Xxxxxx Xxxxxxxx Komise
ze xxx 25. xxxxxxxx 1984,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
(84/425/XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx odběru xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx úřední kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx Aktem x xxxxxxxxxxx Řecka, a xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx požaduje, xxx xxxxxx kontrola xxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů týkajících xx kvality a xxxxxxx xxxxx byla xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx vzorků x xxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx směrnice Xxxxxx 71/250/XXX [2], 73/46/EHS [3], 74/203/XXX [4], 75/84/XXX [5], 76/372/XXX [6] xxxxxxxxx pozměněné xxxxxxxx 81/680/EHS [7], xxxxxxxx 71/393/EHS [8], 72/199/XXX [9], 78/633/XXX [10] naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxx 84/4/EHS [11] x xxxxxxxx 81/715/EHS [12] xxx stanovily xxxxxx počet xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx; xx xxxxxx x práci xx té xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx metodu;
vzhledem x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx, pokud xxx x jejich xxxxx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx popsanou v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí xxxxxxxxxx xx 30. června 1985 x xxxxxxxxxx x nich xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxxx 3
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 25. xxxxxxxx 1984.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Komise
[1] Úř. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 155, 12.7.1971, x. 13.
[3] Xx. věst. X 83, 30.3.1973, x. 21.
[4] Xx. věst. X 108, 22.4.1974, x. 7.
[5] Xx. xxxx. X 32, 5.2.1975, x. 26.
[6] Úř. xxxx. X 102, 15.4.1976, x. 8.
[7] Xx. věst. X 246, 29.8.1981, x. 32.
[8] Úř. xxxx. X 279, 20.12.1971, x. 7.
[9] Úř. věst. X 123, 29.5.1972, x. 6.
[10] Xx. věst. X 206, 29.7.1978, x. 43.
[11] Xx. xxxx. X 15, 18.1.1984, x. 28.
[12] Úř. věst. X 257, 10.9.1981, x. 38.
XXXXXXX
XXXXXXXXX XXXXXXXXXXX XXXXXX XX XXXXXXXX XXXXX
1. Xxxx x rozsah
Metoda xx určena xxx xxxxxxxxx spiramycinu v xxxxxxxx x premixech. Xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx (1 xxx) [1]
2. Xxxxxxx
Xxxxxx se extrahuje xxxxx metanol/fosfát-bikarbonátovým xxxxxx x xX 8. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxx antibiotická xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx difúze xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx médiu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx tvorbou inhibičních xxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xxx xx xxxxx úměrný logaritmu xxxxxxxxxxxx koncentrace nad xxxxxx použitých xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
3. Xxxxxxxxxxxxxxx: Xxxxxxxxxxx xxxxxx XXX 9341 (XXXX 8340, NCIB 8553)
3.1 Xxxxxxxxx základní xxxxxxx
Xxxxxxxxx kultivační médium (4.1) x xxxxx xxxxxxxx mikroorganizmem Xxxxxxxxxxx xxxxxx x inkubujte 24 hodin při 30 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx okolo 4 °X. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx.
3.2 Příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxxx [2]
Xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx 2 xx 3 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx 250 xx kultivačního xxxxx (4.1) xxxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 18 xx 20 xxxxx xxx 30 °C. Xxxxxxxx xxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (4.3) x promíchejte. Zřeďte xxxxxxxx xx 1/10 xxxxxxxx xxxxxxxx sodného (4.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxx 75 %, xxxxxx xxx 650 xx x 1 xx xxxxxx proti xxxxxxx chloridu xxxxxxx (4.3.). Xxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxx týden při xxx 4 °X.
4. Xxxxxxxxxx média a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxx xxxxxx [3]
|
Xxxxxx xxxxxx |
6,0 g |
|
Trypton |
4,0 x |
|
Xxxxxxx z xxxxxxx |
3,0 x |
|
Xxxxxxx x xxxx |
1,5 x |
|
Xxxxxxx |
1,0 g |
|
Agar |
10,0 xx 20,0 x |
|
Xxxx |
1000 xx |
|
XX 6,5 xx 6,6 (xx xxxxxxxxxxx). |
|
|
4.2 Xxxxxxxx xxxxxx [4] |
|
|
Trypton |
5,0 x |
|
Xxxxxxx x kvasnic |
4,0 x |
|
Xxxxxxx x masa |
3,0 x |
|
Xxxx |
10,0 xx 20,0 g |
|
Voda |
1000 xx |
|
XX 8,0 (po xxxxxxxxxxx). |
|
4.3 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 0,8 % (xxxxxx xxxxxxxx)
Xxxxxxxxx 8 x xxxxxxxx sodného xx vodě a xxxxxx do 1000 xx; xxxxxxxxxxxx.
4.4 Xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx, xX 8,0
|
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxx X2XXX4 |
16,7 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX2XX4 |
0,5 x |
|
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx XxXXX3 |
20,0 x |
|
Xxxx do |
1000 ml |
4.5 Xxxx xxxxxxx xxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxx (4.4)
50/50 (objemově).
4.6 Xxxxxxxxxx látka
Spiramycin o xxxxx aktivitě (x XX).
5. Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxx odvážené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.6.) xx směsi (4.5.) x xxxxxx stejnou xxxxx, xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx 1000 XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx. Skladován x zazátkované xxxxx xxx 4 °X xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx až xxx xxx.
X tohoto zásobního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx směsí (4.5.) xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
|
X8 |
1 |
XX/xx |
|
X4 |
0,5 |
XX/xx |
|
X2 |
0,25 |
XX/xx |
|
X1 |
0,125 |
XX/xx |
6. Xxxxxxxx xxxxxxxx x zkušebních xxxxxxx
6.1 Extrakce
Odvažte 20,0 x vzorku v xxxxxxx krmiv, 1,0 xx 20,0 x x xxxxxxx. Přidejte 100 ml směsi (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Odstřeďte xxxx dekantujte x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (4.5), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= U8).
Pro očekávané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxx 2,5 mg/kg xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx 20,0 x xxxxxx. Přidejte 100 xx směsi (4.5) x třepejte 30 xxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx 50 xx roztoku xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx 4 ml xx sníženého xxxxx xx rotační odparce xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxx xxxxxx směsí (4.5), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx 1 XX/xx (= X8).
6.2 Xxxxxxxx xxxxxxx
X xxxxxxx X8 připravte roztokU4 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,5 XX/xx), X2 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,25 XX/xx) x X1 (xxxxxxxxx xxxxx: 0,125 XX/xx) xxxxxx xxxxxxxxxx ředění (1 + 1) xxxxx (4.5).
7. Xxxxxxxx xxxxxx
7.1 Naočkování zkušebního xxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.2) bakteriální suspenzí (3.2) xxx xxx 50 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx miskách xx xxxxxxxxx xxxxxx (4.2) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx poskytne xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x různými xxxxxxxxxxxxx spiramycinu.
7.2 Příprava xxxxx
Xxxxxx agarem xx xxxxxxx xx xxxxxxx xx čtyřmi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X8, X4, X2, S1) x čtyřmi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku (X8, X4, X2, X1). Xxxx čtyři xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx misky xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx médiu nejméně xxx otvorů x xxxxxxxx 10 xx 13 xx x xxxxxxx 30 mm xxxx středy. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xx miskách skládajících xx x xxxxxx xxxx s xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxx umístěným xx xxxxx, 200 xx x xxxxxxx a 20 mm xxxxxxx.
Xxxxxxxx xx misky množství xxxxx (4.2.), xxxxxxxxxxxxx xxxx v 7.1., xxx vytvořilo xxxxxx xxx 2 xx xxxxxx (60 xx xx xxxxx x xxxxxxx 200 xx). Xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxx x umístěte xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x standardních xxxxxxx (xxxx 0,10 x 0,15 xx na xxxxx, xxxxx průměru). Xxxxxxxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxx čtyřikrát xxx, xx každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 32 xxxxxxxxxxx zón.
7.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx 16 xx 18 xxxxx xxx 30 ± 2 °X.
8. Vyhodnocení
Změřte průměr xxxxxxxxxxx zón x xxxxxxxxx xx 0,1 xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro každou xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx vynášejte xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx ve xxxxxx x průměrům xxxxxxxxxxx xxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx standardního roztoku x extraktu, například xxx xx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxx xxxxxxx:
x) SL = 7x1 + 4x2+ s4 – 2x8 / 10
Stanovte "xxxxxxxxxxxx" bod xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XX) x použitím xxxxxxx:
x) XX = 7x8 + 4x4+ x2 – 2x1 / 10
Podobně xxxxxxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxx pro xxxxxxxx úroveň xxxxxxxx (XX) x nejvyšší xxxxxx xxxxxxxx (XX) xxxxxxxxxx u1, x2, x4 x x8 xx s1, x2, x4, a x8 x dříve xxxxxxxxx xxxxxxxxx [5]
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX a XX xx stejný xxxxxxxx papír x xxxxxx xx xxx, xxxxxx xxxxxxx "xxxxxxxxxxx" xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podobně xxxxxxxxxxxx XX x XX x xxxxxx je xxx, xxxxxx xxxxxxx "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx pro xxxxxxx.
X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx. Xxx praktické xxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx (XX — XX) a (XX — XX) xxxxxxxxxx xxxx xxx x 10 % xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, buď u1 x x1 xxxx x8 x x8, xxxxx být vyřazeny x XX, SH, XX x UH xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx alternativní "xxxxxxxxxxxx" xxxxxx:
x) XX = 5x1 + 2s2 – x4 / 6 xxxx 5x2 + 2x4 – x8 / 6
x′) XX = 5s4 + 2x2 – x1 / 6 xxxx 5x8 + 2x4 – x2 / 6
a podobně xxx XX a XX. Měla xx xxx splněna xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxx.
Xxxxx xxxx křivky xxxxxxxxxx xx paralelní, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx X) x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx rovnic, x xxxxxxxxxx xx tom, xxxxx xxxx xxxxxxx xxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxx xxxxx xxxxxx
x) Xxx A = (x1+ x2+ x4+ x8 – x1 – x2 – x4 – x8) × 0,602 / x4+ u8+ x4+ x8 – u1 – x2 – x1 – x2
Xxx xxx xxxxxx
x) Xxx X = (x1+ x2+ x4 – x1 – s2 – x4) × 0,401 / u4+ x4 – x1 – x1
xxxx
x´) Log X = (x2+ x4+ x8 – x2 – s4 – x8) × 0,401 / x8+ x8 – u2 – x2
Xxxxxxxx extraktu xxxxxx = xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx × X
(X8 = S8 × A)
Pokud byla xxxxxxxxx aktivita xxxxxxxx xxxx xxxxxx 0,5 xx 2,0, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxx proveďte xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxx možné, roztoků xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxx relativní xxxxxxxx xxxxxxxx do požadovaného xxxxxxx, xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxx.
Xxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxxxx za neparalelní, xxxxxxxx stanovení. Pokud xxxx xxxxx docíleno xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxx považováno xx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx kilogram xxxxxx.
9. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx analytikem xxxxx překročit:
- 2 xx/xx x absolutní xxxxxxx pro xxxxxx xxxx spiramycinu xx 10 mg/kg,
- 20 % vzhledem x xxxxxxxx hodnotě xxx xxxxxx 10 xx 25 xx/xx,
- 5 xx/xx x xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx 25 až 50 xx/xx,
- 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxx xxx 50 mg/kg.
[1] 1 xx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 3200 mezinárodních xxxxxxxx (XX).
[2] Další xxxxxx xxxxx být použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxx stanoveno, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
[3] Může xxx xxxxxxx jakékoli komerční xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x dávající xxxxxx xxxxxxxx.
[4] Xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx stejné výsledky.
[5] Xxxx xxxxxxx "x" x "x" xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx zón.