Xxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 27. dubna 1972,
xxxxxx se stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Společenství pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx se jakosti x složení krmiv, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx dne 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že opatření xxxx směrnice xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxxx xxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx gossypolu, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS xx xxx 15. června 1971, xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x stanovení a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx popsaných x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Obecná xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) přílohy xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx týkající xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx použijí xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
XXXXXXX X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit obsah xxxxxx x produktů xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx těch xxxxx, xxxxx xxxxxxxx řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (např. xxxxx x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při prvním xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx extrahuje 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx mezi xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx vzorku.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) kyselina xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí být xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) ethanolu. 10 ml = 30,94 xx 0,1 X NaOH.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxx X: xxxxxxxxx xx vodě 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X a 3 x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx roztok II: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 g xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [K4(Fe(CN)6].3H2O. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 xxx 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxxx sítem x xxxxxxxx xxx x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x přidat xxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxx minut silně x xxxxxxxxxx protřepávat, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx baňky xxxxxxx lázeň xx xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx vyjmuta x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx po 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x lázně, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx zchladit xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Carrezova xxxxxxx XX (3.4) a xxxx jednu minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx x 200 xx trubici.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (P’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 ml xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx protřepat, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx smíchal x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx ji xx xxxxxx vodní xxxxx. Přesně xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a II (3.4), doplnit xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - P’) / [α]X20°
xxx je:
P = xxxxxxx optická xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, x úhlových xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: ječný škrob
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx ve 40 % ethanolu, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy v xxxxxxx ve 100 xx xxxx, která xx při xxxxxxxx 200 xx optickou xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 absolutní hodnoty xxx xxxxx škrobu xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zničeny xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 V xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx laktózy, jako xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, postupovat xx přidání 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Nechat vychladnout x pokračovat x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodě 5.3.
2. STANOVENÍ HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Kyselý xxxxxx se alkalizuje xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx roztokem xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Síran xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx pentahydrát XxXX4 · 5H2O p.a., xxxx xxxx xxxx xxxx rtuťnatý XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Kyselina sírová x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx sírová 0,1 X.
3.6 Kyselina sírová 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5H2O x.x.
3.13 Granulovaná pemza, xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.1).
5. Postup
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 g xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 g oxidu xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx nebo 0,6-0,7 g xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx sírové (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, nejprve xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, dokud hmota xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (světlezelený, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi mědi), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; poté xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Přidat xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx přesně odměřené xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx poznámky 7.2) x xxxxxx několik xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxxxxx aparatury x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejméně 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx s kohoutem xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx byl použit xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, přidat do xxxxx xxxxxx xxx 10 xx roztoku xxxxxx sodného (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx thiosíranu xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Xx xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx je xxxxxx alkalická, pokračovat x destilaci. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, že xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx čas xx xxxx promíchat xxxxx xxxxxx baňky x xxxxxxxxx zbarvení. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx baňce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, který xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x titrace) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx dusíku; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X odpovídá 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx použít některé xxxxxxxxx, xxxxx vyžadují xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x destilací. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx musí xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 U xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx má xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx baňka destilační xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x pomalu xxxxx kapalinu xx xxxxxxx baňky xxx, xxx xx nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxx xxxxxxx proteinů rozpustných xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové. Suspenze xx filtruje a xxxxx dusíku ve xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx hrubých proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 4 xxxx xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx x souladu x xxxxx xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx připravený xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx nebo inkubátor xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x objemu 500 ml. Přidat 450 xx roztoku xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx je xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx inkubátoru (4.1) x nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 hodinách. Xx 48 xxxxxxxx xxxxxx 15 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx baňky destilační xxxxxxxxx (4.2). Přidat xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx bodu 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx xxxx. Xxxxx xx xxxxxxx pěna, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx použije xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx další xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x titrace
Postupovat, xxx xx uvedeno v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx bez xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx objemu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,4 absolutní hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % relativní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx vyšším xxx 10 % musí xxx odtučněny extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stanovených xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx proteinů se xxxxxxx xxxxxxxxx trichloroctovou. Xx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se měří xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx se xxxxxx x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xx xxxxxxxx metody xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx skupin, xxxxxxx zbarvení xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 25 x molybdenanu xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2H2O) x 700 xx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Přidat 50 xx kyseliny xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x mírném xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx chladič, xxxxxx 175 g xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody a 1 ml xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx zůstat xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Před použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 g xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] a xxx xx baňky o xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx zábrusem. Xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx vakuum a xx protřepávání doplnit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx). Odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x rozředit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx nastavená ultratermostatem xx 25 °C + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, přesnost: 1 sekunda.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx a xxx ho do xxxxxxx baňky o xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x promíchat xxx xxxxxx xxxxxx xxx x zpět skleněnou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 25 °X přesně xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx musí xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 xx zředěného xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Po 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx spektrofotometrem xxx 750 nm x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x porovnání x xxxxx.
