Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/ES
ze xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx metody Společenství xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x tryptofanu x xxxxxxxx
(Xxxx x xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. xxxxxxxx 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Rakouska, Xxxxxx x Xxxxxxx [2], x xxxxxxx na xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/EHS xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx krmiv za xxxxxx zjištění, xxx xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx a správních xxxxxxxx na xxxxxx x složení xxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx x analýzy.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx nařízením Komise (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx E xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxx xxxxx xxxxxxx xx premixů a xxxxx.
(3) Směrnice Xxxx 79/373/XXX xx dne 2. dubna 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx na xxx [5], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], a směrnice Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 o xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx výživy [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], xxxxxxx, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx uváděny xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx stanoveny xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X a xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxx.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x správní xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx předpisy xxxxxxxx xx 1. xxxx 2000.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
Xxxxxx 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 6. července 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Byrne
člen Komise
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. věst. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Xx. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST A XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Účel x xxxxxx použití
Tato xxxxxx je určena xxx xxxxxxxxx vitamínu X (retinolu) v xxxxxxxx x premixech. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx xxxx 0,550 μx all-trans-vitamín A xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 XX xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx draselného a xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X se xxxxxxx xxxxxxxx fází xxxxxx xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) za xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx x xxxx xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx sodného, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, c = 0,5 xxx/x v xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 g/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx xxx HPLC: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + objemově). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx použité xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, xxxxx čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 mg 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 ml xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x doplňte po xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitátu: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 80 xx palmitátu vitamínu X (3.12) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 1400 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 xx, xx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 mm x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx xxxx xxxxxxx (výkonnostní parametry: xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nastavením xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx s 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x vybavený zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx ramenem x xxxxxxxxxxxxx trubicí procházející xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx být horní xxxxxx kapaliny xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Všechny xxxxxxx musí xxx xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (za xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx vzorku
Rozmělněte xxxxxx xxx, aby xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 mm, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx obsahu vitamínu X, xxxxxxx x xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 mg XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 ml xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx kondenzátor (4.3) x nechejte xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx pomalým xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx vody x obsah xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx kvantitativně xxxxxxxxxxxx celkovým objemem 250 ml xxxx xx 1000 ml xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx postupně 25 xx xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx silně xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx s použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) a dvakrát 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x dělící xxxxxxx xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx suchý skládaný xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx nálevku a xxxxx 50 ml xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx vrstvy xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx byl xxxxx xxx xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx postranního ramene, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného válce, xxxxxxxxxx a dobře xxxxxxxxxxx. Nechejte xxxxxx xxxxxxx xx a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dělící xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx extrakce dalšími 100 xx petroléteru (3.2), xxxxx dvakrát 50 ml dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 ml xxxxx xx tvaru hrušky (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx dusíku (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx objemu (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx až 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na reverzní xxxxxx xxxxxx C18 (4.5.1) x koncentrace xx měřena xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx fluorescenčního xxxxxxxxx (excitace: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx alikvotní xxxx (např. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x střední xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic náplně 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Směs xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx/xxxxx: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx standardních xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx x 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx petroléterem (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx extraktu na xxxxxxx xxxxxxx odparce (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, odstraňte xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx rozpusťte zbytek x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 560 XX xxxxxxxx X/1 ml. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx použitím.
