Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona x. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči a x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, aby xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo místo xxxxxxx a rozsah xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx šíření x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. ssp. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx xx al.,

b) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, a ostatní xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), u xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. původce xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x výjimkou semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx semen a xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx zjišťování výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) vymezovacím xxxxxxxxx - průzkum x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx zamoření xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx hniloby, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx a x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx xxxxx x veškerých xxxxxx předmětech xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx na pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Státní xxxxxxxxxxxxxxxxx správou (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx správa"), xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 1 zákona x důvodu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx vymezené xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxx §76 zákona x xxxxxx podezření x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx vznikla vegetativním xxxxxxxx z jedné xxxxxxx xxxxxx; přitom xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx vznikly x témže xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx příbuzná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které z xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx provádí každoročně x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx států Evropské xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx stát"),

c) namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx zásilek dovážených xx třetích xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x namátkově vybrané xxxxxx ostatních xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx nebo potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. b) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 písm. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx nebo xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) a x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx substrátu, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. b) a x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x počet, xxxxx, xxxxxxx a xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, rozsah tohoto xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx informací x xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx uznávaných vědeckých x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx anebo xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce hnědé xxxxxxx a xxxxxxxx xx Věstníku Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Věstníku.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž vzorky xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx fyzickou xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 odst. 1 xxxx. b) xxxxxx xxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. x) xxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx rostlinolékařská správa xxx xxxxxxxxxx odkladu xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xx oprávněna xxxx partii uvádět xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru x xxxxxxx také Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx ročně x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Komisi xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx úrovně potvrzování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx členskými xxxxx. Xxxxxxxx úředních xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, a xx v xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx případech xx 1. xxxxxx. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, týkající xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx vztahují xxxx x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx zjištění xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx se v xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x případě původce xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx podle přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 a xxxxxx XX, nebo

b) pozitivní xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxx xxx jejím xxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x to způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx dodržení xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, x xxxxx toto xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxx xxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx xx účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx nebo xxxxxxx, xx kterých xxxx xxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx podrobeny opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) nařídí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dohledu xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx tyto xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx zamoření partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx členského xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx podrobnosti týkající xx tohoto xxxxxxxxx x bude s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx které může Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx opatření podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Opatření xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x přihlédnutím x aktuálním xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xx způsobu pěstování, xxxxxxx xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx, x xxxxx přišly xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx je možná xxxxx výměna pěstebního xxxxxxxxx, a pozemek, xx nichž xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x odkud xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx nákazy x souladu x xxxxxxxxxxx bodu 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví x souladu s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x na xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxxxxxxxx podle písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx zónu na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx s ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx vodu xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x doprovodné vegetace, xxxxxxx prostřednictvím xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx mohlo xxx xxxxxxxx pěstování xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx zónu xx základě stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), popřípadě xxxxxxxx 2 xxxx. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx odstavce 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 xxxxxx zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx území, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx xxx vedení xxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. c) a xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zajistí xxxxxxxxxxx testování podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, xxxxx byly označeny xx zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx zamoření s xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx potřeby xxxxxx xxxxx předměty x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x nově xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní zónu xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x c).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být xxxxxx x xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xx x xx xxxxxx xxxxxxxx uvedeným x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx použita xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx uvedeným x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud xxxxxxxxxxxxxxxx správa předem xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby x xx xxxx xxxxxxx požadavky na xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx tato xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. a),

c) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty za xxxxxxxx xxx za xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx území x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx budou tato xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 odst. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx podle §76 xxxx. 4 xxxx. x) zákona xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 a odstavce 2 po xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx v xxxxxxx x §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 odst. 8 x 9, a xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx určené x výrobě předstupňů x reprezentativní xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx potvrzen výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru v xxxxxxxxx potvrzené klonové xxxxxxxxxxx se zaměřením xx tuto souvislost, xxxx

2. reprezentativní vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x následujícím roce, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu testovaných x kontrolních xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx kontrol.

Testování xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx uchovávání x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx kontaminace mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 odst. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx test (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X toho důvodu xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x v rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

(1) Popis xxxxxxxx xx v xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX test (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (oddíl 5).

(3) Ačkoli xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx média xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx nemusí xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx bakterie, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx neselektivní x xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx XXXX (oddíl 8) xxxx biotest (xxxxx 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx kolonie xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus se xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z xxxxx xxxxx xx založen xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx izolací xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v xxxxxxx izolace typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Pozitivní výsledek xxxxx jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx detekční práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxxx testů.

(1) Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx xxxxxx i xx xxxxx počet, jestliže 200 xxxx xxxx x dispozici.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x oddílu 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. X případě, xx xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx xxxxxxx polyklonální protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx větší xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX test.

