Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/45/ES
ze xxx 6. července 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx stanovení xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX EVROPSKÝCH XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx společenství,
s ohledem xx xxxxxxxx Xxxx 70/373/XXX xx xxx 20. července 1970, xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Finska x Xxxxxxx [2], x zejména xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx k tomu, xx:
(1) Směrnice 70/373/XXX xxxxxxx, že xxxxxx xxxxxxxx xxxxx za xxxxxx xxxxxxxx, zda xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x správních xxxxxxxx na xxxxxx x složení krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx pro odběr xxxxxx x xxxxxxx.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/XXX xx xxx 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách x xxxxxxxx [3], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) x. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx A a xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx látky přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Xxxx 79/373/XXX xx xxx 2. xxxxx 1979 x uvádění krmných xxxxx xx xxx [5], naposledy pozměněná xxxxxxxx Komise 2000/16/XX [6], x xxxxxxxx Xxxx 93/74/XXX xx xxx 13. xxxx 1993 o xxxxxxxx xxxxxxxx xx zvláštním xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx.
(5) Opatření xxxx xxxxxxxx jsou x souladu xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxx xxx krmiva,
PŘIJALA XXXX XXXXXXXX:
Článek 1
Xxxxxxx státy xxxxxxx, aby xx xxxxxx xxxxxxxx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxxx X a xxxxxxxxxx x xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx metodami xxxxxxxxxxx x příloze.
Xxxxxx 2
Členské státy xxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx směrnicí nejpozději xx 31. srpna 2000. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx vyhlášení. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx určena xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx dne 6. xxxxxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Xxxxxx
[1] Xx. xxxx. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Xx. xxxx. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Xx. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Xx. věst. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Úř. xxxx. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. xxxx. X 125, 23.5.1996, x. 35.
PŘÍLOHA
ČÁST A XXXXXXXXX XXXXXXXX A
1. Xxxx x oblast použití
Tato xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxx vitamínu X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx X zahrnuje xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx a xxxx cis xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx X xx xxxxxxxx x mezinárodních xxxxxxxxxx (IU) xx xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx xxxx 0,344 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2000 XX vitamínu X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx draselného a xxxxxxx X xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je odstraněno xxxxxxxxx a xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx x, xxxxx xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx použití XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx a jeho xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (viz 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 xxx/x v xxxxxxxxx, β = 120 x/x (pro x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx bude xxxxxxxx charakteristikami použité xxxxxx.
3.10 Dusík, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, extra čistý, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,1 xx 50 xx xxxxxxx xxxxxxxx A (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxx xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X palmitát, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx all-trans-vitamín X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x přesností xx 0,1 mg 80 xx palmitátu xxxxxxxx X (3.12) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx ve 2-xxxxxxxxx (3.8) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx rozpouštědlem. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný xxxxx xxxx xxx stanoven xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 ml
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx zábrusovými xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxx 300 mm, xx zábrusovým xxxxxx, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu.
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx xxxxxxxx fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx jednotlivý xxx xxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx xx podmínek XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlnové xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x magnetickým xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) xxxxxxxxxxx xx:
4.8.1 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x vybavený xxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx trubicí xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx být horní xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X je citlivý xxxx (UV) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v nepřítomnosti xxxxxx (za použití xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx občasným povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx tak, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx dbejte, xxx xxxxxxx x zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx a saponifikací, xxxxx xxxx dojít xx xxxxxxx vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,01 x, 2 x xx 25 g xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx xxxxxxx (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx k varu x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Potom xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x nechejte xxxxxxx xxxxxxx 25 xxxxx za stálého xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x obsah xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte dekantací xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx objemem 250 xx xxxx xx 1000 ml xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) a 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx xx dělící nálevky xxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Podíl vody x xxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx roztocích xxxx xxx okolo 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx vrstvu petroléteru xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 ml petroléteru (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x dělící nálevce xxxxxxx 100 ml xxxxxxx xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby xx zabránilo tvorbě xxxxxx) a potom xxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx nezůstává xxxxxxxx xx xxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx suchý skládaný xxxxx xxx dělení xxxx (4.4), aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx do 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx nálevku x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx se xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), nahraďte zátku xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x nasměrujte xxxxx konec xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx xxx hladinou xxxxxxxx. Xx pomoci xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx ramene, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx válce, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx dělící nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxxx vrstvy xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx petroléteru xxx, jak xx xx xxxxxxx v 5.3.1, x pokračujte xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx pro HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx část xxxxxxx xxxxxxxxxxx (z 5.3.1 xxxx 5.3.2) do 250 ml baňky xx tvaru hrušky (4.2.4). Odpařte xxxxxxxxxxxx xxxxx do xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx vodní lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x odpojte xxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem dusíku (3.10) x ihned xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) metanolu (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu A xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XX detektoru (325 xx) xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, xxxxx: 475 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx x 5.4 x vymývejte mobilní xxxx (3.9). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píku (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 nebo 10 μx xxxx ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) a xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx toku: 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): XX xxxxxxxx (325 nm) xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 nm)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X palmitátu (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, xxx je xx xxxxxxx v 5.2, xxx xxx xxxxxxxx XXX. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 ml xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) téměř xx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 560 IU xxxxxxxx X/1 xx. Xxxxxx obsah xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx pracovní xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx tohoto xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx baňky, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx ml.
