Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx po xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx předpisů xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx s xxxxxxxx xxx EHP)
KOMISE XXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXX,
x xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx xx směrnici Xxxx 67/548/XXX ze xxx 27. xxxxxx 1967 x sbližování xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících se xxxxxxxxxxx, balení x xxxxxxxxxx nebezpečných látek [2], naposledy xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], a xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) V xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pokroku.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o sbližování xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx být pokus, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx, je-li rozumně x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/EHS xxxxxx alternativní zkušební xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xxxxx xx. 3 odst. 1 směrnice 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx této směrnice xxxx x xxxxxxx xx stanoviskem Výboru xxx přizpůsobení xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx úseku xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX SMĚRNICI:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X a XX xxxx směrnice xx xxxxxx do xxxxx X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Článek 2
1. Členské xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx souladu x touto směrnicí xxxxxxxxxx do 1. xxxxx 2001. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx přijaté xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx odkaz na xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx úředním xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské xxxxx.
2. Xxxxxxx státy xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx vnitrostátních xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx přijmou x oblasti xxxxxxxxxx xxxx směrnice, x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx společenství.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx členským xxxxxx.
V Xxxxxxx xxx 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx před xxxxxxxxxxxxx po dvacáté xxxxx.
[2] Xx. xxxx. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Úř. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx zkoušky xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx na xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx transkutánního xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) a xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx metod (XXXXX, Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Evropské Komise) (1, 2, 3) xxxxxxxxx jako xxxxxxx xxxxxx. Validační xxxxxx XXXXX xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxx založené xx xxxxxx lidské xxxx xxxx umožnil xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx těžké xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx poleptání kůže, X 34) (2). Xxxxx x xxxxxx xxxx zkoušek je xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx xx xxx xxxxxxx, xxxxxx na xxxxxxxxxxxx požadavcích x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, část X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx kůže: xxxxxxxx poškození kůže xx aplikaci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx až xx 24 x xxxxxxxxx na epidermální xxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx schopností xxxxxxxx xxxxxx normální xxxxxxxxx x xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx vrstvy (xxxxxxx xxxxxxx), která xx xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx nesnižují XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a neutrální xxxxxxxxx látky (xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx zařadit xxxxxx xxx stanovení vázání xxxxxxx, aby xx xxxxxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pro tyto xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí být xxxxxxxxxx z mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xx poté xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx antibiotik (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx xxxxx x xxxxxx den xx xxxxxx omytí xxxxx xxxxx roztokem xxxxxxxxxx x xxxxxxx se xx 3 dnů (x xxxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxx xxxxxxx starší než 31 xxx).
1.5.2 Příprava xxxxxxx kůže
Zvířata se xxxxxxx usmrtí. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxx xx x kůže xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží xxxx xxxxx xxxxxxxxx (XXXX) xxxxxxxx xxx, xxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxx s xxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx těsně xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxxxxxx, x přebytek xxxxx xx ořízne. Xxxxxxx xxxxxxxx a X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx teflonové xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Trubička xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx svorky xx xxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) xx aplikuje xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx tak, xxx byla pokryta xxxx epidermis. Xxxx xx na xxxxxx xxxxx látky xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x trubička xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xx 30 °X, xxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxx, xxxx rozemletím xx xxxxxx materiál nebo xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx xxxxx se xxxxxxx xxx terčíky xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx xxxx xxx 1.5.3.4). Xxxxxxxx xxxxx xx zcela xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx xxxxxxx 30 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx x xxxxxxxx ztuhly, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx teplé xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX se xxxx xxxxxxxxxxxxxx impedančním xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx (xxxx. XXX 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Před xxxxxxx xx povrchové xxxxxx kůže xxxxx xxxxxxxx dostatečného objemu 70 % ethanolu xxx, aby byla xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx sekundách xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x tkáň xx xxxxxx xxxxxxxx 3 xx roztoku xxxxxx hořečnatého (154 xX). Xxxxxxxxx můstku xx xxxxxx na xxx strany terčíku xxxx xx xxxxxx xxxxxx odporu x xΩ/xxxxxx kůže (obrázek 2). Xxxxxxx elektrod x délky xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (silné) xxxxxxxxx je během xxxxxx xxxxxx opřena x xxxxx konec xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx části xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové xxxxxx xxx, xxx spočívala xx dně xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx spodkem xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx teflonové trubičky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx naměřené xxxxxxx odporu.
