Xxxxxxxx směrnice Xxxxxx 93/117/XX
xx xxx 17. xxxxxxxx 1993,
xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxx
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o založení Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx zavádějí xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx nařízením (EHS) x. 3768/85 [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx se xxxxxx xxxxxxxx krmiv, xxxxx mají xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx předepsaných xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx o xxxxxxx x složení krmiv, xxxxxxxxx xx použití xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx vzorků a xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx metody Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx dodržování xxxxxxxx při používání xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx;
xxxxxxxx x xxxx, xx opatření xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru pro xxxxxx,
XXXXXXX TUTO SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Členské xxxxx xxxxxxx, xx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxx metody popsané x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 30. listopadu 1994. Xxxxxxxxxx x xxxx uvědomí Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx obsahovat xxxxx xx xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx za takový xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
X Bruselu dne 17. prosince 1993.
Xx Xxxxxx
Xxxx Xxxxxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Úř. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 362, 31.12.1985, x. 8.
XXXXXXX
1. STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1,3-xxx [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx]xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxx metoda xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 5 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx x jeho xxxxxxxxx xxxx se xxxxxxxx na koloně x xxxxxx hlinitým. Xxxxxxxxx xx eluuje x kolony methanolem, xxxxxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxx xx upraví pomocí xxxxxxx xxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (HPLC) xx xxxxxxxx xxxx pomocí XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxx
3.2 Okyselený xxxxxxxx
Xx 500 xx odměrné xxxxx xx oměří 4,0 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (X20x, 1,18 x/xx), doplní xx xx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.1.) a xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xxx připraven xxxxx xxxx použitím.
3.3 Xxxxxxxxxxx, xxx XXXX
3.4 Xxxxxxxxxxx xxxx
Xxx 3X, 8 xx 12 xxxx (1,6–2,5 mm xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx hlinitokřemičitanu, xxxxxx xxxx 0,3 xx).
3.5 Xxxx hlinitý: xxxxxx, xxxxxx aktivity I xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx
100 x oxidu xxxxxxxxx xx naváží xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx 2 xx xxxx. Xxxxxxxxx xx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 20 xxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxx zazátkované xxxxxxx.
3.6 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx x = 0,025 xxx/x
3,4 x dihydrogen xxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxx (xxx HPLC) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx, doplní xx po značku x promíchá.
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, roztok x = 0, 025 xxx/x
3,55 x xxxxxxxxx (xxxx 4,45 x dihydrátu, xxxx 8,95 x xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx rozpustí ve xxxx (xxx XXXX) x 1000 xx xxxxxxx xxxxx. Doplní xx xx xxxxxx x promíchá.
3.8 Xxxxxxx xxxx XXXX
Xxxxxx xx:
650 xx xxxxxxxxxxxx (3.3.),
250 xx xxxx (pro XXXX),
50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxxxxx (3.6.),
50 ml xxxxxxx xxxxxxxx fosforečnanu xxxxxxx (3.7.).
Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 0,22 μx (4.6.) x roztok se xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx).
3.9 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx: 1.3-bis [(4-xxxxxxxxxxxxxxx) xxxxx] xxxxxxxx hydrochlorid, X 758.
3.9.1 Xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: 300 μg/ml:
Naváží xx 30 mg xxxxxxxxxxxx xxxxx robenidinu (3.9.) x přesností 0,1 xx. Xxxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxxx (3.2.) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx, xxxxxx se po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxx xx obalí xxxxxxxxxxx folií x xxxxx x xxxxx.
3.9.2 Xxxxxxxxx, pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx: 12 μg/ml
Odměří xxx 10,0 xx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.1) xx 250 xx odměrné xxxxx, xxxxxx xx značku xxxxxxx fází (3.8) x xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx x xxxxx.
3.9.3 Kalibrační xxxxxxx
Xx souboru 50 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 x 25.0 xx xxxxxxxxxx standardního roztoku (3.9.2.). Doplní se xx značku xxxxxxx xxxx (3.8.) a xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx 1.2, 2.4, 3.6, 4.8 x 6.0 μg/ml robenidinu. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx těsně xxxx použitím.
