Směrnice Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX ze xxx 20. července 1970, xxxxxx xx zavádí xxxxxx xxxxxx vzorků x analýzy Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Finska x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, xx úřední xxxxxxxx krmiv xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx odběr xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) č. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx na xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx xxxxx přidány xx xxxxxxx a xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. dubna 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX ze xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxx krmiv.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Členské státy xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x tryptofanu x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami xxxxxxxxxxx v příloze.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x účinnost xxxxxx a správní xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy používat xx 1. xxxx 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici nebo xxxx xxx takový xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx si xxxxxxx členské xxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. července 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Úř. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX A STANOVENÍ XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast použití
Tato xxxxxx xx určena xxx stanovení xxxxxxxx X (xxxxxxxx) v xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx alkohol a xxxx xxx izomery, xxxxx xx stanoví xxxxx metodou. Obsah xxxxxxxx X je xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín A xxxxxxxx nebo 0,344 μx all-trans-vitamín X xxxxxxx nebo 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx x, pokud xx to nutné, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X se xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Chromatografické xxxxxxxxx xxxx vybírány xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxx x jeho xxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Petroléter, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 ml
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (viz 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x v xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-xxxxxxxx
3.9 Xxxxxxx xxxx pro XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx aktivity, např. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx A palmitát, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 mg 80 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (3.12) do 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx A na xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x plochým dnem xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Allihnův xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx pro kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxx (výkonnostní parametry: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx izomery xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 UV xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením vlnové xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 mm křemennými xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (viz xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx vybavená xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx trubice xxxx mít xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx na opačném xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (za použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, nebo nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fólií) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x baňce x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx x varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx stálého xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx dusíku. Potom xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na pokojovou xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx vody xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx baňku postupně 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x převeďte výplachy xx xxxxxx xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x etanolu v xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx x nechejte xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3)
Když xx xxxxxx oddělily (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx kombinované xxxxxxxx x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx zabránilo tvorbě xxxxxx) x potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (čtyřnásobné xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx extrakčního xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx postranního ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx baňky xx tvaru hrušky (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx do xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x odpojte xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx měla xxx x xxxxxxx 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x koncentrace xx xxxxxx pomocí XX detektoru (325 xx) xxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx vstřiků xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx poskytují xxxxxx výsledky.
Kolona pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově)
Úroveň xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 ml xxxxx s plochým xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.2, xxx bez xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx petroléterem (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx vakuové xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) a xxxxx rozpusťte zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 560 XX xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní roztok xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 ml xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx 20 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx značku metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx je 56 XX xxxxxxxx A xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx roztoků xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx použití xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výsledkům XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX standardizace standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx. Pipetujte 3,0 xx tohoto zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx ml. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx být xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1 530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx ml. Změřte XX xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx X
Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1 821 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro roztok xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x IU/kg xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx které:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v IU/ml
V1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx roztoku xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx analýzu xx xxxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx fázové xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx být použit xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx může xxx použito xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného může xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
n |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
střed [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx E x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx kg. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a vitamín X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxx odpařením x zbytek xx xxxxxxxx x metanolu x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx požadovanou koncentraci. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Etanol, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 až 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (viz 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx pro HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.9 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol xxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu: Xxxxxxx x přesností na 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx odměrné xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku obsahuje 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx. (UV xxxxxxxx – viz 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (UV xxxxxxxx – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, délka izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Schleicher &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX výbava xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Xxxxxxxx odměrný xxxxx o xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx ramenem a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx mít spodní xxxxx ve tvaru xxxxxxx U a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx kapaliny ve xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx nálevky.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je xxxxxxx xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx nádobí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx občasným povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x až 25 x vzorku xx 500 xx baňky x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 xx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Připojte kondenzátor (4.3) k baňce x ponořte xxxxx xx xxxxx xxxxx x magnetickým míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx pět xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx kondenzátor xxxxxxxxx 20 ml xxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx celkovým xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) a xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx a etanolu x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Třepejte xxxxx xxx minuty x xxxxxxxx ustát xxx xxxxxx.
