Xxxxxxxx Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxxx aminokyselin, xxxx a olachindoxu x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/XXX
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x přistoupení Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx, x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxxxxx z právních x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx pozměněná směrnicí Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Rady 93/74/XXX xx dne 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/ES [5], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxx 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx směrnicí Xxxxxx 98/19/XX [7], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že druhá xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [8], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/XXX [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxx jiné x xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx; že xx xxxxxx uvedené xxxxxx upravit;
vzhledem x xxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx této směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxx olachindoxu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
X příloze xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx xxx "4. Xxxxxxxxx obsahu xxxx" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx neprodleně Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx tuto xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx odkaz xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 3. září 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Fischler
člen Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Úř. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Úř. věst. X 15, 18.1.1984, x. 28.
PŘÍLOHA
ČÁST X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda slouží xx stanovení xxxxxx xxxxxxx (syntetických x xxxxxxxxxxx) a vázaných (xxxxxxx vázané a xxxxx) xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, arginin, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx, histidin, xxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx metoda nerozlišuje xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx rozlišovat xxxx xxxxxxx X x L. Xxxx xxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Princip
2.1 Xxxxx aminokyseliny
Volné aminokyseliny xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Současně xxxxxxxxxxx dusíkaté makromolekuly xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx upraví xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx separují xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovovaných xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx x methionin xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx oxidovány na xxxxxxxx xxxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx musí stanovovat x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx vzorku.
Oxidace xx xxxxxxx při 0 xX xxxxx kyseliny xxxxxxxxxxx x fenolu. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Hydrolyzát xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxxxx se xx reakci x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 xx (440 xx xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx jakosti (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 dvojsíran xxxxx
3.5 xxxxxxxx xxxxx
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx o xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 x/xx
3.8 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (thiodiglykol)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – plyn (&xx; 10 xxx xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx sloučeniny xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu. Vysuší xx xx xxxxx xxx X2X5 xxxx X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 xxxxxxxx xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx sodný, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 x XxXX (3.5) xx xxxxxxxx ve xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 1 mol/l:
40 x NaOH (3.5) xx rozpustí xx xxxx x doplní xx 1 litru.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx mravenčí x xxxxxx:
Xxxxxx se 889 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 x xxxx x xxxxx se 4,73 x fenolu (3.3).
3.20 hydrolyzační směs, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) se xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx xx xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x x xxxxxxxxx 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, přidá xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx (3.7 x 3.9 xx xxxxx xxxxxxx přímo).
3.22 xxxxxxxx 5-sulfosalicylová, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-sulfosalicylové (3.6) se xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xxxxx na 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx permravenčí – xxxxx):
X xxxx xxxxxxx se xxxxxx 0,5 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.1) x 4,5 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx (3.19); ponechá xx v xxxxx 1 xxxxxx xxx 20–30 °X, xxx xx utvořila xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx ochladí x xxxxx s xxxxxxx xxxxx (15 minut).
Pozor:
Je xxxxx zamezit xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx oděv.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý xxxxxx, x = 0,2 xxx Na+/l, xX 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx thiodiglykolu (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) x 16,50 ml XXx (3.7). xX xx xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx xx vodou xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Standardní xxxxxxx aminokyselin. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx. Tento roztok xxx obdržet x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 zásobní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx, c = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 x xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx (3.16.3) v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx a doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým roztokem. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) xxxxxxxx kyselinu xxxxxxxxx x methioninsulfon.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx vnitřního standardu, xxxx. xxxxxxxxxx, c = 20 μxxx/xx
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx rozpustí x xxxxxxxxxxxx tlumivém roztoku (3.24) x xxxxxxx xxxxx na 250 xx a xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx aminokyselin xxx xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μx xxxxxxxx xxxxxxxx x methioninsulfonu x x = 10 nmol/50 μx x ostatních aminokyselin
Ve 100 xx xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx sodného (3.10) x 30 xx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) a 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx xx xxxxxxx. xX xx xxxxxx xx 2,20 hydroxidem xxxxxx (3.18).
Roztok xx xxxxxxxxxxxxx převede do 50 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po xxxxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx se.