Pipetujte 2,0 ml tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 xx xxxxxxx baňky, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 IU xxxxxxxx X na xx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) nyrýsujte xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní roztok xxxxxxx X acetátu
Pipetujte 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 IU xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín A xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx mezi 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx pro xxxxxxx X xxxxxxx = 1 530 při 326 nm xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x doplňte xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Xxxxxx XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx a 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X alkohol = 957 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 ml xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx A, připraveného xxxxx 5.6.1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx odměrné xxxxx x xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx A xx xx. Změřte XX spektrum tohoto xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1 821 xxx 326 nm ve 2-xxxxxxxxx
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx pro xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx koncentraci roztoku xxxxxx v IU/ml xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx A x x IU/kg xx xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v XX/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) v xx
X2 = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v 5.4 x xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx v g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx pro analýzu xx nemělo xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 X xxxxxx tuku x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxx xxx doba saponifikace xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Oddělení xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % z xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [XX/xx] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXX E
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx X v xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxxx jako xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 mg XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx vitamínu X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X xx extrahován xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxx x, pokud xx xx nutné, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce účinné xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenčního xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah varu 40 až 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx sodný, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Roztok xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 xx x xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx charakteristikami xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Dusík, prostý xxxxxxx
3.10 DL-α-tokoferol xxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx xxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx baňky. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) a doplňte xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx roztoku xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 DL-α-tokoferol, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 mg XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx po značku xxxxxxx rozpouštědlem. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – viz 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx a xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx baňky, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 a 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, kuželovité, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Hruškovité baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým hrdlem, x adaptérem pro xxxxxxxx xxxxxxx plynu
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μm xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX nebo xxxxxxxxxxxxx detektor s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx o objemu 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x zátkou
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx trubicí procházející xxxxxxx. Nastavitelná trubice xxxx xxx spodní xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx xxxxxxx xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx použití xxxxxx x xxxxxxxx xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x kyslíku (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (vyhněte xx xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx s xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx bezprostředně před xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 g, 2 x až 25 x xxxxxx xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx postupně xx stálého kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x ponořte baňku xx xxxxx xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx (4.7). Zahřejte x xxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 25 minut xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx vypláchněte kondenzátor xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx teplotu.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx vypláchnutím xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx dělící xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx nebo do xxxxxxxxxxx přístroje. Xxxxx xxxx a xxxxxxx x kombinovaných xxxxxxxxx xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x nechejte ustát xxx minuty.
5.3.1 Extrakce x použitím dělící xxxxxxx (4.2.3)
Když se xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxx dělící nálevky (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx dvakrát 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud voda xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx dostačující). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte dělící xxxxxxx a filtr 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx petroléterem (3.2) x dobře xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx tlaku x xxxxxxx dusíku xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 ml xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, zazátkujte x dobře protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx jako xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx nálevky.
Promyjte kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx vzorku xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 xx xxxxx xx xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx sucha na xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx při teplotě xxxxx lázně nepřekračující 40 °C. Obnovte xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx od xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx by měla xxx x rozsahu 5 μx/xx xx 30 μx/xx).
5.5 Stanovení xxxxxx HPLC
Vitamín X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 nm) xxxx XX detektoru (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μl) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; ostatní xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx předpokladu, že xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 ml/min.
Detektor (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) nebo XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Kalibrace (DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx v 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Odpařte 25 xx tohoto xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx do xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.1.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μx/xx DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx etanolu (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx mělo xxx při 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm v xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x metanolu (3.3) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx na xx. Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx připraven xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx kalibračního xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 a 10,0 xx standardního pracovního xxxxxxx xx sérií 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxxx, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx). Za xxxxxxx středních xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml etanolem x změřte UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx maximum by xxxx xxx při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292nm x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx vitamínu X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx vztahu xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E w x mg/kg ve xxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · V2 / X1 · x [xx/xx]
xx které:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x roztoku vzorku (5.4) v μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x xxxxxx koncentrací xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxxx xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxx XXXX.
7.2 Xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx měření xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx XXX (3.12) a skladujte xxxxxx v xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT může xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- a δ xxxxxxxxxx xx xxxxx x použitím normální xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx přibližně 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Výsledky xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx krmivo |
Minerální xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx pro selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
sr [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [mg/kg] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
R [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX C
STANOVENÍ XXXXXXXXXX
1. Xxxx x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx určena pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx přidán xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx stanovení xxxxxxx tryptofanu xx xxxxxx extrahován xx xxxxx xxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx jsou stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx XXXX x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μX/xx)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), sušený pod xxxxxx xxxx pentoxid xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx pod vakuem xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx být xxxxx, xxx xxxxx Ba(OH)2. 8 X2X nadměrně xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, jež xxxx xxxxx stanovení) (xxx poznámky 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, w = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 g/ml
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Petroléter, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, c = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx do 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 6 mol/l:
Vezměte 492 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x vodou (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou (3.13). Skladujte při –18 oC po xxxx xxxxxxxxx čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx xxxxxxx xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx týdnů.
