Směrnice Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx klasifikace, balení x označování nebezpečných xxxxx [1]
(Text x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných látek [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Xxxx 1999/33/XX [3], a xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx xxxxxxx:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x ekotoxicity xxxxx x xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tuto xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS ze xxx 24. listopadu 1986 x sbližování xxxxxxxx a správních xxxxxxxx xxxxxxxxx států xxxxxxxxxx xx ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx pokus, xxx xxxx má xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx xx přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx překážek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx části X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení souladu x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice, x xxxxxxxxxx tabulku mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ustanoveními.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Xxxxxx
[1] Přijato xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx účinky xx xxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx modelu xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Validační xxxxxx XXXXX prokázala, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx umožnil xxxxxxx xxxxxxxx stupně xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx způsobující xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x xxxxxxx látky xxxxxxxxxxx poleptání xxxx, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; volba xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození kůže xx aplikaci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx na epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (stratum xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou xxxxxxx. Xx zkušebního xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx zařadit stupeň xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků získaných xxxxx xxx tyto xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) potkanů (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx kmen). Xxxxxxx a xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx poté xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx xx testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx bakterií). Zvířata xx třetí x xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x použijí xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx kůže xxxxx xxx použita xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata se xxxxxxx usmrtí. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx kůže x xxxxxxxxxx xxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx teflonové (PTFE) xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx s trubičkou. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx xxxx xxxxxxxx, x přebytek xxxxx xx ořízne. Rozměry xxxxxxxx a O-kroužku xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pokryje xxxxxxx xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení pevných xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx xxxxx přidá xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) a trubička xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx x maximálnímu xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx prášek.
Ke xxxxxxx xxxxx látky xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx zcela odstraní xxxxxxx tekoucí xxxx x xxxxxxx nejvýše 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx látek, xxxxx x trubičce xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (např. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx se povrchové xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx dostatečného objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX). Elektrody xxxxxx xx umístí xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx za účelem xxxxxx odporu v xΩ/xxxxxx kůže (xxxxxxx 2). Rozměry elektrod x délky xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxxxxxx xxxx uvedeny xx obrázku 1. Xxxxxx vnitřní (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x horní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx zajištěno, xx xx xxxxx části xxxxxxxxx ponořené v xxxxxxx síranu xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (tenká) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxx teflonové xxxxxxxx xx udržuje konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx hodnota xxxxx xxx 20 xΩ, xxxx to xxx xxxxxxxxx vrstvou xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. O xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx např. xxx, že xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxx x 10 s xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x měření xx xxxxxxx s xxxxxxxx síranem hořečnatým.
Výsledky XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontroly spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x přístroje xxxx doporučeny tyto xxxxxxxxx látky x xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky x xxxxxxxxx organické látky
Jsou-li xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky xxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx nebo xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx průniku barviva. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X
Xx předchozí aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx na 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx kůže se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x nejvýše xxxxxxxx teplotě, xxx xx odstranilo veškeré xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx kůže xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxx trubičky x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou xxxx (8 xx). Lahvičky xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování xx xxxx xxxxxxxx, a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % xxxxxxx (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (SDS) x destilované vodě x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °C. Xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x zlikvidují x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx zředí 4 xx 30 % (m/V) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx barviva
Obsah xxxxxxx sulforhodaminu B xx xxxxxx xxxx xx vypočte x xxxxxx A (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx vypočte xxx xxxxx xxxxxx xxxx a xxxx xx xxxxxxx jeho xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina chlorovodíková (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx aplikovat xx xxxxxxx xxxx na xxxxxx xxxx (např. 2 hodiny), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx ty xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxxxx. Validační xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek při xxxxxx aplikaci xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx vliv xx získané xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx předpověď xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxxx xx zařízením x xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x určit xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata zkušební xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx až xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx kůže sestávající x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x funkční rohovité xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx jsou xxxxxxx proniknout xxxxxxxxx xxxxxxx (difuzí xxxx xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Modely xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx pocházet z xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Model xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x vrstvu xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná. To xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx. Musí xx xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých buněk x xxxxxx xxxx xxx dostatečně vysoká, xxx bylo možné xxxxx rozlišit xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx absorbance A) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx v mezích xxxxxxxxxxxx xxx daný xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Nejdůležitější xxxxxx xx, xxx xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx zkoušené látky, xxx pokrylo xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx kůži, a xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx použitelná xxx široké spektrum xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx expoziční xxxx musí být xxxxxxxx materiál x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx níž xx v různých xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx výsledky (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX o koncentraci 0,3 mg/ml při xxxxxxx 20-28 °C xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (rozpouštědlem) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 nm.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx zaznamenání xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx xxx. budou xxx xxxxx xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx ve validační xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx široké spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx validační studie xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x předcházející xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx xxxx potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx údajů x xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx experimentech, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška s xxxxxxx lidské kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx A x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v procentech xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xx xxxxx tabulky.
