Směrnice Komise 2000/45/XX
xx xxx 6. xxxxxxxx 2000,
xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx Společenství xxx stanovení xxxxxxxx X, vitamínu X x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx
(Xxxx x významem xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x založení Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Rady 70/373/XXX ze dne 20. července 1970, xxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxx vzorků x xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx kontrolu xxxxx [1], naposledy xxxxxxxxxx aktem o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxx x Švédska [2], x xxxxxxx xx xxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x tomu, xx:
(1) Xxxxxxxx 70/373/XXX xxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx požadavky xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx x xxxxxxx krmiv, xxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx x analýzy.
(2) Xxxxxxxx Rady 70/524/EHS xx dne 23. xxxxxxxxx 1970 x xxxxxxxxxxx látkách v xxxxxxxx [3], naposledy xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx (XX) č. 2439/1999 xx xxx 17. xxxxxxxxx 1999 [4], xxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxx A a xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxx látky přidány xx xxxxxxx x xxxxx.
(3) Xxxxxxxx Rady 79/373/XXX xx dne 2. xxxxx 1979 x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxx [5], xxxxxxxxx pozměněná xxxxxxxx Xxxxxx 2000/16/XX [6], a směrnice Xxxx 93/74/EHS ze xxx 13. září 1993 o krmivech xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx [7], xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 96/25/XX [8], stanoví, xx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx.
(4) Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx látek.
(5) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx výboru xxx xxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxx X x xxxxxxxxxx x krmivech a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze.
Xxxxxx 2
Xxxxxxx státy xxxxxx x účinnost xxxxxx a správní xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 31. xxxxx 2000. Xxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 1. září 2000.
Xxxx opatření xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx nebo xxxx být xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
Článek 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v platnost xxxxxxxx dnem xx xxxxxxxxx v Úředním xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx směrnice xx xxxxxx členským xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 6. xxxxxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxx Xxxxx
xxxx Komise
[1] Xx. věst. X 170, 3.8.1970, x. 2.
[2] Xx. xxxx. X 241, 29.8.1994, x. 1.
[3] Úř. xxxx. X 270, 14.12.1970, x. 1.
[4] Úř. věst. X 297, 18.11.1999, x. 8.
[5] Úř. xxxx. X 86, 6.4.1979, x. 30.
[6] Úř. xxxx. X 105, 3.5.2000, x. 36.
[7] Xx. věst. X 237, 22.9.1993, x. 23.
[8] Úř. věst. X 125, 23.5.1996, x. 35.
XXXXXXX
XXXX X XXXXXXXXX XXXXXXXX X
1. Xxxx x oblast xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X (xxxxxxxx) x xxxxxxxx a premixech. Xxxxxxx X xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx xxxxxxx x xxxx cis xxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx xxxxx metodou. Xxxxx xxxxxxxx A xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (XX) na xx. Xxxxx XX xxxxxxxx xxxxxxxx 0,300 μx all-trans-vitamín A xxxxxxxx xxxx 0,344 μx all-trans-vitamín A xxxxxxx xxxx 0,550 μx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx 2000 IU xxxxxxxx X/xx.
2. Princip
Vzorek je xxxxxxxxxxxx etanolovým xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx X je xxxxxxxxxx do petroléteru. Xxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxxx a, pokud xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Obsah xxxxxxxx X xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx kapalinové xxxxxxxxxxxxxx (XX-XXXX) xx použití XX xxxx fluorescenční xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx parametry xxxx vybírány tak, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx A xxxxxxxx x jeho xxx izomerů.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx 40 xx 60 °C
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 x/100 ml
3.5 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, β = 10 x/100 ml (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx xxxxx, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, x = 0,5 mol/l x xxxxxxxxx, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 poznámky)
3.7 Xxxxxx fenolftaleinu, β = 2 x/100 xx v xxxxxxx (3.1)
3.8 2-propanol
3.9 Mobilní xxxx xxx XXXX: xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.10 Xxxxx, xxxxxx xxxxxxx
3.11 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxx, extra xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 2,80 x 106 XX/x
3.11.1 Xxxxxxx roztok xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxx: Xxxxxxx s přesností xx 0,1 xx 50 mg xxxxxxx xxxxxxxx X (3.11) xx 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte xx 2-propanolu (3.8) x xxxxxxx xx xxxxxx stejným xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 1400 XX xxxxxxxx X xx xx. Přesný xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.1.
3.12 Xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. 1,80 x 106 XX/x.
3.12.1 Xxxxxxx xxxxxx xxx-xxxxx-xxxxxxx X xxxxxxxxx: Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,1 xx 80 xx xxxxxxxxx vitamínu X (3.12) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Rozpusťte ve 2-xxxxxxxxx (3.8) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx xx 1400 IU xxxxxxxx X xx xx. Přesný obsah xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx 5.6.3.2.
3.13 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (xxx 7.5 xxxxxxxx)
4. Přístroje x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Xxxxxx x xxxxxxxx skla
4.2.1 Xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 xx, xx xxxxxxxxxxx hrdly
4.2.2 Xxxxxxx xxxxx xx zábrusovými xxxxxxx, xxxxxxxxx, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 xx, se xxxxxxxxxxx hrdly
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 xx, xx zábrusovým xxxxxx, x adaptérem xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.