3.17 Kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx:
Xxxxxxx 2,00 ml koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx přibližně xxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx konečný xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx chraňte xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
3.18 Kyselina xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Roztok 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) ve 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 xx xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x metanolu (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx xxxxx (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxxx xxx XXXX xx spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx magnetické xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx prošel xxxxx x otvory 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx x vysokým xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (extrakt)
Odvažte x xxxxxxxxx xx 1 xx příslušné xxxxxxxx (1–5 g) xxxxxxxxxxxx vzorku (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx baňky. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx nebo xxxxxxx 60 minut x xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxxx míchadla (4.7). Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxx xX xx 3,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx obdrželi xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx kalibrační xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony HPLC xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx chromatografii xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x extrakty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx extrakty xxxxxx den, mohou xxx skladovány při 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Stanovení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 g xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx dávka xxxxxx by měla xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx vířivém xxxxxx (4.8) nebo magnetickém xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx magnet xx xxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxx uzavřete. Přeneste xx autoklávu (4.6) x xxxxxx xxxxx x párou na 30–60 xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx x autoklávujte xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Xxx xxxxxxx xx krystalizaci Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 ml xxxx o xxxxxxxx xxxxxxx. Mírně xxxxxxxxxxxxx, xxxx míchejte. Xxxxxxxx 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Zchlaďte xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx dobu 15 xxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu ve xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chlorovodíkovou, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx x upravte xX na 3,0 x xxxxxxxx XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx koncentraci mezi 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx odměrné xxxxx x xxxxxxx objemu x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx do kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Pokračujte x xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 5.4.
Chraňte standardní xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, mohou xxx xxxxxxxxxx při 5 °X xx xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.4 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Kolona pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 x kyseliny xxxxxx (3.18) + 900 ml vody (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 ml). Xxxxxxx xX xx 5,00 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx toku: 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 nm, xxxxx: 356 nm
Vstřikový xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × X × X × X × MW / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x xxxxxxxxxx xx 100g xxxxxx
X = xxxxxx píku xxxxxxxxx standardu, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 xx) přidaný xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu (3.15) x μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx xxxxxxxxx při xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx standardu, xxxxxxxx (5.2) nebo xxxxxxxxxxx (5.3)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) x xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku x x (opravená na xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx tryptofanu (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx uspořádána xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 laboratořích k xxxxxxx metody xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x následující tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx výsledků (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx testem)
sr: standardní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx reprodukovatelnosti, %
|
Vzorek 1 Krmivo xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx doplněné X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Krmný xxxxxxxxxx pro xxxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
|
x |
50 |
55 |
50 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [g/kg] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
CVR [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx studijní xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, xx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx ve 13 xxxxxxxxxxxx k ověření xxxxxx pro extrakci xxxxxxx tryptofanu. Replikované (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Směs xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Xxxx pšenice xx sójou (= xxxxxx 4) s xxxxxxxx tryptofanem (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx vzorky byly xxxxxxxxxxx xx v xxxxx laboratořích s xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx hydrolýzy. Výsledky xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx krmivo xxx xxxxxxx (XXX 117) |
Xxxxxx 2 Xxxxx-xxxxx xxxx xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Vzorek 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx mléko (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [g/kg] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
sr [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx tryptofanem x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání následované xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Metanol |
||
|
Gradientový xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
15 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 xxx. |
100 % X |
0 % B |
|
|
Úroveň xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková xxxx xxxx: |
xxxxxxxxx 33 minut |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxx XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx plnícího xxxxxxxxx. Xxxxxxx systém xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Navíc xx důležité, aby xxxx degradační xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx čára xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxx dostatečně xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx produktů, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, by xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx dát xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxxx s xxxxxxxxxx (normální) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx velikosti píků xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx byly v xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx (xxxx) příliš xxxx (malé) xxxx xxxxxx vysoký (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx změněným xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx barnatý
Stářím xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, což xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Deutscher Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXXXX).