Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx směrnici Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], a zejména xx článek 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx vzorků x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx proteinů, hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) přílohy xxxxx směrnice Komise x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, xxxxxx xx xxxxxxx analytické metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971, s xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxx, xx použijí xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx xxxxxxxx.
Článek 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Neprodleně x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Xxxxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit obsah xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx o vysoké xxxxxxxxxxx hmotnosti xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx těch krmiv, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, řepnou xxxxx, xxxxxx xxxxx skrojky xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx kvasnice, xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx (např. xxxxx x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx tepla xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xx čiření x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných podmínek xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx udává xxxxx xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (V/V) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok XX: xxxxxxxxx ve vodě 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx o xxxxxx 250 ml x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx prošel xxxxx x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxxxx x přidat xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu prvních xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, aby x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx z xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Carrezova roztoku X (3.3) a xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx XX (3.4) x xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Pokud xxxx filtrát xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx v 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxx xxxx doby xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx x xxxxxxx xx xx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx chladnější vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx I (3.3) x XX (3.4), doplnit xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx x změřit xxxxxxxx rotaci, jak xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah škrobu (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Xxxxxx polarimetrem
procenta xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]D20°
kde je:
P = xxxxxxx optická xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný xxxxx
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x směsi xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (X - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx ve 100 xx vody, xxxxx xx xxx tloušťce 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx německé sacharimetry
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace čistého xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx sušené xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxx 50 °X. Nechat vychladnout x pokračovat x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 5.3.
2. STANOVENÍ XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové, xxxxx přebytek xx xxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx XxX x.x. nebo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx nebo xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Kyselina xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 ml 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5H2O x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 g xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nevře. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Když xx xxxxxx xxxx a xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx použije katalyzátor xx bázi xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dusíku (xxx poznámky 7.2) x přidat několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x ponořit xxxxx xxxxxxxx do kapaliny xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx nejméně 1 cm (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 100 ml 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx rovněž xxx 10 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx asi 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx destilace xxx xx xxxx promíchat xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx ke xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 N (3.10) v závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx zbarvení nezmění xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx pokus (xxxxxxxxx a titrace), x xx bez xxxxxx, xxxxx má xxx analyzován. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x titrace) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx p.a. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx sírové 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx dusíku. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx některé xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx mezi mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx baňky, snížen xx 10 až 15 xx a xxxxxxx vodou xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, xxxxxx hydroxid xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x pomalu xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx tak, xxx xx nesmíchala x roztokem kyseliny.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX PROTEINŮ XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanovených xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Suspenze xx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx ve xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx pro stanovení xxxxxx hrubých proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x musí xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě připravený xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx v bodě 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx metody.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Přidat 450 xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °C. Xxxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 hodinách přidat 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx po xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x dát xx xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx téměř xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx stopy vody.
Když xx xxxxxx xxxx x bezbarvý (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx pokus xx xxxxxxx stejného postupu, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx během slepého xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx extrakcí xxxxxxxxxxxx (b.v. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY PEPSINU
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje stanovit xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx chlorovodíkovou.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx proteinů xx xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx filtrátu xx xxxxx xxxxxxxx sodný x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx hustota xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x odpovídající xxxxxxxx xxxxxxxx xx odečte x xxxxxxxxxx křivky.
Definice: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako množství xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx uvolní xx xxxxxx takové xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina chlorovodíková 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 g xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx x kulatým xxxx a normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx kyseliny fosforečné (x: 1,71) a 100 xx koncentrované xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx baňku xx xxxxxx chladič, xxxxx do xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Li2SO4 · 2H2O), 50 xx xxxx a 1 xx brómu. Xxxxx xx dobu 15 minut, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx vychladnout. Přelít xxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 l, doplnit xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx a filtrovat. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Před použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx několik xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, dokud se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx tohoto roztoku x rozředit kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 ml. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx xx 100 xx kyseliny chlorovodíkové (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx a xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx získaného xxxxx bodu 5.1 x promíchat xxx xxxxxx pohyby tam x zpět xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou xx xxxxxx xxxxx. Nechat xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X xxxxxx po xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx přidání xxxxxxx pepsinu (doba x teplota xxxx xxx přesně xxxxxxxx). Xxxx přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx filtr.
5.3 Xxxxx zbarvení a xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) a xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x kyvetách x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx kyseliny trichloroctové (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx zkumavku xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx suchý filtr. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx alikvotního xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx referenčním roztokem xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx hustotu xxx xx xxxxxxx x poslední xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx z kalibrační xxxxxx množství tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hustotě xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita pepsinu x μxxxxxx tyrosinu xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (j/mg) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx rozpuštěno, musí xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx na mg xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Ansonovovým milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 min. xxx 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx volný gossypolu, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 xxx.
2. Princip
Gossypol xx extrahován za xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Gossypol xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx gossypol-dianilin, jehož xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx při 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 objemovými xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x nalít xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx rysku směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud xxxxxxx xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto činidlo xx skladuje x xxxxxxxxxx xxxxxxx měsíců x xxxxxxxxxxx lahvi x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx xxx 27,9 xx octanu xxxxxxxxx. Rozpustit x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx stát xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Xxxxxxxxx x doplnit xx xxxxx rozpouštědlem X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X a X chráněny xxxx xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 ot./mim.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxxxx na předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx přesné xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx xxxxx xxxxx xx může xxx 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx xxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx mělo být xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx obsahovala 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx rozpouštědla X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx filtr a xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (X a X) x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx jako referenční xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxxxxx (B) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx pokus od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx hodnoty vypočítat xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek obsahující 1 až 5 xx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x přidat 10 xx rozpouštědla B (3.3). Současně připravit xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Zahřívat xxx xxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx lázní. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx po xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Homogenizovat x xxxxxx xxxx 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxxx hrdlem.
