Směrnice Xxxxxx 2000/33/XX
xx xxx 25. dubna 2000,
xxxxxx xx po xxxxxxx xxxxx přizpůsobuje xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx x označování xxxxxxxxxxxx xxxxx [1]
(Text s xxxxxxxx xxx XXX)
XXXXXX XXXXXXXXXX SPOLEČENSTVÍ,
s xxxxxxx xx Xxxxxxx x xxxxxxxx Evropského společenství,
s xxxxxxx na xxxxxxxx Xxxx 67/548/XXX xx xxx 27. června 1967 x sbližování xxxxxxxx a správních xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxxx nebezpečných xxxxx [2], naposledy pozměněnou xxxxxxxx Evropského xxxxxxxxxx x Xxxx 1999/33/XX [3], x zejména xx xxxxxx 28 xxxxxxx xxxxxxxx,
xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx:
(1) V xxxxxxx X xxxxxxxx 67/548/XXX xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx technickému xxxxxxx.
(2) Xxxxx xx. 7 xxxx. 2 xxxxxxxx Xxxx 86/609/XXX xx xxx 24. xxxxxxxxx 1986 x sbližování xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx členských xxxxx xxxxxxxxxx xx ochrany xxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x jiné xxxxxxx xxxxx [4] xxxxx být xxxxx, xxx xxxx xx xxx xxxxxxx zvíře, xxxxxxxx, je-li xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxxxxxx xxxxxx.
(3) Xxxxxx zamýšlí xxxxxxx xx přílohy X xxxxxxxx 67/548/XXX xxxxxx xxxxxxxxxxxx zkušební xxxxxx, xxx nichž xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx zpřístupnit xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx. 3 odst. 1 xxxxxxxx 67/548/XXX.
(4) Xxxxxxxx této směrnice xxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx Výboru xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx směrnic o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx překážek xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx látek x xxxxxxxxx,
XXXXXXX TUTO XXXXXXXX:
Xxxxxx 1
Xxxx xxxxxx X x II xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx X xxxxxxx V xxxxxxxx 67/548/XXX.
Xxxxxx 2
1. Členské xxxxx uvedou v xxxxxxxx právní x xxxxxxx xxxxxxxx nezbytné xxx xxxxxxxx xxxxxxx x touto xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx 1. xxxxx 2001. Xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx Xxxxxx.
Xxxx předpisy xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxx směrnici xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx učiněn při xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx členské státy.
2. Xxxxxxx xxxxx xxxxx Xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx právních xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx směrnice, a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx a přijatými xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 3
Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxx po xxxxxxxxx x Úředním xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxx 4
Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.
X Bruselu xxx 25. dubna 2000.
Xx Xxxxxx
Xxxxxx Wallström
členka Komise
[1] Xxxxxxx před xxxxxxxxxxxxx xx dvacáté xxxxx.
[2] Úř. věst. 196, 16.8.1967, x. 1.
[3] Xx. xxxx. X 199, 30.7.1999, x. 57.
[4] Xx. xxxx. X 358, 18.12.1986, x. 1.
XXXXXXX X
"X.40 XXXXXXX XXXXXX XX XXXX
1. XXXXXX
1.1 Xxxx
Xxx zkoušky xx vitro na xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xx principu xxxxxxxxx transkutánního elektrického xxxxxx xxxx potkana (XXX) a zkouška x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx metod (XXXXX, Xxxxxxxx výzkumné xxxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx) (1, 2, 3) xxxxxxxxx xxxx vědecky xxxxxx. Xxxxxxxxx studie XXXXX xxxxxxxxx, že xxxxx zkouškami xxx xxxxxxxxxx rozlišit xxxxx xxxxx leptající x xxxxxxxxxxx xxxx. Protokol x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx lidské xxxx xxxx umožnil xxxxxxx rozlišit xxxxxx xxxxxxxx účinků (xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx těžké xxxxxxxxx, X 35 x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, X 34) (2). Xxxxx a xxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx; xxxxx zkoušky, xxxxx xx xxx xxxxxxx, závisí xx xxxxxxxxxxxx požadavcích a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxx xxxx Xxxxxx xxxx, xxxx X.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxx: xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxx 1.5.3.4 x 1.7.2.3.
1.4 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx potkana
Zkoušený xxxxxxxx xx xx xx 24 h xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx způsobit xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vrstvy (stratum xxxxxxx), xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx xxxxxxxxx XXX pod xxxxxxxx xxxxxx (5 xΩ) (4, 5). Xxxxxxxx x nedráždivé xxxxx xxxxxxxxx XXX xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx aktivní xxxxx x neutrální xxxxxxxxx látky (definice xxx xxxxxxxxxx (6)) xxx xxxxxxx stupeň xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx získaných xxxxx xxx tyto xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2, 7).
1.5 Popis xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxx XXX xx xxxx xxxxxxx
1.5.1 Xxxxxxx
Xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x mladých (20 — 23 xxxxxxx) xxxxxxx (Wistar xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxx x xxxxx xxxx xx opatrně xxxxxxxx holicím strojkem. Xxxxxxx xx xxxx xxxxx opatrným otíráním, xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxxxxxx, penicilin, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx den xx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x použijí xx xx 3 dnů (x přípravě xxxx xxxxx xxx použita xxxxxxx starší xxx 31 xxx).
1.5.2 Příprava xxxxxxx xxxx
Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Z xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx odstraní xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xxx se x xxxx opatrně xxxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxx přes xxxxx teflonové (XXXX) xxxxxxxx tak, xxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx x trubičkou. Xxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx přetáhne xxxxxxx X-xxxxxxx, aby xxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx tkáně xx ořízne. Xxxxxxx xxxxxxxx x X-xxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxxx X-xxxxxxx xx teflonové xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx držená xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX) (obrázek 2).
1.5.3 Xxxxxxxx xxxxxx
1.5.3.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (150 μx) se xxxxxxxx xx epidermis xxxxxx xxxxxxxx (obr. 2). Xxx zkoušení xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx, xxx byla xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxx xx xx povrch xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (150 μx) x xxxxxxxx xx lehce xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxx xxxxx k xxxxxxxxxxx xxxxx. U xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx na 30 °X, xxx xx xxxxxxxx xxxxx roztavila, xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xx prášek.