5.4 Xxxxx pokus
Pro xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °C, homogenizovat x xxxx přidat 1,0 xx roztoku xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 xxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μmolu xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.1) na 5,0 xx. Přidat 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x poslední xxxx xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx množství tyrosinu x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pokusem.
Aktivita xxxxxxx x μmolech xxxxxxxx xx 1 xx x za xxxxx xxxxxx xxx 25 °X se vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx na xx (j/mg) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x xx xxxxxxx podle bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření získána xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 komerčních jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x za 10 xxx. při 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx obsahu je 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, nebo xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu přeměněn xx gossypol-dianilin, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx při 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx isopropanolu x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx B: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 xx ledové xxxxxxxx octové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: pokud optická xxxxxxx slepého xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx několik xxxxxx x zazátkované lahvi x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx xxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X. Xxxxxxxxxxx gossypolu v xxxxx roztoku xx 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 xx xxxxxx gossypolu. Rozpustit x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 mg/ml.
Pokud xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jejich trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxx x malým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx dostatečné množství xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx pokrutinách xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 ml filtrátu; xxxx xx obsahovat 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 ml, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx pipety xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr a xxxxxxxx filtrát v xxxx baňce xx xxxxxxxxxx hrdlem. Během xxxxxxxx zakrýt nálevku x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxxxxx baněk (X x B) o xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx doplnit xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Poté xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx isopropanolu x hexanu (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C a X) x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako referenční xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxxx (X) a (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx po xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx (X) porovnáním x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (B) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx roztoku xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx obsahující 1 xx 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx pokus x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx 10 až 15 xxxxx, poté xxxxxxxxx x xxxxxxxx filtráty x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 xx x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx pokusu xx xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx jedné xxxxx x xxxxx série xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Tyto xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Zahřívat 30 minut xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 ml xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx hodinu.
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx specifická xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: E 1% / 1cm = 600
Xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx obsah xxxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx hustota, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 5.2
x = zkušební xxxxxx x g
a = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Na xxxxxxx kalibrační xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Doplnit xxxxxx rozpouštědlem A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx první xxxxx, včetně xxxxxxx xxxxxx, xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx vroucí vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bodě 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx série xxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxx roztoky referenční xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Do první xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x promíchat.
Přidat pipetou 2 ml těchto xxxxxxx xx dvou xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx na 25 xx xxxxx x xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx do xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (standardní xxxxx).
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μx).
6.3 Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní hodnoty xxx xxxxx gossypolu xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX II
1. STANOVENÍ X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx x identifikovat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, která obsahují xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt je xxxxxxxx sestupné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x referenčními xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx disodný Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX směs xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
3.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, d: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média: řídit xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu chlortetracyklinu, xxxxxxxxxxxxxxx a tetracyklinu xxxxxx xx agaru, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx papíru 25 xx). Xxxxxxxx a Xxxxxxx papír (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxxx
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky asi 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) připravit xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx roztoky xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx je předpokládaný xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx použít xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx nacházejí xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vzorek ve xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx ho xxxxx xxxx xx xxxxxxxx zředit xxxxx (3.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika xxx 100 μx xx 1 ml (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xx pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx mít xxxxx xxxxxxxx vlhkost; pokud xx to xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx II (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx UV světlem
Když xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx možné xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx naočkuje X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx a xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx přes noc xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx tetracyklinového xxxxxxxxxxx xx projeví světlými xxxxxxxxxxx zónami x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) na xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx uvedeny xxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxx mírně měnit xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx než xxxxxxxx normálních xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, XXXXXXXXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX
X. XXXXXX XX XXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (TC) x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx jejich xxxxxxxxx xx 5 xxx. Obsahy xxxxx xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx xxxxxxx, xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení XXX x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí a xxxxxx antibiotická aktivita xx stanoví xxxxxxx xxxxxx CTC, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. cereus. Difúze xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: X. cereus XXXX x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx do zkumavky xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx noc xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 až 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 xx 30 °C, poté xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx může x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx deskách x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx média se xxxxxxx při 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 ml |
|
Fosfátový xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxx borité |
15 xx |
|
0,5 % ethanolový xxxxxx methylenové xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4 · 2X2X x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx použitím x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: CTC, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx vyjádřena x chlorovodíku.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx. Xxxxx roztok se xxxxxxxx x chladničce xxxxx týden.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx chlortetracyklinu-HCL na 1 xx. Xxxxxxx xx provede xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Poté připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx bodu 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx oxytetracyklinu-HCL na 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μg xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem podle xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,5 |
μg/ml |
|
S2 |
0,25 |
μg/ml |
|
S1 |
0,125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 ppm
Do xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx fosfátovým pufrem (4.3) xxxxx odkazů x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx koncentraci X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx nebo dekantovat xxxxxxx s cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
řeď. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx X8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx vyšší xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu antibiotika xx xxxxxx xxxx xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20ti xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX nižší xxx 3; pokud xx xx xxxxx, xxxxxxx pH xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x xxxxxxx pH xx 5,5 xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx xx modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), s cílem xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, U2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx velikosti, xxx bylo možné xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx se xx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx misky xxxxx 18 hodin xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací proti xxxxxxx inhibičních zón. Xxxxxxxxx xxxxxx standardního xxxxxxx a extraktu. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + U2 + X4 + X8 - X1 -X2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - X1 -X2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx nezasahuje žádná xxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx rychlejší xxx xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx acetonu, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx obsahu XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx a kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx poté xxxxx a jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx bylo xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se přidá 1,5 až 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx subkulturou x xxxxxxxxx xxxx noc xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 ml xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx lázni xxx 37 °X xxxxx xxxx kmene xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 až 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Xxx 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx látky (4.7) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Chlortetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx odměrné xxxxx o objemu 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx standardních xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx xxxxx koncentrací. Xxx každé xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx k xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx xxxxx podmínek xxxxx xxxxx, které xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,12 μx CTC-HCL. Dát 1 xx tohoto xxxxxxx do xxxx xxxxxxxx a 0,75 xx (= 0,09 μx) do dvou xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým pufrem (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní roztok (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx TC-HCL na 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL nebo XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μg) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx na xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 xx kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného bazálního xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 nebo 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale xxxxxxxx xx xxxxxxxxx prostředí.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx teplota xx xxxxxxxx udržuje xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx xx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxxx křivky xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (obecně 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx fotometr xx nastaví xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx různých xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx křivce xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx vzorku.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx v krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech, x to xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx oleandomycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx přímo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx rodičovského xxxxx
Xxxxxxxxx X. cereus xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxxxx 100 μg xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx asi 30 °X. Skladovat kulturu x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se šikmým xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx deskách xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,1 x 0,2 ml xx 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Médium xxx udržování rodičovského xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar, xxxxx jakosti |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
Před xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) roztok xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx standardní xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x zředit roztokem (4.6) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx základě xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx přidat do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou.
Odstředit, xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx x zředit xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx roztoku (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx v xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx koncentrace standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx sestávajících xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x výšce 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx zón, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx stanovit tylosin x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx odstředění xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes xxx xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální suspenze
Smýt xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx agarem (3.1) xx použití 2 xx 3 xx fyziologického roztoku (4.4). Naočkovat tuto xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin při 35 °C, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování rodičovského xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 x xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, pH 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Čistý xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Standardní xxxxx: tylosin x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx standardní xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx xxxxxxx xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 mg xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) a xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx tylosinu xx 1 xx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
Xxx xxxxxxxxxxx použít 10 x zkušebního xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Ultra-turrax xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 xxxxx. Xxxxxxxxx extrakt x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7).
Xxx xxxxxx nižší xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) upravené na xX 8 xxx 48 až 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx agaru se xxxxxxx x xxxxxxx xx použití xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovaného xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o průměru 200 mm x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx průměru děr.
U xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát x každou xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noci xxx 35 až 37 °C.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx zanesením xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k interferenci, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 -S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku nesmí xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Po xxxxxxxxxx xxxx filtraci xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx virginiamycinu na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem x xxxxxxxxxxxx média (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx při asi 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx při 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx trvanlivost xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx provádí xxx 48 až 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
8,0 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 p.a. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxxx x známé xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztok standardní xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx základě tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx na 1 ml. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1+) xx xxxxxxx xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x obsahu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx do xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx více xxxxx (4.5) x cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μx virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x U1, xxx je xxxxxxx x bodě 6.1.
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, S2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx o průměru 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx se xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 mm.
Pipetovat xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 ml, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxx 35 až 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx aktivita x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx být xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido xxxxxx x xxxxxxxx inhibičních xxx standardních xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx podle LUFA xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX.
[9] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.