Použijí se xxxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX xxxxx xxxx XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx lze xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx rozetření xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx následně xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx využití xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx omezily xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx takto xxxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx oddíl 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x pelet bramborových xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Test xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx tuto xxxxxx. Bakteriální xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx na XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Kultivace xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x v případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx patogenity xx xxxxxx v xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za negativní. X případě, že xx tento xxxx xxxxxxxxx, je pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx popsány v xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX test je xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx biotest mohou xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Pokud xxxx výsledky xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx testy a x případě xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx vzorků.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, že se xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddílu 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V xxxxxxxxxx klimatických podmínkách xx příznaky xx xxxx zjistí xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx příznaků xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx pomalé a xxxxxxxx omezené na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx listy často x přes infekci xxxxxx rostou, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tvarované listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx xxxxxx xxxxx stonku xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx až xxxxxxxx xxxxxxxxxxx partie. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x dokonce stonky xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x hlízy xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx příznaky jsou xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx cévních na xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx příznakem je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx svazků x xxxx, xxx při xxxxxx zmáčknutí hlízy xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x příznaky na xxxxxxx xxxx x xxxxx stádiu xxxxxxx xxxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxx xxxx příznaky omezeny xx jednu xxxx xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx jen xxxxxx xxxxxxx xxxxx a xxxxx se postupně xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx může oddělit xx vnitřní xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx povrchu xxxxx praskliny, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx bakteriální infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Public/irc/sanco/Home/main.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Hlízy xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx množství xxxx xx vzorku vede x xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx bramborový extrakt xxx xxxxxx také xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx dezinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má být xxxxxxxx PCR test, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx DNA) a xxxx prostředky xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx je xxxxxxxx užitečný v xxxxxxx, xx je xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nožem xx škrabkou xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x pupkových xxxxx brambor. Xx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxx pletiva xxxxxxxxxxxx cévní svazky. Xx odebrání xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °C xx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového konce xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx hlízy xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx do ukončení xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx vzorku xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Výkrojky x xxxxxxx části xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x nádobě xxx xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx po xxxx maximálně 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x růst xxxxxxxxx x průběhu skladování xxxx bránit zjištění xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x třepají xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx;

xxxx

x) výkrojky xx xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3), buď v xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx jednorázovém xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx rozlití xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) a xxxxxx. Xxxxx má xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx zařízení, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x po xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10°C x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Ralstonia solanacearurn x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°C (xxxxxx). Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, aby xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx zacházelo xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí x xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx populací Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx vhodný xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx provádí xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Pomocí čistého xxxxxxxxxxxxxxx nože xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx povrchem xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) části xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxx, skladují xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, ale lze xx dosáhnout xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx rozdělí xx 2 stejné xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx během xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X a xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °C (měsíce), xxxxx je nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý screeningový xxxx xxxxxxxx test XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx se xxxx XX použije xxxx xxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vyšetření xxxxxx x monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx je stanoven xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx IF xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx by xx xxxx protilátky xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Používají xx xxxxxxxxxx protilátky (xxx xxxxxxxxxxxx stránku xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx potřeby může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx extraktech xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x a xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového xxxxx. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx podle dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx o xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) Xxx pelety x xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetuje xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx. Napipetuje xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) resuspendované xxxxxx 1/100 x každého xxxxxxx do řady xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx použít xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx na teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx fixují xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx pokynů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 měsíce).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx protilátky x XX xxxxx. V xxxxx jamce xx xxx být titr 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), titr 1/2 (X/2), xxxx (T) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. b):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Pracovní ředění xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. a) x oddílu 4.3. xxxx. a)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx navlhčený papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx stejné jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx k dispozici xxxxxxxxx pokyny od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po dobu 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx pufrem XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou xxxxxxx xxxxxx osušením.

4.3.4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx papír. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.6. Kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx se xxxxxxxxx x umyjí xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx krycí xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx IF xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív se xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela xxxxxxxx x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Buňky x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx může xxxx, xxxx všechna sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X peletách x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění protilátek xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx pozitivní x vzorků, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek xx považuje za xxxxxxxxx. Xxxxx testování xxxx nutné.

5. Test XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x xx pozitivní, xxxx být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který byl xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx ml (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sklíčka s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx FITC poskytuje xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provádí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

5.1.1. Připraví se xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Napipetuje se 100 µl každého xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000 g.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta x 500 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x inkubuje se xxxx noc xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx rozpustí peleta x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 4 °X po xxxx 30-60 minut.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx po dobu 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, jak ukazuje xxxxxxx 3, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx vzorky xx xxxxx sklíčko, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Zbývající roztok xxxxxx (49 µx) xxxx být xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx se stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se nechají xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x hybridizace

5.2.1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Sigma X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, pH 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx dobře xxxxxxx přibližně 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po xxxx 10 minut xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx xx ponoří xxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze xxxxxx, x osuší xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx každé jamky x inkubuje xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx suší xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx se nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx komora xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx namočeným x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x hybridizační xxxx xxx xxxxxxx 55 °X po dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx se hybridizační xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 sklíčko x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X a xx xxxxxxx xx 4 okének na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx přidá 10 µx hybridizačního xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx sklíčko se xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x v peci xxx teplotě 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxxxxxx vody (Xxxxx xxxx xxxxx = UM), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x hybmixu (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Každá x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Sejmou xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.10. Držák xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a xxxxx xx inkubovat dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx XXX a xxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu filtračním xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µl krycího xxxxxxx (např. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx podobný) xx xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x nebo 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx okénka napříč xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx a xxxxx obvodu. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx nejsou zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx v xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx zjištění xxxxxxxxxxx buněk (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. X peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x IF testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx FISH testu xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx při použití XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány ve xxxxx pozitivních kontrolách x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují za xxxxxxxxxxxxx infikované Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx xxx použití rhodaminového xxxxxx pozorovány x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx PCR xxxx xxxxxxx jako xxxxx screeningový test x je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování touto xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx optimalizační xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x protokoly. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. PCR test xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx laboranti x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze vzorku,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x nimž xxx přidán Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx provádění XXX xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx by xxxx xxx pokud xxxxx bez xxxxxx. X xxxxxxx použití XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx vzorky. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití s xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx v dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [pH 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx termobloku nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxxxx do xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx na 1 xx v 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx třepáním, xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxxxxxxxxx xx na 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx horní xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X a xxxxxxxx xx z xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x promíchá xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx vody (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °C xx do xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxx XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX by xx mohly xxxxxx, xxxxx xx se xxxxxxxxx, xx jsou xxx xxxxxxxxxx XXX x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx jeden xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx multiplexová reakce, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx se přidá 5 µl xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx směs XXX a xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx do xxxxx PCR xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. PCR mikrozkumavky xx umístí xx xxxxxxxx termocykleru, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6)

