Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Předmět xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx unie¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, aby se

a) xxxxxxxxx výskytu x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx a

c) při xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx jejich xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx účely této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis et xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx a plodů, xxxxx potměchuť (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny z xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, k určení xxxxxxx xxxxxx infekce x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, zařízení, stroji, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx v xxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx které xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní xxxxxx; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují klonově xxxxxxxx partie, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx partie klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x rozsahu podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x rozsahu podle §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx členských států,

d) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označené xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Zjišťování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx dovážených ze xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx do třetích xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx brambor,

b) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx pěstování,

b) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxx doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxx xxxxxx x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx jeho xxxxxxx xxxxx zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx podezřelých z xxxxxxx x plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 písm. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 písm. x) x porostů xxxx ze skládek, x případě uvedeném x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx dužninou xxxx, x porostech xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx napadení původcem xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 5 písm. x) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx odběru xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Xxxxx xx základě uznávaných xxxxxxxxx x statistických xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 odst. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, pověřenou x této činnosti Xxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx této xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto partii xxxxxx xx trh xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 zákona jednou xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, a xx v případě xxxxxxxx v rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x ostatních případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x oddílu II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo pod xxxxx xxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 zákona x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ zajistí provedení xxxxxxxx laboratorního testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, s xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x výjimkou xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx opatření xxxxxxxx xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx dalšího možného xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx šíření předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx nad xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx spojených s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx i xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx nebezpečí zamoření xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, x případě xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx Xxxxx xxxxxxxxxx úřední xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x bude x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx výsledkům, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož byl xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx do xxxxx x uvedeným xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx místa produkce xxxxxx xxxx, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxx pěstebního substrátu, x xxxxxxx, na xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx zamořeným předmětem xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene a),

c) xxxxxx karanténní území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx rostliny z xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx by xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx rozsah zamoření,

b) xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxx vody xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx původem x Xxxxx republiky v xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x objekty, stanoví xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x partiím, které xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzné partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x případě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x), x) x x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v souladu x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se s xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx splněny xxxxxxxxx na zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x bodě 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x případě průmyslového xxxxxxxxxx této xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškeré jiné xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. b), xx buď xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 písm. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 a x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx mimořádná rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. x) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx riziko xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx České xxxxxxxxx x uváděný xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x nichž prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním uplynulém xxxxxxxxxx xxxx potvrzen x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x vyhlášce x. 331/2004 Sb.

A. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx se xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vydaných Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx administrativním x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo screeningových xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti.

Z xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx potvrzený druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje izolaci x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxxxxx a x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu z xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Pokud xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx být izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Xxxxxxx patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx kroužkovitosti ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx screeningových xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx další test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx vhodná xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx vhodná metoda xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média nebo XXX-88 xxxxx a xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx během 3-10 dní xx xxxxxxxxx na médium. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x které mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx kultivační metoda xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx provedena x rostlin použitých xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus z xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx selektivního obohacení x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovené xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx MTNA xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody extrakce x koncentrace xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx selhat x důvodů xxxxxxxxxx xxxx inhibice saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddílu 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen zřídkakdy x často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x příznaky xxxxxx xxxxxx, xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x zpočátku xxxxxxx na okraje xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx ucpáním xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx chlorotické, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Xxxxxxxxxx děložní xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky mohou xxxxxxxxxx xxxxxxx. Často xxxx xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou rostliny xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx tmavší xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx hlízy vystupují x cév sloupky xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx pletiva xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx x mohou xx xxxxxxxx šířit xx xxxx prstenec. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové xxxxx. X pokročilých stadiích xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxxx době se x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x druhotnému xxxxxxxxx xx xxxxxxx vnitřních xxxxx x nekrózy. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx maskovat a xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x atypické xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených zjišťovacích xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (s xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxx patogenní XXX) a xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Tento postup xxxx xx obzvlášť xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy. Opatrně xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx při xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx vzorku xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx jsou xxxxxx znovu používány, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx to xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx pufru, x xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx v mixéru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx učinit bezpečnostní xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Xxxxx je nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µm), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx rozvířila xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Použije xx 500 µx xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx solanacearurn x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx vířením x xxxxx xxx teplotě -16 xx -24°C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx transport xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx xxxxxxxx nutné, xxx se xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x vzorky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx předešlo kontaminaci. Xx platí x xxx xxxxxxx na XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Pokud xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny na xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 xx ze xxxxxx strany každého xxxxxx xxxxx nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx má trvat 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx xxxxx popisu x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 až -86 °X (xxxxxx), pokud xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, je pro xxxxxxxxx analýzy nutné xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, používá se xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx vzorku x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx stanoven jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální protilátky xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx titru xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. To xxxxx není xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx s jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X) by se xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - pro xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx jako duplikát xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle obrázku 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů protilátek.

V xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx boxu po xx možná xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x IF xxxxx. V první xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v ostatních xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátky x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx test xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) a xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Každé xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx extraktu.

Pokud nejsou x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx sklíčka xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou kontaminaci, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx a tato xx xxxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xxxxx sklíčko.

4.4. Vyhodnocení XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx obarvené x xxxxxxx titru protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je barevnost xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění protilátky xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx povrchu sklíček.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx protilátek podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x xxxxxx, xxx je xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x je pozitivní, xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 denní kultury (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx peleta v 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx použití se xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB a 50 µx 96 % etanolu. Promíchá xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx se xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °C) x xxxxxx se xxx plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx den. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx lyzozymu (Xxxxx L-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Tris-HCI, 50 mM EDTA, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx měl by xx pouze xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx sklíčka xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxx filtračním xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 xX Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx jamky x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx stupňovaných xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % etanolu xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká inkubační xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx plotnu xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / sklíčcích se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °C x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx vody (Ultra xxxx water = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 ml XXX). Xxxxx z nich xx přeinkubuje ve xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx x kádince s 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx se nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Vectashield, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Hodnocení XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny gramnegativních xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx neberou x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo okénka xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx FISH testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx stonku xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxx mnohem méně xxxxx xxx x XX testu.

5.3.5. V xxxxx xx berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace výsledku xxxxx FISH:

a) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutné xx další testování. Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. PCR xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných xx xxxxxx extraktů, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx dosažení maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x interní kontrolou.

Je xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX test by xxxx provádět zkušení xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx molekulární xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy zacházet xxxx x konečnými xxxxxx, xxx bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu ze xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x xxxx xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (příprava xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 ml Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Použijí xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx enzymatických xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx pufru (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se do xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x teplotě 95 °C xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx vloží xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx A (Invitrogen), xxxxx se promíchá xxxxxxxx x inkubuje xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 minut.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxx a vzorek xxxxx xxx stejnoměrně xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xx ledu po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g po xxxx 20 minut xxx 4 °C x xxxxxxxx xx x xxxxxx etanol.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x promíchá xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje se xx 15 000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -20 °X až xx upotřebení xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx vzorku XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx PCR mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA z xxxxxxx xxxxxx smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Použije xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx bromidu (0,5 xx xx x) po dobu 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným vzorkem).

PCR xxxx xx pozitivní, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx kontaminaci, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx x xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx médium xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx příznaků a xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny ve xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx se zajistilo xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené postupy xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou částí x rozměrech 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx a 15 xx xxxxx). Xxx každý testovaný xxxxxx se xxxx xxxxxx x blok xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx gumovým xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxx podélný xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x hluboký xxxxxxxxx xxxx xxx čtvrtiny xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Zářez xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x nanese xx do xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx rostliny lilku.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx dvěma prsty xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx skalpelu xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem xx xxxxx v xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx den xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako pozitivní xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx vhodných podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Rostliny se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx teplota xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx xxx pozitivní x negativní kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených policích, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx blízko xxxx, oddělí se xxxxxxxx přepážkami. Při xxxxxxx, xxxxxxxx, kontrole x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Pravidelně po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; čím xxxx trvá období xx objevení xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx odrůst. Mladé xxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora subsp. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Může xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx na xxxxx vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx použití částí xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx a xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (viz xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx stát, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx podle oddílu 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx pouze xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho izolovat x xxxxxx projevujících xxxxxxxx napadení.

