Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx stanoví xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplatňují na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. sepedonicus (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Davis xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx semen bramboru, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a xxxxx, xxxxx potměchuť (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx území, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, zařízení, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx xxxxxx části x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx se xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x ní xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ původem x Xxxxx republiky x xxxxxxx podle §8 odst. 2,

b) xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově xxxxxxx xxxxxx nesadbových brambor xxxxxxx x České xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx vymezené podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx všechny partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxx rostlinolékařské kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx bramboru určené x vývozu do xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx rajčete určených x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx vody ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x případě uvedeném x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x porostech xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, pevných odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx vegetace v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, původ, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x statistických xxxxx x biologie xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby, x přihlédnutím x xxxxxxxx produkce brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx na míře xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx zjištění a xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané anebo xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx dohledu této xxxxxx, že xxxxxx xxxxx odebírány a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx na trh xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx průzkumu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 zákona xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx státům x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx ročně xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x případě xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx xxxxxxxxx množitele, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x produkci předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo xxx xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X případě podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx podezřelého výskytu x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího xxxxxxx xxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx z výskytu, xxxxxxxxx i xxxx xxxx pozemky a xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx může Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 odst. 2 xxxxxx a x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce hnědé xxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x něhož xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx xxxxx produkce xxxxxx těch, xxx xx možná xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx s ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx objektem, označeným xxxxx písmene a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx podle písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a možného xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx podle xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a jeho xxxxxxx rozšíření podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 písm. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x v souladu x xxxxxxxxxxx odstavců 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), odstavce 2 xxxx. c) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx míru rizika xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, rozšíří xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx vymezí karanténní xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx xxx xxxxxx x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx předem ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx podrobí xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx očisty a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 písm. c), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx a xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx narušena xxxxxxxx xxxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x uváděný xx xxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x rozsahu podle xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx předstupňů x reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x následujícím roce, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx se podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx bramboru a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx patogenu z xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí na xxxxx není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, které xxxxxx xx infikovaném xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx patogena xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx použití testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx založen na xxxxx biologickém principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz, ačkoli xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Metody extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx vhodná xxxxxx xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx za použití XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované pelety 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx získat xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vyčistit a xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou přípravu xxxxxxx x pupkové xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které mohou xxxxxxxx přerůst. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx x rostlin použitých xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx z xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx tuto metodu. Xxxxxxxxxxx inhibitory Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx MTNA nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx provede test xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx použitím xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody extrakce x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx založené na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedení druhého xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé identifikace xxxxxxx kultur, x xxxxxxx xx podezření, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx na konci xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky skryté xxxx se zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx vznikají neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Infikované děložní xxxxxx, listy a xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy a xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx prstence cévních xxxxxx x xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x mohou xx postupně xxxxx xx celý prstenec. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx povrchu hlízy xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx xx x Evropě objevilo xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx lze vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány do 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx xxxxxxxxx výkrojku z xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx se x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku se xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx nádobách xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že jsou xxxxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce okamžitě, xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v mixéru xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX test, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo mlecí xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí se xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut při xxxxxxx 4-10°X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx se 500 µl pro xxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, 500 µl pro Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx vířením a xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx testy.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny na xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx čistého dezinfikovaného xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se odstraní xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx zalijí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx při pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxxx není nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx popisu x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °C (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), pokud xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx hlavní screeningový xxxx a xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx screeningový test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx FISH. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx se xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorku s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dochází x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly mít XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených vzorkových xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx být xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 a xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx testovány s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s relativně xxxxxx množstvím xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx obrázku 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) resuspendované xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - pro větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx řady okének. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx pokojové xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), nad xxxxxxxx nebo pomocí 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup IF xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx titr (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx test v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (WD) protilátky x XX pufru. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx oddílu 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Množství protilátky xx každém xxxxxx xxxx xxx nejméně xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 minut při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do každého xxxxxx x přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx s žádnými xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX opakován (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být při xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou morfologií x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx nebo pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, kde je xxxxx typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx IF test. Xxxx se FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx byl uchován x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) z 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx při xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje se xx xxxx 8 xxxxx na 7 000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) může xxx uložen xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) v 10 xx pufru (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx xxx skladovat, xxx měl by xx xxxxx jednou xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx dobu 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx jednou, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX CaCl₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx po dobu 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx v xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační roztok (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx a předinkubuje xx po dobu 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx sklíčku / sklíčcích xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se umístí xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 minut x kádince x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx krátce do XXX x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx filtračním papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího roztoku (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx všechna sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx než x XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx xx negativní, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. XXX xxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a XXX) by se xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx a XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly by xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 nebo XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx enzymatických xxxxxx a koncentrující xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx extraktu xx vzorku x xxxxxx se do xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x teplotě 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx DNAR xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx být stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx se 500 µl xxxxxxxxxxx x míchá xx xxxxxxxx, až se xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx se xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °C x odstraní xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje se xx 15 000 g xx dobu 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v DNA xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní xxxx (UPW) a xxxxx stát xxxxxxx 20 minut při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX by xx xxxxx použít, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x kontroly pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, která byla xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xx vhodně optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx amplifikované xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µl xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx dobu 30-45 minut, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx se zdokumentuje.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický vzor xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, ale xxx zjištěn ve xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx byl zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x vzoru (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx lze dosáhnout xxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx negativní. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX s interními xxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml přidaný x extraktům ze xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx zjištění lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující médium xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx falešně xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají se xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx xxxxxxx pravého listu. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Každý xxxxxxxx xx horizontálně xxxxxxx (pro xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x xxxxxxxxxxx částí x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxx xxxxxx x blok xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx listem podélný xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx přidrží otevřený xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxx xxxxxxxx štětečkem na xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx se překryje xxxxxxxx vazelínou aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), dlouhý 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x řezem se xxxxx v místě xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx napětí xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x podkožní xxxxxx (xx méně než 23 X). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx to možné x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx nechají xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se tak, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxx xxxxx nedostatku xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx teplota xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx při nedostatku xxxxx se zajistí xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx kontaminaci. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx chráněny xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová nebo xxxxxxxxxxx ochablost (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx trvá období xx objevení xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, proto xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Patří k xxx Erwinia carotovora xxxxx. carotovora a X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Tyto xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx nebo xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx použití částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů a xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % etanolem. Xxxxxxx se xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Může xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx identifikují a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx podle xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho izolovat x xxxxxx projevujících xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x pelety xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx části xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl pozitivní xxxxxxxx x testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx šťávy z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace z xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x infikovaných xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx vypláchnout ředěním, xxxxxxx patogen xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) a techniky xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx pěstovat xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx média příliš xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x následujících xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. U subkultur xx xxxxxxxx růstu xxxxxxxx. Xxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx provádět xx použití xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x kultur z xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx nebo slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Tvorba X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx antiséra.

