Xxxxxxxx Xxxxxx 2000/33/ES
ze xxx 25. xxxxx 2000,
xxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/EHS x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Xxxx x xxxxxxxx pro XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Smlouvu x xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx,
x xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. června 1967 o xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx týkajících xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx parlamentu x Rady 1999/33/XX [3], a xxxxxxx xx článek 28 xxxxxxx směrnice,
vzhledem k xxxxx důvodům:
(1) X xxxxxxx X směrnice 67/548/XXX se xxxxxxx xxxxxx pro stanovení xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx vlastností, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 směrnice Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 o sbližování xxxxxxxx x správních xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx účely [4] xxxxx být xxxxx, xxx němž xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, xx-xx rozumně x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx do xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xxxxx xx. 3 xxxx. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x souladu xx stanoviskem Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx o xxxxxxxxxx technických xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx,
XXXXXXX XXXX XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X x II xxxx směrnice se xxxxxx do xxxxx X přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx v xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Neprodleně x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn xxx xxxxxx úředním vyhlášení. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx znění xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, které xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxxxx tabulku mezi xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x Xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
V Bruselu dne 25. xxxxx 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Xxxxxxxöx
xxxxxx Xxxxxx
[1] Xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx po xxxxxxx xxxxx.
[2] Xx. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Úř. věst. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX NA XXXX
1. XXXXXX
1.1 Úvod
Dvě xxxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx (XXX) x xxxxxxx x xxxxxxxx modelu xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx střediskem pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx metod (XXXXX, Společné xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx XXXXX prokázala, že xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxx leptající a xxxxxxxxxxx kůži. Xxxxxxxx x zkoušce založené xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, R 35 x xxxxxxx látky xxxxxxxxxxx poleptání xxxx, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx xx být xxxxxxx, závisí xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx úvod, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx kůže xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 a 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx — zkouška XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx je xx xx 24 h xxxxxxxxx xx epidermální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Materiály x xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxxxxx xxxxxxxx integrity x xxxxxxxxx funkce xxxxxxxx vrstvy (stratum xxxxxxx), která xx xxxxxx xxxx snížení xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx nesnižují XXX xxx xxxxxxxx hodnotu. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx povrchově aktivní xxxxx a neutrální xxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxx xxx literatura (6)) xxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx výsledků získaných xxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxx látek (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx musí být xxxxxxxxxx z xxxxxxx (20 — 23 xxxxxxx) potkanů (Wistar xxxx srovnatelný xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx holicím xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxxxxx xxxxxxxxxx (obsahujícího xxxx. xxxxxxxxxxxx, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx a amfotericin x xxxxxxxxxxxxx zastavujících xxxx xxxxxxxx). Zvířata xx třetí a xxxxxx xxx po xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí xx xx 3 dnů (x přípravě xxxx xxxxx xxx použita xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Xxxxxxxx xxxxxxx kůže
Zvířata xx xxxxxxx usmrtí. Z xxxxxxx zvířete se xxxx opatrně xxxxxxxx xxxxxxx kůže a xxxxxxxxxx xxx xx x kůže opatrně xxxxxxxxx. Xxxx xx xxxx přeloží přes xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx byla x xxxxxxxx x trubičkou. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X-xxxxxxx, xxx xxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx ořízne. Rozměry xxxxxxxx x O-kroužku xxxx uvedeny xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pružinové xxxxxx xx umístí do xxxxxxxxxxx komory xxxxxxxxxx xxxxxx síranu xxxxxxxxxxx (154 xX) (xxxxxxx 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (xxx. 2). Xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxx epidermis. Xxxx xx xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x trubička xx lehce protřepe. Xxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx na 30 °X, xxx se xxxxxxxx látka roztavila, xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx nebo xx xxxxxx.
Xx xxxxxxx xxxxx látky se xxxxxxx tři terčíky xxxx. Xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx po xxxx 24 h (xxx také bod 1.5.3.4). Xxxxxxxx látka xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx tekoucí xxxx x xxxxxxx nejvýše 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx x trubičce ztuhly, xxx xxxxxxxx omytím xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °C.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx nízkonapěťovým impedančním xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. AIM 401 xxxx 6401 xxxx xxxxxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx objemu 70 % xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxxxxx zakryta. Xx xxxxxxxx sekundách xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí přidáním 3 ml xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Elektrody xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx v xΩ/xxxxxx xxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxxxxx x délky xxxxxxxxxxxx xxxxx elektrod pod xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxx opřena x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxx, xx xx délka xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Vnější (xxxxx) xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx receptorové xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx teflonové xxxxxxxx xx xxxxxxx konstantní (xxxxxxx 1), neboť xxxx xxxxxxxxxx má xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx odporu.
