Sedmá xxxxxxxx Xxxxxx
xx xxx 1. xxxxxx 1976,
xxxxxx xx stanoví xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(76/372/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx xx xxx 20. xxxxxxxx 1970 o xxxxxxxx xxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o přistoupení [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxx kontroly xxxxx, xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx dodržování požadavků xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jakosti x xxxxxxx xxxxx, xx provádějí podle xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX ze xxx 15. července 1971 [3], 71/393/XXX xx xxx 18. listopadu 1971 [4], 72/199/EHS xx dne 27. xxxxx 1972 [5], 73/46/XXX ze xxx 5. xxxxxxxx 1972 [6], 74/203/XXX xx xxx 25. března 1974 [7] x 75/84/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1974 [8] xxx stanovily xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx s xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxxxx xxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx Stálého xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, že xxxxxxx xxx xxxxxx kontroly xxxxx, pokud jde x obsah xxxxxxxxxx X1, xx xxxxxxxxx xxxxx metod xxxxxxxxx x xxxxxxx této xxxxxxxx.
Xxxxxx ustanovení uvedená x části 1 (xxxx) xxxxxxx první xxxxxxxx Xxxxxx 71/250/XXX xx dne 15. xxxxxxxx 1971, s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x analýze, se xxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Článek 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné pro xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 1976. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 1. xxxxxx 1976.
Xx Xxxxxx
X. X. Lardinois
člen Xxxxxx
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1971, x. 2.
[2] Xx. věst. X 73, 27.3.1971, x. 14.
[3] Úř. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[4] Xx. věst. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[5] Úř. xxxx. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[6] Xx. xxxx. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[7] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[8] Úř. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX B1
A. XXXXXX XXXXXXXXXXXXX TENKOVRSTVÉ XXXXXXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx
Xxxx metoda xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 v xxxxxx xxxxxxxx: podzemnice xxxxxx, xxxxx, xxxxx semena, xxxx, sezam, xxxxxxx xxxxx x kukuřičné xxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxx mouka, xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx 0,01 xx/xx (10 ppb).
Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx ztěžují xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx X (dvourozměrná xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx).
2. Princip
Vzorek xx xxxxxxxxx chloroformem. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx silikagelu. Xxxxx xx odpaří x reziduum se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx tohoto xxxxxxx xx xxxxxxx tenkovrstvé xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx XX světlem xxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se známými xxxxxxxxxx standardu xxxxxxxxxx X1. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 extrahovaného z xxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx není xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx "x. a".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 0,5 xx 1,0 procentem 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 N–hexan.
3.4 Methanol.
3.5 Xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Směs benzenu x xxxxxxxxxxxx: 98/2 (X/X).
3.7 Směs chloroformu (3.2) x methanolu (3.4): 97/3 (V/V).
3.8 Xxxxxxxxx pro kolonovou xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx částic 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Absorbent – xxxx, předem odtučněná xxxxxxxxxxxx, nebo xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, xxxxxxxxxxx.
3.11 Inertní xxxx, xxxx. dusík.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková 1 X.
3.13 50 % (X/X) xxxxxxxx xxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx), promytá xxxxxxxxx.
3.15 Xxxxxxxxx G–HR xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx 0,1 μx xxxxxxxxxx X1 xx 1 xx chloroformu (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx, xxx je uvedeno x bodu 7.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx jakosti xxxxxxxxxx xxx 0,1 μg xxxxxxxxxx X1 x X2 na 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6). Xxxx koncentrace jsou xxxxxxxxxx. Musí být xxxxxxxx xxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx.
3.18 Vyvíjecí xxxxxxxxxxxx:
3.18.1 Chloroform (3.2)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.2 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda: 96/3/1 (X/X), chromatografický xxxx x nenasycenou xxxxxxxxxx;
3.18.3 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/methanol (3.4)/xxxx: 94/4.5/1.5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.4 Chloroform (3.2)/methanol (3.4): 94/6 (V/V), xxxxxxxxxxxxxxxx tank s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx;
3.18.5 Xxxxxxxxxx (3.2)/xxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx tank x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
4. Xxxxxxxxx
4.1 Xxxxx – xxxxx.
4.2 Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, Schleicher x Schüll č. 588 nebo xxxxxxxxxxxx, xxxxxx 24 xx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (xxxxxxx průměr 22 xx, xxxxx 300 xx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxx a 250 μx zásobníkem.
4.5 Xxxxxxx xxxxxxx odparka, x xxxxxx o xxxxxx 500 ml x xxxxxxx dnem.
4.6 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.7 Zařízení xxx xxxxxxxxxxxx chromatografii.
4.8 Xxxxxxxx desky xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 200 x 200 xx, xx připraví xxxxx (xxxxxxx množství stačí xxx xxx xxxxx): xxx 30 x xxxxxxxxxx X-XX (3.15) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx 60 ml xxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxxxxxx suspenzi xx xxxxx xxxxxxx způsobem, xxx xx vytvořila xxxxxxxxxxx vrstva x xxxxxxxx 0,25 mm. Xxxxxx uschnout xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Před xxxxxxxx aktivovat xxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxx 110 °X.
Xxxxx xxxxxxxxxx k xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
4.9 XX lampa xxxxxxxxxxx (360 xx). Xxxxxxxxx záření musí xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx X1 xx xxxxx pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx byla xx xxxxxxxxxx 10 xx xx lampy ještě xxxxx xxxxxxxxxxxx.
4.10 Xxxxxxx xxxxxxxx x objemu 10 xx, s xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
4.11 XX xxxxxxxxxxxxxxx.
4.12 Fluorimetr (xxxxxxxxx).
5. Xxxxxx
5.1 Příprava xxxxxx (xxx "Poznámky", xxxx X xxx 1)
Xxxxxxxxx xxxxxx takovým xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxx s xxx x velikosti 1 xx (v souladu x xxxxxxxxxxx XXX X 565).
5.2 Xxxxxxxx
Xx Xxxxxxxxxxxxx baňky o xxxxxx 500 ml xxx 50 g xxxxxxxxxxx x homogenizovaného xxxxxx. Xxxxxx 25 x xxxxxxxxx (3.14), 25 ml vody x 250 xx xxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 30 minut xxxxxxxxx (4.2) x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx filtrační xxxxx (4.3). Odstranit xxxxxxx 10 xx xxxxxxxx, xxxx sebrat 50 xx.
5.3 Xxxxxxxxxx xx xxxxxx
Xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx trubice (4.4) xxxxxx xxxxx x xxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (3.9), xxxxxxx trubici xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2), x xxxx xxxxxx 5 x xxxxxx xxxxxxx (3.10).
Xxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx sodného xx xxxxx xxxxx, a xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 10 x xxxxxxxxxx (3.8). Xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zamíchat, xxx xx odstranily xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 15 xxxxx xxxx, a xxxx opatrně xxxxxx 15 x xxxxxx xxxxxxx (3.10). Nechat xxxxxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxx 50 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (5.2) xx 100 xx n-hexanu (3.3) x xxxx kvantitativně xxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx klesnout xx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx 100 xx diethyletheru (3.5) x znovu xxxxxx xxxxxxxx klesnou až x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx tohoto xxxxxxx xxxx na to, xxx rychlost xxxxxxx xxxx 8 xx 12 xx za xxxxxx x aby xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx 150 xx xxxxx chloroformu x xxxxxxxxx (3.7) x xxxxxx xxxx eluát.
Odpařit xxxxx xx xxxxx xxx proudem xxxxxxxxx xxxxx (3.11) x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.5) při xxxxxxx xxxxx než 50 °X. Xxxxxxxx kvantitativně xxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx (3.6) xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 10 xx (4.10). Koncentrovat xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (3.11), x xxxx xxxxxxx objem xx 2 xx xx použití chloroformu (3.2) xxxx směsi xxxxxxx a acetonitrilu (3.6).
5.4 Tenkovrstvá xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.8) nanést 2 xx xx xxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxx xx 2 cm xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx:
- 10, 15, 20, 30 x 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku alfatoxinu X1 (3.16),
- 10 μx xxxxxxxx získaného xxxxx xxxx 5.3 x x xxxx 20 μl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16),
- 10 x 20 μx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3.
