Sedmá směrnice Xxxxxx
xx xxx 1. března 1976,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx cílem xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx krmiv, xx xxxxxxxxx podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x tomu, xx směrnice Komise 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/EHS xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. prosince 1972 [6], 74/203/EHS xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] již xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx metod Xxxxxxxxxxxx; že x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx provedených xxxxx xx xxxx nutné xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx analýzy xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, pokud xxx x xxxxx aflatoxinu X1, xx provádějí xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Neprodleně x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Bruselu xxx 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. xxxx. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. věst. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX JEDNOROZMĚRNÉ XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 v xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice xxxxxx, xxxxx, lněná xxxxxx, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx ztěžují xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx analýzu xxxxx xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx filtruje x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx odebere x přečistí xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xx směsi xxxxxxx x acetonitrilu. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x chromatogramu pod XX světlem xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 extrahovaného x xxxxx musí být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, všechna xxxxxxx xxxx xxx čistoty "x. x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, nebo skelná xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. dusík.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (hyflosupercel), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 na 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx roztok xxx xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace jsou xxxxxxxxxx. Musí xxx xxxxxxxx tak, aby xx xxxxxxx stejná xxxxxxxxx fluorescence x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx atmosférou;
3.18.2 Diethylether (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), chromatografický xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou atmosférou.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Drtič – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Xxxüxx č. 588 xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 cm.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx průměr 22 xx, xxxxx 300 xx) s teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x xxxxxx x objemu 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx chromatografii, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx desek): xxx 30 g xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, zazátkovat x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x poté xxxxxxx v desikátoru xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx aktivovat xxxxx xxxxx hodinu x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx vyhovující, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX xxxxx xxxxxxxxxxx (360 mm). Xxxxxxxxx xxxxxx musí xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxx 10 cm xx lampy ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (volitelný).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (x souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 ml xxx 50 x xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml xxxx x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx 30 minut třepačkou (4.2) x přefiltrovat xxxx skládaný xxxxxxxxx xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 ml xxxxxxxx, poté xxxxxx 50 ml.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (4.4) vložit xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), naplnit trubici xx xx xxxx xxxxxx chloroformem (3.2), x poté přidat 5 g xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného xx xxxxx xxxxx, x xxxx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx přidání xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Nechat 15 xxxxx xxxx, a xxxx opatrně xxxxxx 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx až x xxxxxxx povrchu xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx x-xxxxxx (3.3) x směs xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx kolony. Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 až 12 xx za xxxxxx x xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Poté xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) a xxxxxx celý xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem inertního xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.5) xxx xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat roztok xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), a xxxx doplnit xxxxx xx 2 xx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6).
5.4 Tenkovrstvá chromatografie
Na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) xxxxxx 2 xx xx xxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxx xx 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x tomu 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μl xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx musí xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx x musí xx xxxxxx, zda xxxx aflatoxiny X1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx odděleny.
Nechat xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx vzdálenosti 10 xx od xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx B1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx provádí xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx skvrna. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μl extraktu xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu a xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx B1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx excitační vlnové xxxxx 365 nm x xxxxxx xxxxx 443 xx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx skvrn aflatoxinu X1 xx xxxx xxx XX xxxxxxx xxxxxx x modré xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx B2a)
Poznámky:
Níže xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx musí provádět xxxxxx xxxxx schématu xxxxxxxx xx xxxxxxx 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx roztoků
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx přímky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx mikrostříkaček xxxx roztoky:
- x xxxx X: objem xxxxxxxxxxx extraktu vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx B1,
- v xxxxxx B x X: 25 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx.
Xxxxxxx desku x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě a xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx stříkat kyselinu xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 xx, který xxxxxxx xxxx X x B (xx xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx zbytek xxxxx je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx vysušit desku xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva o xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx ve xxxxx II, dokud xxxx rozpouštědla nedosáhne x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx oschnout xxx xxxxx ve tmě x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod XX xxxxxxx (4.9) a xxxxxx tyto znaky:
a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x bodu C (xxxxxxx xx směru X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 (který xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx naneseného x xxxx X (xxxxxxx ve směru XX).
x) Objevení xx xxxxxxxxx skvrn, jaké xxxx popsány x xxxx b), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxx X. Xxxxxx těchto xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx B1 xx xxxx A xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx X) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx II (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg vzorku (xxx) se vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · V / X · X
xxx:
X x X xxxx příslušné objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) a extraktu, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x mikrogramech xx 1 xx, xxxxxxxxxx B1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x mikrogramech na 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx B1, x xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx X) xxxxxxxx z xxxxxx;
X = xxxxxxx objem xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x gramech, x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx použitý pro xxxxxxxxxx xx koloně.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx xx 8 xx 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 xx xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x xxxxxxx roztoku xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx tohoto xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx roztok; 312 · X · 1 000 / 20&xxxx;600
312 · X · 1&xxxx;000 / 19&xxxx;800 pro xxxxxx xx směsi xxxxxxx x acetonitrilu..
Ve tmě xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °X, xx xxxxx po dobu xxxx týdnů.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 až 10 μl aflatoxinu X1 na 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4. Xxx XX xxxxxx by měla xxx viditelná xxxxx xxxxx xxxxxx a x xxxxx původního xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, nesmí xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahy xx 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. METODA XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx xx oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx metoda xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx citrusovou pulpu.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x přečistí xxxxxxxxx chromatografií na xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx část tohoto xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx stanoví x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx flourometricky srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxxxxxxx postupem.
3. Činidla
Poznámka:
Pokud xxxx xxxxxxxxx jinak, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx peroxidy.
3.6 Xxxx xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 mm.
3.9 Xxxxxxxxx – xxxx, xxxxxx xxxxxxxxx chloroformem, xxxx xxxxxx vata.
3.10 Síran xxxxx, bezvodý, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx plyn, xxxx. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxx xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx směsi benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a kontrolovaný xxx xx uvedeno x bodu 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Dvourozměrná xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxx xx desku (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx x vymezení xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx pipet xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx roztoky:
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx získaného podle xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx standardního roztoku (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx mít xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx vyvíjí xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx X, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vymezující xxxxx. Xxxxxxx desku x chromatografického xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx 15 xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx o xxxxxxxx 1 xx x chromatografickém xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx tmě ve xxxxx II, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx desku z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
5.4.3 Interpretace xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX světlem, xxxxxxx xx deska xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx od xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, X, X x E. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx přímky, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx X těchto přímek xxxxxx xxxxx, kde xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx poloha xxxxxx xxxxxxxxxx B1 však xxxx xxx x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X x X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 v extraktu xxxxxx xx stanoví, xxx xx uvedeno x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak je xxxxxxx xx xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx xx xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx podle xxxx 5.3, x k xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx je xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 x extraktu x ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx než fluorescence xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx první xxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx X, X a X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního roztoku, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x poté znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx a emisní xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx skvrnách xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxx C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxx xxx 5.6 xxxxxx X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz bod 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Reprodukovatelnost
Viz "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
C. XXXXXXXX XXXXXXXX XX METOD X X X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx více xxx 5 % xxxx xx musí xx přípravě xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (b. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx případech xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx stejného vzorku, xx odhaduje xx:
± 50 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x 10 μx/xx xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx střední xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx k xxxxxxx