Je třeba xx všimnout, že xx-xx naměřená xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může to xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx terčíku xxxx. O odstranění xxxx xxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (střední hodnoty) xxxx přijatelné, xxxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx rozpětí xxxxxx. Xxx popsanou xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx přijatelná rozpětí xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx xxxx organické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xxxxx postupem xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx falešně pozitivní (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx terčíku kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % roztoku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx kůže xx xxxx xxxxxxxxx 10 x xxxxxxx xxxxxxx xxxx x nejvýše xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx veškeré xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx kůže xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xx do xxxxxxxx (např. 20 xx xxxxxxxx lahvičky xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx (8 ml). Xxxxxxxx xx xxxxx 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx další xxxxx xxxxxxx. Xxxx xxxxxx oplachování se xxxx zopakuje, a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 xx 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (SDS) x xxxxxxxxxxx vodě x xxxxxxxx xx xxxx noc xxx 60 °C. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx vyjmou x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx se xxxxxxxx 8 min. xxx 21 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx ˜ 175). 1 xx vzorku supernatantu xx xxxx xxxxx 4 xx 30 % (m/V) roztoku XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx (A) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 nm.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu barviva
Obsah xxxxxxx sulforhodaminu B xx xxxxxx xxxx xx xxxxxxx z xxxxxx X (molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sulforhodaminu X při 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx barviva xxxxxxxxxxxxxx X xx xxxxxxx xxx každý xxxxxx xxxx x poté xx vypočte xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxx látky xxxxxxxxxx xxxx přijatelné xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx barviva:
|
Kontrola |
Látka |
Rozmezí xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx voda |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxx na xxxxxx dobu (např. 2 xxxxxx), aby xx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x několika zkoušených xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx aplikaci na xxxxxx xxxx po xxxx 2 xxxxx (2), třebaže toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx experimentální postup xxxxx xxx xxxx xx xxxxxxx hodnoty XXX. Xxxx 5 Ω xxx předpověď xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xx zařízením x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány x xxxx metodě. Doporučuje xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx studii (3).
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx materiál xx xxxxxxxxx až po xxxx 4 xxxxx xx trojrozměrný model xxxxxx kůže xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Materiály s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx specifikované xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx např. xxxxxxxx xxxxxxx redukce XXX) xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx hypotéze, že xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx nebo xxxxx) a jsou xxxxxxxxxx cytotoxické, aby xxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx — stanovení xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx
1.7.1 Xxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxx lidské kůže xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx zdrojů, xxxx xxxx xxxxxxxx určitá xxxxxxxx. Model xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy xxxx xxx dostatečná. To xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx modelu x xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, že model xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx buněk (xxxxxxxxx xxxx. redukcí XXX, xx. měřením xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce xxxx xxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxx pro daný xxxxx. Podobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxx (xx srovnání x xxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx látku) xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Nejdůležitější xxxxxx je, aby xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálu
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx aplikováno dostatečné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (minimálně 25 μx/xx2). X xxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx látka xx xxxx xxx xxxxxxxx, xxx byl xxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxx potřeby před xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxx xx použitelná xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx buněk xxxx xxx použita xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Nejčastěji xx xxxxxxx xxxxxxxxx redukce XXX, xxx xxx xx v různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxxxxx správné x xxxxxxxxxxxxxxxx výsledky (2). Xxxxxx kůže xx xxxxxx do xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx 0,3 xx/xx xxx xxxxxxx 20-28 °C xx dobu 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx měřením absorbance X při xxxxxx xxxxx 545 xx 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x přesné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx doby, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxx xxxxx vliv xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx ve validační xxxxxx ECVAM (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x mezinárodními xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx laboratoře a xxxx laboratořemi xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx xxxxx. Metoda xxxx splňovat xxxxxxx xxx definovaná xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx (2) a výsledky xxxxxx xxxxxxxxx studie xxxx být xxxxxxxxxxx xx vědeckém xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxx (kΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx x xxx všechny xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x procentech xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x x odvozené xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx uvedeny xx xxxxx xxxxxxx.
