Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 zákona č. 326/2004 Xx., o xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis et xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo místo xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx jejich eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Yabuuchi et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen bramboru, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx šíření infekce x x xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní partie; xxxxxx se xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx partie xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partiím, které x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) rozmnožovací xxxxxxxx bramboru²⁾ původem x České xxxxxxxxx x xxxxxxx podle §8 odst. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx rostlin označené xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Zjišťování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx třetích xxxx podléhají

a) všechny xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx v případě xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech produkce, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v odstavci 2 písm. x) x b), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. a) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx v odstavci 2 xxxx. x) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona Ústav xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx odebrané anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické osobě, xxxxx vlastní příslušnou xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx trh xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx škodlivými xxxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X případě podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx Xxxxx x rámci xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx podmínek xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx ostatních partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx a v xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx státem vhodným xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx o xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít původ x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx partii, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, sklady nebo xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx přišly do xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx materiálem, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, kde xx možná úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx objektem, označeným xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx v souladu x ustanovením bodu 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx ze xxxxxxxx xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání nebo xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x souladu x pozitivními xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx vodu, z xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx karanténního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené předměty x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx odborného šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx zajistí laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx partií hostitelských xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx však všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x objekty za xxxxxxxx, rozšíří rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Opatření proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a) xxxxx xxx sázena x pod dohledem Xxxxxx se x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a že xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xx buď xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx odborně odůvodněná, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby xx x xxxxxxx s §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, pokud xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru v xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx postupy, které xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Protože protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx jako kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx odpadů a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na infekci xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x rostliny xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu x typickými příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx přerůst nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x každé xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx přesnost (viz xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (viz xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx získat během 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx médiu x které xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx nepodaří, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx použitých xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá k xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus z xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx MTNA nebo XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test je xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx xx podezření, xx se xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x často pak xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx i xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, i xxxx xxxx x infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované děložní xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx slabá xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez měknutí x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx zhnědnout a xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx příznakům xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx šířit xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit xx xxxxxxx korové části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem vnitřních xxxxx a nekrózy. Xxxxxxxx houbová nebo xxxxxxxxxxx infekce může xxxxxxxx maskovat a xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Standardní xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x jestliže xx xx xxxxxxxx PCR xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxxx či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx odstraní slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x pupkových konců xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx nadbytečná xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxx do 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají stranou x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx po xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx všech xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce okamžitě, xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxx xxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a nádoby. Xxxxx má být xxxxxx XXX xxxx, xx nutno zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavky xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) při teplotě 4-10°X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Použije se 500 µx xxx xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, 500 µl xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx glycerol xx konečnou koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx a xxxxx xxx teplotě -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx při teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí se xxxxxxxx x chladícím xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly by xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx se xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo po xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), pokud xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly xxx XX titr alespoň 1:2000. Xxxxx testu xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7 000 x a xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx s jiným xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) by se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se použijí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 okénky x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx větší xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje stejné xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx v řadě. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx duplikát xxxx pro druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo pomocí 95 % etanolu xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx po xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx měl xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (T/2), xxxx (T) a xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (WD) protilátky x XX pufru. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx test xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu kapiček, xxxxx xx mohly xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx xxxxxx jako xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx při xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Berou xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF testu xx negativní pro xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xx přidané xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx je xxxxx jej úspěšně xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (PB) x 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx bramborového extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se přes xxx při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X PB a 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µx 0,01 X XX (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x zředěný 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

5.1.6. Sklíčka xx nechají uschnout xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °X) x fixují se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možnost xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX EDTA, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx měl xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 v pufru (20 mM Tris-HCl, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Sklíčka xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu v xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Připraví xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx teplotě 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / sklíčcích xx xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, aby xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xx předehřáté xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx z nich xx přeinkubuje ve xxxxx lázni při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx podobný) do xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx lepší xxx x pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx podobnou Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx méně xxxxx xxx u XX testu.

5.3.5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx FISH:

a) Výsledky XXXX testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx typických xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX test xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx používá xxxxxx x interní kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx použít xxx xxxxxxxxx PCR testu xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx jako vzorky.

K xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx o xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx roztoku lyzozymu (50 xx lyzozymu xx 1 xx x 10 mM Xxxx XXx, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx při xxxxxxx 65 °C po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá se 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje xx xx 15 000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá třepáním x inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx stát nejméně 20 minut xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx xxx teplotě -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx xxxxxxxxxxxx reakce, která xxxxxxxx také interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs XXX x přidá xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx DNA x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 V na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX barvením x ethidium xxxxxxx (0,5 xx na x) xx dobu 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (krátké vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx PCR o xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx negativní, xxxxx xxxxxxxx typický pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x druhou xxxxx XXX primerů (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, bude xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Každý xxxxxxxx xx horizontálně xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx délky). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx možno xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi děložními xxxxxx a prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx mírně úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx xxxxx x místě xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx inokulací nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx než 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x pletivem x xxxxxxxxx infikovaných hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny nechají xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx teplota xx 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx xxx pozitivní x xxxxxxxxx kontroly xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx nedostatku xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s nimi. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro různé xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorku na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Rostliny xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ve fázi xxx xxxxx a xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Patří k xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx vydezinfikuje otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx z xxxxx x xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx latentní infekce xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou po 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test IF/PCR xx xxxxxxxx vzorku xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Pokud xx xxxx pozitivní, xxxx xx být xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx části hlízy xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxx vejcoplodého, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 xxx na xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx kontroly odděleně xx xxxxxx, které xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx měla xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx desetinásobné ředění x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx obvykle nepodaří xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, že xxxxxxxx xx obvykle x infikovaných pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x kontrolními miskami x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx provádějí xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, než xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X subkultur xx rychlost růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx smetanově bílé xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V případě xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx být vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx k xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx ureázy -