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxx xx xxxxxxx jednoho x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18). Výběr xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxx nanesením 25 μx jakostního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.1) na xxxxx x musí xx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx X1 x X2 xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ve xxx x xxxx xxxxxx xxxxx UV xxxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Skvrny xxxxxxxxxx X1 modře xxxxxxxxxxx.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx fluorimetricky xxxxx xxxxxx pokynů:
5.5.1 Xxxxxxxx měření
Množství xxxxxxxxxx X1 v extraktu xx stanoví porovnáním xxxxxxxxx fluorescence xxxxx xxxxxxxx x intenzitou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx překrytím xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx než xxxxxxxxxxxx 10 xx extraktu x xxxxx být xxxxxxxxx xxxx než xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx intenzita fluorescence 10 μl xxxxxxxx xxxxxxxx než intenzita xxxxxxxxxxxx 40 μx xxxxxxxxxxxx roztoku, rozředit xxxxxxx 10 xxxx xxxx 100 krát xxxxxxxxxxxx (3.2) nebo xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6) x xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxx B1 xx xxxx fluorimetrem (4.12) xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx 365 xx x emisní délce 443 nm. Množství xxxxxxxxxx X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx porovnáním jejich xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx B1.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx identity xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xx provede xxxxx:
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxx sírovou
Na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx 5.4 xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx musí xxx XX zářením xxxxxx z modré xx xxxxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx zahrnující tvorbu xxxxxxxxxx X1 - xxxxxxxxxxx (aflatoxin X2x)
Xxxxxxxx:
Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx postupy xx xxxx provádět xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx obrázku 3.
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (6 cm xx xxxxx strany), xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx na desku xxxxxx kapilárních xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: xxxxx xxxxxxxxxxx extraktu xxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 5.3, xxxxx xxxxxxxx xxx 2,5 xx xxxxxxxxxx X1,
- v xxxxxx X a X: 25 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
5.6.2.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx v chromatografickém xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx směru X, xxxxx čelo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k vymezující xxxxx.
Xxxxxxx xxxxx x xxxxx x nechat xxxxxxxx pět xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.12) xx xxxxx x xxxxx 2,5 xx, xxxxx xxxxxxx body X x X (na xxxxxxx 3 xxxxxxxxx xxxxxxxxx), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx xx chráněn xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx 10 xxxxx xx tmě, x xxxx vysušit desku xxxxxxx vzduchu při xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxx xx xxxxxxxxxxxx vyvíjí za xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.18.1) [vrstva x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx] xx xxx xx xxxxx XX, xxxxx xxxx rozpouštědla xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx linii. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xx tmě x při xxxxxxxx xxxxxxx.
5.6.2.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx xxxx xxxxx:
x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X (xxxxxxx ve xxxxx X).
x) Objevení xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx X1 (xxxxx xxxxxxxxxx s kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx) x intenzivnější xxxxx fluoreskující xxxxxx xxxxxxxxxx X1 – xxxxxxxxxxx, xxxxxxx obě xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x bodu B (xxxxxxx xx xxxxx XX).
x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxx xxxx xxxxxxx x xxxx x), xxxxxxxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx X. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 xx xxxx X ve xxxxx I (xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x xxxx X) x xxxx migrační xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 – hemiacetalu xx xxxx X xx xxxxx XX (stejná xxxxxxxxxx jako x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x bodu B). Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxx pocházejících x xxxxxxxx a xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxx B xx si xxxx xxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx výsledků
6.1 Xx základě xxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorku (xxx) xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx:
X · X · X / X · X
xxx:
X x X xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx (3.16) x xxxxxxxx, xxxxx má xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx;
X = xxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxx X1 ve xxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16);
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x mikrolitrech, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorku x xxxxxxx, s xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx na xxxxxx.
6.2 Xx základě fluorimetrického xxxxxx
Xxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 kg xxxxxx (xxx) xx vypočítá xxxxxx xxxxxx:
X·X / X·X
xxx:
X = xxxxx xxxxxxxx, x mikrolitrech, xxxxxxxxxxxx xxxxx (10 μx nebo 20 μx);
X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1, v xxxxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx hodnotě X) xxxxxxxx x xxxxxx;
X = xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx;
X = xxxxxxxx zkušebního vzorku x gramech, s xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx na koloně.
7. Xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16)
7.1 Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxx X1
Xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), jehož xxxxxxxxxxx xx xx 8 do 10 μx/xx. Stanovit xxxxxxxxx xxxxxxxx mezi 330 x 370 nm xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.11).
Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (X) xxx 363 xx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx 348 nm x případě roztoku xxxxx benzenu x xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx:
xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx; 312 · X · 1&xxxx;000 / 20&xxxx;600
312 · A · 1 000 / 19&xxxx;800 xxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx..
Xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx získat xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxx 0,1 μg/ml. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx x chladničce xxx 4 °C, je xxxxx xx xxxx xxxx xxxxx.
7.2 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx čistoty
Nanést xx xxxxx (4.8) 5 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 8 xx 10 μx xxxxxxxxxx X1 na 1 xx (7.1). Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v xxxx 5.4. Xxx UV xxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx skvrna x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx by neměla xxx xxxxxxxx žádná xxxxxxxxxxxx.
8. Opakovatelnost
Rozdíl mezi xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx analytik, xxxxx xxxxxxxxx:
- 25 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx aflatoxinu X1 xx 10 xx 20 μg/kg,
- 5 μx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx obsahy od 20 xx 50 μx/xx,
- 10 % xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxx 50 μx/xx.
9. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", část X xxx 2.
X. XXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXX CHROMATOGRAFIE
1. Xxxx x xxxxxx
Xxxx xxxxxx umožňuje xxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 x xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxx do oblasti xxxxxxxxxx metody X. Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx je 0,01 xx/xx (10 ppb). Xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx krmiva xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Eluát xx xxxxxx x residuum xx xxxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xx podrobí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx srovnáním xx známým xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx aflatoxinu B1. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 xxxxxxxxxxxxx z xxxxx xxxx být potvrzena xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx činidla xxxx xxx čistoty "x.x".
3.1 Xxxxxx.
3.2 Xxxxxxxxxx stabilizovaný 0,5 – 1,0 xxxxxxxxx 96 % (X/X) xxxxxxxx.
3.3 X–xxxxx.
3.4 Xxxxxxxx.
3.5 Diethylether, xxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
3.6 Xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx: 98/2 (V/V).
3.7 Xxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxxx (3.4): 97/3 (X/X).
3.8 Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, velikost xxxxxx 0,05 xx 0,20 xx.
3.9 Xxxxxxxxx – vata, xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxx xxxx.
3.10 Xxxxx xxxxx, xxxxxxx, granulovaný.
3.11 Xxxxxxx xxxx, např. xxxxx.
3.12 Kyselina chlorovodíková 1 X.
3.13 Křemelina (xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx.
3.14 Xxxxxxxxx X–XX xxxx xxxxxxxxxx, pro xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
3.15 Vyvíjecí xxxxxxx.
3.15.1 Xxxxxxxxxxxx (3.5)/xxxxxxxx (3.4)/voda 94/4,5/1,5 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.15.2 Xxxxxxxxxx (2.3)/aceton (3.1): 9/1 (X/X), xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxx xxxxxx obsahující asi 0,1 μx aflatoxinu X1 xx 1 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx (3.6), xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx xx uvedeno x xxxx 7 xxxxxx X.
4. Xxxxxxxxx
Xxx xxx 4 xxxxxx X.
5. Xxxxxx
|
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx |
xxx xxxx 5.1, 5.2 x3.5 xxxxxx X. |
|
5.2 Xxxxxxxx |
|
|
5.3 Pročištění xx xxxxxx |
5.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Narýsovat xx xxxxx (4.8) xxx xxxxxx rovnoběžné xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx (6 xx xx xxxxx xxxxxx), xxxxxx x vymezení xxxxxxx čel xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx injekčních mikrostříkaček xxxx xxxxxxx:
- x xxxx X: 20 μx vyčištěného xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 5.3,
- x xxxx X: 20 μx standardního roztoku (3.16),
- x bodu X: 10 μx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16),
- x xxxx X: 20 μl standardního xxxxxxx (3.16),
- v xxxx X: 40 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16).