2.2 Hodnocení x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Je-li hodnota XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx látku xxxxx xxx 5 kΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx XXX xxxxx nebo xxxxx 5 kΩ a xxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xx látka žíravá.
U xxxxxxxxx xxxxxxxxx látek xxxx xxxxxxxxxxx organických xxxxx, které xxxxxx xxxxxxx TER menší xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xx-xx střední obsah xxxxxxx v terčíku xxxx větší xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl jakožto xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx zkoušené látky xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xx xxxx xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx menší xxx xxxxxxx obsah xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx xxxxxxx 36 % HCl, xx xxxxxxx falešně pozitivní, x látka tedy xxxx xxxxxx.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem lidské xxxx
Xxxxxxx xxxxxxxxxx A xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx; xxxxxxx xxxxxxxxxx X dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x výpočtu xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx. Hraniční xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx žíravé (nebo xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx leptavých xxxxxx), xxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx x zkoušce musí xxxxxxxxx alespoň tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx látka:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx fyzikálně-chemické xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxx referenční xxxxx, pokud xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx jakýchkoli xxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxx odporu (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x procentech (xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x duplicitních xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx,
- xxxxx jakýchkoli xxxxxx pozorovaných xxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) XXXXX (1998), XXXXX News &xxx; Xxxxx, ATLA 26, 275-280.
(2) Xxxxxx, X. X., Archer, X. X. X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X. A., Xxxxxx, X. X., Xxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx, X-X., Liebsch, X. (1998), The ECVAM xxxxxxxxxxxxx validation study xx xx vitro xxxxx for skin xxxxxxxxxxx. 2. Results xxx xxxxxxxxxx by xxx Management Xxxx, Xxxxxxxxxx in vitro 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. G., Fentem, X. H., Xxxxxx, X., Xxxxxx, A. X., Worth, X. X. (1998), Xxx XXXXX international xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xx xxx test xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, G. J. X., Xxxxxxxxx, X. X., Rhodes, X. (1986), Xx xx xxxxx skin corrosivity xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx validation, Xxxx Xxxx. Xxxxxxx. 24, 507-512.
(5) Botham, X. X., Hall, T. X., Dennett, X., XxXxxx, X. C., Xxxxxxxxx, X. A., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, D. X., Xxxxxxx, X. (1992), The skin xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. P., Xxxxxx, X. H., Balls, X., Botham, X. X., Xxxxxx, R. X., Xxxx, X. X., Esdaile, D. X., Liebsch, M. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx proposed XXXX testing xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, X. A., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxx, X. R., Gordon, X. X., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, R. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxx, J. X., Xxxxxxxx, X., Walker, X. X., Balls, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx skin xxxxxxxxxxx testing. Xxx xxxxxx and recommendations xx ECVAM xxxxxxxx 6, ATLA 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX II
"B.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX FOTOTOXICITY 3X3 XXX XX XXXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx definována xxxx xxxxxxx odezva xxxxxxxx xx xxxxx expozici xxxx určitým xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx látky.
Informace xxxxxxx ze xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx slouží x identifikaci xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušené xxxxx, xx. xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx možného xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx látky xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV záření xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x hlediska xxxxxxxxxxx je stanovení xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxx, xxx xxxxxxxx identifikovat xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx podání a xx xxxxxxxx xx xxxx, a xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x rámci spojeného xxxxxxxx EU/COLIPA v xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x cílem xxxxxxxx platnou xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx. X xxxx 1996 xxxxxxxxxx xxxxxxxx skupina OECD xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušek xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Výsledky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx u xxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx určena xxx xxxxxxxxx xxxxxx nepříznivých xxxxxx, které mohou xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky x světla, např. xxxxxxxxxxxxxxxx, fotoalergie x xxxxxxxxxxxxxxxxx, třebaže xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxxxxxxx reagovat. Zkouška xxxx xxxx vyvinuta x xxxx, aby xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek xx uvedena x xxxxxxx.
1.2 Definice
Intenzita xxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxx xx X/x2 nebo xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (xxxxxxxxx × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxx (X × x) xx xxxxxx povrchu, xxxx. X/x2 xxxx X/xx2.
Xxxxxx xxxxx UV xxxxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx de x'Xxxxxxxxx): XXX (315400 xx), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Používají xx xxxxxx xxxx označení: xxxx hranice xxxx XXX a XXX xx xxxxx používána xxxxxxx 320 xx x pásmo XXX xxxx být rozděleno xx UV-A1 x XX-X2 x xxxxxxx xxxxx 340 nm.