c) Provede xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx ve xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx teplotě 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx potom xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx použití.

c) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx postupy XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills a xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, jsou-li dosaženy xxxxxx reakce xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Kultura se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx a Xxxxxxxxxxx také obsahují xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X je xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, která xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx v XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx x příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx rozetřením nebo xxxxxxxxx xx MTNA x XXXX, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx kolonií typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Plant Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového pufru xxx získání xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, že xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Mikrozkumavky xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x objemu 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR musí xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx pro XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Vypočítá xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx jamkami x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx C. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient agar = XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx extraktem x minerálními solemi (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x autoklávu xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx xxxxxx na 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.) a ochlazení xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X NaOH, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX kontrolou (Pastrik, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx ctt gtg xxx tgg xx xx -3'

xxxxxx PSA-R 5'- xxx xxx xxx gtt tca xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx acg ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs PCR

Činidlo	Množství xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 cyklus: x) 3 minuty xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA matrice)

vi) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Udržuje xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků cyklů xx), xxx), iv), x), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc gca xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená množství xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx se xxx xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové violeti x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx violeti x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx barvivo, nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx roztokem x xxxxx se xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx se pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx také použít xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx tubers. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx methods xx light xxxxxxxxxx. X: Manual of xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Microbiology, Washington, 21-23.

