Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/XX
xx xxx 6. července 2000,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx metody Společenství xxx stanovení vitamínu X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx se zavádí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska [2], x zejména xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx zjištění, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro odběr xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 o xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) č. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxxx X musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx látky xxxxxxx xx premixů x xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx krmných xxxxx xx trh [5], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX ze xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx zvláštním xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny analytické xxxxxx pro kontrolu xxxxxx xxxxx.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx kontroly xxxxxx xxxxxxxx A, vitamínu X x tryptofanu x krmivech a xxxxxxxxx prováděly xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx xxxxxxxx přijatá xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské státy.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (retinolu) x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxx izomery, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (IU) na xx. Jedna XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín X xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X je xxxxxxxxxx do petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X se stanoví xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx varu 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 ml
3.5 Xxxxxx askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx pro HPLC: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.11 All-trans-vitamín X xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx aktivity, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 ml xxxxxxx baňky. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitát, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx se zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxx (výkonnostní xxxxxxxxx: xxxxx jednotlivý xxx xxx xxxxxxx izomery xxxxxxxx za podmínek XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z opakního xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte se xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 mm, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X, odvažte x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx roztoku xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce a xxxxxxx baňku xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxx pod pomalým xxxxxxx dusíku. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 ml vody x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx dekantací xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x převeďte výplachy xx dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx vody x xxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně dvě xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 ml petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává bezbarvá xx přídavku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx suchý skládaný xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx všechna xxxxxxxxxxxx voda xx 500 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.3), nahraďte xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx postranního xxxxxx, xxxxxxxx vrchní vrstvu xxxxxxxxxxx do 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) Přidejte 100 xx petroléteru (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), potom xxxxxxx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx vrstvy petroléteru xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak je xx popsáno v 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx atmosférický xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx baňku xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Odstraňte zbývající xxxxxxxxxxxx proudem dusíku (3.10) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x koncentrace xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Podmínky XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (objemově + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X acetátu (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X palmitátu (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx petroléterem (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx A/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní roztok xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 ml xxxxxxx baňky, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je 56 XX xxxxxxxx A xx ml.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx zředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx výšky píků (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní roztok xxxxxxx A acetátu
Pipetujte 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxx xx 25 xx odměrné baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm a 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Standardní xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu A
Pipetujte 3,0 ml nezředěného xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X, připraveného xxxxx 5.6.1 do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 xx tohoto xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1 821 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci xxxxxxx xxxxxx v XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x IU/kg ve xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x nízkou koncentrací xxxxxxxx A xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx petroléteru dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx přibližně 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x ostatních xxxxxxx xxxx xx měla xxx xxxx saponifikace xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx být xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx izomerů xxxxxxxx xx možné x použitím normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx použito přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx laboratoří
n: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
CVr [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
CVR [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
ČÁST X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx E x xxxxxxxx a premixech. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx kg. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx extrahován xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno odpařením x zbytek se xxxxxxxx x metanolu x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx účinné xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 mg, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 ml xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx po značku xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX kontrola – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x adaptérem pro xxxxxxxx trubici plynu
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka vybavená xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, nebo xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx může xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 ml baňky x xxxxxxx dnem xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx stálého xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx BHT (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx sulfidu sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x baňce x ponořte baňku xx vodní lázně x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte k xxxx x nechejte xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx přidejte 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 minut za xxxxxxx míchání xxx xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx vypláchněte xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx a obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx měl být xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx nálevce dvakrát 100 ml xxxxxxx xxxx xx současného xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx emulzí) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s dalšími 100 xx dávkami xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx obyčejně dostačující). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx petroléteru (3.2), doplňte po xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x dobře promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8)
Když xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x nasměrujte dolní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, aby xxx právě xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx z xxxxxxx dusíku do xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x dobře xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx x převeďte xxxxxx vrstvu do xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx postup xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx nálevky.
Promyjte kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx je xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx popsáno.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx xxxxx ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Obnovte xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx dusíku (3.9) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 ml) xxxxxxxx (3.3) (koncentrace XX-α-xxxxxxxxxx by xxxx xxx v rozsahu 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx na xxxxxxxx fázové koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx výšky xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx shodné xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (DL-α-tokoferol xxxxxxx nebo DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2. Xxxxxxxx extrahujte xxxxxxxxxxxx (3.2) podle 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx tohoto xxxxxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx rozpusťte xxxxxx x 25,0 xx netanolu (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, ekvivalent 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) a promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x stanovte střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační graf.
5.6.1.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) na 25,0 ml etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte xxxxxxx 2,0 ml zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx baňky, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 xx etanolem x xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx jako α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E x x xx/xx xx xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 U vzorků x nízkou koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx podle 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx BHT (3.12) a skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx doba skladovatelnosti xx čtyři xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito přibližně 150 xx kyseliny xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [mg/kg] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- a X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tryptofanu je xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahříván při 110 °C po 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu je xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx podmínek x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a vnitřní xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx x hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-methyl-tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být dbáno, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx rušit stanovení) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Petroléter, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, c = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx vodě x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 ml HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx HCL (3.7) x doplňte do 1 l xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x tryptofanu (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX po xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx roztok, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx odměrné xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx dobu xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx vodou (3.1) x metanolem (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx > 98 %
3.21 Roztok 1 x 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx fáze xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 ml xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro XXXX se spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx nebo xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Polypropylenová xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Mechanická xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 0,5 xx. Vzorky, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx usušeny xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx musí být xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x přesností na 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 mol/l (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 minut x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx magnetického xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pipetujte 10,0 xx roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x konečném xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x zřeďte xxxxx xx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μm (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx extrakty xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxx dusíku xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (4.8) xxxx magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx autoklávu (4.6) x vroucí xxxxx x párou na 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °C xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx xxxxx pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx ve vodní/ledové xxxxx po dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x xxxxxxxx HCL, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx do xxxxxx XXXX přefiltrujte xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Pokračujte x chromatografii xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Pokud xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx xxx, mohou xxx skladovány xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx doba xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 nm
Vstřikový objem: 20 μx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X × B × X × X × X × XX / X × G × X × 10&xxxx;000 × X = x xxxxxxxxxx xx 100x xxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
B = xxxxxx píku xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = objem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního standardního xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 ml) nebo xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha píku xxxxxxxxx standardu, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) v ml (= 2,00) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx xxxxxx x x (xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, jestliže xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx hmotnost xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx spolupráce Společenství (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx prováděny x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [g/kg] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
CVR [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Výsledky jsou xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: koeficient xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx se sójou |
Vzorek 5 Xxxx pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx xx x xxxxx laboratořích s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx uvedeny v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Vzorek 2 Nízko-tučná rybí xxxxxx (CRM 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx odstředěné xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [g/kg] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
CVR [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: |
125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 mol/l XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + objemově) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 min. |
60 % X |
40 % B |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx podle typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx tryptofanem x xxxxxxxx standardem. Xxxxx xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx standardu xxx xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx píků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx tryptofanu, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (jsou) příliš xxxx (malé) xxxx xxxxxx vysoký (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx barnatý
Stářím xx stává hydroxid xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx roztoku xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx může x tryptofanu způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Verband Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).