2.2 Hodnocení x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ a xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, xxxxx dávají xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovné 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx získanému xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx je xxxx xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxx střední obsah xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl, xx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní, x xxxxx tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; hodnoty xxxxxxxxxx X dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx životaschopnosti xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), musí xxx xxx xxxxxxxxxxx model xxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx metody a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx potvrdit, xx xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx alespoň tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Podobné informace xx měly xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- podrobnosti xxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- popis jakýchkoli xxxxxx pozorovaných účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. E. B., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Earl, X. K., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, M. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Barratt, X. D., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Gerner, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Toxicology xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Rhodes, X. (1986), An in xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Hall, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, X. C., Xxxxxxxxx, D. A., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), The xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx of xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. H., Balls, X., Xxxxxx, P. X., Curren, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, M. (1998), Xx evaluation xx xxx xxxxxxxx XXXX testing xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxx, X. X., Gordon, X. X., Hildebrand, X., Lewis, X. X., Liebsch, M., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Balls, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx xxx recommendations xx ECVAM xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 FOTOTOXICITA — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a následné xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx slouží x xxxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx může xxxxxxx xx xxxxxxxx látky xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX záření xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx vyvolané kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, xxx xxxxxxxx identifikovat xxxxxxxxxx, xxxxx jsou fototoxické xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xx xxxx, a xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx působí xx nanesení xx xxxxxxx jako fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx byla xxxxxxxx x validována x xxxxx spojeného xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx platnou alternativu xx vitro k xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Výsledky xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx ukázala xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového nebo xxxxxxxxxxx světla xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx povrchu, xxxx. J/m2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx de l'Eclairage): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Používají se xxxxxx jiná označení: xxxx hranice mezi XXX a XXX xx často xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x xxxxx UVA xxxx být xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 s xxxxxxx xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. příjem vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx červeně xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x poměru x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, xxxx xxx UV), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx zkoušeným xxxxxxxxx látkám.
Předpovědní model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in vitro xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX a xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx stejně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx UVA/VIS xxxxxxx (+ XX) a xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx závislosti účinku xx koncentraci xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: akutní xxxxxxx reakce, vyvolaná xx první xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Fotoiritace: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které se xxxxxxxxx xx kůži xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx nebo xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxx tím, xxx xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx z genového xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx látky. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx tumoru xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx xxxxxxxxx látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx xxx souběžně xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, je pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx látek (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (např. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nemusí xxx zkoušena xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinky (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři mechanismy, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx k poškození xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx zkoušení x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XXX/XXX xxxxxx x xxx této xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx vyjádřena xxxx koncentračně závislé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x ozáření.
Buňky Balb/c 3X3 se 24 x kultivují, aby xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx destičky xx xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx xx poté 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx udržuje x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou z xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx (+ UV) a xxx xxxxxxx (-UV), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx x neexponovanými xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx buněk xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xx xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Buňky xx xxxxxx xxx intenzitě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 až 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se stanoví x den později xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx xxxxxx životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx vždy po xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx negativní kontroly xx UVA xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx bez xxxx vykazují při + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x tomtéž rozpouštědle xxx xxxxxxxxx experimentu x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních kontrol xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxx xxx zkoušky obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Zkouška splňuje xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX neexponovaných kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xxxx xxx souběžně xxxxxxxx xxxxx fototoxická xxxxxxxx látka. Při xxxxxxxxx studii EU/COLIPA xxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola chlorpromazin (XXX), x je xxxx doporučen. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx CPZ xxxxxxx (+ UVA): EC50 = 0,1 xx 0,2 μg/ml, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx typu nebo xxxxxxxxxxxx hodnocené zkoušené xxxxxxxx látky. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx účinek).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx studii xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx linie xxxxxxxxxxx — Balb/c 3T3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, nebo x xxxxx ECACC a xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxx kultivační podmínky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x měly xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx být xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x pasáže x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx než xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 na UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Balb/c 3X3 se xxxxx x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx vlhčené xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště důležité xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx cyklus xxxxxx dosavadního rozpětí xxx xxxxxxx buňky xxxx xxxxxxx linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx nasadí do xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx hustotě x xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx před xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx po 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx inokulum 1 × 104 xxxxx xx jamku.
Pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx je xxxxx z destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x temnu (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx in xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx chemická xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xx vivo xxxx xx vitro xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx transformace. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxxx xxxxxxx provedena xx systémem xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické látky xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, pokud údaje x xxxxxxxx neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světlem.
Zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx ve fyziologickém xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), který xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100násobek požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx měly xxx xxxxxxx v xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, tj. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. aceton), xxx xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx radikálů.