Xxxxxxx xxxxxx proudem xxxxxxx nebo inertního xxxxx (3.11). Xxxxxxx xxxxxx xxxx mít xxxxxx asi 5 xx.
5.4.2 Xxxxxxxx (podle xxxxxxxx xx xxxxxxx 1)
Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx vyvíjecího xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx] ve tmě xx směru I, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Vyjmout desku x xxxxxxxxxxxxxxxxxx tanku x nechat oschnout 15 xxxxx xx xxx a xxx xxxxxxxx teplotě.
Poté xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.15.1) [xxxxxx x xxxxxxxx 1 cm x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx atmosférou] xx xxx xx xxxxx XX, dokud xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx tanku x xxxxxx xxxxxxxx xx xxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
5.4.3 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xx obrázku 1)
Xxxxxx xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx, xxxxxxx se deska xxxxxx xx vzdálenosti 10 xx xx xxxxx (4.9). Xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1 xx standardního xxxxxxx X, X, D x E. Načrtnout xxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx procházejí těmito xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx s xxxxxxxxxx xxxxx. Průsečík X těchto přímek xxxxxx místo, xxx xxx očekávat xxxxxx xxxxxxxxxx X1 pocházející x xxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxx x bodu X (obrázek 1). Xxxxxxxx poloha xxxxxx xxxxxxxxxx X1 však xxxx být x xxxx X umístěném xx xxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxx přímek xxxxxxxxxxx xxxx xxx 100 xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxx X a X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x xxxxxxxx xxxxxx xx stanoví, xxx je xxxxxxx x xxxx 5.5.
5.4.4 Xxxxxxxxxx chromatografie
Narýsovat xx xxxxx desku (4.8) xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx přilehlými xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx ve xxxxxxxx xx obrázku 1, x xxxxxx xx xxx X (xxx xxxxxxx 1) 20 μx přečištěného xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxx podle bodu 5.3, x x xxxx 20 μx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxx xxx xx xxxxxxx v bodu 5.4.2. Ozářit xxxxxxxxxxxx XX xxxxxxx (4.9) x xxxxxx zda:
- xx skvrny xxxxxxxxxx X1 x extraktu x xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx,
- fluorescence xxxxxx skvrn je xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X1, xxxxx xx vyvinula x xxxx X xx xxxxx desce.
5.5 Xxxxxxxxxxxxx stanovení
Stanovení xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx těchto xxxxxx:
5.5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx skvrn X, X x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxx potřeby xx xxxxxxxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxxx silnější xxx xxxxxxxxx 40 μx standardního xxxxxxx, xxxxxx xxxxxx 10 xxxx nebo 100 xxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxx xxxxx xxxxxxx x acetonitrilu (3.6), x xxxx znovu xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
5.5.2 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx aflatoxinu B1 xx xxxxx xxxxxxxxxxxx (4.12) při excitační xxxxxx xxxxx 365 xx x xxxxxx xxxxxx délce 443 xx.
Xxxxxxxx aflatoxinu X1 xx xxxxxxxx extraktu xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx X, D x X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
5.6 Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx B1
Viz bod 5.6 metody X.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxx 6 xxxxxx X.
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxx xxx 8 xxxxxx X.
8. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx
Xxx "Xxxxxxxx", xxxx X xxx 2.
X. POZNÁMKY XXXXXXXX XX XXXXX X A X
1. Xxxxxxxxx
Xxxxxx obsahující xxxx xxx 5 % xxxx xx musí xx xxxxxxxx xxxxx xxxx 5.1 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (x. x. 40 až 60 °X).
X takových případech xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vzorku.
2. Xxxxxxxxxxxxxxxxxx výsledků
Reprodukovatelnost výsledků, xx. xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx:
± 50 % xxxxxxx xxxxxxx xxx střední xxxxxxx xxxxxxxxxx X1 x 10 μg/kg xx do 20 μx/xx;
± 10 μx/xx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro střední xxxxxxx od 20 xx 50 μx/xx;
± 20 % xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 50 μg/kg.
Dodatek x xxxxxxx