Ke xxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxx. Zkoušená látka xx xxxxxxxx xx xxxx 24 x (xxx také bod 1.5.3.4). Zkoušená látka xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx vody x xxxxxxx xxxxxxx 30 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx látek, xxxxx x trubičce xxxxxx, xxx xxxxxxxx omytím xxxxxxx vody xxxxx xx 30 °X.
1.5.3.2 Xxxxxx XXX
XXX xx xxxx nízkonapěťovým xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx střídavý xxxxx (xxxx. XXX 401 nebo 6401 xxxx ekvivalentní). Před xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx kůže sníží xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 70 % xxxxxxxx xxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx odstraní xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx zvlhčí přidáním 3 xx roztoku xxxxxx xxxxxxxxxxx (154 xX). Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx za účelem xxxxxx xxxxxx x xΩ/xxxxxx xxxx (obrázek 2). Xxxxxxx elektrod x xxxxx exponovaných xxxxx elektrod pod xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxx xx xxxxxxx 1. Xxxxxx xxxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx je xxxxx xxxxxx odporu xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxx trubičky, xxx xxxx zajištěno, xx xx délka xxxxx xxxxxxxxx ponořené x xxxxxxx síranu hořečnatého xxxxxx. Xxxxxx (xxxxx) xxxxxxxxx xx umístěna xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx, aby xxxxxxxxx xx xxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxxxxxx 1), xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxx na naměřené xxxxxxx odporu.
Je xxxxx xx všimnout, xx xx-xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxx 20 xΩ, může to xxx způsobeno xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxx straně xxxxxxx xxxx. X xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxx pokusit xxxx. xxx, xx xx xxxxxxxxx trubička xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx x 10 x xx protřepává. Xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xx opakuje x xxxxxxxx síranem xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx XXX (xxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx tyto xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx přijatelná xxxxxxx xxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx odporu (xΩ) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx chlorovodíková (36 %) |
0,5–1,0 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
10–25 |
1.5.3.3 Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx
Xxxx-xx xxxxxxx XXX pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx zkoušené látky xxxxx xxxx rovny 5 xΩ, xxx xxxxxxx xx tkáni xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (2).
1.5.3.3.1 Xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X
Xx xxxxxxxxx aplikaci xxxxxxxx látky xx xx xxxxxxxxxxx stranu xxxxxxx xxxxxxx kůže xxxxxxxx xx 2 x 150 μx 10 % roztoku xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X x destilované vodě. Xxxxxxx xxxx xx xxxx přibližně 10 x xxxxxxx proudem xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx kůže xx xxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxx (např. 20 xx skleněné xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx spektrometrii) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodu (8 ml). Xxxxxxxx xx lehce 5 xxx. protřepávají, xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx. Tato xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx, x xxxx xx terčíky xxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 5 ml 30 % roztoku (x/X) xxxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx (XXX) x xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx při 60 °C. Xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx kůže vyjmou x zlikvidují x xxxxx roztok se xxxxxxxx 8 xxx. xxx 21 °X (xxxxxxxxx odstředivá xxxx ˜ 175). 1 xx xxxxxx supernatantu xx poté zředí 4 xx 30 % (x/X) xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxx. Absorbance (X) xx měří xxx xxxxxxxxx 565 xx.
1.5.3.3.2 Xxxxxxx obsahu xxxxxxx
Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx B xx xxxxxx kůže xx xxxxxxx x xxxxxx A (xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X xxx 565 xx = 8,7 × 104; xxxxxxxxxx xxxxxxxx = 580). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx X se vypočte xxx každý xxxxxx xxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx hodnota. Xxxxxxx xxxxxxx výsledků vázání xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxxx hodnoty xxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx pro uvedení xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx:
|
Xxxxxxxx |
Xxxxx |
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (μx/xxxxxx xxxx) |
|
Xxxxxxxxx |
10X xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx (36 %) |
40-100 |
|
Xxxxxxxxx |
Xxxxxxxxxxx xxxx |
15-35 |
1.5.3.4 Xxxxxxxxx informace
Látky xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xx xxxxxx dobu (xxxx. 2 xxxxxx), xxx xx identifikovaly ty xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx. Validační xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx TER xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx zkoušených xxxxxxxxxx látek xxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxx xx xxxx 2 xxxxx (2), xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxx leptavých xxxxxx xxx 24hodinové xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxx x rozměry xxxxxxxxxx zařízení x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx postup xxxxx xxx xxxx xx získané hodnoty XXX. Xxxx 5 Ω xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx byl xxxxxxx z údajů xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxx xxxx popsány x xxxx xxxxxx. Doporučuje xx tedy xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx hodnotu xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (3).
1.6 Podstata xxxxxxxx xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx až xx xxxx 4 xxxxx xx trojrozměrný model xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x rekonstruované xxxxxxxxx x funkční xxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxxxxxxx účinky xxxx xxxxxxxxxxxxxx schopností způsobit xxx xxxxxxxxxxxxx expoziční xxxx xxxxxx životaschopnosti xxxxx (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX) xxx definovanou xxxxxxxx úroveň. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx účinky jsou xx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxx xxxx xxxxx) a xxxx xxxxxxxxxx cytotoxické, xxx xxxxxxxxx smrt buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.
1.7 Xxxxx zkušební xxxxxx — xxxxxxxxx xxxxxx modelu xxxxxx xxxx
1.7.1 Modely xxxxxx xxxx
Xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx, xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxx pod xx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx. To xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx látkám, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxx živých buněk x xxxxxx xxxx xxx dostatečně vysoká, xxx bylo xxxxx xxxxx rozlišit xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxx. xxxxxxxxxxxxxx buněk (xxxxxxxxx xxxx. xxxxxxx XXX, xx. měřením xxxxxxx xxxxxxxxxx X) xx expozici xxxxxxxxx xxxxxxxxx látce xxxx xxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx hodnoty xxxxxxxxxxxxxxxx buněk po xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxx (xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx kontrolní xxxxx) xxxx být xx xxxxxxxxxxxxxxx mezích. Nejdůležitější xxxxxx xx, xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro validaci (2).
