Směrnice Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx stanovení aminokyselin, xxxx a xxxxxxxxxxx x krmivech x xxxxxx xx mění xxxxxxxx 71/393/EHS
(Text x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Xxxx 70/373/XXX za xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx krmiv [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx a Xxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx kontroly, xxx xxxxxx splňují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x právních x správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx a složení, xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 o xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [2], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/ES [3], x směrnice Rady 93/74/XXX ze xxx 13. xxxx 1993 x xxxxxxxx určených xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/ES [5], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 70/524/XXX ze xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [6], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/ES [7], xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx krmiv [8], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Komise 84/4/XXX [9], stanoví xxxxxx xxxxxxx xxxx jiné x xxx zjišťování xxxxxx xxxx; xx xx xxxxxx uvedené xxxxxx xxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxxx aminokyselin, xxxx x obsahu xxxxxxxxxxx x krmivech se xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
X příloze xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx "4. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx" xxxxxxxxx xxxxx X xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx právní a xxxxxxx předpisy xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Uvědomí x nich xxxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx od 1. xxxxx 1999.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Členské xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx ustanovení vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x platnost xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 5
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 3. xxxx 1998.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Xx. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Xx. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Xx. věst. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Úř. xxxx. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX A
Stanovení xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx slouží xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (syntetických x xxxxxxxxxxx) x xxxxxxxx (xxxxxxx vázané x xxxxx) aminokyselin x xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Metoda xx použitelná xxx xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxx, kyselinu xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx glutamovou, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxx, fenylalanin, xxxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxxx.
Xxxx metoda xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx formami X x L. Xxxx xxxxxxxxxx pro stanovení xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Princip
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx aminokyseliny xx extrahují zředěnou xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Současně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx srážejí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxx xx xX 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx separují xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxx xx po xxxxxx s ninhydrinem xxxxxxxxxxxxx detekcí xxx 570 xx.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx stanovovaných xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxx(x)xx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx stanovovat x hydrolyzátech neoxidovaných xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxx 1 mohou xxx xxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxx oxidační činidlo xx rozloží xxxxxxxxxxx xxxxxx. Oxidovaný xxxx xxxxxxxxxxx vzorek xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xX 2,20. Aminokyseliny se xxxxxxxx iontoměničovou chromatografií x stanovují xx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 xx (440 xx xxx xxxxxx).
3. Xxxxxxx
Xxxx xxx xxxxxxx dvakrát destilovaná xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, x = 30 %
3.2 xxxxxxxx mravenčí, w = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 dvojsíran xxxxx
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx o hustotě xxxxxxxxx 1,18 g/ml
3.8 xxxxxxxx xxxxx, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx xxxx 40–60 °X
3.13 norleucin xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 ppm xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 xxxxxxxxxxxxx
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx xxxxx xxx X2X5 xxxx X2XX4 xxxxx xxxx xxxxxxxx
3.16.2 kyselina cysteová
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx c = 7,5 mol/l:
300 g XxXX (3.5) xx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, xxxxxx x = 1 xxx/x:
40 x XxXX (3.5) xx rozpustí xx xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx kyseliny xxxxxxxx x xxxxxx:
Xxxxxx xx 889 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 g xxxx x přidá xx 4,73 g fenolu (3.3).
3.20 hydrolyzační směs, x = 6 xxx XXx/x s xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) se xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx xx xxxxx xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, c = 6 mol XXx/x x xxxxxxxxx 2% thiodiglykolu:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 900 xx xxxx, přidá xx 20 ml xxxxxxxxxxxxx (3.9) x xxxxxx xxxxx xx 1 litr (3.7 x 3.9 se xxxxx xxxxxxx xxxxx).
3.22 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, β = 6 %:
60 x xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx (3.6) se xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xxxxx na 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx permravenčí – xxxxx):
X malé xxxxxxx se xxxxxx 0,5 xx peroxidu xxxxxx (3.1) x 4,5 xx roztoku xxxxxxxx mravenčí x xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx x xxxxx 1 hodinu xxx 20–30 °X, aby xx xxxxxxxx kyselina xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx kontaktu x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý xxxxxx, x = 0,2 xxx Na+/l, xX 2,20:
X přibližně 800 xx xxxx xx xxxxxxxx 19,61 x xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 g xxxxxx (3.3) x 16,50 xx XXx (3.7). xX xx xxxxxx xx 2,20. Xxxxxx se xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 eluční xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pro použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 xxxxxxxxxxxx xxxxxxx připravované xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Standardní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °C.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xxx obdržet x xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, c = 1,25 μxxx/xx
0,2115 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 g xxxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí (3.16.3) x citronanovém xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) x litrové odměrné xxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (3.27.1) obsahuje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx xxxxxxxxx standardu, xxxx. norleucinu, x = 20 μmol/ml
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.24) v odměrné xxxxx xx 250 xx x xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 6 xxxxxx.
3.27.4 xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx x c = 10 xxxx/50 μl x ostatních xxxxxxxxxxxx
Xx 100 ml xxxxxxx xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx sodného (3.10) v 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) a 0,50 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx standardu (3.27.3), xxxxx se xxxxxxx. xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxxxx xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 50 xx xxxxxxx xxxxx, doplní po xxxxxx xxxxxxxxxxxx tlumivým xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx pod 5 °C xxxxxxx 3 měsíce.
Viz xxxx xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 xxxxxxxxxx xxxxxx standardních xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, připravenými xxxxx xxxx 5.3.3.1 a xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x xxxxxxxxxx chloridu xxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxx teplotě xxx 5 °X xxxxxxx 3 měsíce.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 nebo 250 xx xxxxxxxx zpětným xxxxxxxxx
4.2 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx skla x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx těsněním (např. Xxxxx, Schott) pro xxxxxxx x xxxxxxx
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x tepelnou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 pH xxxx (xxx xxxxxxxxx místa)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 xxxxxxxxxxx
4.7 xxxxxxx xxxxxxx odparka
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 analyzátor xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XXXX x iontoměničovou xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx kolonovou xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxx xx xxxxxx sulfonovanou xxxxxxxxxxxxxx pryskyřicí, xxxxx xxxxxxxx vzájemné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx a separaci xx xxxxxx ninhydrin xxxxxxxxxxx xxxxx. Průtok xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stálostí xxxxxxx ± 0,5 % xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kalibraci i xxxxxxx vzorku.
Některé analyzátory xxxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxxx vykazuje xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx separaci určitých xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx-xx hydrolyzát xxxxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x/xxxx vysoké koncentrace xxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx úpravou pH xxxxxxxxx hydrolyzátu na xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx 40 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Vzorek xx xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx sítem x oky 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X xxxx xxx zmrazení. Vzorky x xxxxxxx obsahem xxxx xx xxxx xxxxxx extrahují petroletherem (3.12).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx v krmivech x v xxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx množství (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 xx a xxxxx xx 100,0 xx xxxxxxxxx xxxxx (3.21). Xxxxx xx třepe 60 xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.8). Po xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x obsahu 100 xx.
Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx přefiltruje xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx odstranila xxxxxxx sraženina. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx přenese xx xxxxxxx x xxxxxx 100 xx, pH xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxx roztoku xxxxxxxxx sodného (3.18), xxxxx se roztok xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx značku xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24).
Použije-li xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) xx xxxxxxx 100 xx odstředěného xxxxxxx a xxxxx xx doplní xx xxxxxx tlumivým roztokem (3.24).
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li extrakty xxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
5.3.1 oxidace
0,1 xx 1 x upraveného xxxxxx (5.1) xx xxxxxx s přesností 0,2 xx:
- do xxxxx s kulatým xxxx x obsahu 100 xx (4.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (5.3.2.3) nebo
- do xxxxx x kulatým xxxx o xxxxxx 250 ml (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx nebo
- xx nádoby x xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) (xxx uzavřenou xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx část xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 mg.
Baňka/nádoba xx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx 0 °X, potom se xxxxx 5 ml xxxxxxxx směsi (3.23) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx. Baňka/nádoba xx uzavře x xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xx x x xxxxx s xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx xxx 0 °X x xxxxxxx xx xxx 16 hodin. Xx 16 xxxxxxxx xx vyjme x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 hydrolýza
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
X xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) xxx, aby xxxxxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx nádoby xxx xx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx postupu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorků
Do xxxxx s xxxxxxx xxxx x obsahu 100 xx nebo 250 xx (4.1) xxxx xx nádoby x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) xx xxxxxx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) x xxxxxxxxx xx 0,2 mg. Xxxxxxxx část xxxxxx xx xxxx mít xxxxx dusíku xxx 10 xx. Opatrně xx xxxxx 25 xx hydrolyzační xxxxx (3.20) a smíchá xx se xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx xxxxx 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx hydrolýza
Ke xxxxx x xxxxx (připravené xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx zpětným xxxxxxxxx xx xxxx 23 hodin. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx promyje 5 ml citronanového xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx x ledové xxxxx. Xxxx xx postupuje xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx xx xxxxxxx (4.3) xxx 110 °X. Xxx xx xxxxx xxxxx hodiny xxxxxxxxx xxxxxxxxx tlaku (x důsledku xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) a xxxxxxx k xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na xxxxx. Nádoba xx xxxxxxxxx. Xx uplynutí xxxxx xxxxxx xx xxxxxx zašroubuje a xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x sušárně (4.3) 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xx sušárny, opatrně xx odšroubuje uzávěr x xxxxxxx se xx xxxxx x xxxxxxx vodou. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx převede pomocí xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx x xxxxxx 250 xx xxxx do xxxxx s xxxxxxx xxxx o xxxxxx 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx xX
Xxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xX xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx aminokyselin xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx), xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxx xxxxxxx standardní roztok (3.27.3).