4. Přístroje x pomůcky
4.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x nádržkou xx xxxxxxxxx 150 xx. Xxxxxxx xxxxxx 10 – 15 xx, xxxxx 250 xx.
4.2 Xxxxx xxxxxxxx
4.3 Xxxxxxx xxxxxxx
4.4 Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vlnovou xxxxxx, anebo xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx v xxxxx 250 - 400 xx
4.4.1 Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, X18, 10 μx náplní nebo xxxxxxx.
4.5 Xxxxx xx xxxxxxxxxx vláken (Xxxxxxx XX/X xxxx xxxxxxx)
4.6 Xxxxxxxxxx filtry 0,22 μx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45 μm
5. Xxxxxx
Xxxx.: Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xx světlo. Xxxxx xxxx xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxx skla.
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx robenidinu x xxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx ani xxxx xxxxxx látky.
5.1.2 Je xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (5.1.1.), xx xxxxxxx xxxx přidáno xxxxxx množství xxxxxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxx. X dosažení xxxxxx 60 xx/xx xx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xxxxxxx 3 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.9.1.). Xxxxxx se xxxxxx xxx na xxxxx 0,5 ml x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx 15 x modelového krmiva, xxxxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx začít x extrakcí (5.2.).
Xxxx.: Xxx účel této xxxxxx by mělo xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jako xx xxxxxxxx vzorek x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
5.2 Xxxxxxxx
Xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx naváží xxxxxxxxx 15 x xxxxxxxxxx xxxxxx x přesností 0,01 g, xxxxx xx 100 xx xxxxxxxxxxx methanolu (3.2), xxxxxxxxx a hodinu xxxxx xx xxxxxxxx (4.2). Xxxxxx se xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.5) a xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx xx 150 xx Erlenmeyerovy baňky. Xxxxx se 7,5 x xxxxxxxxxxxxx síta (3.4), zazátkuje a xxx xxxxx se xxxxx. Xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxx přes xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx. Tento xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx (5.3).
5.3 Čištění
5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxx s xxxxxx hlinitým
Do xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx (4.1) se xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxx xxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xx 11,0 x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.5) x xxxxxx se xx xxxxxx, pokud xxxxx x minimální xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx prostředí. Xxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxx kolony.
5.3.2 Xxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx napipetuje 5,0 ml xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku (5.2). Xxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxx xxxxxx x extrakt xx xxxxx řádně xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx pomocí 100 xx xxxxxxxxx (3.1) xxx rychlosti xxxxxxx 2 – 3 xx xx xxxxxx x xxxxx xx xxxx xx 250 xx xxxxx x kulatým xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx tlaku x xxx teplotě 40xX xxxxxx xx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxx (4.3). Odparek xx xxxxx xxxxxxxx xx 3 – 4 xx xxxxxxx xxxx (3.8.) x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx 10 ml xxxxxxx xxxxx. Baňka xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx 1 – 2 xx xxxxxxx xxxx x xxxx roztoky xx xxxxxxx do xxxxxxx baňky. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxx fází x promíchá xx. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx 0,45 μx xxxxx (4.7). Xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxxx (5.4).
5.4 Stanovení xxxxxx xxxxxxx kapalinovou xxxxxxxxxxxxxx (XXXX)
5.4.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxxx. Xxxxx být xxxxxxx i jiné xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
xxxxxxx xxxx (3.8),
průtoková xxxxxxxx: 1,5–2 ml/minuta,
vlnová xxxxx xxxxxxxxx: 317 nm,
objem xxxxxxxx: 20–50 μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxxxxx opakovaným nástřikem xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.9.3), xxxxx obsahuje 3,6 μx/xx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx výšek xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.4.2 Xxxxxxxxxx xxxx
Xxx xxxxx kalibrační xxxxxx (3.9.3) se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx se výšky (xxxxxx) píků pro xxxxxx xxxxxxxxxxx. Kalibrační xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průměrných hodnot xxxxx xxxx ploch xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.4.3 Roztok xxxxxx
Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx objem extraktu xxxxxx, xxxx při xxxxxxxxx x určí xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx a xxxxxxxxx výsledků
Z průměrných xxxxxx výšek (ploch) xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx koncentrace xxxxxxxxxx x roztoku vzorku x μg/ml xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx grafu (5.4.2).
x = (x × 200)/x,
xx xxxxxx xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx navážky xxxxxx x xxxxxxx.
7. Xxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx detektoru x diodovým polem, xxxxx xxxxxxxx porovnání xxxxxxx extraktu vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.9.3) xxxxxxxxxxx 6 μx/xx xxxxxxxxxx.
7.1.1 Opakované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx
X xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.9.3). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxx obdobné xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x extraktu xxxxxx.
Xxxx by se xxxxxx xxxxx xxxxx xxxx robenidinu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x xxxxxxxx jeho xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx 10 % xxxxxxx xxxx.
7.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) xxx vlnové xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxx být záznam xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx rozlišovací xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxx/xxxxx 2 xx;
x) při xxxxxx xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx zaznamenaný xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx dvěma spektry xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx.
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx se xxxxx xxxxxxxx vzestupu, xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx vzorku xxxxx od xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx v rozsahu 10 až 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx bodech xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx 15 % absorbance xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx kritérií, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2. Opakovatelnost
Rozdíl xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nesmí xxxxxxxxxx 10 % xxxxx. xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx obsahu xxxxxxxxxx xxx 15 xx/xx.
7.3 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx pro fortifikovaný xxxxxx xxxx být xxxxxxx 85 %
8. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx test, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čtyři xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx. Xxxxx ze xxxxxx xxx podroben xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v této xxxxxxx:
|
Xxxxxx |
xxxxxxx |
|||
|
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx xxxxxx |
Xxxxxx |
|
|
Xxxxxx (xx/xx) |
27,00 |
27,99 |
43,6 |
40,1 |
|
Xx (xx/xx) |
1,46 |
1,26 |
1,44 |
1,66 |
|
XXx (%) |
5,4 |
4,5 |
3,3 |
4,1 |
|
SR (xx/xx) |
4,36 |
3,36 |
4,61 |
3,91 |
|
XXX (%) |
16,1 |
12,0 |
10,6 |
9,7 |
|
Xxxxxxxxx (%) |
90,0 |
93,3 |
87,2 |
80,2 |
Xx = xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = variační xxxxxxxxxx opakovatelnosti
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx x reprodukovatelnosti
2. XXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXX
(2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
1. Xxxx x oblast použití
Tato xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Dolní xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 1 xx/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Extrakt xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxxxxxx xxx znovu xxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví xx xxxxxxxx xxxx vysoce xxxxxxx kapalinovou chromatografií (XXXX) xxxxxx XX xxxxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxxxx
3.2 Xxxxxxxx, xxx HPLC
3.3 Xxxxxxx xxxx HPLC
Směs xxxxxxxxx (3.2.) x xxxx (pro HPLC) 75 + 25 (xxx.).
Xxxxxxxxxxx se přes 0,22 μx xxxxx (4.5.) x xxxxxxx (xxxx. ultrazvukem xx xxxx 10 minut).
3.4 Xxxxxx xxxxxxxx methansulfonové σ = 2 %
20 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x 1000 xx xxxxxxxxx (3.2.).
3.5 Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx σ = 10 %
100 xx kyseliny chlorovodíkové (X20 x. 1,18g/ml) xx rozředí x 1000 xx xxxx.
3.6 Xxxxx CG-120 (Xx), 100 – 200 xxxx
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx takto: 100 x xxxxxxxxxxx xx rozmíchá v 500 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3,5) x za xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Filtruje se xxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 500 xx vody x xxxxx 250 ml xxxxxxxxx (3.2). Potom xx xxxxxxxxxx dalšími 250 xx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx ionex xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx lahvi.
3.7 Xxxxxxxxxx xxxxx: čistý methylbenzochát (2-xxxxxx-7-xxxxxx-xxx-6-xxxxx-1,4-xxxxxxx-4-xxxxxxxxxxx-3-xxxxxxxxxx)
3.7.1 Xxxxxxxx standardní xxxxxx benzochátu, 500 μx/xx
Xxxxxx xx 50 xx xxxxxxxxxx xxxxx (3.7) x xxxxxxxxx 0,1 xx, xxxxxxxx xx xx 100 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4), xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.2 Pracovní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx 50μx/xx
Xx 50 xx odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 ml základního xxxxxxxxxxxx roztoku methylbenzochátu (3.7.1), doplní xx xxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxx x xxxxxxxx.
3.7.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xx xxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 1, 2, 3, 4 x 5 xx xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (3.7.2). Xxxxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx (3.3) x zamíchá. Xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 2, 4, 6, 8 a 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx připravovat xxxxx xxxx xxxxxx použitím.
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.2 Xxxxxxx xxxxxxx
4.3 Xxxxxxxx kolona (250 x 15 xx) xxxxxxxx uzavíracím xxxxxxxxx x nádržkou x xxxxxxxxx 200 xx
4.4 HPLC zařízení xxxxxxxx XX detektorem x měnitelnou xxxxxxx xxxxxx nebo detektorem xxxxxxxx xxxxx
4.4.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: 300 xx x 4 xx, C – 18, 10μx xxxx xxxxxx xxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,22 μx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxxx 0,45μx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxx
5.1.1 Xxxxxxxx krmivo xxx xxxxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxx x xxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxx.
5.1.2 Xxxx xx provést xxxx výtěžnosti analýzou xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx je xxxxxxxx xx vzorku. X xxxxxxxxxxx xx xxxxxx 1,5 xx/xx xx přidá do 20 g xxxxxxxxxx xxxxxx 600 μl xxxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.7.1), promíchá xx x xx 10 xxxxx xx započne x xxxxxxxx (5.2).
Xxxx.: Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx, xxxx xx xxxxxx, x xxx xxxx analýze xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx.
5.2 Extrakce
Do 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky xx naváží přibližně 20 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxx 0,01 x. Xxxxx xx 100 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxxxxxxx xx třepe (4.1) xx dobu 30 xxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx přes papírový xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx na extrakci xxxxxxxx-xxxxxxxx (5.3).
5.3 Xxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xx 500 ml xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx 100 xx roztoku xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5) xx xxxxx 25 xx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodu (5.2). Dále xx xx nálevky xxxxx 100 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1) x xxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x spodní vrstva (xxxxxxxxxxxxxx) xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx xx opakuje xx xxxxx xxxxxxx 40 xx dávkami xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xx xxxxx s xxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx (4.2) xxx xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 xX. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x 20–25 ml xxxxxxxxx (3.2), xxxxx xx zazátkuje x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (5.4).
5.4 Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx
5.4.1 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xx xxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxx (4.3) xx xxxxx tampon xx xxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 5 g xxxxxxxxxx xxxxxx x x 50 ml xxxxxxxx chlorovodíkové (3.5). Xxxx xxxx se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Přebytečná kyselina xx odpustí xx xxxxx nad xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx vodou xxxxx proteklý xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xx xx xxxxxx xx xxxxxx 50 xx xxxxxxxxx (3.2) x nechá xx xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx.
5.4.2 Kolonová xxxxxxxxxxxxxx
Xx xxxxxx xx xxxxxxx napipetuje xxxxxxx xxxxxxx (5.3). Xxxxx x xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx dvěma xxxxxxx 5 xx 10 xx methanolu (3.2) x xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx. Extrakt xx xxxxx xxxxx xx k xxxxxxx xxxxxx. Kolona xx xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxx tak, aby xxxxxx nepřesahoval 5 xx xx minutu. Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxx z kolony 150xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.4) x xxxxx se xxxx xx 250 xx Xxxxxxxxxxxxx baňky.
5.5 Extrakce xxxxxxxx-xxxxxxxx
Xxxxxxx eluát (5.4.2) xx převede xx xxxxxxxxxxxx dělící xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx 5 xx 10 ml methanolu (3.2) a výplach xx přidá do xxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 300 xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.5) x 130 xx xxxxxxxxxxxxxx (3.1). Třepe se xx xxxx jedné xxxxxx x xxxxx xx nechají xxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx (xxxxxxxxxxxxxxxx) xxxxxx xx xxxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxx se xxxxxxx xx dvěma xxxxxxx 70 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx extraktem x baňce s xxxxxxx xxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx odpaří do xxxxx x rotační xxxxxxx (4.2) při xxxxxxxx tlaku a xxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx x xxxxx xx rozpustí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx 10 xx odměrné xxxxx. Xxxxx x xxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx 1 xx 2 xx xxxxxxxxx x xxxx se xxxxxxx xx odměrné xxxxx. Xxxxx xx xxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxx množství xx xxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx (4.6). Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxx analýzu HPLC (5.6).