Je třeba xx xxxxxxxx, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx než 20 xΩ, může to xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx látky na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. O xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx se xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička zakryje xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx hořečnatého se xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx hodnoty) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx spadají xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx doporučeny xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Upravený xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx organické látky
Jsou-li xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx tkáni xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx postupem se xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx xxxxx se xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx se xxxx přibližně 10 x xxxxxxx proudem xxxx o xxxxxxx xxxxxxxx teplotě, aby xx odstranilo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Všechny xxxxxxx kůže xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx do xxxxxxxx (xxxx. 20 xx xxxxxxxx lahvičky xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 xx). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. xxxxxxxxxxxx, xxx xx odstranilo další xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování se xxxx zopakuje, x xxxx xx terčíky xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x destilované xxxx x xxxxxxxx xx xxxx noc xxx 60 °X. Po xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx vyjmou x xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °C (xxxxxxxxx odstředivá xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx supernatantu xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (m/V) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (A) xx xxxx při xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx sulforhodaminu B xx terčík xxxx xx xxxxxxx z xxxxxx X (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X xxx 565 xx = 8,7 × 104; molekulová xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vázání xxxxxxx xxxx přijatelné, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx přijatelného xxxxxxx xxxxxx. Pro popsanou xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx hodnoty xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx barviva (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X kyselina xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Negativní |
Destilovaná xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx aplikovat na xxxxxxx xxxx na xxxxxx dobu (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx leptavé. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx kůže xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky x xxxxx xxx leptavých xxxxxx při 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx zařízení a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx vliv xx xxxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, jež xxxx xxxxxxx v xxxx metodě. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx řady xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xx validační xxxxxx (3).
1.6 Podstata zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx po xxxx 4 xxxxx xx trojrozměrný xxxxx xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx zkoušky redukce XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx xx založena xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (difuzí nebo xxxxx) x jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx buněčných xxxxxxxx.
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx lidské xxxx xxxxx pocházet z xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx pod xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. To xxx xxxxxxxx demonstrací xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx neproniknou xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx musí xxx dostatečně xxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. redukcí XXX, xx. xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx A) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro daný xxxxx. Podobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (ve xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx, xxx xxxxx xxxxxxxxx mezinárodním xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx zkoušeného xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx pokrylo xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U xxxxxxx xxxxxxxxx musí být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky, xxx xxxxxxx xxxx, a xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx byl xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx látky xx měly xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx, že aplikační xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxx materiál x xxxxxxx xxxx opatrně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk
K xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx validovaná xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx xxxx xx xxxxxx xx roztoku XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °X xx dobu 3 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx vlnové xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, postupu xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx xxxx xx výsledky životaschopnosti xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx metodika x xxxxxxxxxxx xxxxx byly xxxxxxxxxxx zkoušením xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX (3). Xx rozhodující, aby xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx a xxxx xxxxxxxxxxxx reprodukovatelnost xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx splňovat xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx kritéria xxx xxxxxxxx validitu (2) a výsledky xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx být xxxxxxxxxxx xx vědeckém xxxxxxxx x předcházející odbornou xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Zkouška TER xx xxxx potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx hodnotách a x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x procentech xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x pro xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx včetně xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx ve xxxxx tabulky.
2.2 Xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx výsledků
2.2.1 Xxxxxxx TER na xxxx potkana
Je-li xxxxxxx XXX dosažená xxx xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 kΩ, xxxx xxxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx nebo xxxxx 5 xΩ x xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxx žíravá.
