Směrnice Xxxxxx 98/64/XX
xx xxx 3. xxxx 1998,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx 71/393/EHS
(Text s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s ohledem xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o zavedení xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Aktem x xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Švédska, x xxxxxxx xx xxxxxx 2 uvedené xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv za xxxxxx kontroly, xxx xxxxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x správních předpisů xxxxxxxxxx se jejich xxxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx a analýzy xxxxxxxx xx Společenství;
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxx 79/373/EHS xx xxx 2. xxxxx 1979 o xxxxxxx krmných směsí xx trh [2], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 97/47/XX [3], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. září 1993 x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx účelům xxxxxx [4], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [5], stanoví, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx směrnice Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x doplňkových látkách x krmivech [6], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 98/19/ES [7], xxxxxxx, že obsah xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxx do xxxxxxx směsí;
vzhledem x xxxx, xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971, kterou xx stanoví analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [8], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 84/4/EHS [9], xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx jiné x xxx zjišťování xxxxxx xxxx; xx xx xxxxxx uvedené xxxxxx upravit;
vzhledem k xxxx, xx xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxxxx xxxxxx látek;
vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že analýzy xxx xxxxxx kontrolu xxxxxx aminokyselin, xxxx x obsahu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx uvedených x xxxxxxx xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
X xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxx 71/393/EHS xx bod "4. Xxxxxxxxx xxxxxx tuku" xxxxxxxxx xxxxx B xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
1. Xxxxxxx xxxxx uvedou x xxxxxxxx právní x xxxxxxx předpisy nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxxxxx 1998. Xxxxxxx x xxxx neprodleně Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. xxxxx 1999.
Xxxx opatření xxxxxxx členskými státy xxxx obsahovat odkaz xx tuto směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx jejich úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx stanoví členské xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Komisi xxxxx xxxxxxxx ustanovení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx předpisů, xxxxx xxxxxxx v oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 5
Xxxx xxxxxxxx xx určena členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 3. xxxx 1998.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[3] Úř. xxxx. X 211, 5.8.1977, x. 45.
[4] Úř. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[5] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
[6] Xx. věst. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[7] Úř. xxxx. X 96, 28.3.1998, x. 39.
[8] Xx. věst. X 279, 2.12.1971, x. 7.
[9] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
XXXXXXX
XXXX X
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (syntetických x xxxxxxxxxxx) x vázaných (xxxxxxx xxxxxx x xxxxx) aminokyselin x xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx použitelná pro xxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxx(x)xx, xxxxxxxxx, xxxxx, threonin, xxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx glutamovou, xxxxxx, xxxxxxxx, isoleucin, xxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxx, xxxxx, tyrosin x xxxxx.
Xxxx metoda xxxxxxxxxxx xxxx solemi aminokyselin x nemůže xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx X x X. Xxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx hydroxy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
2.1 Xxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zředěnou xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Současně xxxxxxxxxxx dusíkaté makromolekuly xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chromatografií x xxxxxxx xx xx xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 570 nm.
2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx proces xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx aminokyselinách. Xxxx(x)xx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx cysteovou x xx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx musí xxxxxxxxxx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxx 1 mohou xxx xxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx se xxxxxxx xxx 0 xX xxxxx kyseliny xxxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (x = 6 xxx/x) xx 23 xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx pH 2,20. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx iontoměničovou xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xx reakci x xxxxxxxxxxx fotometrickou detekcí xxx 570 nm (440 xx xxx xxxxxx).
3. Činidla
Musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX).
3.1 xxxxxxx xxxxxx, w = 30 %
3.2 xxxxxxxx xxxxxxxx, x = 98–100 %
3.3 xxxxx
3.4 xxxxxxxxx sodný
3.5 xxxxxxxx sodný
3.6 xxxxxxxx 5-xxxxxxxxxxxxxxx, dihydrát
3.7 kyselina xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 1,18 g/ml
3.8 xxxxxxxx xxxxx, dihydrát
3.9 2,2-xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx)
3.10 xxxxxxx xxxxx
3.11 xxxxxxxxx
3.12 xxxxxxxxxxx, xxx varu 40–60 °X
3.13 xxxxxxxxx xxxx xxxx sloučenina použitelná xxxx xxxxxxx xxxxxxxx
3.14 xxxxx – xxxx (&xx; 10 ppm xxxxxxx)
3.15 1-xxxxxxx
3.16 aminokyseliny
3.16.1 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 1; xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xx xxxxx xxx X2X5 xxxx X2XX4 týden před xxxxxxxx
3.16.2 kyselina xxxxxxxx
3.16.3 xxxxxxxxxxxxxxx
3.17 hydroxid sodný, xxxxxx x = 7,5 xxx/x:
300 g XxXX (3.5) se xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxx xx 1 xxxxx.