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA x každého xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 mg xx l) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. U xxxxx xxxxxx nálezů xx xxxxxxxxxxx pravost xxxxxxxxx XXX provedením restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx restrikčního xxxxxxxxx xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x porovnává se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x rostlinnými xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx amplikon xxxxxxx xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx (xxxxx se požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX primerů (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX x xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx žádný z xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx na kontaminaci, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx lilku xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx x extraktům xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (příprava xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Metodu xxxx xxx úspěšně xxxxxx x xx extrakty, xxxxx byly xxxxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -68 až -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx obohacující xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx dokonce x xxxxxxx nepřítomnosti xxxxxxxx x poskytují také xxxxxxxxxx základní konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků xx xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx uvedeny v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx rostliny xxxxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravého xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podepře (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx xx xxxxxx blok pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 cm xxxxx x 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hliníkové xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Pomocí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx listem xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx dlouhý 0,5 až 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxx xxxxxxxx průměru xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx se xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez xx xxxxxxxx sterilní vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 až 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx sterilního xxxxxxxx xx udělá xxxxxxxxx xxxxx (v xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 tloušťky stonku, xxxxxxx x xxxxx xx začne x xxxxx kapky xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx snížení xxxxxxxxx xxxxxx buněk (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxx xxxxxxxxx s podkožní xxxxxx (xx méně xxx 23 G). Xxxxxx se rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxx vejcoplodého.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx známé xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx inokulační xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x zalévají xx xxx, xxx xxxxxxx x nasávání xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx odumírají při xxxxxxxxx xxx 30 °X x optimální xxxxxxx xx 21 °X. Aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx zacházení x xxxx. Xxxxx musí xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x jednoho xxxxxx xx druhý.

7.8. Pravidelně xx osmi xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx působí u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, které xxxx xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx turgoru). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx mívají často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx déle xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx infekci xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx rostliny xx xxxx xxx listů x nebo xxxxxx xxxx xx. Vadnutí xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx hub přítomných x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx x xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx odlišit xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx lilku xxxxxxxxxxx xxxxxx příznaky, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx stonků xxxxxxx. Povrch xxxxx x stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Provede xx xxxx lF xxxx XXX xx šťávě x xxxxx x xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se identifikují x potvrdí xx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx může stát, xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx dokonce x xx xxxxxxxx inkubační xxxx až 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx částí stonků x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx rostliny odebraných xxx xxxxxx inokulace. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxxx (selektivních) xxxxxxx postupem xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x takto xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx náročným xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx z xxxxxx pletiva xxxxx (3.1.5) nebo stonku (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx je možná xx použití xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx všech xxxx bramboru xxxx xxxxx stonku a x rostlin xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x nichž byl xxxxxxxxx výsledek v xxxxx TF/PCR složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Pokud xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, měla xx být provedena xxxxx oddílu 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxx 106 cfu xx ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4053 xxxx PD 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx každou xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx se xxxx xxxx použitím x testování xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x neředěné xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kvůli náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxx, zatímco xxxxxxx xxxxxxx. Proto se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx MTNA xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), za xxxxxxx xxxxxxx určených x xxxxxxxx (hokejek) a xxxxxxxx roztěrů.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °C.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx misek xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x dalším xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 dnech.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus pro xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx následnou identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx na XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx by se xxxx provést dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se rozetřou xx jedno z xxxxxxxxxxxxx médií (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx dextrózový agar (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx roste pomalu x xxxxxxx vytváří xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx čistoty. U xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, hladké, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx v xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Gramovo barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Identifikace

Čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx za použití xxxxxxx dvou následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx známý xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá xxxxx by se xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X a xx xxxxx xxxxx xx xxxx být xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx růstu, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx ze subkultur xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx musí xxxxxxxx z xxxxxx x živného dextrózového xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx katalázy +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx citrátu -

Xxxxxxxxx škrobu - xxxx slabá

Růst xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Tvorba kyseliny x:

- glycerolu -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- rhamnózy -

- xxxxxxxx -

Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. lF xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x xxxxx na xX (dodatek 3).

b) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (oddíl 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx nebo xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X případě xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx lze potom xxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx specifických xxxxxxxxx xx xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx a de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx a xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxx xxxxxxxxx x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x XXX.

x) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Test XXXX xx xxxxxxxxx, jsou-li xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (FAP)

a) Kultura xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °C (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx postup XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx pozitivní, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Anteiso X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx o přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Jiné xxxx xxxx Curtobacterium, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx tyto xxxxxxxx neobvyklá xxxxxxxx, xxxxx xx však xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml x UPW.

b) Provede xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx kultur testované xxxxxxxxx látky x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx listů..

10.3. Inkubuje xx xxx teplotě 18-24 °C při xxxxxxxxxxx světle x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx nedošlo k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, které po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx lilku vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xx patogenní xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx odstraněním xxxxx xxxxxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx množství sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx. Izoluje xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx se xx xxxx. 3-5 xxx xxx teplotě 21-23 °X a sleduje xx vznik kolonií xxxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Gesundheit xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Bactériologie	Angers	Francie
Laboratoire Xxxxxxxx xx la Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx de Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Centre	Aas	Norsko
Direcção-General xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx vyšetření xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx MTNA x xxxxxxxxxx xx v 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx zakalené xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 mn.

Výkrojky pletiva xx odeberou x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx odrůdy s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx je xxxxx, xx je prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx výkrojky se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 xx x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Čtyři xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx alikvotní xxxxx x 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Skladování probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °C xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX a XXXX xxxxx xx provedou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx pufr(50 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, zkontroluje xx xX x xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °C xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Pufry xxx XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x pufru xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx používá xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Leica).

Dodatek 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx typu okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx agar (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx xxxx (Difco)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) glukózy (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 C po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = YGM)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 g
K2HPO4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx v xxxxxxxxx xxx 115 °X xx dobu 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx média

Médium XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx všechny složky xxxxx z XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 g
MgSO4 . 7H2O	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX se upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X se přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, nalidixic acid 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx antibiotik: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (obě 5 mg/ml) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) v xxxxxxxx xxxxxxxxx. Zásobní xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx při xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx xx pH xx 7,2. Xx autoklávování x ochlazení xx 50 °C se xxxxxxx xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx roztoků následovně: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, polymyxin B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx sterilizují xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 měsíce. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištění xxxxxxx 10³ až 10⁴ buněk C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- ctc ctt xxx xxx xxx xx aa -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx gat xxx xxx ctt xxx x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx NS-8-R 5'- xxx xxx ggt xxx cct xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx z DNA X. ni. xxxxx. xxxxxxxxxxx šablony = 502 bp (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x interní PCR xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx na reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μl	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx NS-8-R (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx množství	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx validovány xx xxxxxxx Taq polymerázy Xxxxxx Elmer (AmpliTaq xxxx Xxxx) x Xxxxx BRL.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx bramboru xx xxxxxxx homogenizační xxxxxx x purifikace DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním nebo xxxxxx metodami xxxxxxx XXX je xxxxx xxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx PCR

Postupuje xx xxxxx následujícího programu:

1 xxxxxx: i) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 minuta při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx teplotě 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx cyklerem XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), x), vi) x xxx).

1.4. Analýzy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX amplifikované x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při teplotě 37 °C po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx specifického pro X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx pufru

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná xxxx 50 ml

Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx modř 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Pufr 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (TAE), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Před použitím xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda EUB-338-FITC: 5'- xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX ROZTOK OBSAHUJE XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X NEVDECHOVAT. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zkontroluje xX x v xxxxxxx xxxxxxx xx upraví xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: V ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx přefiltrujte xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx při teplotě 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 mM

Zředí se xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx se množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx EUB 338 (100 ng/μl)	4,5	18,0
sonda XXXXX301 (100 ng/μl)	4,5	18,0
Celkový xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx pěstovat ve xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Beauty",

"Long Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Gramovo barvení x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpustí xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx se 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx se společně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxx x xxxxxxx se x uzavřené nádobě xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx barviva

Zásobní xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx se.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx tekoucí xxxxx.

4. Zalije se Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Opláchne xx pod xxxxxxx xxxxx x vysuší xx savým xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx vyplavuje xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx na dobu 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx se také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx and diagnosis xx xxx xxxx xxx bacterium Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx potato tubers. Xxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, J. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Pl. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. G., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx significance xx xxxxxxxxxxxx versus xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx carbohydrates xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fattyacid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Microbiology 14; 335-345.

7. Janse, X. X. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Corynebacterium sepedonicum) xx xxxxxx. EPPO Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx development xx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Rudolph, X x D. X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. J. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Lelliott, X. X., E. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx fluorescent xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx ring rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx stocks. XXXX Bull., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. a X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx of Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx detection xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Mills, D., Xxxxxxx, X., W. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx hybridization. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x X.X. Rainey. 1999. identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, X., Xxxxxxx, X. x Knorr, D. (1999) Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx in potato xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Plant Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx PCR profiling xxxxx xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx solanacearum xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. European Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. X. X. xxx X. G. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Pseudomonas working xxxxx. Antonie van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, D.E. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Systematic Bacteriology 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, A. R.; Xxxxx, X. X. x X. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x hlízách xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, x xx xxxxxxxx xxxx x půdy,

iii) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx různé metody, xxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x validaci protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx zařízení, pečlivé xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 odst. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx je znázorněno x xxxx uvedených xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx test (xxxx XX, PCR/FISH, xxxxxxxxxx izolace) musí xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem založeném xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x testování xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx je druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete a xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx nebo bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x podezřením x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx diagnostické xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx na xxxxx slizu xx xxxxxx xxxxxxx stonku xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.3.

6) Xxxx XX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx v oddíle 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých fázích xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, ale xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x bodu 6.2. Xxxxx specifická xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý xxxx xxxxxx.

14) Test patogenity xx popsán x xxxx 6.3.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx detekci x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v hlízách xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxxxx xx dvou xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x diagramu 3), x xxxxx xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura je X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Screeningové xxxxx x izolační xxxxx xxxx umožnit detekční xxxx 10³ až 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx xxxxxx i xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx druhý xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx izolace je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx v oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx negativní, xx třeba opakovat xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx s xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx příznaky, rostlin xxxxxxx nevykazujících příznaky xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogenu xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx druhého xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx testy negativní, xxxxxxxx xx vzorek xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx je popsán x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních podmínkách xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, přičemž x xxxx xxxxxxx k xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, ale xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx se rychle xxxxx xxxxxxxxx a xxxxx kolapsem a xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx xx x cévních svazků xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx překrojit xxxxxx x pupkového xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx konec. X xxxx xxxx xx infekce xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx světle hnědého xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx zbarvení xxxxx výrazněji hnědým x xxxxxxxx se xxxx rozšířit xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. V xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx konce xxxxx x x xxxx xxxx vytékat xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx přilepují xxxxxxx xxxx. Xx xxxxxx xx mohou xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x houbového xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx u xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °C, při xxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx rozvine xxxxxxxx xxxxx směrem xxxx x vadnutí xx jedné xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx xx stonku xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx odumírání cévního xxxxxxx. Při příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum dulcamara x X. nigrum. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx stejné xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx ve vodě, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx pod xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx, jestliže je xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx vody, x xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxx napomoci předběžné xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx skvrn xxxxxxxxxxxxx slizu z xxxxxxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx X nebo xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx xxxx IF (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz oddíl 6.1.8.) atesty XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx izolaci

a) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx zbarveného xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx stonku xxxxxxxx xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 minut stát.

b) Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx universální xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx metodou xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x rozředěnou xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při teplotě 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx perlově xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx středu. Xxxxxxxxxx formy R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které jsou xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx tetrazolového xxxxx a média XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zbarvené. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx potvrzující xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx xxxxxxx x bodu 6.2.

3. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx

3.1. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na xxxxx xxxx. Intenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x xxxx než 200 hlízami, xxxxx xx x dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může být xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 týdnů xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

b) Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxx xxxxxxx x případě, xxxx xx xx vzorcích xxxxxx zeminy nebo xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx malé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx s xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xx dají xxxxxxx x testují xx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx příznaky xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x podezřelými příznaky xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx uchovávají v xxxxxx (4-10 °C) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx III.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx nepoužitých xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx nádoby xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx být důkladně xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx možné, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 ml) extrakčního xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx se v xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250mm, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo rozlití xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx každý xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x nádoby. Xxx xxxxx XXX xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx drcení v xxxxxxx xx jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstřeďováním (xxxxxx 180 x xx dobu 10 xxxxx xxx teplotě 4-10 °C) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx přídavkem (10 xx) extrakčního pufru.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx odstřeďováním, 7&xxxx;000 x xx dobu 15 xxxxx (nebo 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) k 500 µl referenční xxxxxxx xxxxx a xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x uloží xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Extrakty xx uchovávají během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx přeprava xxxxxxxx, zajistí se xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, aby xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. To xxxxx pro xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagramy x popisy xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx použít xx xxxxxxx vzorky x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx sterilní xxxxxx xx uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx následujícího xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 cm x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx nejspodnější postranní xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx díl x každého xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. X lilku xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx xx odeberou 1-2 cm xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx oddenků x xxxxxxx kořeny.

Při xxxxxxxxxx určité oblasti xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní vzorek x počtu nejméně 10 rostlin na 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx bude xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx u xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve vodních xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura stramonium x další zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské xxxxxxxx druhy, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podmínek, xxxxxxxx Xxxxxxxx hastata, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga parviflora, Xxxxxxxxxx scleratus, Rorippa xxx, Rumex spp., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx provést vizuální xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxx se xx xxxxxxx atestuje se xxxxxxxx (xxx oddíl 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx savým xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin chlazené,

nebo

b) xx xxxxx zpracují xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx (např. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx části xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Po xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Čistý nebo xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx díly. Xxxxx xxx se xxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz oddíl 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody koncentrace xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje populaci xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx izolační test xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xx-xx podezření, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx populace xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx po zředění xxxxxx sterilní xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx v xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx a xxxxxx xxxx xxx použito x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx vody ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx detekce se xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu selektivní xxxxxxx xx ovlivňována xxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých je xxxxxx xxxxxx více x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx vodě xxx x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxx důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx nějakého čistícího xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx bráno x xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti v xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx k xxxx, že xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx nepřítomnosti xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x xxxxxxxxx mapování x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxx xxxxxxx vody xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených období xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vlivů xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx může dojít xx xxxxxxxx xxxxxxx x tím x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx vody xx xxxxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxxxxxx rostlin, xxxxx xxxx přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx vzorky xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo lahviček xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 m xx břehu. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx vody xx zpracování xxxxxxx x odpadní vody xx odeberou xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 ml. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx velikost, xxxxxxxxxx xx odebrat xxxxxx nejméně 3krát xxx každé vzorkovací xxxxx, z xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované dílčí xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx xxxxxxxxxxx mapování xx xxxxxxx xxxxxxx 3 vzorkovací xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx x vzorkují se xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx při 10&xxxx;000 g po xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx možno xxx teplotě 4-10 °X, slije se xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x následným xxxxxxxx filtru v 5-10 xx peletového xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx vhodná xxx xxxxx objemy vody, xxxxx obsahují malý xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor nebo x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx detekci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx původce xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je popsána x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv saprofytické xxxxxxxx na spolehlivost xxxxxxx, opakují xx xxxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solanacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(8) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané v xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx pro detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx xxxxxx při xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx z odpadní xxxx. Xx však xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx nepravidelně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx nebo xxxx xx xxxxx xxxx x úvahu xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx se mělo xxxxx xxxxxxxxxxxx principy xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx jeden xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 ha x xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx výskyt patogenu, xxxxx xx počet xxxxxxxx míst xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °C. Kal xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kalu. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxx vzorek dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx vzorky 10-25 x xxxx xxxx xxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) po xxxx 2 hodin. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Tween-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový diagram x popis xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx testy

6.1.1. Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx úrovní xxxx. Xxx xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx se, xxx se po xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x xxxxxxxxxxxx pletiva xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx živné xxxx YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx XXX negativním xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx plamenem, xxx se roztěry xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx xxxxx nebo súdánskou xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem nilské xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při teplotě 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se objeví xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx pozoruje x xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární a xxx xx morfologie xxxxx typická pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x inkubují xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx savým xxxxxxx. Upozornění: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x pracovat v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem safraninu x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, odsaje xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx imersí x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx modročerné xxxxxxxx PHB xxxxxxx x buňkách X. xxxxxxxxxxxx x růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním slizu xxxx v xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx nejlépe xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, např. červenými xxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx aureus xxxx obarvenými latexovými xxxxxxxxx. Při xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Smíchají xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx použitím suspenzí xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Očkování na xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx se xxxxxxx tato xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx přídaných xx extraktů ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, např. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné půdě xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Dále, kolonie X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx xxxxxxxxx nebo xxxx xxxxxx přítomny xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Je-li xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že citlivost xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx však xxxxxxxxxx i pro xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x glycerolu xxx teplotě od -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx být xxxx jejím xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Kontrolní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Provede xx ředění x xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx vzorku xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich stav x pak xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx živné xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní x xx 3 xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx růžově xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné od xxxxxxxxxxxxxx bakterií tvořících xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx kolonie X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (pH 6-8, bez xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 až -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média.

Test xxxxxxxx na selektivní xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 xxxxx nejsou xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo k xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxx obohacení, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Tento xxxxxx xxx použít xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x zvýšení xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX testu (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx obohaceny. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxxxxxxxxxxx protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx PCR xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 ul x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx kultuře x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx testů XXXXX xxxx XXX xx obsah xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum z xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických bakterií, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx extraktů xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx lF

Postup

Použití xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX xxxx xxxxxx a xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Doporučuje xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum a xxxxxxxx xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx doporučení výrobce. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2 000. Xxxxx testování by xxxx xxx použity xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ze xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x a xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx paralelní xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, xxxxx možno x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety x xxxxxx 1/100 xx prvního okénka.

Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx řada xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx je množství xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx ředění xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, jak xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se kapičky xxx okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek.

Pokud xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx zmrazeném xxxxx x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x odst. 5.1.ii):

Připraví xx pracovní ředění (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx podle xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx okénku xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se kapky xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Umyjí xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxx IF Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx okének xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x umyje xxxx předtím (3.).

Opatrně xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru s xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí tekutiny xx každého xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx sklíčka xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1 000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita fluorescence xxxx být xxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. To se xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx vyskytnout doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x atypickou morfologií x křížově reagující xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopovém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je pozitivní x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx testování.

ii) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx obsahují xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx není xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx xxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx předtím testovány xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla a xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx možno, xxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx prováděn xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx se xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu DNA.

PCR xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 3 B);

- suspenze 10⁶ buněk xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx x virulentního izolátu (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, při XXX použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků.

Aby xx zabránilo případné xxxxxxxxxxx, připravují se xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. V případě xxxxxxx PCR testu xx potřeba připravit xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci cílové XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití se xxxxxxxxxxx metodami XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX EDTA (xX 8,0)) do 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx se 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx s xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, pH 8,0) a inkubuje xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Přidá xx 220 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se při xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx promíchá xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá se 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx se xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx mezifáze xx xxxx odstřeďuje xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), krátce promíchá xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx se xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µl 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4 °C, xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x DNA xxxxxxx.

15. Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx. 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA xx použije xxx xxxx XXX.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX, např. Qiagen XXxxxx Xxxxx Kit, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx schválených protokolů (6.1.6). Připraví se xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx sterilní vodě).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs pro XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx zveřejněných xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx DNA xx 25 µl XXX xxxxxx podle protokolů XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx se negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx reakční směs XXX x přidá xx xxx zdroj XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX místo vzorku.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který byl xxxxxx xxx počátečním xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

1. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx vzorku x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx DNA xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 xx/x) xx xxxx 30-60 xxxxx xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (krátké xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) prosvíceném xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy ve xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx shodným restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx rozdělí xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, jestliže xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x všech xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků (x xxxxxxx vícenásobné XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti x (případně) xxxxx, xx předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx opakováním xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxx PCR dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxxxxx xx získán xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx, zatímco xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx reakce, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx screeningový xxxx použije XXXX xxxx x je xxxxxxxxx, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx nebo IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx druhý vyšetřovací xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx by xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň 10³-10⁴ xxxxx X solanacearum xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X xxxxxxxxxx pufru (XX) ze 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx sklíčka x pozitivními xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického kmenu xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx testu, xx xxxxxx v dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x vzorku(ů).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx xx al. (1998).

1 Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (xxx dodatek 7).

5. Kápne xx 16 µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a zředěný 1:100 s použitím 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx odstředěním x přidá se xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové řadě 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx sklíček.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného boxu xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) na 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx sklíčku, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, a xx tak, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vlhké komory x xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x troubě xxx teplotě 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x vody s xxxxxxxxxxx kvalitou (Milli X), 1 l 1x xxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml xxxx x molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx ve xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se krycí xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého okénka x xxxx xxxxxxx xx zakryje velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 mm).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx většiny gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 jeví fluorescenčně xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx morfologie s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (odst. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx buněk, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka ve xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH s xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když mnohem xxxx častěji xxx x xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx platné, xxxxx xxxx při xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Vzorky, xxxxx xxxxxxxx alespoň 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, pokud při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx typické xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx xxxxx xxxx volitelný xxxx kromě testů XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx obohacení x použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Obohacení xxxxxx xxxx použitím xxxxx ELISA může xxxxxx citlivost testu, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx validovaný xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou šarži xxxxxxxxxx. Xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx konjugátů xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky v xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx jakou xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí se xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx negativní a xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly.

Jako pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx alikvótní podíly xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx negativní, s xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx na 1 ml biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4X56 = PD 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 2 X x X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx destičce xx použije standardní xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX X. solanacearum. Xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxx xxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se používají xxx tento test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Smith xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx topném xxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Nakape xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx z xxxxx. Xxxxx xx třikrát xxxxxx xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x poslední xxxxxxxx roztok xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx komerčních xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx koncentrace, než xx xxxx).

6) Přidá xx 100 µx xx xxxxx jamky x nechá xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx protilátek xx xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Přidá se 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu při xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx vylije x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx při 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) DAS-ELISA

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx pufru xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx do xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x PBS (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (BSA), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx se ředění xxxxxxxxxxx imunoglobulinu konjugovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx se xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky x inkubuje xx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 nm xx odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hustoty (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx vzorky xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx kontrolního vzorku, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx větší xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx inkubace xx xxxxxxxxxx) x xxxx větší xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže průměrné xxxxxxx OH x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx extraktu xxxxxxxxxxx vzorku, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx menší xxx dvojnásobek hodnot x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorcích xxxxxxx, xx došlo x xxxxxxxx kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelnou xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx extraktu xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku x v optimálních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však také xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx se 10 testovacích xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx pravých xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se použije xxxxx (xxxx. kultivar Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx až do xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx výrazné x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx sazenice xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx extraktu xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx hned xxx děložními listy xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx jehlou (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxx xxxxx x pipetou xx xxxxx přibližně 5-10 µx suspendované xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x prvním listem.

Sterilním xxxxxxxxx xx udělá xxxxxx xxx asi 1 xx xxxxxx x hluboký přibližně 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx technikou xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 hodinové xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx, a peletovým xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorek. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx xx ostatních xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx při xxxxxxx 25 - 30 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x důvodu nedostatku xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx jinak xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy blízko xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, xxxxxxx by mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, chloróz xxxxx xxxxxx rostlin.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx během 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx na složeném xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné výsledky xxxxxxxx xxxx získány, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, bakterie xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx znovu xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nevykazují xxxxx příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. solanacearum, pokud xxx organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx testy

Identifikují xx xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (viz dodatek 3).

6.2.1. Výživové a xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Stead (1987), Klement et xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx fermentační xxxx O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test podle Xxxxxxx +

Xxxxxxx dusičnanů +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX kultury xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx metody xxxx sérologický test.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 buněk xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX se xxxxxxxxxxx monoklonální protilátkou x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxx xxxx (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx v uzavřených xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo vařící xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Vzorky mohou xxx xxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx a Maiss (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Boudazin xx al. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx et xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx kontrolní kmen.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 hodin xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Použijte xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx jako profil xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2OH x 18:1 2OH x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenu xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X každého xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx tvoří biovary xxxxxx xx schopností xxxxxxx a/nebo oxidace xxx disacharidů a xxx hexosových alkoholů (Xxxxxxx, 1964 a Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx půda xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx živné xxxx x čistou xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 jamkami (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění během 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx dílčích fenotypů xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Repetitivní xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) xxx xxxxxx k xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo původně xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et al., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x potvrzení xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se nechají xxxxxxxxx až 2 xxxxx xxx teplotě 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx jako patogenní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx krnění.

5) Xxxxxxx xx izolace x xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 xx xxx xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx provede xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx půdy xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (monohydrát) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

pH 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein hydrolyzát (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx do xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996)

Základní xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Glycerol 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx konečná xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxx (Sigma) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600&xxxx;000 U (xxxxxxxxx 100 mg)/l

Bacitracin (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa C-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx výše xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx pomalejší, ale xxxx xx také xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. solanacearum se xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx světlejší x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx bacitracinu xx 2&xxxx;500 U/l xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx xxxxxxxxx růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 4 °X x temnu a xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x médiem xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově připravená xxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kvality xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x pozorováním, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx teplotě 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné půdy

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx příprava xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, xxx vynechá xx Bacto-Agar x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx zásobní xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx referenční xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné x xxx xx získat x těchto sbírek:

1. Xxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxx (XXXX), xxxxx fytobakteriologie XXXX, Angers, Francie.

Tabulka 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx kultur XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kmenů xxxx xxx zaručena xxxxx x případě, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx kultur.

Tabulka 2: Xxxxxxxxxx panel XXX xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx bakterií x optimalizaci xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx životaschopnost xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx standardy x testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) s 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testů.

B. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy vodivých xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX živné xxxx x suspenduje xx v 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx kolonie xx 1 ml. Xxxxxxx se xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 nm.

Odebere xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, x xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx pupkové xxxxx xxxx uvedeným xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl resuspendované xxxxxx. Přenese xx 100 µl suspenze X. xxxxxxxxxxxx do xxxxx mikrozkumavky a xxxxxxxx xx. Provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 ve xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se získá 9 kopií každého xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx PCR xxxx se provede xxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF a XXXX xxxxx se xxxxxxx test patogenity xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx zjištěna x xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx používá pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

Xxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx používá x ředění xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2H₂O 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí roztoky xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 g

NaH XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, zkontroluje xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx fosfátem (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 g

Na₂HPO₄. 12X₂X 29,0 g

KCI 2,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

3.3. PBS-Tween

10xPBS 100 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit do 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx se x koncentrovanou HCl xx upraví pH xx 9,8.

Doplní se xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx účely xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Potahovací xxxx, xX 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx se složky x zkontroluje pH 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx pufr (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Substrátový xxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx voda 900 xx

Xxxxxx xx x xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (c).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx pole xx xxxxxxx s více xxxxxx x

x - xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x F,

kde x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx okénku x

X = zřeďovací faktor xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Validované xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX TCC XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 288 bp

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 30 sekund při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx při 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Elmer 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x X. solanacearum XXX vytvářejí polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx XX po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Ps-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx gat xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 xx.

2.2. Reakční xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x pufr PCR (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Ps-2 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Gibco XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx MJ Research XXX 200 s xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (syntéza extenze)

vi) xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu jednotlivých xxxxx xxxxx ii), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx DNA vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Taq X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX AAG XXX XXX ACG XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX TAT XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 minut xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) nechá se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Bsm 1 xxxx Isoschizomere (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °C.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Pastrik et xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-XXX XXX XXX AGA XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Rs-1-F/Rs-1-R = 718 bp

s Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx biovar 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Biovar 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces xxx xxx reakce xxxxxxxxxx xxx biovary 1/2- x biovary 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx při teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx vyžadovat úpravu xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX vzniklé amplifikací x XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-3-R xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x TRIS-acetát-EDTA (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před použitím xx zředí xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx xxx gct xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-gct xxx tcc cgt xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. POUŽÍT XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se pH xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 kapek XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 M

Tris-HCI 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes filtr x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx se až x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx hybridizačního roztoku. XXXXXXXXXX: FORMAMID JE XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXX POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

Poznámka:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Na₂HPO₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx lilku x rajčete

Vysejí se xxxxxx xxxxxxx (Lycopersicon xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx melongena) do xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx přesadí xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx se xxxx pěstovat xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx přirozená xxxxx dne, pokud xx delší;

Teplota: xxx: 21 až 24 °X,

xxx: 14 až 18 °X.

Xxxxxx odrůda xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Amann, X.x., X. Xxxxxxxx xxx D.A. Stahl. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx probing xx whole cells xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Anon. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe European Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific primers xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxx identification xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, M.M. 2002. Enrichment Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Enzyme-Linked Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection of xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx tkat xxxxxxx xxxxxxxxx and the xxxxxxxxxxxxxx response. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (ed.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Centre xxx huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx in nitrate xxxxxxxxxx in biovars xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Kaleya-iwaki, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx a XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) A xxxxxxxxx method for Xxxxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxxxxx potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx its sensitivity xxx xxxxxxxxxxx. Bulletin XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx appearance xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Rudolph, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx of xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Ltd., Xxxxxx. 216 xx.

16. Lopez, X.X., Gorris, M.T., Xxxx, P., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx enricliment improves xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular detection xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, C.T. xxx Xx Bruijn, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas and Xxxxxxxxxxx pathovars and xxxxxxx generated xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Applied and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. X., Xxxxxxxx, C.T. and Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting xx xxxxxxx classify Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Wang, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, X. Fegan, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A novel xxxxxx for xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx and xxxxxx-xxxxxxxx DNA probes xxx XXX xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Pukall, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Elphinstone, J.G. xxx Xxxxx, S.M.D. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx and Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, S.E., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx M.J. Xxxxxxx. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Xxxxxxxxxxx pickettii and Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase chain xxxxxxxx. X. Gen. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, J.J., Offord, X.X., Holderness, M. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, D.E. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx relationships of xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx syzygii, xxx xxx blood xxxxxxx bacterium xx xxxxxx based xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Race 3 xx Western Xxxxxx xx detennined xx AFLP, RC-PFGE xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Bacterial xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, S.A., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, N. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx autonated xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Wullings, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Xxxxx xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx, which causes xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl hybridization xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.