Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, která xx uplatňují na xxxxx Xxxxx republiky xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx opatření s xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x ostatní rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx potměchuť (Solanum xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený na xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx, x určení xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx bramboru určené x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech produkce, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 písm. x) x porostů xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. a) z xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x porostech xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 písm. c) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, složení x dobu xxxxxx xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx podle odstavců 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x testovaných vzorcích xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě uznávaných xxxxxxxxx a statistických xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx kontrolního a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx zjištění x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx v souladu x §10 odst. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx fyzické osobě, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx za účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, a xx v případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx pro výsadbu xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x produkci předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx podezření z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení podmínek xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Ústavu, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx přesunem xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i xxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x jiného členského xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx trh a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx těch, xxx xx xxxxx úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx zamořeným předmětem xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v souladu x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx odebraných vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x pozitivními výsledky xxxxxxxx laboratorního testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. c), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx způsobem x x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené předměty x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného zamoření x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného šetření xxxxx odstavce 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx zóny, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 písm. c) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 odst. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx požadavky xx zneškodňování odpadů, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx podrobí očistě x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x registračním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx splnění a xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx nebudou narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx průzkumu podle §3 xxxx. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 a x souladu x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x výrobě předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů a xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním a xxxxx chybám, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 definován xxxx xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx bramboru x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx jsou:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Pokud xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v oddílu 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů, x xxxxx xxxxx xx založen na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující k xxxx, aby xxx xxxxxx považován za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x každé xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. V xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx a protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná metoda xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické kolonie xxx xxxxxx během 3-10 xxx xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Pro úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx přípravu xxxxxxx x pupkové xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního obohacení x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX nebo XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx biotesty xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx pelety nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx selhat x důvodů konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x často xxx xx xx konci xxxxxx. Xxxxx toho xxxx příznaky skryté xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x když xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx stonku často xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Často xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx nebo průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x stav, xxx xxx jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx na hlízách xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx část prstence, xxxxxx xx vyskytovat xxx blízko pupkové xxxxx x mohou xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se objevují xx povrchu hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx se x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx jiných hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx je ve xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx se xx provádět PCR xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém konci xxxxx xxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého pletiva x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z pupkových xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po xxxx xxxxxxx dvou týdnů.

Všechny xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxx xxxxxxx x testují se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky se xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx xx x karanténě při xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nádobách xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, že xxxx xxxxxx znovu používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to není xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků za xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°X) nebo xxxxxxxx filtrací (40-100µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx vířením x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Extrakty xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo zahradnických xxxxx se odstraní xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx savým xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není možné, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x druhá polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx screeningový xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test a xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx další xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx citlivé.

Používají xx protilátky xxxxx xxxxxxx kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7 000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx plamenem (viz 4.2).

Xxxxxxxx se oddělená xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx se použijí xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které byly xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Pro xxxxxx x relativně xxxxxx množstvím škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro druhý xxxxxx podle obrázku 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší se xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °C), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle zvláštních xxxxxx dodavatelů protilátek.

V xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (WD) protilátky x XX pufru. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Každé xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx xxxxxx okénku xxxx být nejméně xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx do každého xxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. U xxxxxx x žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx IF test. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx možno proveden x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx byl uchován x glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X PB x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µl 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx stejné xxxxxxxx 0,01 M XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx by xx xxxxx jednou xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po xxxx 10 minut při xxxxxxxx teplotě. Potom xx ponoří xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx zakrytím dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx horkou plotnu xxx teplotě 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka se xxxxxx xx předehřáté xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x hybmix x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) do xxxxx jamky a xxxx sklíčko xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve vzorku xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se buněčná xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x morfologií charakteristickou xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx u XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx typických xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Pokud xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX test xx xxxx provádět zkušení xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) xx se xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX testu xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx jsou k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do mikrozkumavky x objemu 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxx 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx chloroformu x xxxxx xx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), krátce xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se na 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x odstraní xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx při 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx xx xxxxx použít, pokud xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx do směsi XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx a provede xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Použije xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx dobu 30-45 xxxxx, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x době x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním testu x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx nebyl získán xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx přidaný x xxxxxxxxx ze xxxxxx, které byly xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx uchovávány v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku jednou x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 listů xx úplného rozvinutí xxxxxxx pravého listu. Xxx xx zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx i xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x průměru 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx šířky a 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 xx 1,0 cm x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx a nanese xx do xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx xxxxx nebo xxxxxx malířským xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx se zakryje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx děložními xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x pletivem z xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx x karanténě xx vhodných podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní kontroly xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených policích, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx zajistí xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s nimi. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx pro různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx ochablost (ztráta xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx období xx objevení xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx fázi xxx listů x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx listů x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo XXX xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) xxxxx (viz xxxxx 8). Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní infekce xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 cm x xxxxx testované xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho xxxxxxxx x pletiv projevujících xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx části hlízy xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx všech hlíz xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla by xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µl xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx růstovým xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx vzorku, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx nebo XXX-88 médium (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx rychlost růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx po dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného ředění xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx lF testu xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx kultury xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx připraveného NaOH xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Boer, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx pozitivní, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx xx v UPW.

b) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se vhodný xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

c) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A je xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Provede se xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx se po 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx rozdrtí x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje se xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire National xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Quarantaine xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX x FISH

Vypěstuje xx 72 hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x suspenduje xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx xx prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml.

Připraví xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx C. x. subsp. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 xx-24 °X až do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x FISH testy xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR musí xxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx být xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů PCR	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z výkrojků x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Vypočítá xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více jamkami x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované pelety (X).

X = C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

Médium x kvasnicovým extraktem x minerálními solemi (Xxxxx extract mineral xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °X po xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 x.

X zásobě xx nechají roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx skladování v xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx PSA-R 5'- xxx tga xxx gtt xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx nebo Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X a NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pupkové části xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx jiných modelů xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx xxxxx cyklů xx), xxx), iv), x), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. subsp. xxxxxxxxxxx produkuji charakteristickou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bgl XX xx inkubaci xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Příprava nanášecího xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx upraví xxxxxx XXx nebo NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx až 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné odrůdy xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení v Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx roztokem x xxxxx xx působit xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx safraninovým roztokem x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx xxxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx ring rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx and preliminary xxxxx of bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative methods xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of fermentative xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative bacteria. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific classification xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole xxxx fattyacid analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx EC xxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, K x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Russell, X., W. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, C. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx pathogenic bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2nd ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Janse, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, rostlin xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování xxxxxx x za podmínek xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx označování a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx živné xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, ale xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx výtok xxxxx xx svazků xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x rostlinného materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx izolační xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx identifikace čistých xxxxxx X. solanacearum xx provede xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, ale doporučuje xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx je xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použit x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx screeningových testů xxxxxxxxxx na různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx FISH je xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých na X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V případě, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx v oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x noci dochází x xxxxxxxx. X xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx listy zelené, xxx později žloutnou x objevují xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny se xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx hnědý x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X rané xxxx se infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx může xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X pokročilejších fázích xx xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového xxxxx xxxxx a x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx slupce xx xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj xxxxxxx xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx viditelným příznakem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxxx 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) se xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx rostliny, xxxxx xxxxx jejím úplným xxxxxxxxx. Xx méně xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx stonku, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx hnědě zbarvená xxxxxx pletiva bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx hostitelů

Rostliny Solanum xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou u xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x rostliny X. xxxxxx rostoucí u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx u xxxxxxxx rajčete. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx slizu, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden nebo xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo z xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. solanacearum perlově xxxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx použit xxx zjištěni původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx vzorku

a) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx jestliže xx xxx proveden test XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx vodivé pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě, aby xxxxx dojít ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx nepoužitých xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx pufru; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx DNA na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx na xxxxx použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °C (měsíce). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx přeprava x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. solanacearum byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx testy.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx xx smíšené xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, měl xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx dlouhý xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x podzimu, xxxxxx přirozenou infekci xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Datura xxxxxxxxxx a další xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxxxxx atestuje xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (např. Xxxxx). Není-li to xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx nejdéle na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Jeden xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 až -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx nebrání izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li podezření, xx velká saprofytická xxxxxxxx ovlivní spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody a xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní vody xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx citlivost detekce xx však xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem xxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx vodě. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ buněk/litr povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vodě xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Z tohoto xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní vodu xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx nichž dojde xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v úvahu xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx si xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx k podobnému xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx nejspolehlivější x období xxxxxxxx xxxx, xxxx a xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, pokud xxxxx 30 cm pod xxxxxxxx a 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 x xx dobu. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx kapalina nad xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 ml pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx velké objemy xxxx, xxxxx obsahují xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x vzorků xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií inhibuje xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x xxxxx testů x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx test xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. solanacearum xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x tomto xxxxxx xx použitelné xxx xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx tyto xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v půdě xxxx xxxx xx xxxxx vzít x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx i xxx xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx vzorek se xxxxxxxxx 0,5 až 1 kg xxxx xx 60 míst xx ploše 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, zvýší se xxxxx sběrných xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a kanalizace xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 kg x míst reprezentujících xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních kamínků xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx a xxxxx xxxxx jsou v xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční testy

