
- xxxxxxxxx rychlost: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μl.
Stabilita chromatografického xxxxxxx xx kontroluje xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x změří xxxxx (xxxxxx) píků xxx xxxxxx koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průměrných xxxxxx výšek nebo xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μg/ml.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxxx xxxxxx (5.5.) x použitím xxxxxx xxxxx, xxxx byl xxxxxx xxx kalibrační xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx hodnota výšky (xxxxxx) z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Z xxxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2.).
Obsah xxxxxxxxxxxxxxxx x (xx/xx) xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx
x =(x x 40)/x,
xx xxxxxx xx
x = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx výsledků
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx opakovaným xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx vzorku xx fortifikuje xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.7.2.). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxx pouze ke xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx množství, xxx na množství xxxxxxxxxxxxxxx ve zředěném xxxxxxxx. Xxxx píku x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxx 10 % původní xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx spektra zaznamenaný xx vrcholu píku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností detekčního xxxxxxx. Pro detektor x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx se nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx lišit xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % relativní absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x jestliže xxxxx xxxxxxxx mezi dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx nesmí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx spektra v xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxx odchylka mezi xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx není dosaženo xxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxx, přítomnost xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx methylbenzochátu xxxx 4 x 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno xxx xxxxxx. U každého xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx analýzy.
Výsledky
|
Modelové xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
SR (xx/xx) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
XXX |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = standardní xxxxxxxx opakovatelnosti
CVr = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
XX = standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = variační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx