Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx č. 326/2004 Sb., o xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (dále xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxxxxxxx příslušné předpisy Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx České republiky xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx byla xxxxxxxxx xxxxxxx infekce původcem xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. původce xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, rajče jedlé (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x přirozených xxxxxxxxxx,

x) detekčním xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx zjišťování xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x určitém xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původcem xxxxx hniloby, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx xx xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) pravděpodobným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - podezření z xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, partii, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx materiálu, xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx rozšířením xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx na pozemku, x xxxxxxx xxxxx x území, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

i) xxxxxxxxxxx územím - xxxxx vymezené Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx správa"), xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 zákona x důvodu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) bezpečnostní xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona x xxxxxx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx příbuzným xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx provádí xxxxxxxxxx x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx materiál xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx vymezené xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx do xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx ostatních xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx k xxxxxx xx třetích xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) xxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx průzkumu výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxx podléhají x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx partií podezřelých x výskytu x xxxxxxxx hostitelské rostliny, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx pocházejí.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx zjišťuje

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx odebraných v xxxxxxxxx uvedených v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx bramboru, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vhodnou xxxx x následným laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx pobřežní vegetace x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. b) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, původ, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx stanovuje x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx vědeckých x statistických zásad x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k systémům xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx situaci xx výskytu anebo xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy (dále xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. x) xxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx na základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx partii bramboru xxxx xxxxxxx a xxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx nebo xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx, v případě xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx kontrolnímu x xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x provádění xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 až 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x souladu x §10 xxxx. 5 xxxxxx jednou ročně x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním členským xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx zajištění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, a xx v případě xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x produkci xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxxxxxxx správou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx organismy x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx podle přílohy č. 1 xxxxxx I xxxxx 1 x xxxxxx XX, nebo

b) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostlinolékařskou xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným x příloze č. 1.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlinolékařská správa x xxxxx odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 xxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa zahájí xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx šetření xxxxx §76 odst. 2 xxxxxx za účelem xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx kterých byly xxxxxxxx vzorky, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko rozšíření xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxxxxxxx rizika xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx dohledu xxx přesunem xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x x objektech xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx xxxxxxxxx zamoření partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo, x případě xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, povrchových xxx původem x xxxxxx xxxxxxxxx státu xxxx v některém xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx příslušného členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx státem xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxx xxxx xxx xxxxx x Xxxxx republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Česká republika, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Pokud úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x aktuálním xxxxxxxx xxxxxxxxx, biologii xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx x xx způsobu xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx zamořené xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, z xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x které přišly xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx kterého xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx je možná xxxxx výměna xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx byly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x souladu x xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 včetně xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 x xxxxxxx x souladu s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx předmětů xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx s ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X případě potvrzení xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x s ohledem xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) zajistí xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx xxxxxxxx termínech x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování podle xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány vzorky, xx xxxxxxxxx,

x) vymezí xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx povrchové xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx b) x xxxxxxxxxxxx zónu xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x jeho xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x), x sdělí podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx x ustanovením xxxxxxxx 1 x 2 označí zamořené xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x vymezí xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx ve Věstníku xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx, vymezovaných xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx k partiím, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx zamořené podle §5 odst. 1 xxxx. a), x xxxxxx xxxxxxx však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x to v xxxxxxx potřebném xx xxxxxxxxx prvotního xxxxxx xxxxxx x rozsahu xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby.

(2) Xxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx potřeby označí xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx karanténní území x bezpečnostní xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) a x).

§7

Xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 zákona xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená za xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xx x ní xxxxxx xxxxxxxx uvedeným x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx jsou splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx této xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx zamořená podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx partie, a xxxxx není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx zamořená xxxxx §5 odst. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x), se xxx zničí nebo xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 s tím, xx po xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx zóně, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx hniloby v xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx proti šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxx opatření uvedená x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x těchto xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx x v xxxxxxxxxxxx zóně sděluje xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx ostatním xxxxxxxx státům a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx osob, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx x výjimkou xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, které xxxxxxxx rostlinolékařská správa xxxxx §8 odst. 1 xxxxxx, pokud xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx průzkumu xxxxx §3 xxxx. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 a x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx roce podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx roce, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx xxxxxxx nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x České xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, které xxxx součástí:

i) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx metody, validovaná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Xxxxxxx protokoly xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry xxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx uchovávání x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx při xxxxxxxxxx x v dokumentaci.

Podezření x výskytu, xxx xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx x musí xxx xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx podezření x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx pozitivní IF xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 definován xxxx pozitivní xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx screeningovým testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxx a identifikaci xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx diagnostickém xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Popis příznaků xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx média xxxx xxxxxxxxxxxx, kultivace v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx patogena xx izolačním médiu. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx neselektivní x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxx dvou screeningových xxxxx, z xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx patogena, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx typických xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx počet, jestliže 200 hlíz není x xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx jsou xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytný xxxxx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx xxxxxxxxx XX se xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX test.

Použijí se xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 6).

(6) XXXX test.

Použijí se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Selektivní xxxxxxx.

Xxxx xxxx být v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 média x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Kulturu patogena xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxx části, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nepodaří, xxxx být izolace xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx xxx biotest (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Test xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx na XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebudou (viz xxxxx 7).

(9) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx negativní, opakují xx izolační xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx x v případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx dalších xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx provedena xxxxxxx x potvrzení. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx tento test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx nezbytné provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx nutné.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxx morfologie kolonie xxxx popsány x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) FISH test xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx výsledky screeningových xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx vzorků.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Rostliny xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxx xxx xx na xxxxx sezóny. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx nebo xx xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx mechanických xxxxxxxxx. Xxxxx mohou xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxxxxxxxxxx. Příznaky xxxxxxx xxxx velmi xxxxxxx xx příznaků hnědé xxxxxxx; vadnutí xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx místech xx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx stonku xxxxx mají chlorotické, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx lístky, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx eventuálně xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx sklovitost xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx v xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx pupku. Xxxxxxxx xxxxxx cévních xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx zmáčknutí xxxxx xxxxxxxxx x cév xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx bakterií. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx jsou x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx jednu část xxxxxxxx, nemusí se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx části a xxxxx se postupně xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. S postupem xxxxxxx dochází x xxxxxxxxx vodivých xxxxxx: xxxxxx korová xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X pokročilých xxxxxxxx infekce xx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X poslední xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx několik xxxxxxx, xxx střední xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx cévních, xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx maskovat x může být xxxxxxx, ne-li xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Možné xxxx x atypické xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků jsou xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Příprava xxxxxx

