Třetí Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx metod xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx kontrolu krmiv [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx cílem je xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/EHS ze xxx 15. června 1971 [2] a 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxx škrobu, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx působením xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, volného x xxxxxxxxx gossypolu, jakož x x aktivitu xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971, xxxxxx se xxxxxxx analytické xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X této xxxxxxxx.
Článek 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx i x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, oleandomycinu, tylosinu x virginiamycinu x xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Obecná ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku k xxxxxxx, se xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Členské státy xxxxxx x účinnost xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxxxxx 1973. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu xxx 27. dubna 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA X
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit obsah xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx krmiv, xxxxx obsahují řepné xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx listy, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx zahrnuje dvojité xxxxxxxxx. Xxx prvním xxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou. Xx čiření x xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx optická rotace xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx okyselení xxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, čiření x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx při prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx udává obsah xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx x 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 xx 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: rozpustit xx xxxx 21,9 x xxxxxx zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 ml.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x hexakyanoželeznatanu xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, d: 0,948 xxx 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx sítem x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (P xxxx X) (viz xxxxxxxx 7.1)
Navážit 2,5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxx rozmístil x xxxxxx dalších 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx a xx dobu prvních xxx minut silně x pravidelně protřepávat, xxx se zabránilo xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx ve xxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxxxx, xxx i xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx na xxxx xxxx. Baňka xxxxx xxx xxxxxxx x lázně xxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx a xxxxx zchladit xx 20 °C.
Přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x xxxxx minutu protřepávat. Xxxx přidat 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, homogenizovat x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxx zcela xxxx (což xx xxxxxx), opakovat xxxxxxxxx xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx rotaci xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % ethanolu
Navážit 5 x vzorku s xxxxxxxxx xx 1 xx, dát xx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 100 xx a xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (xxx xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx baňku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě a xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx se zkušební xxxxxx xxxxx smíchal x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx ethanolem (3.5), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný chladič x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx lázně, xxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx za xxxxxxx Xxxxxxxxx roztoku X (3.3) x XX (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx rotaci, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) se xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření polarimetrem
procenta xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]D20°
kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx xxxxx
+ 195,4°: bramborový xxxxx
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: xxxxxx xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx x krmných xxxxxxx
6.2 Měření xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx sacharimetru
S’ = xxxxxxx rotace látek xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx sacharózy x xxxxxxx ve 100 xx xxxx, která xx při xxxxxxxx 200 mm xxxxxxxx xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx podle xxxxxxxxxxxx:
16,29 x pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 x xxx xxxxxxx sacharimetry
20,00 x pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx čistého xxxxxx (xxx 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx než 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx škrobu xxxxxxxxxxx xx nebo xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud vzorek xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx příslušného xxxxxxxx zředěné xxxxxxxx xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxxxxx, jako xx xxxxxx xxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, postupovat xx xxxxxxx 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx baňku xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx na základě xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx amoniak se xxxxxxxxxxx x shromáždí xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx přebytek xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Činidla
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx síran xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx xxxx nebo xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Granulovaný xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,25 X.
3.11 Nasycený roztok xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 1 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 xx 0,4 x oxidu xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.13), promíchat xxxxx xxxxx. Zahřívat xxxxx, xxxxxxx mírně x xx občasného xxxxxxxxxxxx, dokud xxxxx xxxxxxxxxxx x pěna xxxxxxx; poté xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baňky x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx je xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx ještě xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx vychladnout.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx; xxxxxx vychladnout; poté xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx baňky destilační xxxxxxxxx xxxxxx odměřené xxxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx xxxxxxx xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx konec xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx baňce xx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Přes xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít xx xxxxx 100 xx 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na bázi xxxxx, xxxxxx do xxxxx xxxxxx xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx xx 30 minut xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx alkalická, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx ukáže, že xx destilát neutrální. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx času promíchat xxxxx sběrné xxxxx x pozorovat zbarvení. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxidu sodného 0,1 N (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx nezmění xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx metody
Za xxxxxx xxxxxxxx, xxx činidla xxxxxxxxxx dusík, se xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx a xxxxxxx), x xx bez xxxxxx, který xx xxx analyzován. Xx xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (x.x. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx sírové 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx vyjádřit xxxx procento vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xxxxx než 20 % x xxxxx než 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které vyžadují xxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxx x destilací. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx dusíku xxxx xxx objem xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx xx xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, xxxxxx xx 10 xx 15 xx a xxxxxxx xxxxx xx 25 xx.