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxx
1.7.2.1 Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx
X xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx aplikováno xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 25 μx/xx2). U pevných xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxx, x xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx ovlhčena, xxx byl xxxxxxxx xxxxx styk s xxxx; xxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx rozemlety na xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx, xx aplikační xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (2). Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx kůže xxxxxxx xxxxxxxxx fyziologickým xxxxxxxx.
1.7.2.2 Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx
X xxxxxx životaschopnosti xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx kvantitativní xxxxxx. Nejčastěji xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx XXX, xxx xxx xx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx prokázalo, xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (2). Xxxxxx kůže se xxxxxx xx xxxxxxx XXX o koncentraci 0,3 xx/xx při xxxxxxx 20-28 °X xx xxxx 3 xxxxx. Sraženina xxxxxxx xxxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx (rozpouštědlem) x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx měřením absorbance X xxx xxxxxx xxxxx 545 až 595 xx.
1.7.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxx kůže x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx. budou xxx velký xxxx xx výsledky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Doporučuje se, xxx metodika x xxxxxxxxxxx model xxxx xxxxxxxxxxx zkoušením xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vybraných x xxxxxxxxxx látek xxxxxxxxx ve validační xxxxxx XXXXX (3). Xx xxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx laboratoře a xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx spektrum xxxxxxxxxx látek. Metoda xxxx splňovat xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx vědeckou xxxxxxxx (2) x výsledky xxxxxx validační studie xxxx xxx publikovány xx xxxxxxxx časopise x xxxxxxxxxxxxx odbornou xxxxxxx.
2. ÚDAJE
2.1 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
2.1.1 Xxxxxxx TER xx xxxx potkana
Hodnoty xxxxxx (xΩ) pro xxxxxxxx xxxxxxxx, pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, o xxxxxxxxx hodnotách x x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xx formě xxxxxxx.
2.1.2 Zkouška x xxxxxxx xxxxxx kůže
Hodnoty xxxxxxxxxx X x xxxxxxxxx xxxxxxx životaschopnosti xxxxx x xxxxxxxxxx xxx zkoušený xxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx látky včetně xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x o odvozené xxxxxxxxxxx by xxxx xxx uvedeny ve xxxxx tabulky.
2.2 Xxxxxxxxx x interpretace xxxxxxxx
2.2.1 Xxxxxxx TER xx xxxx xxxxxxx
Xx-xx hodnota XXX xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx větší xxx 5 xΩ, xxxx látka xxxxxx. Xx-xx xxxxxxx TER xxxxx nebo rovna 5 kΩ a xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx látku xxxx xxxxxxxxx organickou xxxxx, xx xxxxx xxxxxx.
X xxxxxxxxx aktivních xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx TER xxxxx xxxx xxxxx 5 xΩ, xxx provést xxxxxxxxx průniku xxxxxxx. Xx-xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x terčíku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 36 % HCl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx je tedy xxxxxx. Xx-xx střední xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxx souběžně xxx použití 36 % XXx, xx xxxxxxx falešně xxxxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx žíravá.
2.2.2 Xxxxxxx x modelem lidské xxxx
Xxxxxxx obsorbance X xxx xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxxxxxx 100 % xxxxxxxxxxxxxxx buněk; hodnoty xxxxxxxxxx A dosažené xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx procentuální xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxx xx rozlišují xxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx materiálů, které xxxxxx žíravé (nebo xxxxxx xx rozlišují xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx), musí xxx xxx předpovědní xxxxx xxxxx definován před xxxxxxxx metody x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx potvrdit, xx xx xxxxxx (2).
3. XXXXXX
Xxxxxxxx o zkoušce
Protokol x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx alespoň xxxx xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxxxxx xxxxx, fyzikální xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx postupu,
- xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx.
Xxxxxxxx:
- hodnoty odporu (xxxxxxx XXX) xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (zkouška x xxxxxxx xxxxxx xxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxx standardní referenční xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx o xxxxxxxxxxxx xxxx opakovaných xxxxxxxxxxxxx x středních xxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx formě xxxxxxx,
- popis xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx účinků.
Rozbor xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. XXXXXXXXXX
(1) ECVAM (1998), XXXXX Xxxx &xxx; Views, XXXX 26, 275-280.
(2) Fentem, X. X., Archer, X. E. X., Xxxxx, M., Xxxxxx, X. X., Curren, X. X., Xxxx, X. K., Xxxxxxx, X. J., Xxxxxxxxxx, X-X., Xxxxxxx, M. (1998), Xxx ECVAM xxxxxxxxxxxxx validation xxxxx xx in xxxxx xxxxx for skin xxxxxxxxxxx. 2. Xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx by xxx Xxxxxxxxxx Team, Xxxxxxxxxx in xxxxx 12, 483-524.
(3) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Worth, A. X. (1998), The XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx. 1. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxx xxxx xxxxxxxxx, Toxicology xx xxxxx 12, 471-482.
(4) Xxxxxx, X. X. X., Xxxxxxxxx, M. X., Xxxxxx, C. (1986), An xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx — xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Xxxx Xxxx. Toxicol. 24, 507-512.
(5) Botham, X. X., Hall, X. X., Xxxxxxx, R., XxXxxx, X. X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X., Esdaile, X. X., Xxxxxxx, X. (1992), Xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxx: xxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxxxxx trial, Xxxxxxxxxx xx vitro 6, 191-194.
(6) Xxxxx, X. X., Fentem, X. X., Xxxxx, X., Botham, X. X., Curren, X. X., Earl, X. X., Xxxxxxx, D. X., Xxxxxxx, X. (1998), Xx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx, XXXX 26, 709-720.
(7) Xxxxxx, P. X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. D., Xxxxxx, X. X., Esdaile, X. X., Gardner, X. X., Xxxxxx, X. C., Xxxxxxxxxx, X., Lewis, X. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxx, M., Xxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxx, X. 1995), X xxxxxxxxxxxxx study on xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxx xxx recommendations xx XXXXX xxxxxxxx 6, XXXX 23, 219-255.
