Sedmá směrnice Komise
ze xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx na Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx směrnici Rady xx dne 20. xxxxxxxx 1970 x xxxxxxxx metod odběru xxxxxx x analytických xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx [2], a xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx právními x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x složení xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. xxxxxxxx 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. xxxxxxxxx 1971 [4], 72/199/XXX xx xxx 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. xxxxxx 1974 [7] x 75/84/XXX ze dne 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx prací xx však xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx metod;
vzhledem k xxxx, že xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx krmiva,
PŘIJALA TUTO XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud jde x xxxxx xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení uvedená x části 1 (xxxx) xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx Komise 71/250/XXX xx xxx 15. xxxxxxxx 1971, x xxxxxxxx části týkající xx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, xx xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx nejpozději xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx informují Komisi.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Xxxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Xx. věst. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Xx. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Úř. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
PŘÍLOHA
STANOVENÍ XXXXXXXXXX X1
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 v těchto xxxxxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, sezam, babassu xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx a škrob. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 xxx).
Xxxxx xxxx xxxxxxxx rušivé xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx analýzu podle xxxxxx X (xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx se xxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx na silikagelu. Xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx stanoveném xxxxxx chloroformu xxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx roztoku xx podrobí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x chromatogramu pod XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxxxxxx xx známými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 extrahovaného z xxxxx xxxx být xxxxxxxxx stanoveným postupem.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. x".
3.1 Aceton.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 xx 1,0 xxxxxxxxx 96 % (V/V) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs chloroformu (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx xxx kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, velikost částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, xxxxxx odtučněná xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx sírová.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx, xxx je xxxxxxx x xxxx 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx obsahující xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx B1 x X2 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx xxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxx xxx, aby xx získala xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxx (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/xxxx: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Xxxxxxxxxx (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x nasycenou xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Třepačka xxxx xxxxxxxxxx míchačka.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxxx x Xxxüxx x. 588 xxxx ekvivalentní, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx chromatografická xxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx 22 xx, délka 300 xx) x teflonovým xxxxxxxx x 250 μx xxxxxxxxxx.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx o objemu 500 xx x xxxxxxx dnem.
4.6 Erlenmeyerovy xxxxx o objemu 500 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Xxxxxxxx xxx tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
4.8 Xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx xxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxx xxxxx): xxx 30 g xxxxxxxxxx G-HR (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 xx xxxx, zazátkovat a xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vrstva o xxxxxxxx 0,25 xx. Xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx aktivovat xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx desky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx záření musí xxx dostatečná, xxx xxxxxx 1 ng xxxxxxxxxx B1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla na xxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx xxxxx xxxxx rozeznatelná.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx zátkami.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx (xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 1)
Rozmělnit xxxxxx takovým způsobem, xxx xxxx prošel xxxxx s xxx x xxxxxxxxx 1 xx (v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxx 500 xx xxx 50 x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 xx vody x 250 ml xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx promíchávat 30 xxxxx xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx skládaný filtrační xxxxx (4.3). Xxxxxxxxx xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, poté sebrat 50 ml.
5.3 Přečištění xx koloně
Do xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx xxxxxxx xx do xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x poté xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, xx xxxxx xxxxxx vrstvy xxxxxx xxxxxxx xx xxxxx rovný, x xxxx přidat po xxxxxx dávkách 10 x silikagelu (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx stát, x xxxx xxxxxxx přidat 15 x síranu xxxxxxx (3.10). Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx extraktu xxxxxxxxx xxxxx bodu (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Přidat 100 xx xxxxxxxxxxxxx (3.5) x xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx x hornímu xxxxxxx xxxxxx síranu sodného. Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx to, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx 8 xx 12 ml za xxxxxx a xxx xxxxxx nevyschla. Odstranit xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx xxx 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) do xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 ml (4.10). Koncentrovat roztok xxx xxxxxxx inertního xxxxx (3.11), a xxxx xxxxxxx xxxxx xx 2 ml xx xxxxxxx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6).
5.4 Xxxxxxxxxxx chromatografie
Na xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx od xxxxxx xxxxx x x odstupech xx 2 xx xxxx xxxxxx standardních xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx extraktu xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Chromatogram xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx jednoho x vyvíjecích xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx 25 μx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxx a musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx B1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx odpařit xx xxx x poté xxxxxx xxxxx XX xxxxxxx ze xxxxxxxxxxx 10 cm xx xxxxx (4.9). Xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx fluorescence 10 ml extraktu x nesmí xxx xxxxxxxxx xxxx než xxxxx skvrna. Pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 10 μx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μl xxxxxxxxxxxx roztoku, xxxxxxxx xxxxxxx 10 krát xxxx 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx znovu podrobit xxxxxxxxxxx chromatografii.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní délce 443 nm. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 v xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxxxxxxxxx získaný xxxxx xxxx 5.4 nastříkat xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx XX xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx žlutou.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx musí xxxxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 cm xx každé xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx čel rozpouštědel. Xxxxxx xx desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu vzorku xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3, xxxxx obsahuje xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- x xxxxxx B x X: 25 μl xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx se vyvíjí xx použití xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x tloušťce 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve tmě xx xxxxx I, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxx desku x xxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx o xxxxx 2,5 cm, xxxxx xxxxxxx xxxx A x X (xx xxxxxxx 3 vyznačeno xxxxxxxxx), dokud xxxxx xxxxxxxxx, přičemž xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx xxx, x xxxx xxxxxxx desku xxxxxxx vzduchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx nedosáhne x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx oschnout pět xxxxx ve xxx x při pokojové xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pod UV xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx ze xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx xx xxxxx X).
x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx B1 – xxxxxxxxxxx, přičemž xxx xxxxxx pocházejí ze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu X (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx skvrn, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx b), pocházejících xx vzorku extraktu xxxxxxxxxx x xxxx X. Poloha xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx vzdáleností xxxxxxxxxx X1 xx xxxx A xx xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx jako u xxxxxxxxxxxx xxxxxx naneseného x xxxx C) x dále xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx xx xxxx A xx xxxxx XX (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X). Xxxxxxxxxxxxx intenzity xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx z xxxxxxxx x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X xx xx xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
6.1 Xx xxxxxxx vizuálních xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxxxxxx na 1 kg vzorku (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / W · X
xxx:
X a X xxxx xxxxxxxxx objemy xxxxxxxxxxxx xxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx roztoku (3.16);
V = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního xxxxxx x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx koloně.
6.2 Xx základě xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxx (xxx) se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = objem xxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx desku (10 μx xxxx 20 μx);
X = množství xxxxxxxxxx X1, x xxxxxxxxxxx, xx skvrně xxxxxxxx (poměrně x xxxxxxx xxxxxxx Y) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x ohledem xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx, x xxxxxxx xx objem xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx.
7. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxx xxxxxxxxxxx xx od 8 do 10 μx/xx. Xxxxxxxx absorpční xxxxxxxx xxxx 330 x 370 nm xx použití xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx hustotu (X) xxx 363 xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 xx x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx roztok xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx ředění x cílem získat xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx, xxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1 xx xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx 4 °C, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μl xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx (7.1). Vyvinout xxxxxxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x bodu 5.4. Při UV xxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx x x místě xxxxxxxxx xxxxxxxx xx neměla xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx u xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx 10 xx 20 μx/xx,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx od 20 do 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx výsledku pro xxxxxx vyšší než 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
B. XXXXXX XXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 x krmivech, které xxxxxxxxx do oblasti xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx hranice xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 xxx). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx a jeho xxxxxxxxx část xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografii. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1. Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xxxxxxxxxxxxx z krmiv xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx xxxxxxx "p.a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) ethanolu.
3.3 N–hexan.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, bezvodý, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs xxxxxxx x acetonitrilu: 98/2 (X/X).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx chromatografii, xxxxxxxx xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Síran xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Xxxxxxx xxxx, xxxx. xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 N.
3.13 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) promytá xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx G–HR nebo xxxxxxxxxx, pro tenkovrstvou xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (V/V), chromatografický xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Standardní xxxxxx xxxxxxxxxx asi 0,1 μg aflatoxinu X1 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), xxxxxxxxxx x kontrolovaný xxx je xxxxxxx x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 metody X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx body 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Extrakce |
|
|
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx chromatografie
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx rozpouštědel. Xxxxxx na desku xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- v xxxx A: 20 μx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx B: 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 10 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 20 μx standardního xxxxxxx (3.16),
- x xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx slabým xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx (3.11). Získané xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxx 5 xx.
5.4.2 Vyvíjení (xxxxx xxxxxxxx na obrázku 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nasycenou xxxxxxxxxx] ve xxx xx xxxxx I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx desku x chromatografického tanku x nechat xxxxxxxx 15 minut xx xxx a při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx ve xxx a xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx fluoreskujících xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxxxxxx roztoku X, X, D x X. Načrtnout xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx procházejí xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx úhel x xxxxxxxxxx směry. Průsečík X těchto xxxxxx xxxxxx xxxxx, kde xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x extraktu vzorku xxxxxxxxxx v xxxx X (xxxxxxx 1). Xxxxxxxx poloha skvrny xxxxxxxxxx X1 xxxx xxxx být x xxxx X xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx přímek svírajících xxxx xxx 100 xxxxxx x protínajících xxxx X a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x bodu 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1, x xxxxxx xx xxx A (xxx xxxxxxx 1) 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, který byl xxxxxx podle xxxx 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxx jak xx xxxxxxx x xxxx 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxx:
- xx xxxxxx aflatoxinu X1 z extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxx skvrn xx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx xxxxxxxx x xxxx X xx xxxxx desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vizuálně nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
5.5.1 Vizuální měření
Množství xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx skvrn C, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx extraktu xxxxxxxx xxx intenzita 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx xxxx 100 xxxx chloroformem (3.2) xxxx směsí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxx fluorimetrem (4.12) při excitační xxxxxx xxxxx 365 xx a emisní xxxxxx xxxxx 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz xxx 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx výsledků
Viz xxx 6 xxxxxx A.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx C xxx 2.
X. XXXXXXXX XXXXXXXX SE XXXXX X X B
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxx 5 % xxxx xx xxxx xx xxxxxxxx podle xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 xx 60 °X).
X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. rozdíl xxxx xxxxxxxx získanými xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxx xx stejného vzorku, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μg/kg xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % střední xxxxxxx pro střední xxxxxxx vyšší xxx 50 μx/xx.
Xxxxxxx x xxxxxxx