Mohou jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx se xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx xxxxxxx nepodaří xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vysokých xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX médium nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx použití xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx porovnání x kontrolními xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxx po xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx a identifikace xx xx xxxx xxxxxxx dříve, než xxxx xxxxx příliš xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °C xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx žluté, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x rovnými xxxxxx x obvykle xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují xx xxxxxxx nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xx zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx následující fenotypícké xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Nutriční x fyziologické xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx inokula xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce nitrátů -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx lF postup (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, jestliže xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx mikrozkumavkách x ohřívacím xxxxx xxxx vřící xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx xxx potom uložit xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Pastrik x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx pozitivní, pokud xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Připraví xx suspenze přibližně 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx bakterie xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx inokulum xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na xx z 3-xxxxxxx xxxxxx testované xxxxxxxxx xxxxx x vhodného xxxxxxxxxxx kmene Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X při xxxxxxxxxxx xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxx nevykazují xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx růst xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx považována xx xxxxxxxxx formu Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx z rostlin x příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx rozetřením nebo xxxxxxxxx na XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx při xxxxxxx 21-23 °X x xxxxxxx se xxxxx kolonií typických xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Protection Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National de xx Xxxxxxxxxx Végétaux, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx de Xxxxxxxxxxx de Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX a xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx xxxxxxx prostřednictvím xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx se provedou xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µl xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím imunofluorescence.

Pro XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro IF x FISH testy xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x PCR xxxx xxx C. m. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí být xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x rostlinných tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx krycí xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Vypočítá xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x S/s,

kde S = xxxxxx xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová média

Živný xxxx (Xxxxxxxx agar = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx x minerálními solemi (Xxxxx extract mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 g
MgSO4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 média x autoklávu xxx 115 °C xx xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx jinak, pocházejí xxxxxxx xxxxxx xxxxx x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 g.

V xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: trimethoprim (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx sterilizované xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx 50 °X xx přidají xxxxxxxxxxx antibiotika: polymyxin X sulphate (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus xx 1 ml vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také nemělo xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x interní XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg pa xx -3'

primer XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx c -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx xxx xxx xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu x DNA C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx části xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx nutná nová xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky pro XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx viii) 5 xxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován pro xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx modelů xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx z XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 g

Ledová kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx gca xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µm x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Hybmix

NaCl 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx výpočtů x tabulce. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx je ochraňovat xxxx přímým slunečním xxxxxxx nebo elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Složky se xxxxxxxx, zkontroluje se xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx se 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid draselný 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx rozetřou xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx roztoku.

Postup xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x vysuší se xxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx přidávaného 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou a xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx dostupné roztoky xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx tubers. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Manual xx xxxxxxx for general xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx fermentative xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. The interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. EPPO Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x D. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) in xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX intergenic spacer xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx of three xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx polymerase xxxx reaction-based techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx host DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx bacteria xxx their xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx agric. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx tubers xx B1O-PCR xxx xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx detection xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Skerman, V. X. X., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Janse, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou součástí:

i) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx a xxxx,

xxx) identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x podrobnosti xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, je x dodatku 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx materiálů, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx chybám, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx pozitivní xxxxxxxxxxxx xxxx (test IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Jestliže xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a identifikaci xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných hostitelských xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx určen xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx živné půdě x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx nachází x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx usnadňují xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx vykazujícího příznaky xxxx popsány v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx negativní, xxxx xx izolace opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx provede pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika je xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx je popsán x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho screeningového xxxxx není xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Standardní xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx výsledky, ale xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx izolační xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x dalšími xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx podezřelých na X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo rostlin xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Metody xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx provedena izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, vyžaduje se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx testy xxxxxxxxx, považuje se xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy nejsou xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx listů směrem x vrcholu xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx je možné xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx do xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. V rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx podle láhvově xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, ze xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx od pupkového xxxxx hlízy x x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx listů. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx málo xxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx xxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx větší xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx stonku, xxxxx xxxx dokladem xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva bílý xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx inokula (např. x rostliny X. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx jsou příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx má xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, a to x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx mohou napomoci xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x infikovaného pletiva xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx buněčnou suspenzí X. solanacearum xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx virulentní izoláty X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, ploché, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx vzorku vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR test, xxx odstranění patogenní XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx v xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx test XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx hniloby xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx na řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx dobu nejméně 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx se xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) za řádných xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx třepačce (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) homogenizují xx dostatečným množství (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v mixéru (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx polyethylenový xxxxx Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx pomocí mixéru xxxxxxxx vysoké nebezpečí xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx xxxxx zamezit xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x sáčcích na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx zkumavek xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx omyje přídavkem (10 ml) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °C a xxxxxxxx se supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µx xxx X. solanacearum, 500 µl pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (x/x) x 500 µl xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx extraktu, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x vzorky X. solanacearum xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí pro xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx oddíl 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz oddíl 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx smíšené xxxxxx o xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx by xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx z předpěstírny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxx spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx dlouhý xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 vzorkovací xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx xxxx rok x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. nigrum, Xxxxxx xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx oleracea. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx stonku x příznaky se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx to xxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) na 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx pročišťování xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx rozdělí xx xxx xxxxxx xxxx. Jeden díl xx xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx skladuje x 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx další testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby ve xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddíle 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX jsou popsány x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ovlivní spolehlivost xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx k detekci xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxx vody a xxxxxx xxxx být xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx vody xx zpracování brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx liší x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxx x xxxxxxxxx vodě. Zatímco xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Vzhledem x tomu, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně k xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx a tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx vody do xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx vzorky xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x vzorkují xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 minut), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx v 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx obsahují xxxx počet saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx x příslušných xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x tomto oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx z xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx kalu xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x při xxxxxxx této metody xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx ploše 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 cm. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze zpracování xxxxxxx x kanalizace xx navzorkuje shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 a 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx ukázat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxx s xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx vlákna bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx protáhne xxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx modří nebo xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx zakápnou 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 minut při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx jasně xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx černí:

a) Zakápnou xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx B x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx olejovou imersí x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx vzorky použitím xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se x pozitivních vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije tato xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, xxxxxxx X. solanacearum xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx být xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, že xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

X xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxx jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků nejdříve xxxxxxxxxx její vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx vzorek (vzorky).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx pro xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx zkontroluje xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, nepravidelné x xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx rozvine růžově xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace podezřelých xxxxxx (xxx oddíl 6.2.) a xxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx postup xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů PCR xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx X. solanacearum x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx může dojít x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx saprofytů, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X obohacovacího xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje se 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °C v xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx inhibice xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx jakýmkoli xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu IF xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x výsledek IF xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použit xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx se xxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx je definován xxxx xxxxxxxx ředění, xxx kterém xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během xxxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx nutné, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x glycerolu. Glycerol xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x resuspenzí xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx v příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx řady xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx rezervní nebo xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx teplotě 60 °X), plamenem, 95 % etanolem xxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x pufru XX. Xxxxxxxx xxxxxx ovlivňuje xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx uspořádají na xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx testovací okénko xx pokryje kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx protilátek, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx pečlivě xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx v xxxxx IF. Xx xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx množství použité xxxxxxxxxx.

5. Sklíčka xx xxxxxxxx zakrytá na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x kolem xxxxxx. X vzorků s xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Pokud je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx test IF xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy PCR

Principy

Použije-li xx xxxx XXX xxxx xxxxxx screeningový xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, musí xxx povinně xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx, x sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx PCR použita xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 ml přidaný xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako negativní. Xxxxxxxx maximální citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly PCR (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x zabránění kontaminace xxxxxx cílovou XXX. Xxxx XXX by xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx biologii, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA ze xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx PCR použít xxxx XXX extrahovanou x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx se zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x pozitivní x xxxxxxxxx kontrole, které xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx k dispozici xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými metodami XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX NaCI, 10 xX Tris-HCI (pH 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx na 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX TrisHCl, xX 8,0) a xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx roztoku Easy XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx třepáním, pokud xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx stane homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °C), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx po dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x xx xxxx 20 minut xxx xxxxxxx 4 °C x odstraní xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) a promíchá xx překlápěním xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx DNeasy Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µl XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. PCR mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se vhodně xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Amplikony xx xxxxxxx elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX z každého xxxxxx x 3 µx nanášecího pufru (dodatek 6) do 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx nových nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický pro X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx není xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže je xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx očekávaný xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako první xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX test a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX test xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx test a xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk X xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 až - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, jak xx uvedeno x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol vychází x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Napipetuje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá xx stejné množství 0,01 PB (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx nad plamenem.

V xxxx xxxx xx xxxxx postup xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °X po xxxx nejméně 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx každém xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 a 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Přiloží se xxxxx sklíčka (24 x 24 xx) xx první a xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx při xxxxxxx 45 °C v xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 l 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Spláchne se xxxxxxxx vzorku inkubací xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx krátce xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, USA xxxx xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, kde xxxxxx pozorovány žádné xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx testu XXXX x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx u xxxxxx x bramborových xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx morfologií x xx křížové xxxxxx se saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx pozorovány xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Nutné je xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx IF, XXX xxxx XXXX xxx xxxx relativně xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, ale může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx vzorku.

Poznámka:

Použije se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspense obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx druhotných xxxxxxxxx protilátek xxxxx xxxxxxxxxx výrobce. Při xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx otestován xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze xxxxxxxx xxx vzájemného působeni x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. kmen XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Pro srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x PBS R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové destičce xxxxx odděleny xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Nepřímý xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µl xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx xxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx se 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx nechá v xxxxx nejméně 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx každé jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá se 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou x XXX. Xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky se xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx p-NPP/ml xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx při 405 xx se odečítá x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx je menší xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx než 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx se substrátem) x jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx z negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, jestliže xxxxxxxx hodnoty XX x xxxxx xx xxxxxxx vzorkem jsou xxxxx než dvojnásobek XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx hodnoty XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní hodnoty XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x negativních kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx k vzájemné xxxxxxxxxxx nebo nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx ze vzorku, xxxxx byl předtím xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (přípravu viz x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx lze však xxxx xxxxxxx použít xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx v teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx citlivé xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou citlivostí xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx u xxxxx xxxx xxxx výrazné x vyvíjejí xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx děložními xxxxx pomocí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx prsty x xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, přičemž řez xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 xx, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx vzorek, x xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx relativní xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx oddělených místech xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Musejí-li xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, oddělí xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxx bez hmyzích xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx xxxxxx dlouhých 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx mohou být x těchto rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití citrátů +

Xxxx při 40 °X -

Xxxx v 1% NaCl +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Média x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx IF xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Test ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Pastrik xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx profil podezřelé xxxxxxx stejný jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x absence 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím jedné x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxx případně xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx využití a/nebo xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx úspěšně provést xxxxxxxxx xx živné xxxx x čistou xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx primerů XXX, XXX x XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx et xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno analýzou XXXX (Cook et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx et al., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx lilku xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx mělo xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx považována jako xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Hledají xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xx stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx se rozmělní x suspenduje x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX fosfátového xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacím xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Dodatek 2

x) Xxxxx xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se složky x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové médium

kasein xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v autoklávu xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxxx živná xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx xxxxxxx stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Signa B-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Agar #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může to xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx a rozptýlenější xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X v xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx podrobena xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 až 5 dnech při xxxxxxx 28 °X xxxxxx typické kolonie.

c) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Provede xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x pozitivní xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx optimalizace testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx kultur sekce xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, že xxxxxxxxx x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ až 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx vhodné jako xxxxxxxxx v testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x negativních kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/biovaru 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx v 10 mM fosfátovém xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Obvykle xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx optické hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx se xx, xx xx prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x protřepe xx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx řádně označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 N1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 až - 24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. solanacearum v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx každou sérii xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x FISH testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. solanacearum xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx pufry lze xxxxxxxxx xx dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx se používá xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx podložních sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr xx používá jako xxxxx xxxxxx na xxxxxx sklíček na XX testy k xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je možné xxxx antioxidant xxxxxx xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 ml

Rozpustí xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Doplní xx do 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 mg tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 koncentrovanou XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho pole xx xxxxxxx s xxxx okénky a

s - plocha pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 nebo 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (N).

N =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx II xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx gtc xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx BRL. Poznámka: Původně optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 bp x 96 xx.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX TGT XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x enzymem Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Rs-1-F: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Před xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx nebo NaOH. [XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při teplotě 4 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí se xx x, podle xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 nebo XXX2 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx děložními xxxxxx (10 až 14 dní) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x rajčete xx xx měly pěstovat xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Beauty"

Vhodná xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/EC xx 20 Xxxx 1998 xx xxx control xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Roux, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European isolates. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Cambra, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X and Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Monoclonal Xxxxxxxx xxx sensitive Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Asymptomatic Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx restriction xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. and Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Englebrecht, X.X. (1994) Modification of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Australian Xxxxxx for huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., X. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX technique. X. Phytopathololry 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and some xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Publications Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. In: X.X. Delme xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Stephens, X.X. and Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Holloway, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx and PCR xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (fornierly Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Mol. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Journal of Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Forde, X.X.X. (1995) Production xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Agricultural Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 pp.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by partial 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and the xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Nijhuis, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx in sihl xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx probes. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.