4.4 Xxxxxxxx filtrační xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx, xxxxxx 185 mm (xxxx. Xxxxxxxxxx & Xxxxxxx 597 HY 1/2)
4.5 XXXX xxxxxx xx vstřikovacím xxxxxxxx
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx xxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx: xxxxx xxxxxxxxxx pík xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx XXXX)
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Xxxxxxxxxxxxxxx x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Vodní lázeň x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx x xxxxxx 1x xxxxxxxx zábrusovým xxxxxx a xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx trubicí procházející xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx ve xxxxx xxxxxxx X x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxx tak, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena do xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X xx citlivý xxxx (XX) xxxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx z opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hliníkovou fólií) x xxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx nad xxxxxxxxx musí být xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx povolením xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k zahřátí. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx obsahu xxxxxxxx X, xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,01 x, 2 x xx 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx s xxxxxxx xxxx nebo Xxxxxxxxxxxxx baňky (4.2.1). Xxxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.13), 2 xx roztoku xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) a 2 xx xxxxxxx xxxxxxx sodného (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx a xxxxxxx xxxxx xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx k xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx minut. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) a xxxxxxxx xxxxxxx dalších 25 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Potom xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 ml vody x obsah baňky xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Extrakce
Převeďte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 xx xxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx (4.8). Vypláchněte xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 ml xxxxxxx (3.1) x 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx výplachy xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx extrakčního xxxxxxxxx. Xxxxx vody x etanolu v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx dvě xxxxxx.
5.3.1 Xxxxxxxx x použitím xxxxxx xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx další xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx xxxx extrakci xxxxxxx 100 ml xxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx nálevce xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx xxxxxxxxxx třepáním s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, dokud xxxx nezůstává bezbarvá xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx extrakt xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx (4.4), xxx xx odstranila xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xx 500 xx odměrné xxxxx (4.2.2). Vypláchněte xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Extrakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx válce (4.8.1) xx zábrusovou xxxxxx (4.8.2) a xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx trubice tak, xxx byl právě xxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxx xxxxx x rozvodu dusíku xx postranního ramene, xxxxxxxx vrchní xxxxxx xxxxxxxxxxx do 1000 xx dělící nálevky (4.2.3) Přidejte 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx skleněného xxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx se x xxxxxxxx vrchní xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx předtím. Xxxxxxxx xxxxxx extrakce dalšími 100 xx petroléteru (3.2), potom dvakrát 50 xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dělící xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty petroléteru xxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.3.1, a xxxxxxxxxx xxx xx xxx xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro HPLC
Odpipetujte xxxxxxxxx xxxx roztoku xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 xxxx 5.3.2) xx 250 xx baňky xx tvaru xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx vakuové xxxxxxx (4.1) xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx vodní lázně xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.10) x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Odstraňte zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.10) a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx vitamínu X xx xxxx xxx x xxxxxxx 5 XX/xx xx 30 XX/xx).
5.5 Xxxxxxxxx pomocí XXXX
Xxxxxxx A xx xxxxxxx xx reverzní xxxxxx koloně X18 (4.5.1) a xxxxxxxxxxx xx měřena pomocí XX xxxxxxxxx (325 xx) nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx: 325 xx, emise: 475 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxx. 20 μx) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.9). Vypočtěte xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx stejného vzorku x xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) několika vstřiků xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx podmínky xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona pro xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo ekvivalent
Mobilní xxxx (3.9):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, xxxx. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 – 2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2):&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx;&xxxx; UV xxxxxxxx (325 xx) xxxx fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 325 nm/emise: 475 xx)
5.6 Xxxxxxxxx
5.6.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx 20 ml xxxxxxxxx roztoku vitamín X xxxxxxx (3.11.1) xxxx 20 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) xx 500 xx xxxxx x plochým xxxx nebo Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, xxx xx xx xxxxxxx x 5.2, xxx bez xxxxxxxx BHT. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 x xxxxxxx do 500 xx xxxxxxxxxxxx (3.2). Xxxxxxx 100 xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx sucha, odstraňte xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx proudem xxxxxx (3.10) x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x 10,0 ml xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 560 IU xxxxxxxx A/1 xx. Xxxxxx xxxxx xx xxxxxxx podle 5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx být čerstvě xxxxxxxxx před xxxxxxxx.
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 20 ml xxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x promíchejte. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X xx xx.
5.6.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx graf
Převeďte 1,0, 2,0, 5,0 a 10,0 ml xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální koncentrace xxxxxx roztoků jsou 2,8, 5,6, 14,0 x 28,0 XX xxxxxxxx A xx xx.
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx píků (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx odpovídající xxxxxxxxx XX kontroly (5.6.3.3).
5.6.3 XX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx
5.6.3.1 Xxxxxxx roztok xxxxxxx A acetátu
Pipetujte 2,0 xx zásobního xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx (3.11.1) xx 50 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2) x xxxxxxx po značku 2-xxxxxxxxxx (3.8) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto roztoku xx 56 XX xxxxxxxx A xx xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxx do 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je 6,72 XX vitamínu X xx xx. Změřte XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-propanolu (3.8) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 xx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X:
XX vitamínu X/xx = E326 × 19,0
E1%1cm xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 1&xxxx;530 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.2 Zásobní xxxxxx xxxxxxx A xxxxxxxxx
Xxxxxxxxx 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X xxxxxxxxx (3.12.1) do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8) Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 56 XX xxxxxxxx X na xx. Xxxxxxxxx 3,0 xx xxxxxx zředěného xxxxxxx vitamín X xxxxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x doplňte po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx 6,72 XX vitamínu X xx ml. Xxxxxx XX xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx proti 2-xxxxxxxxx (3.8) ve spektrofotometru (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Extinkční maximum xxxx xxx xxxx 325 xx a 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx X:
XX xxxxxxxx X/xx = E326 × 19,0
X1%1xx xxx xxxxxxx A xxxxxxx = 957 xxx 326 xx ve 2-xxxxxxxxx
5.6.3.3 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vitamínu X
Xxxxxxxxx 3,0 ml nezředěného xxxxxxxxxxxx pracovního xxxxxxx xxxxxxxx X, xxxxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1 do 50 xx odměrné xxxxx (4.2.2) a xxxxxxx po xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Pipetujte 5,0 ml xxxxxx xxxxxxx xx 25 xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx 2-xxxxxxxxxx (3.8). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxx je 6,72 XX xxxxxxxx X xx xx. Xxxxxx XX spektrum xxxxxx xxxxxxx xxxxx 2-xxxxxxxxx (3.8) ve xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) mezi 300 xx x 400 xx. Xxxxxxxxx maximum xxxx xxx xxxx 325 nm x 327 nm.
