Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, která xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx šíření Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx bakteriální hnědé xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx výskytu a xxxxxx,

x) xxxxxxxx místo xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx.,

x) hostitelskými rostlinami -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u nichž xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxx území xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k určení xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx jejich části x xxxxxxxxx jiných xxxxxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx se za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx stejné xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x Xxxxx republiky x rozsahu xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze členských xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x všechny xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx zemí a xxxxxxxxxx xx třetích xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru²⁾ a xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin a xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx hniloby navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx k závlaze xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 písm. x) x x), odstavci 3 a v xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx skládek, x případě xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x řezu dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve skládkách, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, x případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 až 7, xxxxxx xxxxxx průzkumu x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx xxxx xxxxxx zavlečení původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x této činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, že vzorky xxxxx odebírány x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx fyzické osobě, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x produkci předchozího xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx dohledem způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Ústav x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 a xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, s xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x v xxxxxxx x §11 odst. 1 zákona

a) zakáže xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly odebrány xxxxxx, s výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx stupni odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx s cílem xxxxxx šíření předejít xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nad přesunem xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Při podezření xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod původem x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx tohoto xxxxxxxxx x bude x xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx hniloby, které xxxx xxx xxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Xxxxx vhodná xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 odst. 2 xxxxxx a x přihlédnutím x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx xxxxxx do xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, ze xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx těch, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) provede odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a možného xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx ze zařízení xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx lilkovitých z xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných vzorků xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx zamoření,

b) xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, z xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, za xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 písm. b), x xxxxx podrobnosti x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Podrobnosti x tomto xxxxxxxx xxxx důvěrné.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, stanoví xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově xxxxxxxxxx x partiím, které xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x každém xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, a xx v rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona:

a) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx sázena x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx naloží způsobem xxxxxxxx v xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx jsou splněny xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx na xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) zařízení, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x veškeré jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx označené xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx zničí xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx a bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 písm. x), xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx budou tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx nařízených xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xxxxx s registračním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných podle §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx splnění x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx je x souladu s §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x vědeckým, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx na xxx, musí být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v případech, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx klonová xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx všech partií xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Xxxxxxx č. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy popisují xxxxx postupy, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx xx podílely xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx příslušných xxxxxxxx vydaných Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x kalibraci xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx IF test xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxx médiu x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx příznaků je x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) nebo xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx morfologie xxxxxxx je v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v oddílu 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně xxxx screeningových xxxxx, x nichž xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx je Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek pouze xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x xxxx, xxx byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx použít x na menší xxxxx, jestliže 200 xxxx není x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Test imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, další xxxxxxxxxxxx protilátky xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx vhodná metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX média xxxx XXX-88 média a xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx během 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx opatrnou přípravu xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx sekundární bakterie, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx přerůst. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků - viz xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx zřídkakdy x často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx zamění x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx a zpočátku xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Mladé infikované xxxxx často x xxxx infekci nadále xxxxxx, x když xxxx x infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx často xxxx chlorotické, žluté xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou slabá xxxxxxxxxx xxxx průsvitnost xxxxxxx xxx měknutí x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře identifikovaným xxxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Vodivá pletiva xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx hlízách xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx a mohou xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx době se x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx xxxx hnije x prstencem svazků xxxxxxx, čímž dochází x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx maskovat x xxxx být obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 test. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx PCR xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx nožem xx xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí xxxxxxxxxx xxxx pletiva nezahrnující xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx po xxxxxxxxx hlízy na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx po xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x karanténě při xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z pupkové xxxxx xx shromáždí x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx jsou xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx saprofytů x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a odstraní xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µl xxx xxxxxxxxxx účely. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x vzorky Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx i xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx dezinfikovaného xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx každého xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x shromažďují x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx xxxx možné, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není nutná, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxxxxxxx xx skladuje s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 až -86 °X (měsíce), pokud xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx FISH. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX test používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx použití vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti xxxxx xxxx xx titru. Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx (xxx internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx xxxx 15 xxxxx při 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx není nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (viz 4.2).

Xxxxxxxx se oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vzorkových xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 okénky x xxxxxxx nejméně 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Pro xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx množstvím škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 xx je xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. a):

Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. X xxxxx xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx extraktu.

Pokud nejsou x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx se kapky xx xxxxx podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x pečlivě odstranit xxxxxxxxxxx vlhkost jemným xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem s xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při zvětšení 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx obarvené v xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx lepší. Xxxxx x neúplným xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx nelze brát x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, když xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx problémů xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru a xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x morfologií v xxxxx xxxx pracovním xxxxxx protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5x10³. Xxxxxx je xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl xxx xxxxx možno proveden x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx přes xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. v 50 µl 0,01 X XX a 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx a resuspenduje xx peleta x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x použitím 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) může xxx uložen při xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx stejné xxxxxxxx 0,01 M PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x fixují se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg lyzozymu (Xxxxx X-6876) v 10 xx pufru (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 mM XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po dobu 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje v xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °X xx xxxx alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx hybridizační roztok (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx dobu 5 minut při xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx na sklíčku / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx se přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X x temnu.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx vody (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x xxxxxx x 833 ml UPW). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xx XXX a položí xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx xxxxx x mikroskopem vhodným xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1 000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx fluoreskující buňky x morfologií charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx nebo xxx lepší než x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Existuje několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx mnohem xxxx xxxxx xxx u XX testu.

5.3.5. V xxxxx se xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Výsledky XXXX testu jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Výsledek FISH xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx se xxxx vždy zacházet xxxx x konečnými xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro extrakci xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ buněk na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vodě z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx použití XXX xxxxx je potřeba xxxxxxxxx extrakty z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX NaCl, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °C na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx lyzozymu xx 1 xx x 10 xX Xxxx HCl, pH 8,0) a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx xx promíchá xxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx chloroformu x xxxxx xx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx fáze xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x odstraní xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx zachová x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx vac.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (UPW) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx xx xxxxx použít, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx sterilní xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) po xxxx 30-45 minut, za xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx zdokumentuje.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx při optimální xxxxxxx x době x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x vzoru (pokud xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx nebyl xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR i xxxxxxxx reakce došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx mít podezření xx kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x jedné xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx xxxxxxx x extraktům ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx uchovávány v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podmínky.

Podrobnosti x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny ve xxxx 2-3 listů xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Každý xxxxxxxx xx horizontálně xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 cm délky). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx mezi xxxxxx a blok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fólie. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx xxxxx gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x nanese xx xx něj xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µl) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx to xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx podmínkách (dodatek 8) xx dobu xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx tak, xxx nedošlo x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx inkubovány blízko xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx nebo strakaté, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx období xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx používat xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx mohou xxxx xxxxxxxxxx populace xxxxxx bakterií nebo xxx přítomných v xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx carotovora xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Xxxxx exigua xxx. foveata, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx vadnutí lze xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx zvadlých listů xxxx stonků rostlin. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx x xxxxx x xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx identifikují a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx inkubační doby xx 4 týdnů. Xxxxx nejsou po 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx xxxx pozitivní, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, je xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci xxxxx x pelety xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Xxxxx izolace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx za xxxxxxx selektivního xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx všech hlíz xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx a z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx xx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo nebezpečí xxxxxxxxxxx, připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem jako xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, že xxxxxxxx xx obvykle x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx vzorku, x xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 na XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x kontrolními xxxxxxx x počítání všech xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, s xxxxxx počítáním po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx se měly xxxxxxx dříve, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. X subkultur xx rychlost růstu xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx okraji x obvykle xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx každý provedený xxxx známý referenční xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx xxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx po xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx musí provádět xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx srovnání xx xxxx xxxxxxxx x kultur z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Hydrolýza xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% NaCI -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x xxxxx na lF (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx xX postup (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx ve xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx teplotě 100 °C po xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné postupy XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx a xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx xxxxxx kultury x xxxxxxxxx kontroly.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx se vhodný xxxxxx XXX (Janse, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxxxxx s profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Xxxxxxx A, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx A xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx hodnota xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx být provedena xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované izolované xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx, nemůže xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace xx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx MTNA x YPGA, xxxxxxxx xx xx dobu. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx la Protection Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Laboratory	Dublin	Irsko
Plantenziektenkundige Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, že xx prosta X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx první xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří štítkem.

