Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 odst. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx al. subsp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo místo xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx jejich šíření x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx opatření s xxxxx jejich eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Xxxxx xx xx. sepedonicus (Spieckermann xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx bramboru, x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) kromě xxxxx x xxxxx, xxxxx potměchuť (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx rostliny x xxxxxx lilkovitých (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x přirozených podmínkách,

d) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x určení xxxxxx xxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx jejich xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - výskyt xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx které se xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx bezprostředně xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Ústav xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx x České xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru určené x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx podniků, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx produkce, xxxxx xxxx partie xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby se xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx x odstavci 2 písm. x) x x), odstavci 3 x v xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxx xxxxxxxx xxxx, v porostech xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků hlíz xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin s xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx partie x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x způsob předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x přihlédnutím x xxxxxxxx xxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx vzorky xxxxxx xxxxxxxx anebo xxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x této xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx xx trh xxxx xx pěstuje xxxx pěstovala.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 předkládá Xxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx srovnatelné úrovně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, a xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x produkci xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Ústavem ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X číslo 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto podezření xxxxxxxx nebo vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx neodkladně xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 zákona xx účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx výskytu x x souladu x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx opatření pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx s xxxxx xxxxxx šíření xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx přesunu xxxx xxxxxxxxx úředního xxxxxxx nad přesunem xxxxx ostatních partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx i xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx hostitelských rostlin xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného členského xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti týkající xx xxxxxx podezření x xxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx mít xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx může Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Xxxxx x xxxxxxx x §76 odst. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx a xxxxxxxxxxxx zpracování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx objekty xxxxxx xxxxxxxxx materiálu, x něhož xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl vzorek xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx úplná xxxxxx xxxxxxxxxx substrátu, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede odborné xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx základě klonové xxxxxxxxxxx, pěstování, zavlažování x zalévání xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, označeným xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x možného xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx zpracování x xxxxxx xxxxxxx x x ohledem na xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx brambor, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x čeledi xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, z xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx podle písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx x jeho xxxxxxx rozšíření podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx oznámí xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 písm. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx příbuzných x xxxxxxx, xxxxx xxxx označeny za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx ke stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx rizika xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx předměty x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v souladu x §11 odst. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx za zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) smí xxx použita xxx xxxxxxxx Ústavu xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, pokud Ústav xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x že xxxx xxxxxxx požadavky xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně obalového xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx buď zničí xxxx podrobí xxxxxx x dezinfekci xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, že po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x karanténním xxxxx a bezpečnostní xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx o těchto xxxxxxxxxx a o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 písm. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, musí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx byl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx tuto xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech partií xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx jejího xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx a xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajistit xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x kalibraci zařízení, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx od testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování a x dokumentaci.

Podezření x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx být proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Pokud je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx bramboru x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogenu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx médiu x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- PCR test (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x typickými příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které rostou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Pozitivní xxxxxxxx x nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx umožní xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx v mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx xxxxxx během 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx médiu x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktů xxxxxx xxxxxxxxxxxx obohacení x rostlinách lilku xxxxxxxxxxxx (Solanum melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx MTNA nebo XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx z blízkosti xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxxxx xxxxx popsaných v xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx velikosti vzorků - xxx oddíl 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx test pozitivní, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v oddílu 8.

