Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. dubna 2000,
xxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx klasifikace, balení x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [1]
(Text s xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x ohledem xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství,
s xxxxxxx xx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS ze xxx 27. xxxxxx 1967 o sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení a xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [2], xxxxxxxxx pozměněnou xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/ES [3], a xxxxxxx xx xxxxxx 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxxx xxxxxxx:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx xxx stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx přizpůsobit xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx čl. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx ochrany xxxxxx používaných pro xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx xxx xxxxx, xxx xxxx xx xxx použito xxxxx, xxxxxxxx, xx-xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx X směrnice 67/548/EHS xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zvířata, x cílem xxxxxxxxxxx xx xxx zkoušení xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx této xxxxxxxx xxxx v xxxxxxx xx stanoviskem Výboru xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx překážek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxx příloh X a XX xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS.
Článek 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx souladu x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx na xxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
2. Xxxxxxx xxxxx sdělí Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx přijmou x oblasti xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx tabulku xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ustanoveními.
Článek 3
Tato xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Evropských xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Tato xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Xxxxxxx dne 25. dubna 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Úř. věst. 196, 16.8.1967, s. 1.
[3] Xx. věst. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Úř. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX I
"B.40 LEPTAVÉ XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxx střediskem xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (XXXXX, Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx studie XXXXX prokázala, xx xxxxx zkouškami xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x zkoušce xxxxxxxx xx xxxxxx lidské xxxx dále umožnil xxxxxxx xxxxxxxx stupně xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, X 35 x ostatní xxxxx xxxxxxxxxxx poleptání kůže, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx zkoušek xx xxxxxx; xxxxx xxxxxxx, xxxxx xx být xxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx také Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Definice
Poleptání xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Referenční xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx viz body 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx metody — zkouška XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx xx 24 x xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx mladých xxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x bariérové xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx TER pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx TER xxx xxxxxxxx hodnotu. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx látky (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx stupeň xxx xxxxxxxxx vázání xxxxxxx, aby se xxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxx chemických látek (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx metody — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
1.5.1 Zvířata
Terčíky xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx z mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx opatrně xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx xx poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx testovací xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx bakterií). Zvířata xx třetí x xxxxxx den xx xxxxxx omytí znovu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 xxx (x přípravě kůže xxxxx xxx použita xxxxxxx starší než 31 xxx).
1.5.2 Příprava xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx zvířete xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx tuk xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Kůže se xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x trubičkou. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx O-kroužek, aby xxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Pryžový X-xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx vrstvou xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx svorky xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 mM) (obrázek 2).
1.5.3 Xxxxxxxx postup
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx látka (150 μx) xx xxxxxxxx xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx zkoušení pevných xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx látkami x xxxx xx mělo xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx na 30 °X, xxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx materiál xxxx xx xxxxxx.
Xx zkoušce xxxxx látky xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx po xxxx 24 x (xxx xxxx bod 1.5.3.4). Zkoušená xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx tekoucí xxxx x teplotě nejvýše 30 °C. Odstranění xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx dostatečného xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Po xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx odstraní převrácením xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí přidáním 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx xxxxxx na xxx strany xxxxxxx xxxx za xxxxxx xxxxxx xxxxxx v xΩ/xxxxxx xxxx (obrázek 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx exponovaných xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxx xx obrázku 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxx konec xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka xxxxx xxxxxxxxx ponořené v xxxxxxx síranu hořečnatého xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xx dně komory. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxx teflonové xxxxxxxx xx udržuje xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx všimnout, xx xx-xx naměřená xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, xxxx xx xxx xxxxxxxxx vrstvou xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. O odstranění xxxx vrstvy xx xxx xxxxxxx např. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx hořečnatého se xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx hořečnatým.
Výsledky XXX (střední xxxxxxx) xxxx přijatelné, pokud xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx látky x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx TER pro xxxxxxxxx aktivní látky xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx nebo xxxxx 5 xΩ, lze xxxxxxx xx tkáni xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx předchozí aplikaci xxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx terčíku xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxx 10 x omývají proudem xxxx o xxxxxxx xxxxxxxx teplotě, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx sejmou z xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx scintilační xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx deionizovanou vodu (8 xx). Xxxxxxxx xx lehce 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx odstranilo další xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx terčíky xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % xxxxxxx (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (SDS) x xxxxxxxxxxx vodě x inkubují xx xxxx noc xxx 60 °C. Po xxxxxxxx xx všechny xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °C (xxxxxxxxx odstředivá síla ˜ 175). 1 xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx 4 ml 30 % (x/X) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (A) xx xxxx xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx xxxxxx barviva
Obsah xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx terčík kůže xx xxxxxxx x xxxxxx A (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu X se xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pro uvedení xxxxxxxxx látky xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx obsahu barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx xxxxxxx (μg/terčík xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx lze xxxxxx aplikovat na xxxxxxx xxxx xx xxxxxx dobu (xxxx. 2 hodiny), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx ukázala, xx stanovení XXX xxxxxxxxxxxx leptavé účinky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek při xxxxxx aplikaci xx xxxxxx kůže xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx toto xxxxxxxxx umožnilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx účinky x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx 24xxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxx xx xxxxxxx hodnoty XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx zařízením x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány x xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx tedy xxxxxxxxxx xxxxxxx x určit xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx až xx xxxx 4 xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x funkční xxxxxxxx xxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) pod definovanou xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx je založena xx hypotéze, že xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx rohovitou xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx x hlubších xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Popis zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx, musí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Model xxxx xxx funkční xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx. Xx xxx prokázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx látkám, xxxxx xxxxxxxx neproniknou xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínek reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x modelu musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxx XXX, tj. xxxxxxx xxxxxxx absorbance X) xx xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx látce xxxx xxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (xx xxxxxxxx x životaschopností xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx být xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx odpovídal mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx povrch xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx množství xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx kůži, a xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx ovlhčena, xxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx látky xx měly xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx široké xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx uplynutí expoziční xxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx být použita xxxxxxxx validovaná kvantitativní xxxxxx. Nejčastěji se xxxxxxx stanovení redukce XXX, xxx xxx xx v různých xxxxxxxxxxxx prokázalo, že xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže xx xxxxxx do xxxxxxx XXX x koncentraci 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina modrého xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx měřením xxxxxxxxxx X xxx vlnové xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx model kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx xxxxxxxx životaschopnosti xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx metodika x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chemických látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx rozhodující, aby xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx laboratoře x xxxx laboratořemi xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou xxxxxxxx (2) x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Hodnoty xxxxxx (kΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx všechny xxxxxxxxxx referenční chemické xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx s xxxxxxx lidské kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx X a xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x pro xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x středních xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx 5 xΩ, xxxx látka žíravá. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ x xxxxx x povrchově xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx neutrálních organických xxxxx, které dávají xxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx barviva. Xx-xx střední obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx větší nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % XXx jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx pozitivní, x xxxxx xx tedy xxxxxx. Je-li xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx menší xxx střední xxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx, je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx žíravá.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx buněk; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx každý xxxxxxxx xxxxxx lze použít x xxxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx k negativní xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx xxxxxxxx, že xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx alespoň tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx, pokud xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- podrobnosti xxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx odporu (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx (xxxxxxx x modelem lidské xxxx) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx hodnotách, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. H., Archer, X. E. X., Xxxxx, X., Botham, X. X., Curren, X. X., Xxxx, X. X., Esdaile, X. X., Holzhutter, X-X., Xxxxxxx, X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx study xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Results xxx xxxxxxxxxx xx xxx Management Xxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Brantom, X. G., Xxxxxx, X. H., Gerner, X., Walker, X. X., Worth, X. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx tests xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx the test xxxxxxxxx, Toxicology in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxx, C. (1986), An xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Food Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, X. X., Xxxx, T. X., Dennett, X., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), The xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: results of xx interlaboratory trial, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Fentem, X. X., Xxxxx, X., Botham, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxx, L. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, M. (1998), An evaluation xx xxx proposed XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, M., Barratt, X. D., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. X., Gardner, X. X., Gordon, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Xxxxx, R. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Osborne, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, X. F., Xxxxxxxx, W., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx on xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx určitým chemickým xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušené xxxxx, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx může plynout xx xxxxxxxx látky xx xxxxxxx s xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx viditelnému xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx in xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vyvolané xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx fototoxické xx vivo xx xxxxxxxxxx podání x xx xxxxxxxx xx xxxx, x xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx jako xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx zkouškám xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx postupných zkoušek xx vitro xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Výsledky xx zkoušek xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxxx fototoxickými xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx účinků xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxx, aby xxxxxxxx hodnocení stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxx xx W/m2 nebo xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × s) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 nm), XXX (280315 xx) x UVC (100280 xx). Xxxxxxxxx se xxxxxx xxxx označení: xxxx xxxxxxx xxxx XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx UV-A1 a XX-X2 s xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných xxxxxxxx) x xxxxx v xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk: xxxxxxxxxxxxxxx x poměru x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx prošly xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, nebo xxx UV), ale xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx potenciálu. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx použít xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (photo-irritation xxxxxx — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (EC50) xxxxxxxx xxxxx, x xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ XX) x xxx něho (-XX).
XXX (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x matematické xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) a xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, vyvolaná xx první xxxxxxxx xxxx xxxxxxx chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx xx systémovém xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x popisu xxxxx těch fototoxických xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (topické nebo xxxxxx). Tyto xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx vždy x nespecifickému buněčnému xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx x která xxxxxxxx xxxxxxxx dobu jeden xxxx xxx xxxxx xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx x genového xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, který xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxx xxxxxxx, je xxx xxxx vyvinutou zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx chemické látky xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých při xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Úvodní xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným společným xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x oblasti xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje fotoreakce xxxxxxxxxxx absorpci xxxxxxxxxx xxxxx. Před zvážením xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. podle Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx fotoreaktivní xxxxxxxxx a xxxxxx xxx xxxxxxxx zkouškou xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx absorpce xxxxxx (chemickým) chromoforem xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx k xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX světla a xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx zkoušce xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně (XX) (9) 24 xxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x ozáření.
Buňky Balb/c 3X3 se 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx 1 x preinkubují xxxx různými koncentracemi xxxxxxxxxx látek. Poté xx jedna xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dávkou UVA/VIS xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), zatímco xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx (-UV xxxxxxxxxx). X obou xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx dalších 24 x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vzhledem x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx každou x xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se porovnají xxxxxxxxxxxx závislé odezvy xxxxxxx xxx xxxxxxx (+ UV) x xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, xx. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx jakosti
Citlivost xxxxx xx XXX, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX by xxxx být pravidelně xxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 až 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví x xxx xxxxxxx xxxxxxxx NRU. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jakosti, xxxx-xx jejich životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx než 80 % xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx vždy po xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx UVA xxx xxxxxxxxxx zkoušce: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jakosti, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx bez xxxx vykazují xxx + UVA xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x tomtéž xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (X540 XXX) xxxxxx v xxxxxxxx XX negativních kontrol xxxxxxx, xxx 1 × 104 buněk xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx zachovalo xxx xxxxx během xxxx xxx zkoušky obvyklou xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx splňuje xxxxxxxxx přijatelnosti, jestliže xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx fototoxicity 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx chlorpromazin (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Xxx XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti zkoušky: xxx XXX xxxxxxx (+ XXX): XX50 = 0,1 xx 0,2 μg/ml, xxx XXX neozářený (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly jiné xxxxx xxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx z xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. V xxxxxxx případě by xxxx být xx xxxxxxx dosavadních xxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx xxxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx rozsahy xxxxxx XX50 a PIF xxxx XXX (střední xxxxxxxx účinek).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použita xxxxxxxxxxx xxxx linie fibroplastů — Balb/c 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx ECACC x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx linie mohou xxx xxx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační podmínky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx musí xxx prokázána jejich xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx kontrolovány, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x měly xx být xxxxxxx xxxxx xxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx UV xxxxxxx x počtem xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x nižší než xxx xxxxxx. Je xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx buněk Balb/c 3X3 xx UVA xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx jakosti xxxxxxxx x xxxx metodice.
1.7.1.2 Xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx a během xxxxxxxxxx xxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxx Balb/c 3X3 xx jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Eagleova media) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx telecím xxxxx, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x streptomycinem a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx důležité xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx buněčné xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx zkoušce fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx konce xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx jamku.
Pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx stejným xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx podrobeny xxxxxx xxxxxxx zkoušky za xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx je udržována x temnu (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxx zkouškách xx xxxxx určených xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx toxinu xx vivo xxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx metabolická xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxx byla xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, xxxxx údaje x xxxxxxxx neprokazují xxxxxxxxxxxx skladování. Xxxx-xx xxxxx x rychlé xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx fyziologickém xxxxxxx, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x fosfátovým xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx absorbující xxxxxx, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické látky x omezenou xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx by xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 fyziologickým xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx xxxxx xxxxxxxxx, xx. x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (EtOH). Xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx méně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx xxxx xx xxx pečlivě posouzeny xxxxxx specifické vlastnosti, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku, xxxxxxxxx fototoxických účinků, xxxxxx radikálů.
Je-li xxxxx, xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx použito xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí xx 37 °X.
1.7.1.6 Ozáření XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx x pásmu XXX a ve xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření v xxxxx XXX xx xxxx xxxxxxxxxx x xx přímo vysoce xxxxxxxxxxx, xxxxxxx jeho xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 xx x 280 xx 1000krát (11). Kritéria xxx xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx by xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx požadavek, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, x aby xxxxx světelného xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (infračervená xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx simulátorech xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx halogenová xxxxxxx. Xxxxx z nich xx xx xxxxxx, xx emituje xxxx xxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx dokonalá. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx UVB záření, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx xx xxxx xxx použito spektrum xxxxxxxxx zbavené XXX xxxxxx (XXX:XXX ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx xxxxxx filtrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxx použitého xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí pravidelně xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kontrolovat xx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx xxxx xxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Funkčnost XX-xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxxx a xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx kalibrovaný UV-metr xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx případě by xxx xxx x xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx zdroje světla x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx školenými osobami.
Dávka 5 X/xx2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx dobu 50 xxx. musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx xx použita xxxx buněčná xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, může xxx xxxxx UVA záření xxxxx upravena, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx světelné xxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx záření (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx pozitivních výsledků (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx být vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx koncentrací xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených se xxxxxxx (+ XXX) x bez xxxxxx (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx stanoveny x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx koncentrační xxxx x intervaly xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx tak, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx faktorem xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx xxxxxxxx 1 × 105 buněk/ml x kultivačním xxxxx x 100 μx xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx zbývajících xxxxx xx dávkuje xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 xxxxx xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx připraví xxx xxxxxxxx: xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x druhá xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx přichycení x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx xxxxxxxxxx médium x xxxxx dekantuje x xxxxx xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (negativní xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 různých koncentrací xxxxxxxx chemické xxxxx. Xxxxx xx zkoušenou xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx XXX xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx přes víčko 96xxxxxxx destičky UVA xxxxxxx o xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vody xxx xxxxxx, větrá xx pomocí ventilátoru. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx ponechají 50 xxx. (doba xxxxxxxx XXX) v xxxxx xxx pokojové teplotě.
Zkušební xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx přes xxx (18-22 x) (7,5 % XX2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx se xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinkem xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx se xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx promyjí 150 μx předehřátého XXXX/XXX x promývací roztok xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se 100 μx xxxxx XX a inkubuje xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 150 μl XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x zcela xxxxxx (xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx poloze).
Přidá xx xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného roztoku xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx NR.
Destička xx xxxxxx 10 min. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx XX x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx extraktu XX xxx 540 nm, xxxxxxx se pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x počítači pro xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx UVA/VIS nebo xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx cytotoxicita, měl xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx nastaven xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xx do xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxx (-UVA) xxxxxxxxxxx, xxx mohla xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), může být xxxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, stačí xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx koncentrace.
Ověření xxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxx být xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látka xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx případech stačí xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx experimenty xxx xxxxxxxx rozmezí xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu by xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx pro dosažení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx příprava xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx faktorem xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx být xxxxx v xxxxx xxxxxxxx inkubační xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx mít xxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, stanoví xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odpovídající 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx nelineární xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx regresí) xxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jiných xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx by měla xxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kvalita xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx grafického proložení. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx osy y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx této xxxxxxxxxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx případech jak xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx ozáření (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX) xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx XXX &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx chemická látka xxxxxxxxxxx xxxxx xxx +XXX x xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -UV xxxxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Cmax), x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx fototoxického potenciálu xxxx xxxxxxx > 1.
Xxxxxxxx nelze x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace žádnou xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx EC50 (+ XX), svědčí xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxx charakterizaci výsledku xxxxxxx formální xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx získat xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) xx xxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx model verze 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx novou xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx vyvinut s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx studii xxxxxxxxxxxx xx vitro u xxxxxxxxxx látek, které xx xxxxxxx xxxx XX filtry (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx jako xxxxx XXX v případech, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx EC50. Tento xxxxx xxxxxxx střední xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (XXX), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx křivek xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx použití modelu xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx software, xxxxx je volně x dispozici.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (XXX ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx, xx látka xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podmínek xxxx xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx zkušební xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo intenzity xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx další xxxxx. Xx se xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx nebo zkoušení xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (XXX &xx; 5 nebo XXX < 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx zkoušet chemickou xxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, že chemická xxxxx nemá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx toxické xxxxxx xx xxxxxxxxxxx (EC50 +XX x EC50 -XX), xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+UV x -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx omezeny xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, není xxxxxx zkouška xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. za xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o xxxxxxx
Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx obsahovat tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx údaje a xxxxx CAS, je-li xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx důležité pro xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- rozpustnost xxxxxxxx xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- procentuální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- typ x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx před xxxxxxxx x po xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx chemické látky:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx, zdůvodnění xxxxxxxx zkušební koncentrace,
- xxx x složení xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx světla,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce použitého xxxxxx (použitých xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx o xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx zkoušeného xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX záření (intenzita × čas), xxxxxxxxx x X/xx2,
- teplota xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a teplota xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx podmínky x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx extrakce XX (extrakční xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx),
- vlnová xxxxx použitá pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- složení slepého xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx při xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx paralelních xxxxxxxxxxxxx +XXX x -UVA,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- srovnání xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci xxxxxxxxx x xxxxxxxx XXX/XXX x bez xxxx, x to xxx xxxxxxxx fotoiritačního faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx negativní kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx údaje pro xxxxxxxxx kontrolu, xxxxxxx xxxxxxx x směrodatná xxxxxxxx,
- kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx EC50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní chemické xxxxx: xxxxxxx EC50 (+XXX), EC50 (-UVA) x PIF, střední xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Döring, B., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. W., Xxxxxx, X., Moldenhauer, F., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx in vitro xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx with x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx scientific xxxxxxxx xx xxx 3X3 XXX PT xxxx (xx xx xxxxx xxxx xxx phototoxicity), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: ECVAM xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. X., Xxxxxxxxxx, G., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Xxxxxxxx, X. X., Csato, X., Sladowski, D., Xxxxxxxx, W., Brantom, X. (1998), EU/COLIPA "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxx XX (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx test, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Guidelines Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Xxxxxx xx the XXXX Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Toxicological Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Paris, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx xx substances xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Xxxxxxxxxx, X., Prino, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx chemistry Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Xxxxxxx Publishing Xx, Amsterdam, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, B. X., Maurer, T., Xxxxxxx, X. A., Xxxx, W. X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx report xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Photosensitization. X: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx morphological xxxxxxxxxxx and xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. A., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx models xxx phototoxicity testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, H. I. Xxxxxxx xxx.), Taylor &xxx; Francis, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx human xxxx xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx relative cytotoxicity xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx violet xxxxxxx xx sunlight on xxxxxxxxx keratinocytes, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. prosince 1997 M. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Management Xxxx xx the XX/XXXXXX xxxxxxx "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xx Silva, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Lovell, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx on xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Annex XXX xx xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx the 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Quedenau, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxxx to xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, H. X. (1997), X xxxxxxx measure xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx curves xxx xxx use xxx xxxxxxxxxx xxx xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).