Třetí Směrnice Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Společenství pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisy a xxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x obsahy xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx působením xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, jakož x x xxxxxxxx xxxxxxx, se provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x příloze I xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Xxxxxx x. 71/250/XXX ze xxx 15. června 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Členské xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx tetracyklinových antibiotik, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, oxytetracyklinu, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x části 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise x. 71/250/EHS ze xxx 15. xxxxxx 1971, x výjimkou xxxxx týkající se xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx popsané x příloze XX xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v účinnost xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 1. července 1973. Xxxxxxxxxx o xxxx informují Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. dubna 1972.
Za Xxxxxx
xxxxxxxx
X. X. Mansholt
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx metoda
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx a produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx, s xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx obsahují řepné xxxxx, řepnou pulpu, xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, bramborovou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx bohaté na xxxxxx (např. řízky x moučka x xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxx za xxxxx xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, čiření x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx prvním xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx vynásobený xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx 0,1 X x xx xxxxxxxxxxx 0,1 % (x/X) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 xx = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx I: rozpustit xx xxxx 21,9 x octanu zinečnatého Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x xxxxxx kyseliny xxxxxx. Xxxxxxx vodou xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx ve xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) xxxxxxx, x: 0,948 při 20 °X.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Erlenmeyerova xxxxx x objemu 250 xx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Xxxxxxxxxx xxxx sacharimetr.
5. Postup
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělnit vzorek xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx sítem x xxxxxxxx xxx x xxxxxxx 0,5 xx.
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxx rotace (X xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x xxxxxx s xxxxxxxxx na 1 xx x dát xx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 ml. Xxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2), protřepat, xxx se zkušební xxxxxx dobře xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx 25 ml kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx xxxxx do xxxxxx xxxxx xxxxx x xx dobu xxxxxxx xxx xxxxx silně x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx hrudek. Xxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx vložení xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx varu. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx. Přesně po 15 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx vody a xxxxx xxxxxxxx na 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x xxxxx xxxxxx protřepávat. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx XX (3.4) a xxxx jednu xxxxxx xxxxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxx xx xxxxxx), xxxxxxxx stanovení xx použití xxxxxxx xxxxxxxx Carrezova xxxxxxx X a XX, xxxxxxxxx 10 xx.
Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Stanovení xxxxxxx xxxxxx (X’ xxxx X’) látek xxxxxxxxxxx ve 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Poté xxxxxx xxxxx stát xxxxx hodinu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této xxxx xxxxxxxx silně xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxx x xxxxxxxxx. Doplnit xx rysku xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x xxxxxx) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx chladič x xxxxxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx obsah xx xxxxxxx baňky o xxxxxx 100 ml, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou x xxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) x II (3.4), xxxxxxx po xxxxx xxxxx, homogenizovat, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jak xx uvedeno x xxxx 5.2 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxx xxxxxx (%) xx vypočítá xxxxx:
6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 (X - X’) / [α]X20°
xxx je:
P = xxxxxxx optická xxxxxx, v úhlových xxxxxxxx.
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, v xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : xxxxxx škrob
+ 195,4°: xxxxxxxxxx xxxxx
+ 184,6°: kukuřičný xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx škrob
+ 181,5°: xxxxx škrob
+ 181,3°: ovesný xxxxx
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx = 2&xxxx;000 / [α]X20° · (2 X · 0,665) (S - X’) / [α]X20°
Xxx xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx rotace, xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % ethanolu, xx xxxxxxxx sacharimetru
N = xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xx 100 xx xxxx, která xx xxx xxxxxxxx 200 xx xxxxxxxx xxxxxx 100 stupňů xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx mění xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 x xxx xxxxxxxxxxx sacharimetry
26,00 x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxxx xxxxx než 40 % a 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, uhličitany xxxx xxx xxxx stanovením xxxxxxx rotace xxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xx xxxxxx mléčné xxxxx xxxx sušené xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) xxxxx: Xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxxxx xxxxx zpětný xxxxxxx, ponořit xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 50 °X. Nechat vychladnout x pokračovat v xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx základě xxxxxx dusíku stanoveného xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx mineralizuje xx xxxxx. Kyselý xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx v xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx přebytek xx xxxxxxx roztokem hydroxidu xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Xxxxxxxxxxx: xxxx měďnatý XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X x.x., xxxx rtuť xxxx xxxx xxxxxxxx XxX x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx sírová x.x., d: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: rozpustit 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x.x.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Granulovaná pemza, xxxxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x destilační xxxxxxxxx podle Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 mg a xxx ho do xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx xxxx 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého xxxx xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 xx xxxxxxxx xxxxxx (3.4) x xxxxxxx granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx baňky. Zahřívat xxxxx, xxxxxxx xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx x přilnutí xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xx xxxxxx čirý a xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, pokud xx použije xxxxxxxxxxx xx xxxx mědi), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxx x xx stálého xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx zcela xxxxxxxxxx; xxxxxx xxxxxxxxxxx; poté xxxxxx několik xxxxxxx xxxxx (3.3).
Xxxxxx xx xxxxxx xxxxx destilační xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x přidat xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx methylčerveně (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx destilační aparatury x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx hloubky xxxxxxx 1 xx (xxx xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx nalít do xxxxx 100 xx 40 % xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx, přidat do xxxxx xxxxxx xxx 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx baňku xxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxx této xxxx xxxxxxxxxxxx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx lakmusového xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, pokračovat x xxxxxxxxx. Ukončit xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx neutrální. Xxxxx destilace xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx sběrné baňky x pozorovat xxxxxxxx. Xxxxx dojde xx xxxxxxxx xx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Titrace
Ve xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx sodného 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx použité xxxxxxxx xxxxxx, dokud xx zbarvení xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x to bez xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx xxxxxx xx provede xxxxxxx (mineralizace, xxxxxxxxx x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 x xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °X; % X: 10,36) xx xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Xxxxxxx výsledků
Stanovit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Vynásobit xxxxxxxx xxxxxx faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx vyšší xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx než 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Je xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx mezi mineralizací x xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X, xxxxx má být xxxxxxxx nalita do xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 ml x xxxxxxx vodou na 25 ml.
7.3 Pokud xxxx baňka xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx, přidat xxxxxxxx xxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX CHLOROVODÍKOVOU
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Metoda xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °X xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx se stanoví xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proteinů.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina chlorovodíková, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x části 4 této xxxxxxx x xxxx být xxxxxxxxxxxx v xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), čerstvě připravený xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Xxxxxxx činidla xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 40 °X ± 1 °X.
4.2 Mineralizační x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx metody.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx s xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 ml xxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx. Xxxxxx, že xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx (4.1) a nechat xx xxx 48 xxxxx. Xxxxxxxxx xx 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Po 48 hodinách přidat 15 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °X, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx a filtrovat.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná pro xxxxxxxxxxxx, jak je xxxxxxx x xxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxx. Xxxxx xx vytvoří xxxx, xxxxxx několik kapek xxxxxxxxxx xxxxxx (3.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx, xxxxx se xxxx xxxxx zcela xxxxxxxx. Xxxxxx ohřev x xxxxxxx odstranit xxxxxxxx stopy xxxx.
Xxxx xx roztok čirý x xxxxxxxx (světlezelený, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx bázi xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx hodinu. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Destilace x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 5.2 x 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx vzorku, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kyseliny xxxxxx xxxxxxxxxxxx během slepého xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorkem. 1 ml kyseliny xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx.
Xxxxxxxxx množství dusíku xxxxxxxx 6,25. Výsledek xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí překročit:
- 0,4 absolutní xxxxxxx xxx obsah nižší xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsah xxxxx než 20 % x nižší xxx 40 %,
- 0,8 xxxxxxxxx hodnoty xxx obsah vyšší xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx souvislost se xxxxxxxxxxxxxx in xxxx.
7.2 Xxxxxxx x obsahu xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx odtučněny extrakcí xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx stanovení hrubých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pepsinem x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stanovených podmínek xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx filtrátu xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx tohoto xxxxxxx xx měří xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx xxxxxx x kalibrační xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxx množství xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx chlorovodíková 0,06 X.
3.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,025 X.
3.4 5 % xxxxxx (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Na2WO4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx sodného (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 xx xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx chladič, xxxxx xx varu x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx vody x 1 xx brómu. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, xxx xx odstranil xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxx 1 x, xxxxxxx xx xxxxx vodou, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx zůstat xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx 1 objem xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Roztok xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx metody odpovídajícího 354 mg dusíku [1] x dát xx xxxxx x xxxxxx 200 ml x normalizovaným xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx zcela xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx a xx protřepávání xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx tyrosinu: rozpustit 181,2 xx xxxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) a doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx kyselinou (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 100 xx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Xxxxxx, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Postup
5.1 Příprava xxxxxxx (xxx poznámky 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxx xx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxxx 2 xx xxxxxxx x xxx ho do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx x doplnit xx xxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). pH xxxxxxxxxxxx xX xxxxxx xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx vodní xxxxx (4.1).
5.2 Hydrolýza
Odpipetovat 5,0 xx roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx ve xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 xx xxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxxxx bodu 5.1 x promíchat xxx xxxxxx xxxxxx tam x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx 25 °X přesně xx xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx zbarvení x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx ho do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) a xx xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x kyvetách x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxx x xxxxx.
5.4 Slepý pokus
Pro xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx:
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) xx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °C, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °X, homogenizovat x xxxx xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx zkumavku přesně 10 xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bodě 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 50 xx xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, x 5,0 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx tyrosinu. Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) xx 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3,0 ml zředěného xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx 5.3. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx z kalibrační xxxxxx xxxxxxxx tyrosinu x μmolech, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx pepsinu x μxxxxxx tyrosinu xx 1 xx x za xxxxx xxxxxx při 25 °X xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx na xx (x/xx) = 0,32 a / x
xxx:
x = množství xxxxxxxx v μxxx xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = množství xxxxxxx x mg xxxxxxx xxxxx bodu 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, které xx xxx xxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxx, aby xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustota 0,35 + 0,035.
7.2 Xxx xxxxxxxx xx mg xxxxxxx xxxxx metodou xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx xxxxxxxx/xx min. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx xxxxxxxx/x xx 10 xxx. při 35,5 °C).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx příbuzné xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách a xxxxxxx směsích, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xx 20 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx 3-amino-1-propanolu, a xx xxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu xxx xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx-xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Činidla
3.1 Xxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx: xxxxxxx 60 objemových xxxxx xxxxxxxxxxxx x.x. xx 40 xxxxxxxxxx xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Rozpouštědlo X: xx xxxxxxx xxxxx o objemu 1 x xxxxx xxx 500 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx jeden xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx xx odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-amino-1-propanolu x 10 xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx optická xxxxxxx xxxxxxx pokusu xxxxxxxx 0,022, destilovat xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx skladuje v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x hnědého skla.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx o xxxxxx 250 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2). Xxxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x doplnit po xxxxx rozpouštědlem A. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,02 xx/xx. Před xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 ml xxx 27,9 xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxxxxx gossypolu x tomto roztoku xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky xxxxxxxxx X x X xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxx trvanlivost xx 24 hodin.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Postup
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Xx výhodné xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxxxx velkou xxxxxxxxx xxxxx filtrátu, xxx bylo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x bavlníkových xxxxxxxx, xxxxxxxxxx mouce a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 1 x; xxx krmné xxxxx xx může být 5 g. Ve xxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxx alikvotní xxxx 10 xx xxxxxxxx; xxxx xx obsahovat 50 xx 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx mělo být xxxx 0,5 a 5 g, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °X.
5.2 Xxxxxxxxx volného xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx baňky xx xxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx 250 xx, xxxxx dno xx xxxxxxx skleněnými xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx přidat 50 xx xxxxxxxxxxxx X (3.2), xxxxxxxxxx xxxxx a jednu xxxxxx promíchávat v xxxxxx. Filtrovat xxxx xxxxx filtr a xxxxxxxx filtrát x xxxx baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx. Během xxxxxxxx zakrýt xxxxxxx x xxxxxxxx hodinovým xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 ml xxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Případně xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx A (3.2) xx 10 xx. Poté xxxxxxx xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx jako referenční xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 10 xx rozpouštědla X (3.2) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C x X) x objemu 25 ml. Xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx referenční xxxxxx xxx měření xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Zahřívat 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx jednu xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx při 440 xx x xx xxxxxxxxxx kyvetách x xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx xxxxx pokus (X) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx roztokem (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X).
Xxxxxxx optickou xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx). X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) xx jiné odměrné xxxxx x xxxxxx 50 xx. Xxxxxxxx xxx xxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxx xxxxx xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát 10 xx 15 xxxxx, xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx filtráty x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 xx xxxxxxxx ze xxxxxx xx dvou xxxxxxxxx xxxxx x objemu 25 xx a 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx baňky x xxxxx série xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxx 2 xx anilinu (3.4) xx xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx lázní, xxx xx vytvořilo xxxxxxxx. Zchladit xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx hodinu.
Stanovit optickou xxxxxxx volného gossypolu, xxx je xxxxxxx x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx obsah celkového xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v bodě 6.
6. Xxxxxxx výsledků
Výpočet xxxxxxxx xx může xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), xxxx xx xxxxxxx kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených podmínek xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx xxxxxxxx:&xxxx; X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx:
xxxxxxxx %: X · 1&xxxx;250 / X1%1xx ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xx uvedeno x bodě 5.2
p = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x xx
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx křivky
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxx xxxxx xx pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. X xxxxx xxxxx xxxxxx pipetou 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) xx 10 xx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxxxxx slepého xxxxxx, směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 ml.
Přidat xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát xxxxx xxxxxx.
Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit optickou xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx 6 odměrných xxxxx x objemu 50 xx. Do první xxxxx xxxxxx pipetou 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) x xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Xxxxxxx xxxxx každé baňky xx 10 ml xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 minut xxx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx těchto xxxxxxx xx xxxx xxxxx x 6 xxxxxxxxx baňkách o xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série xx 25 xx xxxxx x isopropanolu a xxxxxx (3.1) (referenční xxxxx).
Xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxx série 2 xx xxxxxxx (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx stát jednu xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx porovnáním x odpovídajícími xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku uvedením xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx gossypolu (x μg).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit:
- 15 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx gossypolu xxxxx než 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % xxxxxx).
PŘÍLOHA XX
1. XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx, která xxxxxxxx xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x premixech.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje směsí xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx sestupné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roztoky. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, x xx xxx fluorescencí v XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx antibiotik), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Xxxxxxx
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx x.x. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 g |
|
Hydrogenfosforečnan disodný Xx2XXX4.2X2X x.x. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.3 Xxxxxx X: xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před použitím |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx látky: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx pokyny xxxxx xxxx 3.1. x 3.2. metody xxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx xxxxxxx.
3.10 Xxxxxxxxxx xxxxxx [1]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 g |
|
Agar |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 5,8.
3.11 0,1 % (x/X) xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx chloridu x 5 % (x/X) roztok xxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx papír (2440B xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Inkubátor xxxxxxxxx na 30 °X.
4.4 UV lampa xxx stanovení fluorescence.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx pro xxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Referenční xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx antibiotika nižší xxx 10 ppm, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx vzorek, xxxx nejjemnější xxxxxx xxxxxxxxx proséváním, xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Sebrat xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxx ho xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x cílem xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xxx 100 μg xx 1 xx (6.1) a 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x xxxxxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do pufračního xxxxxxx, pH 3,5 (3.1). Odstranit xxxxxxxx xxxxxxxx vtlačením xxxxxx xxxx xxxxx suchého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Poté xxxxxxx xx papír 0,01 xx referenčních xxxxxxx (5.2 a 5.3) a xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx dobré xxxxxxxx xxxx xxx papír xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx xx xxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx bioautografií x eluent XX (3.4) xxx stanovení XX světlem. Xxxx xxxx rozpouštědla dosáhne xxxxx 15 xx 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x vysušit xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx obsah xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx chromatogramu xxxxxx amoniaku (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx XX xxxxxx žluté xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem naočkuje X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) a xxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx. Po pěti xxxxxxxx xxxxxxxx odejmout xxxxx a xxxxxxx xx xx jinou xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx chromatogramu se xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Identifikace
Relativní xxxxxxx Xx tetracyklinových xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx hodnoty xx xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x xxxx vlhkosti:
|
Chlortetracyklin (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (OTC) |
0,20 |
|
4-epi-CTC |
0,15 |
|
4-epi-TC |
0,13 |
|
4-epi-OTC |
0,10 |
Antibiotická xxxxxxxx "xxx" sloučenin xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXX, OXYTETRACYKLINU X XXXXXXXXXXXX
X. DIFÚZÍ XX XXXXX
1. Účel x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (XXX) x tetracyklin (XX) x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Spodní xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 xxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxxxx interpolací.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxxx xxx 50 xxx xx xxxxxx extrahuje xxxxx acetonu, vody x xxxxxxxx chlorovodíkové xxx xxxxxxxxx CTC x xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení OTC x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxxxx antibiotická xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx CTC, XXX xxxx XX xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx ATCC x. 11778
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx borité. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického solného xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx suspenzi do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře x xxxxxxxx borité, jehož xxxxxxxxxxx agaru je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 dní xxx 28 až 30 °C, xxxx xxxx spóry 15 xx xxxxxxxx (4.6) xxxx, co byla xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulace, x homogenizovat. Tato xxxxxxxx xx xxxx x chladničce skladovat xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx použité xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,2 a 0,3 xx xx 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °C.
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [2]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX xx 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, pH 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2X2X x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Fosfátový xxxx, pH 8,0
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O p.a. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xX 4,5 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx xxxxxxx/xxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.11 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, jejichž xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Chlortetracyklin
Na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxx roztok xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx týden.
Na základě xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx X8, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx 0,01 % černě xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Oxytetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, jehož xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem podle xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, standardní xxxxxxxx xxxxxx S8 obsahující 1,0 μx tetracyklinu-HCL xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx než 50 xxx
Xx zkušebního xxxxxx xxxxxx formamid (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) podle odkazů x xxxxxxx x xxxxx získat koncentraci X8. Koncentrace xxxxxxxxx x tomto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx fosfátového xxxxx (4.3).
|
Antibiotikum |
CTC |
OTC |
TC |
|||
|
Předpokládaný xxxxx x ppm |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Zkušební vzorek x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx formamidu (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 v μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Obsahy vyšší xxx 50 ppm
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx antibiotika xx xxxxxx nebo xx jeho výrobní xxxxxx přidat xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 xx 10 x 20ti xxxxxxx xxxx objemu xxxxx (4.9). Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx třepačkou. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx pH xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx pH na 3 (x minerálních xxxxxxxxx xx použití 10 % kyseliny xxxxxx). Xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8,0 (4.4), xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxx xx ze xxxxx na modrou). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 5,5, xxxxxxxxx 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1), za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx x tetracyklin
Postupovat xxx xx uvedeno x xxxx 6.2.1 xxx, že xx xxxx (4.9) nahradí xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx kultivačního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxx 50–60 °C xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, X2, X1) x xxxx koncentrací xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx vybrat misky x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx nejméně 8 xxx x průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx množství xxxxxxxxxxxx kultivačního média (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x tloušťce xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx opakovat xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx xxx 28 xx 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zanesením xxxxxxxxx koncentrací xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx této xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - X1 -X2 -X4 -S8) · 0,602 / U4 + X8 + X4 + X8 - U1 -X2 -X1 -S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x xxxxxxxxx aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), xxxxxxxxxxxxxx (OTC) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx vyšších xxx 1 x/xx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx vzniknout matným xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx rychlejší xxx xxxxxx xx agaru.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx obsahu XXX se vzorek xxxxxxxx směsí acetonu, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxx OTC x XX xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus x xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Světelná xxxxxxxxxxx závisí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1.), xx xxxxxxx se xxxxx 1,5 xx 3 % agaru (xxxxx xxxxxxx). Xxxxxxxxx přes xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava očkovací xxxxx
24 xxxxx před xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °C. Xxxxxxxxxxx celou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxx 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) a xxxx přenést suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx xxxxxxxx bazálního xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx 37 °C xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx logaritmické fáze (1x30 až 2x).
4. Xxxxxxxxxx média x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [7]
|
Xxxxxx |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,32 g |
|
Hydrofosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
13,6 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 objemově.
4.5 Směs xxxxxxx methanolu/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: XXX, XXX, XX, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx zásobní xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 xx 500 μx XXX-XXX, OTC-HCL xxxx TC-HCL xx 1 xx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 nebo 250 xx dát 1 xx 2 x zkušebního vzorku. Xxxxxx asi 100 xx xxxxx (4.4) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxx xx rysku fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát.
6.2 Oxytetracyklin x tetracyklin
Do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.5) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx.
7. Metoda xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) x xxxxxxx (6) fosfátovým xxxxxx, xX 4,5 (4.2), tak, aby xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx každé stanovení xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, ne které xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx, které xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat standardní xxxxxxxx roztok, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,2 μx XXX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx určených xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx ředění xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx extrakt (6.1) za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 ml xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) do xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx dvou xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým pufrem (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx roztok (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,6 μx XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Poté xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx, 7 xxxxxx, xxxxx xxxxxx dvakrát.
|
ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku |
ml xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μg/ml) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Zředit xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx OTC-HCL xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx tohoto xxxxxxx xx xxxx zkumavek x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx jiných xxxxxxxx. Xxxxxxx objem xxxx jiných xxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium pro xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xx xxxxxxxxx při 590 xx 85 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx v 5 cm kyvetě xxxx 92 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Xxxxxxxx
Xxx xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx, ale nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxx, jejíž teplota xx mícháním udržuje xx 37 °X + 0,1 °C. Xxxxxxxxx xxxx se xxxxx takovým způsobem, xxx bylo možné xxxxxxxxx křivky propustnosti, xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3h). Poté xxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 xx roztoku xxxxxxxxxxxx (4.6) do každé xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx xxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, xxxxxxx xxxxxxxx xx nastaví na 100 % propustnost xxxxxxxxxxxx standardního roztoku (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx). Z důvodu xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 cm x raději 5 xx xxxxxx.
8. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační xxxxxx xx milimetrovém papíře xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených x jednoho vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní hodnoty.
3. XXXXXXXXX OLEANDOMYCINU
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx, x xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,5 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zředí x jeho antibiotická xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém médiu xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx přítomnosti xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx těchto xxx xx přímo úměrný xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx, X 250 TR [8] (rezistentní xxxx xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx B. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odebraným x xxxxxxxxxxxx média (4.1) x xxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 ml. Xxxxxxxxx přes xxx xxx xxx 30 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx šikmý xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) za xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx je 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 až 5 xxx xxx 28 xx 30 °X, xxxx xxxx xxxxx 15 ml xxxxxxxx (4.4) poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sporulaci, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx testy xx deskách xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) určit xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxx použité xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Médium xxx udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx jakosti |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx použitím xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [10]
Xxxxxx (4.1) upravené xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.5 Xxxxx methanol
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Xxxxxxxxx roztok
|
Čistý xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná xxxx |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) aminometan x.x. |
0,5 x |
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxxxxxxx x xxxxx aktivitě.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) v 5 xx methanolu (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μg/ml.
Na xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (4.6) standardní xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx roztoku (4.6) xxxx koncentrace:
|
S4 |
0,05 |
μg/ml |
|
S2 |
0,025 |
μg/ml |
|
S1 |
0,0125 |
μg/ml |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku o xxxxxxxxx 2 xx 10 x 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, odebrat xxxxxxxxx xxxx extraktu x zředit xxxxxxxx (4.6) x cílem xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μx oleandomycinu xx 1 xx (= X8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) za xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.2) xxx 60 °X suspenzí spór (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku (X8, X4, X2, X1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, U1). Každá xxxxx musí obsahovat xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx a xxxxxxxx.
Xx xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx udělat v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx očkovacího xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx má xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x plochých skleněných xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx množství xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx vzorku opakovat xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx během 18 xxxxx xxx xxx 28 až 30 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Zaznamenat xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx koncentrací xxxxx průměru xxxxxxxxxxx xxx. Načrtnout křivky xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Pokud nedošlo x interferenci, obě xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + X4 + X8 - X1 - X2 - X4 - S8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx ošetří xxxxxxxxxx xxxxxxxxx roztokem x xX 8, xxxxxxxxxxx xx 80 °X, x poté xx xxxxxxxxx methanolem. Xx odstředění xx xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxxxx aktivita xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx tylosinu na xxxxxxxx xxxxx naočkovaném Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx XXXX x. 9341
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx agarem xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes noc xxx asi 35 °X. Skladovat kulturu x chladničce x xxxxxxxxxx xxxxx měsíc xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx xxxxxxxxxx 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Inkubovat 24 hodin xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
Za xxxxxx xxxxxxxxx rodičovského xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 a xx účelem stanovení xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx KH2PO4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 ml |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
5,5 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (V/V) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: tylosin x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx xxxxxxx sušárně (5 xx xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztok xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1000 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx připravit rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 2 μg xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx.
Xxxx připravit xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) za xxxxxxx směsi (4.7) xxxx koncentrace:
|
S4 |
1 |
μg/ml |
|
S2 |
0,5 |
μg/ml |
|
S1 |
0,25 |
μg/ml |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx xxxxxx 10 x zkušebního vzorku; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 g xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx fosfátového xxxxx, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x homogenizovat 2 xxxxxx (kuchyňský xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx připravit koncentrace X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 xxx xxxxxxx extrakt xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x rozpustit xxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx média
Naočkovat bazální xxxxxx pro xxxxxxxxx (4.1) upravené xx xX 8 při 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (X8, S4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Každá xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx a extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 2 mm. Upřednostňuje xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se z xxxxxxxx skleněných desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx do xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx antibiotika mezi 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + U4 + X8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - X1 - U2 - X1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx virginiamycin x xxxxxxxx, koncentrátech x premixech. Spodní xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx extrahuje xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Xxxxx 80". Xx odstředění xxxx filtraci xx xxxxxxx zředí a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx vytvořením xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx antibiotika.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea XXXX x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx agarem x kultivačního média (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx asi 35 °X. Xxxxxxxxx xxxxxxx x chladničce x xxxxxxxxxx každých 14 dní xx xxxxx xxxx.
3.2. Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxx agarem (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx solného roztoku (4.3). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat 24 xxxxx při 35 °X, poté smýt xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx fyziologického xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxx xxx 75 % xxxxxxxxx propustnost xxx 650 nm. Xxxxx xx tato xxxxxxxx skladuje v xxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x bazálním xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Očkování kultivačního xxxxx se provádí xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX xx 6,5.
4.2 Fosfátový pufr, xX 6
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx voda xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok.
4.4 Xxxxx methanol.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx "Tween 80" (x/X).
4.7 Standardní látka: xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml. Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 1 μx virginiamycinu na 1 xx. Poté xxxxxxxxx postupným xxxxxxx (1+) xx použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo nižším xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 ml xxxxxxx (4.6) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx čirého xxxxxxx x odpařit xx xxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx 20 xx xxxx více směsi (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 ml (= X8). Poté xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.5)
6.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx xxxxxx, přidat 100 ml xxxxxxx (4.6) x protřepávat 30 xxxxx třepačkou. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx koncentraci 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx bakterií (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx na xxxxx se xxxxxxx x miskách xx xxxxxxx xxxx koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x extraktu.
Za xxxxx xxxxxx vybrat xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx o xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx nebo plastovým xxxxxxxx o xxxxxxx 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx děr.
U xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx čtyřikrát s xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 inhibičních xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noc xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 -X1 - X2 - S4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x relativní aktivita.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Může xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Xxxx xxx použito jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx výsledky.
[3] Xxxx xxxxx slouží x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Xxxxx xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx xxxxx LUFA xxxxxxxx rychlejší růst xxx S. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Xxxxx podle XXXX.
[9] Může být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx použito xxxxxxxx komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[12] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.