Xxxxxxx 1
Xxxxxxx 2"
&xxxx;
XXXXXXX XX
"X.41 XXXXXXXXXXXX — XXXXXXX XXXXXXXXXXXX 3X3 XXX XX XXXXX
1. METODA
1.1 Xxxx
Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx odezva vyvolaná xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx světlu xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx vitro slouží x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xx. xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx nebezpečí, xxxxx xxxx plynout xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx UV xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlu.
Protože xxxxx xxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, lze xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx a xx nanesení xx xxxx, a rovněž xxxxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxxx XX/XXXXXX x xxxxxx 1992 — 1997 (1, 2, 3) x cílem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vivo. V xxxx 1996 doporučila xxxxxxxx xxxxxxx OECD xxxxxxxx xxxxxxxxxx zkoušek xx vitro xxx xxxxxxxxxx fototoxicity (4).
Výsledky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx x xxxxxx x x xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx vynikající. Xxxxxxx xxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx mohou xxxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, které xxxxxxxx xxxx specifické xxxxxxxxxx, bude xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx xxxxxxxxx reagovat. Xxxxxxx xxxx není vyvinuta x xxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx stupně xxxxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx postupného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx.
1.2 Xxxxxxxx
Xxxxxxxxx ozáření: xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx, měřená xx X/x2 nebo xX/xx2.
Xxxxx světelného xxxxxx: xxxxxxxx (intenzita × xxx) xxxxxxxxxxxxxx (XX) xxxx xxxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxx (X × s) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxx. J/m2 nebo X/xx2.
Xxxxxx pásma UV xxxxxx: označení doporučená xxxxxx XXX (Commission Xxxxxxxxxxxxxx xx l'Eclairage): XXX (315400 nm), XXX (280315 nm) x XXX (100280 xx). Xxxxxxxxx xx xxxxxx jiná xxxxxxxx: xxxx xxxxxxx xxxx XXX x XXX xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx 320 xx x pásmo XXX xxxx xxx xxxxxxxxx xx XX-X1 x XX-X2 x hranicí xxxxx 340 xx.
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxx, kterým xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx buněčné xxxxxxxx (xxxx. xxxxxx vitálního xxxxxxx neutrální xxxxxxx xx xxxxxxxxx lysosomů) x xxxxx x xxxxxxxxxx xx měřeném xxxx x xx xxxxxxxx uspořádání zkoušky xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx: xxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxx xxxxx postupem xxxxxxx (x XX, nebo xxx XX), xxx xxxxxx xxxxxxxxxx zkoušeným xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxxxxx model: xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx vitro xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx použít faktor XXX a veličinu XXX.
XXX (xxxxx-xxxxxxxxxx factor — xxxxxxxxxxxx xxxxxx): xxxxxx získaný xxxxxxxxx xxxx stejně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx (XX50) xxxxxxxx xxxxx, x xx při xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx UVA/VIS xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
MPE (xxxx xxxxx effect — střední xxxxxxxx xxxxxx): xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z matematické xxxxxxx celého xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx získaných xxx xxxxxxxxxxxxxx ozáření XXX/xxx xxxxxxx (+ XX) x xxx xxxx (-UV).
Fototoxicita: xxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx určitým chemickým xxxxxx a následné xxxxxxxx světlu nebo xxxxxxx vyvolaná xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxx: xxxxx xxxxxx xxxxx "xxxxxxxxxxxx", xxxxx xx xxxxxxx x popisu xxxxx xxxx fototoxických xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xx kůži xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxxx). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx (podobné reakci xxx xxxxxxxxx).
Xxxxxxxxxxx: xxxxxxx xxxxxxxxxxxx reaktivita, ke xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x světla x která xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jeden xxxx dva xxxxx xxxx tím, než xxx xxxxxx kůže xxxxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxx odezva xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XX/XXX xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx opakovanou xxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxx. Termín xxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxx tumoru xxxxxxxxxx UV xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx látkou.
1.3 Xxxxxxxxxx xxxxx
Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxxxxxxx, xxxxx by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx při každé xxxxxxx, xx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xxxxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxxx chemické látky xxxxx z xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxx srovnáních předložené xxxxxx (1, 3, 13).
1.4 Xxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx zaznamenány x mnoha xxxx xxxxxxxxxx xxxxx (5, 6, 7, 8). Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Podle prvního xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxx-Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx světelných xxxxx. Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxxxx metodiky by xxxx mělo xxx xxxxxxxxx XX/XXX absorpční xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx (např. xxxxx Xxxxxxxx OECD 101). Xx-xx molární xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx než 10 x.xxx-1.xx-1, xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxx xxx zkoušena xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx biologickou xxxxxxxx xx nepříznivé xxxxxxxxxxxx účinky (xxxxxxx).
1.5 Xxxxxxxx zkušební xxxxxx
Xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx mechanismy, xxxxxxx xxxx absorpce xxxxxx (chemickým) xxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (7). Všechny xxxxx x poškození xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx chemické xxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX/XXX světla x xxx xxxx expozice. Xxxxxxxxxxxx je x xxxx zkoušce vyjádřena xxxx koncentračně závislé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XX) (9) 24 xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky x xxxxxxx.
Xxxxx Xxxx/x 3X3 xx 24 x kultivují, aby xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx 96xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx chemickou xxxxx xx xxxx 1 x xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx dávkou XXX/XXX xxxxxx 5 X/xx2 XXX (+ XX xxxxxxxxxx), xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx udržuje x xxxxx (-XX xxxxxxxxxx). X xxxx xxxxxxxx xx poté xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xx dalších 24 x inkubace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx stanovena 3xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (XXX). Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx vyjádřená x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x neexponované xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx x xxxx zkušebních koncentrací. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx porovnají xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx ozáření (+ XX) a xxx ozáření (-XX), xxxxxxx při hodnotě XX50, tj. při xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 % xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx x neexponovanými kontrolami.
