Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x určení xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k určení xxxxxx území, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xx xxxxxxx, x xxxxxxx anebo x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx které xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx z důvodu xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením z xxxxx původní partie; xxxxxx se za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, které xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu podle xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x České xxxxxxxxx x rozsahu xxxxx §8 odst. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx jen "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových brambor xxxxxxx x České xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx vymezené podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx určených x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx potvrzení jeho xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební substrát x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x b), xxxxxxxx 3 a v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. a) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v porostech xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx hniloby v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx uvedeném v xxxxxxxx 5 xxxx. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle odstavců 2 xx 7, xxxxxx tohoto průzkumu x způsob předávání xxxxxxxxx o odebraných x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x statistických xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx ve výskytu xxxxx xx míře xxxxxx zavlečení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx ústavu zemědělského (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, pověřenou x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu této xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx fyzické xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 5 zákona jednou xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem ověřené xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx dohledem xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona

a) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx zásilek, ze xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stupni odhadovaného xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného členského xxxxx nebo x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, sdělí Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx příslušného xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x něhož xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx těch, xxx xx možná xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx základě xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx nebo xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x bezpečnostní xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx ze zařízení xx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vodou xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských rostlin x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx písmene x) xxxxxxxxxx vodu, z xxx byly odebírány xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx podle písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Podrobnosti x tomto oznámení xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx odborného šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. b) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), odstavce 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x xxxxxxx, které xxxx označeny xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx naloží způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v bodě 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Ústav xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x veškeré jiné xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) nebo xxxxxxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x dezinfekci pomocí xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a x případě xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx opatření uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř karanténního xxxxx a v xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s registračním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx a xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby je x souladu x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx jejich přechovávání x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx povoluje Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x rozsahu podle xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby nebyl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, validovaná xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx bramboru a x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x x případě xxxxxxxxxxx výsledku identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx příznaků xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx založen xx xxxxx biologickém xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx patogena, a xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového testu xxxx dostačující k xxxx, xxx byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx lze xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx ještě jeden xxxx více screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Test imunofluorescence (XX).

Xxx vyšetření IF xx vždy použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, další xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se vhodná xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické kolonie xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx patogena xxx xxxxxxxx vyčistit x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx izolační xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx a x případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - xxx oddíl 3.2.

(2) Metody extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede se xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x v xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx příznaky skryté xxxx se xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx kontrole xx xxxx xxxxxx přehlédnuty. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx okraje xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx než obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx při jemném xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx sloupky xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx zhnědnout a xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x mohou xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx vnitřních xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky kroužkovitosti xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx je založená xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx xx xx xxxxxx příliš zeminy x xxxxxxxx xx xx provádět XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx. Po xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x pupkových xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx skladování může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot/min) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx dobu 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxx každý xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x nádoby. Xxxxx má být xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxx v sáčcích xx jedno xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije se 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx sterilní glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx při teplotě -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx nutný xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx se xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx na XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx by xxx založeny xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, xxxxx xx předmětem vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo zahradnických xxxxx xx odstraní xxxx x velikosti 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx x shromažďují x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není možné, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx v chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu při xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla prokázána xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x jeho xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX test xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být další xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx stanoven jako xxxxxxxx ředění, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx kroužkovitosti a xxx xxxxxxx vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx provádí xx xxxxxxx připravených vzorkových xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx proveden na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx stejném množství xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 až -24 °X) xx se xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) do zbývajících xxxxxx x řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx podle obrázku 1.

x) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx pokojové xxxxxxx nebo zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx fixovaná sklíčka xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x IF xxxxx. X xxxxx xxxxx by měl xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (WD) protilátky x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se kapky xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a tato xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Napipetuje xx 5-10 µl 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s žádnými xxxx xxxxx počtem xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk v 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá počet xxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx další testování.

b) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx specifické pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl xxx xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 M fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se přes xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním fixačním xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx peleta z xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X PB a 50 µx 96 % etanolu. Promíchá xx protřepáním x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µl 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx x x xxxxx při pokojové xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) x 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx lyzozymu a xxxxxxxx xx dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx jamky a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu v xxxxxx sklíček.

