Xxxxxxxx Komise 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx o xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na směrnici Xxxx 67/548/XXX ze xxx 27. xxxxxx 1967 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], x xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem x xxxxx důvodům:
(1) V xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x přípravků. Xx xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/EHS xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx a správních xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx se ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx být xxxxx, xxx xxxx má xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x prakticky xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx alternativní xxxxxxxx xxxxxx, xxx nichž xxxxxx používána xxxxxxx, x cílem zpřístupnit xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx podle xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx této směrnice xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Xxxxxx xxx přizpůsobení technickému xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a II xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx X přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx x touto směrnicí xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx odkaz xx xxxx směrnici xxxx xxxx být xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx odkazu xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx xxxxx sdělí Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních právních xxxxxxxx, které přijmou x oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxx x přijatými xxxxxxxxxxxxxx ustanoveními.
Článek 3
Xxxx směrnice xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx v Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Článek 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Za Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Komise
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Úř. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx účinky xx xxxx xx principu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx kůže potkana (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX prokázala, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx leptající x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (známé xxxxx xxxxxxxxxxx těžké xxxxxxxxx, X 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kůže, X 34) (2). Xxxxx x postup xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx na xxxxxxxxxxxx požadavcích x xxxxxxxxxx uživatele.
Viz také Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx poškození xxxx xx aplikaci zkoušeného xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xx xx 24 h xxxxxxxxx na epidermální xxxxxx terčíků xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx je xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx prahovou hodnotu. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx stupeň xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX na xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxxxx z mladých (20 — 23 xxxxxxx) potkanů (Wistar xxxx srovnatelný kmen). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx strojkem. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. streptomycin, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx a amfotericin x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx antibiotik x xxxxxxx xx xx 3 xxx (x přípravě xxxx xxxxx xxx použita xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Příprava xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx zvířete se xxxx opatrně odstraní xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x kůže opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx trubičky xx těsně xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx upevněna, x přebytek xxxxx xx ořízne. Xxxxxxx xxxxxxxx a X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx na xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se aplikuje xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (obr. 2). Xxx zkoušení xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx epidermis. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx látky přidá xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x trubička xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx mělo xxxxx x maximálnímu xxxxx. U některých xxxxx toho může xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, aby se xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx rozemletím xx xxxxxx xxxxxxxx nebo xx prášek.
Ke xxxxxxx xxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx zcela xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx x teplotě xxxxxxx 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x trubičce xxxxxx, xxx xxxxxxxx omytím xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro střídavý xxxxx (např. XXX 401 nebo 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % ethanolu xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 3 ml xxxxxxx xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx xxxxxx na xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx za xxxxxx xxxxxx odporu v xΩ/xxxxxx kůže (xxxxxxx 2). Xxxxxxx elektrod x xxxxx exponovaných xxxxx elektrod xxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx vnitřní (silné) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx části xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (tenká) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové komory xxx, xxx xxxxxxxxx xx dně xxxxxx. Xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx trubičky xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.
Xx xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, může xx xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx se xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx hořečnatého se xxxxxxxx x xxxxxx xx opakuje x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Pro xxxxxxxx xxxxxxxx a přístroje xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (kΩ) |
|
Pozitivní |
10M xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx povrchově xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxx zkoušené látky xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx výsledky xxxxxx falešně xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx barviva sulforhodaminu X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx se xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx terčíku kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % roztoku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx kůže se xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx barvivo. Všechny xxxxxxx kůže se xxxxxxx sejmou x xxxxxxxxx trubičky a xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 ml). Lahvičky xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx terčíky xxxx vyjmou x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx vodě x inkubují xx xxxx xxx xxx 60 °X. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxx roztok se xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx odstředivá xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx poté xxxxx 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (X) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx A (xxxxxxx xxxxxxxxx koeficient sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx každý terčík xxxx x xxxx xx xxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxxxx. Střední xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x přístroje xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx látky doporučeny xxxx xxxxxxxxxx hodnoty xxxxxxx obsahu xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx po xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx bez xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx z údajů xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx x xxxx metodě. Doporučuje xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x určit xxxxxxxx hodnotu odporu xxxxxxxxx řady referenčních xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx až xx xxxx 4 xxxxx xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx rohovité xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (stanovený xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx úroveň. Podstata xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Modely lidské xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx splňovat xxxxxx xxxxxxxx. Model xxxx xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx xxxxxxxx demonstrací xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, xxxxx xxxxxxxx neproniknou xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx buněk x xxxxxx xxxx xxx dostatečně xxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxx rozlišit pozitivní x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx xxxxxxxxxx A) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx x mezích xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx být ve xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušené látky, xxx pokrylo xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx kůži, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx látky xx měly xxx xxxxx potřeby xxxx xxxxxxxx rozemlety xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fyziologickým roztokem.
1.7.2.2 Xxxxxx životaschopnosti xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, pro níž xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx se xxxxxx xx xxxxxxx XXX o koncentraci 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx dobu 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx formazanu xx xxxxxxx xxxxxxx absorbance X xxx vlnové xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Doplňkové xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx xxxx x přesné zaznamenání xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx vliv xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Doporučuje se, xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx model byly xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx ECVAM (3). Xx rozhodující, xxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx vykazovala v xxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx splňovat xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx být xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, o xxxxxxxxx hodnotách a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx materiál, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx látky včetně xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace výsledků
2.2.1 Xxxxxxx XXX na xxxx potkana
Je-li hodnota XXX dosažená xxx xxxxxxxxx látku xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovna 5 xΩ a xxxxx o povrchově xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx látku, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx dávají xxxxxxx XXX xxxxx xxxx rovné 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx větší xxxx xxxxx xxxxxxxxx obsahu xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl xxxxxxx xxxxxxxxx kontroly, je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx tedy xxxxxx. Je-li střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % HCl, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x xxxxx tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxxxxxxx xxx každý xxxxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx se rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx xx rozlišují xxxxx třídy xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx být xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxxxxxxx, xx xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- identifikační xxxxx, xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxxx fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx informace xx měly xxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty xxxxxx (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx) pro zkoušený xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) XXXXX (1998), ECVAM Xxxx &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Xxxxxx, X. X. X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. X., Holzhutter, X-X., Liebsch, M. (1998), The ECVAM xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in vitro xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx by xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Brantom, X. G., Fentem, X. X., Gerner, X., Walker, A. X., Xxxxx, X. X. (1998), Xxx XXXXX international validation xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Pemberton, X. X., Xxxxxx, X. (1986), Xx xx xxxxx xxxx corrosivity xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx validation, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Dennett, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx skin xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx xx xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Balls, X., Xxxxxx, P. X., Curren, X. X., Xxxx, L. X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxx, M., Xxxxxxx, X. D., Curren, X. D., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. R., Gordon, X. X., Hildebrand, X., Xxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Osborne, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, J. X., Xxxxxxxx, X., Walker, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx vitro skin xxxxxxxxxxx xxxxxxx. The xxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Obrázek 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Fototoxicita xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx xx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxx x identifikaci fototoxického xxxxxxxxxx zkoušené látky, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV záření xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx zkoušky xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx nanesení na xxxx, a xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx nanesení na xxxxxxx xxxx fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx a validována x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx vivo x xxxxxx x x xxxxxxx a zkouška xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxx nepříznivých xxxxxx, které mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže xxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx tyto xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, bude xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, xxx xxxxxxxx hodnocení xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemických xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita xxxxxxx: xxxxxxxxx ultrafialového xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) ultrafialového (XX) xxxx viditelného xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx x joulech (X × x) xx plochu xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx de x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 xx) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx se xxxxxx jiná xxxxxxxx: xxxx hranice mezi XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x pásmo XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 a XX-X2 s hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx červeně xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx x celkovým xxxxxx x/xxxx životaschopností xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x poměru x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x XX, nebo xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx xxxxxx výsledků xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in vitro xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX x veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx srovnáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx látky, x xx při necytotoxickém xxxxxxx UVA/VIS xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx xxxxx xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx veličina xxxxxxxx z matematické xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx necytotoxickém ozáření XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx ozářením xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň pojmu "xxxxxxxxxxxx", který xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, které se xxxxxxxxx xx xxxx xx expozici xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: získaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx x která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jeden xxxx dva xxxxx xxxx tím, xxx xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx negenotoxické xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná xxxxxxxxxx xxxxxxxx světla a xxxxxxxx látky. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx používá x xxxxxxx, xxx xx tvorba xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx chemickou xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx chemické látky xxxxx z chemických xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx poznámky
Fototoxické xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x mnoha typů xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx je schopnost xxxxxxxxxx xxxxxxxxx energii x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx fotoreakce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Před xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx zkoušení podle xxxxxxxxxx metodiky by xxxx xxxx být xxxxxxxxx XX/XXX absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx než 10 l.mol-1.cm-1, chemická xxxxx xxxx fotoreaktivní xxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x fototoxické xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Zkouška fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx je proto xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX xxxxxx x xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx koncentračně závislé xxxxxxx příjmu vitálního xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx po působení xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx.
Xxxxx Balb/c 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx různými koncentracemi xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx destiček xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxx 24 x inkubace xx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem neutrální xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx koncentrací. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxxxxx (-UV), xxxxxxx při xxxxxxx XX50, xx. při xxxxxxxxxxx způsobující 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x neexponovanými xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx UVA, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx buněk xx XXX xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, příští xxx xx xxxxx xxxxxx UVA xxxxxx 1 až 9 X/xx2 a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx ozáření 5 X/xx2 xxxxx než 80 % životaschopnosti xxxxxxxx udržované v xxxxx. Tato kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx negativní xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) nebo xxx xxxx xxxxxxxx xxx + XXX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx alespoň 80 % vzhledem x xxxxxxxxxxxxxxxx neozářených buněk x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx experimentu x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (X540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx dvou xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx zdvojnásobení (xxxxxxxx xxxx). Zkouška splňuje xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxx xxx souběžně xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx studii XX/XXXXXX xxx použit xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX zkoušený podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx: xxx XXX ozářený (+ UVA): XX50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, pro XXX neozářený (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx být xxxxxxx jako souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx fototoxické xxxxxxxx xxxxx vhodné z xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxx údajů xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx hodnot XX50 x PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx účinek).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Balb/c 3T3, xxxx 31 — xxx z banky XXXX, xxxx x xxxxx XXXXX x xx xxxx doporučena. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx linie xxxxx xxx při stejném xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační podmínky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx musí xxx xxxxxxxxx jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x měly xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx k xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV xxxxxxx x xxxxxx pasáží, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x pasáže x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x nižší než xxx pasáže. Je xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x této xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx postupu xx xxxx být xxxxxxx xxxxxx kultivační xxxxx x xxxxxxxxx podmínky. X xxxxx Xxxx/x 3X3 se xxxxx x DMEM (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX glutaminem, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, aby kultivační xxxxxxxx zajistily, aby xxx buněčný xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx ve xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx zkoušce fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx buňky nasazují xx kultivačního média x takové hustotě, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx konce zkoušky, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx po 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 buněk xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx látku xx xxxxx nasadí xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx podmínek xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z destiček xxxxxxx (+UVA/VIS) x xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx určených xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x fototoxikologii xxxxx xxxxx xxxxx chemická xxxxx, pro xxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xx vivo xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx metabolická xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx systémem aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. v Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx fyziologickém xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x pH xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x omezenou rozpustností xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace a xxxx xx měly xxx xxxxxxx v xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx v konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx použita xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. aceton), xxx xxxx xx xxx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx radikálů.
Je-li třeba, xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj světla: xxxxx vhodného zdroje xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx je kritickým xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření v xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo vysoce xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx mezi 313 xx a 280 nm 1000krát (11). Kritéria pro xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, x aby xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx xx přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx oblast), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního světla xxxxxxxxx simulátory se xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xxxxxxxx xxxxxxx, tak xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx x nich xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx xxxxxxxx významné xxxxxxxx UVB xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX in vitro xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kontrolovat xx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx xxx daný xxxxx kalibrován. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxx referenční xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x měření xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x ke xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odbornou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx necytotoxická xxx buňky Balb/c 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x slabě fototoxických xxxxxxxxxx xxxxx. Pro xxxxxxxx 5 X/xx2 xx dobu 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx je použita xxxx buněčná xxxxx xxxx jiný xxxxxxxx xxxxx, může xxx xxxxx XXX záření xxxxx upravena, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních xxxxxxxxxx. Xxxx světelné xxxxxxxx xx vypočte tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx záření (X/xx2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 J =.W xxx)
1.7.2 Zkušební podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx xx neměla xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx koncentrace xx xxxx být xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx chemických xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx (+ UVA) x xxx xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx experimentech xxx zjištění rozmezí. Xxxxxx koncentrační řady x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx podloženy xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla xx xxx použita geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx se xxxxxxx suspenze 1 × 105 xxxxx/xx x kultivačním médiu x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx pouze xx xxxxxxxxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx pokus). Xx xxxxxxxxxxx buněk xx xxxxxxx po 100 μx buněčné xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx inkubují 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx inkubační xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx inkubaci xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx x každá xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μl EBSS/PBS. Xxxxx se 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx v xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx části xxxxxxx x ozářením XXX xx buňky při xxxxxxxx teplotě xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx přes víčko 96xxxxxxx destičky XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx nedošlo xx xxxxxxxxxx vody xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx pro xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx xxxxxxxx XXX) v xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Zkušební xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem a xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se změny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Doporučuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx xxxxxxx se xxx xxxxxxxxx cytotoxicity xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Xxxxx se 100 μx média XX x inkubuje xx 3 x xxx 37 °X xx zvlhčené xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, aby se xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xx NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx použije slepý xxxxx. Údaje xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx analýzu.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx a množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx získané xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx něho. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx rozsah xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Vzhledem x xxxx, že xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx nemusela být xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx pro xxxxxxxxxx x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx vysoce xxxxxxxxxxx xx ozáření (+XXX), xxxx být xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx koncentrací, xxxxx xxxx být x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem se xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx dostatečně xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx případech stačí xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx být xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx opakované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx ozářením. Xxxxxxxx xxxx xxxx mít xxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx ve xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xx koncentrace zkoušené xxxxxxxx xxxxx odpovídající 50 % inhibici xxxxxxxxx příjmu neutrální xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx regrese (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx výpočet EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proložení. X takovém xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx případech xxxx xx xxxx transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx faktor (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx případech xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx úplné xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx xxxxx tohoto xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX a není xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, nelze hodnotu XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x výsledek, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hodnotu "> XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxx > 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx žádnou xxxxxxxxxxxx, vypočítat xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ UV), svědčí xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx hodnota předpovědí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu.
V xxxxxxxxx x) x x) xx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxxxxx xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx dosažené xx xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: xxxxxxx světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx nemá xxxxxxx xxxx model XXX v xxxxxxxxx, xxx nelze xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx účinek (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, která xx xxxxxxxx na srovnání xxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxx xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (PIF ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μg/ml, xx xxxx pravděpodobné, xx látka xxxx xxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx in vivo. Xx-xx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx pouze xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx týkat údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx v xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx in xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (PIF &xx; 5 xxxx XXX < 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx savčí xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, znamenají xxxxxxxxx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx xxxx fototoxický xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (XX50 +XX x XX50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+XX a -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx omezeny rozpustností xx vodě xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μx/xx, není xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx potvrzující xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx in xxxxx xxxx zkouškou xx xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol x xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx CAS, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx studie,
- stálost x xxxxxxxxxxxxx, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- procentuální koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx buněk xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- xxx x složení kultivačního xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky xxxxxxxxx xxx při xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- v xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x složení xxxxxxxxxx xxxxx (pufrovaný xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zdroje světla,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx ozáření xx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- intenzita ozáření XXX v této xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- xxxxx XXX xxxxxx (intenzita × xxx), vyjádřena x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení xxxxx XX,
- doba inkubace XX,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- vlnová xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- druhá (referenční) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx každé xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) získané xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx křivek závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx získaných x xxxxxxxx XXX/XXX x xxx něho, x to buď xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx světelného účinku (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx životaschopnost (absorbance xxxxxxxx NR) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- kritéria přijatelnosti xxxxxxx b) — xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx: xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x PIF, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Willshaw, A. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx on xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3X3 XXX XX test (xx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Centre: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Balls, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. J. X., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Clothier, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, D., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx XX (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3X3 XXX phototoxicity test, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Xxxxxx xx the XXXX Xxxxxxxx on Xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, OECD Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx progress xx xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Amsterdam, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Hölzle, X., Xxxxxxx, B. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. J. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx: Xxx report xxx recommendations of XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, J. X. (1989), Photosensitization. X: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. X. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx in xxxxx xx morphological xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. I. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Francis, Washington XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx human xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx middle xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx sunlight on xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Standard Operating Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Phototoxicity Test, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Management Xxxx of the XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. X. X., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Pfannenbecker (1998), X Study on xxx Xxxxxxxxxx Potential xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx from Annex XXX of xxx XX Directive 76/768/XXX xx xxx 3T3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx xx cellular xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), A xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx dose-response xxxxxx xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx vivo phototoxicity xx chemicals, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx nalézt x xxxxxxxxxx (12).