X xxxxxxx xxxxxxx xx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. se xxxxxxx 2 xxxxx 1-xxxxxxxx (3.15).
Na xxxxxxx xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 ml za xxxxx xxx 40 °X. Xxxxx xx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx odstranit a xxxxx analýzu znovu.
pH xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) a xxxxxxxxx se xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Hydrolyzáty xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 nebo 5.3.2.4 xx částečně xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.17), xx xxxxxxx xxxxxxx x při xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) s xxxxxxxxx xX xx kvantitativně xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 xx x tlumivým xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx xxxxxx.
Xxxxx-xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 ml vnitřního xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24). Xxxxxxxx xx promíchá.
Dále xx přejde x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Nejsou-li xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxx, uschovávají xx xxx teplotě xxx 5 °X.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) pokojovou xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x potřebné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx filtrem 0,2 μ (4.5). Výsledný xxxx roztok xx xxxxxxx xxxxxxxx chromatografii xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx lze xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx důležité, xxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx roztoku ± 0,5 % xxx xxx analýze xxxxxxxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx vnitřního standardu. Xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xx xxx být v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x roztocích vzorků xx xxxxx nejpodobnější.
Frekvence xxxxxxxxx závisí hlavně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx ředí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24) xxx, aby xxxxxx xxxx standardu xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxx působení xx xxx chromatografický xxxxxx xxxxxxxx reagovat xx xxxxx xxxxxx aminokyselin xxxxxxxxxxx na xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxx xxx dosaženy xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x vrcholu xxxx. Xxxx equimolární xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx obsahu jednotlivých xxxxxxxxxxxx, které mohou xxx ještě přesně xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Při xxxxxxxx threoninu x xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx píku nižšího x xxxx překrývajících xx xxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx přesahovat 2:10 (xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, threonin x xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx ovlivněno nedostatečnou xxxxxxxx xxxxxxxxxx píků). Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx lepší xxx 1:10.
Xxxxxx xxxx zaručit, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" a xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx píků xxxxxx x standardu se xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x g xx xx vzorku.
g xxxxxxxxxxxxx na xx xxxxxx = A × E × XX × X / B × X × 1 000
Xx-xx použit interní xxxxxxxx, násobí xx xxxxxxxx: X / X
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx x extraktu
D = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx stanovovaných xxxxxxxxxxxx
X = koncentrace xxxxxxxxx v μxxx/xx
X = xxxxxxxx navážky xxxxxx (x) (xxxxxxxxxx xx původní xxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxx nebo odtučněn)
F = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (5.3.4) x xx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle 6.1
Xxxxxx a xxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx cystin (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx XX 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxx oxidovaného xxxxxx xxxxxxx xxxx methioninsulfon, xxx xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx MV xxxxxxxxxx: 149,21.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako methionin, xxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx zředěného xxxxxxxx (X) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) xx xxxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx:
X = 100 xx × (10 ml + 5 ml) / 10 xx × V ml / 10xx
X = objem xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx úrovni v xxxx 1990 xxx xxxxxxx čtyř různých xxxxx (xxxxx směs xxx prasata, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx vyloučení extrémů xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
střední xxxxxxx x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Krmná xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 x = 16 |
|
Proteinový xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Premix |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Opakovatelnost
Opakovatelnost vyjádřená xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxx xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní xxxxxxxx (Xx) xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 n = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
0,20 x = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 n = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 x = 17 |
0,99 n = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 x =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 n = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 n = 16 |
2,1 n = 16 |
x = počet xxxxxxxxxxxx laboratoří
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx shora xxxxxxxxx zkoušek jsou xxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs pro xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 x = 17 |
0,23 n = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,48 n = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx koncentrát |
0,85 x = 16 |
0,62 x = 17 |
1,57 x = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 n = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (SR)
|
Referenční xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 n = 17 |
7,0 n = 17 |
3,2 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
5,2 n = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 n = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Premix |
4,3 n = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx materiálů
Správné xxxxxxx uvedené metody xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx k xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kalibračními xxxxxxx aminokyselin.