Skladuje se xxx teplotě pod 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
Xxx xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx aminokyselin xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x vynecháním xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xxxx 250 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx z xxxxxxxxxxxxxxxx skla o xxxxxx 100 ml xx xxxxxxxxx uzávěrem x gumovým xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx, Xxxxxx) xxx xxxxxxx x sušárně
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x přesností xxxxx xxx ±2 °X
4.4 pH xxxx (xxx desetinná xxxxx)
4.5 xxxxxxxxxx filtr (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 analyzátor aminokyselin xxxx xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx ninhydrin, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx naplní sulfonovanou xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stálostí xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx analyzátory xxxxxxxxxxxx xx možno xxxxxx x xxxxxxx, xx hydrolyzát vykazuje xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x a xxxxxxxx xxxxxxxxx mravenčí kyselinu x oxidačního xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx nezaručují xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx hydrolyzát xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx iontů. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx kyseliny xxxx xxxxxxx pH xxxxxxxxx hydrolyzátu xx xxxxx 5 ml. Xxxxxxxx se xx xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx nejvýše 40 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx mletím xxx, xxx prošel xxxxx x xxx 0,5 xx. Xxxxxx x xxxxxxx vlhkostí xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx na vzduchu xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X xxxx xxx xxxxxxxx. Vzorky x vysokým obsahem xxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx petroletherem (3.12).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x krmivech x x xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx množství (1–5 g) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx x xxxxx xx 100,0 ml xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx třepe 60 xxxxx xx xxxxxxxxxx třepačce nebo xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Po xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx kádinky x xxxxxx 100 xx.
Xx xxxxxxx míchání xx přidá 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x pokračuje xx x míchání xx magnetické xxxxxxxx xxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxx odstředí xxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx sraženina. 10,0 xx odstředěného xxxxxxx xx přenese do xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, xX xx upraví xx 2,20 pomocí roztoku xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx baňky xxxxxxxxx velikosti a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se 1,00 xx interního standardu (3.27.3) xx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x potom xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Xxxx xx pokračuje xxxxx xxxx 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li extrakty xxxxxxxxxx xxx den, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 oxidace
0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx x xxxxxxx xxxx o xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (5.3.2.3) xxxx
- xx xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx nebo
- xx xxxxxx o xxxxxx 100 ml xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) (pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx část xxxxxx xx měla xxx obsah xxxxxx xxx 10 mg x obsah xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx do xxxxx x ledovou xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, potom xx xxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxxx (3.23) x xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xx i s xxxxx s xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x xxxxxxx xx xxx 16 xxxxx. Xx 16 hodinách xx xxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) xxx, xxx neulpěl xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx ani xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx pokračuje podle 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 100 ml nebo 250 ml (4.1) xxxx do xxxxxx x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x upraveného vzorku (5.1) x přesností xx 0,2 mg. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx měla xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx. Opatrně xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.20) x xxxxxx xx xx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxx podle 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx směsi x xxxxx (připravené xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 skleněné kuličky x xxxx xx xxxxx xx mírného xxxx pod zpětným xxxxxxxxx xx dobu 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx hydrolýzy xx xxxxxx chladič xxxxxxx 5 ml citronanového xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx se xxxxxx x ochladí xx x xxxxxx xxxxx. Xxxx xx postupuje xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx podle 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx do xxxxxxx (4.3) při 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tlaku (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látek) x xxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxx se šroubovací xxxxxx volně xx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx. Po uplynutí xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx baňka se xxxxxxx v xxxxxxx (4.3) 23 hodin. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x postaví se xx lázně x xxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx postupu při xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx baňky xxxxxxxxxxxxx převede xxxxxx xxxxxxxxxxxxx tlumivého roztoku (3.24) do xxxxxxx x xxxxxx 250 xx xxxx do xxxxx s xxxxxxx xxxx o xxxxxx 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx k xxxxxx má analyzátor xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx úpravě xX xxxxx 5.3.3.1 nebo 5.3.3.2.
5.3.3.1 pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx aminokyselin vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx), xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx do hydrolyzátu 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. se xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx rotační xxxxxxx (4.7) se xxxxx objem xx 5-10 xx xx xxxxx při 40 °X. Pokud by xx objem xxxxxxx xxxxxx pod 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx analýzu xxxxx.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx připravené xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 se částečně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 17 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx xxxxxxx xxxxxxx x xxx zajištěné xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx upraví xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) x upraveným xX xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx citronanového xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx a tlumivým xxxxxxxx (3.24) se xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx se xxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx se xxxxxxxx.
Xxxx xx přejde k xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx xxxx mít xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Směs xx xxxxxxxx a potřebné xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx filtrem 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx analyzátoru aminokyselin (4.9).
Xxxxxxx lze xxxxxxx xxxxx xxxx automaticky. Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxx se xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx xxxxxxxxx standardu. Xxxxxx xxxxx sodíku x aminokyselinám xx xxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x roztocích xxxxxx xx xxxxx nejpodobnější.
Frekvence xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stabilitě xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x analytického xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) xxx, xxx xxxxxx píku standardu xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx na typu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx. Zvolený xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jednotlivé xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx i xx xxxxxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxx ještě xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx by xxxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx nižšího x xxxx překrývajících xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 2:10 (pokud se xxxxxxx xxxxx xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx, je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx ovlivněno nedostatečnou xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx). Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxx 1:10.
