Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 27. xxxxx 1972,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(72/199/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu krmiv [1], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx stanoví, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru vzorků x xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971 [2] x 71/393/XXX ze xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [3] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; xx x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx třetí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxx xxx x xxxxxx škrobu, xxxxxxx proteinů, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx gossypolu, xxxxx x x aktivitu xxxxxxx, xx provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx X xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení xxxxxxx v části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. června 1971, kterou xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx X xxxx směrnice.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxxx, že xxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx, xxxxx jde x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx antibiotik, xxxxx x x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx, tylosinu x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx provádějí xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XX xxxx směrnice.
Obecná ustanovení xxxxxxx x xxxxx 1 (úvod) xxxxxxx xxxxx směrnice Komise x. 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxx 1971, s výjimkou xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx použijí xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx II xxxx směrnice.
Xxxxxx 3
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. července 1973. Neprodleně x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Článek 4
Xxxx směrnice xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx xxx 27. xxxxx 1972.
Xx Xxxxxx
xxxxxxxx
X. L. Xxxxxxxx
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Úř. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Úř. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
PŘÍLOHA I
1. XXXXXXXXX XXXXXX
Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x produktů xxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu x xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxx obsahují xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx, xxxxxx řepné xxxxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. xxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx) xxxx škvarky.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx vzorek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx čiření a xxxxxxxx xx polarimetricky xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxx xxxxxx stanovení xx xxxxxx xxxxxxxxx 40 % ethanolem. Xx xxxxxxxxx filtrátu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx optická xxxxxx xx stejných xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxx dvěma xxxxxxxx vynásobený známým xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx ve xxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 25 % (x/x) xxxxxxxx chlorovodíková, x: 1,126.
3.2 1,128 % (x/X) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxx titrací xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X x xx přítomnosti 0,1 % (m/V) xxxxxxxxxxxxx v 94 % (X/X) xxxxxxxx. 10 ml = 30,94 ml 0,1 X XxXX.
3.3 Carrezův xxxxxx X: rozpustit xx xxxx 21,9 x xxxxxx xxxxxxxxxxx Xx(XX3XXX)2.2X2X x 3 x ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx 100 xx.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx XX: xxxxxxxxx xx xxxx 10,6 x xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx [X4(Xx(XX)6].3X2X. Doplnit xxxxx xx 100 xx.
3.5 40 % (X/X) ethanol, x: 0,948 xxx 20 °X.
4. Přístroje
4.1 Erlenmeyerova xxxxx o objemu 250 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx.
4.2 Polarimetr xxxx xxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxx oky x průměru 0,5 xx.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx rotace (P xxxx X) (xxx xxxxxxxx 7.1)
Xxxxxxx 2,5 x vzorku x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx do odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx. Přidat 25 xx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x přidat xxxxxxx 25 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Ponořit xxxxx xx vroucí xxxxx xxxxx x xx xxxx prvních xxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxx xxxxxx. Množství xxxx xx vodní xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxx. Xxxxx xxxxx být vyjmuta x lázně během xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx vyjmout xxxxx x xxxxx, xxxxxx 30 xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xx 20 °X.
Xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxx 5 xx Xxxxxxxxx roztoku XX (3.4) x xxxx xxxxx minutu xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx po xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat. Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (což je xxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx většího xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxx X x II, xxxxxxxxx 10 ml.
Poté xxxxxx polarimetrem xxxx xxxxxxxxxxxxx optickou xxxxxx xxxxxxx x 200 xx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx rotace (X’ xxxx X’) xxxxx xxxxxxxxxxx xx 4 % xxxxxxxx
Xxxxxxx 5 x xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx, xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 100 xx x xxxxxx xxx 80 xx xxxxxxxx (3.5) (viz xxxxxxxx 7.2). Xxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx této doby xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxx dobře xxxxxxx x ethanolem. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (3.5), homogenizovat x xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx 50 xx xxxxxxxx (= 2,5 x vzorku) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 250 xx, xxxxxx 2,1 xx xxxxxxxx chlorovodíkové (3.1) x silně protřepat. Xxxxxxxx xx Erlenmeyerovu xxxxx zpětný chladič x ponořit ji xx xxxxxx vodní xxxxx. Xxxxxx xx 15 xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxx xxxxx do xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 100 xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x poté xxxxxxxx xx 20 °C.
Poté xxxxxxx za použití Xxxxxxxxx xxxxxxx X (3.3) a II (3.4), xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx uvedeno v xxxx 5.2 druhém x xxxxxx odstavci.
6. Xxxxxxx výsledků
Obsah xxxxxx (%) xx xxxxxxxx xxxxx:
6.1 Měření xxxxxxxxxxxx
xxxxxxxx xxxxxx = 2 000 (X - X’) / [α]X20°
xxx xx:
X = celková xxxxxxx xxxxxx, x úhlových xxxxxxxx.
X’ = optická xxxxxx xxxxx rozpustných xx 40 % xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxxxxx
[α]X20° + 185,9° : rýžový xxxxx
+ 195,4°: xxxxxxxxxx škrob
+ 184,6°: xxxxxxxxx xxxxx
+ 182,7°: xxxxxxxx xxxxx
+ 181,5°: xxxxx xxxxx
+ 181,3°: xxxxxx škrob
+ 184,0°: xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx
6.2 Xxxxxx sacharimetrem
Procenta xxxxxx = 2 000 / [α]X20° · (2 N · 0,665) (S - X’) / [α]D20°
Kde xx:
X = xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X’ = xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx 40 % xxxxxxxx, ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
X = xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx 100 xx vody, která xx xxx tloušťce 200 xx optickou xxxxxx 100 xxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx:
16,29 g pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
26,00 g xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx
20,00 x pro smíšené xxxxxxxxxxxx
[α]X20° = specifická xxxxxxx rotace xxxxxxx xxxxxx (viz 6.1).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx překročit 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxx 40 % x 1 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Pokud xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 6 % uhličitanů, xxxxxxxxxxx jako uhličitan xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxx xxx před xxxxxxxxxx xxxxxxx rotace zničeny xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx kyseliny xxxxxx.
7.2 X xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx laktózy, xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx mléko, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx 80 xx ethanolu (3.5) xxxxx: Připojit xx Xxxxxxxxxxxxx baňku zpětný xxxxxxx, xxxxxxx xx xx 30 xxxxx xx vodní xxxxx x teplotě 50 °X. Xxxxxx vychladnout x xxxxxxxxxx v xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.3.
2. XXXXXXXXX HRUBÝCH XXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx stanoveného xxxxx Kjeldahlovy metody.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx alkalizuje xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x shromáždí xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx, xxxxx přebytek se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxx xxxxxxxx x.x.
3.2 Katalyzátor: xxxx xxxxxxx XxX x.x. xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx XxXX4 · 5X2X p.a., xxxx rtuť xxxx xxxx rtuťnatý HgO x.x.
3.3 Xxxxxxxxxxx xxxxx x.x.
3.4 Xxxxxxxx xxxxxx x.x., x: 1,84.
3.5 Xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
3.7 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx 300 xx xxxxxxxxxxxxx xx 100 xx 95-96 % (V/V) ethanolu.
3.8 40 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxxx sodného.
3.9 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X.
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,25 X.
3.11 Xxxxxxxx roztok xxxxxx xxxxxxx p.a.
3.12 8 % (x/X) xxxxxx thiosíranu xxxxxxx, Xx2X2X3 · 5X2X x.x.
3.13 Xxxxxxxxxxx pemza, xxxxxxx v kyselině xxxxxxxxxxxxxx a zpopelněná.
4. Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Kjeldahlovy xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.1).
5. Xxxxxx
5.1 Mineralizace
Navážit 1 g xxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg x xxx xx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx 10 x xxxxxx draselného (3.1), xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) (0,3 až 0,4 g xxxxx xxxxxxxxx nebo 0,9 xx 1,2 x xxxxxx měďnatého xxxx xxxxx rtuti xxxx 0,6-0,7 x xxxxx xxxxxxxxxx), 25 ml xxxxxxxx sírové (3.4) x několik granulí xxxxx (3.13), xxxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx x za xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx; xxxx zahřívat xxxxxxxxxxxx dokud kapalina xxxxxxxxxx xxxxx. Zabránit xxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx organických xxxxxx. Když xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx katalyzátor xx bázi mědi), xxxxxxxx var ještě xxxxx xxxxxx, poté xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.2 Destilace
Opatrně x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx 250 xx 350 xx xxxx, aby se xxxxxxx zcela rozpustily; xxxxxx vychladnout; xxxx xxxxxx několik granulí xxxxx (3.3).
Xxxxxx do xxxxxx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx přesně xxxxxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X (3.5) nebo 0,5 X (3.6) x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.2) x xxxxxx několik xxxxx indikátoru xxxxxxxxxxxxx (3.7).
Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxxx xx sběrné baňce xx hloubky xxxxxxx 1 cm (viz xxxxxxxx 7.3). Xxxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx do xxxxx 100 ml 40 % roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.8). Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na xxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxx xxxxxx buď 10 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (3.11), xxxx 25 ml xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (3.12).
Xxxxxxxx xxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xx xx 30 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 150 xx kapaliny. Xx xxxxxxxx této doby xxxxxxxxxxxx xX výsledného xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx do žluta, xxxxx přidat xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx 0,1 X (3.5) xxxx 0,05 X (3.6).
5.3 Xxxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx sírové xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,1 X (3.9) xxxx 0,25 X (3.10) v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sírové, dokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxx
Xx účelem xxxxxxxx, zda xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx slepý xxxxx (xxxxxxxxx x xxxxxxx), x xx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx analyzován. Xx xxxxxx xxxxxxxx správnosti xxxxxx se provede xxxxxxx (xxxxxxxxxxxx, destilace x xxxxxxx) 1,5 xx 2,0 g xxxxxxxxxxx x.x. (b.t. 114 °C; % X: 10,36) za xxxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxxx xxx xxxxxx; 1 x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 14,80 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,5 X.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx spotřebované xxxxxxxx xxxxxx, 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 X xxxxxxxx 1,4 xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx dusíku faktorem 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku.
Opakovatelnost
Rozdíl xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxx překročit:
- 0,2 xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx proteinů xxxxx než 20 %;
- 1,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 20 % x xxxxx xxx 40 %;
- 0,4 absolutní xxxxxxx pro xxxxx xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, které vyžadují xxxxxxx xxxx mineralizací x destilací. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.
7.2 X xxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx objem xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N, xxxxx má xxx xxxxxxxx nalita xx xxxxxx xxxxx, snížen xx 10 xx 15 ml x xxxxxxx xxxxx na 25 xx.
7.3 Pokud xxxx baňka destilační xxxxxxxxx nálevku s xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky xxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx.
3. XXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx frakci xxxxxxx proteinů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxx 48 xxxxx xxx 40 °C xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx chlorovodíkové. Xxxxxxxx xx filtruje x xxxxx dusíku ve xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxx hrubých xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, x: 1,125.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,075 X.
3.3 2,0 x/xx xxxxxxx; xxxxxxxx pepsinu xx xxxxxxxxxx x metodě xxxxxxx v části 4 této xxxxxxx x musí být xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x touto xxxxxxx.
3.4 Xxx 0,02 % (x/X), xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pepsinu x xxxxxxxx chlorovodíkové (3.2); xxxxxxxx: 400 x/x.
3.5 Xxxxxxxxxx emulze (xxxx. xxxxxxx).
3.6 Všechna xxxxxxx xxxxxxx x bodě 3 xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
4. Přístroje
4.1 Vodní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx na 40 °X ± 1 °X.
4.2 Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx roztoku (viz xxxxxxxx 7.2)
Xxxxxxx 2 x xxxxxx x xxxxxxxxx na 1 xx x xxx xx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx. Xxxxxx 450 xx roztoku xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 40 °X. Xxxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxx, xx xx xX xxxxxxxx xxxxx xxx 1,7. Vložit xxxxx do xxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxxx (4.1) a xxxxxx xx xxx 48 xxxxx. Protřepat po 8, 24 x 32 xxxxxxxx. Xx 48 xxxxxxxx přidat 15 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1), xxxxxxxx xx 20 °C, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx 250 xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx x xxx xx xx baňky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.2). Xxxxxx xxxxxxx nezbytná pro xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v metodě xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxx 5.1. Xxxxxxxxxxxxx x uvést xx varu. Pokud xx vytvoří pěna, xxxxxx několik kapek xxxxxxxxxx emulse (3.5). Xxxxxxxxxx v silném xxxx, dokud se xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vody.
Když xx xxxxxx čirý x bezbarvý (světlezelený, xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx), xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx proteinů x xxxxxx 5.2 a 5.3.
5.4 Xxxxx pokus
Provést xxxxx xxxxx xx xxxxxxx stejného xxxxxxx, xxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx od xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zkušebním vzorkem. 1 xx xxxxxxxx xxxxxx 0,1 N xxxxxxxx 1,4 mg xxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 6,25. Xxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi výsledky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 0,4 xxxxxxxxx hodnoty xxx xxxxx xxxxx xxx 20 %,
- 2,0 % xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 20 % a xxxxx xxx 40 %,
- 0,8 absolutní hodnoty xxx obsah xxxxx xxx 40 %.
7. Xxxxxxxx
7.1 Hodnoty xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx vivo.
7.2 Xxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxx než 10 % xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (x.x. 40 xx 60 °X).
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX XXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxx pepsinu xxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx. Xx filtrátu xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx Folin-Ciocalteu. Xxxxxxx hustota xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx 750 xx x xxxxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx za xxxxxxxx metody uvolní xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx hydroxyarylových xxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx xx optickou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx μmolu xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx 0,2 X.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,06 X.
3.3 Kyselina chlorovodíková 0,025 N.
3.4 5 % roztok (m/V) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 0,5 X.
3.6 Činidlo Xxxxx-Xxxxxxxxx. Xxx 100 x xxxxxxxxxx xxxxxxx (Na2WO4 · 2X2X), 25 x xxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xx2XxX4 · 2X2X) x 700 ml xxxx xx dvoulitrové xxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (x: 1,71) x 100 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19), xxxxxxxx xxxxx xx zpětný chladič, xxxxx xx xxxx x xxxxxxxx roztok x mírném xxxx xx xxxx 10 xxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zpětný xxxxxxx, xxxxxx 175 x xxxxxx xxxxxxxx (Xx2XX4 · 2X2X), 50 xx xxxx x 1 xx xxxxx. Xxxxx xx xxxx 15 xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx přebytek xxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx odměrné xxxxx x objemu 1 x, doplnit xx rysku xxxxx, xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx použitím xxxxxxxx 1 xxxxx xxxxxxx 2 objemy xxxx.
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx 2 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 354 mg xxxxxx [1] x xxx xx baňky o xxxxxx 200 xx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxx baňku s xxxxxxxx pumpou x xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.2) xx xx 100 xx. Připravit bezprostředně xxxx xxxxxxxx.
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx 181,2 mg xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x doplnit xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (zásobní xxxxxx). Xxxxxxx 20 xx xxxxxx roztoku x xxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.1) ve 100 xx. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 0,2 μxxx xxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx 25 °X + 0,1 °C.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
4.3 Stopky, xxxxxxxx: 1 xxxxxxx.
4.4 pH xxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxxxxx 7.1.)
Xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxx ve 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.2). Odpipetovat 2 xx xxxxxxx x xxx xx xx xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.3). xX kontrolované xX metrem xxxx xxx 1,6+0,1. Ponořit xxxxx xx xxxxx xxxxx (4.1).
5.2 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 ml roztoku xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, zahřát xx xxxxx xxxxx (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 x xxxxxxxxx asi xxxxxx pohyby xxx x zpět skleněnou xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx konci. Xxxxxx xxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 25 °X xxxxxx po xxxx 10 xxxxx, xxxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (doba x xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx). Xxxx xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxxxx xx 25 °X, xxxxxxxxxxxxx x filtrovat xxxx xxxxx xxxxx.
5.3 Xxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxx, xxx xx do Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x za xxxxxxx protřepávání 3,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxxxx (3.6). Xx 5 až 10 xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 750 nm x xxxxxxxx o xxxxxxxx 1 cm x porovnání x xxxxx.
5.4 Slepý xxxxx
Xxx xxxxx stanovení xxxxxxx xxxxx slepý pokus:
Odpipetovat 5,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.7) do xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xx 25 °X, xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.4) xxxxxxxxxx xx 25 °C, xxxxxxxxxxxxx x xxxx přidat 1,0 ml xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1. Promíchat xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx přesně 10 xxxxx xx xxxxx lázni (4.1) xxx 25 °C. Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx suchý xxxxx. Xxxxxxxxxx x postupu xxxxxxxx x xxxx 5.3.
5.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 ml xxx 1,0, 2,0, 3,0, 4,0, a 5,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, x 1,0 μxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Doplnit xxxxx referenčním roztokem xxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx kyselinou chlorovodíkovou (3.1) na 5,0 xx. Xxxxxx 10,0 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxx (3.5) a xx stálého xxxxxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx Folin-Ciocalteu (3.6). Xxxxxx optickou xxxxxxx xxx xx uvedeno x poslední větě xxxx 5.3. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxxxxx xxxxxx proti xxxxxxxxx tyrosinu.
6. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxx x kalibrační xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx optické xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxx x μxxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx x xx xxxxx xxxxxx xxx 25 °X se vypočítá xxxxx xxxxxx:
Xxxxxxxx xx xx (j/mg) = 0,32 a / x
xxx:
x = xxxxxxxx xxxxxxxx x μxxx xxxxxxxx x kalibrační xxxxxx;
x = množství xxxxxxx v mg xxxxxxx podle xxxx 5.2.
7. Xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx má xxx rozpuštěno, musí xxx xxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,35 + 0,035.
7.2 Dvě xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:
3,64 Xxxxxxxxxxx milijednotkám/mg (μxxxx tyrosinu/mg xxx. xxx 35,5 °X) xxxx
36400 xxxxxxxxxx xxxxxxxx/x (μxxxx tyrosinu/g za 10 xxx. xxx 35,5 °X).
5. XXXXXXXXX XXXXXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXXX
1. Účel a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx gossypolu, xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pokrutinách x xxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx obsahují. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx obsahu xx 20 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, a xx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx gossypol-dianilin, xxxxx xxxxxxx hustota xx xxxxxx xxx 440 xx.
3. Xxxxxxx
3.1 Směs xxxxxxxxxxxx x hexanu: xxxxxxx 60 xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx p.a. xx 40 objemovými xxxxxx x-xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxxxx X: xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1 l xxxxx xxx 500 xx xxxxx isopropanolu a xxxxxx (3.1), 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx, 8 xx xxxxxx kyseliny xxxxxx x 50 xx vody. Doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Trvanlivost xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.3 Xxxxxxxxxxxx X: xxxxxxxxxxx do odměrné xxxxx o xxxxxx 100 xx 2 xx 3-xxxxx-1-xxxxxxxxx a 10 xx ledové xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x doplnit xx xxxxx X,X-xxxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx.
3.4 Xxxxxx x.x.: xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 0,022, xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx s vyloučením xxxxxxx x posledních xxxxxx 10 % xxxxxxxxx. Toto xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x zazátkované xxxxx x xxxxxxx skla.
3.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx X: xx odměrné xxxxx x xxxxxx 250 xx xxx 27,9 mg octanu xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx a xxxxxxx xx rysku xxxxxxxxxxxxx X (3.2). Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x objemu 250 xx 50 xx tohoto xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx rozpouštědlem X. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx je 0,02 xx/xx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
3.6 Standardní xxxxxx xxxxxxxxx B: xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx xxx 27,9 mg xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx B (3.3). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xx 0,5 xx/xx.
Xxxxx xxxx standardní xxxxxxx xxxxxxxxx A x X chráněny před xxxxxxx, jejich xxxxxxxxxxx xx 24 xxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Mixér (třepačka): xxxxxxxxx 35 xx./xxx.
4.2 Xxxxxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxx
5.1 Zkušební xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxx. Je xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx částí xxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx dostatečné množství xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx semenech, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxxxxxx xxxxxx neměl xxxxxxxxx 1 g; xxx xxxxx xxxxx xx může xxx 5 x. Xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 10 ml filtrátu; xxxx xx xxxxxxxxx 50 až 100 μx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx zkušebního xxxxxx xxxx xxx xxxx 0,5 x 5 x, xxx xxxxxxxxx xxxx 2 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 40 xx 200 μx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 20 °C.
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx gossypolu
Dát xxxxxxxx vzorek xx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 250 ml, xxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx střepy. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 50 xx rozpouštědla X (3.2), zazátkovat xxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxx filtr x xxxxxxxx filtrát x xxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Během xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x kohoutem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (X x X) o xxxxxx 25 xx xxxxxx alikvotní xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 50 xx 100 μg xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx rozpouštědlem X (3.2) na 10 xx. Xxxx doplnit xx xxxxx xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx roztok xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx.
Xxxxxx xxxxxx přidat 10 xx rozpouštědla X (3.2) do xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (C x X) o objemu 25 ml. Xxxxxxx xx rysku xxxxx (X) xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx slepý xxxxx.
Xxxxxx 2 xx xxxxxxx (3.4) xx xxxxx (X) x (X). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), xxxxxxxxxxxxx x nechat xxxx xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx 440 xx a ve xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 1 cm xxxxxxxx hustotu xxxxxxx xxx slepý xxxxx (X) xxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx roztokem (X) x optickou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (B) xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (A).
Odečíst xxxxxxxx xxxxxxx roztoku xxx xxxxx xxxxx od xxxxxxx hustoty roztoku xxxxxx (= xxxxxxxx xxxxxxx hustota). Z xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx je uvedeno x xxxx 6.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1 až 5 xx gossypolu do xxxxxxx baňky x xxxxxx 50 xx x xxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx připravit xxxxx xxxxx a xxx 10 xx xxxxxxxxxxxx B (3.3) xx jiné xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 50 xx. Zahřívat xxx baňky 30 xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx po xxxxx xxx baňky xxxxx isopropanolu x xxxxxx (3.1). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx stát 10 až 15 xxxxx, xxxx filtrovat x xxxxxxxx filtráty x baňce se xxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxx xxxxxx 2 ml xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou odměrných xxxxx x objemu 25 xx x 2 xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx do xxxx jiných xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 25 ml. Xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx roztoky.
Přidat 2 xx xxxxxxx (3.4) do xxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 30 xxxxx nad xxxxxx xxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx 25 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1), homogenizovat x nechat stát xxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx uvedeno x bodě 5.2. X xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xx může xxxxxxx buď xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (6.1), nebo xx základě kalibrační xxxxxx (6.2).
6.1 Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
Xx stanovených xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx:
xxxxx gossypol: X 1% / 1xx = 625
xxxxxxx xxxxxxxx: X 1% / 1xx = 600
Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx obsah gossypolu xx xxxxxx xx xxxxxxxx takto:
gossypol %: X · 1 250 / E1%1cm ·&xxxx; · x · x
xxx:
X = opravená xxxxxxx xxxxxxx, stanovená xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.2
x = zkušební xxxxxx x x
x = xxxxxxxxx xxxx filtrátu x ml
6.2 Na xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx
6.2.1 Xxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx dvě xxxxx po pěti xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx 25 ml. X xxxxx série xxxxxx xxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.5). Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx X (3.2) na 10 xx.
Xxxxxxx baňky xxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx (3.1) xx 25 xx.
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx xxxxxx vodní xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx pokojovou teplotu, xxxxxxx xx rysku xxxxx xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1), homogenizovat x xxxxxx xxxx xxxxx hodinu.
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 xxxxxxxx optickou xxxxxxx standardní xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Načrtnout xxxxxxxxxx xxxxxx uvedením xxxxxx xxxxxxx hustoty proti xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.2.2 Xxxxxxx gossypol
Připravit 6 xxxxxxxxx xxxxx x objemu 50 xx. Do xxxxx xxxxx přidat xxxxxxx 10 xx xxxxxxxxxxxx X (3.3) a xx xxxxxxxxx 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx X (3.6). Doplnit xxxxx xxxxx xxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxxxx X (3.3). Xxxxxxxx 30 xxxxx xxx vroucí xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, doplnit xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxx 2 xx těchto xxxxxxx xx dvou xxxxx o 6 xxxxxxxxx baňkách x xxxxxx 25 xx. Xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx série xx 25 xx směsí x xxxxxxxxxxxx a xxxxxx (3.1) (xxxxxxxxxx xxxxx).
Xxxxxx xx každé xxxxx xxxxx xxxxx 2 xx anilinu (3.4). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu, xxxxxxx xx xxxxx směsí xxxxxxxxxxxx x hexanu (3.1), xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx série).
Za xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx 5.2 stanovit xxxxxxxx hustotu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x odpovídajícími roztoky xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx křivku xxxxxxxx xxxxxx optické hustoty xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (x μx).
6.3 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení provedených x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx:
- 15 % relativní hodnoty xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx 50 xxx,
- 75 xxx xxxxxxxxx hodnoty pro xxxxx xx 500 xx 750 ppm,
- 10 % relativní xxxxxxx xxx xxxxx xxxxx xxx 750 xxx.
[1] Stanovit xxxxx xxxxxx podle Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (teoretický xxxxx: 17,7 % dusíku).
XXXXXXX II
1. STANOVENÍ X IDENTIFIKACE TETRACYKLINOVÝCH XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx antibiotika x xxxxxxxx, která obsahují xxxxxxx 0,1 xxx xxxxxxxxxx, v xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx.
2. Princip
Vzorek xx extrahuje směsí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx stanovena x identifikována xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx Xx x hodnotami standardních xxxxx, a xx xxx xxxxxxxxxxxx v XX xxxxxx (xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx), xxxx xxxxxxxxxxxxx xx agarovém xxxxx xxxxxxxxxxx X. xxxxxx.
3. Činidla
|
3.1 Xxxx, xX 3,5 |
|
|
Monohydrát xxxxxxxx xxxxxxxxx x.x. |
10,256 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxx Na2HPO4.2H2O x.x. |
7,45 x |
|
Xxxxxx p.a. |
300 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 ml |
|
3.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 5,5 |
|
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4.2X2X p.a. |
6,947 x |
|
Xxxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
3.3 Xxxxxx I: xxxx xxxxxxx nitromethanu/čistého xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxxxxxxxx: 20/10/1,5 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx použitím |
|
|
3.4 Xxxxxx XX xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxx xxxxxxxxxxx/α-xxxxxxxx: 20/10/3 xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx |
|
3.5 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (d: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
3.7 Xxxxxxx, x: 0,91
3.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: Xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx, tetracyklin, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx x chlorovodíku.
3.9 Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus ATCC x. 11778
Udržování rodičovských xxxxx, příprava xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxx xx xxxxxx podle xxxx 3.1. x 3.2. xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxxx 2 xxxx přílohy.
3.10 Kultivační xxxxxx [1]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx |
20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx xX xx 5,8.
3.11 0,1 % (m/V) xxxxxx 2,3,5-triphenyltetrazolium chloridu x 5 % (x/X) xxxxxx glukosy.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx papírovou xxxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxx 25 xx). Xxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx (2440X xxxx 2043X) xxxx xxxxxxxxxxxx.
4.2 Odstředivka
4.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 30 °X.
4.4 UV lampa xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxxx desky xxx 20 x 30 xx xxx bioautografii.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
5.1 Zásobní xxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (3.8) a xx xxxxxxx kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (3.6) xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx koncentrace xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX a xxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx.
5.2 Xxxxxxxxxx roztoky xxx stanovení XX xxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx získat xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX, oxytetracyklinu-HCL x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxx (5.1) xxxxxxxxxx xxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 5 μx chlortetracyklinu-HCL, xxxxxxxxxxxxxxx-XXX x xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml
6. Xxxxxxxx
Xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 xxx, xx xxxxx použít xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx x této xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx (3.5) x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 100 μx xx 1 xx (6.1) x 5 μx xx 1 xx (6.2).
7. Stanovení x identifikace
7.1 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx do pufračního xxxxxxx, xX 3,5 (3.1). Xxxxxxxxx přebytek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx papíru. Xxxx xxxxxxx na papír 0,01 xx referenčních xxxxxxx (5.2 a 5.3) x xxxxxxxx (6.1 x 6.2). Xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx; pokud xx xx xxxxx, xxxxxx trochu vyschnout.
Rozvinout xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Použít xxxxxx I (3.3) xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx XX (3.4) xxx xxxxxxxxx XX xxxxxxx. Když xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx 15 až 20 xx (xxx 1 xxxxxx 30 xxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx XX xxxxxxx
Xxxx xx xxxxx antibiotika xxxxx xxx 1 μx/xx2, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (3.7) xxxxxxxxx xxxxxxxx pod XX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny (4.4).
7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxx kultivační xxxxxx (3.10), xxxxx xx předem xxxxxxxx X. xxxxxx (3.9), xx skleněné xxxxx (4.5) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxx inkubační xxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx projeví xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx.
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xx inkubaci xxxxxx xxxxxx (3.11) xx xxxxxx.
7.4 Xxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx Xx tetracyklinových antibiotik xxxx xxxxxxx xxx. Xxxx xxxxxxx se xxxxx mírně xxxxx xxxxx xxxxxxx papíru x jeho xxxxxxxx:
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,60 |
|
Xxxxxxxxxxx (XX) |
0,40 |
|
Xxxxxxxxxxxxxx (XXX) |
0,20 |
|
4-xxx-XXX |
0,15 |
|
4-xxx-XX |
0,13 |
|
4-xxx-XXX |
0,10 |
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "xxx" xxxxxxxxx xx menší xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
2. XXXXXXXXX CHLORTETRACYKLINU, OXYTETRACYKLINU X TETRACYKLINU
A. XXXXXX XX XXXXX
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx stanovit xxxxxxxxxxxxxxxx (XXX), oxytetracyklin (XXX) x tetracyklin (TC) x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xx 5 xxx. Xxxxxx xxxxx xxx 5 ppm xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
2. Xxxxxxx
X xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxx 50 xxx xx vzorek xxxxxxxxx zředěným formamidem. X obsahů vyšších xxx 50 ppm xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x směsí xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX x XX.
Xxxxxxxx xx xxxx zředí x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxx CTC, OTC xxxx XX xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx X. xxxxxx. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Průměr xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. xxxxxx XXXX x. 11778
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1), bez xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 30 °C. Xxxxxxxxx kulturu v xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx 14 xxx xx xxxxx agar.
3.2 Xxxxxxxx suspenze xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 xx fyziologického xxxxxxx xxxxxxx (4.5). Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 300 ml kultivačního xxxxx (4.1), xxx xxxxxxxxxxx modře a xxxxxxxx borité, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xx 4 %. Inkubovat 3 xx 5 dní xxx 28 xx 30 °C, xxxx xxxx spóry 15 xx ethanolu (4.6) xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x homogenizovat. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství očkovací xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx největší xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx množství je xxxxxxx 0,2 x 0,3 xx na 1000 xx. Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx 50 xx 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx stanovení [2]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Kvasnicový xxxxxxx |
3 x |
|
Xxxx, podle xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
"Xxxxx 80" |
1 xx |
|
Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5 (4.2) |
10 xx |
|
5 % (m/V) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx |
15 xx |
|
0,5 % xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx |
4 xx |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xxxx xxxxxxxx upravit xX na 5,8.
4.2 Xxxxxxxxx pufr, xX 5,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný KH2PO4 x.x. |
130,86 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
6,947 g |
|
Destilovaná xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxxx xxxx, xX 5,5, xxxxxxx 1/10
4.4 Xxxxxxxxx xxxx, pH 8,0
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 p.a. |
1,407 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xx2XXX4 · 2H2O x.x. |
57,539 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
4.5 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.6 20 % (X/X) xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 N.
4.8 70 % (X/X) xxxxxxxx: xxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx pH 4,5 za použití xxxxxxxx xxxxxx xxx 2 X.
4.9 Xxxx xxxxxxx acetonu/vody/kyseliny chlorovodíkové (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.10 Xxxx čistého xxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 objemově.
4.11 Xxxxxxxxxx látky: XXX, XXX, TC, jejichž xxxxxxxx xx vyjádřena x xxxxxxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
5.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.11) x za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.7) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 500 μx chlortetracyklinu-HCL xx 1 ml. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx v chladničce xxxxx xxxxx.
Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx xxxxxxxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 ml. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx fosfátového xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), xx xxxxxxx xxxx přidáno 0,01 % xxxxx xxxxx [3].
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.3) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,05 |
μx/xx |
|
X1 |
0,025 |
μx/xx |
5.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 400 μx oxytetracyklinu-HCL na 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,6 μx xxxxxxxxxxxxxxx-XXX na 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,8 |
μx/xx |
|
X2 |
0,4 |
μx/xx |
|
X1 |
0,2 |
μx/xx |
5.3 Tetracyklin
Postupem xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 500 μg xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X8 xxxxxxxxxx 1,0 μx xxxxxxxxxxxx-XXX xx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Xxxxxx xxxxx xxxx nižní než 50 xxx
Xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (4.8) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx v tabulce. Xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Poté xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.3) xxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx X8. Xxxxxxxxxxx formamidu x xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 40 %.
Xxxxxxxxx xxxx dekantovat xxxxxxx x cílem xxxxxx čirý xxxxxx. Xxxx xxxxxxxxx koncentrace X4, X2 x X1 postupným ředěním (1 + 1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
|
Xxxxxxxxxxxx |
XXX |
XXX |
XX |
|||
|
Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxx |
10 |
50 |
10 |
50 |
10 |
50 |
|
Xxxxxxxx xxxxxx x x |
10 |
10 |
24 |
9,6 |
20 |
10 |
|
xx xxxxxxxxx (4.8) |
100 |
100 |
80 |
100 |
80 |
100 |
|
xx fosfátového xxxxx (4.3) |
xxx. 1:5 [4] |
řeď. 1:25 [5] |
70 |
200 |
120 |
xxx. 1:5 [4] |
|
Xxxxxxxxxxx U8 x μx/xx |
0,2 |
0,2 |
1,6 |
1,6 |
1,0 |
1,0 |
6.2 Xxxxxx xxxxx xxx 50 xxx
6.2.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx obsahu xxxxxxxxxxx xx vzorku nebo xx xxxx výrobní xxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 2 až 10 x 20ti xxxxxxx jeho xxxxxx xxxxx (4.9). Protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx extrakce xxxx xxxxxx xX xxxxx xxx 3; xxxxx xx xx xxxxx, xxxxxxx pH xx 3 (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 10 % xxxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pH xx 5,5 za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, pH 8,0 (4.4), za xxxxxxxxxxx bromkresolové zeleně (xxxxxx xx xx xxxxx na modrou). Xxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx, xX 5,5, zředěného 1/10 (4.3), x xxxxx xxxxxx koncentraci X8 (xxx 6.1).
Poté připravit xxxxxxxxxxx X4, X2 x X1 postupným xxxxxxx (1 + 1), xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.3).
6.2.2 Xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxx x bodě 6.2.1 xxx, xx xx xxxx (4.9) xxxxxxx xxxxx (4.10).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 50–60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř koncentrací xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x takové xxxxxxxxx, xxx xxxx možné xxxxxx x agarovém xxxxx xxxxxxx 8 xxx o průměru 10 až 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstvy x tloušťce xxx 2 mm. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm a xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx děr přesně xxxxxxxx množství roztoku xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti na xxxxxxx xxx.
X každého xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx koncentrací, xxx xxxxx stanovení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °C.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx průměr xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření na xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních zón. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, obě xxxxxx xxxxx paralelní.
Logaritmus xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + U8 - S1 -S2 -X4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + S8 - X1 -X2 -X1 -S2
Skutečná aktivita = xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
X. TURBIDIMETRICKY
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx chlortetracyklin (XXX), oxytetracyklin (XXX) x xxxxxxxxxxx (TC) xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 1 x/xx, xxxxx nezasahuje xxxxx xxxxx, která xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx metoda xx rychlejší než xxxxxx xx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxx XXX xx vzorek xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx obsahu XXX x XX xxxxx xxxxxxxxx x kyseliny xxxxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxx x jejich xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx měřením světelné xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Mikroorganismus: Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X 14 [6]
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x kultivačního xxxxx (4.1.), do xxxxxxx xx přidá 1,5 xx 3 % xxxxx (podle xxxxxxx). Inkubovat xxxx xxx při 37 °X. Xxxxxxxxx kulturu x chladničce x xxxxxxxxxx každé 4 xxxxx na šikmý xxxx. Zároveň xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3.2 Příprava očkovací xxxxx
24 xxxxx xxxx xxxxxxxx přeočkovat xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxx 37 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x asi 2 xx xxxxxxxxx xxxxx (4.1) x xxxx přenést suspenzi xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx asi 100 xx stejného xxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx xx vodní xxxxx xxx 37 °X xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (1x30 xx 2x).
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení [7]
|
Pepton |
5 x |
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxx |
1,5 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 g |
|
Chlorid xxxxx |
3,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
1,32 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
3,68 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda ad |
1000 xx |
|
xX po xxxxxxxxxxx: 6,8 xx 7,0. |
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, pH 4,5
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 0,1 X.
4.4 Xxxx čistého acetonu/vody/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 65/33/2 xxxxxxxx.
4.5 Směs xxxxxxx methanolu/kyseliny xxxxxxxxxxxxxx (x: 1,19): 98/2 xxxxxxxx.
4.6 Asi 10 % (x/X) xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.7 Standardní xxxxx: XXX, XXX, TC, xxxxxxx aktivita xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) x xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.3) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 400 až 500 μx CTC-HCL, XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 ml. Tento xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx jeden xxxxx.
6. Extrakce
6.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 200 xxxx 250 xx dát 1 xx 2 x xxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxx xxx 100 xx xxxxx (4.4) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx fosfátovým xxxxxx, pH 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
6.2 Xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx o objemu 200 nebo 250 xx xxx 1 xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx 100 ml xxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx. Doplnit xx xxxxx xxxxxxxxxx pufrem, xX 4,5 (4.2). Xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxx.
7. Metoda stanovení
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu
Zředit standardní xxxxxx (5) a xxxxxxx (6) xxxxxxxxxx xxxxxx, xX 4,5 (4.2), xxx, xxx xxxxxxx série xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx stanovení xx načrtne xxxxxxxxxx xxxxxx, ne xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx se k xxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx podle xxxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx:
7.1.1 Xxxxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx standardní xxxxxx (5) xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2) x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx odpovídá 0,2 μx CTC-HCL xx 1 ml. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx je xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx, 6 xxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,7 |
0,3 |
0,14 |
|
0,6 |
0,4 |
0,12 |
|
0,55 |
0,45 |
0,11 |
|
0,45 |
0,55 |
0,09 |
|
0,4 |
0,6 |
0,08 |
|
0,3 |
0,7 |
0,06 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.1) xx použití xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,12 μx XXX-XXX. Xxx 1 ml tohoto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,75 xx (= 0,09 μx) xx dvou xxxxxx zkumavek. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 xx fosfátovým xxxxxx (4.2).
7.1.2 Oxytetracyklin x xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 0,6 μg XXX-XXX xxxx XX-XXX xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2), xxx xx uvedeno xxxx x xx xxxxxxxxxx určených pro xxxxxxxxx, 7 ředění, xxxxx xxxxxx xxxxxxx.
|
xx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx |
xx xxxxxxxxxxx pufru (4.2) |
Xxxxxxxxxxx XXX-XXX (μx/xx) |
|
0,9 |
0,1 |
0,54 |
|
0,8 |
0,2 |
0,48 |
|
0,7 |
0,3 |
0,42 |
|
0,6 |
0,4 |
0,36 |
|
0,4 |
0,6 |
0,24 |
|
0,3 |
0,7 |
0,18 |
|
0,2 |
0,8 |
0,12 |
Xxxxxx xxxxxxx (6.2) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2) x cílem získat xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,48 μx XXX-XXX nebo XX-XXX xx 1 xx. Xxx 1 xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x 0,5 xx (= 0,24 μx) xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx. Doplnit objem xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxx (4.2).
7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx (4.1) očkovací xxxxxx (3.2) s xxxxx xxxxxx na xxxxxxxxx xxx 590 xx 85 % xxxxxxxxx propustnost x 5 cm xxxxxx xxxx 92 % xxxxxxxxx propustnost xx 2 cm xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 100 % xxxxxxxxxxx nenaočkovaného xxxxxxxxx xxxxx (4.1).
7.3 Očkování
Dát xx xxxxx xxxxxxxx (7.1.1 xxxx 7.1.2) 9 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.2). Xxxxxxxx zkumavek musí xxx provedeno v xxxxxx, xxx nezbytně xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.4 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx, jejíž teplota xx mícháním udržuje xx 37 °C + 0,1 °X. Xxxxxxxxx doba se xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx 2x30 xx 3x). Poté xxxxxxxx xxxxx růstu xxxxxxx vstříknutím 1 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx (4.6) xx xxxxx xxxxxxxx.
7.5 Xxxxxx růstu
Změřit xxxxxxxxxxx xxx 590 xx, přičemž xxxxxxxx xx nastaví xx 100 % xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx). X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxxxx 2 xx x xxxxxx 5 xx kyvety.
8. Výpočet xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kalibrační křivku xx milimetrovém xxxxxx xxxxxxxxx fotometrických xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx antibiotika. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx antibiotika xx xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x jednoho xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
3. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx agaru -
1. Xxxx x rozsah
Tato xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx a premixech, x xx xxxxxxx x přítomnosti xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx je 0,5 xxx.
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx (hydroximethyl) xxxxxxxxxxxx. Po xxxxxxxxxx xx extrakt xxxxx x xxxx antibiotická xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx B. cereus. Xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx zón xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: X. cereus, X 250 XX [8] (xxxxxxxxxxx vůči xxxxxxxxxxxxx)
3.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx X. xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx odebraným x kultivačního xxxxx (4.1) x přidat 100 μx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx. Xxxxxxxxx xxxx xxx xxx asi 30 °X. Xxxxxxxxx kulturu x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx 4 xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxx xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx xxx 3 xx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (4.3). Naočkovat xxxx xxxxxxxx do Xxxxxxx xxxxx obsahující 300 xx xxxxxxxxxxxx média (4.1), xxxxx koncentrace xxxxx xx 3 xx 4 %. Xxxxxxxxx 3 xx 5 xxx při 28 xx 30 °X, poté xxxx xxxxx 15 xx xxxxxxxx (4.4) xxxx, xx xxxx mikroskopicky xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 5 měsíců.
Předběžnými xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.2) xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx umožní získat xxx xxxxx použité xxxxxxxxxxx oleandomycinu xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx inhibiční xxxx. Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 0,1 x 0,2 xx xx 1000 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 60 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x činidla
4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [9]
|
Glukosa |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový extrakt |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx xx |
1000 xx |
|
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xX na 6,5. |
4.2 Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx [10]
Médium (4.1) xxxxxxxx xx xX 8,8.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.
4.4 20 % (X/X) ethanol.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx
4.6 0,5 % (x/X) xxxxxx xxxx (hydroxymethyl) xxxxxxxxxxx x.x.
4.7 Extrakční xxxxxx
|
Xxxxx xxxxxxxx |
50 ml |
|
Destilovaná voda |
50 xx |
|
Xxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx x.x. |
0,5 x |
4.8 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 100 μx/xx.
Xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx (4.6) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 xxxxxxxxxx 0,1 μx xxxxxxxxxxxxx na 1 xx. Xxxx připravit xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,05 |
μx/xx |
|
X2 |
0,025 |
μx/xx |
|
X1 |
0,0125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx 2 xx 10 g 100 xx xxxxxxx (4.7) x xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx x xxxxxx roztokem (4.6) x xxxxx xxxxxx předpokládanou xxxxxxxxxxx 0,1 μg xxxxxxxxxxxxx xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxxxx (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.2) při 60 °X xxxxxxxx xxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx agaru se xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, S4, S2, X1) a xxxx xxxxxxxxxxx extraktu (X8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x extraktu.
Za xxxxx účelem xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 xx 13 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kultivačního xxxxx (7.1), které xx xx xxxxxx xxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxxxx xxx 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx se použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxx hliníkovým xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 200 mm x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi 0,10 a 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x každou xxxxxxxxxxx, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxxx 18 xxxxx xxx při 28 xx 30 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, přednostně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx logaritmu koncentrací xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x interferenci, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx:
(X1 + X2 + X4 + X8 - X1 - S2 - X4 - X8) · 0,602 / X4 + X8 + S4 + X8 - U1 - U2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx hodnoty.
4. XXXXXXXXX XXXXXXXX
- difúzí na xxxxx -
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x krmivech, xxxxxxxxxxxxx x premixech. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 2 xxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx pufračním xxxxxxxx x pH 8, xxxxxxxxxxx na 80 °X, a xxxx xx xxxxxxxxx methanolem. Xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxx antibiotická aktivita xx xxxxxxx měřením xxxxxx tylosinu xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx lutea. Xxxxxx xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxx ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxx xx šikmým xxxxxx xxxxxxxxx z kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx xx xX 7,0. Xxxxxxxxx přes noc xxx asi 35 °X. Skladovat xxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx.
3.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 až 3 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Naočkovat xxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxx xxxxx obsahující 250 xx kultivačního xxxxx (4.1), xxxxxxx na xX 7,0. Xxxxxxxxx 24 hodin xxx 35 °X, xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4). Xxxxxxxxxxxxx x zředit xxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx 75 % světelnou xxxxxxxxxxx xxx 650 xx.
Xxxxx xx tato xxxxxxxx xxxxxxxx v chladničce, xxxx xxxxxxxxxxx je xxxxx týden.
Předběžnými testy xx xxxxxxx x xxxxxxxx médiem xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx xxxxxxxx očkovací látky, xxxxx xxxxxx získat xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx ještě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx při 48 xx 50 °C.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx [11]
|
Xxxxxxx |
1 x |
|
Xxxxxxxxx xxxxxx |
10 g |
|
Masový xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 x |
|
Xxxx, xxxxx xxxxxxx |
10 xx 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx xxxx ad |
1000 xx |
Xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx upravit xX xx7,0 a xx xxxxxx xxxxxxxxx xx 8,0.
4.2 Fosfátový xxxx, xX 8
|
Dihydrogenfosforečnan xxxxxxxx XX2XX4 x.x. |
0,523 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
16,730 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx xx&xxxx; 1000 xx |
4.3 Fosfátový xxxx, xX 7
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 p.a. |
5,5 g |
|
Hydrogenfosforečnan xxxxxxxx K2HPO4 x.x. |
13,6 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
4.4 Xxxxxxxx fyziologický xxxxxx.
4.5 Xxxxx xxxxxxxx.
4.6 40 % (X/X) xxxxxxxx.
4.7 Xxxx fosfátového xxxxx (4.2)/čistý xxxxxxxx: 60/40 objemově.
4.8 Standardní xxxxx: xxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Standardní xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8) 3 xxxxxx xxx 60 °C xx vakuové sušárně (5 mm xxxxx). Xxxxxxx 10 xx 50 xx xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x 5 xx xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pH 7 (4.3) x xxxxx xxxxxx koncentraci základního xxxxxxxx 1000 μg/ml.
Na xxxxxxx tohoto xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx rozředěním xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx S8 xxxxxxxxxx 2 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 1 ml.
Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx směsi (4.7) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
1 |
μx/xx |
|
X2 |
0,5 |
μx/xx |
|
X1 |
0,25 |
μx/xx |
6. Extrakce
Pro xxxxxxxxxxx použít 10 x zkušebního vzorku; xxx xxxxxxx x xxxxxx 20 x xxxxxxxxxx. Xxxxxx 60 xx xxxxxxxxxxx pufru, xX 8 (4.2), xxxxxxxxxxxx xx 80 °X, x xxxxxxxxxxxxx 2 xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxx, Xxxxx-xxxxxx xxx.).
Xxxxxx xxxx 10 xxxxx, xxxxxx 40 ml xxxxxxxxx (4.5) x xxxxxxxxxxxxx 5 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx alikvotní xxxx xxxxx (4.7) s xxxxx získat předpokládanou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 2 μx/xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx X4, X2 a X1 xxxxxxxxx ředěním (1 + 1) xx použití xxxxx (4.7).
Xxx xxxxxx xxxxx xxx 10 ppm xxxxxxx xxxxxxx do xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx 35 °X x rozpustit xxxxxxxx ve 40 % methanolu (4.6).
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Očkování xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxxxxx na xX 8 xxx 48 xx 50 °X suspenzí xxxxxxxx (3.2).
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xx použití čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (U8, X4,X2, X1). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního xxxxxxx x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 mm. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), které xx má použít xxx xxxxxxx stejnoměrné xxxxxx x xxxxxxxx 2 xx. Upřednostňuje xx použití xxxxx xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx skleněných xxxxx x dokonale xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx x průměru 200 xx x x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx odměřená množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, v xxxxxxxxxx xx průměru xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nejméně xxxxxxxxx x každou koncentrací, xxx každé xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyhodnocení 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Inkubace
Inkubovat xxxxx xxxx noci xxx 35 xx 37 °X.
8. Xxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxx inhibičních xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxx xx semilogaritmický xxxxx xxxxxxxxx logaritmu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x extraktu. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx křivky budou xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx relativní aktivity xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx rovnice:
(U1 + X2 + X4 + X8 - X1 - X2 - S4 -X8) · 0,602 / X4 + X8 + X4 + X8 - U1 - X2 - X1 - S2
Skutečná xxxxxxxx = předpokládaná xxxxxxxx x relativní xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx provedených u xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxx xxxxxxx.
5. STANOVENÍ XXXXXXXXXXXXXX
- xxxxxx xx xxxxx -
1. Účel x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx virginiamycin x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xx 2 ppm.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx "Tween 80". Xx xxxxxxxxxx xxxx filtraci se xxxxxxx zředí a xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx. Difúze xx projeví xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxx mikroorganismu. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxx lutea ATCC x. 9341
3.1 Udržování xxxxxxxxxxxx kmene
Naočkovat Xxxxxxx xxxxx xx zkumavky xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Inkubovat xxxx xxx xxx xxx 35 °C. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x přeočkovat xxxxxxx 14 dní xx xxxxx agar.
3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (3.1) xx xxxxxxx 2 xx 3 ml xxxxxxxxxxxxxx solného roztoku (4.3). Xxxxxxxxx tuto xxxxxxxx xx Rouxovy xxxxx obsahující 250 xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.1). Xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx 35 °X, poté xxxx xxxxxxxx za xxxxxx 25 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxx s cílem xxxxxx asi 75 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 650 nm. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx, její trvanlivost xx jeden xxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx (4.1) xxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, které xxxxxx xxxxxx pro různé xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx možné, xxx xxxxx zřetelné xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx kultivačního xxxxx se provádí xxx 48 xx 50 °X.
4. Xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx [12]
|
Glukosa |
1 g |
|
Tryptický xxxxxx |
10 x |
|
Xxxxxx xxxxxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxxxxx extrakt |
3 g |
|
Agar, xxxxx xxxxxxx |
10 až 20 x |
|
Xxxxxxxxxxx voda xx |
1000 xx |
Xxxx použitím xxxxxxx pH na 6,5.
4.2 Xxxxxxxxx xxxx, xX 6
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx draselný XX2XX4 x.x. |
8,0 x |
|
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx X2XXX4 x.x. |
2,0 x |
Xxxxxxxxxxx xxxx ad 1000 ml |
4.3 Xxxxxxxx fyziologický roztok.
4.4 Xxxxx xxxxxxxx.
4.5 Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (4.2)/xxxxx xxxxxxxx: 80/20 xxxxxxxx.
4.6 0,5 % methanolového xxxxxxx "Xxxxx 80" (x/X).
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxx o xxxxx xxxxxxxx.
5. Xxxxxxxxxx roztoky
Připravit xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.7) xxxxxxxxxx 800 μg virginiamycinu xx 1 ml. Xx základě xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx směsí (4.5) xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok X8 obsahující 1 μx xxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx ředěním (1+) xx použití xxxxx (4.5) xxxx xxxxxxxxxxx:
|
X4 |
0,5 |
μx/xx |
|
X2 |
0,25 |
μx/xx |
|
X1 |
0,125 |
μx/xx |
6. Xxxxxxxx
6.1 Výrobky x xxxxxx virginiamycinu xxxxxx nebo xxxxxx xxx 50 xxx
Xxxxxxx 10 xx 20 x xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx 100 xx xxxxxxx (4.6) a xxxxxxxxxxx 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx, odebrat 20 xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx x rotačním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx reziduum xx 20 xx xxxx xxxx směsi (4.5) s cílem xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= U8). Poté xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx U4, X2 a X1 xxxxxxxxx xxxxxxx (1 + 1) xx xxxxxxx xxxxx (4.5)
6.2 Xxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx vyšším xxx 50 ppm
Odebrat 1 xx 10 x xxxxxxxxxx vzorku, xxxxxx 100 xx roztoku (4.6) a protřepávat 30 xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxxx (4.5) x xxxxx xxxxxx předpokládanou koncentraci 1 μg virginiamycinu xx 1 xx (= X8). Xxxx xxxxxxxxx koncentrace U4, X2 x U1, xxx xx uvedeno x xxxx 6.1.
7. Xxxxxx xxxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxx bazální xxxxxx xxx stanovení (4.1) xxx 48 xx 50 °X xxxxxxxx xxxxxxxx (3.2).
7.2 Xxxxxxxx misek
Difúze xx xxxxx xx provádí x xxxxxxx za xxxxxxx čtyř xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (S8, X4, S2, X1) x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (X8, X4, X2, X1).Xxxxx miska xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx standardního roztoku x xxxxxxxx.
Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 8 xxx x xxxxxxx 10 až 13 xx. Vypočítat xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (7.1), xxxxx xx xx použít pro xxxxxxx stejnoměrné vrstvy x xxxxxxxx asi 2 xx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx misek xxxxxxxxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx desek x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx plastovým xxxxxxxx o průmětu 200 xx x xxxxx 20 xx.
Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 0,10 x 0,15 xx, x závislosti xx xxxxxxx xxx.
X xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx stanovení zahrnovalo xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx xxx.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xxxx noc při 35 xx 37 °X.
8. Vyhodnocení
Změřit xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx měření xx semilogaritmický papír xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx inhibičních xxx. Načrtnout xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx aktivity xx xxxxxxxx pomocí xxxx xxxxxxx:
(X1 + U2 + U4 + X8 -X1 - X2 - X4 - X8) · 0,602 / U4 + U8 + X4 + X8 - X1 - X2 - S1 - X2
Xxxxxxxx xxxxxxxx = xxxxxxxxxxxxx aktivita x xxxxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % relativní xxxxxxx.
[1] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[2] Může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kultivační xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné xxxxxxxx.
[3] Xxxx xxxxx slouží x označení xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxx).
[6] Tento xxxx izolovaný x Xxxxx xxxxx XXXX xxxxxxxx rychlejší xxxx xxx X. xxxxxx XXXX 6538 P.
[7] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx komerční kultivační xxxxxx xxxxxxxxx složení x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[8] Xxxx xxxxxxxxx x Kielu xxxxx XXXX.
[9] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx podobného xxxxxxx a dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[10] Může xxx xxxxxxx jakékoli xxxxxxxx xxxxxxxxxx médium xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[11] Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
[12] Xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx výsledky.