Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x označování xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na směrnici Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. června 1967 o sbližování xxxxxxxx a správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Evropského parlamentu x Xxxx 1999/33/XX [3], a zejména xx článek 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx důvodům:
(1) X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX xx stanoví xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, toxicity x ekotoxicity xxxxx x přípravků. Je xxxxxxxx přizpůsobit tuto xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. listopadu 1986 x sbližování xxxxxxxx x správních xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx být xxxxx, xxx němž má xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx rozumně x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx xx xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx stanoviskem Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic x xxxxxxxxxx technických překážek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx příloh X x II xxxx směrnice xx xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx státy.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, které přijmou x xxxxxxx působnosti xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x platnost xxxxxx dnem xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 25. xxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx po dvacáté xxxxx.
[2] Úř. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX I
"B.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Dvě zkoušky xx xxxxx xx xxxxxxx účinky na xxxx na principu xxxxxxxxx transkutánního elektrického xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) a zkouška x využitím xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx alternativních xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako vědecky xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX xxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxxx rozlišit známé xxxxx leptající x xxxxxxxxxxx kůži. Xxxxxxxx x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx účinků (známé xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; volba xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx uživatele.
Viz xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx aplikaci zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz body 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx na epidermální xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx TER pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx a nedráždivé xxxxx nesnižují XXX xxx xxxxxxxx hodnotu. Xx zkušebního xxxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx chemických xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx srovnatelný xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným xxxxxxxx, xxxxxxx se testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx antibiotik (obsahujícího xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x koncentracích xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx třetí a xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx znovu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 xxx (x přípravě xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx zvířete se xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx tuk se x kůže opatrně xxxxxxxxx. Kůže xx xxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx konec trubičky xx těsně xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, xxx xxxx xxxx upevněna, x xxxxxxxx tkáně xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx a X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pokryje xxxxxxx xxxxxxxx. Trubička držená xxxxxx pružinové xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (obr. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Poté xx xx povrch xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x trubička xx lehce protřepe. Xxxx látkami a xxxx xx mělo xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx toho xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx se xxxxxxxx xxxxx roztavila, xxxx rozemletím na xxxxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 h (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx nejvýše 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (např. XXX 401 nebo 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % ethanolu xxx, xxx byla xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx přidáním 3 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx na xxx xxxxxx terčíku xxxx xx účelem xxxxxx odporu v xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Rozměry xxxxxxxx x xxxxx exponovaných xxxxx elektrod pod xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (silné) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x horní xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx části xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx síranu hořečnatého xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx dně xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx svorky x xxxx xxxxxxxxx trubičky xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx vzdálenost má xxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx naměřená xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může to xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx vrstvy xx xxx xxxxxxx např. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička zakryje xxxxxx v rukavici x 10 s xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx hodnoty) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx organické látky xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx nebo xxxxx 5 kΩ, lze xxxxxxx xx tkáni xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx terčíku xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx kůže xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx do xxxxxxxx (např. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx barvivo. Xxxx xxxxxx oplachování xx xxxx zopakuje, x xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx 60 °X. Xx xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx poté xxxxx 4 xx 30 % (m/V) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (A) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx a poté xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a přístroje xxxx xxx uvedení xxxxxxxxx xxxxx doporučeny xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx kůže xx xxxxxx dobu (např. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, které xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx zkoušených xxxxxxxxxx látek xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx správnou xxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx a rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx xxxx xx získané hodnoty XXX. Xxxx 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx zařízením x xxxxxxxx, jež xxxx xxxxxxx v xxxx xxxxxx. Doporučuje xx tedy xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx hodnotu odporu xxxxxxxxx xxxx referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx po xxxx 4 hodin xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx pokles xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx xx založena xx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx proniknout xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) x jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx určitá xxxxxxxx. Model musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x vrstvu xxxxxx buněk xxx xx. Bariérová xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Musí xx xxxxxxxx, xx model xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých buněk x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxx. ivotaschopnost xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, tj. měřením xxxxxxx absorbance X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (ve xxxxxxxx x životaschopností xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx být xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejdůležitější xxxxxx je, xxx xxxxx odpovídal mezinárodním xxxxxxxxxx xxx validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx materiálů musí xxx aplikováno xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné množství xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxx, xxx byl xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx látky xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxx materiál z xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx fyziologickým roztokem.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx životaschopnosti xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx redukce XXX, xxx xxx xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx roztoku XXX o xxxxxxxxxxx 0,3 mg/ml xxx xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx formazanu se xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X xxx xxxxxx xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x přesné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky životaschopnosti xxxxx. Doporučuje se, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx model byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardů xxxxxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx rozhodující, aby xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx laboratořemi reprodukovatelnost xxx široké spektrum xxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx validitu (2) x xxxxxxxx xxxxxx validační studie xxxx xxx publikovány xx vědeckém časopise x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx experimentech, o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx uvedeny xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
Xx-xx hodnota XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 kΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 kΩ x xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx látka žíravá.
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx neutrálních xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx dávají xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovné 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx střednímu xxxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxx je xxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxx xxx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl, xx xxxxxxx falešně pozitivní, x látka tedy xxxx žíravá.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x výpočtu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx být xxx předpovědní xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx metody x xxxxxxxx validační studie xxxx potvrdit, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Podobné xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxx referenční xxxxx, pokud xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx TER) nebo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- popis jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Archer, X. E. B., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. D., Xxxx, X. X., Esdaile, X. J., Holzhutter, X-X., Liebsch, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx by xxx Management Xxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Fentem, X. H., Xxxxxx, X., Walker, X. X., Xxxxx, X. X. (1998), Xxx XXXXX international validation xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx and distribution xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Pemberton, X. X., Rhodes, X. (1986), An xx xxxxx xxxx corrosivity xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, X. X., Xxxx, X. X., Dennett, R., XxXxxx, J. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, E., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx of xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Worth, X. X., Fentem, X. X., Balls, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx evaluation xx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. A., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. R., Xxxxxx, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, X. X., Liebsch, X., Xxxxxxxx, X., Osborne, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
PŘÍLOHA II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — ZKOUŠKA XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX IN XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx vyvolaná xx první xxxxxxxx xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx slouží x xxxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx látky xx spojení s xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x světla, lze xxxxxxxx identifikovat xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx fototoxické xx xxxx xx xxxxxxxxxx podání a xx nanesení na xxxx, a xxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx byla xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x cílem xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vitro pro xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxxx x x xxxxxxx a xxxxxxx xx ukázala pro xxxxxxxxx těchto účinků xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných nepříznivých xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky x světla, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže xxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx tyto specifické xxxxxxxxxx, bude ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxx xxxxxxxx x tomu, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 nebo xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx záření: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx XX xxxxxx: označení xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Commission Xxxxxxxxxxxxxx de x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 nm), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx se xxxxxx jiná xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx mezi XXX x XXX xx často používána xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx měří xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. příjem vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx postupem xxxxxxx (x XX, xxxx xxx XX), ale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx používaný xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xx předpověď fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX a xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx factor — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný srovnáním xxxx stejně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrací (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx při necytotoxickém xxxxxxx XXX/XXX xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx xxxxxx — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x bez xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx první xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxx těch xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které se xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (topické xxxx xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x nespecifickému buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx týdny xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx negenotoxické xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná opakovanou xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx UV xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxx každé xxxxxxx, xx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx x chemických xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx zaznamenány x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x oblasti slunečního xxxxxx. Xxxxx prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Grotthaus-Draperův xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx zvážením xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx než 10 l.mol-1.cm-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx fotoreaktivní xxxxxxxxx x nemusí xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx nebo xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx k xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx dávce XXX/XXX xxxxxx a xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx vitálního xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx působení xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx destičky xx xxxxx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 x preinkubují xxxx různými koncentracemi xxxxxxxxxx látek. Poté xx jedna ze xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x temnu (-UV xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (NRU). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se vypočte xxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx xxx hodnotě XX50, tj. při xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: citlivost xxxxx xx XXX by xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx později xxxxxxxx XXX. Buňky xxxxxxx kritérium jakosti, xxxx-xx xxxxxx životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 menší než 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx kontrola xx měla xxx xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX při xxxxxxxxxx zkoušce: zkouška xxxxxxx kritéria xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx v EBSS (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxx + UVA experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx neozářených xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 XXX) xxxxxx v extraktu XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zda 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxx xxx zkoušky obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx hodnota X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Při xxxxxxxxx studii XX/XXXXXX xxx použit xxxx xxxxxxxxx kontrola chlorpromazin (XXX), a je xxxx doporučen. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx CPZ ozářený (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx fototoxické chemické xxxxx vhodné x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx by xxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx údajů xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 a XXX xxxx XXX (střední xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx linie fibroplastů — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx XXXXX x xx xxxx doporučena. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx mohou xxx xxx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx předpokladu, že xxxx kultivační podmínky xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx by měly xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx kontaminovány xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx takové kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x tomu, xx citlivost xxxxx xx XX vzrůstá x počtem xxxxxx, xxxx xx být xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 z xxxxxx x nejnižším dosažitelným xxxxxx pasáží, nejlépe x nižší xxx xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx rutinní xxxxxxx xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx kultivační xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx jedná x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx media) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím sérem, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x streptomycinem a xxxxxxxx xx vlhčené xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště důležité xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zajistily, aby xxx xxxxxxx cyklus xxxxxx dosavadního xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx nasadí xx xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx buňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x takové xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx okamžiku, xxx xx po 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx destičkách je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx xxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx podrobeny celému xxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, kdy xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (+UVA/VIS) x xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx určených pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, pro jejíž xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxxx xx vitro xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx za xxxxxxxx xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx systémem xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Zkoušená chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skladování. Může-li xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxx být rozpuštěny xx fyziologickém xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), který xxxxx obsahovat proteinové xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx nerušily při xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx by xxxx xxx rozpuštěny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx měly xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (EtOH). Mohou xxx xxxxxxx jiná xxxxxx xxxx cytotoxická xxxxxxxxxxxx (xxxx. aceton), xxx měly by xxx xxxxxxx posouzeny xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx radikálů.
Je-li xxxxx, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx použito xxxxxxx x/xxxx ultrazvuk x/xxxx xxxxxxx na 37 °C.
1.7.1.6 Ozáření XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX a xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření x xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx a 280 xx 1000xxxx (11). Kritéria pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxxx, x xxx xxxxx světelného xxxxxx (xxxxxxxxxxx po xxxxxxxxxxx xxxx) byla xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx délky x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (infračervená xxxxxx), xx dále xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx za optimální xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx simulátorech se xxxxxxx jak xenonová xxxxxxx, xxx vysokotlaká xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx z xxxx xx tu výhodu, xx emituje xxxx xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx cytotoxické xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Příklad xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx filtrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí pravidelně xxxx každou zkouškou xxxxxxxxxxxx kontrolovat xx xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Funkčnost XX-xxxxx xx měla xxx kontrolována x xx xxxxx účelem xx xxxxxxxxxx použít xxxxx referenční stejným xxxxxxxx kalibrovaný UV-metr xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx případě by xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k měření xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 byla xxx validační studii xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx buňky Balb/c 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x slabě fototoxických xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx je xxxxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx dostatečná xxx xxxxxxx standardních xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.W xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx látky xxxx xxxxxxxxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací chemických xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) by xxxx xxx náležitě xxxxxxxxx x předchozích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx řady x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx tak, xxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Xxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx pokus). Xx zbývajících buněk xx xxxxxxx xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx připraví dvě xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x xxxxx xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, jejich přichycení x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx dekantuje x každá jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS obsahujících xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x temnu xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx zkoušky x ozářením XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx víčko 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx nedošlo xx kondenzaci xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx expozice XXX) v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx promyje dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Třetí xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx provádět tuto xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx experimentální xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx hodnocení cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx neutrální červeně.
Buňky xx promyjí 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μx xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx NR xxxxxxxx x buňky xx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx NR x xxxxx xxxxxxxxx x nevytvoří xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx vhodném xxxxxxx (xxxx. ASCII) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx analýzu xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx něho. Je-li xxxxxxxx cytotoxicita, xxx xx být rozsah xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx nimi xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx proložit experimentálními xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx být xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, ale xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx xxx v xxxx částech experimentu xxxxxxxx, řádově xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx experimentu (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, stačí xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx intervaly mezi xxxxxxxxxxxx dávkami xx xx nejvyšší xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledky xxxxxx být xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx hlavní experiment xxxxxxxxx jednou nebo xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx hraničních hodnot xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx považováno xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx xxxxxxxx změnit xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx této zkoušky xx xxxxxxxx roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx důvodu xxxx být změna xxxxxxxx (jiné rozpouštědlo, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx faktorem xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx ozářením. Zkrácení xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Zpracování výsledků
Je-li xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxx xxxxxxxx jiných xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx hodnoty XX50 xxx další xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kvalita proložení. Xxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxxxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Hodnocení výsledků (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx v xxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx (+UVA), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx hodnota XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX vypočítat, xxxxxxx xxx x výsledek, xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx se xxxxxxx -UV xxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx použije pro xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx hodnota &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx toho, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx hodnotu XX50 (+ UV), svědčí xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxx xxxxxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxx formální hodnota "XXX = *1";
(C) &xx; PIF = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx získat xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) a x) xx xxxx xxx pro předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx dosažené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: xxxxxxx světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx novou xxxxx xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx potenciálu, který xxx vyvinut x xxxxxxxx údajů z xxxxxxxxx studie EU/COLIPA (15) x byl xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx chovají xxxx XX filtry (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxx získat xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci. Xxx použití modelu xxx xx Humboldtově xxxxxxxxxx (Xxxxxx) vyvinut xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx volně x dispozici.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx bude xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx zkušební xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Ty xx xxxxx xxxxx xxxxx x penetraci, xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky v xxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx in xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (PIF &xx; 5 nebo XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxx xx použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx chemická xxxxx xxxx fototoxický xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxxxxx. X případech, kdy xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x EC50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Není-li xxxxxxx tomu xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx na xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, není xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo by xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx in vitro xxxx zkouškou xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx údaje x xxxxx XXX, je-li xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x čistota,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx studie,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- procentuální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx a xx ní:
- xxx x složení xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- v xxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x složení xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- zdůvodnění výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx charakteristiky xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx filtrů),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- vzdálenost xxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x této xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX světlu,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × xxx), xxxxxxxxx x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx udržovaných x temnu.
Zkušební xxxxxxxx x) — zkouška XXX:
- složení xxxxx XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxxxxx extrakce XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro spektrometrii, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- křivky závislosti xxxxxx xx koncentraci (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) získané xxx paralelních xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx: xx-xx to xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ozářením XXX/XXX x bez xxxx, x xx buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx photo xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx a) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx životaschopnost (absorbance xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx kontrolu, xxxxxxx xxxxxxx a směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), EC50 (-UVA) x PIF, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Klecak, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Willshaw, X. (1994), EEC/COLIPA project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx assay, Xxxxxxxxxx xx vitro 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX XX xxxx (xx xx xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxx Centre: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. X., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, X., Holzhütter, X. X., Clothier, X., Desolle, P., Xxxxxxxxx, F., Liebsch, X., Lovell, W. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Potthast, X. X., Xxxxx, X., Sladowski, X., Xxxxxxxx, W., Brantom, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3T3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx xxx OECD Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Validation xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Toxicological Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, G. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx substances, Xxxxxxxx progress in xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. W., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, X. A., Xxxx, X. J. X., Sapora, O., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Photosensitization. V: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (K. C. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx York, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx in xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxx xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. N. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, R. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx violet xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Cancer Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Phototoxicity Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Management Xxxx of xxx XX/XXXXXX project "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. X., Xx Silva, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, F., Liebsch, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Phototoxic Xxxxxxxxx xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX xx the XX Directive 76/768/EEC xx the 3X3 XXX In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. X., Quedenau, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxxx xx external xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), X xxxxxxx measure xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx curves xxx xxx use xxx predicting the xx xxxx phototoxicity xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x literatuře (12).