Je-li xxxxx, xxxx být pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj xxxxxx: xxxxx vhodného zdroje xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx pásmu xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření x xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx a xx přímo vysoce xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 nm x 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx měla xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx zdroj xxxxxx xxxxxxxxx světlo x xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, x aby xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx po přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx detekci xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx dále xxxxxx xxxxxxxx poškozovat testovací xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx za optimální xxxxx světla. X xxxxxxxxx simulátorech xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx x xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx méně xxxxx x xx xxxxxxxx, avšak xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx XXX záření, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vysoce cytotoxické xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx by xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx použitého xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: intenzita xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx každou zkouškou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. UV-metr xxxx xxx pro xxxx xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx být x xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 xxxx xxx validační xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx buňky Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx k xxxxxxxx x slabě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx buněčná xxxxx xxxx jiný xxxxxxxx xxxxx, může xxx xxxxx UVA záření xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních fototoxinů. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / intenzita xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xx neměla xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x bez xxxxxx (-XXX) by xxxx xxx náležitě stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Xxxx by xxx použita geometrická xxxx koncentrací (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx pouze xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx dvě xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx nedosáhnou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx xxxxxxxxxx médium x xxxxx dekantuje x každá jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x ozářením XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx víčko 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vody xxx víčkem, větrá xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx odstraní x xxxxx jamka xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % CO2, 37 °X).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx způsobené xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx předehřátého XXXX/XXX x promývací xxxxxx xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μx xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °C xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxxxxxx x buňky xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x zcela xxxxxx (případně xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 min. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx se NR x xxxxx nevylouží x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x počítači pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a množství xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx smysluplnou xxxxxxx xxxxxxxxxx odpovědi na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, měl xx být rozsah xxxxxxxxxxx a interval xxxx xxxx nastaven xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Vzhledem x xxxx, že xx zkoušená chemická xxxxx nemusela xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx experiment x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, ale xxxxx xx xxx vysoce xxxxxxxxxxx xx ozáření (+XXX), může xxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx xxx v xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx splněn xxxxxxxxx uspokojivé xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx až xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx xxx dále xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx hlavní experiment xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx považováno xx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx této zkoušky xx příprava roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx faktorem xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx ozářením. Zkrácení xxxx může xxx xxxxxx x chemických xxxxx nestálých xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx metod xxxxxx proložení (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 pro další xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx proložení. Xxx výpočet XX50 xxx popřípadě použít xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx papír (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení výsledků (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx v xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx bez xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx chemická xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX vypočítat, xxxxxxx xxx o xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -UV zkouška xx xx nejvyšší xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x xxxx hodnota xx xxxxxxx pro xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; PIF", předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx hodnota &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx nevykazuje xx do xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ XX), svědčí xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx předpovědí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
V xxxxxxxxx b) x x) xx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx opatrně xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model verze 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxx studie XX/XXXXXX (15) a byl xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx chovají xxxx XX filtry (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μg/ml, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx, xx látka bude xxxxxxx za různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx vivo. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx pouze při xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, např. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže in xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxx xx použitých xxxxxxxx fototoxická. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx zkoušet chemickou xxxxx xx xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx chemická xxxxx nemá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx vivo xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, kdy xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Není-li xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+UV x -XX) a jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx zkouška pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. xx xxxxxxx modelu lidské xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx volby xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx buněk,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, je-li známo,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx podmínky x) — inkubace xxxx aplikací a xx xx:
- typ x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- délka inkubace (xxxxxxxxxx xxxx inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx XX/XXX, tak xxx něj,
- v xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx cytotoxická, zdůvodnění xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x složení xxxxxxxxxx xxxxx (pufrovaný xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- délka xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky ozáření xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- vzdálenost xxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- intenzita xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX světlu,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × xxx), xxxxxxxxx x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení média XX,
- xxxx inkubace XX,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- xxxxxx xxxxx použitá pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx délka, je-li xxxxxxx,
- složení xxxxxxx xxxxxxx xxx spektrometrii, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx při každé xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX x -UVA,
- xxxxxxx křivek závislosti xxxxxx xx koncentraci: xx-xx to možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- srovnání obou xxxxxx závislosti xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxx x xxxxxxxx XXX/XXX x xxx něho, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (XXX),
- klasifikace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (absorbance xxxxxxxx NR) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxx, X., Klecak, X., L'Eplattenier, X., Xxxxxxx, M., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Pape, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Balb/c 3X3 xxxx phototoxicity assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Statement on xxx scientific validity xx xxx 3X3 XXX PT xxxx (xx xx xxxxx xxxx for phototoxicity), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx DGXI/E/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Holzhütter, X. X., Clothier, X., Desolle, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. M., Xxxxx, X., Sladowski, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx XX (xxxxx trial), part 1: the 3X3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Xxxxxx xx xxx XXXX Xxxxxxxx on Harmonisation xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. W. (1993), A scheme xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx potential, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, X. (1972), List xx xxx xxxxxxxxxxxx substances, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Xxxxxxxxx, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xöxxxx, X., Johnson, X. X., Maurer, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. X. X., Xxxxxx, O., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx report xxx recommendations xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Photosensitization. X: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx York, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx phototoxicity testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. N. Xxxxxxxx, H. X. Xxxxxxx eds.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Washington XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx spectra xxx xxxxx xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx keratinocytes, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Operating Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Management Xxxx of xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. W., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Study xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX xx the XX Directive 76/768/EEC xx xxx 3X3 XXX Xx Vitro Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx cellular xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx vitro phototoxicity xxxxxxx xxxx xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx its use xxx xxxxxxxxxx the xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ATLA 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Další xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x literatuře (12).