Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. dubna 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx právních a xxxxxxxxx předpisů týkajících xx klasifikace, xxxxxx x označování xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. xxxxxx 1967 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], a xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx důvodům:
(1) X xxxxxxx V směrnice 67/548/XXX se stanoví xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x ekotoxicity látek x přípravků. Je xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX ze xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiné xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx má xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x prakticky dostupná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Komise xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxx xxxxxx používána zvířata, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 xxxx. 1 směrnice 67/548/EHS.
(4) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx úseku xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do části X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Článek 2
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx státy xxxx xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx být takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx sdělí Xxxxxx xxxxx hlavních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které přijmou x oblasti působnosti xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 25. dubna 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx po dvacáté xxxxx.
[2] Úř. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX I
"B.40 LEPTAVÉ XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx zkoušky xx xxxxx xx xxxxxxx účinky na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx elektrického xxxxxx kůže potkana (XXX) x zkouška x využitím modelu xxxxxx xxxx byly Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx studie XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx zkouškami xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kůži. Protokol x xxxxxxx xxxxxxxx xx modelu xxxxxx xxxx dále xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx těžké xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx poleptání kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx je xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxx, xxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx až xx 24 h xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx usmrcených xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx xxxxxx (stratum xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou xxxxxxx. Xx zkušebního postupu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx literatura (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx strojkem. Xxxxxxx xx poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx třetí x xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x použijí xx xx 3 xxx (x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx použita xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxx přes xxxxx xxxxxxxxx (PTFE) xxxxxxxx tak, aby xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x trubičkou. Xxxx konec trubičky xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, xxx xxxx xxxx upevněna, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Rozměry xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx uvedeny na xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx látky přidá xxxxxxxxxxxx voda (150 μx) x trubička xx lehce xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx by xxxx xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx zahřátím xx na 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka roztavila, xxxx rozemletím xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx.
Xx zkoušce xxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vody x teplotě xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek, které x trubičce xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx TER
TER xx xxxx nízkonapěťovým xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx ekvivalentní). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxxxxx zakryta. Po xxxxxxxx sekundách se xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x tkáň xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx xxxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx na xxx strany xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Rozměry xxxxxxxx x délky xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (silné) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx odporu xxxxxx x xxxxx konec xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx ponořené v xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové komory xxx, aby xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx spodkem xxxxxxxxx svorky x xxxx xxxxxxxxx trubičky xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může xx xxx způsobeno vrstvou xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx vrstvy xx xxx xxxxxxx např. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Roztok xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (střední xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontroly spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx látky a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx látky x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky
Jsou-li xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxx zkoušené xxxxx xxxxx xxxx rovny 5 xΩ, lze xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, zda xxxxxxxx xxxxxx falešně xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Aplikace a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxx se xxxx přibližně 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx o xxxxxxx xxxxxxxx teplotě, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx kůže se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx xxxxxxx xxxx vyjmou a xxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) natrium-dodecyl-sulfátu (XXX) x destilované vodě x inkubují xx xxxx xxx xxx 60 °X. Xx xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx kůže xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx odstředivá xxxx ˜ 175). 1 xx vzorku xxxxxxxxxxxx xx poté zředí 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX v xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (A) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X při 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x poté xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Střední xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx na xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx ukázala, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx po xxxx 2 xxxxx (2), třebaže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky x xxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx účinků xxx xxxxxxx x údajů xxxxxxxxx se xxxxxxxxx x postupem, xxx xxxx xxxxxxx v xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx řady referenčních xxxxxxxxx vybraných z xxxxxxxxxx látek použitých xx xxxxxxxxx studii (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx xx xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx model xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx expoziční xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx hypotéze, xx xxxxxxxx látky s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xx, xxx jsou xxxxxxx proniknout rohovitou xxxxxxx (difuzí nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxx xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx pod xx. Xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx dostatečná. Xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, že model xxxxxxxxx za definovaných xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých xxxxx x xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx rozlišit xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxx. ivotaschopnost xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxx XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx daný xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxx (ve xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx kontrolní látku) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx odpovídal xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx materiálů xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx být ovlhčena, xxx xxx zajištěn xxxxx styk x xxxx; xxxxx látky xx xxxx být xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí být xxxxxxxxx, xx aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxx fyziologickým xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx použita xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx níž xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, že xxxxxxxxx správné a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže xx xxxxxx xx xxxxxxx XXX o xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx formazanu xx xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X xxx vlnové xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx, xxx metodika a xxxxxxxxxxx model xxxx xxxxxxxxxxx zkoušením xxxx xxxxxxxxxxxx standardů vybraných x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazovala v xxxxx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxx splňovat alespoň xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou validitu (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx kůži xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) pro xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolu x pro všechny xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx včetně údajů x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX na xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX dosažená pro xxxxxxxxx látku větší xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx žíravá. Xx-xx hodnota XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ a xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx organickou látku, xx látka xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx neutrálních xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx průniku barviva. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx použití 36 % XXx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx xxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx kůže menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx, xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx obsorbance X xxx negativní xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A dosažené xxx každý zkoušený xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx materiálů, xxxxx xxxxxx žíravé (xxxx xxxxxx se rozlišují xxxxx třídy xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx před xxxxxxxx metody a xxxxxxxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxxx, že xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- identifikační xxxxx, xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxxx fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Podobné informace xx xxxx být xxxxxxx pro referenční xxxxx, pokud xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx podmínky:
- podrobnosti xxxxxxxxx xxxxxxx,
- popis x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx TER) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x procentech (xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) ECVAM (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Xxxxx, ATLA 26, 275-280.
(2) Fentem, X. H., Archer, X. X. X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. D., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), The ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx evaluation xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Walker, X. X., Worth, X. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx distribution xx the test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. J. X., Pemberton, M. X., Xxxxxx, X. (1986), An in xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, X. X., Hall, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, J. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Cheeseman, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx test xx xxxxx: xxxxxxx xx xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Earl, L. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx the xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. A., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, R. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, P., Xxxxxxx, X., Ponec, X., Xxxxxxx, X. F., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx vitro xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná ozářením xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx ze zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky, xx. existence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx může xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX záření xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx vyvolané kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x světla, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx podání a xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx nanesení xx xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx EU/COLIPA x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx platnou alternativu xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx skupina XXXX xxxxxxxx postupných xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4).
Výsledky xx zkoušek fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx porovnány x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx fotoiritačmi účinky xx vivo u xxxxxx x u xxxxxxx x zkouška xx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Zkouška xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx mnoho xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, xxx xxxxxxxx hodnocení stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemických látek xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx ultrafialového nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx viditelného xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × x) xx plochu xxxxxxx, xxxx. J/m2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx CIE (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx mezi XXX x UVA xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 nm x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx) x xxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x na xxxxxxxx uspořádání xxxxxxx xxxxxxxx s celkovým xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x poměru x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x UV, xxxx xxx XX), ale xxxxxx xxxxxxxxxx zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx používaný xxx xxxxxx výsledků zkoušek xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro xx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný srovnáním xxxx stejně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrací (EC50) xxxxxxxx látky, a xx xxx necytotoxickém xxxxxxx UVA/VIS světlem (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
XXX (xxxx xxxxx xxxxxx — střední xxxxxxxx xxxxxx): nová xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx průběhu xxxxxx závislosti účinku xx koncentraci xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx určitým chemickým xxxxxx a následné xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx systémovém xxxxxx xxxxxxxx látky.
Fotoiritace: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (topické nebo xxxxxx). Xxxx fototoxické xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x xxxxx vyžaduje xxxxxxxx xxxx jeden xxxx dva xxxxx xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: genotoxická odezva xxxxxxxxxx z genového xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx negenotoxické dávce XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látce.