Životaschopnost xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. příjem xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální červeně xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x na xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušky xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx životaschopnost xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolám (xxxxxxxxxxxx), které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx zkoušky (x UV, xxxx xxx UV), ale xxxxxx exponovány zkoušeným xxxxxxxxx látkám.
Předpovědní model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxx zkoušek xxxxxxxx na předpověď xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxxxx metodice xxx xxx převod xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xx předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx faktor XXX x xxxxxxxx XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx factor — xxxxxxxxxxxx faktor): xxxxxx xxxxxxx srovnáním xxxx xxxxxx účinných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx xxx necytotoxickém xxxxxxx XXX/XXX světlem (+ UV) a xxx něho (-XX).
XXX (xxxx photo xxxxxx — střední xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x matematické xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx účinku xx xxxxxxxxxxx získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX/xxx světlem (+ XX) x bez xxxx (-XX).
Xxxxxxxxxxxx: akutní xxxxxxx reakce, vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x následné xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx vyvolaná ozářením xxxx xx systémovém xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx pojmu "xxxxxxxxxxxx", který se xxxxxxx x popisu xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xx expozici xxxxxxxxx xxxxxx (topické xxxx xxxxxx). Tyto fototoxické xxxxxx xxxxx xxxx x nespecifickému xxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxx reakci xxx opalování).
Fotoalergie: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla x která vyžaduje xxxxxxxx xxxx jeden xxxx xxx xxxxx xxxx tím, xxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx negenotoxické xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxx xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx XX zářením xxxxxxxx chemickou xxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxx, je xxx xxxx xxxxxxxxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx použitých xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx poznámky
Fototoxické xxxxxx byly zaznamenány x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle xxxxxxx xxxxxx fotochemie (Grotthaus-Draperův xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx zvážením xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx metodiky xx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XX/XXX absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxx Xxxxxxxx XXXX 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx než 10 l.mol-1.cm-1, xxxxxxxx xxxxx nemá xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx nebo xxxxxxxxx jinou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx účinky (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební metody
Byly xxxxxxxxxxxxxx čtyři xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx k poškození xxxxx. Zkouška xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx je proto xxxxxxxx xx srovnání xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX xxxxxx a xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx xx v xxxx zkoušce vyjádřena xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příjmu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky x ozáření.
Buňky Xxxx/x 3X3 xx 24 x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Dvě 96xxxxxxx destičky xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx poté 1 h preinkubují xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX/XXX xxxxxx 5 J/cm2 XXX (+ UV xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x temnu (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx médium nahradí xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxx 24 x xxxxxxxx je xxxxxxx životaschopnost xxxxxxxxx 3xxxxxxxxx xxxxxxx neutrální xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x procentech xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxx každou z xxxx zkušebních xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx při ozáření (+ UV) x xxx xxxxxxx (-UV), xxxxxxx xxx xxxxxxx XX50, tj. xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx XXX, dosavadní xxxxx: xxxxxxxxx xxxxx xx XXX by xxxx být pravidelně xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx při intenzitě xxxxxxx xx zkoušce xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx vitro, xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxx XXX záření 1 xx 9 X/xx2 x buněčná xxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví x xxx později xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx kritérium jakosti, xxxx-xx xxxxxx životaschopnost xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx buněk.
Citlivost xxxxx xxxxxxxxx kontroly xx XXX xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx negativní xxxxxxxx (xxxxx x XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx xxx xxxx vykazují xxx + UVA xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % vzhledem x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx experimentu x xxxxx (-UVA).
Životaschopnost xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (A540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX negativních xxxxxxx xxxxxxx, zda 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx xx jednu xxxxx xxxxxxxxx při xxxxx během xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X540 XXX xxxxxxxxxxxxxx kontrol xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx fototoxická xxxxxxxx látka. Xxx xxxxxxxxx studii XX/XXXXXX xxx použit xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), a je xxxx xxxxxxxxx. Pro XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti zkoušky: xxx XXX ozářený (+ XXX): EC50 = 0,1 xx 0,2 μg/ml, pro XXX neozářený (-XXX): XX50 = 7,0 xx 90,0 μg/ml. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx (PIF), xx. posun xxxxxxx XX50, by xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jiné xxxxx xxxxxxxxxxx chemické xxxxx vhodné x xxxxxxxx typu xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx přiměřeným xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x XXX xxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxxx účinek).
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Xxxxxxxx
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx xxxxxxxxx studii xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx linie xxxxxxxxxxx — Xxxx/x 3X3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx z xxxxx XXXXX a xx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx buňky nebo xxxxxxx linie mohou xxx xxx stejném xxxxxxxxx postupu použity xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx měly xxx pravidelně xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, x xxxx xx být xxxxxxx xxxxx tehdy, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx citlivost xxxxx xx UV xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Balb/c 3X3 x xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, nejlépe x xxxxx xxx xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxx buněk Balb/c 3X3 na XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jakosti popsaným x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx a kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx kultivační média x xxxxxxxxx xxxxxxxx. X buněk Xxxx/x 3X3 xx xxxxx x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, 4xX glutaminem, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště xxxxxxxx xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx buněčný cyklus xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxx nasazují xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x takové xxxxxxx, xxx xxxxxxxxx konfluence xx konce xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx je xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx životaschopnost. Xxx buňky Xxxx/x 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx destičkách xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96xxxxxxxxx destiček, xxxxx xxxx poté xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx, xxx xx xxxxx z xxxxxxxx xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx udržována x xxxxx (-UVA/VIS).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx použití xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxx zkouškách in xxxxx určených xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx chemická xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx xx vivo nebo xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxx xxx za xxxxxxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx chemické xxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, xxxxx údaje x stálosti neprokazují xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx látky xxxxxxxx xxx červeným světlem.
Zkoušené xxxxxxxx látky xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXXX) xxxx xx fyziologickém xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxx (PBS), který xxxxx obsahovat xxxxxxxxxx xxxxxx a xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx 100násobek xxxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace x xxxx xx měly xxx zředěny x xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Použije-li se xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. xx všech xxxxxxxxx, tj. x xxxxxxxxx kontrole x xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx rozpouštědly xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) x xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (např. xxxxxx), xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx chemickou xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx rozpouštění xxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx na 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX xxxxxxx/xxxxxxxx
Xxxxx světla: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxx v xxxxx XXX x ve xxxxxxxxxx pásmu xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB je xxxx xxxxxxxxxx a xx přímo xxxxxx xxxxxxxxxxx, přičemž xxxx xxxxxxxxxxxx vzrůstá xxxx 313 xx a 280 nm 1000krát (11). Kritéria pro xxxxx xxxxxxxx světelného xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx zdroj xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, které xxxxxxxx chemická látka xxxxxxxxx, a xxx xxxxx světelného xxxxxx (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) byla dostatečná xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxxxx), xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx poškozovat xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx halogenová výbojka. Xxxxx x nich xx xx výhodu, xx xxxxxxx méně xxxxx x je xxxxxxxx, xxxxx její xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx není xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx solární xxxxxxxxxx vyzařují významné xxxxxxxx UVB záření, xxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx délky UVB xxxxxxxxx.
Xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU in xxxxx xx xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx UVB xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx xxxxxx filtrovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxx publikován x xxxxxxxxxx (3).
Xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) xx musí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx. XX-xxxx musí xxx pro daný xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx by měla xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx referenční xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. V xxxxxxxx xxxxxxx xx xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx k měření xxxxxxxxxx intenzity xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx světla x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx širokopásmového UV-metru xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx vyžadují xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx osobami.
Dávka 5 X/xx2 byla xxx validační xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Balb/c 3X3 x xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nastavena xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx použita xxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, může xxx xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, aby xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx standardních xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx:
x(xxx) = dávka xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / intenzita xxxxxxx (mW/cm2) 60 (1 X =.X xxx)
1.7.2 Zkušební podmínky
Maximální xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx xxxxx by xxxxxx xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx koncentrace by xxxx xxx vyhovující (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx (+ XXX) x bez světla (-XXX) xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x předchozích xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx řady x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxx, aby xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx postup [1]
1.7.3.1 Xxxxx xxx
Xxxxxxxx xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 buněk/ml x kultivačním médiu x 100 μx xxxxxxxxxxxx média xx xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (xxxxx xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk xx xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx: jedna pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxxx fotocytotoxicity (+XXX).
Xxxxx xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °C), xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx inkubační xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx růst.
1.7.3.2 Xxxxx den
Po inkubaci xx kultivační médium x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx jamka xx xxxxxxx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. Xxxxx xx 100 μx XXXX/XXX xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx xx 8 xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se zkoušenou xxxxxxxxx látkou xx xxxxxxxx x xxxxx xx dobu 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °C).
K xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ozářením XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě po xxxx 50 min. xxxxxxx xxxx víčko 96xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 MW/cm2 (5 X/xx2. Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx ventilátoru. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx xxxxxxxxx 50 xxx. (xxxx expozice XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.
Zkušební xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx EBSS/PBS. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx se xxxx xxx (18-22 x) (7,5 % CO2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky se xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x fázovým xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx chyby, xxxxx xxxxxxx se xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx fototoxicity xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx červeně.
Buňky xx xxxxxxx 150 μx předehřátého EBSS/PBS x xxxxxxxxx roztok xx xxxxxxx odstraní xxxxxxxx. Přidá xx 100 μl xxxxx XX x xxxxxxxx xx 3 h xxx 37 °X xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx inkubaci xx xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μl xxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx na třepačce, xxxxx se XX x buněk nevylouží x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR xxx 540 xx, xxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxx ve xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx smysluplnou analýzu xxxxxxxxxx odpovědi xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx xxxx. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx x interval xxxx xxxx xxxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxx proložit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx křivku. Vzhledem x tomu, že xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxx xx xx mezní xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx experiment x xxxxx (-UVA) xxxxxxxxxxx, ale xxxxx xx být xxxxxx xxxxxxxxxxx xx ozáření (+XXX), xxxx být xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx být x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx lišily, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx kvality xxxxx. Xxxx-xx v xxxx částech xxxxxxxxxxx (-XXX x +XXX) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx zkoušku x xxxxxxx intervaly xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx nejvyšší xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx být xxxx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx xxxxxxxxx stačí xxxxx xxxxxx experiment xxxxxxxxx jednou xxxx xxxx xxxxxxxxxxx experimenty xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx hodnot xxxxxxxxxxxxx modelu xx xxxx xxx xxx xxxxxxxx opakovány.
Je-li xxxxxxxxx xxxxxxxx považováno xx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx dosažení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx důvodu xxxx být xxxxx xxxxxxxx (jiné xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, použití ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx x úvahu xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odpovídající 50 % inhibici xxxxxxxxx xxxxxx neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx jakékoli xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Hillovou xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxx závislosti xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx proložení (14). Xxxx použitím xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx by měla xxx vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx případě xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx osy y: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx této transformaci xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx výsledků (xxxxxxxxxxx modely)
2.3.1 Xxxxxxxxxxx xxxxx — verze 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxxx jak xxx xxxxxxx (+XXX), xxx xxx xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx koncentraci, lze xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx PIF ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx látka xxxxxxxxxxx xxxxx při +XXX x není xxxxxxxxxxx při zkoušce -XXX, xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x výsledek, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxx se xxxxxxx -XX xxxxxxx xx po xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Cmax), x xxxx hodnota xx xxxxxxx xxx xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; PIF = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+UV))
Lze xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx toho, že xxxxxxxx látka xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx hodnotu EC50 (+ XX), xxxxxx xx x neexistenci xxxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(X) &xx; XXX = *1 = (Cmax (-XX)) / (Cmax (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "PIF = *1", je xxxx hodnota xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx b) a x) by měly xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX in xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx verze 2: střední xxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx xxxxx verzi xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxx vyvinut s xxxxxxxx údajů x xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX (15) a xxx xxxxxxxx naslepo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vitro x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xx chovají xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nelze xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (MPE), xxxxxxxx, která je xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci. Xxx xxxxxxx modelu xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Berlín) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx je volně x xxxxxxxxx.
2.4 Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 NRU xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx koncentracích xxx 10 μx/xx, xx xxxx pravděpodobné, xx xxxxx bude xxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx in xxxx. Xx-xx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xx xx xxxxx xxxxx údajů x xxxxxxxxx, absorpci x xxxxx akumulaci xxxxxxxx xxxxx x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx látky alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže in xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx (XXX &xx; 5 xxxx XXX &xx; 0,1) xxxxxxx, že xxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx fototoxická. V xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxx zkoušet chemickou xxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx, znamenají xxxxxxxxx xxxxxxxx, že xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, xxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx obdrženy totožné xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx koncentraci (EC50 +XX a EC50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+XX x -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx rozpustností xx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxx 100 μg/ml, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx látku xxxxxx x xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. xx xxxxxxx xxxxxx lidské xxxx in xxxxx xxxx xxxxxxxx in xxxx).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx x xxxxxxx
Xxxxxxxx o zkoušce xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx vlastnosti x xxxxxxx,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx studie,
- xxxxxxx x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění volby xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx v tomto xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x aplikačním xxxxx (XXXX nebo XXX).