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxx analyzátory aminokyselin xx xx xxxx xxxxxxx koncentrace kalibračních xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) považovat xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx musí xxxxxxxxxxxx pro všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx roztok xx xxxx citronanovým tlumivým xxxxxxxx tak, aby xx xxxxxxx ploch xxxx uprostřed xxxxxx xxxxxxx.
9.2 Xxxxx se x analýze hydrolyzátů xxxxxxx zařízení xxx xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výrobce.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx než 1 % xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx krmiva, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx dojít x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x musí xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x xxxxxx použití
Touto xxxxxxx xx stanoví xxxxx xxxx v xxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxxx xx analýzu xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, jejichž xxxxxxxx xx řídí xxxxx xxxxxxxx Xxxx 136/66/XXX xx dne 22. xxxx 1996.
Podle druhu x xxxxxxx xxxxxx xx pro analýzu xxxxxxx jeden xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx krmiva rostlinného xxxxxx, s výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx okruhu xxxxxxx X.
1.2 Postup X – xxxxxxx xxx
Xxxx metoda xx xxxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxxx původu x xxx všechny krmné xxxxx. Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx není xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx (např. xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx x výrobky, které xxxx podrobeny zpracování, xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx).
1.3 Interpretace xxxxxxxx
Xx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se dosáhlo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X, xxx xxxxxxxx X, je třeba xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Postup X
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Rozpouštědlo xx xxxxxxxxxxx a zbytek xx xxxxxx a xxxxx.
2.2 Xxxxxx B
Vzorek xx zahřívá x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Směs xx ochladí a xxxxxxxxxxx. Promytý a xxxxxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx X.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxxxxx x bodem xxxx xxxx 40 x 50 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxx xxx 1 x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 xx
3.2 xxxxx xxxxx, bezvodý
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 3 xxx HCl/l
3.4 xxxxxxxxx prostředky, např. xxxxxxxxx, Hyflo-supercel.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, se sifonem (Xxxxxxxxx přístroj), xxxxxxxx xxxxxxxx xx měla xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx hodinu. X typu bez xxxxxx xx měla xxx xxxxxxxx rychlost xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, bez xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x porositou x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bodu 4.1.
4.3 Xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx horkovzdušná xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx X (viz xxx 8.1)
Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx (4.2) a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx úlomky pemzy [1].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxx xx suší 1,5 xxxxxx x xxxxxxx (4.3). Xxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx xx xxxxxxx 30 xxxxx, xxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx následujícími váženími xxxx xxx xxxxx xxx 1 mg).
5.2 Xxxxxx X
Xx xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 300 ml xx odváží 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx (viz bod (8,2) a xxxxx xx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx sklem xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chladičem. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxx plameni xxxx xx topné xxxxx x xxxx xx po xxxx xxxxx xxxxxx. Během xxxx xx xxxx xxxxxxxx usazování částeček xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx ochladí x xxxxx se xxxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx xxxxxxxx nedošlo xx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx přes xxxxxxxxx xxxxxx filtrační xxxxx xxxxxxx tuku. Xxxxxx xx promývá xxxxxxxx xxxxx, xx xx získá xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx, zda filtrát xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx xxxxxxxxxx ukazuje, xx xx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx petroletherem xxxxx xxxxxxx A.
Dvojitý filtrační xxxxx xx xxxxxxx xx položí na xxxxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx v horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °X ± 3 °C.
Dvojitý xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx zbytkem xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (4.2) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.1) x dále se xxxxxxxxx xxxxx druhého x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % x xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % relativně k xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx od 5 xx 10 %,
- 0,4 % v xxxxxxxxx xxxxxxx, při xxxxxx nad 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxx, které xx xxxxxxx drtí xxxx xxxxx neumožňují odebrat xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxxxxx xx x 10 xxxx x více xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx extrakt se xxxxxx na 500 xx petroletherem (3.1) x xxxxxxxx xx. 50 ml roztoku xx odpipetuje do xxxx suché, xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx tuku xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 a + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx v gramech (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx zbytku xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx
8.2 X xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx tuku xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx 5 g.
8.3 Xxxxxx xxx domácí xxxxxxx, xxxxx mají xxxxxx obsah xxxx, xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx a extrakcí xxxxx xxxxxxx X xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 xx xxxx xx opláchnutí xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx horká xxxx xxxxx vody xxxxxxx.