Připraví xx alikvotní xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus zjištěn x xxxxxxx v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních kontrol x nesmí být xxxxxxx v žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx sterilizované xxxxx lze skladovat xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Extrakční xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx PCR	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x výkrojků x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx pro XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx sklíček. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX a FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = c x S/s,

kde S = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx jamkami x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x subsp. sepedonicus

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, pocházejí xxxxxxx složky médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x ochlazení xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin B 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (obě 5 xx/xx) v 96 % metanolu, amphotericin X (Sigma) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní testování xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx xxx xxx tgg pa xx -3'

primer PSA-R 5'- xxx xxx xxx xxx tca xxx xxx c -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctg xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x xxxxxxx PCR kontroly 18X xXXX 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta při xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx viii) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), iv), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx charakteristickou xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Bgl XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (např. Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx water = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X NaOH x zamíchání magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx proužkem xx xxxxxxxxxxx pH x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx před prachem xxx teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx hybridizačního xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a sterilizuje xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx přepichují do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního substrátu.

Lilek xx xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka xxx, pokud je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Roztok krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 g

Jodid draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx se xx vody a xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, vysuší se xx xxxxxxx a xxxxxx se zahřátím.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx se Xxxxxxxxx xxxxxxx roztokem x xxxxx se působit xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx safraninovým roztokem x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx použít xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Corynebacterium sepedonicum xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual of xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, F., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx carbohydrates xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. The xxxxxxxxxxxxxx xx the EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) in xxxxxx. XXXX Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x K. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x semi-selective xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) in xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Chain Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx spacer xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. x X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Corynebacteria. Xxx. Cornell agric. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, A. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx automated real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory guide xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx to xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Wilkins Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, DE., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx V. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx working party. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. Xxxxxxxxxxxxx Journal of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Janse, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Ralslonia solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx životaschopných kultur X. solanacearum jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx a jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx označování a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedených xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx infekci X. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx proveden druhý xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru a xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Popis příznaků xx nachází v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx výtok slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx kultivací na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Dílčí xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx doporučuje xx pro každý xxxx případ.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx poznámka x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není dostačující x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx i xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogenu jsou xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový test. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx popsány x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xx třeba xxxxxxxx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx nevykazujících příznaky, xxxxxxx xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx alespoň jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X případě, xx xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx další xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x X. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x vrcholu xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx fázích vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx rostliny. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx je xxxxx xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx do xxxx xx x cévních xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx pupkový xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, ze kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx prýštit xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X pokročilejších fázích xx infekce rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá xxxxx xxxx důsledek vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších fázích xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxx rostliny xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) rostlina tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší počet xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat vodou xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx a X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °C nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx S. xxxxxx rostoucí u xxxxxxx xxxxxxxx bramboru xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx jako x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, mohou xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx vodou. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez stonku xxxxxxx xxxxxx xx xxxx, x to x při xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Použije xx jeden nebo xxxx následujících xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Jiné xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (viz oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence hlízy xxxxxxxx nebo x xxxxxxx vláken stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx živné xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, které xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Aviruletní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx testů xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku xxxx x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx desinfekční prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění patogenní XXX) x mycí xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx omezí na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx vyšetření takové xxxxx xx xxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Všechny naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx se uchovávají x chladu (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými xxxxxxxx xx měly být xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx anebo utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °C) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) homogenizují xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Pro každý xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x nádoby. Xxx xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx použít xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx dekantuje. Je-li xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální frakce xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x po xxxx 15 minut (xxxx 10 000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °C x xxxxxxxx se supernatant, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx resuspenduje x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx R. solanacearum, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx nedoporučuje.

Je-li nutná xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. solanacearum byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené vzorky. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx o počtu xx 200 stonkových xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 cm dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx nad xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx statisticky xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Detekce xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx celý rok x víceleté Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx spp. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx R. solanacearum xxxxxx 2/Xxxx 3 x kořenech a/nebo xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx bakteriální sliz). Xxxxxxxx díl stonku x xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx vysuší xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Není-li to xxxxx, uloží xx xxxxx stonků x xxxxxx nejdéle na 72 hodin xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování extraktu xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se rozdělí xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých kultur X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a identifikace X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx oddíle je xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, citlivost detekce x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. Z tohoto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx nichž dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxx hodnocení spolehlivosti x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto schéma xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx ze zpracování xxxxxxx a v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x různé xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x xxxxxxxx výskytu xxxxxxxx.