(5) IF xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx jedná x Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx jen zřídkakdy x často xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx xxxxxx x příznaky jiných xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx je obvykle xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Mladé infikované xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, x když xxxx v infikovaných xxxxxxx je omezený. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx spodní xxxxx xxxxxx často xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx oranžové mezižeberní xxxxxx. Infikované děložní xxxxxx, listy x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx listy a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků jsou xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx měknutí x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xxx nepatrně tmavší xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře identifikovaným xxxxxxxxx je žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx a xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx v xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx blízko xxxxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx prstenec. X postupem infekce xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx oddělit xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx být xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz na 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Níže popsaný xxxxxxxxxx extrakt lze xxxxxx xxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, jestliže xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx xxxxxx zeminy x jestliže se xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx konců xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x pupkových xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X po xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx vizuální xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx teplotě x xxxxxxxxxx se x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku xx xxxxxxxxxx podle přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se shromáždí x nepoužitých nádobách xx jedno použití, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x pupkového xxxxx se zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) výkrojky xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x třepají xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) po xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °C xxxx xx dobu 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx za xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx x sáčcích xx xxxxx použití x použití zkumavky xx xxxxx použití.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°X a odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje se xxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx pro xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a 500 µl pro xxxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou xxxxxxxxxxx 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x xx xxxxxxxxx xxxxx vzorku, promíchá xx vířením x xxxxx xxx teplotě -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxx odděleně, xxx xx předešlo xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx populace, která xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx přímo xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx sterilní xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx stonků xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části se xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx gumového xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx není možné, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx ji xxxxxxxxx filtrací x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx použít xX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx xxxxxxxx xxxx hlavní vyšetřovací xxxx, xxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxx protilátka. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Doporučuje xx xxxxxxx xxxx xxx každou xxxxx xxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX titr alespoň 1:2000. Xxxxx testu xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat v xxxxxxxxx ředěni (XX) x blízkosti xxxxx xxxx xx titru. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 až - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx se vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X) xx xx xxxx xxxxx možnosti xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx test se xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx s relativně xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx o průměru 6 mm je xxxxxx 15 µl - pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx resuspendované bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x řadě. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší se xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx na xxxxxxx xxx zahřátím (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % etanolu xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx fixovaná xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx boxu xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx x XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x IF pufru. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx test xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od dodavatele xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx všech xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx v pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx FITC, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx průměrech a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxx musí být xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx být xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx kmenem ve xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Berou xx x xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx u xxxxxx, kde je xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX testu xx xxxxxxxxx pro xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx FISH

PRINCIP

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový test xxxxxxxx XX test. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující postup xx měl být xxxxx možno proveden x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx suspenze obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx (např. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 denní xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se přes xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX a 50 µx 96 % xxxxxxx. Promíchá xx protřepáním x xxxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx se 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx obrázek 3, přičemž xx xxxxxxx 2 různé xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx odstředěním, přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 X PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla být xxxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 mg lyzozymu (Xxxxx X-6876) v 10 ml xxxxx (100 xX Tris-HCI, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Každý vzorek xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 mM Tris-HCl, 2 xX CaCl₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx se xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °C xx dobu alespoň 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut při xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx na sklíčku / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) tak, aby xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx komory a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °C x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx water = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a podložní xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do promývacího xxxxxxx 1/2 hybmix x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do XXX x položí xx filtrační papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx ihned x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx a kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x morfologií charakteristickou xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může stát, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx FISH xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí stonku xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx FISH:

a) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru nejsou xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden XX xxxx. Xxxxx xx XXX test xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx rozsahu jako xxxxxxxx screeningového testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx extraktů, které xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX a XXX) by se xxxx vždy zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných pelet, x xxxx byl xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx použití PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jsou k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx x validovanou xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM NaCl, 10 xX Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče do xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl chloroformu x xxxxx se xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Odstřeďuje se xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Přidá xx 1 ml 100 % xxxxxxx (-20 °C), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 minut xxx 4 °X x xxxxxxxx se x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°C, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Peleta xx resuspendujte x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Skladuje xx při xxxxxxx -20 °X až xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX xx xxxxxxx 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX by xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx zveřejněného xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x xxxxx se xxxxxx sterilní voda XXX, xxxxx byla xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxx optimalizovaný xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx vzorku smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Trisacetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx na x) po xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx ve zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x době x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx vzor xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX prosvícením po xxxxxxxx ethidiumbromidem a xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace výsledku XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn v xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx opakováním xxxxx x xxxxxx sadou XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx vícenásobných xxxxxxxxxxx XXX x interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Test xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx kolonie xx 1 xx přidaný x xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx s negativním (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx i xx extrakty, které xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx příznaků a xxxxxxxxx také vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být vytvořeny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x níže uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, bude xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx horizontálně xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx je vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x vyhloubenou částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx děložními xxxxxx x prvním xxxxxx listem xxxxxxx xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x hluboký přibližně xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx otevřený xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a nanese xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx linky nebo xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx mezi všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se překryje xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý list xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx se xxxxx v místě xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) se xxxxxxxx lilku xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx děložními lístky xxxxxx injekční stříkačky x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx než 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x kde xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po inokulaci xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx v karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 týdnů xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za dostatečného xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx kvůli nedostatku xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx na xxxxx oddělených policích, xxxxx při nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx manipulaci xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, aby xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx dnech se xxxxxxxxx xxxxxxxx vykazující xxxxxxxx. Původce kroužkovitosti xxxxxx x lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx před znekrotizováním xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx trvá období xx objevení xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx mnohem citlivější xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx rostliny, proto xx nezbytné používat xxxxxxxx ve xxxx xxx listů x xxxx xxxxxx xxxx xx. Vadnutí mohou xxxx způsobovat populace xxxxxx bakterií nebo xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z pletiv xxxxx. Patří x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, jakož x velké koncentrace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Může xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx se na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx izolace xx použití xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů a xxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % etanolem. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx PCR xx xxxxx x xxxxx x izoluje xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (viz xxxxx 8). Může xx xxxx připravit Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx optimální, xx xxxx stát, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx doby xx 4 xxxxx. Xxxxx nejsou xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx test XX/XXX xx složeném vzorku xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) médiích xxxxxxxx xxxxx oddílu 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx původce xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx hlízy xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, ale u xxxxx xxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx třeba xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx xx xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. lzolace x xxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xx obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx saprofytů. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx patogen zůstává. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky se xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Počáteční xxxxxxxx xxxxx zahrnuje porovnání x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx po xxxxx dnech, s xxxxxx počítáním po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x identifikace xx xx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový agar,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx kroužkovitosti xxxxx pomalu a xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické kolonie xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití nejméně xxxx xxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se zahrne xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx dnech by xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx růstu, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx živného xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx x kultur x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze přibližně 10⁶ buněk/ml v xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF postup (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx vodě (UPW)

b) Xxxxxxx se 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx vřící vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx xx může xxxx xxxxx xxxxxxxx přidáním xxxxxxx připraveného NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx velikosti x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx FISH je xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx reakce kultury x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Kultura se xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

c) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx x profilem xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml v XXX.

x) Provede xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx izolované xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, aby xxxxxxx x přemokření xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx nastat typické xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, ale xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx příznaky xxxxxxx nevyskytují, nemůže xxx kultura xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 cm xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na MTNA x YPGA, inkubuje xx po xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx kolonií xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx für Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Agricultural Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Végétaux, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx testy XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 hodinová xxxxxxx virulentního xxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx dosáhne prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx prosta C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx s 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. xxxxx. sepedonicus xx první rnikrozkumavky. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost x xxxxxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí být xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx dobu až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 mM fosfátový xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 g

KH₂PO₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx odpěňovač	Odpěňovací xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx použití xxx extrakci homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx do pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 mM fosfátový xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Vector Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Stanovení koncentrace xX x FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (c).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = C x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro izolaci x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 X xx dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % metanolu, amphotericin X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Difco)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: polymyxin X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx zásobních xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% etanolu, xxxxxxxxx X sulphate x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 xxxxx při xxxxxxxxxx v chladu xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac xxx xxx xxx tca xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx ggt xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt tca xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx amplikonu z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (UPW)	15,725 μl
10x XXX xxxx (1) (15 mM MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x TP (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace primerů XX-7-X x NS-8-R xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx nová xxxxxxxxxxxx koncentraci činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °C (prodlužování xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Research XXX 200. Při xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), xx) a xxx).

1.4. Analýzy ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx charakteristickou xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx teplotě 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Cms XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx ggc xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE TOXICKÝ! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xX a x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx x xxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití je xxxxx xx ochraňovat xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) se xxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxx substrátu. Semenáčky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 ml 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 g xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx voda 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x uloží xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx a xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx violeti x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se omyje xxx xxxxxxx vodou.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx roztokem x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx detection xxx xxxxxxxxx of xxx ring xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Bradbury, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. The xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx light microscopy. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, R. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx taxonomic xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx XX xxxxxx for the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. EPPO Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Identification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Akadémiai Xxxxx, Budapest, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, R. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. appl. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. A. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., W. a X., X. Hanus, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX sequences xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by polymerase xxxx xxxxxxxx-xxxxx techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, C. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, D. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx tubers xx X1X-XXX and xx automated real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx identification xx xxx genera of xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx sequence-derived XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx identification xx xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofPlantPathology, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. xxx X. X. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx in xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx working party. Xxxxxxx van Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Beuningen, X. X.; Xxxxx, X. X. a X. X. L. Xxxxxxxxx, 1998. Detection xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx brown xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx hybridization with 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, schválená xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x za podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx provedených xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v níže xxxxxxxxx postupových diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx IF, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je podezření xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru a xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu nebo xxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxx živné xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Popis xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Test xx výtok slizu xx xxxxxx cévních xxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx nebo extraktech xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx infekce typické, xxx xxxxxxxx test xx negativní, musí xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx popsán x bodu 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx ke zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), z xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx kolonií, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx výsledek pouze x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx umožnit xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx k xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx nebo další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých xx X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v oddíle 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích rostlin xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx alespoň xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, je xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Testy PCR xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx se jedná x X. solanacearum, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů směrem x vrcholu xxxxxxxx xxx vysokých teplotách xxxxx xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx x zotavení. X xxxxxx fázích vadnutí xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x ohýbání xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x xxxxxxxx rostliny. X cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx rostlin obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx je možné xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx vody xx z xxxxxxx xxxxxx táhnou vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx u xxxxxxxxx konce x xxxxxxx přes pupkový xxxxx. V rané xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle xxxxxxx zabarvení cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika minutách xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x odumření xx může rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx od pupkového xxxxx hlízy a x oček xxxx xxxxxxx bakteriální xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx částice půdy. Xx slupce xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx nasycené xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx jedné xxxxxx rostliny xxxx xxxx rostliny, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, ale na xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx stonku, které xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědě xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx nažloutlý xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx hostitelů

Rostliny Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně vysoká xxxxxxxxxxx inokula (např. x rostliny S. xxxxxx xxxxxxxx u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx částí xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx tvořit xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx řez stonku xxxxxxx svisle xx xxxx, x xx x při absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx test XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence hlízy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 il suspenze x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. SMSA, viz dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx se případně xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx xxx xxxxxxx 28°C.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx krémově xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx média a xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx kruhové xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx bramboru xxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx až 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx množení xxxxx populací X. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx je xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx test XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx xxx bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Množství pletiva xxxxxxxxxxxx cévní svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou x xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx zjištěny příznaky xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, provede xx xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx nejméně 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) za xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx včetně hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxx do nepoužitých xxxxx na xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to xxxxx, uchovávají se x nádobě xxx xxxxxxx pufru; v xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Waring nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx sterilované xxxx (xxxxx) a nádoby. Xxx testu XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx nebo v xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx drcení x xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x po dobu 10 xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) při teplotě 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by se xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. solanacearum, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx zbývající xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx nezbytně nutné, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx a vzorky X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlinné xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx dlouhé xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx odebere kousek xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nad spojením x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx 1-2 cm xxxx ze stonku xxx xxxxx nebo xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x podzimu, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx celý xxx x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx hostitelské xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx rostliny rodu Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x kořenech x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Xxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx scleratus, Xxxxxxx spp, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx a Urtica xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx bakteriální sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x xxxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují části xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při teplotě xx 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) se xxxxx xxxxxxxx drcením v xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Není-li to xxxxx, uloží xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx zahušťování xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale xxx xx provést filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx testuje při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce) pro xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx oddíl 6.1.6.)

Test XXXX (viz oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x doporučuje xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího testu XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat x důvodu xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxxx xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle je xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx vody a xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Citlivost xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx uvedené xxxxxx xxxxxxxxxxx detekci asi 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní vodě xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx nějakého xxxxxxxxx postupu (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx nichž dojde xx snížení xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx mělo být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx v odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění R. xxxxxxxxxxxx v povrchové xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x období pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx vzorkování x různé době xxxxx xxxx uvedených xxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke značnému xxxxxxx x tím x zastření výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx odeberou xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx vzorkování odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a odpadní xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, z xxxxx xxxxx bude xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 km xxxxxxx xxxx a vzorkují xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4-10 °C, slije xx kapalina xxx xxxxxxxxxx a resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x půdě

5.1. Postupový xxxxxxx pro detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx jsou popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx populace xx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx selektivní xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx popsané x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx rovněž xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx kalu x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx xxxxxx xxxxxx dostatečně xxxxxxx, xxx zaručovaly xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které xx xxxxx vyskytovat v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxx sledování, xxx není xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx této metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx hlístů. Na xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 x xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Před xxxxxxxxxx xx každý vzorek xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx nebo xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Xx-xx třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne se xxxxxx právě xxx xxxxxx země. Řez xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx vodou. Sleduje xx, xxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx charakteristická xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx xxxx YPGA xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxx fixovaly.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx modří nebo xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test nilskou xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx modři x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °C.

b) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx se inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx obarvený roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx se zvětšením 600x až 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx olejovou xxxx xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, zda se xxxxxx xx PHB xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, zda xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx je xxxxxxxxxx buněk typická xxx R. solanacearum.

Test xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx B x 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx inkubovat xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx nebo v xxxxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx použije xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx test x zajištění xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do extraktů xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxx růst xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Dále, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx jiného testu.

Pří xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxx touto xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx x xxx extrakty, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by měla xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx k rutinnímu xxxxxxxxx vzorků nejdříve xxxxxxxxxx její vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx vzorek (xxxxxx).

1. Xxxxxxx se ředění x cílem xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µl xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky se xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx a pak xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx po 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum na xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx růžově xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie.

3. Předpokládané xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx universální živnou xxxx., aby se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx identifikace podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, jestliže po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že nedošlo x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxx xx selektivní média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx médium xxx xxxxxxxxx, např. xxxxxxxxxxxx xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx vzorků x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx zředění xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx být xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

1. X obohacovacího testu XXX xx xxxxxxx 100 ul extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx baněk. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxx (např. 100 xx v 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx při xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo XXX xx obsah xxxxx promíchá.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xx xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, lze docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx hlavního screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxx test xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx pro xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém dojde x optimální reakci xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x použitím xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx polyklonální xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx blízkých xxxx stejných xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx být ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x resuspenzí ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx v pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx při teplotě - 16 xx 24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, pokud xxxxx s 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx test vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx množství xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované bramborové xxxxxx v ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx druhý vzorek, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx vhodné pro xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší se xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx nebo zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), plamenem, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx konkrétních xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx je potřeba, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx by xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x pufru IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx savý xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Množství xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx papíře xxxxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx ponořením xx dobu 5 xxxxx x pufru XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, které xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx sklíčka. Xxxxxxx xx opláchne x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x filtry vhodnými xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumají xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx jasně fluoreskující x zcela xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxx odchylná, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx imunofluorescenčního xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části bramboru x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním ředění xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Při xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx screeningový xxxx, x xxxx izolace xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX použita xxxx xxxxx screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x celém xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená xxxxxxx x protokoly PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx třeba xxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím testován xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní části xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx byla přidána X. xxxxxxxxxxxx (přípravu xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx PCR použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci, připravují xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx možno xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx použít xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k dispozici xxxxx metody xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými v dodatku. 6.

x) Metoda podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Tris-HCI (xX 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá třepáním x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x směs xx xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní se xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx a odstraní xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx uschnout xx xxxxxxx nebo v XXX xxxxxxx.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxx x 100 µl sterilní XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx test XXX.

x) Xxxx metody

Jiné xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x kontroly pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX v xxxxxxxxx, ve xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx podle xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX jako xxx ten, xxxxx xxx použit xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Analýza xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (w/v) agarózového xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se vhodný XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx dobu 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx zdokumentuje.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje pravost xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x čase xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx u xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx produkt PCR xxxxxxxxx velikosti musí xxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx také získat xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x interními xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test FISH

Princip

Když xx jako první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx pozitivní, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo XX xxxx. Když xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na ml xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx měl xxx xxxxx možno xxxxxxxx s čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 xx - 24 °C xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 ml X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (PB) ze 3-5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x tomto xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx se xx dobu 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a rozpustí xx peleta xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, odstraní xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx v 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, jak ukazuje xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo x sušičce xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx fázi je xxxxx xxxxxx přerušit x pokračovat x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx prachem x x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx dna vzduchotěsného xxxx tkaninou nebo xxxxxxxxxx papírem nasáklým xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx každém sklíčku, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Přiloží se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx první x xxxxxxxx 4 okénka, x xx xxx, xxx pod xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x hybmix x 958 xx vody x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx v kádince x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X xxxxx) x xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do každého xxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx buněčná xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxx málo xxxxx, xx pozoruje nejméně 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Při xxxxxxxxx xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. To xxxx xxxxxx v xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx buňky x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx okénka xxxxxxx) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx testu FISH x sebou xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, že u xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx a pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx dojde x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnými R. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, pokud xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx resuspendované pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx obsahují méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH testu xx xxxxxxxxx, pokud xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx FISH xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX ELISA je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx testu XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, ale xxxx xx rovněž xxxxxx x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Doporučuje xx určení xxxxx xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx komerční formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx bakterií xxx vzájemného působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x příměsí 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx mikrotitrové destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °C xx 4 xxxxxx ve xxxxx lázni xxxx xxxxxx xxxx může x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx se xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx mikrotitrační xxxxxxxx (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx nechá x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U validovaných xxxxxxxxxx protilátek xx xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x jamky xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx jamky. Nechá xx inkubovat x xxxxx při pokojové xxxxxxx a odečítá xx absorbance při 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C po xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xx nejméně dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se inkubovat 16 hodin při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek X. solanacearum v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), přidá se 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx stát 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Jamky xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví se xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Jamky se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 mg p-NPP/ml xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx do každé xxxxx a inkubuje xx x temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx se stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativního xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů.

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x jamek xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx dvojnásobek xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx test nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx protilátek.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx přidaný xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx uchovány x xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx třech xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx vzorku. Podrobnosti xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx kultivary s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23X). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Inokulace zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem xx xxxxx příčný xxx xxx 1 cm xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 tloušťky xxxxxx, přičemž řez xx xxxxx v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx jako pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx nechají růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx se xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx činnostech xx xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, protože xx xxxxx přenést bakterie xxxx vzorky.

Hledají xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kultury x podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické příznaky, xxxxxxxx mohou xxx x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxxxx bakteriemi R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny xxx xxxxx provedený xxxx (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx se následující xxxxxxxxxx vlastnosti, které xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx naopak chybí x R. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx al. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx PHB +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx při 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Test IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx antiséra.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Test IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx x této xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx sterilní xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx zkumavkách x xxxxxxxxx bloku nebo xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx být uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx specifických xxx X. solanacearum (xxxx. Xxxx et al. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx pozitivní, xxxxxxxx xx u kultury x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx nový xxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx testu xx zahrnou případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Hayward et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do živné xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná xxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx olivově xxxxxx xx žlutou x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x využitím xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx definováno xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx inokulum x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx lilku ve xxxx 3 pravých xxxxx (viz odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx relativní xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx zamokření nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, kultura nemůže xxx považována xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze stonku xxx 2 cm xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx při teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 5,0 g

D(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx se xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °C x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx živné půdy

Živná xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx získala stanovená xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx omezit růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx xxxx použitím xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx kontrole xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (viz xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx při xxxxxxx 28 °C xxxxxx typické xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, xxx xxxxxxx se Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso et xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx se tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut a xxxxxxx xx xx 50 °X. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Komerční standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx působení (tabulka 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx je xxxxxx z xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx York, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx patogenních bakterií xxxxxxx (CFBP), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených xxxxx xxxx být xxxxxxxx pouze x xxxxxxx, že pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Referenční xxxxx XXX sérologicky xxxx geneticky xxxxxxxxxx xxxxxxxx k optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx pelety bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, nejsou xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx na 1 xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x FISH

Kultivuje se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk tvořících xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx hustotě 0,15 při 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x pupkových konců 200 xxxx x xxxxxxxx odrůdy s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xx, xx xx prosta X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x protřepe xx. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Čtyři nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx části x 100 N1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH xxxxx xx xxxxxxx test xxxxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x nejméně x 10⁶ a 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po dobu xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx pro xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx tkání homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx bramborových xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx xxx IF (10 mM xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x sterilizuje x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx podložních xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx roztok xx xxxxxx sklíček xx XX testy k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) nebo Xxxxxxxxx® (Leica).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt obsahuje xxxxxx podíl aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx sodný (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a koncentrovanou XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 g XxXX₂.

Xxxxxxxx se dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx testu DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x nastaví xx xxxxxxx pH 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = c x X/x,

xxx S = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1 000/y x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX GCC XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 minuty xxx 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové DNA)

iii) 20 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky restrikčních xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-agt xxx xxx xxx gcg xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Ps-2: 5'-xxx xxx xxx aca xxx gtc xxx xx -3'

Očekávaná velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs xXXX (20mM)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx a xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 sekund xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (hybridizace primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. solanacearum DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx inkubační xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají velikost 457 xx a 96 bp.

3. Protokol xxx multiplexní XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX GAG XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-AAC XXX XXX XXX XXX XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX ACC TGT XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxx kontroly XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) po inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx biovar X. solanacearum (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Rs-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX AGT XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX XXX XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX specifický pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx pro xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza kopie)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (xxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití jiných xxxxxxxxx může vyžadovat xxxxxx jednotlivých kroků xxxxx ii), xxx) x iv).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 g

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-ggc xxx tag caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx roztok

[UPOZORNĚNÍ: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně čisté xxxx (např. Ultra xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx se 0,4 g parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) a 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx proužkem a x případě xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx roztok xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: FORMAMID XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x rajčete xx xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

LITERATURA

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx the xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Detection xx Ralstonia solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Bulletin 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium xxx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Xx: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Characteristics of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Applied Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Variation xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx ofYseudomonas solanacearum. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Fujii, X. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Kishi. 1998. Detection of xxxxxx cells of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx on its xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx analysis. Systematic xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the diagnosis xx xxxxxxxxx diseases xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Publishers. pp. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Environmental Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Differentiation xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx campestris xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Hong, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. J. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, J.G. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by multiplex XXX amplification of 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 pp.

24. Xxxx, X.X., X.X. Jackson, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas sy xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, M. 1996. Analysiss xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, and the xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Prior, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx wilt xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64: 4546-4554.