5.6 Analýza xxxxxx XXXX
5.6.1 Xxxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx indikativně. Xxxxx xxx použity xxxx parametry xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx:
- kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.4.1),
- xxxxxxx xxxx: směs xxxxxxxxx a vody,
- xxxxxxxxx rychlost: 1–1,5 xx/xxxxxx,
- xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx: 265 nm,
- xxxxx xxxxxxxx: 20 xx 50μx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kalibračního xxxxxxx (3.7.3) xxxxxxxxxxxx 4μx/xx, až do xxxxxxxx konstantních výšek xxxx ploch xxxx x xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2 Xxxxxxxxxx graf
Pro xxxxx xxxxxxxxxx roztok (3.7.3) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx každou koncentraci. Xxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx výšek xxxx xxxxx píků xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x μx/xx.
5.6.3 Xxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxx xx nastříkne xxxxxxx vzorku (5.5.) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, jaký byl xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
X xxxxxxxx hodnoty xxxxx (xxxxxx) píků methylbenzochátu x xxxxxxx xxxxxx xx určí koncentrace x xxxxxxx vzorku x μg/ml xxxxx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2.).
Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx w (xx/xx) xx vzorku xx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx
x =(c x 40)/x,
xx kterém xx
x = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x μx/xx,
x = xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x gramech.
7. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
7.1 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx anebo xxxxxxxx detektoru s xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (3.7.3.), xxxxxxxxxxx 10 μg/ml xxxxxxxxxxxxxxxx.
7.1.1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxxxxxxx roztoku (3.7.2.). Xxxxxxxx xxxxxxxxx methylbenzochátu xx xxx podobné xxxx xx předpokládaný xxxxx methylbenzochátu x xxxxxxxx xxxxxx.
Xxxx by xxxxx pouze ke xxxxxxx píku xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx množství xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx x polovině maximální xxxxx xxxx xxx xx přibližně 10 % původní šíře.
7.1.2 Xxxxxxxx diodového pole
Výsledky xxxx xxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:
x) při xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxx musí xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxx plus/minus 2 xx;
x) xxx xxxxxx xxxxx xxxx 220 x 350 xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušeného xxxxxx x standardu xxxxxxxxxxx xx vrcholu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ostatních částí xxxxxxx v rozsahu 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx nikde xxxxxxxx xxxx dvěma xxxxxxx xxxxxxxxxxx 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx;
x) xxx vlnové xxxxx mezi 220 x 350 xx xx xxxxx spektrum xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxxx xxxx zkoušeného xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 10 xx 100 % xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tohoto kritéria xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejná xxxxxx x jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nikde 15 % xxxxxxxxxx xxxxxxx xx vrcholu xxxx.
Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.
7.2 Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx 10 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx methylbenzochátu xxxx 4 a 20 xx/xx.
7.3 Výtěžnost
Výtěžnost xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 90 %.
8. Výsledky kruhového xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx analyzováno xxx xxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xxxx provedeny xxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx
|
Xxxxxxxx krmivo |
Sypké xxxxxx |
Xxxxxx |
Xxxxx krmivo |
Pelety |
|
|
Průměr (mg/kg) |
Nezjištěno |
4,50 |
4,50 |
8,90 |
8,70 |
|
Sr (xx/xx) |
— |
0,30 |
0,20 |
0,60 |
0,50 |
|
XXx (%) |
— |
6,70 |
4,40 |
6,70 |
5,70 |
|
XX (mg/kg) |
— |
0,40 |
0,50 |
0,90 |
1,00 |
|
CVR |
— |
8,90 |
11,10 |
10,10 |
11,50 |
|
Výtěžnost (%) |
— |
92,00 |
93,00 |
92,00 |
89,00 |
Xx = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXx = xxxxxxxx koeficient opakovatelnost
SR = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXX = xxxxxxxx xxxxxxxxxx reprodukovatelnosti