8.5 X xxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxxxx doba xxxxxx xxx 1,5 xxx. Xx však třeba xxxxxxx přílišnému vysoušení, xxxxx může xxxx x xxxxxx výsledkům. Xx xxxxx použít x xxxxxxxxxxx xxxxxx.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx xxxxxxxxxx provést xxxx hydrolýzou xxxxxxxx xxxxx postupu X x následně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx B. Xxxxxx xx xx xxxxx xxxx xx xxxxx krmiva x xxxxx xxxx x xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXXX
(2-[X-2-(xxxxxxxxxxxx)xxxxxxxxx]-3-xxxxxxxxxxxxxxxx-X1,X4-xxxxxx)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx olachindoxu x xxxxxxxx. Xxxxx xxx stanovitelnosti je 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografií (XXXX) xx xxxxxxxx fázi xx použití UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 xxxxxxxx
3.2 xxxxxxxx, xxx XXXX
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx xxxx xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx látka: xxxxx xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, X 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok olachindoxu, 250 μg/ml
Do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 xx se xxxxxx 50 mg xxxxxxxxxxx (3.5) s xxxxxxxxx xx 0,1 xx a xxxxx xxx 190 xx xxxx. Baňka se xxxxxxx na 20 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x ultrazvukové xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na laboratorní xxxxxxx, xxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx každý měsíc.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (3.5.1) xx xxxxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx po xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.4) a xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx fólií x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxx připravovat xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 kalibrační xxxxxxx
Xx xxxx odměrných baněk x xxxxxx 50 xx xx xxxxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.2). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 a 10,0 μx olachindoxu xx xx.
Xxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxx denně xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 ultrazvuková xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx třepačka
4.3 zařízení XXXX x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ultrafialového xxxxxxxxx nebo s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx filtry x xxxx 0,45 μx
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxxxxx je xxxxxxx xx světlo. Xxxxxxx postupy xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x nádobách x xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo se xxxx xxxxxx analyzovat xxx xxxxxxxx, zda xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxxxx odpovídá xxxx obsahu ve xxxxxx X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 50 xx/xx se xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (3.5.1) do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx x xxxxxx se xxxxxx xx xxx 0,5 xx. Přidá xx 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx 10 xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx několikrát xxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Xxxxxxxx:
Xxx xxxxx této xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx vzorek x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx xx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1000 xx, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxxxx na xxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Přidá xx 410 xx xxxx a xxxxxxx xx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx xx xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx filtrem. 10,0 xx filtrátu xx přenese xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 20 xx, xxxxxx se xxxxx xx značku x xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (viz xxx 9. Xxxxxxxx). Xxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx HPLC (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Xxxxxxxxx:
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxx podmínky, za xxxxxxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxxxx výsledky.
analytická kolona (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + V)
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 xx/xxx
xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx chromatografického xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxx, xx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μg/ml, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků x xxxxxxxxxx časů.
5.3.2 Kalibrační xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx xx provede xxxxxxx nástřiků x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Sestrojí xx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxx) píků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx koncentrací x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx roztoků a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) píků xxxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx olachindoxu x roztoku xxxxxx xx zjistí xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx xxxxxxxxxx x kalibračním xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x x xx/xx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = x × 1&xxxx;000 / m
kde:
c = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x x (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx výsledků
7.1 Identita
Identita xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx (co-chromatography) xxxxx využitím xxxxxxxxx x diodovým xxxxx, xxxxxxx xx porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2) x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3), xxxxxxxxxxxx 5,0 μx/xx olachindoxu.
7.1.1 Xxxxxxxxx stanovením x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx vzorku (5.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx olachindoxu xxxxxxxxxx x extraktu vzorku.
S xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a zředění xxxxxxxx xx mělo xxxxx jen xx xxxxxxx výšky píku xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x polovině xxxx xxxxx xxxx být x xxxxxxx ±10 % původní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx extraktu vzorku.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového xxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xx chromatogramu xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx udává ±2 xx;
x) při vlnové xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx xxxxx spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx analytu;
b) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 nm xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x sestupu xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx ostatních x xxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 10 xx 100 % relativní absorbance. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx mezi spektry xxxxxxxxxxx nikde 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxx-xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx splněno, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 xx/xx, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx xxxxxxxx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx modelový xxxxxx xxxx xxx výtěžnost xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 laboratoří xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiva xxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
vzorek 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
L |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
A |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
střední (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
CVR (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: počet xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
Sr: xxxxxxxxxx odchylka opakovatelnosti
SR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxx koeficient opakovatelnosti
CVR: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx obsahující xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výsledky xxxxx navážkou vzorku x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kalibračního xxxxx (5.3.2).
[1] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx zkoušet xx xxxxxxx, zamění se xxxxxx pemzy za xxxxxxxx xxxxxxx.