Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/ES
ze xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx stanovení xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x tryptofanu x xxxxxxxx
(Xxxx s významem xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska [2], x zejména na xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, že úřední xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx splněny xxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xx jakost x xxxxxxx krmiv, xxxx být xxxxxxxxx xx použití metod Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx a analýzy.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/EHS xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx dne 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx dne 2. dubna 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx trh [5], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/ES [6], a směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. září 1993 x krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Musí xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xxx se xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx směrnicí nejpozději xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Komisi.
Budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx státy musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Tato směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Komise
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST A XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x oblast použití
Tato xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx cis izomery, xxxxx se stanoví xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X je xxxxxxxx v mezinárodních xxxxxxxxxx (XX) na xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx stanovitelnosti xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx A xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno xxxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud xx xx nutné, xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx vybírány xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx x jeho xxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l v xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, extra čistý, xxxxxxx aktivity, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Zásobní xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 mg xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx xx 2-propanolu (3.8) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx čistý, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 IU/g.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 IU xxxxxxxx X na xx. Xxxxxx obsah xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 ml
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx ve xxxxx xxxxxxx U a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny ve xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (UV) světlu x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, nebo nádobí xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx a saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx obsahu vitamínu X, odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx do 500 xx baňky s xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx hydroxidu draselného (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přibližně 20 xx vody x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml etanolu (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte výplachy xx xxxxxx xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x etanolu v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx extrakci xxxxxxx 100 ml petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx kroužení (aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx vody, dokud xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 ml odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ve xxxxx písmene X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx byl xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx a dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx x xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), potom xxxxxxx 50 ml dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dělící nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx extrakty xxxxxxxxxxx xxx, jak je xx popsáno v 5.3.1, x pokračujte xxx je xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx pro HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 ml xxxxx xx tvaru xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx tlaku při xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx rotační vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x ihned xxxxxxxxx zbytek xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xx měla být x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X je xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx mobilní xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 mm x 4 xx, C18, xxxxxxxx částic náplně 5 xxxx 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; XX xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Kalibrace
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx v 5.2, xxx xxx xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx rozpusťte xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 XX xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx před použitím.
Pipetujte 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx X xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x stanovte xxxxxxx výšky xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek píků (xxxxx) nyrýsujte kalibrační xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 ml odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx tohoto zředěného xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx A xxxxxxx = 1 530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní roztok xxxxxxx A xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx do 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx nezředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 ml tohoto xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X alkohol = 1&xxxx;821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx v IU/ml xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx vzorku (5.4) v XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx xxxxxxx (3.1), x rozrušení xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx měla xxx xxxx saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Namísto XXX xxxx xxx použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx izomerů xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx nesmí překročit 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
sr [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [IU/kg] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX VITAMÍNU E
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxxx xxxx xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx kg. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx E).
Mez xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxx x, xxxxx je xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx stanoví xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (RP-HPLC) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx HPLC: xxxx metanolu (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Zásobní xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a doplňte xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx po značku xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx skla
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx trubicí procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx kapaliny xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Saponifikace
V xxxxxxxxxx xx hmotnosti obsahu xxxxxxxx X xxxxxxx x přesností xx 0,01 g, 2 x až 25 x xxxxxx xx 500 ml baňky x xxxxxxx dnem xxxx Erlenmeyerovy baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 xx xxxxxxx sulfidu xxxxxxx (3.6). Připojte xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x ponořte xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx a xxxxx xxxxx ochlaďte xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx do 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) nebo xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x kombinovaných xxxxxxxxx xx xxx být xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě emulzí) x xxxxx opakovaným xxxxxxxx s xxxxxxx 100 ml dávkami xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte dolní xxxxx xx tvaru xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tak, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx tlaku z xxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx petroléteru xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx a převeďte xxxxxx vrstvu do xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x přidejte xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxxx nálevky.
Promyjte kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx jak xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx sucha na xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx vakuové odparky. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx v xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx HPLC
Vitamín X xx oddělen na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx UV xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx získaného x 5.4 a vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) xxxx XX detektor (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, ekvivalent 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx ml. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μg/ml DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx střední xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx xxxx xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx v xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx měla xxx xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x metanolu (3.3) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx připraven před xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx do sérií 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy). Za xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (ploch) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 UV xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx xxxxxxxx x xxxxxx XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx extinkce 0,6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx jako α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx X x x xx/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E x xxxxxxx vzorku (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx analýzu xxxxx překročit 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX může xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- a δ xxxxxxxxxx je možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
CVr [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx použití
Tato xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván při 110 °X xx 20 hodin. Po xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx podmínek x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní xxxxxxxxxx xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx xxx dbáno, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx BaCO3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX stupeň
3.9 Petroléter, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x NaOH (3.5) xx vodě x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx HCL (3.7) x doplňte xx 1 l xxxxx.
3.12 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx do 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX po xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx odměrné baňce x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 g 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) ve 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx nebo xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x šroubovacím xxxxxxxx
4.5 Membránový xxxxx, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Vířivý xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx rozmělněn xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx vlhkost, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx xxxx xxx xxxx mletím xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 1 mg příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx koncentrovaného vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx orto-fosforečné, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 za xxxxxxx hydroxidu sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 a 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx objem xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx několik ml xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx skladovány xxx 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte s xxxxxxxxx na 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx obsah dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx vody. Promíchejte xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx potažený xxxxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Přeneste xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí xxxxx x xxxxx na 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx pod 100 °C. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx do xxxxx xxxxx 30 xx xxxx o xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x upravte xX na 3,0 x xxxxxxxx HCL, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx koncentraci mezi 10 x 30 % xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné baňky x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte vodou xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 ml). Xxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx do xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx xxx, mohou xxx skladovány xxx 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 nm, xxxxx: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μl
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × B × X × X × X × MW / X × G × X × 10&xxxx;000 × X = x xxxxxxxxxx xx 100x vzorku
A = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx standardu (3.17)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
C = objem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) přidaný xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního standardního xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) nebo xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, extraktu (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) v ml (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx x x (opravená xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx vzorek xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x vyššího xxxxxxxx.
8. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx byly xxx xxxxxx analyzovány xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx prováděny x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx xxx xxxxxx byly analyzovány xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx xx xxxxx |
Xxxxxx 5 Směs xxxxxxx xx sójou (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [g/kg] |
0,018 |
0,048 |
|
R [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx xxxxxxxxx. Výsledky xxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx rybí xxxxxx (CRM 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx nebo obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °C |
||
|
Mobilní xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx program: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx typu XXXX kolony x xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní čáru xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx důležité, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx chromatografovány, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx doba běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx vymytí všech xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ovlivňovat xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, by měl xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx odezvu. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxxxx (normální) koncentrací xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) buď xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) xxxxxx xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (vysoké), xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx velikosti x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx barnatý
Stářím xx xxxxx hydroxid xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx roztoku xxx stanovení xxxxxx XXXX, což xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).