5.2.3. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx krabice xxxxxxxx xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Krabice xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační xxxxxx (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 krycími xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xx předehřáté xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 ml XXX). Xxxxx z nich xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x hybmixem při xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx s morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo málo xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxx testovacích sklíček (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx lepší xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx PCR test xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají se xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test by xxxx xxxxxxxx zkušení xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) xx se xxxx xxxx zacházet xxxx s konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx došlo x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx z xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx by měly xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních substrátů xxxxxx jsou k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x validovanou xxxxxxx PCR, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku a xxxxxx se xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx ledu.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg lyzozymu xx 1 xx x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží a xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese se xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 minut xxx 4 °X x odstraní xx x pelety etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx při 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx xxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a pro XXX xx xxxxxxx 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx se xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx DNA x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx bromidu (0,5 xx xx x) xx dobu 30-45 minut, za xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx mutagenem.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech xxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx zjištěn ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx pozitivní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), za xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus ve xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z obou xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x jedné xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které byly xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x níže uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx ve xxxx 2-3 listů xx úplného rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx hloubky, 10 xx xxxxx x 15 cm délky). Xxx každý xxxxxxxxx xxxxxx se mezi xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx bloku.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx x prvním xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx přibližně xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx špičky xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx mezi všechny xxxxxxxxx rostliny xxxxx.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx dvěma prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx sešikmený zářez (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx inokulací nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx těsně xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po inokulaci xx rostliny nechají xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se tak, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx vody nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x nimi. Xxxxx xxxx být xxxxxxxx pro různé xxxxxx inkubovány blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné manipulaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x xxxx krátce xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. xxxxxxx, jakož x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx také připravit Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx se na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx xxxxx a xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx x izoluje xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (viz xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává v xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou po 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx příznaky, xxxxxxx xx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných nad xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx původce kroužkovitosti xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho xxxxxxxx x pletiv xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx x z xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x testu XX/XXX složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx maceraci stonků xxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění suspenze 106 xxx xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Aby xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly odděleně xx xxxxxx, které xxxx xxx testovány.

Pro xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Ze 100 µl alikvotní xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx obvykle xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx patogen zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx x roztěrům (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí po xxxxx xxxxx, x xxxxxx počítáním xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx pěstovat xx XXX médiu; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, než xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, smetanově zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx zaručení xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx rychlost růstu xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx smetanově xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x obvykle mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxx při 21 °X x po xxxxx dnech xx xxxx být vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxx xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx musí xxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxxx dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum přibližně 10⁶ xxxxx na xx z 3-denních xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x vhodného xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x přemokření xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx rostliny, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx infekce, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx považována xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx z rostlin x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx inokulace. Pletiva xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 dní xxx xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Ernährangssicherheit	Vídeň x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Quarantaine xx xx Pomme xx Xxxxx	Xx Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Laboratory	Dublin	Irsko
Plantenziektenkundige Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z pupkových xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx s bílou xxxxxxx, u xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml.

Připraví xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx se xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Mikrozkumavky xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 µl xx xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX xxxx se xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus zjištěn x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx extrakci homogenizací

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro XX.

2.3. Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX a XXXX xxxxxxxxxxx buněk

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx mikroskopického sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha jednoho xxxx na xxxxxxx x xxxx jamkami x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = C x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 X po xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °C xx xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx není xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a ochlazení xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin B 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx autoklávování x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus na 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg xx xx -3'

primer PSA-R 5'- xxx xxx xxx gtt tca xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx xxx xxx xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x DNA X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer PSA-R (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx za xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx xx podle xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Udržuje xx xxx teplotě 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xx optimalizován xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc gca xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx pH a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Roztok xx xxxxxxxxxxxx přes membránový xxxxx 0,22 µm x skladuje xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 sklíčka	8 sklíček
Sterilní xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Semenáčky x plně rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový roztok

Jód 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx v xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx v xxxxxxxx nádobě do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x nechá se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se omyje xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx se xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xx batches xx xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx light xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, R. x Leifson, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx oxidative xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x X. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, X x X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx plant pathogenic xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) in xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. a X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx by xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx X1X-XXX and xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, V. X. X., 1967. X guide xx xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd ed., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling xxxxx xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Journal ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X study in xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx van Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, schválená xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxxxx stálé a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx být xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx s podezřením x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx slizu xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické aglutinační xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vykazujícího příznaky xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Test FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx příznaky metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx test xx negativní, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx poznámka v xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx čistá kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx x xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Screeningové xxxxx x izolační xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx xxxxxxxxx kontroly x každé xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx pozitivní, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx podezřelých xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. X případě, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x R. solanacearum, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx fázích xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x objevují xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným x končí xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X cévních svazků xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx hnědý x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx do vody xx x cévních xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx je třeba xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx může xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx od xxxxxxxxx xxxxx hlízy x x oček xxxx xxxxxxx bakteriální sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx částice půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx propadlá xxxxx xxxx důsledek vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) se během xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení listů xxxxxx dolů x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx systému. Při xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx hostitelů