Výpočet obsahu xxxxxxxx A:
IU xxxxxxxx X/xx = X325 × 18,3
E1%1cm xxx xxxxxxx A alkohol = 1 821 při 326 xx xx 2-xxxxxxxxx
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (plochy) xxxx xxx roztok xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x XX/xx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx grafu (5.6.2).
Xxxxx xxxxxxxx A x x XX/xx xx xxxxxx je xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
x = 500 · β · V2 · 1 000 / X1 · x (XX=xx)
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx xxxxxxxx A x xxxxxxx xxxxxx (5.4) x IU/ml
V1 = objem xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 v xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 X xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X může xxx užitečné xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxx: 25 g) xx jednoho xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxx HPLC.
7.2 Xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx nemělo překročit 2x.
7.3 Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx 10 xx xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx emulze.
7.4 X xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx měla xxx doba saponifikace xxxxxxxxxxx na 45–60 xxxxx.
7.5 Xxxxxxx BHT xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx možné x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 150 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Namísto xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito přibližně 50 mg XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x stejného xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 15 % z xxxxxxx xxxxxxxx.
9. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxx [1]
L: xxxxx laboratoří
n: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx koncentrát |
Bílkovinný xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
13 |
12 |
13 |
12 |
13 |
|
x |
48 |
45 |
47 |
46 |
49 |
|
xxxxx [XX/xx] |
17,02 x 106 |
1,21 x 106 |
537100 |
151800 |
18070 |
|
xx [IU/kg] |
0,51 x 106 |
0,039 x 106 |
22080 |
12280 |
682 |
|
x [XX/xx] |
1,43 x 106 |
0,109 x 106 |
61824 |
34384 |
1910 |
|
XXx [XX/xx] |
3,0 |
3,5 |
4,1 |
8,1 |
3,8 |
|
xX [XX/xx] |
1,36 x 106 |
0,069 x 106 |
46300 |
23060 |
3614 |
|
X [XX/xx] |
3,81 x 106 |
0,193 x 106 |
129640 |
64568 |
10119 |
|
CVR [%] |
8,0 |
6,2 |
8,6 |
15 |
20 |
XXXX X
XXXXXXXXX VITAMÍNU X
1. Xxxx a xxxxxx xxxxxxx
Xxxx metoda xx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxx E x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxx vitamínu X xx xxxxxxxx xxxx xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. 1 xx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,91 xx XX-α-xxxxxxxxxx (vitamín X).
Xxx xxxxxxxxxxxxxxx je 2 xx xxxxxxxx X/xx.
2. Xxxxxxx
Xxxxxx xx hydrolyzován xxxxxxxxxx xxxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx x vitamín X je xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx odstraněno odpařením x xxxxxx xx xxxxxxxx x metanolu x, xxxxx je xx nutné, xxxxx xx požadovanou xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx E xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vysoce účinné xxxxxxxxxx chromatografie (XX-XXXX) xx xxxxxxx XX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx detekce.
3. Xxxxxxx
3.1 Xxxxxx, σ = 96 %
3.2 Xxxxxxxxxx, rozsah xxxx 40 xx 60 °X
3.3 Xxxxxxx
3.4 Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, β = 50 g/100 xx
3.5 Roztok askorbanu xxxxxxx, β = 10 x/100 xx (xxx 7.7 poznámky)
3.6 Xxxxxx sodný, Na2S. x X2X (x = 7–9)
3.6.1 Roztok xxxxxxx sodného, c = 0,5 xxx/x x glycerolu, β = 120 g/l (xxx x = 9) (xxx 7.8 xxxxxxxx)
3.7 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, β = 2 x/100 ml x xxxxxxx (3.1)
3.8 Mobilní xxxx pro HPLC: xxxx metanolu (3.3) x vody, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx). Xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
3.9 Xxxxx, prostý xxxxxxx
3.10 XX-α-xxxxxxxxx acetát, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.10.1 Xxxxxxx roztok XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx: Odvažte x xxxxxxxxx xx 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu (3.10) do 100 xx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x etanolu (3.1) a doplňte xx značku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx 1 mg XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx. (UV xxxxxxxx – xxx 5.6.1.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 xxxxxxxx).
3.11 XX-α-xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx
3.11.1 Xxxxxxx s xxxxxxxxx na 0,1 xx, 100 xx XX-α-xxxxxxxxxx (3.10) xx 100 ml xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxx (3.1) a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. 1 xx tohoto roztoku xxxxxxxx 1 xx XX-α-xxxxxxxxxx. (XX xxxxxxxx – xxx 5.6.2.3; xxxxxxxxxxx – xxx 7.4 poznámky).
3.12 2,6-Xx-xxxx-xxxxx-4-xxxxxxxxxxxx (XXX) (viz 7.5 xxxxxxxx)
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Rotační xxxxxxx xxxxxxx
4.2 Nádobí x xxxxxxxx xxxx
4.2.1 Xxxxx x plochým xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx, 500 ml, xx xxxxxxxxxxx xxxxx
4.2.2 Odměrné xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, úzkohrdlé, 10, 25, 100 x 500 xx
4.2.3 Xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, 1000 xx, se xxxxxxxxxxx xxxxxxx
4.2.4 Xxxxxxxxxx xxxxx, 250 ml, se xxxxxxxxxxx xxxxx
4.3 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx izolační xxxxxx 300 mm, xx xxxxxxxxxx hrdlem, x xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx plynu
4.4 Xxxxxxxx xxxxxxxxx papír xxx oddělení fáze, xxxxxx 185 mm (xxxx. Schleicher & Xxxxxxx 597 XX 1/2)
4.5 HPLC xxxxxx xx vstřikovacím systémem
4.5.1 Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 250 xx x 4 mm, X18, xxxxxxxx částic xxxxxx 5 nebo 10 μm xxxx xxxxxxxxxx
4.5.2 XX xxxx xxxxxxxxxxxxx detektor x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx
4.6 Spektrofotometr x 10 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.7 Xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
4.8 Xxxxxxxxx přístroj (xxx xxxxxxx 1) sestávající xx:
4.8.1 Skleněný xxxxxxx xxxxx o xxxxxx 1x vybavený zábrusovým xxxxxx x xxxxxx
4.8.2 Xxxxxxxxx vložka xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx procházející xxxxxxx. Nastavitelná xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx X x xxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxx, xxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx převedena xx xxxxxx xxxxxxx.
5. Postup
Poznámka:
Vitamín X je citlivý xxxx (UV) xxxxxx x oxidaci. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xx xxxxxxx xxxxxx x opakního xxxx, xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx) x xxxxxxx (vypláchněte xxxxxxx). Vzduch xxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx extrakce xxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx xx xxxxxxxx občasným xxxxxxxxx xxxxx).
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx 1 xx, xxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxx. Xxxxxxxxxx musí být xxxxxxxxx bezprostředně xxxx xxxxxxx x saponifikací, xxxxx xxxx xxxxx xx ztrátám vitamínu X.
5.2 Xxxxxxxxxxxx
X závislosti xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X odvažte x xxxxxxxxx xx 0,01 g, 2 x až 25 x xxxxxx xx 500 xx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.2.1). Přidejte xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx 130 xx etanolu (3.1), xxxxxxxxx 100 xx XXX (3.12), 2 ml xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (3.5) x 2 xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (3.6). Xxxxxxxx kondenzátor (4.3) x xxxxx x xxxxxxx baňku xx xxxxx lázně x xxxxxxxxxxx míchadlem (4.7). Xxxxxxxx x xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxxx (3.4) xxxx xxxxxxxxxxx (4.3) x xxxxxxxx odtékat xxxxxxx 25 xxxxx xx xxxxxxx míchání pod xxxxxxx proudem xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 20 xx xxxx a xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx.
5.3 Xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 250 ml xxxx xx 1000 xx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3) nebo do xxxxxxxxxxx přístroje (4.8). Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 25 xx xxxxxxx (3.1) a 100 xx petroléteru (3.2) x xxxxxxxx xxxxxxxx do dělící xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx roztocích xx xxx xxx xxxxx 2:1. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxx minuty.
5.3.1 Extrakce x použitím dělící xxxxxxx (4.2.3)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxxx 7.3), převeďte xxxxxx xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxx xxxxxxx (4.2.3). Xxxxxxxx tuto xxxxxxxx dvakrát 100 xx petroléteru (3.2) x dvakrát 50 xx petroléteru (3.2).
Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx extrakty x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (aby se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx) x xxxxx opakovaným xxxxxxxx s xxxxxxx 100 xx xxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (3.7) (xxxxxxxxxxx promývání xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx). Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx dělení fází (4.4), xxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx suspendovaná xxxx xx 500 xx xxxxxxx xxxxx (4.2.2). Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx 50 xx xxxxxxxxxxx (3.2), doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) x xxxxx xxxxxxxxxxx.
5.3.2 Xxxxxxxx za použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (4.8)
Xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx (xxx poznámky 7.3), xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (4.8.1) xx xxxxxxxxxx vložku (4.8.2) x nasměrujte xxxxx xxxxx xx tvaru xxxxxxx U xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx, xxx xxx xxxxx nad xxxxxxxx rozhraní. Xx xxxxxx tlaku z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx 1000 xx xxxxxx nálevky (4.2.3) Xxxxxxxx 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2) xx xxxxxxxxxx xxxxx, zazátkujte x xxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vrstvy xxxxxxx xx a převeďte xxxxxx vrstvu do xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx. Opakujte xxxxxx xxxxxxxx dalšími 100 xx xxxxxxxxxxx (3.2), xxxxx xxxxxxx 50 xx dávkami petroléteru (3.2) a xxxxxxxx xxxxxx petroléteru xx xxxxxx nálevky.
Promyjte kombinované xxxxxxxx xxxxxxxxxxx tak, xxx xx xx xxxxxxx x 5.3.1, x pokračujte jak xx tam xxxxxxx.
5.4 Xxxxxxxx roztoku vzorku xxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (x 5.3.1 nebo 5.3.2) do 250 xx xxxxx ve xxxxx xxxxxx (4.2.4). Xxxxxxx rozpouštědlo xxxxx xx sucha na xxxxxxx xxxxxxx odparce (4.1) za xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx 40 °X. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx tlak xxxxxxxxxxx xxxxxx (3.9) x xxxxxxx baňku xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx rozpouštědlo xxxxxxx xxxxxx (3.9) x ihned rozpusťte xxxxxx xx známém xxxxxx (10–100 xx) xxxxxxxx (3.3) (xxxxxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx xx xxxx xxx x rozsahu 5 μx/xx xx 30 μg/ml).
5.5 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxx X xx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx X18 (4.5.1) x xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx fluorescenčního detektoru (xxxxxxxx: 295 nm, xxxxx: 330 xx) xxxx XX xxxxxxxxx (292 xx) (4.5.2).
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx (např. 20 μl) metanolového xxxxxxx xxxxxxxxx x 5.4 x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx (3.8). Xxxxxxxxx střední xxxxx xxxx (xxxxxx) několika xxxxxxx roztoku xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (5.6.2).
Xxxxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx; xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx použity xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxx výsledky.
Kolona xxx xxxxxxxxxxx chromatografii (4.5.1): 250 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx 5 xxxx 10 μx nebo xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx (3.8): Xxxx xxxxxxxx (3.3) x xxxx, např. 980 + 20 (xxxxxxxx + xxxxxxxx)
Xxxxxx xxxx: 1–2 xx/xxx.
Xxxxxxxx (4.5.2): Fluorescenční detektor (xxxxxxxx: 295 xx/xxxxx: 330 nm) xxxx XX xxxxxxxx (292 xx)
5.6 Xxxxxxxxx (XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX-α-xxxxxxxxxx)
5.6.1 Xxxxxxxx DL-α-tokoferol acetátu
5.6.1.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxx 25 xx xxxxxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 500 ml xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx Erlenmeyerovy xxxxx (4.2.1) x xxxxxxxxxxxx, jak xx xx xxxxxxx x 5.2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.2) xxxxx 5.3 a doplňte xx 500 xx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx 25 xx tohoto xxxxxxxx xx rotační xxxxxxx xxxxxxx (xxx 5.4) xxxxx xx xxxxx, xxxxxxxxx zbývající xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx (3.9) x znovu xxxxxxxxx xxxxxx x 25,0 xx xxxxxxxx (3.3). Xxxxxxxxx koncentrace tohoto xxxxxxx xx 45,5 μx DL-α-tokoferolu na xx, xxxxxxxxxx 50 μx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx xx xx. Standardní xxxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxxx připraven xxxx použitím.
5.6.1.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 ml xxxxxxxxx xxxxx, doplňte xx xxxxxx metanolem (3.3) x xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx koncentrace xxxxxx xxxxxxx jsou 2,5, 5,0, 10,0 a 25,0 μg/ml DL-α-tokoferol xxxxxxx, xx. 2,28, 4,55, 9,10 x 22,8 μx/xx DL-α-tokoferolu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx xxxxxxx kalibračního roztoku x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxxx). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxxx) xxxxxxxxx kalibrační graf.
5.6.1.3 XX standardizace zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1)
Xxxxxxxx 5,0 xx xxxxxxxxx roztoku XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx (3.10.1) xx 25,0 xx xxxxxxxx x změřte UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 nm.
Absorpční xxxxxxx xx mělo xxx xxx 284 xx:
X1%1xx = 43,6 xxx 284xx x xxxxxxx
Xxx tomto xxxxxx xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx 0,84 xx 0,88.
5.6.2 Xxxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx
5.6.2.1 Příprava xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku
Převeďte pipetou 2,0 xx xxxxxxxxx xxxxxxx DL-α-tokoferolu (3.11.1) xx 50 ml xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxx (3.3) x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx roztoku xx 40 μx XX-α-xxxxxxxxxx xx xx, xxxxxxxxxx 44,0 μx XX-α-xxxxxxxxx acetátu na xx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
5.6.2.2 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x kalibrační xxxx
Xxxxxxxx 1,0, 2,0, 4,0 x 10,0 xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx 20 xx odměrných xxxxx, doplňte xx xxxxxx xxxxxxxxx (3.3) x xxxxxxxxxxx. Nominální xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx 2,0, 4,0, 8,0 x 20,0 μx/xx DL-α-tokoferolu, xx. 2,20, 4,40, 8,79 x 22,0 μx/xx XX-α-xxxxxxxxx acetátu.
Vstříkněte xxxxxxxxxx 20 μx každého xxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx střední xxxxx xxxx (plochy). Xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx (ploch) narýsujte xxxxxxxxxx xxxx.
5.6.2.3 XX xxxxxxxxxxxxx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1)
Rozřeďte 2,0 xx zásobního xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxxx (3.11.1) na 25,0 ml etanolem x xxxxxx UV xxxxxxxx tohoto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx (3.1) xx xxxxxxxxxxxxxxxx (4.6) xxxx 250 xx x 320 xx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být při 292 xx:
X1%1xx = 75,8 při 292xx x xxxxxxx
Xxx xxxxx xxxxxx by měla xxx získána xxxxxxxx 0,6.
6. Xxxxxxx xxxxxxxx
Xx xxxxxxx xxxxx (xxxxxx) xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x μg/ml (xxxxxxxx xxxx α-xxxxxxxxx xxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx (5.6.1.2 xxxx 5.6.2.2).
Obsah xxxxxxxx X x x xx/xx xx xxxxxx je dán xxxxxxxxxxx rovnicí:
w = 500 · β · X2 / X1 · m [xx/xx]
xx xxxxx:
β = xxxxxxxxxxx vitamínu X x xxxxxxx xxxxxx (5.4) v μx/xx
X1 = xxxxx xxxxxxx xxxxxx (5.4) x xx
X2 = objem xxxxxxx xxxxxxxxxx x 5.4 x xx
x = xxxxx xxxxxxxx xxxxx x x
7. Xxxxxxxx
7.1 U xxxxxx x nízkou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx X xxxx xxx xxxxxxxx spojit xxxxxxxx xxxxxxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (hmotnostní xxxxxxx: 25 x) xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx XXXX.
7.2 Množství xxxx ve xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx 2g.
7.3 Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, přidejte xxxxxxxxx 10 ml xxxxxxx (3.1), x xxxxxxxxx xxxxxx.
7.4 Xx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XX-α-xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX-α-xxxxxxxxxx xxxxx 5.6.1.3 xxxx 5.6.2.3 přidejte xx xxxxxxx (3.10.1 xxxx 3.10.2) přibližně 10 xx BHT (3.12) a skladujte xxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxxx doba skladovatelnosti xx xxxxx xxxxx).
7.5 Xxxxxxx BHT může xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx.
7.6 Xxxxxxxx α-, β-, χ- x δ xxxxxxxxxx xx možné x použitím xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.
7.7 Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx použito xxxxxxxxx 150 mg xxxxxxxx xxxxxxxxx.
7.8 Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx sodného xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 xx XXXX.
8. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx u stejného xxxxxx xxxxx překročit 15 % x xxxxxxx výsledku.
9. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx [2]
L: xxxxx xxxxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovatelnosti
sR: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: opakovatelnost
R: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
XXX: koeficient variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
|
Xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxx |
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx |
Xxxxxx xxx xxxxxx |
|
|
X |
12 |
12 |
12 |
12 |
12 |
|
x |
48 |
48 |
48 |
48 |
48 |
|
xxxxx [xx/xx] |
17 380 |
1 187 |
926 |
315 |
61,3 |
|
xx [xx/xx] |
384 |
45,3 |
25,2 |
13,0 |
2,3 |
|
x [xx/xx] |
1 075 |
126,8 |
70,6 |
36,4 |
6,4 |
|
XXx [%] |
2,2 |
3,8 |
2,7 |
4,1 |
3,8 |
|
xX [xx/xx] |
830 |
65,0 |
55,5 |
18,9 |
7,8 |
|
X [xx/xx] |
2 324 |
182,0 |
155,4 |
52,9 |
21,8 |
|
XXX [%] |
4,8 |
5,5 |
6,0 |
6,0 |
12,7 |
ČÁST X
XXXXXXXXX XXXXXXXXXX
1. Účel x xxxxxx xxxxxxx
Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx celkového x xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxx X- x X- xxxxxxx.
2. Xxxxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx hydrolyzován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx 110 °X xx 20 xxxxx. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.
Xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxx kyselých podmínek x přítomnosti xxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxxx x vnitřní xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx HPLC x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.
3. Xxxxxxx
3.1 Dvojnásobně xxxxxxxxxxx xxxx, xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx (vodivost &xx; 10 μS/cm)
3.2 Xxxxxxxxxx xxxxx: tryptofan (xxxxxxx/xxxxx &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx
3.3 Xxxxxxx standardní xxxxx: α-xxxxxx-xxxxxxxxx (čistota/obsah &xx; 99 %), xxxxxx xxx xxxxxx xxxx pentoxid fosforu
3.4 Xxxx-xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxx xxx xxxxx, xxx nebyl Xx(XX)2. 8 X2X xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XxXX3, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx) (xxx xxxxxxxx 9.3)
3.5 Xxxxxxxx sodný
3.6 Kyselina xxxx-xxxxxxxxxx, x = 85 %
3.7 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, p20 = 1,19 x/xx
3.8 Xxxxxxx, XXXX xxxxxx
3.9 Petroléter, xxxxxx xxxx 40–60 °X
3.10 Roztok hydroxidu xxxxxxx, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxxxx 40,0 x XxXX (3.5) xx vodě x xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1).
3.11 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 6 xxx/x:
Xxxxxxx 492 xx XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 l xxxxx.
3.12 Xxxxxxxx chlorovodíková, x = 1 xxx/x:
Xxxxxxx 82 ml XXX (3.7) x xxxxxxx xx 1 x xxxxx.
3.13 Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 xxx/x:
Xxxxxxx 8,2 xx XXX (3.7) x doplňte do 1 l vodou.
3.14 Xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x:
Xxxxxxx 34 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx (3.6) a xxxxxxx xx 1 x xxxxx (3.1)
3.15 Xxxxxxxxxxxxx roztok tryptofanu (3.2), x = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2553 x xxxxxxxxxx (3.2) x 500 ml xxxxxxx baňce v xxxxxxxx chlorovodíkové (3.13) x xxxxxxx po xxxxxx kyselinou xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Skladujte při –18 xX xx xxxx maximálně xxxx xxxxx.
3.16 Xxxxxxxxxxxxx vnitřní xxxxxxxxxx xxxxxx, c = 2,50 μxxx/xx:
Xxxxxxxxx 0,2728 g α-xxxxxx-xxxxxxxxxx (3.3) x 500 xx odměrné xxxxx x kyselině xxxxxxxxxxxxxx (3.13) x xxxxxxx xx značku xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (3.13). Xxxxxxxxx xxx –18 oC xx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.
3.17 Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx standard:
Vezměte 2,00 xx koncentrovaného xxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15), x 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (α-methyl-tryptofan) (3.16). Xxxxxx vodou (3.1) x xxxxxxxxx (3.8) xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x na xxxxxxxxx xxxxxxx koncentraci xxxxxxxx (10–30 %) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxx.
3.18 Kyselina xxxxxx
3.19 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxx
3.20 Ethanolamin &xx; 98 %
3.21 Xxxxxx 1 x 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) xx 100 xx xxxxxxxx (3.8).
3.22 Xxxxxxx xxxx xxx XXXX: 3,00 x xxxxxxxx octové (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanolu (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1x/100 ml). Xxxxxxx xX na 5 x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1).
4. Xxxxxxxxx x xxxxxxx
4.1 Vybavení xxx XXXX se spektrofluorimetrickým xxxxxxxxxx
4.2 Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, 125 xx x 4 xx, X18, velikost xxxxxx xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
4.3 xX xxxx
4.4 Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx 125 xx, se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.5 Xxxxxxxxxx filtr, 0,45 μx
4.6 Autokláv, 110 (+ 2) °X, 1,4 (+ 0,1) xxxx
4.7 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx
4.8 Xxxxxx mixer
5. Xxxxxx
5.1 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxx, xxx xxxxxx xxxxx x otvory 0,5 xx. Xxxxxx, xxxxx xxxx vysokou vlhkost, xxxx xxx před xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx 50 °C, xxxx zmrazením. Vzorky x vysokým obsahem xxxx xxxx xxx xxxx mletím xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (3.9).
5.2 Stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xxxxxxxx (1–5 x) xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx Xxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx 100 ml xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, c = 0,1 mol/l (3.13) x 5,00 xx koncentrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16). Xxxxxxxx xxxx mixujte 60 xxxxx x xxxxxxxx mechanické xxxxxxxx, xxxx magnetického míchadla (4.7). Nechejte xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx 10,0 ml roztoku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx 5 xx xxxxxxxx xxxx-xxxxxxxxxx, c = 0,5 xxx/x (3.14). Upravte xX xx 3,0 za xxxxxxx xxxxxxxxx sodného, x = 1,0 xxx/x (3.10). Xxxxxxxx xxxxxxxxx metanolu (3.8), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx 10 x 30 % metanolu x xxxxxxxx objemu. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx pro chromatografii (xxxxxxxxx xxxxxx objem xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (3.17)).
Xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx ml xxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,45 μx (4.5). Provádějte chromatografii xxxxx 5.4.
Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx a extrakty xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx den, mohou xxx xxxxxxxxxx xxx 5 °X xx xxxxxxxxx xxxx xxx xxx.
5.3 Xxxxxxxxx celkového xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx)
Xxxxxxx x xxxxxxxxx xx 0,2 xx od 0,1 xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxxx (5.1) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (4.4). Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx by měla xxx xxxxx xxxxxx xxxxx 10 mg. Xxxxxxxx 8,4 g xxxx-xxxxxxx hydroxidu xxxxxxxxx (3.4) x 10 xx xxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx mixeru (4.8) nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (4.7). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx směsi. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4 xx vody. Xxxxxxxxxxx xxxxxx x láhev xxxxx xxxxxxxx. Přeneste xx autoklávu (4.6) x xxxxxx xxxxx x xxxxx xx 30–60 xxxxx. Uzavřete xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxx 110 (+ 2) °X xx xxxx 20 xxxxx.
Xxxx xxxxxxxxx autoklávu xxxxxx xxxxxxx právě pod 100 °X. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx Xx(XX)2. 8 X2X, xxxxxxxx xx horké xxxxx 30 xx xxxx x pokojové xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxx. Přidejte 2,00 ml xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vnitřního xxxxxxxxx (α-xxxxxx-xxxxxxxxx) (3.16). Xxxxxxxx xxxxxx xx vodní/ledové xxxxx xx xxxx 15 xxxxx.
Xxxxx přidejte 5 ml xxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxx, x = 0,5 mol/l (3.14). Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, x = 6 xxx/x (3.11) xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xX xx 3,0 x použitím XXX, x = 1 xxx/x (3.12). Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, abyste xxxxxxxx koncentraci xxxx 10 a 30 % metanolu v xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxx baňky x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx chromatografii (xxxxxxxxx 100 xx). Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxx xxxxxxxxxxx xx kolony XXXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,45 μx (4.5). Xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 5.4.
Chraňte xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx není xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx den, xxxxx xxx xxxxxxxxxx při 5 °X po xxxxxxxxx dobu xxx xxx.
5.4 Stanovení xxxxxx XXXX
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx doporučení; xxxxxxx xxxxxxxx smějí xxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (viz xxxx poznámky 9.1 x 9.2):
Xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (4.2): 125 xx x 4 mm, C18, xxxxxxxx částic xxxxxx 3 μx xxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxx fáze (3.22): 3,00 x xxxxxxxx xxxxxx (3.18) + 900 ml xxxx (3.1) + 50,0 xx xxxxxxx (3.21) 1,1,1-xxxxxxxxx-2-xxxxxx-2-xxxxxxxxx (3.19) x xxxxxxxx (3.8) (1 x/100 xx). Xxxxxxx xX na 5,00 x xxxxxxxx ethanolaminu (3.20). Xxxxxxx xx 1000 xx vodou (3.1)
Xxxxxx xxxx:&xxxx;&xxxx; 1 xx/xxx.
Xxxxxxx xxxx běhu: xxxxxxxxx 34 xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxx xxxxx: xxxxxxxx: 280 xx, xxxxx: 356 xx
Xxxxxxxxx xxxxx: 20 μl
6. Výpočet xxxxxxxx
X × X × X × X × E × XX / X × X × X × 10&xxxx;000 × W = x tryptofanu xx 100x xxxxxx
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, roztoku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (3.17)
X = plocha xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (3.15) (2 ml) xxxxxxx xx kalibračního roztoku (3.17)
X = xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxx (3.15) v μxxxxxx/xx (= 2,50) xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.17)
X = xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardního xxxxxxx (3.16) v xx přidaného xxx xxxxxxxx (5.2) (= 5,00 ml) nebo xx xxxxxxxxxxx (5.3) (= 2,00 xx)
X = plocha xxxx xxxxxxxxx standardu, extraktu (5.2) xxxx xxxxxxxxxxx (5.3)
X = xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = objem xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku (3.16) v xx (= 2,00) přidaného xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (3.17)
X = xxxxxxxx vzorku x x (opravená na xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx x/xxxx xxxxxxxx)
XX = xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (= 204,23)
7. Xxxxxxxxxxxxxx
Xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx překročit 10 % z vyššího xxxxxxxx.
8. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx Společenství (xxxxxx vzájemné xxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx, xx byly xxx xxxxxx analyzovány xx 12 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx. Replikované (5) xxxxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxx uvedeny x následující tabulce:
L: xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých xxxxxx xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
CVR: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 1 Xxxxxx pro xxxxxxx |
Xxxxxx 2 Krmivo xxx prasata xxxxxxxx X-xxxxxxxxxxx |
Xxxxxx 3 Xxxxx xxxxxxxxxx pro prasata |
|
|
L |
12 |
12 |
12 |
|
n |
50 |
55 |
50 |
|
střed [x/xx] |
2,42 |
3,40 |
4,22 |
|
xx [x/xx] |
0,05 |
0,05 |
0,08 |
|
x [g/kg] |
0,14 |
0,14 |
0,22 |
|
CVr [%] |
1,9 |
1,6 |
1,9 |
|
xX [x/xx] |
0,15 |
0,20 |
0,09 |
|
X [x/xx] |
0,42 |
0,56 |
0,25 |
|
XXX [%] |
6,3 |
6,0 |
2,2 |
Xxxxx xxxxxxxx spolupráce Xxxxxxxxxxxx (xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx) byla xxxxxxxxxx xxx, xx dva xxxxxx xxxx analyzovány xx ve 13 xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx (5) analýzy xxxx xxxxxxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet laboratoří xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: xxxxxxxxxxxxxxxxxx
XXx: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Xxxxxx 4 Xxxx xxxxxxx se xxxxx |
Xxxxxx 5 Směs pšenice xx xxxxx (= xxxxxx 4) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (0,457 x/xx) |
|
|
X |
12 |
12 |
|
x |
55 |
60 |
|
xxxxx [g/kg] |
0,391 |
0,931 |
|
sr [g/kg] |
0,005 |
0,012 |
|
r [x/xx] |
0,014 |
0,034 |
|
XXx [%] |
1,34 |
1,34 |
|
xX [x/xx] |
0,018 |
0,048 |
|
X [x/xx] |
0,050 |
0,134 |
|
XXX [%] |
4,71 |
5,11 |
Další xxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tak, že xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx s xxxxx potvrzení xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx. Výsledky xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx:
X: počet xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
x: xxxxx jednotlivých hodnot xxxxxxxxxx eliminačních xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx-Xxxxxxxxx xxxxxx)
xx: xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx
xX: xxxxxxxxxx odchylka xxxxxxxxxxxxxxxxxxx
x: xxxxxxxxxxxxxx
X: reprodukovatelnost
CVr: xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx, %
XXX: xxxxxxxxxx variace xxxxxxxxxxxxxxxxxxx, %
|
Vzorek 1 Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx (CRM 117) |
Xxxxxx 2 Nízko-tučná rybí xxxxxx (XXX 118) |
Xxxxxx 3 Sójová xxxxxx (XXX 119) |
Xxxxxx 4 Xxxxxx odstředěné xxxxx (XXX 120) |
|
|
X |
7 |
7 |
7 |
7 |
|
x |
25 |
30 |
30 |
30 |
|
xxxxx [x/xx] |
2,064 |
8,801 |
6,882 |
5,236 |
|
xx [x/xx] |
0,021 |
0,101 |
0,089 |
0,040 |
|
x [x/xx] |
0,059 |
0,283 |
0,249 |
0,112 |
|
XXx [%] |
1,04 |
1,15 |
1,30 |
0,76 |
|
xX [x/xx] |
0,031 |
0,413 |
0,283 |
0,221 |
|
X [x/xx] |
0,087 |
1,156 |
0,792 |
0,619 |
|
XXX [%] |
1,48 |
4,69 |
4,11 |
4,22 |
9. Xxxxxxxx
9.1 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx a α-xxxxxx-xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistěním kolony:
|
Kolona xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx: |
125 xx x 4 xx, X18, xxxxxxxx xxxxxx náplně 5 μx xxxx xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxx xxxxxx: |
32 °X |
||
|
Xxxxxxx xxxx: |
X: 0,01 xxx/x XX2XX4/xxxxxxx, 95 + 5 (xxxxxxxx + xxxxxxxx) X: Xxxxxxx |
||
|
Xxxxxxxxxxx xxxxxxx: |
0 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
15 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
17 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
19 xxx. |
60 % X |
40 % X |
|
|
21 xxx. |
100 % X |
0 % X |
|
|
33 min. |
100 % X |
0 % X |
|
|
Xxxxxx xxxx: |
1,2 ml/min. |
||
|
Celková doba xxxx: |
xxxxxxxxx 33 xxxxx |
||
9.2 Xxxxxxxxxxxxxx xx bude xxxxxx xxxxx typu XXXX xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx startovní xxxx xxxx tryptofanem x xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx důležité, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Hydrolyzáty xxx xxxxxxxxx standardu by xxxx být xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxx xx překontrolovala xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxxxx. Xx důležité, xxx xxxx běhu xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx vymytí xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx píky pozdního xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.
X rozsahu xxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx systém xxx xxxxxxxx odezvu. Xxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxx měřena x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx standardu a xxxxxxxx xx koncentracemi xxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x vnitřního xxxxxxxxx byly v xxxxxxxxx xxxxxxx XXXX/xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxx (xxxx) buď xxxxxxxxxx, x/xxxx xxxxxxxxx standardu xx (jsou) xxxxxx xxxx (malé) nebo xxxxxx xxxxxx (xxxxxx), xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxx konečným xxxxxxx.
9.3 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hůře xxxxxxxxx. Xx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx XXXX, xxx xxxx x tryptofanu xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
[1] Xxxxxx xxxxxxxx skupinou xxx xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx- und Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).
[2] Řízené xxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Untersuchungs- xxx Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (VDLUFA).