5.3.1 Extrakce x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru do xxxxx xxxxxx nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx dávkami xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx opakovaným xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx fází (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx a xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx skleněného xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx dolní xxxxx ve tvaru xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx právě nad xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, převeďte xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx x dobře protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx oddělit xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx xxxxxxx petroléteru (3.2) x přidejte xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x pokračujte xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při teplotě xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by xxxx xxx v rozsahu 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx UV xxxxxxxxx (292 nm) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x vymývejte xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních roztoků (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovních xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak je xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x doplňte xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (viz 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx dusíku (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx na xx, ekvivalent 50 μx DL-α-tokoferol acetátu xx ml. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 x 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 a 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační graf.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx po xxxxxx metanolem. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx ml, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx standardního pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, doplňte po xxxxxx metanolem (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) narýsujte xxxxxxxxxx graf.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 nm x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum xx xxxx xxx při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by xxxx xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E x x xx/xx ve xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · x [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 x ml
m = hmota zkušební xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx E xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx neobjeví xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), k xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Po xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx acetátu xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx XXX (3.12) x skladujte xxxxxx v chladničce (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX xxxx xxx použit hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx je xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Namísto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Nerozlišuje xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Princip
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 hodin. Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx kyselých xxxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a vnitřní xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx detekcí.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx voda xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx používána (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx látka: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený pod xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu barnatého (xxxx xxx dbáno, xxx xxxxx Xx(XX)2. 8 X2X nadměrně xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxx BaCO3, xxx xxxx rušit xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x20 = 1,19 g/ml
3.8 Metanol, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx orto-fosforečná, x = 0,5 mol/l:
Vezměte 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx tryptofanu (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx maximálně čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-methyl-tryptofanu (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) a doplňte xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztok tryptofanu x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15), x 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx přípravy chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Roztok 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Doplňte xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, C18, velikost xxxxxx náplně 3 μx xxxx ekvivalent
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Membránový filtr, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x xxxxxx 0,5 xx. Vzorky, xxxxx xxxx vysokou vlhkost, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx buď xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx zmrazením. Xxxxxx x vysokým obsahem xxxx xxxx být xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (extrakt)
Odvažte x přesností xx 1 xx příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) a 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pipetujte 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx (3.8), xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx standardní xxxxxx (3.17)).
Xxxx vstříknutím xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx standardní xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx analyzovat xxxxxxxx xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (hydrolyzát)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Odvážená xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx vířivém xxxxxx (4.8) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Ponechejte xxxxxxxx xxxxxxxx magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx nádoby 4 xx xxxx. Našroubujte xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x xxxxxx vodou x xxxxx xx 30–60 minut. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °C xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx snižte xxxxxxx právě pod 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx protřepávejte, xxxx míchejte. Xxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx/xxxxxx xxxxx xx dobu 15 minut.
Potom přidejte 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx lázni x xxxxxxxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx objemu x xxxxxx vodou xx definovaný xxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX přefiltrujte několik xx roztoku xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Pokračujte x chromatografii podle xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X po xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.4 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že poskytují xxxxxx výsledky (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 mm, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μm nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) v xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx do 1000 ml xxxxx (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx běhu: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × C × X × X × XX / X × X × H × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100g vzorku
A = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = objem roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = koncentrace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) v μmolech/ml (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx hydrolyzátu (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
H = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) x xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx v x (opravená na xxxxxxx hmotnost, jestliže xxx vzorek xxxxx x/xxxx odtučněn)
MW = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx byly xxx xxxxxx analyzovány ve 12 laboratořích x xxxxxxx metody xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx zadržených eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx pro prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx výsledky
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx sójou |
Vzorek 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Společenství byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx až v xxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx předkládajících xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odlehlých xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace opakovatelnosti, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Vzorek 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Xxxxxx moučka (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující specielní xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: |
125 xx x 4 xx, C18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx nebo xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Metanol |
||
|
Gradientový xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 min. |
100 % A |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx typu XXXX xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx systém xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx produkty xxxxx odděleny xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx standardu xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx doba běhu xxxx dostatečně xxxxxx xxx vymytí xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx xxxx pozdního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx chromatografie.
V xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxx HPLC/flourescenčního xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx vnitřního xxxxxxxxx xx (xxxx) příliš xxxx (xxxx) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx změněným konečným xxxxxxx.
9.3 Hydroxid xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx xx projevuje x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx pomocí XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).
[2] Řízené xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).