7.3 Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx baňky xx xxxxxxx a pomalu xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky xxx, xxx se nesmíchala x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx rozpustných xxxxxxxx a kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxx 48 hodin xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Suspenze xx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,075 N.
3.3 2,0 x/xx pepsinu; xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx v xxxxx 4 této přílohy x xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto metodou.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2)
Navážit 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx a xxx xx do odměrné xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Xxxxxx xxxxx do vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx po 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 hodinách přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx rysku xxxxx x filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 ml xxxxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x dát ho xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná xxx xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx druhé xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx a uvést xx xxxx. Pokud xx xxxxxxx xxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx v xxxxxx xxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x opatrně odstranit xxxxxxxx xxxxx xxxx.
Xxxx xx xxxxxx xxxx x bezbarvý (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx var xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx vychladnout.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx uvedeno v xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx xxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx má být xxxxxxxxxx.
6. Výpočet výsledků
Odečíst xxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxxxxxx během xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. 1 xx kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx procento xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní xxxxxxx xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty získané xxxxx xxxxxxx nemají xxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxx vyšším xxx 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX AKTIVITY XXXXXXX
1. Xxxx a rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx použitého xxx xxxxxxxxx hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Nehydrolyzovaná xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xx xxxxx hydroxid xxxxx x činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx xx xxxx xxx 750 nm x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových skupin, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 N.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,025 N.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx trichloroctové.
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxx 100 x xxxxxxxxxx sodného (Xx2XX4 · 2H2O), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do dvoulitrové xxxxx x kulatým xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) a 100 ml koncentrované xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx vychladnout, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 ml xxxxx. Xxxxx xx dobu 15 xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Přelít xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 xxxxxx xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx množství xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 xx xxxxxx [1] x xxx xx baňky x xxxxxx 200 ml x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx nerozpustí. Xxxxxxx vakuum x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkovou (3.2) xx xx 100 xx. Xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x doplnit xx xxxxxxx litru xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μmol xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °C + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, přesnost: 1 xxxxxxx.
4.4 xX xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 ml x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.3). xX kontrolované xX xxxxxx musí xxx 1,6+0,1. Xxxxxxx xxxxx do xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx pohyby tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zesílenou na xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx dodrženy). Xxxx přidat 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) předehřátého xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx hustoty
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx činidla Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 xx 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx s xxxxx.
5.4 Xxxxx pokus
Pro xxxxx xxxxxxxxx provést xxxxx xxxxx pokus:
Odpipetovat 5,0 ml xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 ml xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, homogenizovat x xxxx xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 10 minut xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °X. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Kalibrační křivka
Do Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tyrosinu, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx xxxxxxxxxxx roztokem xxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a xx stálého protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx bylo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μmolech tyrosinu xx 1 mg x xx jednu xxxxxx xxx 25 °X se vypočítá xxxxx vzorce:
Jednotky xx xx (x/xx) = 0,32 x / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxx;
x = xxxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Poznámky
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx takové, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx/xx (μxxxx xxxxxxxx/xx xxx. xxx 35,5 °C) xxxx
36400 xxxxxxxxxx jednotek/g (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X CELKOVÉHO XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx volný gossypolu, xxxxxxx gossypolu x xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx obsahu xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, x xx buď xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx anilinu xxxxxxxx xx gossypol-dianilin, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx n-hexanu.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 x xxxxx xxx 500 ml xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 50 xx xxxx. Doplnit xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Rozpouštědlo X: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx x objemu 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx x 10 ml xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx N,N-dimethylformamidem. Xxxxxxxxxxx xxxxxx činidla xx xxxxx xxxxx.
3.4 Anilin x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s vyloučením xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto činidlo xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x zazátkované xxxxx x xxxxxxx xxxx.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem A. Xxxxxxxxxxx gossypolu x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx dobu xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxx X: do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxx A a X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (xxxxxxxx): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx gossypolu xx xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního vzorku x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx filtrátu, xxx xxxx xxxxx xxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx neměl xxxxxxxxx 1 x; xxx krmné směsi xx xxxx být 5 x. Ve xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx by obsahovat 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx mělo xxx xxxx 0,5 a 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx filtrátu xxxxxxxxxx 40 až 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx x jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx v xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x B) x xxxxxx 25 xx xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem X (3.2) na 10 xx. Xxxx doplnit xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx měření xxxxxxx pro xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx odměrných xxxxx (X x X) x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx xxxxx baňku (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako referenční xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 ml xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) a (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, aby xx vytvořilo xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx a xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X) x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (B) xxxxxxxxxx x referenčním xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx roztoku pro xxxxx pokus od xxxxxxx hustoty xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). Z xxxx hodnoty xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx gossypolu, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx xxxxxxxxx do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x přidat 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Současně xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx xxxx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu x xxxxxxx po xxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Homogenizovat x nechat xxxx 10 až 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx pipety xxxxxx 2 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 ml x 2 ml xxxxxxxx xxxxxxx pokusu do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x každé xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx použijí xxxx referenční roztoky.
Přidat 2 ml anilinu (3.4) do dvou xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx optickou xxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v xxxx 6.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx (6.2).
6.1 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx volného xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx vzorku xx xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / E1%1cm ·&xxxx; · p · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx hustota, xxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = xxxxxxxx vzorek x x
x = xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x ml
6.2 Xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx
6.2.1 Xxxxx gossypol
Připravit xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, směsí isopropanolu x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Zchladit xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxx 5.2 stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním s xxxxxxxxxxxxxx roztoky referenční xxxxx. Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx uvedením hodnot xxxxxxx hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Celkový gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx ostatních 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx na xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx xxxxxxx o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx obsah baněk xxxxx xxxxx na 25 ml xxxxx x isopropanolu x xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, doplnit xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx roztoků xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx optické hustoty xxxxx množství xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného vzorku xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 xxx,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxx: 17,7 % dusíku).
PŘÍLOHA II
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 ppm xxxxxxxxxx, v koncentrátech x xxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx xxxxxxxx papírové xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx standardních xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX světle (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), nebo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Pufr, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát kyseliny xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx chroroformu/α-dichlorhydrinu: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Chlortetracyklin, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
3.9 Mikroorganismus: X. cereus XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx x očkování xxxxxxxxxxxx média: řídit xx xxxxxx xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x tetracyklinu xxxxxx xx xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx použitím upravit xX na 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium xxxxxxxx x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Zařízení pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx chromatografii (xxxxx xxxxxx 25 xx). Schleich x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) nebo xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 XX xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Xxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx pufrem (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx bioautografií
Zředit xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx roztoky, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x tetracyklinu-HCL xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx je xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx xxxxxx xxx homogenizovaný xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx frakci xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, neboť xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) a xxxxxxxxx. Xxxxxx supernatant x xxxxxx ho xxxxx nebo ho xxxxxxxx zředit směsí (3.5) s xxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) a 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Chromatografie
Ponořit xxxxx do pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx 0,01 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.2 x 5.3) a extraktu (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx xx xxxxx, xxxxxx trochu vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx X (3.3) xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Když xxxx rozpouštědla dosáhne xxxxx 15 xx 20 cm (asi 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx chromatografii x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx než 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX lampou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.10), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx xxxxxxxx desky (4.5) x položit xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx a položit xx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx, kde xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu se xx xxxxxxxx odpaří xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx zde. Xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (TC) |
0,40 |
|
Oxytetracyklin (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "epi" xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx normálních sloučenin.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx xxx určeny xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxx. X obsahů xxxxxxx xxx 50 ppm xx vzorek extrahuje xxxxx xxxxxxx, vody x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení XXX x směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx OTC x XX.
Xxxxxxxx se xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx při xxx 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým agarem (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 ml xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx xxx 28 až 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx se může x chladničce xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,2 x 0,3 ml na 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 g |
|
"Tween 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx kyseliny xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (V/V) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx použitím x xxxxxxx na pH 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: CTC, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na základě xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Zředění xx provede za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx pufru (4.3) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,05 |
μg/ml |
|
S1 |
0,025 |
μg/ml |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 μx oxytetracyklinu-HCL xx 1 ml, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx zásobního xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní pracovní xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Obsahy xxxxx xxxx xxxxx xxx 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx vyšší xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20xx xxxxxxx jeho objemu xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xX nižší xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx xX na 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xX xx 5,5 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx bromkresolové xxxxxx (xxxxxx xx xx xxxxx xx xxxxxx). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Xxxx připravit xxxxxxxxxxx U4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Postupovat xxx je uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx spór (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, U4,U2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx tímto xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové velikosti, xxx xxxx možné xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale rovným xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně projekcí. Xxxxxxxxxx měření na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx se vypočítá xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 -U2 -X1 -X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (OTC) x tetracyklin (XX) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx vzniknout matným xxxxxxxxx. Tato xxxxxx xx rychlejší než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX xx vzorek xxxxxxxx směsí xxxxxxx, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx obsahu XXX x XX směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultivačního xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx kterého xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx aureus K 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Staphylococcus xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx xxxxx 1,5 xx 3 % xxxxx (xxxxx xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx na xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx laboratorní xxxxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx ve zkumavce xxxxx v asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xx xxxxx xxxxx xxx 37 °X xxxxx růst xxxxx xxxxxxxxx logaritmické xxxx (1x30 až 2h).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx stanovení [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
xX xx xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.4 Xxxx čistého xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, OTC, XX, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 až 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx skladuje x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 200 nebo 250 xx xxx 1 až 2 x xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Doplnit xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Do odměrné xxxxx x xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx sérií x extraktu
Zředit xxxxxxxxxx xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxx xx znázorní xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx k xxxxxxxx. Ředění xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx kmene, xxxxx xx mohou xxxxx xxxxxxxxx od laboratoře. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat standardní xxxxxxxx xxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx xxxx xxxxxx zkumavek. Doplnit xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.1.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxx 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Koncentrace XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 0,48 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Dát 1 xx xxxxxx roztoku xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 ml (= 0,24 μx) xx dvou xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx jiných zkumavek xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 xx xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve 2 xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx aparatury xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx musí xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx mícháním udržuje xx 37 °X + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Xxxx xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx roztoku formaldehydu (4.6) do každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž fotometr xx xxxxxxx xx 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx nejvyššímu xxxxxx xxxxxxxxxxx). X důvodu xxxxxx rozdílů x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx doporučuje použít xxxxxxx 2 cm x xxxxxx 5 xx xxxxxx.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx koncentracím xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- difúzí xx agaru -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje stanovit xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tetracyklinů. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx zředěným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx inhibičních xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: B. xxxxxx, X 250 TR [8] (xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), jehož xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx při 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx mikroskopicky xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Tato xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx skladovat nejméně 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx různé použité xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx inhibiční zóny. Xxxx množství xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx na 1000 ml. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Kultivační média x činidla
4.1 Médium xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Bazální médium xxx xxxxxxxxx [10]
Xxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (V/V) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (m/V) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) aminometanu x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 xx |
|
Xxxxxxxxxxx voda |
50 xx |
|
Xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku (4.8) x 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx xxxxxxxx (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx agaru xx xxxxxxx x miskách xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx o xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud nedošlo x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
4. STANOVENÍ XXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxx xx extrahuje xxxxxxxxxx. Xx odstředění se xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx pH 7,0. Xxxxxxxxx xxxx noc xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 až 3 xx fyziologického xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx suspenzi x xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v chladničce, xxxx trvanlivost je xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx a přípravy xxxxxxxxxxx suspenze upravit xX na7,0 x xx účelem stanovení xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný K2HPO4 x.x. |
16,730 g |
Destilovaná voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 7
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
4.4 Sterilní xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 xxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °X xx vakuové xxxxxxx (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx fosfátovým xxxxxx, xX 7 (4.3) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx základního xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx zásobního xxxxxxx připravit xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) standardní xxxxxxxx roztok S8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx použít 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Přidat 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx na 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 minut, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx obsahy xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X a xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx pro stanovení (4.1) xxxxxxxx xx xX 8 xxx 48 až 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx agaru xx xxxxxxx v miskách xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx účelem vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr xxxxxx odměřená xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika xxxx 0,10 a 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxxx xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx projekcí. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx proti průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - S2 - X4 -X8) · 0,602 / X4 + U8 + X4 + X8 - U1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx na xxxxx -
1. Účel x rozsah
Tato metoda xxxxxxxx xxxxxxxx virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro stanovení xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx roztokem "Xxxxx 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx a xxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví měřením xxxxxx virginiamycinu xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx zón xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Sarcina xxxxx do xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxx 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx každých 14 xxx xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, xxxx smýt xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx deskách x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx pro xxxxx xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, ale xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 až 50 °X.
4. Kultivační xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [12]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 objemově.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx látka: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) za použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 až 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx xxxx směsi (4.5) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx než 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 g xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx roztoku (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x X1, xxx je uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) při 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx roztoku (S8, X4, X2, S1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, U1).Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média (7.1), xxxxx xx xx použít pro xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x průmětu 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, aby xxxxx xxxxxxxxx zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx xxx při 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx zón, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat měření xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx. Pokud xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -S1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + S8 - U1 - X2 - S1 - S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx výsledky.
[2] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[3] Xxxx amido slouží x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx kruhy).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx rychlejší růst xxx S. xxxxxx XXXX 6538 X.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[8] Kmen izolovaný x Xxxxx podle XXXX.
[9] Může být xxxxxxx xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační médium xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.