- Vzorky xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou přítomny.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx nejméně 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx rovněž xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx a xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx být provedena xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx dílčí xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (nebo 7000 x po dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx přes membránu (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µm) s xxxxxxxxx xxxxxxxx filtru x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx obsahují xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx u vzorků xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx uvedeny doporučené xxxxxxx vzorkování

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx selektivní xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

5.2. Xxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx x testování xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx tyto metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Ralstonia xxxxxxxxxxxx, které se xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x půdě xxxx xxxx xx xxxxx vzít x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx v polní xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx používanými pro xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx x hloubky 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx sběrných míst xx 120 x xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Před xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx detekci x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx charakteristická samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx zakápnou 1 % vodným roztokem xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Krátce se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx octové x xxxxx xx inkubovat 1 minutu xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 600x až 1000x x použitím xxxxxxxxx xxx olejovou nebo xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také se xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx světle, zda xxxx granule xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx všechna sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok a xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x kohoutku x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx do xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: safranin xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx opatření a xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx olejovou xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum s xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx buněk X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx z xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, např. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx částicemi. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (viz dodatek 3) xx postupuje podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) na xxxxxx testovacího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Pozoruje xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jemném míchání xx xxxx 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Xxxxxxx xxxxx xxxx přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx detekce touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Metoda je xxxx xxxxxxxxxx x xxx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx nově připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx před jejím xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x cílem zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx půdě XXXX xxxx mléčně bílé, xxxxxx, nepravidelné a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve středu x xxxxxxxxx pruhy xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx tomto médiu xxxxx xxxxxxxx kolonie X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx nebo xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx dlouhodobě xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Provede xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx postup lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx způsobem dojde x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx polyklonálních protilátek xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx vzorku do 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), který xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxx použit xxxxx xxxxx extraktu xx vzorku xx xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx výsledků obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx hlavního screeningového xxxxx xx doporučuje xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX jako hlavní x výsledek IF xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test XX xxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný zdroj xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx každou xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx nejvyšší ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx proveden xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xx vzorků. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx být ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx potřeba, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) by xx mělo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx množstvím xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének v xxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx při okolní xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx ve xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx boxu po xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. První xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x dvojnásobek xxxxx (2T).

ii) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x pufru IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý papír. Xxxxx testovací xxxxxx xx pokryje xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého extraktu.

Pokud xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx vlhkém papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx se pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx a xxxxx jako předtím (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx buněk xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x určeném xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií R. xxxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle oddílu 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx s typickou xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx IF. Jestliže xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum na 1 xx přidaný xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx optimalizační pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly PCR (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX by xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx laboranty x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x přenosu XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx pufru xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, do xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx DNA z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x mikrozkumavka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Mikrozkumavka se xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane homogenní.

8. Xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % etanolu (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se na xxxx xx xxxx 10 min.

11. Odstřeďuje xx xxx 15 000 x xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, zachová xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx sterilní XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx teplotě xxxxxxx 20 minut.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX se xxxxxxx xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx se xxxxx xxxxxx, pokud xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve sterilní xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, který xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx PCR (viz dodatek 6).

4. Přidají se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx PCR x xxxxx xx xxx xxxxx UM jako xxx xxx, který xxx použit xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, a xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx dobu 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x výsledek xx zdokumentuje.

4. X xxxxx nových nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx enzymem x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx kontroly. Spolehlivé xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx nebo xxxx xxxxxx negativních kontrol, xx podezření na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test x xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Když xx FISH test xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extrakty, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx uvedeno v dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x tomto xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx fixační roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx xxxxxx ve 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx stejné množství 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx další den. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) se xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x to xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 hodin x xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Připraví se 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix a 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx se inkubovat xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx vzorku inkubací xx dobu 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx Q water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx se zakryje xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, kde xxxxxx pozorovány žádné xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli kontaminaci xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx jestliže jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx problémů. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx na xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx méně xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx.

6. Interpretace výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x žádných negativních xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx ELISA Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx test kromě xxxxx IF, XXX xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, xxx může xx xxxxxx setkat x nezdarem xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určení xxxxx xxx každou xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného působeni x xxxxxx roztoku xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 A x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx se použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové xxxxxxxx xxxxx odděleny xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede týmž xxxxxxxx jako test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µl vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 minuty xx xxxxx lázni nebo xxxxxx xxxx xxxx x některých případech xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx do xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx teplotě 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx pomocí XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx xxxxxxxx roztok xx xxxxx x xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Připraví xx xxxxxx ředění protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním xxxxx (dodatek 4). X validovaných xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné koncentrace, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx a xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx se xxxxxx xxxx předtím (bod 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy v xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx inkubovat v xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx absorbance při 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá se 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx xxxxx destičce. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do xxxxx xxxxx x inkubuje xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx se xxxxxxx x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx menší xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se substrátem) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx z negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx lze očekávat xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx v teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx nebo kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. xxxxx xx xx plného xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx rajčat.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx testovací rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23X). Vzorek se xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx přidrží xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx příčný řez xxx 1 cm xxxxxx x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx vazelínou z xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Oddělí xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx rostlin, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Musejí-li xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx xxxxxx, protože by xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx stonků dlouhých 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x podezřením na X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx biotestu xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto xxxxxxx xxxxx izolovány x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx vesměs přítomny xxxx xxxxxx xxxxx x R. solanacearum, xxxxxxxx Lelliott x Xxxxx (1987), Klement xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního pigmentu -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx pozitivní, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx test ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx water).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx vodní xxxxx xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx al. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Opina xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Test FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx stejný jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX x absence 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Hayward, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx olivově xxxxxx xx žlutou a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu restrikčních xxxxxxxxx RFLP (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, XXX a XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; viz dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16S xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx test xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice se xxxxxxx xxxxxxxxx až 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x suspenduje x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx suspense xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx živné xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx získala xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (přibližně 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 mg/l

Poznámky:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx růst X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytů. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx a červené xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx médium (viz xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx se xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 g

NaNO₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx půdu XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál bud' x pozitivní xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně dostupné x lze xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx kultur xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní materiál

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 zdravých hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx serologických x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx vhodné jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu xxxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 mM fosfátovém xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se dřeň x pupkových konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx se. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx sterilních xxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a množství X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX test xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry lze xxxxxxxxx po xxxx xx jednoho roku.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Peletový xxxx (10 mM fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx extraktů x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro IF xxxx

Xxxx pro XX (10 xX fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx pro IF.

Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček na XX testy x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx nepřímého xxxxx ELISA

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podíl aromatických xxxxxxx, je možné xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx být čerstvě xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a koncentrovanou XXx se xxxxxx xX na 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx se dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Pufry xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 ml

Rozpustí se xxxxxx a zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x fosfátosolný xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Vypočítá se xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho pole xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 nebo 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované pelety x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CGT AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 minuty xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 minut xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Pastrika a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-agt cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc aca xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx směs PCR

Reagencie	Množství x reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 sekund při 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-CCC AGT XXX XXX XXX XXX T-3'

Přímý primer XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX GAA TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX TCA XXX ACC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: i) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 nebo Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Bsm X xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. solanacearum pomocí xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx acc ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx tcc xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx potřeby xx upraví xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Xxxxxxxxxxx xx roztok xxxx xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 nebo XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx před přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje pH x sterilizuje autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x rajčete xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx and D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Bacteriol. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Cambra, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Potato Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, J., Xxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx quantification xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Hayward (ed.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Research, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., El-Nashaar, H.M., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Fujii, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx specificity. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of pathogenicity xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx bacterial diseases xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (eds). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Stephens, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx genomic fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas pathovars xxx strains generated xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Stephens, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx strain-specific DNA xxxxxx xxx PCR xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). As Xxx. J. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx analysis and xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx region xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, xxx xxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, X. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and xxx xxxxx disease bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16S rRNA xxxx sequences. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Bonants, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, G.S., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Genetic xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Prior, P., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.