Xxxxx:
- xxx a xxxxx xxxxx,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- xxxxx buněčné xxxxxx, xx-xx známo,
- xxxxxxxxx xxxxx xx XXX xxxxxxxxx radiometrem xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro
Zkušební xxxxxxxx x) — inkubace xxxx xxxxxxxx a xx xx:
- xxx x xxxxxxx kultivačního xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- délka inkubace (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx ní).
Zkušební xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru koncentrací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx XX/XXX, tak xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost a xxxx cytotoxická, zdůvodnění xxxxxxxx zkušební xxxxxxxxxxx,
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok),
- délka xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx/xxxxxxxx použitého xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx o jeho xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, vyjádřená x xX/xx2,
- xxxxx expozice XX/XXX xxxxxx,
- dávka XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), vyjádřena x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x teplota xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- xxxxxxx xxxxx XX,
- xxxx xxxxxxxx XX,
- inkubační xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (extrakční činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx absorbance XX,
- druhá (referenční) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx střední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na koncentraci (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) získané xxx paralelních xxxxxxxxxxxxx +XXX x -XXX,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx: xx-xx to xxxxx, xxxxxxx hodnoty XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx xxxx xxxxxx závislosti odezvy xx xxxxxxxxxxx získaných x ozářením UVA/VIS x xxx něho, x xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx xxxxxx ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx photo effect) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx a) — xxxxxxxx negativní kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx XX) xxxxxxxxx x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx údaje xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxx XX50 (+UVA), XX50 (-XXX) x XXX-xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx chemické xxxxx: hodnoty XX50 (+XXX), EC50 (-XXX) x XXX, střední xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx výsledků.
Závěry.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, H., Xxxxx, X., Xöxxxx, X., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., L'Eplattenier, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Willshaw, X. (1994), XXX/XXXXXX project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: First xxxxxxx obtained xxxx x Xxxx/x 3X3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Statement xx xxx xxxxxxxxxx validity xx xxx 3X3 XXX XX test (xx xx vitro xxxx for phototoxicity), Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx, Joint Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxx, X. J. W., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. X., Clothier, X., Xxxxxxx, P., Xxxxxxxxx, X., Liebsch, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxxxx, U., Potthast, X. X., Csato, X., Sladowski, X., Xxxxxxxx, X., Brantom, X. (1998), EU/COLIPA "Xx vitro xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, xxxxxxx xx xxxxx II (xxxxx trial), xxxx 1: xxx 3X3 XXX phototoxicity xxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 12, 305-327.
(4) OECD Xxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Final Report xx the OECD Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Xxxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx Test Xxxxxxx, XXXX Publications Xxxxxx, Paris, 1996.
(5) Xxxxxx, X. X. (1993), X xxxxxx xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx substances xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx in Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Xxxx 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XX–XXXX.
(7) Xxxxxxxxx, H., Xxxxxx, X. W., Hölzle, X., Xxxxxxx, X. X., Maurer, X., Xxxxxxx, M. X., Xxxx, X. J. X., Sapora, X., Xxxxxxxxx, X. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Xxxxxxxxxxxxxxxxxx. V: Xxx science of xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, E., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx neutral xxx absorption, Xxxxxxx. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, L. A., Xxxxxx, X. G., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxxxxx, H. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. vyd., 515-530.
(11) Xxxxxxx, X. X., Pidoux X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx human xxxx xxxxx: estimates xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, near xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx regions xx xxxxxxxx on xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Xxxx/x 3T3 XXX Xxxxxxxxxxxxx Test, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 X. Liebschem, xxxxxxxxx 6. března 1998 xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxx of xxx XX/XXXXXX xxxxxxx "In Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. J. X., Xx Xxxxx, X., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, W. X., Pfannenbecker (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Filter Xxxxxxxxx xxxx Xxxxx XXX of xxx XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3T3 XXX In Vitro Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Holzhütter, X. X. (1997), X xxxxxxx xxxxxxx of xx xxxxx phototoxicity xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx vivo xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Xxxxxxx
&xxxx;
[1] Další xxxxxxxxxxx xxx nalézt x xxxxxxxxxx (12).