Fotokarcinogenita: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se používá x xxxxxxx, kdy xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx chemickou látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, který xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxx xxxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx poznámky
Fototoxické xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x mnoha typů xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx být xxxxxxxxx UV/VIS xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx menší než 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxx zkoušena zkouškou xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx čtyři mechanismy, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) chromoforem xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx této xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx xxxxxxx vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx červeně (XX) (9) 24 xxxxx xx působení xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 se 24 x kultivují, xxx xxxxxxxxx monovrstvu. Xxx 96xxxxxxx destičky na xxxxx zkoušenou chemickou xxxxx xx poté 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek. Poté xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-UV xxxxxxxxxx). U xxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x inkubace je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (NRU). Relativní xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xxxxxxx při xxxxxxx (+ UV) x xxx ozáření (-UV), xxxxxxx při xxxxxxx XX50, tj. při xxxxxxxxxxx způsobující 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx x neexponovanými kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx buněk xx XXX, dosavadní xxxxx: citlivost xxxxx xx XXX xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx, příští xxx xx xxxxx xxxxxx XXX záření 1 xx 9 X/xx2 x buněčná xxxxxxxxxxxxxxx se stanoví x xxx později xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx jejich xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 menší xxx 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx negativní kontroly xx UVA při xxxxxxxxxx zkoušce: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly (xxxxx x XXXX (Xxxxxx fyziologický xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxx + UVA experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx v xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx obvyklou xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx splňuje xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: při xxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Při xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx použit jako xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x je xxxx xxxxxxxxx. Pro XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx postupu xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx CPZ xxxxxxx (+ XXX): EC50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, xxx XXX neozářený (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), xx. xxxxx hodnoty XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vhodné x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx hodnocené zkoušené xxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx případě xx xxxx být na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kritéria přijatelnosti xxxxxxx přiměřeným xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x XXX xxxx XXX (střední xxxxxxxx xxxxxx).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx z xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx ECACC x xx tedy xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx potřebám xxxxx, ale xxxx xxx xxxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx nejsou kontaminovány xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx být xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX xxxxxxx x xxxxxx pasáží, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxx x nejnižším xxxxxxxxxxxx xxxxxx pasáží, nejlépe x xxxxx než xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx a během xxxxxxxxxx postupu xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx kultivační média x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X buněk Balb/c 3X3 se xxxxx x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx media) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx vlhčené xxxxxxxxx při 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště xxxxxxxx xx, xxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě a xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxx použitím xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx buňky nasazují xx kultivačního xxxxx x takové xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx je po 48 h od xxxxxxxx stanovována xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx buňky Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx jamku.
Pro každou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx stejným xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x temnu (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx určených xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, pro jejíž xxxxxxxx jako xxxxxx xx xxxx nebo xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx transformace. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx provedena xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx být čerstvě xxxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxx neprokazují xxxxxxxxxxxx skladování. Xxxx-xx xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx červeným světlem.
Zkoušené xxxxxxxx látky xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx roztoku (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx proteinové xxxxxx x pH xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické xxxxx x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xx xxxx xxx xxxxxxx v xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, tj. v xxxxxxxxx kontrole a xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx měly by xxx pečlivě posouzeny xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx xxx pro xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Ozáření XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx vhodného zdroje xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v pásmu XXX a xx xxxxxxxxxx pásmu je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxx vysoce xxxxxxxxxxx, xxxxxxx jeho xxxxxxxxxxxx vzrůstá mezi 313 xx x 280 nm 1000xxxx (11). Kritéria xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxxx, a xxx xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx xx přijatelnou xxxx) xxxx dostatečná xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx látek. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx emise xxxxx (infračervená xxxxxx), xx xxxx neměly xxxxxxxx xxxxxxxxxx testovací xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xenonová xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx z xxxx xx tu xxxxxx, xx emituje xxxx xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx není dokonalá. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxx filtrovány, aby xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxx spektrum xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx simulátoru xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (intenzita xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kontrolovat xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. UV-metr xxxx xxx xxx xxxx xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx by xxxx xxx kontrolována x xx tímto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx kalibrovaný XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje xxxxxx x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak takové xxxxxxxxx xxxxxxxx odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 xxxx xxx validační xxxxxx xxxxxxxx jako necytotoxická xxx buňky Balb/c 3X3 x dostatečně xxxxx x excitaci x xxxxx fototoxických xxxxxxxxxx xxxxx. Pro xxxxxxxx 5 J/cm2 xx xxxx 50 xxx. xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxxxxxxxx buňky a xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (X/xx2) 100 / intenzita xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx fototoxické xxxxxxxx látky xxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x předchozích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí. Xxxxxx koncentrační řady x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx závislosti xxxxxx na koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx experimentálními xxxxx. Měla xx xxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví se xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 96jamkové xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx každou xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x každá jamka xx xxxxxxx dvakrát 150 μl XXXX/XXX. Xxxxx se 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx koncentrací xxxxxxxx chemické látky. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx látkou se xxxxxxxx x temnu xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx části xxxxxxx x xxxxxxxx XXX xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx 50 xxx. xxxxxxx přes xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx kondenzaci xxxx xxx víčkem, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx pro xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (doba expozice XXX) v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx způsobené xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx záznamy xx xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx fototoxicity nepoužijí.
Zkouška xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx předehřátého XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx opatrně odstraní xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μx média XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °C xx zvlhčené xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx NR xxxxxxxx x buňky xx xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. EBSS/PBS se xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (případně xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx poloze).
Přidá se xxxxxx 150 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a kyseliny xxxxxx, xxx se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx se xxxxxx 10 min. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx použije xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve vhodném xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx smysluplnou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx získané při xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx nimi nastaven xxx, xxx bylo xxxxx proložit experimentálními xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx být xx do xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx být splněn xxxxxxxxx uspokojivé kvality xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx experimentu (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx zjištěna, xxxxx xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem se xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx xxx dále xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx příprava xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxx xxxxxx xxxx být změna xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx ozářením. Xxxxxxxx xxxx může mít xxxxxx u xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, stanoví xx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nelineární xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx funkcí xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 xxx další xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx doporučuje použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx v xxxxx případech xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — xxxxx 1: fotoiritační xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-UV)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx fototoxického potenciálu, xxxxxxx hodnota XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
Jestliže xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, nelze hodnotu XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí o xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", jestliže xx xxxxxxx -UV zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x xxxx hodnota xx použije xxx xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+UV))
Lze xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; PIF", předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-UV) xxx hodnotu XX50 (+ XX), xxxxxx xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci výsledku xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", je xxxx hodnota předpovědí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
V xxxxxxxxx x) a x) by měly xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model xxxxx 2: střední světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx vyvinut s xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) a xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx jako model XXX v xxxxxxxxx, xxx nelze xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx využívá xxxxxxx xxxxxxxx účinek (mean xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na srovnání xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je volně x dispozici.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxx xxx posouzení xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, absorpci x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo zkoušení xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, např. xx xxxxxxx modelu xxxxxx kůže xx xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx pro savčí xxxxx xx použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx chemickou xxxxx až po xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx negativní xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx vivo xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, kdy xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx koncentraci (EC50 +XX a XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+XX x -XX) a xxxx-xx xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx potvrzující xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx modelu lidské xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx o xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- procentuální koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, je-li xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro
Zkušební podmínky x) — xxxxxxxx xxxx aplikací x xx ní:
- xxx x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- inkubační podmínky (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x po ní).
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx použitého xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx o jeho xxxxxxxxx,
- vzdálenost zdroje xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- intenzita ozáření XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX xxxxxx (intenzita × xxx), xxxxxxxxx x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx inkubace XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (referenční) xxxxxx délka, je-li xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx použit.
Výsledky:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- křivky závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx versus relativní xxxxxxxxxxxxxxx buněk) získané xxx paralelních experimentech +XXX a -UVA,
- xxxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x EC50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných x ozářením UVA/VIS x xxx xxxx, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), xxxx výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx photo effect) (XXX),
- klasifikace fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx negativní xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR) ozářených x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+UVA), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, B., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, S., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Pape, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Willshaw, A. (1994), XXX/XXXXXX project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: First xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Balb/c 3X3 xxxx phototoxicity xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX PT xxxx (xx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Centre: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. W., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Holzhütter, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. M., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), EU/COLIPA "Xx vitro phototoxicity", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Report xx the OECD Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Criteria of Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. W. (1993), X xxxxxx xxx in xxxxx xxxxxxxxx of substances xxx photoallergenic xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, G. (1972), Xxxx of xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Hölzle, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, M. A., Xxxx, X. X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The report xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Photosensitization. V: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx in xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx phototoxicity testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, H. I. Xxxxxxx eds.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux X. (1987), Action xxxxxxx xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Phototoxicity Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 M. Liebschem, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Phototoxic Xxxxxxxxx xx XX Filter Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX xx the XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3X3 XXX Xx Vitro Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. G., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pairs xx xxxx-xxxxxxxx curves xxx xxx xxx xxx predicting the xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).