Tvorba X₂X -

Xxxxxx indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx v 7% XxXX -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- salicinu -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx dosaženo, jestliže xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX test

a) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx xxxx (UPW)

b) Xxxxxxx se 100 µx suspenze xxxxx x uzavřených mikrozkumavkách x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné postupy XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Boer, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x kol., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní kontroly.

9.5. Xxxxxxx mastných kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx také obsahují xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede se xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X při dostatečném xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, aby xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxx během 2 xxxxx xxxxxx typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx infekce, xx se xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Pletiva xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Agricultural Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Protecção xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x které xx jisté, že xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx C. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF test

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x pufru xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx na okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde S = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x více jamkami x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro izolaci x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí x provede xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx agar = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 g
D(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7H2O	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x ochlazení xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 g.

V zásobě xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx na 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx X sulphate x destilované vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xx xx -3'

xxxxxx PSA-R 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx NS-primerů).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový objem	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Gibco XXX.

(²) Koncentrace primerů XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx pupkové části xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná nová xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů ii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 minuta při xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx při teplotě 72 °C (prodlužování xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc tcc xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX xX!]

xxx) Roztok se xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x skladuje xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx až 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx slunečním xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx xx skleníku xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový roztok

Jód 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou se xx vody a xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x nechá se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx omyje xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu tak xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne se xxx tekoucí xxxxx x vysuší se xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx safraninovým roztokem x nechá se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx modře, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Scheme xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx ring xxx xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, I. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Bull. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual of xxxxxxx xxx general xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. The interpretation xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx rot infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, K x D. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Billing a X. X. Hayward, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. A. x P. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx onicum (Spiek. xx Kotth.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. a X., W. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, K.-H., 2000. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx coamplification xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx potato tubers xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx to xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22. Smith, X. C.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx primer for xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx pathogen Clavibacler xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Journal ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. and X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, rostlin xxxxxxxx, rostlin rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx odstraňování odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx nebo screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx být potvrzen xxxxxx screeningovým xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže je xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx R. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx a bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx určen xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Xxxx xx výtok xxxxx xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxx ELISA bakteriálního xxxxx suspendovaného ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx popsán v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx snadno izolovatelný x rostlinného materiálu xxxxxxxxxxxx příznaky metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (viz v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce typické, xxx izolační xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx pro každý xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x případě izolace xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly x každé sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli postup xxx použit i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx v oddíle 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx testech získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx vzorků.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx provedena izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li druhý xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x R. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxxxx x noci xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x objevují se xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Při xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx do xxxx xx z cévních xxxxxx táhnou xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx hlízy x x xxxx xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx slupce se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx místa xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X pokročilejších fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx než 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx dokladem odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, pokud xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (xxxx. x rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x kořeny xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí stonku xxx xxxxx. Z xxxx cévních svazků xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, a xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx modří X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x nechá xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese se 50-100 xx suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx (XX, YPGA nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx zcela krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz bramboru

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištěni původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx test XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nože na xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky vodivých xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Množství pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx omezí xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx stranou a xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx včetně hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxx xx nepoužitých xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx se x xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx použití (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx pomocí mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) a nádoby. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 g xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µl xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx se při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x zpracovány xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (viz oddíl 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 cm dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere kousek xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x paty každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin rostoucích xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx vodou nebo xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx pozdního jara, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx zjistit xx celý xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) a třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Není-li xx xxxxx, uloží se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx na 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, které má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, ale lze xx xxxxxxx filtrací xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx díl xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x doporučuje xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x důvodu xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx být xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx však xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx nichž xxxxx xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx testovacího schématu xx mělo xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx patogenu x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx xx uvědomit xxxx omezení při xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx na určených xxxxxxxxxxxx místech zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx může xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx odebírají x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx odeberou xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro každé xxxxxxxxxx místo, z xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx dílčí vzorky xxx 10 000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µm) s xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx filtrátu. Tato xxxxxx je xxxxxx xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx obsahují xxxx počet saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx populace konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx postupový xxxxxxx x xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy selektivní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Je xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx určujících xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu je xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem přítomnosti xxxxxxxx x polní xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x její sledování, xxx xxxx infikována, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx půdy xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx reprezentujících xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Před xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx s xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx ze 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx xxxx XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx mikroskopické xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x známém XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx nechají xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se barvící xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx kapkou xxxx x přiloží se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x použitím objektivu xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx buněk xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% roztokem xxxxxxxx xxxxx X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku a xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xylolu x vysají xx xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se opláchnou xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x při zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx zbarvenými xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk R. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx pozorovatelná pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx částicemi. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx dobu 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije xxxx xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx předtím testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx R. solanacearum xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce touto xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná x xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx připraví xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx kultivaci patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx inkubovat při xxxxxxx 28 °C. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx a xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx růžově xx krvavě červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx červené a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx saprofytických xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální živnou xxxx., xxx se xxxxxxx izolované xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě ve xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže xx 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti detekce. Xxxxx způsobem xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx antagonismu saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx může xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX doporučuje použít xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx testu ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx podíl xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx vzorky xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx výsledků obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX jako xxxxxx x výsledek IF xxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx test izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx měly xxx xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx proveden na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, zvláště xxxxx j jsou xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °C) xx xx xxxx podle xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x testování xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - u xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované bramborové xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx poměru) resuspendované xxxxxx pro xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx rezervní xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) protilátek x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx na test xxxxx odst. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx sklíčka xx test podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí xxx xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx se pečlivě xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx umístí xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx každého xxxxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx buněk xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx fluoreskující x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx velikostí a xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx tehdy, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru používaného xxx extrakci xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, do xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x virulentního xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx použití XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

Standardizované materiály x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají xx xxxx popsané xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx substrátů vzorků xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx enzymových xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 mM TrisHCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Easy DNA® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení xxxx x vytvoření mezifáze xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx a odstraní xxxxxx.

14. Peleta xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx - 20 °X xx do použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx test PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx PCR v xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Přidají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx PCR a xxxxx se xxx xxxxx UM xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx ve xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, a xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Amplikony se xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx se proužky XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální teplotě x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zjištěn u xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx není xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx také získat xxxxxxxxxx testu s xxxxxx sadou primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Odstraní se xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx sklíčko, a xx neředěný x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x přidá xx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x sušičce xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další den. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx se xxxxx x postupné xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) se nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx sklíčka (24 x 24 mm) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx sklíčka a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx do držáku xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná morfologie x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx málo buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli kontaminaci xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. To může xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx x bramborových xxxx a xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnými X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx u xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Výsledky XXXX testu jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x nejsou xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx v pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx určení xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity protilátky x pracovním ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který xxx xxxxxxx otestován jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx vzájemného působeni x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A x X). Pro xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx být xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx ELISA (Robinson Xxxxx xx al., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X na 4 minuty ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění protilátek xxxxx X. solanacearum x blokačním xxxxx (dodatek 4). U validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx se 100 µx do xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µl xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x jamky se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µl xx xxxxx jamky. Nechá xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 až 5 xxxxx xxxx 4 ° C po xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x PBS. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 mg p-NPP/ml xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (OH) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx vzorkem xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty OH xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (přípravu viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně použít xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny ve xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx možno, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Vzorek xx xxxxxxx mezi testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx začne x xxxxx kapky xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx rostliny ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo jinak xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx rostliny x xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx je udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. Z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx vzorku ze xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Média a xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Test XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx k X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx xx xx. (1993); Pastrik x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Použije xx metoda XXXX (6.1.7) x nejméně 2 oligosondami specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, jestliže xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx stejných xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX a absence 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx nový případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx použitím xxxxx x následujících xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Živná xxxx pro xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární identifikace xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, XXX a XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx al., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 a 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx patogenity)

Jako závěrečné xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x hustotě přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 ml xx 24 až 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx považována xxxx xxxxxxxxx forma R. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx tlakem při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit x 1-2 dny xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X v temnu x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut x xxxxxxx se xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně dostupné x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx rostlin (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx může xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x původních sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx všech xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) na SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x pupkových xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx provede test xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx po dobu xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Peletový xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co byly xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx pro IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, je xxxxx xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný pufr (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx pole xx xxxxxxx x xxxx okénky a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = tubusový xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

X = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý primer XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC XXX XXX CCT XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °C (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu ii), xxx) a iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx gca xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Polymerace. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 sekund xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 minut při 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx kroků cyklu xx), iii) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp a 96 bp.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX AGA XXX T-3'

Přímý primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 minut xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund při 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Bsm 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX vzniklé amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx tag xxx xxx acc xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc tcc xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx se xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx chráněný xxxx xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (pH 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX POUŽÍVAT RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx použití se xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje pH x sterilizuje xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná odrůda xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole xxxxx xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx in microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Communities L235, 1-39.

3. Boudazin, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx of Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxx application xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxxxx solanacearum: detection xx restriction fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx solanacearum. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Bulletin 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, K xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, M.M., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx isolation, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Xxxxx et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Stephens, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Stephens, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Tavner, G. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Maiss, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx xxxxxxxxxx cham reaction. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx region with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., L.A. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx by partial 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx of oligonucleotide xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, J.J., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx disease xxxxxxxxx xx banana xxxxx xx 16S xXXX xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X. 1998. Genetic diversity xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.