5.6.2 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 5,0 x 10,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) a xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A na xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX xxxxxxxx (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx standardních xxxxxxx
5.6.3.1 Zásobní roztok xxxxxxx X xxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx zásobního xxxxxxx vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 XX xxxxxxxx A na xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x doplňte po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu A xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Pipetujte 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxx 325 xx a 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx X xxxxxxx = 957 xxx 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 ml nezředěného xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx A, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx 5,0 ml tohoto xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xx xxxxxx 2-propanolem (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Extinkční xxxxxxx xxxx xxx xxxx 325 xx x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1 821 při 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx výšky (xxxxxx) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v XX/xx xx vztahu xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx X x x XX/xx xx xxxxxx xx dán xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 · 1 000 / X1 · m (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu A x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x XX/xx
X1 = xxxxx roztoku xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx v x
7. Xxxxxxxx
7.1 X vzorků x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx vsázek (hmotnostní xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx nemělo xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx etanolu (3.1), x rozrušení emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx čistých xxxx xx xxxx xxx doba xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx normální xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto roztoku xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx stanovení xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx hodnot
sr: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
R [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
XXX [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU E
1. Xxxx a oblast xxxxxxx
Xxxx metoda je xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X x xxxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx E xx vyjádřen xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx DL-α-tokoferol xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (xxxxxxx X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2 xx xxxxxxxx E/kg.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx je xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx X je xxxxxxxxxx xx petroléteru. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno odpařením x zbytek xx xxxxxxxx x xxxxxxxx x, pokud je xx xxxxx, zředí xx xxxxxxxxxxx koncentraci. Xxxxx vitamínu E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx účinné xxxxxxxxxx chromatografie (RP-HPLC) xx xxxxxxx XX xxxx fluorescenčního xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40 až 60 °X
3.3 Metanol
3.4 Roztok xxxxxxxxx draselného, β = 50 x/100 xx
3.5 Roztok xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 g/100 xx (xxx 7.7 xxxxxxxx)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Xx2X. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx sodného, x = 0,5 xxx/x x xxxxxxxxx, β = 120 x/x (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: xxxx metanolu (3.3) x vody, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx poměr bude xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx, ověřené xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x přesností xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) a doplňte xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx v xxxxxxx (3.1) x xxxxxxx xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – viz 7.4 xxxxxxxx).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační vakuová xxxxxxx
4.2 Xxxxxx z xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Dělící xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx baňky, 250 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx oddělení xxxx, xxxxxx 185 xx (xxxx. Xxxxxxxxxx &xxx; Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 HPLC výbava xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 nebo 10 μx nebo xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 mm xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní xxxxx x xxxxxxxxxxx míchadlem
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx spodní xxxxx xx tvaru xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx, aby xxxxx být xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.
5. Xxxxxx
Xxxxxxxx:
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xxxx (UV) světlu x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx x nepřítomnosti xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, aby xxxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx E xxxxxxx x přesností xx 0,01 g, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx kroužení 130 xx xxxxxxx (3.1), přibližně 100 xx XXX (3.12), 2 xx xxxxxxx xxxxxxxxx sodného (3.5) x 2 ml xxxxxxx sulfidu xxxxxxx (3.6). Připojte xxxxxxxxxxx (4.3) k xxxxx x ponořte xxxxx xx vodní lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx roztoku hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) přes xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx odtékat xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) xxxx xx xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx saponifikační xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxx xxxx do xxxxxxxxxxx přístroje. Xxxxx xxxx a etanolu x kombinovaných xxxxxxxxx xx měl xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxx dělící xxxxxxx (4.2.3). Opakujte xxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Promyjte xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 ml dávkami xxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx tvorbě xxxxxx) x xxxxx opakovaným xxxxxxxx s dalšími 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx voda xxxxxxxxx bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx obyčejně xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx filtr xxx xxxxxx fází (4.4), xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte dělící xxxxxxx x filtr 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx po xxxxxx petroléterem (3.2) x xxxxx promíchejte.