Rostliny Solanum xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx inokula (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx ve xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx vodivých pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx stonku xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle xx xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx fixovaných xxxxx bakteriálního slizu x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (viz oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx při xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) inkubuje se 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx média a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy potvrzující xxxxxx X. solanacearum x podezřelých izolátech xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže může xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx test XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx vodivé xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx se uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Není-li xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) homogenizují xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx použijí xxxxxxx sterilované nože (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx zakalený, pročistí xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 minut při xxxxxxx 4-10 °C) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100 µx), xxxxx xx omyje přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (v/v) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx přeprava v xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx x vzorky X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou v xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (viz xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx smíšené vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx založen na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx odebere kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx z každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx země. X xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx celý xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx hostitelské rostliny xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx za specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. nutans., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx stranou xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx papírem. Xxxxx xx xxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx drcením x xxxxxx maceračním xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) s přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 hodin nebo xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx dekantuje supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx dva stejné xxxx. Xxxxx xxx xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °C x druhý díl xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx v odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx než v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobně podstatně xxxxx. X tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx provedení nějakého xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx si uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx výkyvů xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím x zastření výskytu xxxxxxxx.

- Vzorky vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx jsou přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx odeberou xxxxxx xxxx do xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud možno 30 cm xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx metod:

a) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx dobu. 10 xxxxx (nebo 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Provede se xxxxxxxx přes membránu (xxxxxxxxx velikost pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx filtrátu. Tato xxxxxx je vhodná xxx velké objemy xxxx, xxxxx obsahují xxxx počet saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x příslušných dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum xx dosáhne pomocí xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx být xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Je xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx populací Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx xxxx kalu xx xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx v xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x její xxxxxxxxx, xxx není xxxxxxxxxx, xxx i při xxxxxxx této xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx by xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, zvýší xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním xx xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx nebo xxxx xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx na výtok xxxxx ze stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx pravděpodobného xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, zda xx xx několika xxxxxxxx xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x spodní povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Preparáty xx obarví xxx xxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Krátce se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx savým papírem.

c) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x xxxxx xx inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

f) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, zda xx xxxxxx na XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% roztokem súdánské xxxxx B x 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx se opláchne xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx olejovou xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx komerčně dostupného xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx výrobce. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, zda se x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx jsou rovněž xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx použitelná i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví jako xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleně od xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx před xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx její xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx na 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx provádí xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. solanacearum xx xxxxx půdě XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx a po 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx tomto xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx malé, kruhové, xxxxx červené x xxxxxxxxx xxxx jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při pokojové xxxxxxx v xxxxx xxxx dlouhodobě ve xxxxxxx ochranném médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné bakterie xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x inhibici jinými xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro test XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se přenese 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx předem připraví xx sterilních xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx v 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C x xxxxxxx nebo statické xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA nebo XXX xx obsah xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx se inhibice xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx test xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx by měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 až - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx odstraněn přidáním 1 ml pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx fixovány xx xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až 24 °X) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 do prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Pro jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx odměřené standardní xxxxxxxx (15 µx xx vhodné pro xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), ostatní 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x pufru XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají na xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství konjugátu xxxxxxxxxx xx okének xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka se xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 minut xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xx krycí sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx testovací xxxxxxx epifluorescenčním mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumají xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v testovacích xxxxxxxx sklíčka. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx porovnání s xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx stejném xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx může stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx části bramboru x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle oddílu 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx jasně fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx IF. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx screeningový xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx postupového diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx být prováděn xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx biologii, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx extrakce DNA x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx extrakci xxxxxxxx x DNA ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. solanacearum (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. solanacearum ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3 X);

- xxxxx možno, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx použít pro xxxxx test, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx výše popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymových xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda podle Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µl xxxxxxxx ze xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx xx termobloku xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 minut.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Easy XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx viskozita xxxxx x směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 g xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), xxxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx při 15 000 x po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní se xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, zachová xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX a nechá xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx test XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx DNeasy Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x kontroly xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx extraktu DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, ve kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx týž xxxxx XX xxxx xxx xxx, který xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx testování, a xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních opatření xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a UV (xxxxxx xxxxxx délky xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje pravost xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx optimální xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX světlem xx obarvení ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x zkoumaného xxxxxx zjištěn, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxx kontrolními primery xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx a (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx testu s xxxxxx sadou primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX test. Když xx FISH xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, je x dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk R xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx do extraktů xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx by xxx xxx pokud možno xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x glycerolu xxx teplotě - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (PB) ze 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Wullingse et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx dobu 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx se a xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Zbývající xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (zamíchá xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (nebo x sušičce sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) a xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x suchu xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx tkaninou nebo xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx dvě středová xxxxxx (3 a 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Přiloží se xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx zahřáté xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X v xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx lázni x teplotě 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Držák sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 minut.

9. Xxxxxxx xx krátce xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X filtrem xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma průměry x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx málo buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx neberou x xxxxx.

3. Při podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x sebou nese xxxxxxx problémů. Je xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, i když xxxxxx méně xxxxxxx xxx u testu XX.

5. V úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx pozorovány x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX testu xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy ELISA Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX ELISA xx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, ale může xx rovněž xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určení titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. solanacearum a xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx komerční xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze xxxxxxxx xxx vzájemného působeni x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 X a X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx pro tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X na 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx boxu xxxx x xxxxxxxxx případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °C.

4) Extrakty xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx nechá v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx dvojnásobné koncentrace, xxx xx titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx a xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx každé xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x jamky xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx jamky. Nechá xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx sérového xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx každé jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx menší xxx xxxxxxxxxxx XX x negativního kontrolního xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného vzorku, xxxxx hodnoty OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí), xxx xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx výrazné x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Pokud možno, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx injekční stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, přičemž xxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx nebo vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Musejí-li xxx xxxxxxxx x xxxxxxx vzorků xx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby nedošlo x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx by xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní rostliny xxxxxxxxxx xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. solanacearum použitím xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx provedený test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití citrátů +

Xxxx při 40 °X -

Růst v 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx viz Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx pozitivní, jestliže xxxx XX kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů se xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx v 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx xxx uchovány xxx teplotě - 16 až - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Opina xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, jestliže xx x kultury x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test FAP xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx pozitivní kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx použitím xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Živná xxxx pro xxxx xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx patří:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční PCR x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX a XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx analýzou XXXX (Xxxx xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx patogenity)

Jako závěrečné xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura xxxxxx xxx považována jako xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x suspenduje v xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx tlakem xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová violeť (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx než výše xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. solanacearum xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx by xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 minut a xxxxxxx se na 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako standardní xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace testů, xxx se zabránilo xxxxxxxxxx působení (xxxxxxx 2). Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx může být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x testech xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx na 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních kontrol xxx screeningové testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) na SMSA xxxxx půdě x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx buněčná xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx optické hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx je xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství X. solanacearum x xxxxxxxxxxx vzorcích by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x FISH testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx zjištěn v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx pufr se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx pro XX.

Xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx podíl xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx a zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

4.3. PBS-Tween

10xPBS 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a nastaví xx hodnota pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho pole xx xxxxxxx x xxxx okénky a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx bakterií (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX CCT GCC-3'

Reverzní xxxxxx Y-2: 5'-CCC XXX GCT XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx následující cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 minuty xxx 96 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Pastrika x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx g -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-CCC AGT XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX GAA TTG XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX ACC XXX XXX TGC XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx primerů XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx kontroly XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 minut při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), iii) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací z XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. solanacearum (Pastrik xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX ACG XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Bsm X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx proužkem x x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (pH 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx OLI2 5 ng/µl

Připraví se xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Pro xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje xxxxxxxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx a rajčete

Vysejí xx semena rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxx pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka dne, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx for determinative, xxxxxxxxxxxx and enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx sensitive Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, E. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Englebrecht, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Variation xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ofYseudomonas xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx medium and x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Methods xxx the diagnosis xx bacterial diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Cambra, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Delme xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx generated xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection of X. solanacearum in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Paul, Minnesota: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X rRNA sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx of Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Fegan, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx bacterium xx banana xxxxx xx 16S xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, J.J., Hagenaar, X., Nijhuis, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Xxxxxxxx, X., Feuillade, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Ralstonia solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Europe xx xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX and rep-PCR. Xx: Prior, X., Xxxxx, C. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Detection xx Ralstonia solanacearum xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum, which xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.