5. Xxxx, R. x Leifson, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx development xx x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. appl. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Billing x X. X. Hayward, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Chain Xxxxxxxx primers xxxx XXX intergenic spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx relationship xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, A. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Skerman, X. X. D., 1967. X xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx genera of xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. C.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: report xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních podmínek x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní screeningový xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, izolaci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Popis příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx testy usnadňují xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx výtok slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx v oddíle 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx extraktů z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx snadno izolovatelný x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx může xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx negativní, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum xx provede xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx pozitivní, xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx fázích vadnutí xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx k ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx výhonku nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxxx uříznutého stonku xxxxxx do xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx infekce rozšíří xxx od xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx cévního xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Za xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, které xxxxx jejím xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx podmínek pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx může xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx S. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx řez xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx napomoci xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xx mikroskopickém sklíčku xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (viz oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x roztoku xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze vhodně xxxxxx i pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž použit xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x obsahem chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) a xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx příliš xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx nože na xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky vodivých xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx omezí na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx na řezu xxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx dobu nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx části se xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx na jedno xxxxxxx, které jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °C) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx polyethylenový sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx zářením) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při homogenizaci xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx použijí xxxxxxx sterilované nože (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci. Xx platí pro xxxxxxx IF a xxxxxxx testy.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a popisy xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx se uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny z xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere nejspodnější xxxxxxxxx výhonek x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 cm xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx odebere 1 xx dlouhý xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x podzimu, xxxxxx přirozenou xxxxxxx xx xxxxx zjistit xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí ve xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx rostliny rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus scleratus, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Silene xxxx. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl stonku x xxxxxxxx se xx stranou xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx se krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx rotační třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) se ihned xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin nebo xxx pokojové teplotě (18-25 °X) na 24 hodin.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, ale lze xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Jeden díl xx testuje při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx v xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx nebrání izolačnímu xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x důvodu konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx popsané x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx liší x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx izolace je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx než v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx postupu (např. xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx snížení saprofytických xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx mělo xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx xxxx schéma xxxxxxx úspěšně k xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx si xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x různé době xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx x tím x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských rostlin, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xx odeberou xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky nejméně 3xxxx xxx každé xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Je-li potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µm) x xxxxxxxxx promytím xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx objemy xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx je xxxxxx v oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni v xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx testy selektivní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx schéma popsané x tomto oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, ale xxxx xxx rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx zpracování brambor xxxx xxxx x xxxxxxx vody. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx tyto xxxxxx xxxxxx dostatečně citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x půdě xxxx kalu je xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx sledování, xxx není xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °C. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a kanalizace xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx právě nad xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x známém XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx roztokem xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx olejovou xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx světle, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx všechna xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) vodným roztokem xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: safranin je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v bakteriálním xxxxx nebo x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx částicemi. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) na xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx živnou xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně validovaná xxxxxxxxxx živná xxxx, xxxx. SMSA (ve xxxxx Elphinstone et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě přípravených xxxxxxxx ze xxxxxx xxx očekávat, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx nejdříve xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x cílem xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje xxxxxx xxxx x xxx xx provádí kontrola xxxxx po 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx médiu xxxxx atypické kolonie X. solanacearum. Xxxxx xxx malé, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx fluidní, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné bakterie xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxxxxx typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x ke zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx být neúspěšné x xxxxxx konkurence xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může být xxxxxxx X. solanacearum x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Kromě toho, xxxxxxx xxxx dojít x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 ml obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené živné xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °C x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx konkurenčních saprofytických xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx koncentrace.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek IF xxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit xxxx pro xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx být xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn xxxxxxxx 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x ředění 1/100 do xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx být použita xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx pro xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx okénka je xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxx na sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při teplotě 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx boxu po xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx ředění ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.i)

Xxxxxxx 2. Příprava xxxxxxx xx test podle xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Setřesou se xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx se pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Pečlivě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx na xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Setřesou xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx excitaci XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x určeném titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx sklíčka. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx zjištění pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Při xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx izolace xxxx IF. Xxxxxxxx xx PCR xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx přidaný xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX by xxx být prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx kontrolami (v xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx mělo vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, který xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci bakterií x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx brambor.

Standardizované xxxxxxxxx x pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx substrátů vzorků xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx enzymových reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx metodami XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Tris-HCI (xX 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), důkladně xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se převede xx xxxx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx třepáním a xxxxxxxx xx na xxxx xx xxxx 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15 000 x po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x odstraní xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx se při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, zachová xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní XX a xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Skladuje xx při teplotě - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx použije xxx test PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi amplifikované XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx nových xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx obarvení ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního výsledku xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx očekávaný amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahujícího X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Když xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, který se xxxxxxx v tomto xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a rozpustí xx peleta xx 200 µx fixačního xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx vzorky na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µl) xxxx být uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V případě, xx xx třeba XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu (xxxx x sušičce xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx nad xxxxxxxx.

X xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x pokračovat v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx při teplotě 45 °X xx xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) se xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx umístí do xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 kádinky obsahující 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx Q), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x kádince x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx a celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. solanacearum xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, pokud xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma průměry x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo buněk, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Při podezření xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx být test xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x bramborových xxxx a pelet xx stonkových xxxxxx xxxxxxxx dojde k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Vzorky, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy ELISA Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxx. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx citlivost xxxxx, ale xxxx xx xxxxxx setkat x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx definován jako xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x pracovním ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné jakou xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x PBS X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, které se xxxxxxxxx xxx tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Použije xx 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °C na 4 minuty xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx množství dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Jamky xx xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx předtím (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxx xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx absorbance xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá se 200 µl xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx jamek xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), přidá xx 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx při teplotě 37 °X.

5) Jamky xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx dobře vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 mg p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx každé xxxxx a xxxxxxxx xx x temnu xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx při 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx ELISA

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativního kontrolního xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX v negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, které xxxx uchovány v xxxxxxxxx v teplotě - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx kultivary x xxxxxxxxxxx citlivostí), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů až xx plného rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Vzorek se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace zářezem

Rostlina xx přidrží xxxx xxxxx prsty a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx rostlin, xxx xx zabránilo vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx relativní xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx IF/PCR/izolace na xxxxxxxx vzorku ze xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, provedou se xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx organismus xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx bakteriemi R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx čisté kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x X. solanacearum, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě této xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx je nejméně xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní vody (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx vodní lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) s nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Test XXXX xx pozitivní, jestliže xx x xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx na tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří disacharidů x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Živná xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx žlutou a xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Pastrik xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx do skupiny 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2T) R. xxxxxxxxxxxx, jak xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx et xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné půdy xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x přidá filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx získala stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x může xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X v xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx měly xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá xxxx xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx a xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx komerčně xxxxxxxx x xxx je xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Národní sbírka xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx lyofilizací, nejsou xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x FISH

Kultivuje xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) na XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx se x 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se xx, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Mikrozkumavky musí xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx sterilních zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x PCR xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx používá x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento pufr xx používá xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX testy k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Pufry xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí se xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX GCC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Reakční směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x reakci	Konečná koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Taq X xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC TTA XXX XXX TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX TGC XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 bp (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 sekund při 58 °C (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Rs-3-R: 5'-XXX ACG GCA XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX specifický pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx použití termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX R. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X nemají žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx xxx xxx xxx xxx ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x přidá se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx se pH xxxxxxxxxx proužkem x x případě xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při teplotě 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 mM (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Pro xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX POUŽÍVAT RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny lilku x xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx and D.A. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx in microbiology. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 July 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, X. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division specific xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx polymorphisms xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x semi-selective xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Characteristics of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, H.M., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, L. 1990. Variation in xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx cells xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx whole cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxx appearance xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Lelliott, X.X. and Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive sequences xxx PCR. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, D. X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx rep-PCR fingerprinting xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, K.H. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection of X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX amplification xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region with xxxxxxxx positive control. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent of xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Pseudomonas xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx based xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Wolf, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, C. and Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. and Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.