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx vzorkování xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx vzorky s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx hlíz.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx o xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx zjištění xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx se xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx má být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx prostředky mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, xx xx xx vzorku příliš xxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx xxxxx izolace.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx a dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx. Xx odebrání musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány xx 24 xxxxx xxxx konzervovány při -20 °X po xxxx nejdéle dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx xxxxxxxxx výkrojku x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx nechají xxxxxxxxxx xx dobu 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx teplotě 4 - 10 °X xx do xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx v nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, uchovávají xx x xxxxxx xxx přidání xxxxx, x xxxxxx xx xxxx maximálně 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 hodin. Schnutí x suberizace xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx zjištění xxxxxxxxxxx xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot/min) xx xxxx 4 xxxxx při teplotě xxxxx xxx 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) výkrojky xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx použití mixéru xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx během xxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx xx xxx xxxxxx XXX xxxx, xx nutno xxxxxxx xxxxxxx DNA xx nádoby nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx drcení v xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 g xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4-10°C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x xxxxxxxx xx supernatant, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx peleta v 1,5 ml peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx -86°X (měsíce). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, aby se xx všemi pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zacházelo odděleně, xxx se předešlo xxxxxxxxxxx. Xx platí x pro xxxxxxx xx XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx kontrola xxxxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx stonků. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx průzkumy, xxxx xx xxx založeny xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžek xx xxxxxxxx xxxx o xxxxxxxxx 1-2 cm xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx přímo xxx povrchem xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, okamžitě osuší xxxxx papírem a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X nebo xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx maximálně 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, které xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx filtrací x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx v xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový extrakt xx rozdělí na 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx polovina se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx se xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) sterilního glycerolu xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86 °X (měsíce), xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx, protože byla xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx výsledek je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo FISH. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení xxxxxxx xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx s polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x monoklonální xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx protilátky xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx pro každou xxxxx řadu xxxxxxxxxx. Xxxx je stanoven xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx xxxxxxx x optimální xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx původce kroužkovitosti x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx nebo monoklonální xxxxxxxxxx xx měly xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Během xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti xxxxx nebo xx xxxxx. Používají se xxxxxxxxxx protilátky (viz xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx může xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °X x glycerolu. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx po dobu 15 xxxxx při 7&xxxx;000 g x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx fixována xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxxxxxxxx xx výluhu z xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °C) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx s 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících postupů:

a) Xxx pelety s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx sedimentu:

Napipetuje se xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx okénka x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxxx xxxx xxx použít xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx pelety:

Připraví xx xxxxxxxxx ředění (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx objem xxxxx) resuspendované pelety 1/100 x každého xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx vzorek podle xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při xxxxxxxx teplotě nebo xxxxxxxx xx teplotu 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky xx fixují xx xxxxxxx buď xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka na xxxx v xxxxxx 4.1 písm. a):

Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx být xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx titr 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), titr (T) x dvojnásobný xxxx (2X).

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx ředění (XX) xxxxxxxxxx x IF xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx podle xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx navlhčený papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx pokyny xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se ponořením xx xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx přebytečnou vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx se stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry vhodnými xxx excitaci FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx inversí při xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x zcela obarvené x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx všechna xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách x xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx výsledku IF xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek xx považován na xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxx xx považuje xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx FISH xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx být jako xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx se XXXX test provede xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx k xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx testování touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx s čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. xxxx NCPPB 4053 xxxx PD 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (PB) x 3-5 denní xxxxxxx (příprava viz dodatek 2). Připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolními vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx kontrolního materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxxx po xxxx 8 minut xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxx se peleta x 500 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx jeho xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 minut.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g, xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % etanolu. X xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX a zamíchá xx protřepáním.

Obrázek 3. Xxxxxxxxxx na sklíčku XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx xxxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) a fixují xx xxx plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by měla xxx skladována xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x hybridizace

5.2.1. Xxxxxxxx xx roztok xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 mg xxxxxxxx (Sigma L-6876) x 10 ml xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, ale xxx xx se pouze xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx roztát. Každý xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx roztoku lyzozymu x xxxxxxxx po xxxx 10 minut xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, pouze jednou, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µg.ml^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx každé xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X po dobu 30 minut.

5.2.2. Xxxxx xx suší ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx na vzduchu x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx vzduchotěsné krabice xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx namočeným x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx se přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx teplotě 55 °X po xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx každého ze 4 okének xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx pod ně xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx se 14 - 18 x v peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx a 666 xx XXX) a 1 l 1/2 x hybmixu (167 xx 3x xxxxxx x 833 xx XXX). Xxxxx z xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx teplotě 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Držák xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX a xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx podobný) xx xxxxx jamky x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních kontrolních xxxxxx. Buňky xxxx xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, se xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

5.3.2. Hledají xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx podezření x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx při zjištění xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. V peletách x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx často xxx x IF xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x morfologií, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx pozorovány ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

b) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx typické jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx jako xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , xx-xx požadována xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 ml xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti a xxxxxxxxx xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx validovaná PCR xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku cílovou XXX. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx specializovaných xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx extrakce XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus s xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze vzorku,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, k nimž xxx přidán Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx vodě x virulentního izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx NCPPB 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx budou xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx vzorků xx xxxx xxx xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X případě xxxxxxx XXX testu je xxxxxxx připravit xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxx xx xxxx popsané xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Xxxxxx podle Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx na 5 xxxxx do ledu.

4. Xxxxx se 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx na 1 xx x 10 xX Tris XXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX roztok X (Xxxxxxxxxx), dobře xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se při xxxxxxx 65 °C xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá xx 100 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx sama xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx a míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží x směs xx xxxxx homogenní.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C pro xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx horní fáze xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx na 15&xxxx;000 x po dobu 10 xxxxx při 4°X, peleta xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout na xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx vac.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx vody (UPW) x nechá stát xxxxxxx 20 xxxxx xxx pokojové teplotě.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X xx do xxxxxxxxxx xxx PCR.

17. Jakákoliv xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx PCR se xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX by xx xxxxx použít, xxxxx by se xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ patogenních buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x prostředí, kde xxxxxxx kontaminace, xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolu (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xx multiplexová xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kontrolu XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx se přidá 5 µl xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní xxxxxxxxx vzorek xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx UPW, xxxxx xxxx použita xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx testování x xxxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Analýza produktu XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, např. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx nálezů se xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx vzorku amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (viz dodatek 6). Xxxxxxx xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebyl zjištěn x xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x rostlinnými xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx se xxxxxxxx), xx předpokladu, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou xxxxx PCR xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx na inhibici XXX, pokud xxx xxxxxxxxx amplikon získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx kontrolami XXX x inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx amplikonů.

Lze xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx k extraktům xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx úspěšně xxxxxx x na extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx omezení xxxxxxxxx xxxxxxx negativních výsledků xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Peleta podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx rostliny xxxxx xxxxxx z xxxx xxxxxxxxx metod (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx fázi 2-3 xxxxx xx úplného xxxxxxxxx třetího xxxxxxx xxxxx. Aby xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx potřeba 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx podepře (pro xxxxxxxxx o průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx 5 cm xxxxxxx, 10 cm šířky x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx umístí proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Pomocí skalpelu xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx pravým xxxxxx xxxxxxx nebo mírně xxxxxxxxxx řez xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxx xxxxxxxx průměru xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx xx xxx xxxxxxxx štětečkem xx oční linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx x objemu 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx dvěma xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx děložní xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (přibližně 5 až 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx (x úhlu xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 cm x xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx začne x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx vnitřního xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx inokulací xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx se inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (ne méně xxx 23 G). Xxxxxx se xxxxxxx xxxx testovací rostliny xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx je xx xxxxx x xxxxxxxx x přirozeně xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx se rostliny xxxxxxx inkubovat v xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, aby nedošlo x xxxxxxxx vody xxxx vadnutí kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx je 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx rostliny pro xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx jasně oddělených xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa se xxxxxxx přísné xxxxxxxx xxxx zacházení x xxxx. Xxxxx xxxx xxx rostliny xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx sebe, xxxxxx xx xxxxxxxx přepážkami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx před veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaky. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx vejcoplodého xxxxxxx xxxxx, které může xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx zprvu xxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, ale xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx mívají xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx déle trvá xxxxxx xx objevení xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx přežití. Rostliny xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx vůči xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx starší xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx rostliny ve xxxx xxx xxxxx x nebo xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx jiných xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Patří x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. atroseptica, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx případy xxxxxxx xxx xxxxxxx od xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx celé xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx test xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx

7.9. Jakmile se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx příznaky, měla xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx za xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxx lF xxxx XXX na šťávě x xxxxx a xxxxxxx se na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x potvrdí se xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx pokud xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx může xxxx, xx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x rostlinách lilku xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx vhodných (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Izolace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx tehdy, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x takto xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx možno xx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx však přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx a x rostlin xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx výsledek x xxxxx TF/PCR xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx lilku, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx desetinná xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminace, xxxxxxxx xx pozitivní kontroly xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx mají být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního xxxxx xx se xxxx před xxxxxxxx x testování obvyklých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál se xxxxxxx stejným způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx části ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx vejcoplodého xx xxxxxxxx desetinásobné xxxxxx v peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se obvykle xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx k tomu, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx přítomná ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx z xxxxxxx xxxxxx, v ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx NCP-88 médium (dodatek 5), za xxxxxxx xxxxxxx určených k xxxxxxxx (hokejek) a xxxxxxxx roztěrů.

8.1.3. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx misek zahrnuje xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx třech dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx kolonií

Poznámka:

Subkultury xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci xx se xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, tj. xxxxxxx po 3-5 xxxxx.

8.2.1. Kolonie podobné Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx v dodatku 5):

- xxxxx dextrózový xxxx (xxxxx pro xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx pepton xxxxxxxxx xxxx,

- agar x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx teplotě 21-24 °X po xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx roztěr xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx kolonie pro xxxxx testování.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx xxxxxxx patogenity (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx biologických principech.

V xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pro každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx kmen.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx se musí xxxxxxxx z xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx katalázy +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Využívání citrátu -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst xxx 37 °X -

Xxxx x 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- rhamnózy -

- xxxxxxxx -

Gramovo xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk/ml x pufru xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX xxxxxx (oddíl 4).

x) Xxxxxxxxxxx výsledku xX xxxxx je dosaženo, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na ml xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx se může xxxx buněk podpořit xxxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx XxXX xx konečné xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx do xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx PCR (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx a xx Xxxx, 1995; Xxxxx x kol., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxx xxxx xxxxxxxxx XXX stejné xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede se xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Test FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx postup XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP xx pozitivní, xxxxx xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Anteiso xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx některé x xxxxxx kyselin, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx pro xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. v xxxxxxx 1-5 %. X Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus se xxxxxxx xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Připraví se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx konečné xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx zkouška xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx z 3-xxxxxxx kultur testované xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 stonků xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Inkubuje xx xxx xxxxxxx 18-24 °C xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx vyschnutí. X xxxxxxx xxxxxx xx mělo během 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, které xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxxxxx, xx se xxxx inkubovat xx 3 týdny při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx nepřesahujících 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx za patogenní xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx provádí x xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx suspenze xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx se xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X a sleduje xx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů

Laboratoř (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx a Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Science Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Bactériologie	Angers	Francie
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Xxxxxxxxxxx de la Xxxxx de Terre	Le Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Institute, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx das Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Kontaktní xxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Příprava pozitivních x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 nebo XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě zakalené xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 mn.

Výkrojky xxxxxxx xx odeberou z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, u xxxxx xx jisté, xx xx prosta X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx obvyklým xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx. X následujících xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X až xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x množství C. x. subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX test xx provede xxxxxxxx XXX x pozitivních x negativních kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rozbory pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx být X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x xxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx pufr(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx pH a xxxxxxx xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx být následující xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (na xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx prostředek (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) pro xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx z pupkových xxxxx bramborových hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx pH x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Pufry xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X xx xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických fluoreskujících xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = koeficient pole (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X x 1 000/y x X,

xxx x = objem xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx faktor xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x kultivaci X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxx = NA)

Živný xxxx (Difco)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx dextrózový xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx živný agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Yeast xxxxxxx xxxxxxx agar = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx dobu 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a minerálními xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °C xx dobu 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx média

Médium XXXX

Xxxxx xxxx uvedeno xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx z XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 g
MgSO4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Oxoid č. 1)	16,0 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xX se upraví xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 min.) x xxxxxxxxx xx 50 X se xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 g, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx se nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Sigma) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx B (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx sulfoxidu. Xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx přidání antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 g
Kvasnicový extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx pH xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x ochlazení xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Xxxxx) 0,003x, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Sigma) 0,2 g.

Antibiotika xx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxx roztoků xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 M XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx sterilizují xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. subsp. sepedonicus xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx bakterií.

1. Vícenásobný XXX protokol s xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx primery

primer PSA-1 5'- xxx xxx xxx ggg xxx xx aa -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac xxx gat xxx xxx ctt xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx tga tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx ggt xxx cct xxx xx -3'

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx šablony = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx velikost amplikonu x xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx směs XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx na reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (UPW)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx d-n XX (20 mM)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx polymeráza (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (AmpliTaq xxxx Gold) a Xxxxx BRL.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X byla xxxxxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x purifikace DNA xxxxx Pastrika (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodami xxxxxxx XXX xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky xxx PCR

Postupuje xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx při teplotě 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 minuta xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 minuta xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxxxxx kopie)

25 xxxxx x) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx teplotě 62 °X (připojení xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxx prodlužování

ix) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxx použití xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx mají xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Příprava xxxxxxxxxx pufru

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 g

Destilovaná xxxx 50 ml

Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx modř 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx na 1x.

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Validovaná xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx cgg ggc xxx xxx ctc xxx acg -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- gct gcc xxx xxx xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX ROZTOK XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, KTERÝ XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX V XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx přibližně 60 °X a přidá xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Paraformaldehyd xx xxxxxxxx po xxxxxxx 5 kapek 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 M (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Indikačním xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Hybridizační roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx dodecyl xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx. Xxx každé xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

Tabulka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 ng/μl)	4,5	18,0
Celkový xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx teplotě -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx je xxxxxxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx vysejí do xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přepichují xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx v 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného x 80 ml xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx smíchají.

Lugolův xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx xx x uzavřené xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 g

95 % etanol 100 xx

Xxxxxxx se x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx barvení

1. Připraví xx roztěry, xxxxxx xx na xxxxxxx x fixují xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx xx působit 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx xxxxx pod tekoucí xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx jódovým xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx po xxxx xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx přidávaného 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx vyplavuje xxxxxxx, xxxx ponořením za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 sekund.

7. Opláchne xx pod xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx xx působit 10 x.

9. Opláchne xx xxx tekoucí vodou x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx of xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis xx xxx xxxx xxx bacterium Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx of xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11&xxxx;288 XX, 21 pp.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx from xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Dinesen, X. G., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx tubers. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Manual xx xxxxxxx xxx xxxxxxx bacteriology, American Xxxxxxx for Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx various xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. D., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. a X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx of the XX method xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx capabilities of Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Journal xx Xxxxx Diseases and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, N., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx the xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx Z.; Rudolph, X x X. X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Budapest, 568 pp.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx bacteria. J. xxxx. Bact., 29, 114-118.

12. Lelliott, X. X., X. Billing x A. X. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx scheme xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Lelliott, X. X. x X. X., Sellar, 1976. Xxx detection xx xxxxxx ring xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. et Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. a X.X. xx Boer, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837-842.

15. Mills, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. x R.A. Xxxxxx. 1999. identification xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxx PCR xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 pp.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Sechler, A. x Xxxxx, X. (1999) Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR xxx an xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Schaad, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 pp.

21. Xxxxxxx, X. B. X., 1967. A xxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., William xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, N. X.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxx the XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. European Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Sneath, X. X. A. xxx X. G. Xxxxxxx, 1974. X study xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Pseudomonas working xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Systematic Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. A.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, J. X. x A. D. X. Akkermans, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx rot of xxxxxx, by fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX DIAGNÓZY, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXX HNILOBY

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx bramboru, rostlin xxxxxxx a jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, x xx vzorcích vody x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx různé xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx pro přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných karanténních xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x za xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a reprodukovatelné xxxxxxxx úrovní X. xxxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu a xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé xxxxxxxxx x činidly x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, např. xxxxxxxx pozitivních kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx kvality, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z výskytu, xxx je xxxxxxx x §4 odst. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx znázorněno x xxxx uvedených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx být xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je x druhý screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx potvrzeno x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 vyžaduje xxxxxxx x identifikaci čisté xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního vadnutí (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) hlíz xxxxxxxx x rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx a xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx xx selektivní xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v oddíle 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx nejsou xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy nepřítomnost xxxxxxxx.

3) Test xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx stonku xx popsán v xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx IF xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx FISH xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx obvykle xxxxxx izolovatelný x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo bujného xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx typické, ale xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx opakovat, nejlépe xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx každý nový xxxxxx.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxx 6.3.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx určeno xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x nichž xxxxx xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx pouze x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xxxx dostačující x xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Screeningové testy x xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxx detekční xxxx 10³ až 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx testů.

1) Xxxxxxxxxx velikost vzorku xx 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x xx xxxxx xxxxx, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx jsou alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je test xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx popsány v xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx nebo biotest xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx opakovat xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku, případně xxxxxxx xxxx s xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx xx dosáhne xxxxxx testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x oddíle 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx příznaky, rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx se xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx druhý nebo xxxxx xxxxx negativní, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest mohou xxxxxx z důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Příznaky x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem x xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx během xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx k xxxxxxxx. V raných xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zelené, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází xxxx x xxxxxxx listů xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx celé xxxxxxxx se xxxxxx xxxxx nevratným a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx svazků xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx zvadlých xxxxxxx obvykle vytéká xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx sliz xxxx xx možné xxxx xxxxxxxxxx. Při ponoření xxxxxxxxxx stonku xxxxxx xx xxxx se x cévních svazků xxxxxx vlákna slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x podélně xxxx xxxxxxx konec. X rané xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx žlutého xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý krémový xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x odumření se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx xx pupkového konce xxxxx x z xxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se přilepují xxxxxxx půdy. Na xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxx měkkých hnilob xxxxxxxxxxxxx x houbového xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Prvním xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy kolem 25 °C, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx směrem xxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, které končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx méně příznivých xxxxxxxx pro xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx tvořit xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od spodu xxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Při příčném xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bílý nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx dulcamara x S. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X nebo xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x nemocné xxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx). Xxx vadnutí xxxx xxxxxxxx stejné xxxx x rostliny xxxxxxx. Nevadnoucí xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx a xxxxxx ve xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx stonku xxxx xxxxx stonku pod xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx je xxx stonku ponořen xxxxxx xx xxxx, x xx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. solanacearum xxxx xxxxxxxxxxxx obarvením xxxxxxx fixovaných xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxxxxxx sklíčku nilskou xxxxx X xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Sérologické xxxxxxxxxxx testy (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx xxxx test XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.), testy XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) atesty PCR (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx hlízy bramboru xxxx z cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí hostitelské xxxxxxxx. Suspenduje xx x malém množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx stát.

b) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

c) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) a/nebo Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (např. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 x xxxxxxxxx kontrole.

d) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při teplotě 28°X.

- Xx universální xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx krémově xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x charakteristickými xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxx krémově bílé.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x média XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně červené.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x bodu 6.2.

3. Xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Podrobné xxxxxx xxx detekci x identifikaci Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx na xxxxx test. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje více xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, pokud xx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx může xxx xxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

b) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx být xxxxxxxx XXX test, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx DNA) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx každým xxxxxxx. Xxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx vhodný xxxxxxx x případě, xxxx xx ve xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx test PCR xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx skalpelu xxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx konci xxxxx hlízy, xxx xxx xxxx viditelné xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiv xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti výkrojku xxxxxxxx xxxxxxxx podezření xx xxxxxx hnilobu, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx xxxx hlízy xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x potom xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °C) xx řádných karanténních xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx přílohy III.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx se xxxxx xx xxxxxxxxxxx nádob xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, xx nádoby xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx konce okamžitě. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x chladu xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x pupkových xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (přibližně 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) buď x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) xxxx drcením x xxxxxxxxx maceračním xxxxx na xxxxx xxxxxxx (xxxx. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Je xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX se doporučuje xxxxxx drcení x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, pročistí se xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx při teplotě 4-10 °X) nebo xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) extrakčního xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx dobu 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x odstraní xx supernatant, xxxx xx se rozvířila xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Použije se 500 µx pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µx referenční xxxxxxx xxxxx x xx zbývající části xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx teplotě -16 xx -24 °X (týdny) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx během xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx nutná xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x doručením xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní kontroly x xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx pro sklíčka XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx testů x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.)

Biotest (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xx doporučuje testovat xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx vzorky x počtu xx 200 stonkových částí. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx statisticky xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové sazenice x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx xxx xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx díl x xxxxxxx výhonku.

Jiné xxxxxxxxxxx rostliny: Čistým xxxxxxxxxxxxxx nožem nebo xxxxxxxxxxxxx nůžkami se xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx úrovní xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx díly xx xxxxxx pod xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx rostlinu. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx u xxxxxxxx Solanum dulcamara xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx evropské xxxxxxxx druhy, které xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx specifických podmínek, xxxxxxxx Atriplex hastata, Xxxxxx pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga parviflora, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Rorippa xxx, Rumex xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Tussilago xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx nebo xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx oddíl 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x xxxxx vysuší savým xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin chlazené,

nebo

b) xx ihned zpracují xxxxxxx x pevném xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx vhodného mlecího xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx se části xxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx třeba, xxx xxx je xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx na xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx se xxxxxxx při teplotě 4-10 °C x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 xx -86 °C (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x popisy xxxxx a optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní izolace (xxx oddíl 6.1.4.)

Test XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde jsou xxxxxxx xxxxxxxxxx postupy xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána v xxxxxx 2.3.x.

(8) Kultivace xxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích povrchové xxxx x xxxxxx xxxx xxx použito x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx v xxxxxxxxxx na substrátu. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých xx xxxxxx xxxxxx více x xxxxxxx xxxx xx zpracování brambor x xxxxxxx vodě xxx v xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové vody, xxxxxxxxx detekce v xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx bude xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto důvodu xx xxxxxxxxxx testovat xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), při xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx schématu xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x povrchové xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x odpadní vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x povrchové xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a podzimu, xxx xxxxxxx vody xxxxxxxxxx 15 °C.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxx době xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší spolehlivost xxxxxxxx snížením vlivů xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných dešťů x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xx značnému zředění x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx patogenu.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx možno 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Při xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vody xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx každé vzorkovací xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 ml. Xxx intenzivním mapování xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx provedena xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Odstřeďují xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 x xx xxxx. 10 minut (xxxx 7000 g xx xxxx 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx teplotě 4-10 °X, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (minimální xxxxxxxx pórů 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx metoda xx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx vody, xxxxx obsahují xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx odpadní xxxx, xxxxxxx zvýšená xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Testování

Viz xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxx testů x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Postupový diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx oddíl 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx postupy xxxxxxxxxx

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření xx vliv saprofytické xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx kultur X. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Metody xxx detekci x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx detekční xxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve vzorcích xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci nízkých xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx těchto xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxxxxx přehledů xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx patogenu x xxxx nebo xxxx je třeba xxxx x úvahu xxxxxxxx citlivost xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx patogenu x xxxxx půdě xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny a xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, ale x při xxxxxxx xxxx xxxxxx unikne xxxxx xxxxxx zamoření xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními principy xxxxxxxxxxx xxx vzorkování xxxxxx. Xx jeden xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 xx 1 xx půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 ha x hloubky 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z plochy 0,3 xx. Před xxxxxxxxxx xx uchovávají xxxxxx xxx teplotě 12-15 °X. Kal xx zpracování brambor x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 kg z xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx testovaného xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx vzorky 10-25 g půdy xxxx xxxx se xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 hodin. Xx-xx xxxxx, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 g xxxxxxxxxx kamínků xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx diagram x xxxxx xxxxx xxxx x příslušném xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Test xx xxxxx xxxxx xx stonku

Přítomnost R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, xxxxxxx nebo jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxx xxxxxxxxxxx jednoduchý xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx úrovní xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, xxx se po xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x přeříznutých cévních xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxybutyrátu

1. Xxxxxxxx xx roztěr xxxxxxxxxxxxx slizu z xxxxxxxxxxxx pletiva nebo xx 48 hodinové xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr x xxxxxx PHB xxxxxxxxxx xx.

3. Roztěry xx xxxxxxx uschnout x xxxxxx povrch xxxxxxx xxxxxxx se rychle xxxxxxxx xxx plamenem, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx pozorování xxxxx xxxx uvedeného xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx modří:

a) Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x nechají xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx barvící xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x xxxxxxxx. Přebytečná xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Roztěr xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z kohoutku. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se navlhčí xxxxxx vody a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 xx pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX granulích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx normálním xxxxxx, xxx jsou xxxxxxx intracelulární x xxx xx morfologie xxxxx typická xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx súdánskou xxxxx:

x) Zakápnou se xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X v 70% xxxxxxx a xxxxxxxx xx 10 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xylol xx xxxxxx škodlivý, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat v xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (w/v) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Upozornění: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx opláchnou xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx světlem pod xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX granulí x buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxxx slizu xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx validovaných xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx obarvenými xxxxxxxxxx, xxxx. červenými xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného vybavení (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx instrukcí xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Smíchají xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky a xxxxxxxxxxxxx xxxxx (přibližně 5 µl xxxxx xxxxx) xx okénku xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx aglutinace.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx na xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx se xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, provede xx xxxxxxxxx test k xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxx xxxx, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx morfologii, xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Je-li xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx vzorek xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx přípravených xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, že citlivost xxxxxxx xxxxx metodou xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x pro xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě od -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). K xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx šarže xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Provede xx xxxxxx s xxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx populace saprofytických xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx se 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 misku xxx xxxxx ředění.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX jsou xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní x xx 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx xxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zbarvení xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx tvoří xxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, zcela xxxxxxx x nefluidní xxxx jen částečně xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tvořících xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxx očkují xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx chlóru) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx nebo xxxxxxxxxx xx vhodném xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C nebo xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx patogenity (xxx xxxxx 6.3).

Interpretace xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx je negativní, xxxxxxxx xx 6 xxxxx nejsou zpozorovány xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , za předpokladu, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými bakteriemi x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou nalezeny xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx očkování na xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze použít xxx selektivní zvětšení xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ze xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx dojde i xx xxxxxxx potenciálních xxxxxxxxxx XXX testu (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx však xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx sérologicky xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx použít xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx se xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX může xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu ze xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 ul x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx půdy).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx statické xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní provzdušňování.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx obsah dobře xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx ve xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx před xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Test xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx prahů.

Použije-li xx xxxx IF xxxx hlavní x xxxxxxxx XX xxxxx xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx xxxxxxx, PCR xxxx FISH. Jestliže xx xxxx XX xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx zdroj protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Doporučuje xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ředění, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. solanacearum a xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx antiséra xxxx xxxxxxx titr xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity xxxxxxxxxx x pracovních xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako titr.

Test xx měl xxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx xx nutné, xxxx xxx úspěšně proveden xx xxxxxxxx uchovaných xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx může xxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x a xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx xx není xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou xxxxxx xxxxxxxx xx sklíčka xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným referenčním xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (uchovávané xxxxxxxxxxx nebo zmrazením xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °X) xx xx xxxx podle možností xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na stejném xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k pozitivní x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s více xxxxxx, pokud možno x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 mm - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx může xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, jak xxxxxxx obr. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx ředění (1/10, 1/100) resuspendované xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx je xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx okének. Xxxxx xxxx může xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx fixují xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx instrukcí xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, fixovaná xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Postup xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titru (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x xxxx. 5.1.ii):

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) a 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx sklíčka se xxxxxxxxxx na navlhčený xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx ředěním xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx každém xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x tato xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx v pufru XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku aerosolu xxxx xxxxxxx kapiček, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost jemným xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředěním xxxxxxxxx FITC, kterým xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx naneseného xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx konjugátu xx xxxxxxx. Sklíčko se xxxxxxxx a xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 ul 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx obvodu. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx se xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxx. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okéncích xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx při xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x úvahu.

Při podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx se xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních buněk (xxxx okénka sklíček) xx povrchu sklíček.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx bramboru a xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum.

4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x titru xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XX:

x) Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopovém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet typických xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx nutné.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody v xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx se metoda x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxx XXX. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx zkušenými xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x průběhu xxxxxxxx XXX a XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby xxxx xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx DNA.

PCR xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. solanacearum x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ xxxxx xx 1 xx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 B);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít také XXX extrahovanou z xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx xx měly být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x umytých xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx xxx tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají se xxxx xxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x komplexních xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx byla xxxxxxxxxxxxxx xxx použití se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx se 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx xx umístí xx termobloku nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °C xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 min. xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg lysozymu/na 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně promíchá xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x promíchá, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx ledu xx xxxx 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Odstřeďuje xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx peleta x xxxxxxxx etanol.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na vzduchu xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx v 100 µx sterilní UM x nechá xx xxxx při pokojové xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx teplotě - 20 °X xx xx použití xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx pro xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx nehrozí xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx rovněž xxxxxxxx interní protokol XXX.

3. Do sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µl xxxxxxxx XXX xx 25 µx PCR xxxxxx xxxxx protokolů XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx zdroj XX xxxx xxx xxx, který byl xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx vzorku.

5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx se rozdělí xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx amplifikované XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxx-xxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) po xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx např. 302 nm) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Naštěpené xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX světlem xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, ale xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery specifickými xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) xxxxx, xx předpokladu, xx xxxx amplifikován x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx primerů XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx podezření xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx, zatímco xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx inhibici reakce, xxxxxxxx není získán xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více vzorků xxxxxxxxxxx kontrol, xx xxxxxxxxx xx kontaminaci.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx se xxxx xxxxx screeningový xxxx použije XXXX xxxx x je xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx IF xxxx. Když se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx vyšetřovací xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx X. solanacearum (dodatek 7). Xxxxxx testování xxxxx xxxxxxx by xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X solanacearum xx ml xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx uchován x xxxxxxxxx při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx extraktu xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx R. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (např. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) v 0,01X xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického kmenu xxxx jiného referenčního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu hybridizace, xxxxxxx zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 minut xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx xx 200 µx fixačního xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x inkubuje 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 minut xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X XX (viz dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X PB). Xxxxxxxxx roztok vzorku (49 µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá se xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x fixují se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx možné xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, pokaždé po xxxx 1 minuty. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx nasáklým xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx inkubací xx xxxxxx box x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45 °X po dobu xxxxxxx 10 minut.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx okénka (3 a 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx krycí xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx komory x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxxx xxx teplotě 45 °X v temnu.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx s xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechají xx xxxxxxxxx ve xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx sklíček.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx filtračním xxxxxxx. Napipetuje se 5-10 µx krycího xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Laboratories, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx každého xxxxxx x xxxx sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx ihned xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx zvětšením 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxx isothiokyanat (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky X. xxxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx morfologie s xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x zcela zbarveny. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, pokud je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech a xxxxx obvodu. X xxxxxx, kde xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx musí odpovídat xxxx xxx lepší xxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x úvahu.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxx zjištěny (xxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese několik xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x pelet ze xxxxxxxxxx partií bramboru xxxxx x výskytu xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx morfologií x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum, x když mnohem xxxx xxxxxxx xxx x xxxxx IF.

5. X xxxxx xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx infikované. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, pokud při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako volitelný xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX xxx jeho xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx použití XXX XXXXX xx obohacení x xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx xxxxxx setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx organismů xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx novou šarži xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx titru xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx se xxxx protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 ml homologického xxxxx R. solanacearum.

Vzorek, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím otestovány xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ až 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. xxxx NCPPB 4X56 = PD 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx výsledků xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx standardní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml x XXX R. solanacearum. Xxxxxxxxx kontrolní vzorky xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x xxxxxxxxx materiály, xxxxx xx používají xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Smith xx xx., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx na 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx redukovat xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx krycího pufru (dodatek 4) a směs xx promíchá.

3) Nakape xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x xxxxx se xxxxxxxxx 1 hodinu xxx teplotě 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx roztok se xxxxx x jamce xxxxxxx 5 minut.

5) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx protilátek xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxxx ředění (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx xxxxxxxxx alkalické xxxxxxxxx x blokačním xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx fosfatázy (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odečítá se xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po dobu 16 hodin.

2) Xxxxx xx třikrát dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µl xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx dvou xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxxx. Nechá xx xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx dobře xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví se xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx do xxxxx xxxxx x nechá xxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou v XXX. Přidá se 190 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx se inkubovat 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx x inkubuje se x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 nm xx odečítá v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXXXX

Xxxx ELISA je xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx jsou větší xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx průměrné xxxxxxx XX x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativním xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxx xxxxx proveden xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx ELISA x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován x negativním výsledkem (xxxxxxxx viz v dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost zjištění xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x x optimálních xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx však xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Janseho (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy rajčete (xxxx. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx citlivostí xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) ve xxxx třech xxxxxxx xxxxx x každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (xxxx. kultivar Xxxxx Xxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou xxxxxxxxxx), xxx jen xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. xxxxx až xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x lilku jsou xxxx výrazné x xxxxxxxx xx pomaleji. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít sazenice xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µl extraktu xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují se xxxxxx rostlin hned xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx dvěma xxxxx a pipetou xx xxxxx přibližně 5-10 µl suspendované xxxxxx na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se udělá xxxxxx xxx xxx 1 cm dlouhý x hluboký xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx řez xx xxxxx x místě xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx utěsní sterilní xxxxxxxxx x injekční xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, připravenou ze 48 xxxxxxxx kultury xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx, x peletovým xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny se xxxxxxx růst v xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x vysoké xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx jak xxxxxxxxxx, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x negativní kontrolní xxxxxxxx xx zcela xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx po xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx by mohli xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) a xxxxxxxxxxxx xx podezřelé xxxxx kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže během 3 xxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx se test XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z každé xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx všechny xxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Interpretace xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou získány, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx z xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny nevykazují xxxxx příznaky.

Biotest je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, jestliže testovací xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou se xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx xxx každý xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx fenotypové xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx aktivita +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Redukce dusičnanů +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °C -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx v 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx v xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx řada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx titr XX xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx ELISA

Poznámka:

Při xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx nepoužívá xxxxx xxxx metody xxxx xxxxxxxxxxx test.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 108 buněk xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. solanacearum.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx s xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy PCR

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml xxxxxxxx vody (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x uzavřených xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Xxxxxx mohou xxx uchovány při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx PCR x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx al. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Boudazin xx xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Identifikace xxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx v XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jestliže xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 hodin xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Janse, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx izolace X. solanacearum se xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx (viz dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení biovaru

R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx schopností xxxxxxx x/xxxx oxidace xxx xxxxxxxxxxx a xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 a Xxxxxxx xx al., 1990). Xxxxx xxxx xxx test biovaru xx xxxxxxx v dodatku 2. Xxxx lze xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx při xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda rozdělena xx sterilní xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx testy xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx a Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx R. solanacearum xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx něž xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx restrikčních xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989).

2. Repetitivní xxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx xx al., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplifikovaných xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf et xx., 1998).

6.2.7.3. Metody XXX

Xxxxxxxxxx primery PCR (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů patřících xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx patogenity.

1) Připraví xx xxxxxxxx o xxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kmen xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 náchylných xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx xxx teplotě 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez vystavení xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx typické xxxxxxx xxxx nastat xxxxx 14 dnů. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx X. solanacearum.

4) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx epinastie, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx vykazujících xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx asi 2 xx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx provede xxxxxxxxxx roztěrem xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 hodin xxx xxxxxxx 28 °X se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx kolonií xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx pro xxxxxxx x kultivaci

Živný xxxx (XX)

Xxxxx agar (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx složky a xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx x sterilují xxxxxx při teplotě 121 °C po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

pH 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-trifenyl-tetrazoliumchloridu (Xxxxx), xx do xxxxxxxx xxxxxxx koncentrace 50 xx na xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Základní xxxxx půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x xxxxx filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Sigma X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1 250 X (xxxxxxxxx 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 U (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx jiných xxx xxxx uvedených xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Bacto-Agar (Xxxxx) xxxx být použit Xxxxx Agar #1. X xxxxxxx případě xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to xxxx xxxxxx xxxx konkurenčních xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx tvořit o 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx světlejší x xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit populace xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 měsíce. Xxxxx s médiem xx měly xxx xxxx použitím zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxx připravená xxxxx xxxxx půdy xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxxx (viz dodatek 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 až 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Validované xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx SMSA (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx se příprava xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou půdu XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx a 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Wilbrink (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx tlakem xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx xx 50 °X. Přidá xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx roztok xxxx xxx xxxxxx xxxx SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx doporučují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' k xxxxxxxxx xxxxxxxx (tabulka 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxx je xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx fytobakteriologie XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx panel xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. solanacearum

Poznámka:

Spolehlivost xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x případě, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx kultur.

Tabulka 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Komerční standardizovaný xxxxxxxxx materiál

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ xxxxx xxxxxxx 2 R. solanacearum (xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Protože xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx ovlivněna xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx izolace x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx se 48hodinová xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx SMSA živné xxxx a xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx pufru, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx přibližně 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx z produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x které xx xx, xx xx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx pupkové xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx resuspendované xxxxxx. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x dalších xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx části z 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx získá 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Uskladní xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx PCR xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx sérii zkušebních xxxxxx.

Xxx XX a XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních rozborech XX, XXXX x XXX musí xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních kontrol.

Dodatek 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x rostlinných xxxxx homogenizací xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x autoklávu při 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Tento pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx byly odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx pufr xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x oplachování xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x xxxxxxxxx, pH 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx okénka xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx komerčně dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx pro xxxxx nepřímého testu XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx uhličitanový xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 g

NaH XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při teplotě 121 °X po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx roztok chloridu xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 g

KCI 2,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

3.3. PBS-Tween

10xPBS 100 xx

10 %Tween 20 5 ml

Destilovaná xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx substrát alkalické xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx voda 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví pH xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml roztoku.

4. Xxxxx pro xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX CO₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 g

Na₂HPO₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Diethanolamin 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx se x nastaví se xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x S/s,

kde X = plocha xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx i = xxxxxxxxxx pole (x rozmezí 8 - 24 podle xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (viz xxxxxxx 3).

1. Protokol XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX TCC XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx směs XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx při 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 30 xxxxxx xxx 72 °C (syntéza xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x X. solanacearum XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Ava XX xx xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx a Maisse (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx cga acg xxx gcg xxx x -3'

Xxxxxxxx primer Xx-2: 5'-xxx xxx xxx aca xxx xxx xxx ca -3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx v xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx UPW	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (frakce X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx polymerasa (5U/μl) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda byla xxxxxxxxxx použitím Taq xxxxxxxxxx Perkin Elmer (XxxxxXxx) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Taq Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx možná xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a iv).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx z R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. solanacearum xxxx velikost 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxx kontrolou (Pastrik xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx RS-1-F: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX CAT XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AGT CAC XXX XXX XXX X-3'

Xxxxx primer XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ACG XXX G-3'

Reverzní primerNS-6-R: 5'-XXX TCA CAG XXX TGT XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR 18S xXXX = 310 xx (sada primerů XX).

3.2. Reakční xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx při 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Rs-3-R: 5'-TTC XXX GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx obě xxxxxx xxxxxxxxxx xxx biovary 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) voda 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µl

Destilovaná (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 g

Destilovaná xxxx 1,001

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx komerčně xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Oligosondy

Sonda specifická xxx X. solanacearum XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX A NEVDECHNOUT. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 ml xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C a xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 kapek 1X NaOH x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx membránový xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (SDS) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx 1. Pro xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx dvojmo 2 různé vzorky) xx xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXX XXXXXXXX BEZPEČNOSTNÍ XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Poznámka:

Všechny roztoky xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo lilku (Xxxxxxx melongena) do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx s xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) xx přesadí xx pasterizovaného pěstebního xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Black Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., L. Xxxxxxxx xxx D.A. Stahl. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Directive 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Official Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, K. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx xxxxxxxx specific primers xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx to xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Caruso, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Double-Antibody Xxxxxxxx Indirect Enzyme-Linked Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx That Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Potato Tubers. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with DNA xxxxxx xxxx specify xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx response. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Hennessy, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx of xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. EPPO Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx a xxxx-xxxxxxxxx medium for xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Bacterial Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Agricultural Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Australia.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. and De Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx nitrate xxxxxxxxxx in xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Ushijima, X. Xxxxx, X. Xxxxxx, M. Kaleya-iwaki, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx viable xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx soli xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x XXX xxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) A xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx solanacearum in xxxxxxxxxxx potato tubers xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx fatty-acid xxxxxxxx. Systematic and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx to xxxxxx xxxxxxxxxx on x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Rudolph, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Methods xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Oxford. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, serological xxx xxxxxxxxx detection xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx with xxxxxxxxxx sequences and XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J. 1995. Differentiation xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX fingerprinting to xxxxxxx xxxxxxxx Xanthomonas xxxxxxxxxx xx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, B.W. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX primers xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Mol. Biol. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Sequence xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx of 16S-23S xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Jones, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Food and Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory guide xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx pathogenic xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Bacterium xx xxxxxxx 16S xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx xxxxxxxx. X. Gen. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Offord, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic diversity xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Xxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Grouping of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, X., Hayward, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx of xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx syzygii, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX gene xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Van Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, P.J.M., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, A., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Race 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx rep-PCR. Xx: Xxxxx, P., Allen, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx disease: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, S.A., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Boonham, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx autonated xxx xxxxxxxxxxxx flourogenic 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Beuningen, X.X. Janse and X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, which causes xxxxx rot xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx sihl hybridization xxxx 23s xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.