U xxxxxxxxx aktivních látek xxxx neutrálních organických xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, lze provést xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx obsah xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % HCl jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, je xxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx xxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx barviva x xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl, je xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x xxxxxxx lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X xxxxxxxx xxx každý xxxxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xxxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx materiály xx xxxxxxxxxx materiálů, které xxxxxx xxxxxx (nebo xxxxxx se rozlišují xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), xxxx xxx xxx předpovědní xxxxx xxxxx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx potvrdit, xx xx vhodný (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx alespoň tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- identifikační xxxxx, xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx pro referenční xxxxx, xxxxx byly xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- popis x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx odporu (xxxxxxx TER) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. H., Archer, X. X. B., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. D., Earl, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx in xxxxx xxxxx for xxxx xxxxxxxxxxx. 2. Results xxx xxxxxxxxxx by xxx Xxxxxxxxxx Xxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. G., Xxxxxx, X. H., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Worth, X. X. (1998), Xxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx corrosivity. 1. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xx the xxxx xxxxxxxxx, Toxicology in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, X. X., Rhodes, X. (1986), An in xxxxx xxxx corrosivity xxxx — modifications xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Xxxxxx, P. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X., XxXxxx, X. C., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Gardner, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx in xxxxx: results xx xx interlaboratory xxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Fentem, X. H., Balls, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Earl, X. X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx proposed XXXX xxxxxxx strategy xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. A., Xxxxxxxxxxx, M., Xxxxxxx, X. D., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. J., Gardner, X. X., Xxxxxx, X. C., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx and recommendations xx ECVAM workshop 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 NRU XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx první expozici xxxx určitým chemickým xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx slouží x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. existence nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx plynout xx xxxxxxxx látky xx xxxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx in xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx je stanovení xxxxxxxxxxxx vyvolané kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sloučeniny, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx nanesení xx xxxx, x rovněž xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx fotoiritanty.
Zkouška xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) s xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. V xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXXX xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx pro xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x akutními xxxxxxxxxxxxx xxxx fotoiritačmi účinky xx xxxx u xxxxxx a x xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Zkouška xxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže xxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx xxxxxxxx tyto specifické xxxxxxxxxx, xxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxx není vyvinuta x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx xxxxxxx v xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx dopadajícího xx povrch, měřená xx X/x2 xxxx xX/xx2.
Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx povrch, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × s) xx plochu xxxxxxx, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx pásma XX xxxxxx: xxxxxxxx doporučená xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x UVC (100280 xx). Používají xx xxxxxx jiná označení: xxxx xxxxxxx mezi XXX x XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 nm x xxxxx XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx UV-A1 x XX-X2 s xxxxxxx xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: parametr, xxxxxx xx měří celková xxxxxxxx buněčné populace (xxxx. příjem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx buněčných xxxxxxxx) x který v xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxx uspořádání xxxxxxx xxxxxxxx s celkovým xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (x XX, nebo xxx UV), ale xxxxxx exponovány xxxxxxxxx xxxxxxxxx látkám.
Předpovědní xxxxx: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxx — fotoiritační faktor): xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, a xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ UV) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx photo xxxxxx — xxxxxxx světelný xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx celého průběhu xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: akutní xxxxxxx reakce, xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx a následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx po xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx úroveň pojmu "xxxxxxxxxxxx", xxxxx se xxxxxxx k popisu xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx kůži xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (topické xxxx xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx vedou xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx aplikaci chemické xxxxx a xxxxxx x která vyžaduje xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxx týdny xxxx xxx, xxx xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx expozici xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX světla x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx vyvolaná opakovanou xxxxxxxx světla x xxxxxxxx látky. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx používá x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx chemickou xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, který xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, xx xxx xxxx vyvinutou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xxxxxxxxxx použít jako xxxxxxxxxx chemické látky xxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x mnoha xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx jediným xxxxxxxxx xxxxx xx schopnost xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) vyžaduje xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx absorpci xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx zvážením xxxxxxxxxxxx zkoušení xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX absorpční xxxxxxxx zkoušené chemické xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx menší xxx 10 x.xxx-1.xx-1, chemická xxxxx nemá xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x nemusí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxx jinou biologickou xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx může absorpce xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx necytotoxické xxxxx XXX/XXX xxxxxx a xxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx červeně (XX) (9) 24 xxxxx po působení xxxxxxxx chemické látky x ozáření.
Buňky Balb/c 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx destičky na xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx se xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx ze xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 J/cm2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx druhá xxxxxxxx xx udržuje x xxxxx (-UV xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx se poté xxxxxxxxx médium xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem a xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx příjmem xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Relativní xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx závislé xxxxxx xxxxxxx xxx ozáření (+ XX) a xxx xxxxxxx (-XX), xxxxxxx při xxxxxxx XX50, tj. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % úbytek buněčné xxxxxxxxxxxxxxxx xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX by xxxx xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxx 1 xx 9 X/xx2 x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX. Buňky xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx po xxxxxx pasážích buněk.
Citlivost xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % ethanolem (XxXX)) xxxx xxx xxxx xxxxxxxx při + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx neozářených xxxxx x xxxxxx rozpouštědle xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x temnu (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 NRU) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx dvou xxx zkoušky xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx známá xxxxxxxxxxx xxxxxxxx látka. Při xxxxxxxxx xxxxxx EU/COLIPA xxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx doporučen. Pro XXX xxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxx CPZ ozářený (+ UVA): XX50 = 0,1 až 0,2 μx/xx, xxx XXX xxxxxxxxx (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx měl xxx xxxxxxx 6.
Namísto XXX mohou xxx xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx fototoxické chemické xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxx případě by xxxx být xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kritéria xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx přiměřeným způsobem xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x PIF xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx účinek).
1.7 Xxxxx xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx použita permanentní xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx x banky XXXX, nebo z xxxxx ECACC x xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx nebo xxxxxxx xxxxx mohou xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nejsou kontaminovány xxxxxxxxxxxx, a xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx kontroly xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx citlivost buněk xx XX xxxxxxx x počtem xxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 z xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x nižší než xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx buněk Xxxx/x 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx buněčné xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx být použita xxxxxx kultivační xxxxx x inkubační xxxxxxxx. X xxxxx Xxxx/x 3X3 xx jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX xxxxxxxxxx, penicilinem x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Xxxxxxx xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx použité buňky xxxx buněčné linie.
1.7.1.3 Xxxxxxxx xxxxxx
Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx hustotě x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx před použitím xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx fototoxicity xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxx hustotě, xxx nedosáhly konfluence xx xxxxx zkoušky, xx. xx xxxxxxxx, xxx xx xx 48 x xx xxxxxxxx stanovována xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx x 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx látku xx xxxxx nasadí stejným xxxxxxxx do xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx podmínek kromě xxxx, kdy je xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) a xxxxx je xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx aktivace
Zatímco xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx systému xx xxxxxxx požadavkem při xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx žádná xxxxxxxx xxxxx, pro xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxx nebo xx xxxxx je xxxxxxxx metabolická transformace. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx xxxxxxxx xxx xx vědecky xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx provedena xx systémem aktivace xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Zkoušená chemická xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, pokud xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx červeným xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx fyziologickém roztoku, xxxx. x Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (EBSS) xxxx ve fyziologickém xxxxxxx s fosfátovým xxxxxx (XXX), xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx světlo, xxx nerušily xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxx rozpustností xx vodě xx xxxx být xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx by xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li xx xxxxxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx x konstantní xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve všech xxxxxxxxx, tj. x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (XxXX). Xxxxx xxx použita xxxx xxxxxx méně cytotoxická xxxxxxxxxxxx (např. aceton), xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. reakce xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx třeba, xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx zahřátí xx 37 °X.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušení fototoxicity. Xxxxxx v xxxxx XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx záření x xxxxx XXX xx xxxx relevantní a xx přímo vysoce xxxxxxxxxxx, xxxxxxx jeho xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 xx a 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx vhodného xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx důležitý xxxxxxxxx, xxx xxxxx světla xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, x aby xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxxx po přijatelnou xxxx) xxxx xxxxxxxxxx xxx detekci známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxxx xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx slunečního xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. X xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, tak vysokotlaká xxxxxxx halogenová xxxxxxx. Xxxxx z xxxx xx xx xxxxxx, xx xxxxxxx méně xxxxx a je xxxxxxxx, avšak xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx cytotoxické xxxxxx délky XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx by mělo xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx UVB xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx simulátoru xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx ozáření) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx za xxxxxxx vhodného xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx xxxx xxx kontrolována x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx UV-metr xxxxxxxx xxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx by xxx xxx v xxxxxxx časových xxxxxxxxx xxxxxx x měření xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 J/cm2 byla xxx xxxxxxxxx studii xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 a xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 J/cm2 xx dobu 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx ozáření xxxxxxxxx xx 1,666 XX/xx2. Xxxxxxxx je xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxx být xxxxx UVA xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx dostatečná xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vypočte xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 X =.W xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μx/xx, xxxxx všechny xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx pozitivních výsledků (xxxxxxxxxxxx). Hodnota xX xxxxxxxx xxxxxxxxxxx by xxxx být xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx zkoušených xx xxxxxxx (+ XXX) x bez xxxxxx (-XXX) by měly xxx xxxxxxxx stanoveny x předchozích experimentech xxx zjištění xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx tak, aby xxxx křivky závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podloženy xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Měla by xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μx xxxxxxx xxxxxxxx o hustotě 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx dvě xxxxxxxx: xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Tato inkubační xxxx xxxxxx regeneraci xxxxx, jejich přichycení x xxxxxxxxxxxxx xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx x buněk xxxxxxxxx x každá jamka xx xxxxxxx dvakrát 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx EBSS/PBS obsahujících xxxxxxx koncentraci zkoušené xxxxxxxx látky xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky. Xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ozářením XXX xx buňky xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vody xxx víčkem, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx ozáření UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (doba xxxxxxxx XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se odstraní x xxxxx xxxxx xx promyje dvakrát 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX se xxxxxxx xxxxxxxxxxx médiem x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % CO2, 37 °C).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x xxxxxxx kontrastem. Xxxxxxxxxxx xx změny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Doporučuje xx xxxxxxxx tuto xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx experimentální chyby, xxxxx xxxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx fototoxicity xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx xxxxxxxxxxxx EBSS/PBS x promývací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Přidá xx 100 μx média XX x inkubuje xx 3 x xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx xx xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x kyseliny xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx NR.
Destička xx xxxxxx 10 min. xxxxx xx třepačce, xxxxx xx NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx změří xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx slepý xxxxx. Údaje xx xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX) x počítači xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xx měly xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx UVA/VIS xxxx xxx něho. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxx rozsah xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxx xxxxxxxx experimentálními xxxxx křivku. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx nemusela být xx do xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml xxxxxx xxx experiment x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx vysoce xxxxxxxxxxx po ozáření (+XXX), xxxx xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx být x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx xxx splněn xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Není-li x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx dávkami až xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxxxx experimentem xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx byla xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx dostatečně xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx hlavní xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x výsledky xxxxxx hraničních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx být xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx považováno xx xxxxxxxx, může xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx této xxxxxxx xx xxxxxxxx roztoků xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být změna xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití xxxxxxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx může být xxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx možné, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (NR) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Hillovou funkcí xxxx logistickou regresí) xxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx EC50 xxx popřípadě xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx proložení. X xxxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx papír (měřítko xxx x: xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), neboť x xxxxx xxxxxxxxx bude xx této xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx bez ozáření (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF) xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
(x) PIF = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxxxx hodnota XXX ≥ 5 předpovídá xxxxxxxxx fototoxického potenciálu.
Jestliže xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX x není xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX vypočítat, třebaže xxx o xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxxx xxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxx se xxxxxxx -UV zkouška xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentrace (Xxxx), x xxxx xxxxxxx xx použije xxx xxxxxxx "&xx; PIF";
(b) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; PIF", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx hodnota &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxx, xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx hodnotu XX50 (+ XX), svědčí xx o xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx formální hodnota "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx li xxxxxx xxxxx xxxxxxx "XXX = *1", xx xxxx hodnota předpovědí xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) by xxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx dosažené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu, který xxx xxxxxxx s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx studie EU/COLIPA (15) x byl xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx nemá xxxxxxx xxxx model XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxx získat xxxxxxx EC50. Xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx účinek (mean xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (XXX ≥ 5 nebo XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx in vivo. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μg/ml, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nezbytné xxxxx xxxxx. Ty se xxxxx xxxxx xxxxx x penetraci, xxxxxxxx x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx xxxxx alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxx.
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, xx látka xxxxxx pro xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx po xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, znamenají xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx nemá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxx lze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxx nižších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx odezvy xx koncentraci (EC50 +XX x EC50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx toxicita xxxxxxxxx (+XX x -XX) x jsou-li xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vodě na xxxxxxx menší xxx 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx látku vhodná x mělo by xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx modelu xxxxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- fyzikální xxxxxxxxxx x čistota,
- fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx důležité xxx xxxxxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxx x fotostabilita, jsou-li xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (XXXX xxxx XXX).
Xxxxx:
- typ x xxxxx buněk,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx radiometrem xxxxxxxx ve zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxx inkubací x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx látky:
- xxxxxxxxxx xxxxxx koncentrací xxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxx xxx při xxxxxxx XX/XXX, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vykazuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx zkušební koncentrace,
- xxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx),
- délka xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx ozáření XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xX/xx2,
- xxxxx xxxxxxxx XX/XXX světlu,
- xxxxx XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), vyjádřena x J/cm2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx CO2, teplota, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx extrakce),
- xxxxxx xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX,
- xxxxx (xxxxxxxxxx) xxxxxx délka, xx-xx xxxxxxx,
- složení xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- životaschopnost xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx střední životaschopnosti xxxxxxx,
- xxxxxx závislosti xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx xxxxxx relativní xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx: xx-xx to možné, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) a XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxx x xxxxxxxx UVA/VIS x bez xxxx, x xx buď xxxxxxxx fotoiritačního faktoru (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), nebo výpočtem xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx effect) (XXX),
- klasifikace fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx a) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxx životaschopnost (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx buněk,
- xxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxxxx kontrolu, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx pozitivní kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-XXX) a XXX-xxxxxxxxx kontrolní chemické xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontrolní chemické xxxxx: xxxxxxx EC50 (+XXX), EC50 (-XXX) x XXX, střední xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxx, S., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, H., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, X., Moldenhauer, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Steiling, X., Xxxxxxxx, X. (1994), XXX/XXXXXX xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: First xxxxxxx xxxxxxxx with x Xxxx/x 3X3 xxxx phototoxicity xxxxx, Xxxxxxxxxx xx vitro 8, 793-796.
(2) Anon (1998), Xxxxxxxxx on xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxx 3T3 XXX XX xxxx (xx xx vitro xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Centre: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, ATLA 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Balls, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. X., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Holzhütter, X. G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Maurer, T., Xxxxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X. M., Xxxxx, X., Xxxxxxxxx, D., Xxxxxxxx, X., Brantom, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx xxxxx, results xx xxxxx XX (xxxxx xxxxx), part 1: the 3T3 XXX phototoxicity test, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Report xx xxx XXXX Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Validation and Xxxxxxxxxx Criteria of Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, W. X. (1993), X xxxxxx xxx xx vitro xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in Vitro 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), List xx xxx photodynamic substances, Xxxxxxxx progress in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Vol. 3 Part 1, Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, H., Lovell, X. X., Xöxxxx, X., Xxxxxxx, B. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxx, M. A., Xxxx, W. J. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The report xxx xxxxxxxxxxxxxxx of XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. X. (1989), Photosensitization. X: Xxx science xx xxxxxxxxxxxx, (X. C. Xxxxx, xx.), Xxxxxx Xxxxx, New Xxxx, 2. vyd., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Puerner, X. A. (1985), Xxxxxxxx determination xx xxxxx by morphological xxxxxxxxxxx and neutral xxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx eds.), Taylor &xxx; Francis, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, R. X., Xxxxxx X. (1987), Action xxxxxxx xxx xxxxx skin xxxxx: xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx ultraviolet xxx xxxxxx xxxxxxx xx sunlight xx xxxxxxxxx keratinocytes, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3X3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 týmem Xxxxxxxxxx Xxxx xx xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Photoirritation".
(13) Xxxxxxxxx, X., Balls, M., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Xxxxxx, W. X., Pfannenbecker (1998), X Study xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx XX Xxxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX xx xxx XX Directive 76/768/EEC xx xxx 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, ATLA 26, 679-708.
(14) Holzhütter, X. G., Xxxxxxxx, X. (1995), Mathematical xxxxxxxxx of cellular xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, H. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx from pairs xx dose-response xxxxxx xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx chemicals, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxxxx (12).