Pomocí pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx vzorku xx dvou xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 xx x 2 ml filtrátu xxxxxxx pokusu xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx jedné baňky x každé série xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxxx roztoky.
Přidat 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx v xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx optické xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1cm = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx hustota, stanovená xxx xx uvedeno x bodě 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx část xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx dvě xxxxx po xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. X xxxxx série xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx rozpouštědlem X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx xxxxx xxxxx xxxxx série 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí xxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx standardní série xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (v μx).
6.2.2 Celkový xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 10 ml xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx baňky xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu x promíchat.
Přidat pipetou 2 ml těchto xxxxxxx xx dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah xxxxx xxxxx série xx 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát xxxxx xxxxxx (standardní série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxx optické xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného vzorku xxxxx překročit:
- 15 % xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx než 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx obsah: 17,7 % xxxxxx).
XXXXXXX XX
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx a identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, x koncentrátech x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx směsí xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x porovnání x referenčními roztoky. Xxxxxxxxxxx jsou stanovena x identifikována porovnáním xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx fluorescencí x XX xxxxxx (vysoký xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx naočkovaném B. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a očkování xxxxxxxxxxxx média: xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. a 3.2. metody pro xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich x Xxxxxxx papír (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx základě standardních xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx nižší xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx nacházejí xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx nebo xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx papír 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a xxxxxxxx (6.1 a 6.2). Xxx xxxxx oddělení xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; xxxxx xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografií. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x eluent II (3.4) pro stanovení XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 až 20 xx (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x xxxxxxx papír.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx obsah antibiotika xxxxx než 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX lampou xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx kultivační xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx a položit xx xx xxxxx xxxxxx x kultivačním xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx inkubační doby. Xxxxxxxxx přes xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx světlými xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx kultivačním médiu.
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik xxxx xxxxxxx zde. Xxxx hodnoty se xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x tetracyklin (XX) x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí x xxxxxx antibiotická aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XXX, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx médiu naočkovaném X. xxxxxx. Difúze xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx borité, jehož xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx ověřena sporulace, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx na deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx pro použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2X2X p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xx pH 4,5 xx použití xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 N.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx je vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx. Xxxxxxx xx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx bylo přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx oxytetracyklinu-HCL na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx přidat xxxxxxxx (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx ihned xxxxxx xxxxxxxxxx pufrem (4.3) xxxxx xxxxxx x tabulce x xxxxx získat xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx připravit koncentrace X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební xxxxxx x g |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
ml formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
xxx. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu antibiotika xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxx extrakce xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; pokud xx to xxxxx, xxxxxxx xX xx 3 (u minerálních xxxxxxxxx xx použití 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx pH xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně (xxxxxx xx xx xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + U8 - X1 -S2 -X4 -S8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná aktivita x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXX xx xxxxxx xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx obsahu XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx xxxxxxx světelné xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx bylo naočkováno Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus K 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx se xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 hodin xxxx xxxxxxxx přeočkovat šikmý xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx celou kulturu xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx přenést xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx 37 °X xxxxx růst kmene xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx fáze (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx stanovení [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
|
xX xx sterilizaci: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 ml |
4.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) roztoku xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, OTC, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx roztok
Na xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x chladničce xxxxx xxxxx.
6. Xxxxxxxx
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx baňky x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Přidat xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx načrtne kalibrační xxxxxx, ne xxxxx xx znázorní interpolace xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx. Ředění se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, které xx mohou xxxxx xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Chlortetracyklin
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx dvou jiných xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 0,6 μg XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx roztoku xx dvou zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxx xxxxxx zkumavek xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 xx xxxxxx xxx nastavení aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.2). Xxxxxxxx zkumavek xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxx, xxx nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx přesná xxxxxx (obecně 2x30 xx 3h). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx na 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu obsahu xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx propustnosti xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tris (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx B. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx přítomnosti xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx těchto xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 XX [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Skladovat kulturu x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx asi 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), jehož koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx smýt xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx oleandomycinu největší xxxxx, ale ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 a 0,2 ml xx 1000 ml. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx pH na 6,5. |
4.2 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) v 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx koncentraci oleandomycinu 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Extrakce
V xxxxxxxxxx xx předpokládaném xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx roztoku (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, odebrat xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, S4, S2, X1) a čtyř xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 mm. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx získání stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx tylosin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx se xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes xxx xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx fyziologického roztoku (4.4). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Inkubovat 24 xxxxx xxx 35 °C, xxxx xxxx bakterie xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx získat 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 nm.
Pokud xx tato suspenze xxxxxxxx x chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx při 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový extrakt |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx suspenze xxxxxxx xX na7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx pufr, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý methanol: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 hodiny xxx 60 °X xx vakuové sušárně (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x xxxxxxxxxx vzorku; xxx premixy x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Ultra-turrax xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx při 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) upravené xx xX 8 xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (U8, X4,X2, U1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru děr.
U xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx zředí x xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Průměr xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx použití 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx za pomoci 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx tuto xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx skladuje x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx týden.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a činidla
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 ml |
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx postupným xxxxxxx (1+) za použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x obsahu virginiamycinu xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x zkušebního xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxx do xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Rozpustit xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x U1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx zředit xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1, xxx xx xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 48 xx 50 °C xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x miskách za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx x průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx děr xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat difúzi xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx použito jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx roztoků (xxxxx kruhy).
[6] Xxxxx xxxx izolovaný v Xxxxx podle XXXX xxxxxxxx rychlejší xxxx xxx S. aureus XXXX 6538 X.
[7] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Xxxxx podle XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.