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne se xxxxxx právě xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx se xx xxxxxxxx minutách xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx ze 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní xxxxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx zakápnou 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut při xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx pod xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule intracelulární x zda xx xxxxxxxxxx buněk typická xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx B x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní se xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx opláchne xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xylolu x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se opláchnou xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx roztěr mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx míchání xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx předběžný xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Použije xx řádně validovaná xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx ze vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

U xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx bakterií byly xxxxxxxxx. Nanese se 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a pak xx provádí kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx a xx 3 dnech xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto médiu xxxxx xxxxxxxx kolonie X. solanacearum. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx fluidní, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány podezřelé xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup lze xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX se přenese 100 xx xxxxxxxx xx vzorku do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx sterilních zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx použit xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx nutné provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x resuspenzí ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Často xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j jsou xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x následujících postupů:

i) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx standardní množství (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx xx množství xxxxx x příslušném xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 do prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx při okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a dvojnásobek xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx vlhkém papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Je xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx opláchne a xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x zcela obarvené x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X peletách x xxxxxxx části bramboru x částí stonku xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx se odhadne xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx počet typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Vzorek xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x zabránění kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx laboranty v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, aby xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx PCR xxxxxx xxxx DNA extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x prostředí xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x koncentrující xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Tris-HCI (xX 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx fází x vytvoření mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 g xx xxxx 20 xxx. při teplotě 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxx xx xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx resuspenduje x 100 µx xxxxxxxx XX a xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx do xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX se použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x kontroly xxx XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx extraktu XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje interní xxxxxxxx PCR.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx UM jako xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx PCR místo xxxxxx.

5. XXX mikrozkumavky xx umístí do xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX z každého xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx restrikčních fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x neštěpenou x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx pozitivní, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX specifický pro X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, jestliže xx xxxxxx očekávaný xxxxxxxx xx vzorku pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx nebo více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (PB) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, který xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx na 7 000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx xx 200 µl fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx sklíčko, x xx neředěný x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx a xxxxx xx stejné množství 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x suchu xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě středová xxxxxx (3 x 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Přiloží xx xxxxx sklíčka (24 x 24 mm) xx první a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx pod ně xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxxx při teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx a 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx se xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx sklíčka a xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx krátce ponoří xx UPW (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx každého xxxxxx x celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, kde xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx neberou v xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx buňky zjištěny (xxx okénka sklíčka) xx krytu sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x sebou xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x bramborových xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx dojde x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX testu xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky při xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx FISH xxx xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Při použití XXX XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek povinné. Xxxxxxxxx vzorků před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, xxx může xx rovněž setkat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického kmene X. solanacearum a xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (PBS) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx odděleny xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije xx 100-200 µl vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C na 4 xxxxxx ve xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx do xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx nechá v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je titr).

6) Xxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx se xxxxxx xxxx předtím (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx a odečítá xx xxxxxxxxxx při 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 až 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 hodin xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. solanacearum v XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x PBS. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x nechá se xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx a inkubuje xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA

Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud všechny xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přípravu viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou citlivostí xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u lilku xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx mezi děložními xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, xxxxxxx řez xx začne v xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí se xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx jinak xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože by xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, jestliže pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky.

Biotest xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx water).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách v xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °X 4 minuty. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx teplotě - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx metoda XXXX (6.1.7) s nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx stejný jako xxxxxx pozitivní kontroly. Xxxxxx charakteristických mastných xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX a absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx žlutou x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární identifikace xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx AFLP (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx patogenity)

Jako závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx době xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozmělní x suspenduje x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím roztěrem xxxxx možno na xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C se xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Difco) 5,0 g

D(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx získala stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 mg)/l

Chloramfenikol (Signa X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X takovém xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná xxxx XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Provede se xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut x xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Všechny kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx sekce xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx může být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx na 1 xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx x 10 mM fosfátovém xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx z xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx slupkou, x xxxxx xx ví, xx xx prosta X. solanacearum.

Zpracují se xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe se. Xxxxxxx se desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx řádně označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx provede test xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn v xxxxx z negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx pufry lze xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °C po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx v glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 g

KH₂PO₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Xxxxxx xx do 1 x destilovanou xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá se xxxxx typických fluoreskujících xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G = zvětšení objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx reprodukovatelné zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-ggg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx mohou být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum DNA xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer RS-1-F: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX TGC XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Bsm X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N NaOH x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 mM (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx hybridizační směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití xx xxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx semena rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) se xxxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx odrůda xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx identification xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Lindo, L. 1990. Variation in xxxxxxx metabolism in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Lelliott, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Gorris, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Delme xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. and De Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx and PCR xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Analysiss xx xxx phylogenetic relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx banana based xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Detection of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown rot xx potato, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.