1.6 Xxxxxxxx xxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxx xx UVA, xxxxxxxxx xxxxx: citlivost buněk xx UVA xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro, příští xxx xx xxxxx xxxxxx XXX záření 1 xx 9 X/xx2 a buněčná xxxxxxxxxxxxxxx xx stanoví x den později xxxxxxxx XXX. Xxxxx xxxxxxx kritérium xxxxxxx, xxxx-xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx 5 X/xx2 xxxxx xxx 80 % životaschopnosti xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx. Xxxx kontrola xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx pasážích xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx UVA xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx: zkouška xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxx negativní kontroly (xxxxx v XXXX (Xxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok) x 1 % xxxxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) xxxx 1 % xxxxxxxxx (XxXX)) xxxx bez xxxx xxxxxxxx při + XXX experimentu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 80 % xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx souběžném xxxxxxxxxxx x xxxxx (-XXX).
Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx: absolutní xxxxxxxxxx (A540 XXX) xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx 1 × 104 xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxx dvou xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx (doubling xxxx). Zkouška xxxxxxx xxxxxxxxx přijatelnosti, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx A540 XXX xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx ≥ 0,2.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx: xxx každé xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX in xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxxx xxxxxx XX/XXXXXX xxx použit jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXX), x xx xxxx xxxxxxxxx. Pro XXX xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx vitro xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zkoušky: xxx XXX xxxxxxx (+ UVA): EC50 = 0,1 xx 0,2 μx/xx, pro XXX neozářený (-UVA): XX50 = 7,0 xx 90,0 μx/xx. Xxxxxxxxxxxx faktor (XXX), xx. xxxxx xxxxxxx XX50, xx xxx xxx xxxxxxx 6.
Xxxxxxx XXX xxxxx xxx xxxxxxx xxxx souběžné xxxxxxxxx kontroly xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky. X xxxxxxx případě xx xxxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx údajů xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx XX50 x PIF xxxx MPE (střední xxxxxxxx účinek).
1.7 Popis xxxxxxxx xxxxxx
1.7.1 Příprava
1.7.1.1 Xxxxx
Xxx validační studii xxxx použita xxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx — Balb/c 3T3, xxxx 31 — xxx x xxxxx XXXX, xxxx x xxxxx ECACC x xx tedy xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx postupu xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx kultivační xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx specifickým xxxxxxxx xxxxx, xxx musí xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.
Xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nejsou kontaminovány xxxxxxxxxxxx, a xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx tehdy, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxxx xxxxx xx XX xxxxxxx x počtem pasáží, xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 x pasáže x xxxxxxxxx dosažitelným xxxxxx xxxxxx, nejlépe x nižší xxx xxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby byla xxxxxxxxx xxxxx Xxxx/x 3X3 xx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx postupem xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx.
1.7.1.2 Xxxxx x kultivační xxxxxxxx
Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x během xxxxxxxxxx postupu xx xxxx xxx použita xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx podmínky. X xxxxx Balb/c 3X3 xx jedná x XXXX (Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxx) xxxxxxxxx 10 % xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx sérem, 4xX xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x streptomycinem x xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxx 37 °X/7, 5 % XX2. Zvláště důležité xx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxx buněčný cyklus xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx.
1.7.1.3 Xxxxxxxx kultur
Buňky xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx jednou xx xxxxxxxx před xxxxxxxx xx xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
Xxx zkoušce xxxxxxxxxxxx xx buňky nasazují xx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx nedosáhly xxxxxxxxxx xx konce xxxxxxx, xx. xx xxxxxxxx, xxx je xx 48 x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx Balb/c 3X3 xxxxxxxxxxx v 96xxxxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 × 104 xxxxx xx xxxxx.
Xxx každou xxxxxxxxx látku xx xxxxx xxxxxx stejným xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx 96jamkových destiček, xxxxx xxxx poté xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zkoušky xx xxxxxxxx xxxxxxxx kromě xxxx, xxx xx xxxxx x destiček xxxxxxx (+XXX/XXX) x xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx (-XXX/XXX).
1.7.1.4 Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx požadavkem xxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, není x fototoxikologii xxxxx xxxxx xxxxx chemická xxxxx, xxx xxxxx xxxxxxxx xxxx toxinu xx vivo nebo xx xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxx xx nezbytné xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx provedena xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
1.7.1.5 Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx/xxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx před xxxxxxxx, xxxxx xxxxx x stálosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Může-li xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxxx xxxxx provádět xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx roztoku, xxxx. x Earlově xxxxxxxxxxxxx roztoku (EBSS) xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxx (XXX), který xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxxx chemické xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxx být rozpuštěny xx vhodném xxxxxxxxxxxx xx 100xxxxxxx požadované xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxx xx měly xxx zředěny v xxxxxx 1:100 xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 1 % xxx. ve xxxxx xxxxxxxxx, xx. v xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (DMSO) x xxxxxxx (XxXX). Mohou xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx cytotoxická xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxxxx), xxx xxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx specifické xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx fototoxických xxxxxx, xxxxxx xxxxxxxx.
Xx-xx xxxxx, xxxx být xxx xxxxxxxxx rozpouštění použito xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xx 37 °C.
1.7.1.6 Xxxxxxx XX světlem/příprava
Zdroj xxxxxx: xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x vhodné xxxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx fototoxicity. Xxxxxx x pásmu XXX x xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxx spojováno x xxxxxxxxxxxxxxxxx (7, 10), xxxxxxx xxxxxx x xxxxx UVB xx xxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx 313 nm a 280 xx 1000xxxx (11). Xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx zdroj xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx délkách, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, a xxx xxxxx xxxxxxxxxx záření (xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxx) xxxx dostatečná xxx xxxxxxx známých xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Použité xxxxxx délky a xxxxx, včetně xxxxx xxxxx (infračervená xxxxxx), xx dále xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxxxx světla xxxxxxxxx simulátory xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. V xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jak xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx výbojka. Xxxxx x xxxx xx xx výhodu, xx xxxxxxx xxxx xxxxx a xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xx slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx vyzařují xxxxxxxx xxxxxxxx UVB záření, xxxx by být xxxxxx filtrovány, aby xxxx vysoce xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxx.
Xxx zkoušku xxxxxxxxxxxx 3X3 XXX xx xxxxx xx xxxx xxx použito xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxxx (UVA:UVB ˜ 20:1). Xxxxxxx spektrální xxxxxxxxxx záření xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx simulátoru xxxxxxxxx xx validační xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (3).
Dozimetrie: xxxxxxxxx xxxxxx (intenzita xxxxxxx) xx xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodného širokopásmového XX-xxxxx. UV-metr musí xxx xxx daný xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx XX-xxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxxxx x xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxxxxxxxxx XX-xxxx xxxxxxxx xxxx. V xxxxxxxx xxxxxxx by xxx xxx v xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x měření xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx zdroje světla x xx kontrole xxxxxxxxx širokopásmového XX-xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx, avšak xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx 5 J/cm2 xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxx Xxxx/x 3X3 a xxxxxxxxxx xxxxx x excitaci x xxxxx fototoxických xxxxxxxxxx xxxxx. Xxx xxxxxxxx 5 X/xx2 xx xxxx 50 xxx. xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 1,666 MW/cm2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx buněčná xxxxx xxxx xxxx světelný xxxxx, xxxx být xxxxx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxx dostatečná pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xxxxxxxx expozice xx xxxxxxx tímto xxxxxxxx:
x(xxx) = xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (J/cm2) 100 / xxxxxxxxx xxxxxxx (xX/xx2) 60 (1 J =.X xxx)
1.7.2 Xxxxxxxx xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx 100 μg/ml, xxxxx všechny fototoxické xxxxxxxx látky byly xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx; xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx). Xxxxxxx pH xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx (xX 6,5 — 7,8).
Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx (+ XXX) x xxx xxxxxx (-XXX) by měly xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx rozmezí. Xxxxxx koncentrační řady x xxxxxxxxx mezi xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxx xxx, xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxx xx xxx xxxxxxx geometrická xxxx xxxxxxxxxxx (s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ředění).
1.7.3 Xxxxxxxx xxxxxx [1]
1.7.3.1 Xxxxx den
Připraví xx xxxxxxx suspenze 1 × 105 xxxxx/xx x xxxxxxxxxxx xxxxx x 100 μl xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxx do xxxxxxxxxx jamek 96xxxxxxx xxxxxxxx (slepý xxxxx). Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx dávkuje xx 100 μl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx 1 × 105 xxxxx/xx (1 × 104 buněk na xxxxx). Xxx xxxxxx xxxxxxxxx chemickou látku xx xxxxxxxx dvě xxxxxxxx: jedna pro xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (-UVA) x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (+UVA).
Buňky xx xxxxxxxx 24 x (7,5 % XX2, 37 °X), xxxxx nedosáhnou semikonfluentní xxxxxxxxxx. Xxxx inkubační xxxx umožní xxxxxxxxxx xxxxx, jejich přichycení x exponenciální xxxx.
1.7.3.2 Xxxxx xxx
Xx inkubaci xx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx dekantuje x každá xxxxx xx xxxxxxx dvakrát 150 μx EBSS/PBS. Xxxxx se 100 μx EBSS/PBS xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx zkoušené xxxxxxxx látky nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxxx se 8 různých xxxxxxxxxxx xxxxxxxx chemické látky. Xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxx 60 xxx. (7,5 % XX2, 37 °X).
X xxxxxxxxx části zkoušky x xxxxxxxx UVA xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx po xxxx 50 xxx. xxxxxxx xxxx xxxxx 96xxxxxxx destičky UVA xxxxxxx x xxxxxxxxx 1,7 XX/xx2 (5 X/xx2. Aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx pomocí ventilátoru. Xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxx UVA xx ponechají 50 xxx. (doba expozice XXX) x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxx x každá xxxxx xx promyje xxxxxxx 150 μx EBSS/PBS. XXXX/XXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxx (18-22 h) (7,5 % XX2, 37 °X).
1.7.3.3 Xxxxx xxx
Xxxxxxxxxxxxx hodnocení
Buňky xx xxxxxxxxxx xxx mikroskopem x xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx provádět xxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xx xxx hodnocení xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
Xxxxx xx xxxxxxx 150 μx předehřátého XXXX/XXX x xxxxxxxxx xxxxxx xx opatrně xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx 100 μl xxxxx XX a inkubuje xx 3 h xxx 37 °C xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x 7,5 % XX2.
Xx xxxxxxxx se xxxxxx XX xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 150 μx XXXX/XXX. XXXX/XXX xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxxxxxx odstředit x xxxxxxxx xxxxxx).
Xxxxx se xxxxxx 150 μx xxxxxxx připraveného roztoku xxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx, aby xx xxxxxxxxxx XX.
Xxxxxxxx xx xxxxxx 10 xxx. xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xx NR x xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx homogenní xxxxxx.
Xxxxxxxxxxxxx xx změří xxxxxxxxxx extraktu NR xxx 540 nm, xxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx slepý xxxxx. Xxxxx se xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX) x počítači xxx xxxxxxxxx xxxxxxx.
2. XXXXX
2.1 Xxxxxxx x množství xxxxx
Xxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx odpovědi xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx XXX/XXX xxxx xxx něho. Xx-xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, měl xx xxx rozsah xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx nimi nastaven xxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxxxxxx chemická xxxxx xxxxxxxx být xx do xxxxx xxxxxxxxxxx 100 μx/xx xxxxxx xxx experiment x temnu (-XXX) xxxxxxxxxxx, xxx xxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxxxxx (+XXX), může být xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxx x xxxx částech xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx, xx-xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxx-xx v xxxx xxxxxxx experimentu (-XXX x +UVA) xxxxxxxxxxxx zjištěna, stačí xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx experimentem se xxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx dále xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx koncentrací. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx experiment xxxxxxxxx jednou xxxx xxxx předběžnými xxxxxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxx xxxxxxxxxxx.
Xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx modelu by xxxx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.
Xx-xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx za xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx výsledku xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Klíčovou xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx důvodu xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx (xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx, xxxxxxx ultrazvuku) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx x chemických xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx.