Xxxxxx musí zaručit, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx od "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v g xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = X × X × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx použit interní xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: D / X
X = xxxxxx xxxx hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx interního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx x extraktu
D = xxxxxx píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx stanovovaných xxxxxxxxxxxx
X = koncentrace xxxxxxxxx v μmol/ml
V = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (g) (xxxxxxxxxx xx původní váhu xxxxx xx vzorek xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
X = celkový objem xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx objem xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx a cystein xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx cysteová, xxx vypočítávají xx xxxx xxxxxx (C6H12N2O4S2, XX 240,30) x xxxxxxxx MV 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx MV xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx volný methionin xx xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxx methionin, xxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx zředěného xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx volných xxxxxxxxxxxx (5.2) se vypočítá xxxxx xxxxxx vzorce:
F = 100 ml × (10 xx + 5 xx) / 10 ml × V ml / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx 1990 xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx (krmná xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, premix). Xx vyloučení xxxxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx hodnoty x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 x = 18 |
5,08 n = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx vyjádřená xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx dána xxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
xxxxxxxxxx odchylka (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 n = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,20 n = 16 |
0,11 n = 18 |
0,16 x = 18 |
0,28 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 n = 17 |
0,99 x = 15 |
|
Premix |
1.30 n = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 n = 16 |
n = xxxxx zúčastněných laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 x = 16 |
2,6 n = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 n = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 n = 16 |
2,1 x = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Reprodukovatelnost
Výsledky xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx zkoušek xxxx xxxxxxxx v následující xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx odchylka (XX) x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 n = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 n = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) mezilaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
8. Xxxxxxx referenčních materiálů
Správné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx ověřuje xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx k xxxxxxxxx. Doporučuje se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx x rozdílům xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx standardů xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 a 3.27.5) x roztoků xxxxxx (5.3.4) považovat xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx rozsah xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok xx xxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Pokud xx x analýze xxxxxxxxxxx xxxxxxx zařízení pro xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Při xxxxxxx xxxx xxxxxx x krmiv obsahujících xxxx xxx 1 % chloridu (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx xxxxx x podhodnocení obsahu xxxxxxxxxx x musí xx proto xxxxxx xxxxxxxxx postup.
ČÁST X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tuku x xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxx semen a xxxxxx, xxxxxxx zkoušení xx řídí podle xxxxxxxx Rady 136/66/EHS xx dne 22. xxxx 1996.
Podle xxxxx x složení krmiva xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx následujících xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx tuky
Tato xxxxxx je použitelná xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Postup X – celkový xxx
Xxxx metoda je xxxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxxx původu a xxx xxxxxxx krmné xxxxx. Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x nichž není xxxxx tuk xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (např. lepky, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx proteiny x xxxxxxx, xxxxx xxxx podrobeny zpracování, xxxx vytlačování, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx všech xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxxxx X, xxx postupem X, je xxxxx xxxxxxxxx xx platnou xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxxx X
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo se xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxx x xxxxx.
2.2 Postup X
Xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx. Promytý x xxxxxxx xxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxxxxx x bodem xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx bromového xxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, bezvodý
3.3 kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx XXx/x
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Extrakční xxxxxxxx, se xxxxxxx (Xxxxxxxxx přístroj), xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx xxxxxx. X xxxx bez xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 ml xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx látek xxxxxxxxxxx x petroletheru, x xxxxxxxxx v xxxxxxx s požadavky xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Postup X (xxx xxx 8.1)
Xx extrakční xxxxxxx xx xxxxxx 5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx hodin xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xx suché, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx úlomky xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x baňce xx suší 1,5 xxxxxx x xxxxxxx (4.3). Xxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx. Suší xx xxxxxxx 30 xxxxx, xxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx hmotnosti mezi xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx menší xxx 1 xx).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx nebo xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 300 xx xx xxxxxx 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (xxx xxx (8,2) x xxxxx xx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky pemzy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chladičem. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx malém xxxxxxx xxxx na xxxxx xxxxx x xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Během xxxx se xxxx xxxxxxxx usazování xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx ochladí x xxxxx xx xxxxxxxxxx množství filtračního xxxxxxxxxx (3.4), aby xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx tuku. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx dojitý filtrační xxxxx xxxxxxx tuku. Xxxxxx xx promývá xxxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxx neutrální xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx tuk. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx vzorek xxxx před xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx sklo x xxxx xx půldruhé xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °C ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx papír s xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x třetího xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx výsledcích xxxx xxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxx přesáhnout:
- 0,2 % x absolutní xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxx než 5 %,
- 4,0 % relativně k xxxxxxxxxx výsledku při xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxx 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxx, xxxxx se xxxxxxx xxxx nebo xxxxx neumožňují xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx postupuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx se 20 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxxxxx xx x 10 xxxx x xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx 500 xx petroletherem (3.1) x xxxxxxxx se. 50 ml roztoku xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxx xxxxxxxx bodu 5.1.
Xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxx procento xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx (xxxxxxx xxxx extraktu)
b = xxxxxxxx xxxxxx xx druhé extrakci x xxxxxxx
8.2 U xxxxxxx, které mají xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 x.
8.3 Xxxxxx xxx domácí xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx obsah xxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx B xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx sodným.
8.4 X xxxx 5.2 se xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx horká xxxx místo xxxx xxxxxxx.
8.5 U některých xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx doba sušení xxx 1,5 xxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx x nízkým výsledkům. Xx xxxxx použít x xxxxxxxxxxx troubu.
8.6 Xxx obsahu xxxx xxx 15 % xx doporučuje xxxxxxx xxxx hydrolýzou extrakci xxxxx postupu X x xxxxxxxx extrakci xxxxx xxxxxxx X. Xxxxxx to do xxxxx míry xx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx x xxxxxx.
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx olachindoxu x xxxxxxxx. Dolní xxx stanovitelnosti xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxx xxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xx reverzní fázi xx xxxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx fáze xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + V)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxx 2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx, X 851
3.5.1 zásobní standardní xxxxxxxx xxxxxx olachindoxu, 250 μg/ml
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx na 0,1 xx a xxxxx xxx 190 ml xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xx 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, doplní xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx připravovat xxxxxxx xxxxx xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 xx, xxxxxx se xx xxxxxx mobilní xxxx (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxx fólií a xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxx xxxxxxxxx baněk x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 a 20,0 xx pracovního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxx odpovídají 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 x 10,0 μx olachindoxu xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx třepačka
4.3 zařízení XXXX s proměnnou xxxxxxx xxxxxx ultrafialového xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxx diodového xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx srovnatelná xxxxxx
4.4 membránové filtry x xxxx 0,45 μx
5. Postup
Poznámka:
Olachindox xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxx nebo x nádobách x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx, zda xxxxxxxxxx olachindox xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx látky.
5.1.2 Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx ve xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx úroveň 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx a xxxxxx xx xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Xxxxx se 50 g modelového xxxxxx, řádně xx xxxxxxxx x nechá xx 10 xxxxx xxxxxx, přičemž se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xx být xxxxxxxx xxxxxx podobného xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxxxx na xxx xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Xxxxx xx 410 ml xxxx a xxxxxxx xx v ultrazvukové xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Baňka se xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, dále xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx filtrem. 10,0 ml xxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 20 xx, xxxxxx xx xxxxx xx značku a xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx membránovým xxxxxxx (4.4) (viz xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx xx pokračuje xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx HPLC
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx použity xxxx xxxxxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3.1)
xxxxxxx fáze (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + V)
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μl
Stabilita xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se zkontroluje xxx, xx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, až xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků a xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx nástřiků x xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Sestrojí se xxxx za xxxxxxx xxxxxxxxx hodnot xxxxx (xxxxx) xxxx kalibračních xxxxxxx xxxx xxxxxxx x příslušných koncentrací x μg/ml jako xxxxxxxxx.
5.3.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2) xxx použití xxxxxxxx xxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x roztoku xxxxxx x μx/xx porovnáním x xxxxxxxxxxx grafem (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x x xx/xx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / m
kde:
c = xxxxxxxxxxx olachindoxu x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) a kalibračního xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μx/xx olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (co-chromatography)
Extrakt xxxxxx (5.2) xx obohatí xxxxxxxxx přiměřeného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx přidaného xxxxxxxxxxx xx mělo odpovídat xxxxxxxx olachindoxu xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.
X xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a zředění xxxxxxxx xx mělo xxxxx xxx ke xxxxxxx xxxxx píku xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx x rozmezí ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx olachindoxu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx pole
Výsledky xx vyhodnocují xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx xxxxxx xxxxx maximální xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xx xxxxxxxxxxxxx stejný x nepřesností danou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x xxxxxxxx polem xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x standardu xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx vykázána xxxxxx maxima x xxxxxxxx nikde odchylka xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx a sestupu xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx částí xxxxxxx x rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx kritéria je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx maxima x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx spektry xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x těchto xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx není potvrzena.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 mg/kg, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Výtěžnost
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx kruhového xxxxx
X xxxxx XX byl xxxxxxxx xxxxxxx test, xxx xxxx xx 13 xxxxxxxxxx analyzovalo xxxxx vzorky xxxxxx xxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
X |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
X |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
xxxxxxx (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (mg/kg) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
CVr (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
XXX (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx obsah (mg/kg) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
výtěžnost (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx koeficient reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx obsahující xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx uspokojivé xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx vzorku x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kalibračního xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx kuličky.
[2] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.