3.18 xxxxxxxx xxxxx, roztok x = 1 mol/l:
40 x XxXX (3.5) xx rozpustí xx xxxx x doplní xx 1 xxxxx.
3.19 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x fenolu:
Smíchá se 889 g xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2) xx 111 x xxxx x xxxxx xx 4,73 x xxxxxx (3.3).
3.20 xxxxxxxxxxxx směs, x = 6 xxx HCl/l x xxxxxxxxx 1 g xxxxxx/x:
X 492 xx XXx (3.7) xx xxxxx 1 x xxxxxx (3.3) x xxxxxx se vodou xx 1 xxxxx.
3.21 xxxxxxxxx xxxx, x = 6 xxx XXx/x s přídavkem 2% xxxxxxxxxxxxx:
8,2 xx XXx (3.7) xx xxxxxxx přibližně 900 xx vody, přidá xx 20 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9) a xxxxxx xxxxx na 1 litr (3.7 x 3.9 xx xxxxx smíchat přímo).
3.22 xxxxxxxx 5-sulfosalicylová, β = 6 %:
60 x kyseliny 5-sulfosalicylové (3.6) xx rozpustí xx xxxx x xxxxxx xxxxx xx 1 xxxx.
3.23 xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxx xxxxxxxxxxx – fenol):
V malé xxxxxxx xx smíchá 0,5 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.1) s 4,5 ml roztoku xxxxxxxx mravenčí s xxxxxxx (3.19); xxxxxxx xx x xxxxx 1 xxxxxx při 20–30 °X, aby xx utvořila xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx přidáním xx vzorku se xxxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxx xxxxx (15 xxxxx).
Xxxxx:
Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x kůží x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx.
3.24 xxxxxxxxxxx tlumivý roztok, x = 0,2 xxx Xx+/x, xX 2,20:
X xxxxxxxxx 800 xx vody xx xxxxxxxx 19,61 g xxxxxxxxx xxxxxxx (3,8), 5 xx xxxxxxxxxxxxx (3.9), 1 x xxxxxx (3.3) a 16,50 ml HCl (3.7). xX xx xxxxxx na 2,20. Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxx 1 xxxxx.
3.25 eluční xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (4.9)
3.26 ninhydrinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx xxx použitý xxxxxxxxxx (4.9)
3.27 Xxxxxxxxxx xxxxxxx aminokyselin. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °X.
3.27.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.16.1), x = 2,5 μxxx/xx xxx každou xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx obdržet x xxxxxxxx připravené.
3.27.2 xxxxxxx xxxxxxxxxx základní xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx, c = 1,25 μmol/ml
0,2115 x xxxxxxxx xxxxxxxx (3.16.2) x 0,2265 g xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí (3.16.3) v citronanovém xxxxxxxx roztoku (3.24) x xxxxxxx odměrné xxxxx x doplní xx po značku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx pod 5 °X xxxxxxx 12 xxxxxx. Xxxxx roztok xx nepoužívá, pokud xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok (3.27.1) xxxxxxxx kyselinu xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx.
3.27.3 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxx, x = 20 μxxx/xx
0,6560 x xxxxxxxxxx (3.13) xx rozpustí v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztoku (3.24) x odměrné xxxxx xx 250 xx a doplní xx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X nejdéle 6 xxxxxx.
3.27.4 kalibrační xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx s hydrolyzáty, x = 5 xxxx/50 μl xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x x = 10 nmol/50 μl x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
Xx 100 xx kádince xx rozpustí 2,2 x xxxxxxxx sodného (3.10) x 30 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24). Xxxxxxx xx 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.27.1), 4,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx základního xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx (3.27.2) x 0,50 xx zásobního xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3), xxxxx xx xxxxxxx. xX xx upraví xx 2,20 hydroxidem xxxxxx (3.18).
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx do 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (3.24) x xxxxxxx xx.
Xxxxxxxx xx xxx teplotě pod 5 °C xxxxxxx 3 měsíce.