2.2 Xxxxxxxxxx xxxxxxxx
Xx-xx xx možné, stanoví xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky odpovídající 50 % xxxxxxxx xxxxxxxxx příjmu neutrální xxxxxxx (XX) (XX50). Xxx tak xxxxxx xxxxxxx jakékoli vhodné xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxx xxxx logistickou xxxxxxx) xxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx jiných xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx (14). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX50 xxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx proložení. Xxx výpočet EC50 xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx grafického xxxxxxxxx. X takovém xxxxxxx xx doporučuje použít xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxx x: logaritmické, xxxxxxx xxx x: xxxxxxxxxxxxxxxxx), xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.
2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxx)
2.3.1 Předpovědní xxxxx — xxxxx 1: xxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxx jsou x xxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx (+UVA), xxx bez xxxxxxx (-XXX) xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx odezvy xx koncentraci, xxx xxxxxxxxxxxx faktor (XXX) xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx:
(x) XXX = (XX50 (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxxxxxx PIF &xx; 5 předpovídá xxxxxxxxxxx fototoxického potenciálu, xxxxxxx hodnota XXX ≥ 5 xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pouze xxx +XXX a xxxx xxxxxxxxxxx xxx zkoušce -XXX, nelze hodnotu XXX xxxxxxxxx, xxxxxxx xxx x xxxxxxxx, xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx případech xxx xxxxxxxxx xxxxxxx "&xx; XXX", xxxxxxxx xx xxxxxxx -XX xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxx), x xxxx hodnota xx xxxxxxx pro xxxxxxx "&xx; XXX";
(x) &xx; XXX = (Xxxx (-XX)) / (XX50 (+XX))
Xxx xx xxxxxx pouze hodnotu "&xx; XXX", xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxx &xx; 1.
Xxxxxxxx nelze v xxxxxxxx toho, že xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx do nejvyšší xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxx xxxxxxx XX50 (-XX) xxx xxxxxxx XX50 (+ UV), xxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx potenciálu. X xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx charakterizaci výsledku xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx "XXX = *1";
(C) &xx; XXX = *1 = (Xxxx (-XX)) / (Xxxx (+XX))
Xxx xx xxxxxx xxxxx hodnotu "PIF = *1", je xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.
X xxxxxxxxx x) x x) by xxxx xxx pro předpověď xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x úvahu xxxxxxxxxxx dosažené ve xxxxxxx fototoxicity 3X3 XXX xx xxxxx.
2.3.2 Xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx 2: střední světelný xxxxxx (XXX)
Xxxxxxxxxxxx lze xxxxxx novou verzi xxxxxx xxx předpovídání xxxxxxxxxxxxx potenciálu, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx studie XX/XXXXXX (15) x xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx fototoxicity xx vitro x xxxxxxxxxx xxxxx, které xx xxxxxxx xxxx XX xxxxxx (13). Xxxxx model xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nelze xxxxxx xxxxxxx XX50. Xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxxxx xxxxxx) (XXX), xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxx xxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxx počítačový xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxx.
2.4 Interpretace xxxxxxxx
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (XXX ≥ 5 xxxx XXX ≥ 0,1) xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx potenciál. Xxxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx 10 μx/xx, xx také pravděpodobné, xx látka bude xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xx vivo. Xx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 100 μg/ml, mohou xxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Ty se xxxxx týkat údajů x xxxxxxxxx, xxxxxxxx x možné xxxxxxxxx xxxxxxxx látky x xxxx xxxx zkoušení xxxxxxxx látky alternativní xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx kůže xx xxxxx.
Xxxxxxxxx xxxxxxxx zkoušky xxxxxxxxxxxx 3X3 NRU xx xxxxx (PIF &xx; 5 xxxx XXX < 0,1) xxxxxxx, xx látka xxxxxx xxx xxxxx xxxxx za použitých xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. X xxxxxxxxx, xxx bylo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxxxxxx koncentraci 100 μx/xx, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, že chemická xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x fototoxicitu xx xxxx xxx xxxxxxxx xx nepravděpodobnou. X xxxxxxxxx, xxx xxxx při nižších xxxxxxxxxxxxx obdrženy xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx koncentraci (XX50 +XX a EC50 -XX), je xxxxxxxxxxxx xxxxx stejná. Xxxx-xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx (+UV x -XX) x xxxx-xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxx menší než 100 μx/xx, xxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x mělo xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xx vitro xxxx zkouškou in xxxx).
3. ZPRÁVY
Protokol o xxxxxxx
Xxxxxxxx o xxxxxxx xxxx obsahovat tyto xxxxxxxxx:
Xxxxxxxx chemická látka:
- xxxxxxxxxxxxx údaje a xxxxx XXX, xx-xx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x čistota,
- xxxxxxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxx,
- stálost x fotostabilita, xxxx-xx xxxxx.
Xxxxxxxxxxxx:
- zdůvodnění xxxxx xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x tomto xxxxxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx (EBSS xxxx XXX).
Xxxxx:
- xxx x xxxxx buněk,
- nepřítomnost xxxxxxxxxx,
- xxxxx xxxxxxx xxxxxx, je-li známo,
- xxxxxxxxx xxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx 3T3 XXX xx xxxxx
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx:
- xxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, teplota, xxxxxxx),
- délka inkubace (xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xx xx).
Xxxxxxxx xxxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx:
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx látky xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx UV/VIS, xxx xxx xxx,
- x xxxxxxx, xx zkoušená xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rozpustnost x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx,
- xxx x složení xxxxxxxxxx média (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx roztok),
- délka xxxxxxxx xxxxxxxx látky.
Zkušební xxxxxxxx c) — xxxxxxx:
- xxxxxxxxxx výběru xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx,
- xxxxxxxxxxxxxxx propustnosti/absorpce xxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxx),
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx,
- xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xX/xx2,
- délka xxxxxxxx XX/XXX světlu,
- dávka XXX xxxxxx (xxxxxxxxx × xxx), xxxxxxxxx x X/xx2,
- xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx.
