Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (dále xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx unie¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují xx xxxxx České xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis et xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený na xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx x původu xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, k určení xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x určení xxxxxx území, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, skladu xxxx jejich části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx se xx:

1. xxxxxxxxx klonově příbuzné xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou partii xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby

(1) Ústav xxxxxxx každoročně v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze členských xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx členských států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) všechny xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx zemí.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx rajčete určených x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx vody ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 písm. a) x b), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x porostů xxxx xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) prohlídkou xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x porostech xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie a xxxxx, xxxxx, složení x dobu xxxxxx xxxxxx při průzkumu, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 nebo stanoveným Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, že vzorky xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx právnické xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx trh xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx jednou xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx průzkumů provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx členským státům x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro výsadbu xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx vždy x xxxxxxxx předchozího xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní výsledek xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X případě xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x v souladu x §11 xxxx. 1 zákona

a) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, xx xxxxxxx byly odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx zákazu přesunu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nad přesunem xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx spojených s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx podezření x bude x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, které xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx trh a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx přišly xx xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx materiálem, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx produkce xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx byly zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, a xx xxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx pěstitelské vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ohledem na xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování x xxxxxx brambor a x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx xxxxxxx rozšíření podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Podrobnosti x xxxxx oznámení xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x ustanovením odstavců 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx karanténní xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx odborného šetření xxxxx odstavce 1 xxxx. x) x xxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování podle xxxxxxxx 1 Ústav x případě potřeby xxxxxx další předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx zamoření x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx xxx sázena x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx s xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Ústav xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x pokud xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx jejich xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx nařízených podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx zruší xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx nařízená podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx povoluje Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx odstavce 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní vzorky xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z České xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby nebyl x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx považován za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx pro diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx rostou xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Proto xx doporučuje používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx v xxxxxx 8.

(5) Pokud xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx založen na xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Metody extrakce x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky umožní xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx v mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx získat xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního obohacení x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx metodu. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX nebo XXX-88 médiu pravděpodobně xxxxx xxxx narušovat xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku x x případě potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých kultur xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti vzorků - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x koncentrace patogena xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie jsou xxxxxxx v oddílu 8.

(5) IF test xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě toho xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx příznaky xxx kontrole xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované děložní xxxxxx, listy a xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Často xxxx listy a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx na pupkovém xxxxx hlízy xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx identifikovaným xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x stav, xxx xxx jemném xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx hlízách xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x xxxxx xx postupně xxxxx xx celý xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx xx x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x prstencem xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat a xxxx xxx obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx vhodně xxxxxx x pro xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx extrakt xxx xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx provádět PCR xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx konické xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí být xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxx stranou x testují se xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy po xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °X až xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých nádobách xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx mlecího zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx extrakce. Xxx xxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xx nutno zamezit xxxxxxx DNA na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx sterilní xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx teplotě -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx x chladícím xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx se xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx xx XX xxxxx a xxxxxxx testy.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x velikosti 1-2 xx xx xxxxxx strany každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x shromažďují x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx dobu 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx rozdrtí v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx popisu x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx při teplotě -68 až -86 °X (xxxxxx), pokud xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx být další xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx novou xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx monoklonální protilátky xx měly xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Během testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x blízkosti titru xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx není xxxxx, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem původce xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X) xx se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx okénky, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 mm xx xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx podle obrázku. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby xxx xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx boxu xx xx xxxxx nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x IF xxxxx. V xxxxx xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x IF xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx ponořením po xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx okének musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Kapky konjugátu xx xxxxxxxx ze xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do každého xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX testu

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx xxx zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx IF opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně fluoreskující xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx s neúplným xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V xxxxxxxx z pupkové xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Berou xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx nebo pracovním xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX xxxx provede jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx ml přidané xx xxxxxxxx ze xxxxxx, které byly xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx měl být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (např. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx fixačním xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, přičemž se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x použitím 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx je možnost xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Tris-HCI, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx ponoří xxxxxxx xx demineralizované vody, xxxxx xxxxxx, a xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx ve stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx dobu 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x x xxxx při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx x nich xx přeinkubuje xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se krycí xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x kádince x 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx podobný) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx fluorescenčně červené. Xxxxxxxxx se buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x morfologií charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx zbarveny xxxx vykazují slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí stonku xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Výsledek FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Pokud xx XXX test xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx PCR činidla x protokoly. Přednostně xx xxxxxxx metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX test xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx v laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) by se xxxx xxxx zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který byl xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx vzorku,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx pufru (100 xX NaCl, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 minut xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) x inkubuje xx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx promíchá xxxxxxxx, až usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °C), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx se x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X až xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs PCR x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx DNA x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového gelu x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 V xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx na x) xx xxxx 30-45 xxxxx, za xxxxxxx vhodných bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x tímto mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (krátké vlnové xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x době x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x pozoruje xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx opakováním testu x druhou sadou XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít podezření xx inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x extraktům ze xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého listu. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Každý xxxxxxxx xx horizontálně xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx je xxxxxx xxxx pěnového polystyrénu x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx xxxxx x 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký přibližně xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem na xxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx lístky x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx děložními lístky xxxxxx injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny nechají xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx dobu xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx teplota xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku nebo xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx manipulaci xx xxxxxx maximální xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx trvá období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx mohou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií nebo xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, jakož x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx od případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx provedena xxxxxxx xx použití částí xxxxxxx zvadlých listů xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx vydezinfikuje otřením 70 % etanolem. Xxxxxxx xx test xX xxxx XXX xx šťávě x xxxxx x izoluje xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (viz xxxxx 8). Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, zejména xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx inkubační doby xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx test XX/XXX xx xxxxxxxx vzorku xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x každé testované xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx inokulace. Pokud xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx potvrzena pouze xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, je xxxxx ho izolovat x pletiv projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx xxx provedena podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx odděleně xx xxxxxx, které xxxx být testovány.

Pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem jako xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µl alikvotní xxxxx ze vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx ředěním, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 na XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx identifikaci xx xx měly xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxx, než xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx podobné Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx na xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce kroužkovitosti xxxxx pomalu a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se provede xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx barvy slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační testy

Zjišťují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí provádět x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% NaCI -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx slabá

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Připraví se xxxxx dvojnásobného xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Xxxxxxx xx lF postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. PCR test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx buněk x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím bloku xxxx vřící vodní xxxxx xxx teplotě 100 °X po xxxx 4 minut. X případě potřeby xx xxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx uložit xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

c) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

c) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, která xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Clavibacter xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxx postupem podle Xxxxx a xxx., 2001.

10. Xxxx patogenity

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky infekce, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin x xxxxxxxx infekce xxxxxxxxxxx části stonku 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °C x sleduje se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire National xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Pomme xx Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx výkrojků testy XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx schopných tvorby xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x které xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR musí xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx xxx skladovat xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx používá xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x provede xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha jednoho xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx izolaci x kultivaci C. x subsp. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Nutrient agar = NA)

Živný agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 g
MgSO4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 g
FeSO4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx médií x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, pH xx upraví xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx B 0,01 g.

V xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx média xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a činidla xxx PCR

Poznámka:

Úvodní testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také nemělo xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x DNA C. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 mM MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové části xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx programu:

1 cyklus: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů ii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 cyklus viii) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx xxx teplotě 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx jiných modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx cyklů xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx gca xxx xxx tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) a 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x případě potřeby xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým slunečním xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku v xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxxx, xxxxxx xx xx vzduchu a xxxxxx se zahřátím.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx se působit xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 EN, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx of xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Washington, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the XX xxxxxx for the xxxxxxxxx xx latent xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. EPPO Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas pyocyanea xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx x X. X. Hayward, 1966. A determinative xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of latent xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Spiek. xx Kotth.) Skapt. xx Xxxxx.) in xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Chain Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., W. a X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx of Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx X1X-XXX and xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx identification of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer for xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. H. X. and V. X. Xxxxxxx, 1974. X study in xxxx reproductibility between xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx odstraňování xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx prahy vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx a všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx podezření xxxxxxxxx a musí xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x výskytu nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, izolaci xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

1) Popis příznaků xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx výtok xxxxx xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx extraktů x xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test FISH xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx doporučuje xx pro xxxxx xxxx případ.

14) Test xxxxxxxxxx je popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn izolací xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, potvrzením, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx negativní. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx negativní, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx popsán v xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů konkurence xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva z xxxxxxxxx pupkového konce xxxx stejného vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Postupový diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x X. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx fázích vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx se xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx kolapsem x uhynutím rostliny. X cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx a odumření xx xxxx rozšířit xx parenchymatického pletiva. X pokročilejších xxxxxx xx infekce xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx částice půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá místa xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx cévního pletiva. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx jedné xxxxxx rostliny xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Za méně xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx hostitelů

Rostliny Solanum xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx má xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx vodou. X xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx svisle do xxxx, x xx x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo z xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Příprava vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx zjištěni původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X xx xxxx až 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx jestliže má xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx se vyříznou xxxx výkrojky vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny naříznuté xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx se uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx včetně hlíz x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx se xxxxx do nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x pupkového konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx tloučku nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx nutné zamezit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx během extrakčního xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx se použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) a xxxxxx. Xxx testu PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx se supernatant, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx se uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx metody xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx nad spojením x hlavním stonkem. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 cm xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odebere 1 xx dlouhý xxx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx xxx každou xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního jara, xxxx a podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx celý xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx čeledi Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx rostliny rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx oleracea. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx možné provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx cév xxxx bakteriální xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Jeden xxx xx testuje při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl xx skladuje x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx jen xxxxx, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a xxxxxx xxxx být xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x závislosti na xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxx uvedené schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx se doporučuje xxxxxxxx odpadní xxxx xx provedení nějakého xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx si uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx odeberou xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 cm xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx vzorkování odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx odeberou xxxxxx z xxxxx xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x chladu x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, slije xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx přes xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µm) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx testů x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Je xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx je vypěstování xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx není infikována, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx x hloubky 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx sběrných míst xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat následující xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx se xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx černí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě sklíčka xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx inkubovat 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx se xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také se xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx a xxxxxx xx přebytečná xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx x vysají xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx a nechají 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx olejovou imersí x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx z pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxx xxxx by měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx xxxxx xxxxx xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx červené x xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx fluidní, a xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx uchovávají xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx identifikace podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx způsobem dojde x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Obohacení X. solanacearum však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx může xxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X obohacovacího xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx baněk. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx podíl extraktu xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX jako xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Validovaná polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx by xxx xxx proveden xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx být xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml pufru (dodatek 4), 15minutovým odstřeďováním xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j xxxx xxxxxx fixovány xx xxxxxxx plamenem.

Připraví se xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem R. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx pelety s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx obr. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx okénka je xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx xxx každé xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx stavu v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají na xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Setřesou se xxxxx xx všech xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Setřesou xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a přiloží xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumají xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx test IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx kontrolním kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky s xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx je počet xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx hlavního screeningového xxxxx xx doporučuje xxx tehdy, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx schválená xxxxxxx x protokoly PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní opatření x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx PCR by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx předtím testován xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním výsledkem,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx následující pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, které xxx použít xxx xxxxx test, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx k dispozici xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx xx termobloku xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 65 °X xx dobu 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx se xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx na xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX a nechá xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx do použití xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx sraženina xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, by se xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX jako xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Amplikony se xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx nových nálezů/případů xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx fragmenty xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčních xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn x xxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Spolehlivé xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán z xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené oligosondy xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Standardizovaný xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx, který se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, je uveden x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje se xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx nechají uschnout xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) x fixují xx nad xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) se nechají xxxxxxx.

4. Přiloží xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x to xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Připraví xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v kádince x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka se xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Test FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace pufru xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx buňky xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx méně častěji xxx u xxxxx XX.

5. X úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx negativní, xxxxx xxx použití rhodaminového xxxxxx nejsou pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX ELISA je xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx určení xxxxx xxx každou novou xxxxx protilátek. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x pracovním ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx x suspenze xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 A a X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx musí být xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °C xx 4 xxxxxx ve xxxxx lázni xxxx xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx vylijí z xxxxx. Jamky se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací roztok xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx doporučená ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx do každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx se xxxxxx xxxx předtím (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx z xxxxx x jamky se xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° C po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx xxxx xxxxx xx každé xxxxxxxx. Xxxxx se inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx vypláchnou použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µl xx xxxxx xxxxx a xxxxx stát 2 xxxxxx při teplotě 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Jamky xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x inkubuje xx x temnu xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x pravidelných intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (OH) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx hodnoty OH x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx úspěšně použít xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x teplotě - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. listů xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x vyvíjejí se xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Vzorek se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx a prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 cm xxxxxx a hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růst x karanténním xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx rostliny x xxxxxxx vzorků po xxxx inkubace drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými zástěnami. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx bez hmyzích xxxxxx, protože by xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků dlouhých 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx kultury x xxxxxxxxxx na X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx bakteriemi R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx případně známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. solanacearum, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Test IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x pufru IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx kromě této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx pozitivní, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx specifickými xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx x xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2OH, 16:1 2XX a 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3OH poukazuje xx Ralstonia xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x následujících metod.

U xxxxxxx provedeného testu xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum tvoří xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx do živné xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení dílčích xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx primerů XXX, XXX a XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx definováno analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx lilku xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vadnutí xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 cm xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx sterilizovaný roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 U (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X takovém xxxxxxx bude xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx ovlivnění růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx obohacené živné xxxx

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx agarovou živnou xxxx SMSA, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °C. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál xxx' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx působení (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně dostupné x xxx xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx testů

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami na 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Příprava pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx se x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx dosáhne xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx dřeň x pupkových konců 200 hlíz z xxxxxxxx odrůdy x xxxxx slupkou, o xxxxx se ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test se xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX testy xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x XXX musí xxx R. solanacearum xxxxxxxx v nejméně x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx sklíček na XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt obsahuje xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx se xxxxxx xX xx 9,8.

Doplní xx do 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx hodnota pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = tubusový koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC XXX XXX CCT GCC-3'

Reverzní xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX GCT XXX XXX CGT XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován pro xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx při teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx gtc xxx xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Polymerace. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Research XXX 200. Použití xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX TA-3'

Reverzní primer XX-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX AGA XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX TGC XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx pro biovar X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

b) Xxxxxxxx XXX specifický pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research PTC 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Restrikční xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx primerů Rs-1-F x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: FORMAMID XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 hodin nebo xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, J.L., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx virulence and xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. and Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx and molecular xxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx PCR. Applied xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Bruijn, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, N., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Hong, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx solanacearum (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, R. 2002. Xxxxxxxx analysis and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Production xx antibodies to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas sy xxxx, Pseudomonas pickettii xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by polymerase xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Fegan, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16X xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Genetic diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Springer (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, N., Stead, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Detection xx X. solanacearum, which xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.