Směrnice Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x zejména na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx zjištění, zda xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx nařízením Komise (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx X a xxxxxxxx X xxxx xxx uváděn xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx látky přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx trh [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 x krmivech xxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx krmiv.
(4) Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx A, vitamínu X x xxxxxxxxxx x krmivech x xxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Komisi.
Budou xxxx předpisy používat xx 1. září 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol a xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx stanoví xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Jedna IU xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 IU vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx etanolovým roztokem xxxxxxxxx draselného a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx a, pokud xx xx nutné, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx fluorescenční xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx sulfidu xxxxxxx, c = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 mg xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x doplňte po xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX vitamínu X xx ml. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx A na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm nebo xxxxxxx (výkonnostní xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx podmínek XXXX)
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena do xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x oxidaci. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x kyslíku (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx nahrazen xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx a saponifikací, xxxxx může xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 g xx 25 x xxxxxx do 500 xx xxxxx s xxxxxxx dnem nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx baňku do xxxxx lázně s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x nechejte xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx draselného (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a nechejte xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 ml xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 xx etanolu (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx nálevky xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx okolo 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx extrakčního přístroje (4.8)
Xxxx se vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx trubice tak, xxx xxx právě xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce dalšími 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dělící nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Příprava xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Odpařte rozpouštědlo xxxxx do xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) nebo fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic náplně 5 nebo 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9): Směs xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx popsáno v 5.2, xxx bez xxxxxxxx BHT. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx před použitím.
Pipetujte 2,0 ml xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx výšek píků (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx odpovídající výsledkům XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu A xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 nm a 327 xx.
Xxxxxxx obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx A alkohol = 1 530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx proti 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm pro xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;821 při 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu A x xxxxxxx vzorku (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 v ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Pokud se xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X xxxxxx tuku x xxxxxxxxx čistých xxxx by xxxx xxx xxxx saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [1]
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx jako xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno xxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxxxx v xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx X xx stanoví reverzní xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx draselného, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx sodný, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx sodného, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x přesností na 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 ml xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým hrdlem, x adaptérem pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x magnetickým míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x objemu 1x vybavený zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx musí být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může dojít xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx E xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Přidejte xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx baňku xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Zahřejte x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx míchání xxx xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím celkovým xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Opakujte tuto xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx emulzí) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx a filtr 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Když xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx xx tvaru xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx z xxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x převeďte xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx xx to xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam popsáno.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx vzorku xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 nebo 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx sucha na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) za sníženého xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx nepřekračující 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx v xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μg/ml).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx E xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxx fluorescenčního detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μl) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx shodné xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 mm, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 xx) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x doplňte xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx v 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu na xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 ml standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μg/ml DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx by mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx tomto ředění xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte pipetou 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μg XX-α-xxxxxxxxxx xx ml, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Standardní pracovní xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
5.6.2.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μl každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx výšky (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-tokoferol xxxxxx) xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x xx/xx ve xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) v μg/ml
V1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 v ml
m = hmota xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx pro stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx dělení, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx doba xxxxxxxxxxxxxxxx xx čtyři xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x použitím normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg EDTA.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx tryptofanu x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x L- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu barnatého x xxxxxxxx xxx 110 °C xx 20 hodin. Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a vnitřní xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx HPLC x xxxxxxxxxxxxx detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, nebo voda xxxxxxx kvality xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), xxxxxx pod xxxxxx přes xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx pod vakuem xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, c = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx HCL (3.7) x doplňte xx 1 x xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx baňce x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte při –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx odměrné xxxxx x kyselině chlorovodíkové (3.13) a xxxxxxx xx značku kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x na xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Roztok 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX xx spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx širokým xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Vířivý mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x otvory 0,5 xx. Vzorky, které xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx musí xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x přesností na 1 xx příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx orto-fosforečné, c = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte pH xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxxx xxxxxx a zřeďte xxxxx na objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před vstříknutím xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx a extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx barnatého (3.4) a 10 xx xxxx. Promíchejte xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx vodou x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 hodin.
Před xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Aby xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx protřepávejte, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 minut.
Potom xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu ve xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x upravte xX xx 3,0 x použitím HCL, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx odměrné baňky x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx způsobit sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX přefiltrujte několik xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii podle xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx den, xxxxx xxx skladovány při 5 °C xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx vymývání xxxx xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, emise: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × X × C × X × X × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100x xxxxxx
X = plocha píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
B = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = objem roztoku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx tryptofanu, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) x ml (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Společenství (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx byly xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 laboratořích k xxxxxxx metody pro xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx byly prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (třetí xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, že dva xxxxxx xxxx analyzovány xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x ověření xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v následující xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx odchylka opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: standardní odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (CRM 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx odstředěné mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
sR [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx lepší xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní xxxx: |
X: 0,01 mol/l KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se bude xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní čáru xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx degradační xxxxxxxx xxxxx odděleny od xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Je důležité, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx všech xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx píky xxxxxxxx xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V rozsahu xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx měřena x xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu a xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx xx být xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx stává xxxxxxxx xxxxxxx xxxx rozpustný. Xx se xxxxxxxxx x nečirém xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX, xxx xxxx x tryptofanu způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Verband Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).