5.3.2 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx oddělily (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) za xxxxxxxxxx xxxxxx (4.8.2) x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U nastavitelné xxxxxxx tak, aby xxx právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx vrstvu xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) do xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx protřepejte. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx nálevky xxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx dvakrát 50 xx xxxxxxx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx, xxx je to xxxxxxx x 5.3.1, x xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku xxxxxx xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 nebo 5.3.2) xx 250 xx baňky ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx téměř xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °C. Obnovte xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx xxxxx od xxxxxxx vakuové odparky. Xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned rozpusťte xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 μg/ml xx 30 μx/xx).
5.5 Xxxxxxxxx xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx koloně X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního detektoru (xxxxxxxx: 295 xx, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Vstříkněte xxxxxxxxx část (xxxx. 20 μx) xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx fází (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx xxxxxxx stejného xxxxxx a xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx kalibračních xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx HPLC
Následující xxxxxxxx xxxx předkládány xxxx xxxxxxxxxx; ostatní podmínky xxxxx být použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx: 295 nm/emise: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx DL-α-tokoferolu)
5.6.1 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx s xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1) a xxxxxxxxxxxx, jak xx xx popsáno v 5.2. Následně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a xxxxxxx xx 500 ml xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto extraktu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx v 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 45,5 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 50 μx DL-α-tokoferol xxxxxxx xx xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx roztok xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx xxxx použitím.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx xxxxxxxxx baněk, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx těchto xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μg/ml DL-α-tokoferol xxxxxxx, tj. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μg/ml DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx píků (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx graf.
5.6.1.3 XX standardizace xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferol xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx etanolem x změřte UV xxxxxxxx xxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx (3.1) xx spektrofotometru (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284nm x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx měla být xxxxxxx extinkce 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Standard XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx pipetou 2,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx, rozpusťte x metanolu (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx sérií 20 xx xxxxxxxxx xxxxx, doplňte po xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoků xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, tj. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μg/ml XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxxxx několikrát 20 μl každého xxxxxxxxxxxx roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx výšek xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Xxxxxxxx 2,0 xx zásobního roztoku XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) xx 25,0 ml xxxxxxxx x změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 xxx 292xx x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,6.
6. Výpočet výsledků
Ze xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μx/xx (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx kalibračnímu xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Xxxxx xxxxxxxx E w x xx/xx ve xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · X2 / X1 · m [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu E x roztoku xxxxxx (5.4) v μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = xxxxx xxxxxxx odebraných v 5.4 v xx
x = hmota xxxxxxxx xxxxx x g
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx HPLC.
7.2 Množství xxxx ve vzorku xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2x.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx dělení, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 xxxxxxxx xx roztoku (3.10.1 xxxx 3.10.2) xxxxxxxxx 10 xx BHT (3.12) a skladujte xxxxxx x chladničce (xxxxxxxxx xxxx skladovatelnosti xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx XXX může xxx xxxxxx hydrochinon.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx kolony.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx mezi xxxxxxxx xxxx paralelních stanovení xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx spolupráce [2]
X: xxxxx xxxxxxxxxx
x: počet xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx selata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
n |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
střed [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [mg/kg] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
XXXX X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Nerozlišuje mezi X- a X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nasyceným xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx x zahříván při 110 °X xx 20 xxxxx. Po xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu je xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx kyselých xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x hydrolyzátu xxxx xxxxxxxx pomocí HPLC x fluorescenční xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxxxxxxx destilovaná xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx kvality xxxx xxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx > 99 %), sušený xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Vnitřní standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx pod vakuem xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.4 Xxxx-xxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (xxxx xxx dbáno, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 H2O xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx vzduchu, xxx xx zabránilo xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx xxxxx
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Kyselina xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 g/ml
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Xxxxxxxxxx, xxxxxx varu 40–60 °X
3.10 Xxxxxx hydroxidu xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx xxxx x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx chlorovodíková, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx HCL (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx HCL (3.7) x doplňte xx 1 x vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 ml kyseliny xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Rozpusťte 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx při –18 xX po xxxx maximálně čtyř xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 x α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx odměrné xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x doplňte xx xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte xxx –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxx xxxxx (3.1) x metanolem (3.8) xx xxxxxxxxx stejný xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx hydrolyzát.
Tento xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx čerstvý xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxx.
3.18 Xxxxxxxx octová
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Xxxxxxxxxxx &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx metanolu (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 xx). Upravte xX xx 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml vodou (3.1).
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx
4.2 Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 3 μx nebo ekvivalent
4.3 xX metr
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, objem 125 xx, xx xxxxxxx xxxxxx x šroubovacím xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx xxxxx, 0,45 μm
4.6 Xxxxxxxx, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) baru
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx xxxxx
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x otvory 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx teplotě xxxxxxxxxxxxx 50 °X, xxxx zmrazením. Xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxx mletím extrahovány xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 mg příslušné xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Erlenmeyerovy xxxxx. Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x (3.13) x 5,00 xx xxxxxxxxxxxxxxx vnitřního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx třepačky, xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxx usadit xxxxxxxx a pipetujte 10,0 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx do xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 ml xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte xX xx 3,0 za xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x = 1,0 xxx/x (3.10). Přidejte xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 x 30 % xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x vhodném xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx objem xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx stejný xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Před vstříknutím xx xxxxxx HPLC xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a extrakty xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Pokud není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx skladovány xxx 5 °X xx xxxxxxxxx dobu tří xxx.
5.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx s xxxxxxxxx xx 0,2 xx xx 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx láhve (4.4). Odvážená xxxxx xxxxxx by měla xxx obsah dusíku xxxxx 10 xx. Xxxxxxxx 8,4 x xxxx-xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.4) a 10 xx xxxx. Promíchejte xx xxxxxxx mixeru (4.8) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Opláchněte xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx (4.6) x vroucí vodou x párou na 30–60 minut. Xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °C xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx snižte xxxxxxx xxxxx xxx 100 °X. Aby xxxxxxx ke krystalizaci Xx(XX)2. 8 H2O, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxx 30 xx xxxx o pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 ml koncentrovaného xxxxxxx vnitřního standardu (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx/xxxxxx xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx přidejte 5 xx xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 xxx/x (3.14). Xxxxxxxx nádobu ve xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx a upravte xX na 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Přidejte xxxxxxxxx metanolu, abyste xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu v xxxxxxxx xxxxxx. Převeďte xx odměrné baňky x vhodném xxxxxx x zřeďte xxxxx xx xxxxxxxxxx objem xxxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx sraženinu.
Před xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx několik xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x chromatografii podle xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx a hydrolyzáty xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx hydrolyzáty xxxxxx xxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx tří xxx.
5.4 Stanovení pomocí XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxx xxxxxxxxxxx vymývání xxxx xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx; xxxxxxx podmínky smějí xxx xxxxxxx za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxx xxxxxxxx 9.1 x 9.2):
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.2): 125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 3 μx nebo xxxxxxxxxx
Xxxxxxx kolony Pokojová xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.22): 3,00 g xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx roztoku (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5,00 x použitím xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 ml vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx xxxx: xxxxxxxxx 34 minut
Detekční xxxxxx délka: xxxxxxxx: 280 xx, emise: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μx
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × X × X × E × XX / X × G × H × 10&xxxx;000 × X = x tryptofanu xx 100g vzorku
A = plocha xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
B = plocha xxxx xxxxxxxxxx, extraktu (5.2) xxxx hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxx roztoku xxxxxxxxxxxxxxx tryptofanu (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku tryptofanu (3.15) x μmolech/ml (= 2,50) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 xx) xxxx xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha píku xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) nebo hydrolyzátu (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
H = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.16) x xx (= 2,00) xxxxxxxxx xx kalibračního xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
W = xxxxxxxx xxxxxx x x (opravená na xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx vzorek sušen x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx výsledky dvou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxxx porovnání) xxxx uspořádána xxx, xx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 12 laboratořích x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxx xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx xxx prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [g/kg] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
r [x/xx] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
XXx [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [g/kg] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
R [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx (třetí xxxxxxxx xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxx xxxxxx byly xxxxxxxxxxx xx xx 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx tryptofanu. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v následující xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx zadržených xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka reprodukovatelnosti
r: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx xx sójou |
Vzorek 5 Xxxx xxxxxxx xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [x/xx] |
0,391 |
0,931 |
|
xx [x/xx] |
0,005 |
0,012 |
|
x [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
sR [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx, že xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx tryptofanu xxx hydrolýzy. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (identifikované Cochran-Dixonovým xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx opakovatelnosti, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná rybí xxxxxx (XXX 118) |
Vzorek 3 Xxxxxx xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx vymývání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistěním xxxxxx:
|
Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 μx nebo obdobné |
||
|
Teplota xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x KH2PO4/metanol, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Metanol |
||
|
Gradientový xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % A |
0 % B |
|
15 xxx. |
100 % A |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % A |
40 % B |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 xx/xxx. |
||
|
Xxxxxxx doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx podle typu XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx materiálu. Xxxxxxx systém musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx standardem. Navíc xx důležité, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx standardu pro xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx běhu xxxx dostatečně xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jinak xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx následný xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx odezvu. Xxxxxxxx xxxxxx by xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je důležité, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx rozsahu XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) xxx xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx standardu xx (xxxx) xxxxxx xxxx (malé) xxxx xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx být xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx projevuje x xxxxxxx xxxxxxx xxx stanovení pomocí XXXX, xxx xxxx x xxxxxxxxxx způsobovat xxxxx xxxxxxxx.
[1] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Řízené xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).