Viz také xxxxxxxx 9.1.
3.27.5 kalibrační xxxxxx standardních aminokyselin xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx podle xxxx 5.3.3.1 x xxx xxxxxxxx (5.2). Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx 3.27.4 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxx při xxxxxxx xxx 5 °C xxxxxxx 3 xxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 xxxx 250 xx opatřená zpětným xxxxxxxxx
4.2 nádoba x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx o xxxxxx 100 xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx těsněním (např. Xxxxx, Xxxxxx) xxx xxxxxxx v sušárně
4.3 xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxx ±2 °X
4.4 xX metr (xxx desetinná místa)
4.5 xxxxxxxxxx xxxxx (0,2 μx)
4.6 odstředivka
4.7 rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.8 xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.9 analyzátor aminokyselin xxxx xxxxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxxx kolonou, xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx derivatizaci x xxxxxxxxxxxxx detektorem.
Kolona xx xxxxxx sulfonovanou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx oddělení xxxxxxxxxxxx x separaci xx jiných ninhydrin xxxxxxxxxxx látek. Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stálostí průtoku ± 0,5 % xx xxxx zahrnující xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku.
Některé xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxxx vykazuje xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x = 0,8 xxx/x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx analyzátory xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx separaci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, obsahuje-li hydrolyzát xxxxxxxxxxx mravenčí xxxxxxxx x/xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx kyseliny xxxx xxxxxxx xX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 xx. Xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx nejvýše 40 °C.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x oky 0,5 xx. Xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxx nepřesahující 50 °X xxxx xxx zmrazení. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.12).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x x premixech
Do xxxxxxx xxxxx se xxxxxx příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx xx 0,2 xx x přidá xx 100,0 ml xxxxxxxxx směsi (3.21). Xxxxx xx xxxxx 60 minut xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na magnetické xxxxxxxx (4.8). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xx kádinky x obsahu 100 xx.
Xx stálého xxxxxxx xx xxxxx 50 xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx přefiltruje xxxx xxxxxxxx xxx, xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx x obsahu 100 ml, xX xx upraví na 2,20 xxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18), xxxxx xx roztok xxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.24) xx odměrné xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx značku xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx 1,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) na xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24).
Xxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 – chromatografie.
Nejsou-li xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx den, xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxx 5 °X.
5.3 Xxxxxxxxx celkových xxxxxxxxxxxx
5.3.1 xxxxxxx
0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) se xxxxxx x xxxxxxxxx 0,2 xx:
- do xxxxx s xxxxxxx xxxx x xxxxxx 100 ml (4.1) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (5.3.2.3) nebo
- do xxxxx x xxxxxxx xxxx x obsahu 250 xx (4.1), xxxxxxxx-xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx sodíku xxxx
- xx xxxxxx x xxxxxx 100 ml xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.2) (xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx 5.3.2.4).
Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx 10 xx x xxxxx vlhkosti xxxxxxxxxxxxx 100 xx.
Xxxxx/xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxx xxxxx x ochladí xx xx 0 °X, xxxxx se xxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxxx (3.23) x promíchá xx xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx. Baňka/nádoba xx uzavře x xx xxxxx vzduchotěsnou xxxxx x vloží xx i x xxxxx s ledovou xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 0 °X x xxxxxxx xx xxx 16 hodin. Xx 16 xxxxxxxx xx vyjme x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.4).
Xxxx xx pokračuje xxxxx 5.3.2.1.
5.3.2 xxxxxxxxx
5.3.2.1 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků
K xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.1 xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxx směsi (3.20) xxx, aby xxxxxxx xxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxxx xxx xx lžíci. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx hydrolýzy xx pokračuje xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4.
5.3.2.2 xxxxxxxxx neoxidovaných xxxxxx
Xx xxxxx s kulatým xxxx o xxxxxx 100 xx xxxx 250 xx (4.1) xxxx xx xxxxxx x xxxxxx100 xx xx xxxxxxxxxxx uzávěrem (4.2) se xxxxxx 0,1 až 1 x xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) s xxxxxxxxx xx 0,2 xx. Xxxxxxxx část vzorku xx měla xxx xxxxx dusíku xxx 10 mg. Xxxxxxx xx xxxxx 25 xx hydrolyzační xxxxx (3.20) a xxxxxx xx xx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxxx xxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx podle 5.3.2.4.
5.3.2.3 xxxxxxxx xxxxxxxxx
Xx xxxxx x xxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2) xx přidají 3 skleněné kuličky x xxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxx pod zpětným xxxxxxxxx xx xxxx 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 5 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24). Xxxxx se odpojí x ochladí xx x xxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3.
5.3.2.4 uzavřená xxxxxxxxx
Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.1 xxxx 5.3.2.2 se xxxxxx xx xxxxxxx (4.3) xxx 110 °X. Xxx se xxxxx xxxxx hodiny xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx x výbuchu, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx volně xx xxxxx. Nádoba xx xxxxxxxxx. Xx uplynutí xxxxx hodiny xx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx (4.3) 23 xxxxx. Xx xxxxxxxx hydrolýzy xx baňka vyjme xx xxxxxxx, opatrně xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xx lázně x xxxxxxx vodou. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xX (5.3.3) xx xxxxx baňky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx tlumivého xxxxxxx (3.24) xx kádinky x xxxxxx 250 xx xxxx xx xxxxx s kulatým xxxx o xxxxxx 250 xx.
Xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx 5.3.3
5.3.3 xxxxxx pH
Podle toho, xxxxx toleranci x xxxxxx má xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9), postupujte xxx úpravě pH xxxxx 5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2.
5.3.3.1 xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.9), xxxxxxxxxx xxxxxx koncentraci xxxxxx:
Xxxxx xxxxxxxxxx aminokyselin vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xx-xx xx xxxxxx xxxxx kyselin), doporučuje xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.27.3).
X takovém xxxxxxx xx xxxx odpařováním xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 2,00 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.27.3).
Do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4. xx xxxxxxx 2 kapky 1-xxxxxxxx (3.15).
Xx xxxxxxx xxxxxxx (4.7) xx xxxxx xxxxx xx 5-10 xx xx xxxxx při 40 °X. Xxxxx xx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx 5 xx, xxxxxxxxxx xx xxxxx odstranit x xxxxx xxxxxxx xxxxx.
xX xx xxxxxx na 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.18) x xxxxxxxxx xx podle xxxx 5.3.4.
5.3.3.2 xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9)
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx 5.3.2.3 xxxx 5.3.2.4 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přidáním 17 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.17), xx xxxxxxx xxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx 40 °X.
xX xx xxxxxx xx 2,20 xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.18) xxx pokojové teplotě. Xxxx se pokračuje xxxxx xxxx 5.3.4.
5.3.4 xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx (5.3.3.1 xxxx 5.3.3.2) s upraveným xX se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztoku (3.24) xx xxxxxxx xxxxx x obsahu 200 xx x tlumivým xxxxxxxx (3.24) xx xxxxxx xx značku.
Nebyl-li xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx 2,00 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.27.3) x xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24). Xxxxxxxx xx xxxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx (5.4)
Xxxxxx-xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx týž xxx, xxxxxxxxxxx xx xxx teplotě xxx 5 °C.
5.4 Chromatografie
Před xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx (5.2) x xxxxxxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xxxxxxx. Směs xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 0,2 μ (4.5). Xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx je důležité, xxx xx xx xxxxxxx nastřikovalo stejné xxxxxxxx xxxxxxx ± 0,5 % jak xxx analýze xxxxxxxxx xxx vzorků x xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx poměr sodíku x xxxxxxxxxxxxxx by xxx být v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x roztocích xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx ninhydrinového xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Standard nebo xxxxxx xx ředí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx roztokem (3.24) xxx, aby xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 30 – 200 % xxxxxx xxxx pro jednotlivé xxxxxxxxxxxxx v roztoku xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx aminokyselin xx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx. Zvolený xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx od sebe xxxxxxxx x od xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx reagovat xx xxxxx xxxxxx aminokyselin xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx aminokyselin, xx xxxx xxx dosaženy xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxx equimolární xxxxxxx xxxx obsahovat xxxxxxx 30 % xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx mohou xxx xxxxx přesně xxxxxxxxx na použitém xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.9).
Xxx xxxxxxxx threoninu x xxxxxx xx xxxxx xxxxx sedla x xxxxxxx píku nižšího x xxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx neměl xxxxxxxxxx 2:10 (pokud se xxxxxxx xxxxx cyst(e)in, xxxxxxxxx, threonin x xxxxx, je stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx přilehlých xxxx). Xxx xxxxxxx ostatní xxxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx než 1:10.
Xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx od "xxxxxxxxxx xxxxxxxx" x ornithinu.
6. Xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxx píků xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxx pro každou xxxxxxxxxxx aminokyselinu x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v g xx xx xxxxxx.
x xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxx = X × E × XX × X / X × X × 1 000
Xx-xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx: X / X
X = plocha xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx x extraktu
D = xxxxxx píku interního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
XX = xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = koncentrace xxxxxxxxx x μxxx/xx
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (x) (korigovaná xx původní xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx nebo odtučněn)
F = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx roztoku (5.3.4) x xx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vypočteného xxxxx 6.1
Xxxxxx x xxxxxxx xx x hydrolyzátech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx kyselina xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx (X6X12X2X4X2, XX 240,30) x xxxxxxxx MV 120,15 (= 0,5 x 240,30).
Xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx MV methioninu: 149,21.
Xxxxxxx volný methionin xx xxxxxxxx po xxxxxxxx xxxx methionin, xxx xxxxxxx xx xxxxxxx stejná XX.
6.1 Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (F) xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (5.2) se vypočítá xxxxx xxxxxx xxxxxx:
X = 100 xx × (10 xx + 5 ml) / 10 ml × X&xxxx;xx / 10xx
X = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx 1990 xxx xxxxxxx čtyř xxxxxxx xxxxx (krmná směs xxx prasata, krmná xxxx xxx broilery, xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx). Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledky středních xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx uvedeny x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
xxxxxxx hodnoty x x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
6,94 x = 15 |
3,01 x = 17 |
3.27 x =.17 |
9,55 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
9,31 x = 16 |
3,92 n = 18 |
5,08 x = 18 |
13,93 n = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
22,32 x = 16 |
5,06 x = 17 |
12,01 x = 17 |
47,74 x = 15 |
|
Xxxxxx |
58,42 x = 16 |
- |
90,21 x = 16 |
98,03 x = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx vnitrolaboratorní standardní xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx tabulkou:
standardní xxxxxxxx (Xx) opakovatelnosti v xxxxxxxxxx x g/kg
|
Referenční xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx |
0,13 x = 15 |
0,10 x = 17 |
0,11 x = 17 |
0,26 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx pro xxxxxxxx |
0,20 n = 16 |
0,11 x = 18 |
0,16 n = 18 |
0,28 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,13 x = 17 |
0,27 n = 17 |
0,99 n = 15 |
|
Xxxxxx |
1.30 x = 16 |
_ |
2,19 n = 16 |
2,06 x = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx (%) vnitrlaboratorních xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xx)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
Xxxxxxxx |
xxxx(x)xx |
Xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
1,9 x = 15 |
3,3 x = 17 |
3,4 n =.17 |
2,8 x = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx brojlery |
2,1 x = 16 |
2,8 x = 18 |
3,1 x = 18 |
2,1 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
2,7 n = 16 |
2,6 x = 17 |
2,2 x = 17 |
2,4 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,2 x = 16 |
- |
2,4 x = 16 |
2,1 n = 16 |
x = xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
7.2 Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx odchylek xxxxxxxxxxx ze xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx v následující xxxxxxx:
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX) v x/xx
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
0,28 x = 15 |
0,30 n = 17 |
0,23 x = 17 |
0,30 x = 13 |
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxxx |
0,48 x = 16 |
0,34 x = 18 |
0,55 x = 18 |
0,75 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
0,85 x = 16 |
0,62 n = 17 |
1,57 n = 17 |
1,24 x = 15 |
|
Xxxxxx |
2,49 n = 16 |
- |
6,20 x = 16 |
6,62 x = 16 |
n = xxxxx xxxxxxxxxxxx laboratoří
Variační xxxxxxxxxx (%) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (XX)
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xxxxxxxxxxxxx |
|||
|
xxxxxxxx |
Xxxx(x)xx |
xxxxxxxxx |
xxxxx |
|
|
Xxxxx směs xxx xxxxxxx |
4,1 x = 15 |
9,9 x = 17 |
7,0 x = 17 |
3,2 n = 13 |
|
Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx |
5,2 x = 16 |
8,8 x = 18 |
10,9 x = 18 |
5,4 x = 16 |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
3,8 x = 16 |
12,3 x = 17 |
13,0 x = 17 |
3,0 x = 15 |
|
Xxxxxx |
4,3 x = 16 |
- |
6,9 x = 16 |
6,7 x = 16 |
x = xxxxx zúčastněných xxxxxxxxxx
8. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx opakovaným xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx-xx x xxxxxxxxx. Doporučuje se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kalibračními xxxxxxx aminokyselin.
9. Poznámky
9.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx standardů xxxxxxxxxxxx (xxx 3.27.4 x 3.27.5) x xxxxxxx xxxxxx (5.3.4) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx pro všechny xxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx citronanovým xxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xx dosáhlo xxxxx xxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxx.
9.2 Pokud xx x xxxxxxx hydrolyzátů xxxxxxx zařízení xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx zkoušek optimalizovány x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x krmiv obsahujících xxxx než 1 % xxxxxxxx (koncentráty, xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx) xxxx dojít x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
XXXX X XXXXXXXXX XXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xx stanoví xxxxx tuku x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx, xxxxxxx zkoušení xx xxxx xxxxx xxxxxxxx Rady 136/66/XXX xx xxx 22. xxxx 1996.
Xxxxx xxxxx x složení krmiva xx xxx analýzu xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:
1.1 Xxxxxx X – xxxxx extrahovatelné xxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx X.
1.2 Xxxxxx X – xxxxxxx xxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxx krmné xxxxx. Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx materiály, x nichž xxxx xxxxx xxx úplně xxxxxxxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx. lepky, xxxxxxxx, bramborové xxxxxxxx x výrobky, xxxxx xxxx xxxxxxxxx zpracování, xxxx xxxxxxxxxxx, vločkování x xxxxxxxxx).
1.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx všech případech, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx výsledku postupem X, xxx xxxxxxxx X, xx třeba xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
2. Xxxxxxx
2.1 Postup X
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x zbytek xx xxxxxx x xxxxx.
2.2 Postup X
Xxxxxx xx zahřívá x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Směs xx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxx zbytek xx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
3. Činidla
3.1 xxxxxxxxxxx s xxxxx xxxx mezi 40 x 50 °X. Xxxxxxx bromového xxxxx xxxx xxx menší xxx 1 x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx než 2 xx/100 ml
3.2 síran xxxxx, xxxxxxx
3.3 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 3 xxx HCl/l
3.4 xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx, Xxxxx-xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx x pomůcky
4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx by měla xxxxxxx xxx 10 xxxxx xx hodinu. X typu xxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx 10 xx xx xxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxx 4.1.
4.3 Xxxxxxx, buď xxxxxxx xxxxxxxx xx 75 °X ± 3 °X, xxxx horkovzdušná xxxxxxxx na 100 °X ± 3 °X.
5. Postup
5.1 Xxxxxx X (xxx xxx 8.1)
Xx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx (4.2) x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx.
Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.1) x xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.1). Petroletherový xxxxxxx xx xxxx xx suché, xxxxxx xxxxxxx baňky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx [1].
Xxxxxxxxxxxx se oddestiluje, xxxxxx x baňce xx xxxx 1,5 xxxxxx v xxxxxxx (4.3). Xxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x zváží. Xxxx xx dalších 30 xxxxx, xxx se xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx následujícími xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx 1 mg).
5.2 Xxxxxx B
Do xxxxxxx x xxxxxx 400 xx xxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 300 ml xx xxxxxx 2,5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx (xxx bod (8,2) x xxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.3) x úlomky xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx varu xx xxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx a vaří xx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Během xxxx xx xxxx xxxxxxxx usazování xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxx x přidá se xxxxxxxxxx množství filtračního xxxxxxxxxx (3.4), xxx xxx filtraci xxxxxxx xx ztrátám xxxx. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zbavený tuku. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx vodou, až xx získá xxxxxxxxx xxxxxxx. Provede xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxxxx xxxx před hydrolýzou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx položí xx xxxxxxxx xxxx x xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x horkovzdušné xxxxxxx (4.3) xxx xxxxxxx 100 °C ± 3 °X.
Xxxxxxx xxxxxxxxx papír x xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxx do extrakční xxxxxxx (4.2) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx tuku. Patrona xx vloží xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.1) x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx druhého x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 5.1.
6. Vyjádření xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx procento xx vzorku.
7. Opakovatelnost
Rozdíl xx xxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pracovníkem by xxxxx xxxxxxxxxx:
- 0,2 % v xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx obsahu xxxx xxxxxx xxx 5 %,
- 4,0 % xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx výsledku při xxxxxx xx 5 xx 10 %,
- 0,4 % x xxxxxxxxx hodnotě, xxx xxxxxx nad 10 %.
8. Xxxxxxxx
8.1 X xxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxx x xxxx, které se xxxxxxx xxxx nebo xxxxx neumožňují odebrat xxxxxxxxxx homogenní vzorek, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxx xx 20 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxxxxx xx s 10 xxxx i xxxx xxxxx xxxxxxxxx síranu xxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxx xx petroletherem (3.1) xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxxx (3.1) x promíchá xx. 50 xx xxxxxxx xx odpipetuje do xxxx xxxxx, předem xxxxxxx baňky, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx [2].
Xxxxxxxxxxxx xx oddestilujte, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxx odstavce xxxx 5.1.
Xxxxx xxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx:
(10 x + x) × 5
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxxxx)
x = xxxxxxxx xxxxxx xx druhé xxxxxxxx x xxxxxxx
8.2 U xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx xx může xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvýšit xx 5 x.
8.3 Xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx obsah vody, xx xxxx před xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx postupu X xxxxxxx x bezvodým xxxxxxx xxxxxx.
8.4 X xxxx 5.2 se xxxx xx opláchnutí xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx místo vody xxxxxxx.
8.5 U některých xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx doba xxxxxx xxx 1,5 xxx. Xx xxxx třeba xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx může xxxx x nízkým xxxxxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.
8.6 Xxx xxxxxx xxxx xxx 15 % xx doporučuje xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupu A x následně extrakci xxxxx xxxxxxx B. Xxxxxx to xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxx tuku x xxxxxx.
XXXX C
STANOVENÍ OLACHINDOXU
(2-[N-2-(hydroxyethyl)karbamoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid)
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx metodou xx xxxxxxx xxxxx olachindoxu x krmivech. Xxxxx xxx stanovitelnosti xx 5 mg/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx a methanolu. Xxxxx olachindoxu xx xxxxxxxx vysoce xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx UV xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 methanol
3.2 xxxxxxxx, xxx HPCL
3.3 xxxx, xxx XXXX
3.4 xxxxxxx fáze xxx XXXX:
Xxxx xxxx (3.3) x xxxxxxxxx (3.2), 900 + 100 (X + X)
3.5 xxxxxxxxxx xxxxx: čistý xxxxxxxxxx 2-[N-2-(hydroxyethyl)karbomoyl]-3-methylchinoxalin-N1,N4-dioxid, E 851
3.5.1 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok olachindoxu, 250 μx/xx
Xx xxxxxxx xxxxx o obsahu 200 xx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxxxxxx na 0,1 xx x xxxxx xxx 190 xx xxxx. Baňka se xxxxxxx xx 20 xxxxx xx ultrazvukové xxxxx (4.1). Xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx roztok xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx, doplní xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxx se xxxxx hliníkovou xxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx musí xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx.
3.5.2 xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, 25 μx/xx
10,0 xx zásobního standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx do xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 xx, xxxxxx xx xx xxxxxx mobilní xxxx (3.4) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx. Xxxxx roztok xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
3.5.3 xxxxxxxxxx roztoky
Do xxxx xxxxxxxxx xxxxx x obsahu 50 xx se odpipetuje 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 x 20,0 ml pracovního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.5.2). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx (3.4) xx xxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx se obalí xxxxxxxxxx xxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxxxxx 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 a 10,0 μx olachindoxu xx xx.
Xxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx.
4. Přístroje a xxxxxxx
4.1 xxxxxxxxxxxx xxxxx
4.2 xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.3 xxxxxxxx XXXX s xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx ultrafialového xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
4.3.1 xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 xx, xxxxxxx X18, 10 μx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx
4.4 xxxxxxxxxx filtry x xxxx 0,45 μx
5. Postup
Poznámka:
Olachindox xx xxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx postupy xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx světle xxxx x xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx.
5.1 Obecně
5.1.1 Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx analyzovat xxx kontrolu, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxxxxx na xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx krmiva xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, které odpovídá xxxx xxxxxx xx xxxxxx K xxxxxxxxxxx xx úroveň 50 xx/xx xx xxxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.1) xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxx xx odpaří xx xxx 0,5 xx. Přidá xx 50 x xxxxxxxxxx xxxxxx, řádně xx xxxxxxxx x nechá xx 10 minut xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx několikrát promíchá. Xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx (5.2).
