Xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx úřední xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Rady xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], naposledy pozměněnou xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx požadavků xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx předpisy x xxxxxxxxxx se jakosti x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze dne 5. prosince 1972 [6], 74/203/XXX ze xxx 25. xxxxxx 1974 [7] a 75/84/XXX xx xxx 20. prosince 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx analytických metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx na xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem x xxxx, že opatření xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Členské státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxx x xxxxx aflatoxinu X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx uvedená x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části týkající xx přípravy xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro metody xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Komisi.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. března 1976.
Za Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ AFLATOXINU B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x těchto xxxxxxxx: podzemnice olejná, xxxxx, xxxxx xxxxxx, xxxx, sezam, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx hranice pro xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxx alikvotní xxxx se xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu nebo xx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Alikvotní xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Množství aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx musí xxx xxxxxxxxx stanoveným xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není stanoveno xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, neobsahující xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Síran sodný, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx ekvivalent, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok pro xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx B1 a X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx být xxxxxxxx xxx, xxx xx získala xxxxxx xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx č. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, xxxxx 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx o xxxxxx 500 xx a xxxxxxx xxxx.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 mm, xx připraví takto (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Erlenmeyerovy baňky, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx takovým způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx připravené x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx podobné xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx uvedeného xxxxxxx.
4.9 UV xxxxx xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx 10 xx xx lampy xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 UV xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxx x velikosti 1 xx (x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky x xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx xxxx x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 xx.
5.3 Přečištění xx xxxxxx
Xx spodní xxxxx chromatografické xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x xxxx xxxx xx skelné vaty (3.9), xxxxxxx trubici xx do xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Ověřit, xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného xx xxxxx xxxxx, x xxxx přidat po xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, aby xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxxxx 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu sodného.
Smíchat 50 ml extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx až x hornímu xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx na xx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 xx 12 ml xx xxxxxx x xxx xxxxxx nevyschla. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx kapalinu. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx sucha xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11) v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx zkumavky o xxxxxx 10 ml (4.10). Xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 cm od xxxxxx hrany x x odstupech xx 2 cm tyto xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x k tomu 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx tmě xx použití jednoho x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Xxxxx rozpouštědla xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.1) na xxxxx x xxxx xx ověřit, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 při xxxxxxxx zcela xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxx x poté xxxxxx desku XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 cm od xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Kvantitativní xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx skvrn standardního xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx interpoluje. Xxxxxxxxxxxx získaná xxxxxxxxx xxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x nesmí být xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita xxxxxxxxxxxx 10 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) a xxxx xxxxx podrobit xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Fluorimetrické xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx takto:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný podle xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx sírovou (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx z modré xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx musí xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B a X: 25 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx minut xx tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx xxxx X x X (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Nechat xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, a xxxx vysušit xxxxx xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout pět xxxxx ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx aflatoxinu X1 pocházející ze xxxxxxxxxxxx roztoku naneseného x bodu C (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 (xxxxx xxxxxxxxxx x kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx B (xxxxxxx xx směru XX).
x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx xxxxxxx jednak x migrační vzdáleností xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X xx xxxxx I (stejná xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx vzorku naneseného x xxxx C) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx příslušné objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 ml, xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x gramech, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx použitý xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx základě fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu X1 x mikrogramech xx 1 xx xxxxxx (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx vzorce:
S·V / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx ředění;
W = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, s xxxxxxx na objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku nebo xxx 348 nm x xxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech xx 1 ml xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · A · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1 000 / 19&xxxx;800 pro xxxxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx příslušná ředění x cílem získat xxxxxxxxxx pracovní roztok, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 je xxx 0,1 μx/xx. Pokud xx roztok skladuje x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, je xxxxx po xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by xxxx xxx viditelná xxxxx xxxxx skvrna x x xxxxx původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx znatelná žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx provedl xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 do 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx hodnoty xxx obsahy xx 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x residuum xx rozpustí xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx směsi xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Silikagel pro xxxxxxxxx chromatografii, velikost xxxxxx 0,05 až 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 N.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx kyselinou.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX nebo xxxxxxxxxx, xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx roztoky.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Chloroform (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx atmosférou.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx xx uvedeno x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 a3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Nanesení xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx každé xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx kapilárních pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- v xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x bodu X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x tloušťce 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nechat xxxxxxxx 15 minut ve xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx vyvíjecího rozpouštědla (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující linii. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x při xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Určit xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx x svírají xxxxx úhel x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxx xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx poloha xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx xxx v xxxx Q xxxxxxxxx xx průsečíku dvou xxxxxxxxxx přímek svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x protínajících xxxx X x X. Množství aflatoxinu X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx na xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx na xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného extraktu xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxxxx xxxx 5.3, a k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx x xx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx xxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx xxxxx xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx roztok 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační xxxxxx délce 365 xx a emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stanoví porovnáním xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X standardního xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 xxxxxx A.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx bod 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX SE XXXXX X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx neodtučněného vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost xxxxxxxx, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx na:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