Xxxxxxxx xxxxxxxx x) — xxxxxxx XXX:
- složení xxxxx XX,
- doba xxxxxxxx XX,
- xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxx XX2, xxxxxxx, xxxxxxx),
- xxxxxxxx xxxxxxxx XX (xxxxxxxxx činidlo, xxxxx xxxxxxxx),
- xxxxxx xxxxx použitá pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx odečet xxxxxxxxxx XX,
- druhá (xxxxxxxxxx) xxxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx,
- xxxxxxx slepého xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxx, xx-xx xxxxxx.
Xxxxxxxx:
- xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,
- křivky xxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx experimentech +XXX x -UVA,
- xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx: xx-xx xx xxxxx, xxxxxxx xxxxxxx XX50 (+XXX) x XX50 (-XXX),
- xxxxxxxx obou xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx XXX/XXX x bez xxxx, x xx xxx xxxxxxxx fotoiritačního xxxxxxx (xxxxx-xxxxxxxxxxx factor ) (XXX), nebo xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx účinku (xxxx photo xxxxxx) (XXX),
- xxxxxxxxxxx fototoxického xxxxxxxxxx,
- xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxx NR) xxxxxxxxx x neozářených xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx,
- xxxxxxxx přijatelnosti xxxxxxx b) — xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrola:
- xxxxxxx XX50 (+XXX), XX50 (-UVA) x XXX-xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxx,
- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx: hodnoty EC50 (+XXX), XX50 (-XXX) x XXX, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx xxxxxxxx.
Xxxxxx.
4. LITERATURA
(1) Xxxxxxxxx, X., Balls, X., Döring, B., Xxxxxüxxxx, H. X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X., X'Xxxxxxxxxxx, H., Xxxxxxx, X., Lovell, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxx, X., Pfannbecker, X., Xxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxxxx, X., Willshaw, X. (1994), XXX/XXXXXX project xx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x Balb/c 3X3 xxxx phototoxicity assay, Xxxxxxxxxx xx xxxxx 8, 793-796.
(2) Xxxx (1998), Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx the 3X3 XXX PT test (xx in xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxxx), Xxxxxxxx Commission, Xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx: XXXXX xxx XXXX/X/2, 3 Xxxxxxxx 1997, XXXX 26, 7-8.
(3) Spielmann, X., Balls, X., Xxxxxx, X., Pape, X. X. W., Xxxxxxxxxx, X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Clothier, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, F., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxx, T., Xxxxxxxxxxxxx, X., Potthast, X. M., Xxxxx, X., Sladowski, X., Xxxxxxxx, X., Brantom, X. (1998), XX/XXXXXX "Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx", xxxxxxxxxx study, xxxxxxx xx xxxxx II (xxxxx xxxxx), xxxx 1: xxx 3X3 XXX xxxxxxxxxxxxx xxxx, Xxxxxxxxxx xx Vitro 12, 305-327.
(4) XXXX Xxxx Xxxxxxxxxx Programme, XXX/XX/XXXX/XX(96)9: Xxxxx Report xx the XXXX Xxxxxxxx xx Harmonisation xx Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx Toxicological Test Xxxxxxx, XXXX Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx, Xxxxx, 1996.
(5) Xxxxxx, X. W. (1993), X xxxxxx xxx in xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx photoallergenic xxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xx Xxxxx 7, 95-102.
(6) Santamaria, X., Xxxxx, X. (1972), Xxxx xx xxx photodynamic xxxxxxxxxx, Xxxxxxxx xxxxxxxx in xxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxx. 3 Part 1, Xxxxx Holland Xxxxxxxxxx Xx, Xxxxxxxxx, XI–XXXV.
(7) Xxxxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xöxxxx, X., Johnson, X. X., Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. X., Xxxx, X. J. X., Xxxxxx, O., Xxxxxxxxx, D. (1994), Xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: The report xxx recommendations xx XXXXX workshop 2, XXXX 22, 314-348.
(8) Xxxxxx, X. D. (1989), Photosensitization. X: Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, (X. X. Xxxxx, xx.), Plenum Xxxxx, Xxx Xxxx, 2. xxx., 79-110.
(9) Xxxxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X. A. (1985), Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx in xxxxx by xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, Toxicol. Xxxx. 24, 119-124.
(10) Xxxxxxx, X. X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxx X. (1996). X: Xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx testing, Xxxxxxxxxxxxxxxxx, (F. X. Xxxxxxxx, X. X. Xxxxxxx xxx.), Xxxxxx &xxx; Xxxxxxx, Xxxxxxxxxx XX, 5. xxx., 515-530.
(11) Tyrrell, R. X., Xxxxxx X. (1987), Xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxx: estimates xx xxx relative xxxxxxxxxxxx xx the middle xxxxxxxxxxx, xxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx sunlight xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, Xxxxxx Xxx. 47, 1825-1829.
(12) XXXXX/XXXXX/XXXXXX, Xxxxxxxx Xxxxxxxxx Xxxxxxxxx: Balb/c 3X3 XXX Phototoxicity Xxxx, xxxxxxxx 23. xxxxxxxx 1997 M. Xxxxxxxxx, xxxxxxxxx 6. xxxxxx 1998 xxxxx Management Xxxx xx the XX/XXXXXX xxxxxxx "Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx".
(13) Xxxxxxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxx, X. X. X., Xx Xxxxx, O., Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxxxxx, X. X., Xxxxxxxxxxxxx (1998), X Xxxxx xx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx UV Xxxxxx Xxxxxxxxx from Xxxxx XXX xx the XX Xxxxxxxxx 76/768/XXX xx xxx 3X3 XXX Xx Xxxxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxx, XXXX 26, 679-708.
(14) Xxxxxüxxxx, X. G., Xxxxxxxx, X. (1995), Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx of cellular xxxxxxxxx xx external xxxxxxx, Journal xx Xxxxxxxxxx Systems, 3, 127-138.
(15) Xxxxxüxxxx, X. X. (1997), A xxxxxxx xxxxxxx of xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx-xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxx xxx xxxxxxxxxx xxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, XXXX 25, 445-462."
"Dodatek
[1] Další xxxxxxxxxxx lze nalézt x literatuře (12).