Poznámka:
Pro xxxxx xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxx podobného xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x nesmí xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx 50 g xxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1000 xx, xxxxx se 100 xx xxxxxxxxx (3.1) x baňka xx xxxxxx xx xxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxx xx 410 ml xxxx a ponechá xx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 15 xxxxx. Baňka xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxx se xxxxx 30 xxxxx xx xxxxxxxx (4.2) x xxxxx xx xxxxxxxxxxx složeným filtrem. 10,0 xx filtrátu xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 20 xx, xxxxxx se vodou xx xxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) (xxx xxx 9. Poznámky). Xxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXXX (5.3).
5.3 Xxxxxxxxx XXXX
5.3.1 Parametry:
Následující xxxxxxxx jsou doporučené, xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxxxx výsledky.
analytická kolona (4.3.1)
xxxxxxx xxxx (3,4): Xxxx xxxx (3.3) x methanolu (3.2), 900 + 100 (X + X)
xxxxxxxxx xxxxxxxx: 1,5–2 ml/min
detekční xxxxxx xxxxx: 380 xx
xxxxx nástřiku: 20 μx–100 μx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxx, xx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx (3.5.3) xxxxxxxxxx 2,5 μx/xx, xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx píků a xxxxxxxxxx xxxx.
5.3.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Sestrojí se xxxx xx použití xxxxxxxxx xxxxxx výšek (xxxxx) xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x μx/xx xxxx xxxxxxxxx.
5.3.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (5.2) xxx xxxxxxx stejného xxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxx xxxxx (plocha) píků xxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
Ze xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx olachindoxu x xxxxxxx xxxxxx xx zjistí koncentrace x roztoku xxxxxx x μg/ml xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (5.3.2).
Xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx x v xx/xx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = x × 1&xxxx;000 / x
xxx:
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (5.2) x μx/xx
x = xxxxxxxx xxxxxxx vzorku x g (5.2)
7. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx stanovením x přídavkem (co-chromatography) xxxxx xxxxxxxx detektoru x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx porovnávají xxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2) x kalibračního xxxxxxx (3.5.3), obsahujícího 5,0 μx/xx xxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (xx-xxxxxxxxxxxxxx)
Xxxxxxx xxxxxx (5.2) se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.5.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx olachindoxu xx mělo odpovídat xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x extraktu xxxxxx.
X xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx jen ke xxxxxxx výšky xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx píku x polovině xxxx xxxxx musí xxx x rozmezí ±10 % xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx kritérií:
a) při xxxxxx délce xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu xxxx xx xxxxxxxxxxxxx stejný x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx detektor x diodovým polem xx xxxxx ±2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 400 xx xx nesmí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx částí spektra x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx odchylka xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx spektrum vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % xxxxxxxxxx spektra xx xxxxxxx píku.
Není-li xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx splněno, xxxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx při obsahu xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 20 mg/kg, xxxxx xxxxxxxxxx15 % xxxxxxx výsledku.
7.3 Výtěžnost
Pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx 90 %.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
X xxxxx XX xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxx němž xx 13 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx krmiva xxx selata, včetně xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x následující xxxxxxx:
|
| xxxxxx 1 |
xxxxxx 2 |
xxxxxx 3 |
xxxxxx 4 |
|
|
L |
13 |
10 |
11 |
11 |
|
A |
40 |
40 |
44 |
44 |
|
střední (xx/xx) |
- |
14,6 |
48,0 |
95,4 |
|
(Xx) (xx/xx) |
- |
0,82 |
2,05 |
6,36 |
|
(XX) (xx/xx) |
- |
1,62 |
4,28 |
8,42 |
|
XXx (%) |
- |
5,6 |
4,3 |
6,7 |
|
CVR (%) |
- |
11,1 |
8,9 |
8,8 |
|
xxxxxxxxx xxxxx (xx/xx) |
- |
15 |
50 |
100 |
|
xxxxxxxxx (%) |
- |
97,3 |
96,0 |
95,4 |
X: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
CVr: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxx koeficient reprodukovatelnosti
9. Xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx metoda xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xx/xx xxxxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx uspokojivé výsledky xxxxx xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (5.2) tak, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.3.2).
[1] Pokud xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xxxxxx pemzy xx xxxxxxxx xxxxxxx.
[2] Pokud xx xx tuk xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxx, zamění xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx.