Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 zákona x. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zákonů, (xxxx xxx "zákon") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx šíření Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxx xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Spieckermann xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Smith) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rozsah xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx šíření x prováděla se xxxxxxxx opatření s xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx této xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis (Xxxxx) Davis xx xx. xxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx et al.,

b) xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, a xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - brambor (Xxxxxxx tuberosum X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx (Xxxxxxxxxxxx lycopersicum X.) xxxxx semen a xxxxx, lilek xxxxxxxxx (Xxxxxxx dulcamara L.) x ostatní xxxxxxxx x čeledi lilkovitých (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - průzkum xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxx xxxx x určité xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx rozsahu a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx způsobu xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx území, xx xxxxx se xxxxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé hniloby - xxxxxxxxx z xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x rostlině, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo jejich xxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx materiálu, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxx x území, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx xxx "xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx"), xx které xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) bezpečnostní xxxxx - xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx z jedné xxxxxxx xxxxxx; přitom xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, které xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx z xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx systematický xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx materiál bramboru²⁾ xxxxxxx z České xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx xxxx (dále xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx původem x Xxxxx republiky a x xxxxxxxxx členských xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx vypěstované v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 písm. c).

(4) Xxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx dovážených xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx podléhají

a) xxxxxxx dovážené xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ x namátkově xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxx zemí.

(5) Xxxxxxxxxx průzkumu xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx zdroje xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx xx zpracovatelských podniků, xxxxx průmyslově xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx odpady x těchto xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx průzkumu xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx, odkud tyto xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx uvedených v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx nebo xx xxxxxxx, x případě xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx také xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx vhodnou xxxx x následným xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků rostlin x příznaky xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pobřežní vegetace x případě uvedeném x odstavci 5 xxxx. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx prohlídky xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx, prováděném xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, rozsah xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx o xxxxxxxxxx x testovaných xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx x systémům xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x v závislosti xx aktuální xxxxxxx xx xxxxxxx anebo xx míře xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Státní xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx provádí způsobem xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 lze xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, pověřenou x xxxx činnosti Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §72 xxxx. 5 xxxx. x) xxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxx zbytečného xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, která xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxx xx oprávněna xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxx kontrolnímu x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 části X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx potvrzování xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx členskými xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx o xxxxxxxxxxxxx x výsledcích xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx vztahují xxxx x produkci xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Opatření při zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) rostlinolékařskou xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních xxxxxxxx napadení xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx rychlého xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx pod xxxxx xxxxxxxx způsobem stanoveným x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx rostlinolékařská správa x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 xxxxxx x zvláštního xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ zajistí xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa zahájí xxxxxxxxxx po xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx šetření xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx za účelem xxxxxxxx původu xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx kterých byly xxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které xxxx podrobeny opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx vylučuje xxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx x v objektech xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo, x případě původce xxxxx xxxxxxx, povrchových xxx původem x xxxxxx členského státu xxxx v některém xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxxxx úřední rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx může Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx opatření podle xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxx s §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx x aktuálním xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx a xx způsobu pěstování, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx zamořené xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx části x veškeré xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx výměna pěstebního xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x odkud xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx zaměřené xx xxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření a xxxxxxxxx zdroje nákazy x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 včetně xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných partií xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 x stanoví x souladu x xxxxxxxxxxx bodu 2 přílohy č. 3 rozsah xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx posklizňového kontaktu, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx pěstitelské xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx zamořených xxxxxxxx xxxx xxxxxxx podle xxxxxxx a) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stanovení rozsahu xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxx rozšíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx x doprovodné xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx zavlažování, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx mohlo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxxxx správa

a) xxxxxxx xxxxxx laboratorní testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xx vhodných xxxxxxxxx x cílem xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) označí x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x níž xxxx xxxxxxxxx vzorky, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx zamořenou xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx stanovení xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle bodu 3 přílohy č. 3.

(3) Rostlinolékařská xxxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi x xxxxxxx x ustanovením xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby podle xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. b), x sdělí xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx členský xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky v xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx území, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Rostlinolékařská xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxx 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 odst. 2 xxxxx dohledaných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x), v xxxxxx případě však xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx potřebném ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx označí xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xx zamořené, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x xxxxxxxxxxxx zónu xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a), x) a x).

§7

Opatření xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxxx být xxxxxx x pod xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx x xx xxxxxx způsobem xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, xxxxx rostlinolékařská xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx neexistuje xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správy xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx rozšíření xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx zpracování xxxx xxxxxx, x xxxxx není xxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, stroje, dopravní xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx uvedených x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto objekty x předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nepovažují,

d) x karanténním území x bezpečnostní xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. c), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx x případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 a v xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx proti xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxx uvedená x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx odborně xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x o xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx xxxx sděluje xxxxxxxxxxxxxxxx správa xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx §76 odst. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská opatření xxxxxxxx podle odstavce 1 x odstavce 2 xx jejich xxxxxxx x xx xxxxxxxx xxxx stanovené x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx výskytu ani xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, musí xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v rámci xxxxxxxxxx průzkumu podle §3 xxxx. 2, x rozsahu xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx prostým xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Testování xxxxx xxxxxxxx 1 xx v příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx partií rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx v xxxxxxxxx uplynulém xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx potvrzen xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx partií základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů a xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ nebo xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx partií xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x množení x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky.

§9

Účinnost

Tato xxxxxxxx nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x vyhlášce č. 331/2004 Xx.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx a rostlinách xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pro xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních materiálů xxxx uvedeny x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění karanténního xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxxxx podmínek s xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx podmínek xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx parametry musí xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx metod.

Zcela xxxxxxxx je příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx správné xxxxxxxxx, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, pečlivé zacházení x xxxxxxx x xxxxxx uchovávání a xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx kontaminace mezi xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx kontrol xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx kvality, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx při označování x v xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x výskytu, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx pozitivní výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx xxx xxxxxxxx druhý screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx infikovaný xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx pozitivní XX xxxx podle §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu potvrzený xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx rychlý screeningový xxxx, xxxxxxx patogenu x infikovaného xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX test (oddíl 5).

(3) Ačkoli izolace xxxxxxxx z xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxx roztíráním xxxxxxxx xx média není xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx izolačním médiu. Xxxxx xx doporučuje xxxxxxxx neselektivní x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx biotest (xxxxx 7).

(4) Popis xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx bramboru

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, z nichž xxxxx je xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, potvrzením, xx xxxxx kultura xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x tomu, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v každé xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup lze xxxxxx x na xxxxx počet, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.1.

(3) Xxxxx jsou alespoň xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx tento xxxx xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx tento xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Pokud je xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

(4) Test xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx monoklonální xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx validovaná XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Selektivní xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx v xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx za xxxxxxx XXXX média xxxx XXX-88 xxxxx x ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní xx xxxxxxxxx na xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vyčistit x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx využití xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx části, xxx xx xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se kultivační xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Bakteriální inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na MTNA xxxx NCP-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx nebudou (xxx xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx stejného xxxxxx x x případě xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx podezřelých xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx testů xxxxxxxxx x oddílu 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 10.

1.3. Postupový diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddílu 3.2.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx různých biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx nejméně xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, je vzorek xxxxxxxxx za negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx nebo další xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx morfologie xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) IF xxxx je xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx nebo inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx chorob, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Příznaky vadnutí xxxx velmi xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx; vadnutí je xxxxxxx pomalé x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx listů. Mladé xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx mají xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, listy x dokonce xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxx x xxxxx pouze xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx sklovitost nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx v okolí xxxxxxx xxxxxxx, zejména xxxxxx xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy xxxx mít xxxxxxxx xxxxxx zbarvení xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx je xxxxxxx zabarvení prstence xxxxxxx xxxxxx a xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příznaky xx xxxxxxx xxxx v xxxxx stádiu xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx být xxxx příznaky xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X postupem xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx část xx může xxxxxxx xx xxxxxxx korové xxxxx. V pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na povrchu xxxxx xxxxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. X poslední době xx v Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx s prstencem xxxxxx cévních, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx houbová xxxx bakteriální xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být xxxxxxx, xx-xx nemožné, xxxxxxxx pokročilé příznaky xxxxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxx bramboru. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové stránce xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx množství xxxx xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x dispozici xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace xxxxx níže uvedených xxxxxxxxxxxx metod je xxxxxxxx xx testování xxxxxx o xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxx xxxxxxx bramborový xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku:

Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx dezinfekční prostředky (x obsahem xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx vzorkem. Hlízy xx nechají oschnout xx vzduchu. Tento xxxxxx mytí je xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx, že xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx a jestliže xx xx xxxxxxxx XXX test xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Pomocí xxxxxxx a dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx nožem xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na pupkovém xxxxx každé hlízy. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx výkrojky xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx brambor. Na xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx. Xx odebrání xxxx xxx výkrojky x xxxxxxxxx konců xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx konzervovány xxx -20 °C xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx a xxxxxxx xx odděleně.

Pokud xxxx xxx vyříznutí výkrojku x pupkového xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx nechají korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx ve vzorku xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxx nádoby xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx vyčištěny x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, pokud xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx v xxxxxx xxx xxxxxxx pufru, x chladu xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x růst xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakterie xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx zalijí dostatečným xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx x xxxxxx nebo xxxxxxxxxx x utěsněném jednorázovém xxxxxxxxxx sáčku xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx učinit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (nože) x xxxxxx. Pokud má xxx xxxxxx XXX xxxx, je nutno xxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádoby nebo xxxxx zařízení, doporučuje xx drcení x xxxxxxx na jedno xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxx zakalený, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxx (xxx maximálně 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx vakuovou xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx peleta x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µl xxx xxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) k 500 µ1 referenční xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx části vzorku, xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (týdny) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°C.

Opakované zmrazení x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx extraktu, zajistí xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Je nezbytně xxxxx, aby se xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x vzorky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx platí x pro sklíčka xx IF testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx bramboru

Poznámka.

Pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx vhodný xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 částí xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx průzkumy, xxxx xx být založeny xx statisticky xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Pomocí xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx spodní xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx země.

Části xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, okamžitě osuší xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx v xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx se zpracují xxxxxx x následujících xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx okamžitě rozdrtí x xxxxxx maceračním xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) za použití xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx se xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx nebo xxxxxxxxx 24 hodin xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po xxxxxxx, které má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx koncentrace bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx odstředěním xxxxx xxxxxx v oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Čistý xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx během xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhá xxxxxxxx se xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °C (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx xxxxx testování.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx lF xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, protože xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx být xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX použije xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x jeho xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx další xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud xx xX test xxxxxxxx xxxx hlavní xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx může xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx známému kmenu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx NCPPB 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx je xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (FITC) podle xxxxxxxxxx výrobce. Nezpracované xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx by xxxx xxx XX xxxx xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx protilátky xxxxxxxx x xxxxxxxxx ředěni (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx stránku http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. V xxxxxxx potřeby xxxx xxx xxxxxxx proveden xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 minut při 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx peletového pufru. Xx xxxxx xxxx xxxxx, zejména xxxxx xxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x nepovinně v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx podložním xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Použijí xx mikroskopická xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx test xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx test xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx standardní xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx vhodné 15 µx - pro xxxxx okénka xxxxx xxxxx) roztoku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx se napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Druhou xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxx 1.

b) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxx standardní množství (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx vhodné 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 a xxxxxxx xxxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 až 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx fixují na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), xxx plamenem xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx potom xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx zmrazená x xxxxxx boxu xx co xxxxx xxxxxxxxx dobu (maximálně 3 měsíce).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx protilátky x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (T) x dvojnásobný xxxx (2X).

x) Podle přípravy xxxxxxx na xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Xxxxxxxx xxxxxxx se uspořádají xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx musí xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.3. Setřesou se xxxxx xx všech xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx se xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, které by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Zakrytá sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx xx sklíček a xxxx xx opláchnou x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx 0,1M xxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx krycí xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx IF testu

4.4.1. Xxxxxxxxx sklíčka se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx nebo xxxxx inversí xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Zkoumají xx xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx obarvené x určeném xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (oddíl 4).

4.4.2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx buňky s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x testovacích xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v úvahu.

Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X peletách z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx mohou vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění protilátek xxxxx oddílu 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx:

x) Při zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne průměrný xxxxx typických xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x vzorků, kde xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx nutné.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX test x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx proveden IF xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a je xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx diagnózy nutné xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx specifické xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx extrakty, ale xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx extraktu xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx ml (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx PD 406) x 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolními vzorky xxxxxxxxxxxxx kmene nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx suspendovaného x xxxxxxxxxxx extraktu podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provádí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Fixace xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx noc xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X PB x 50 µx 96 % etanolu. Xxxxxxxx se protřepáním x xxxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X xx xxxx 30-60 minut.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx po xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 g, odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx suspenze xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °X po přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, odstraní xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx se stejné xxxxxxxx 0,01 X XX a zamíchá xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx sušičkou xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x xxxxx při xxxxxxxx teplotě.

5.2. Xxxxxxxxxxxxxxx x hybridizace

5.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Sigma L-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, ale měl xx xx xxxxx xxxxxx zmrazit a xxxxxx roztát. Xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) xx xxxxx xxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx sériích 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Xxxxxxxx xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx vzduchotěsné xxxxxxx xxxxxxxx xxxx filtračním xxxxxxx xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X po dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 sklíčko x xxxxxxxxxxxx se po xxxx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx hybridizačního xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxxxx xxxxx komory x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x xxxx xxx xxxxxxx 55 °X v xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx se 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix x 833 ml XXX). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje xx vodní lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx xx inkubovat dalších 15 minut.

5.2.11. Xxxxxxx xx ponoří xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x celé xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro epifluorescenční xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx olejovou xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx většiny xxxxxxxxxxxxxxx buněk) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx zbarveny. Xxxx XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Prohlíží xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, se xxxxxxxx nejméně 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x okénkách testovacích xxxxxxx (viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx vykazují xxxxxx fluorescenci, se xxxxxxx v úvahu.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx ve skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx sklíček.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s velikostí x morfologií podobnou Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, ačkoli mnohem xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX filtru xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x žádných xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x typickou xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx považují xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

b) Xxxxxxxx XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX xxxx. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx se doporučuje xxx tehdy , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx a xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx s interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou XXX. XXX xxxx xx měli xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX ze vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx ve vodě x virulentního izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx také XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty xx xxxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxx bez xxxxxx. X případě xxxxxxx XXX testu xx xxxxxxx připravit xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx materiál xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a jiných xxxxxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx cílovou XXX x extraktu xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx optimalizována xxx použití x xxxxxxxxxxx metodou PCR, xxxxxxxx v dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Napipetuje xx 220 µl lýzového xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx o xxxxxxx 95 °C xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxxxx xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx xx 1 xx v 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx dobu 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µl Xxxx XXXX xxxxxx A (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx se 100 µx Easy XXXX roztok X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxx xx třepáním, xx xx viskozita xxxxx x xxxx xx xxxxx homogenní.

8. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 x po dobu 20 minut xxx 4 °X xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15 000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx při 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX speed xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx stát xxxxxxx 20 minut xxx pokojové teplotě.

16. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx -20 °X xx xx upotřebení xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx se xxxxxxxx odstředěním a xxx XXX xx xxxxxxx 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, že xxxx xxx purifikaci XXX x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx efektivní.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx PCR x xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx protokol XXX xx multiplexová xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx kontrolu XXX.

6.2.3. Xx sterilních XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní xxxxxxxxx xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx UPW, xxxxx xxxx xxxxxxx do xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx testování x xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku xxxxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx ladder.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 mg xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření pro xxxxxxxxx s tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. U všech xxxxxx nálezů se xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu a xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxx:

XXX xxxx xx negativní, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx vzorcích (x xxxxxxx vícenásobné PCR x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx s daným xxxxxxx).

XXX test je xxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx se xxxxxxxx), xx předpokladu, že xxxxx amplifikován žádným x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx PCR xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx amplikon xxxxxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujícího Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x pozitivní kontroly x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx kontrolami PCR x inhibici xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl xxxxxx xxxxx x xxxx amplikonů.

Lze mít xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán z xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx zkoušek.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx k xxxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx xxx očekávat xxx xxxxxxx xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx však xxx xxxxxxx použít x na extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -68 xx -86 °C.

Některé xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx pro xxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaků x poskytují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx optimální xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx o xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Peleta xxxxx 3.1.5. xx rozdělí xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny xx fázi 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx třetího pravého xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety i xxxxxxxxx inokulaci, bude xxx níže xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx zářezem X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podepře (xxx xxxxxxxxx o xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx o xxxxxxxxx 5 cm xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx vzorek xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx pravým xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx řez xxxxxx 0,5 až 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx se přidrží xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx skalpelu a xxxxxx se xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Řez xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx držené xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx děložní lístky x první xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (v xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 cm x xxxxxxx přibližně xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx začne v xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx injekční xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx rostliny lilku xxx před xxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

7.4.2 Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx známé xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Po xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 18-24 °C. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx vlhkosti (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxx xxxx vadnutí xxxxx xxxxxxxxxx vody. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx rostliny xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx růstové xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx místa xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx zacházení x xxxx. Xxxxx xxxx xxx rostliny xxx xxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx vhodnými xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x jiné xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx ke xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx x xxxxxxx komory xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx bakterie x jednoho vzorku xx druhý.

7.8. Pravidelně xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx působí u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx může xxxxx xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Povadlá xxxxx mezi žilnatinou xxxxxx často xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx žlutý xxxxx. Xxxxxxxx xxxx neodumírají; xxx xxxx trvá xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx xx přežití. Xxxxxxxx xxxxx infekci xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxxxx vůči xxxxxx xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx rostliny xx xxxx xxx listů x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx hub přítomných x xxxxxx x xxxxxx hlízy. Patří x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x X. carotovora xxxxx. atroseptica, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, xxxxx i xxxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxx případy xxxxxxx xxx odlišit od xxxxxxx xxxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx se xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx rozliší Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx od Xxxxxxx xxx

7.9. Xxxxxxx xx xx lilku vejcoplodém xxxxxx xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Povrch xxxxx x stonků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Provede se xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a xxxxxxx xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) xxxxx (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (viz xxxxx 9 a 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx podmínky xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx zůstává x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx dokonce x xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx a potvrdí xx patogenita (viz xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus

Diagnóza xxxx být potvrzena xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx x xxxxx identifikován. Xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx organismem, xx xxxxx ho xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx stonku (3.2). Přímá xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx je možná xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx výsledek x xxxxx TF/PCR složených xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Pokud xx xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx oddílu 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xx xxxx před xxxxxxxx x testování xxxxxxxxx xxxxxx přezkoušet xxxx xxxxxxxx xxx růst xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxxxxxx xxxxxx v peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx se obvykle xxxxxxxx kvůli xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx vypláchnout xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x xxxxxx 1/100 až 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx určených x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v xxxxx xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus pro xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci xx xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; inokulace x xxxxxxxxxxxx by xx xxxx provést xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx přerostlá, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx rozetřou xx jedno x xxxxxxxxxxxxx médií (xxxxxxx xxxxxxx v dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (xxxxx xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce xxxxxxxxxxxxxx roste xxxxxx x obvykle xxxxxxx xxxxxxx velikosti xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxx čistoty. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx nebo xxxxx xxxxxxxxx, někdy xxxxx, xxxxxxxx, hladké, vyvýšené, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, s xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) může pomoci xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx (xxx oddíl 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx pravděpodobné xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických principech.

V xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlastnosti. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx inkubovat při 21 °X x xx xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo x žádnému xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx nejvýše 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí xxxxxxxxx kontrolu xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx agaru. Morfologická xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxx x kultur x živného xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Očekávaný výsledek

Oxidačně-fermentační (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx slabá

Růst xxx 37 °X -

Xxxx x 7% NaCI -

Xxxxxxxxx želatiny -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx dvojnásobného xxxxxx vhodného xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxx lF titr xxxxxxx odpovídá xxxxx xxxxxxxxx kontroly.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na ml xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx v uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 100 °X xx dobu 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx může xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Xxxxxx lze xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 až -24 °X až xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx specifických amplikonů xx použijí xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx a xx Xxxx, 1995; Mills x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Schaad a xxx., 1999).

d) Identifikace Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx jsou amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX test

a) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx pozitivní, xxxx-xx xxxxxxxx stejné xxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Test XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx identický x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Anteiso, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x přítomnosti Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxx rody xxxx Curtobacterium, Arthrobacter x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxx xxxxxxxxx ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x UPW.

b) Provede xx xxxx postupem xxxxx Smith a xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx virulence xxxxxx identifikovaných jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx z 3-xxxxxxx kultur xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 stonků xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °C xxx xxxxxxxxxxx světle x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X čistých xxxxxx xx mělo xxxxx 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, avšak xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky xxxxxxx, xx se xxxx inkubovat xx 3 týdny xxx xxxxxxxxx příznivých xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx nepřesahujících 25 °X. Xxxxxxxx se xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx provádí x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx odstraněním xxxxx xxxxxx 2 cm xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx. Izoluje xx xx suspenze rozetřením xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 xxx xxx teplotě 21-23 °X x xxxxxxx xx vznik xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Gesundheit und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Science Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Station xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Bundesanstalt	Kleinmachnow	Německo
Pflanzenschutzamt Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Dienst	Wageningen	Nizozemsko
Norwegian Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx de Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Příprava xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx kultura xxxxxxxxxxxx xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 nebo XX 406) xx xxxxxxxxx xxxxx MTNA x xxxxxxxxxx xx v 10 mM xxxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxxx xxxxxxx přibližně 1 xx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx xx obvykle xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx slabě zakalené xxxxxxxx odpovídající xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx odeberou x xxxxxxxxx konců 200 xxxx odebraných x xxxxxxxx odrůdy s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx výkrojky xx xxxxxxxx obvyklým xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx se 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µl suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X následujících xxxx mikrozkumavkách se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx z 100 µx xx sterilních xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 ml, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx každého xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx PCR xxxx xx xxxxxxx extrakce XXX z pozitivních x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních vzorků.

Pro XX a FISH xxxxx se provedou xxxxxxxxxxxxx rozbory xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx v nejméně x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pufry xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k extrakci xxxxxxxx x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Složky xx rozpustí, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx prostředek (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxxxxxx

1.2. Peletový pufr (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx resuspenzi x xxxxxx extraktů z xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 k xxxxx xxx IF.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx sklíček xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) nebo Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx lF x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx se počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx pole xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx pole xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = koeficient xxxx (x rozmezí xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X - zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (N).

N = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = objem xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx X. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Nutrient xxxx = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Živný xxxxxxxxxx xxxx (Nutrient xxxxxxxx xxxx = NDA)

Difco xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx sterilizace x autoklávu při 121 C xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	10,0 g
Baktoagar (Xxxxx)	15,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx medium = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 g
KH2PO4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Validovaná xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx z XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 g
Manit	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 g
Destilovaná xxxx	1,00 x

Xxxxxx se rozpustí, xX xx upraví xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (při 121 °X po dobu 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx přidají xxxxxxxxxxx: trimethoprim 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx antibiotik: trimethoprim (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 mg/ml) x 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Sigma) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního média xx 3 xxxxxx. Xx přidání antibiotik xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x chladu do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx NCP-88

Živný xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx,xxxxxx xx pH na 7,2. Xx autoklávování x ochlazení na 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx B sulphate (Xxxxx) 0,003g, nalidixic xxxx (Xxxxx) 0,008 x, cycloheximide (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 M XxXX, xxxxxxxxxxxx v 50% xxxxxxx, polymyxin X xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx je 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx vykazovat žádné xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky xx skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX protokol s xxxxxxx PCR xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xx aa -3'

xxxxxx XXX-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx ctt ccc x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- gag xxx xxx aca xxx xxx tga xxx -3'

xxxxxx NS-8-R 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x DNA X. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx velikost amplikonu x interní PCR xxxxxxxx 18S xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx voda (XXX)	15,725 μx
10x PCR xxxx (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx d-n TP (20 mM)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx PSA-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer XXX-X (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx polymeráza (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Elmer (XxxxxXxx xxxx Gold) x Xxxxx XXX.

(²) Koncentrace xxxxxxx XX-7-X x XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x purifikace DNA xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 xxxx. a) a 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx třepáním xxxx xxxxxx xxxxxxxx izolace XXX xx xxxxx xxxx optimalizace xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Reakční xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx následujícího xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx při xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx teplotě 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 minuta při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

xx) 30 sekund xxx teplotě 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 minuta při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx kopie)

1 xxxxxx xxxx) 5 minut xxx teplotě 72 °X (závěrečná xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), xx), v), vi) x xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx z XXX C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx produkuji xxxxxxxxxxxxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx s enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C po xxxx 30 xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx specifického xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 bp.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 g

Destilovaná xxxx 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx specifická xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx vody (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (UPW)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx po xxxxxxx 5 kapek 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx míchadlem.

ii) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 M (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx HCl xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X PARAFORMALDEHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX pH!]

iii) Roztok xx přefiltrujte přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx použití.

iv) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % etanol.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 mM (pH 7,4)

XXXX (sterilizovaný přes xxxxx a autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle xxxxxxx v xxxxxxx. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

Tabulka: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsi

	2 sklíčka	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx XXXXX301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx xxxxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Během xxxxxxx xx nutné xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého

Semena lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x plně xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx by xx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, pokud xx xxxxx;

Xxxxxxx: den: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx violeti

Rozpustí xx 2 g xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx se 0,8 x xxxxxxxxx amonného x 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx jódový xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx společně xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Nasypou xx do vody x xxxxxxx xx x xxxxxxxx nádobě xx rozpuštění.

Safraninový xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 x

95 % etanol 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx se.

Ředění: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví xx xxxxxxx, xxxxxx xx xx vzduchu x xxxxxx se xxxxxxxx.

2. Sklíčko xx xxxxxx roztokem xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Krátce se xxxxx pod xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx jódovým roztokem x nechá xx xxxxxxx po xxxx xxxxx minuty.

5. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx se pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx dlouho, xxxxx xx vyplavuje xxxxxxx, xxxx ponořením za xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx savým xxxxxxx.

8. Xxxxxx xx safraninovým xxxxxxxx x nechá xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx zbarví fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Xxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx of xxx xxxxxxxxx and diagnosis xx the xxxx xxx bacterium Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx EUR 11&xxxx;288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx study of xxxxxxxx from xxxxxx. Xxx. Pl. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx extraction xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx methods xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. a Leifson, X., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. J. Bact., 66, 24-26.

6. Xxxxx, X. X., 1991. Xxxxx- and intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x X. Xxx Vaerenbergh. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX method xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., č. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, H. x X. Rudolph, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x D. X. Sands, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. A., 1966. Xxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., E. Xxxxxxx x A. X. Xxxxxxx, 1966. A xxxxxxxxxxxxx scheme for xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. a X. X., Xxxxxx, 1976. Xxx detection xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx onicum (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) xx xxxxxx stocks. XXXX Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx detection of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Phytopathology, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., W. x X., W. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx unique XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx hybridization. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, K. -X. x R.A. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subspecies xx xxxxxxxxxx xxxx reaction-based xxxxxxxxxx. J. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Detection xx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. S., 1959. Xxxxxxxxxxx studies on xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxx Xxxxxxxxxxxxxx. Mem. Cornell xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, W., Berthier-Schaad, X., Sechler, X. x Xxxxx, X. (1999) Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X guide xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx the xxxxxx xx bacteria. 2xx xx., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Baltimore.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, J; Xxxxx, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx solanacearum primer xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. xxx X. G. Xxxxxxx, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx working xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. International Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. A.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x A. D. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, which xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, by xxxxxxxxxxx xx xxxx hybridization xxxx 23s rRNA-targeted xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx postupové xxxxxxxx xxxxxxxx různé xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum ve xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, x xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX ZÁSADY

Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx v dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx organismu x xxxxxxxx xxxxxxx životaschopných xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx pracovat xx vhodných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx zajišťovat xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx vybraných metod.

Zcela xxxxxxxx je přesná xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx správné xxxxxxxxx, údržbu a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s činidly x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx být uplatněno xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx se zabránilo xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, zvláště při xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x výskytu, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z diagnostických xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) musí xxx potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření na xxxxxxx R. solanacearum x musí být xxxxxxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření potvrzeno x musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za infikovaný X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx přítomnost xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. solanacearum x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x bakteriálního vadnutí (Xxxxxxxxx solanacearum) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxxx vodivého xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx v oddíle 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx IF xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Test PCR xxxxxxxxxxxxx slizu suspendovaného xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx v oddíle 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx se xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx se xxx každý xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (viz xxxxxxxx v diagramu 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x izolační testy xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ až 10⁴ xxxxx/xx resuspendované xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx x na xxxxx xxxxx, jestliže 200 hlíz není x xxxxxxxxx.

2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován za xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je test xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán v xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx v oddíle 6.1.4.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx selhat z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx opakovat xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vodivého xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx s xxxxxxx xxxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, rostlin xxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.1.

3) Pokud xxxx alespoň xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že xx test pozitivní, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxx-xx xxxxx nebo xxxxx testy negativní, xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

5) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test FISH xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxXxxx, x kterých xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx o X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Diagnóza xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Příznaky x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx xxxx xxxxxxx x polních podmínkách xx rozpozná vadnutím xxxxx xxxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Dochází také x ohýbání listů xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx nevratným a xxxxx kolapsem x xxxxxxxx rostliny. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků zvadlých xxxxxxx xxxxxxx vytéká xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nebo xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx ponoření xxxxxxxxxx stonku svisle xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx slizu.

Hlíza xxxxxxxx. Xxxxx bramboru xx třeba překrojit xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx pozná xxxxx láhvově xxxxxxx xx xxxxxx hnědého xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx x odumření xx xxxx rozšířit do xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x z xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, na xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx xxxxxx nejmladších xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx vlhkosti) xx xxxxx několika xxxx xxx rozvine xxxxxxxx xxxxx směrem xxxx x xxxxxxx xx xxxxx straně xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxx končí xxxxx xxxxxx odumřením. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogena (xxxxxxx xxxx méně xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik nevadne, xxx xx stonku xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx postranních xxxxxx.. Xx možné xxxxxxxxx vodou nasáklé xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx odumírání xxxxxxx xxxxxxx. Při příčném xxxx xxxxxxx vylučují xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxx pozorovány příznaky xxxxxxx, pokud teploty xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx není xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. nigrum xxxxxxxx x nemocné xxxxxxxx bramboru nebo xxxxxxx). Xxx vadnutí xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxx. Nevadnoucí rostliny X. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx a xxxxxx ve vodě, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxx spodní xxxxx stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. Z xxxx xxxxxxx svazků xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx do vody, x xx i xxx absenci příznaků xxxxxxx.

2.2. Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx napomoci předběžné xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxx nebo více xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx černí (viz xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testy (Viz xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími vhodnými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx IF (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx oddíl 6.1.8.) xxxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx zbarveného xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx x cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx se x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxx se 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx suspenze.

c) Xxxxxxx xx 50-100 xx suspenze x xxxxxxx xx universální xxxxxx půdu (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) a/nebo Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx biovar 2 x xxxxxxxxx kontrole.

d) xxxxxxxx se 2-6 xxx xxx teplotě 28°X.

- Xx universální xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní kolonie, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve středu. Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx máslovité xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Kelmanova xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx malé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx xxxxx červené.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x bodu 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx ve vzorcích xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx detekci x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Postup xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, pokud xx x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx všech níže xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 hlíz.

- Xxxxxxx bramboru popsaný xxxx může xxx xxxxxx použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním na xxxxxxx xxxxxxx všech xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu. Xxxxx xxxxxx mytí xx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, když xx xx vzorcích xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xx být xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xx zeleninu xx odstraní slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, tak xxx xxxx viditelné xxxxxx pletivo. Opatrně xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx pupkovém konci. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky hnědé xxxxxxx se dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou hnilobu, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx hlízy xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx naříznuté xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx uchovávají po xxxx xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx hlíz x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být uchovány xxxxx přílohy XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x pupkové xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Nejlépe je xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx to možné, xxxxxxxxxx xx v xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx pokojové xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx teplotě nižší xxx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (např. silný xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150mm x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx procesu. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí čerstvě xxxxxxxxxxx xxxx (ostří) x nádoby. Při xxxxx PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nádobách xxxx x mlecím xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx doporučuje xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx xxxxxxx odstřeďováním (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr se xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X x odstraní xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta se xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx se 500 µx pro X. xxxxxxxxxxxx, 500 µx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Xxxxx se sterilní xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (v/v) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx části xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxx xx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (měsíce). Extrakty xx uchovávají během xxxxxxxxx xxx teplotě 4-10 °X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx s doručením xx 24 až 48 xxxxx.

3.1.1.6. Je xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní kontroly x vzorky R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x optimalizovaných xxxxxxxxx xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Postup xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 stonkových částí. Xxxxxxx-xx se průzkum, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku zkoumané xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx 1-2 xx xxxxxx kousky xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové sazenice x xxxxxxxxxxxx: Čistým xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxx stonku xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x pole xxxx skleníku: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx uříznutý hned xxx spojením x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 xx xxxxxx díl x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx 1 cm xxxxxx xxx x xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. X xxxxx xxxxxxxxxx (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx rostoucích xx xxxx se odeberou 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx nebo oddenků x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx xxxxxx oblasti xx doporučuje testovat xxxxxxxxxxx representativní vzorek x počtu nejméně 10 xxxxxxx na 1 vzorkovací místo xxx každou potenciální xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, léta x xxxxxxx, ačkoli xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx xxxxxxx po xxxx xxx x xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx patří xxxxxxxx rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, S. xxxxxx, Datura stramonium x xxxxx zástupci xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx rodu Xxxxxxxxxxx xxx. a Portulaca xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex hastata, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx parviflora, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx alba. X. xxxxxx., Tussilago farfarra x Xxxxxx dioica.

Poznámka:

V xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx s xxxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují 70% xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxxxx části xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 hodiny xxx xxxxxxx do 24 °C xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx možné, xxxxx se xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxx na 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx teplotě (18-25 °X) xx 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx trvat 15 xxxxx, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Další xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není třeba, xxx lze xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. až 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx rozdělí xx xxx xxxxxx díly. Xxxxx xxx se xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) xxxxxxxxx glycerolu xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx případné xxxxx testování.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x xxxxxxxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xx vodě

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené postupy xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx koncentrace xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx zvětšuje populaci xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx x doporučuje se xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx v oddíle 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx

Xxxxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxxx detekce xxxxxxx x xxxxx xxxxxx je použitelné x xxxxxxx patogenu xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx x testování xxxxxx xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Očekávaná xxxxxxxxx xxxxxxx se xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx selektivní xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, kterých je xxxxxx xxxxxx více x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx níže xxxxxxx xxxxxx předpokládá xxxxxxx xxx 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx vodě bude xxxxxxxxxxxxx podstatně xxxxx. X xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx po xxxxxxxxx xxxxxxxx čistícího xxxxxxx (xxxx. sedimentace xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, že se xxxx schéma xxxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx jeho xxxxxxx při xxxxxxx x podobnému mapování x odpadní vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °C.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx období xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením vlivů xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx dojít xx značnému zředění x xxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx v blízkosti xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích místech xx xxxxxxxx vzorky xxxx xx sterilních xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx použití, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xx xxxxxxxx vzorky x xxxxx výtoku xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 500 xx. Je-li xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3krát xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx dílčí xxxxxx o velikosti xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx x vzorkují se xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 hodin.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, může xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Odstřeďují xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 minut (xxxx 7000 g xx dobu 15 xxxxx), xxxxx možno xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx nad usazeninou x resuspenduje xx xxxxxx x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x následným xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x zachycením xxxxxxxx. Tato xxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx objemy vody, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace se xxxxxxx xxxxxxxxxxxx u xxxxxx vody ze xxxxxxxxxx brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní izolační xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX testy xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx podezření xx vliv xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx zředění xxxxxx.

(7) Spolehlivá identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solanacearum se xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxx, ale může xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx vzorků xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se mohou xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxxx spolehlivosti xxxxx získaných xxxxxxxxxxx xxxxxxxx a také xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tohoto xxxxxxxxxxx schématu. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx půdě xx xxxxxxxxxxx náchylné xxxxxxxxxxx rostliny a xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při použití xxxx metody xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx xx shromáždí 0,5 xx 1 xx xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 ha x hloubky 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx míst xx 120 z plochy 0,3 ha. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx xx zpracování brambor x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx kalu. Xxxx xxxxxxxxxx se xxxxx vzorek dobře xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g půdy xxxx kalu se xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 xx./xxx) v 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 hodin. Xx-xx xxxxx, přidání 0,02% sterilního Tween-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků může xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx testů xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Optimalizované protokoly xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testy

6.1.1. Xxxx xx xxxxx slizu xx stonku

Přítomnost X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx výskytu: xxxxxx se xxxxxx xxxxx xxx úrovní xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx do xxxxxxxx s čistou xxxxx. Xxxxxxx xx, xxx xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx cévních xxxxxx.

6.1.2. Test xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx nebo xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) na xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Připraví xx pozitivní kontrolní xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x případně xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx o xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx se xxxxxx xxx nilskou xxxxx nebo súdánskou xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx níže xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou modří:

a) Xxx xxxxxxx se xxxxxxxx 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx a nechají xx xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Odstraní xx xxxxxxx roztok. Xxxxxx xx opláchne xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx se odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Roztěr xx zakápne 8% xxxxxx xxxxxxxx kyseliny xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx savým papírem.

e) Xxxxx se navlhčí xxxxxx vody a xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx xxxxxx epifluorescenčním xxxxxxxxxxx xxx 450 xx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx se, xxx xx xxxxxx xx XXX granulích xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx pozoruje x procházejícím normálním xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. solanacearum.

Test xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské černi X v 70% xxxxxxx x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x krátce xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx x xxxxxx xx přebytečná voda xxxxx papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx krátce xx xxxxxx a xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Upozornění: Xylol xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Sklíčka xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx safraninu x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx. Upozornění: xxxxxxxx xx zdraví xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pod xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1 000x.

g) Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB granulí x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x růžově xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx obarvenými latexovými xxxxxxxxx. Xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx vybavení (xxx dodatek 3) se xxxxxxxxx xxxxx instrukcí xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxxxxx slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx sklíčka.

b) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx suspenzí xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx xx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxxxx míchání xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx na xxxxxx půdu

Poznámka:

Než se xxxxxxx tato metoda xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx tvořících xxxxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, které byly xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx validovaná selektivní xxxxx půda, xxxx. XXXX (xx znění Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx od xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxx misky xxxx přeplněny xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterie. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxx testu.

Pří xxxxxxx xxxxxxx přípravených extraktů xx vzorků lez xxxxxxxx, xx citlivost xxxxxxx touto xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Xxxxxx xx však xxxxxxxxxx i pro xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx virulentního xxxxx biovaru 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx kontaminace xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy xx xxxx xxx xxxx jejím xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Provede xx xxxxxx x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé ředění.

2. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x pak xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 dní. Xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx SMSA xxxx xxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xx 3 xxxxx inkubace se xxxxxxx růžově xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx středu x xxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, kruhové, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, a xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx tvořících xxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx nebo očkují xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx xxxxxxx -68 až -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultur (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx patogenity (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx očkováním xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx negativní, xxxxxxxx po 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx kolonie xxxxxxx xxx R. solanacearum , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x x kontrolních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx pro obohacení, xxxx. xxxxxxxxxxxx bujón Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x extraktech ze xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx může xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxxx, xxxxx bývají xxxxx xxxxxxxx také obohaceny. X xxxxxx xxxxxx xxxx být izolace X. solanacearum x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Xxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x xxxxxxx populací xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx testu XXX xx xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx bujónu (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxx. U obohacovacího xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx do xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 ml xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx uzávěry, xxxxx xxxxxx provzdušňování.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX nebo PCR xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xx vzorky ve xxxx uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx z xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, xxx docílit lepších xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx XX jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx spolehlivosti x xxxxxxxx požadovaných prahů.

Použije-li xx xxxx XX xxxx hlavní x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx použit xxxx xxxxxxx, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx xxxxx provést další xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx byla xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určit titr xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx dojde x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx měl xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx peletového xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x jsou vzorky xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklíčka x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx, jak je xxxxxxx v dodatku 3 X, a nepovinně x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx teplotě - 16 až 24 °X) xx se xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x negativní kontrole, xxxxx lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

i) Xxx xxxxxx x relativně xxxxxx xxxxxxxxx sedimentu xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx vhodné xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x příslušném poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje se xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µl xx xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 xx - x většího xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované pelety xxx každé xxxxxx xx řady xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx jako xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx obr. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se kapičky xxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Bakteriální xxxxx se xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 minut xxx teplotě 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx potřeba, fixovaná xxxxxxx xx možné xxxxxxxxx ve zmrazeném xxxxx x suchém xxxx xx nezbytně xxxxxxx dobu (maximálně 3 měsíce) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx jamka xx měla xxx 1/2 titru (T/2), xxxxxxx 1/4 titru (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), titr (X) x xxxxxxxxxxx titru (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x odst. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx přesnost.

Obrázek 1. Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx sklíčka na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) a 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být nejméně xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx:

2. Podložní sklíčka xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx přikrytá xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx všech podložních xxxxxxx a tato xx xxxxxxx opláchnou xxxxxx IF. Umyjí xx ponořením po xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontaminaci. Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, kterým xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx konjugátu naneseného xx okének xxxx xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx inkubují xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje se 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx krycí xxxxxxxx xx xxxxxxx okénka x přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Vyhodnocení XX testu

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1 000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se zkontroluje xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx XX opakován (xxxx. 6.1.5).

2. Pozorují xx xxxxx fluoreskující xxxxx s charakteristickou xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx s pozitivním xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx protilátky xxxxxx nebo lepší. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, když xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx x pupkové xxxxx xxxxxxxx a xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XX:

x) Xxx zjištění xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou morfologií xx odhadne xxxxxxxx xxxxx typických buněk x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, kde xx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx se xxxx PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx XXX xxxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx xxxxx provést xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx činidla x xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6). Pokud xxxxx, xxxxx se xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx vhodná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx xxxxxxx XXX. Test XXX by xxx xxx prováděn zkušenými xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA x XXX) xx se xxxx xxxx zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze vzorku,

- xxxxxxx xxxx PCR.

Měly xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- suspenze 10⁶ buněk na 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, při XXX xxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků.

Aby xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx xxxxxxxxx kontroly x xxxxxxxxx odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx být xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X případě xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály k xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx DNA

Používají se xxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx inhibitory XXX x jiných xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx cílovou DNA xx xxxxxx. Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Napipetuje se 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 mM XXXX (xX 8,0)) do 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Přidá se 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxxxxxxxxx se umístí xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx lázně x xxxxxxxx 95 °C xx 10 min.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µl xxxxxxx Easy DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Přidá se 100 µx roztoku Xxxx XXX® B (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx odstřeďuje xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. xxx teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx převede do xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Přidá xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °C) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15 000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, xxxxxxx xx xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx na vzduchu xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Peleta se xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx UM x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xx xxxxxxx při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího DNA xx použije xxx xxxx XXX.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx metody extrakce XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Plant Xxx, xx xx mohly xxxxxx, xxxxx by xx xxxxxxxxx, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x kontrolních xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně efektivní.

6.1.6.2. XXX

1. Připraví se xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx PCR xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx vodě).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX x prostředí, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx protokol XXX.

3. Do xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx se xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx podle protokolů XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x přidá xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx XXX xxxxx vzorku.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx při počátečním xxxxxxxxx, a xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx se rozdělí xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx se xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x každého vzorku x 3 µl xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, např. (ladder) 100 bp.

2. Detekují xx proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) po xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V obarveném x UV (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U všech xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx pravost amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX inkubací xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx shodným restrikčním xxxxxxx a pufrem (xxx dodatek 6). Naštěpené xxxxxxxxx se rozdělí xxxxxxxxxxxxxx v agarózovém xxxx a pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem a xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX

Xxxx XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR specifický xxx X. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxxx není x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx specifickými xxx xxxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX očekávané xxxxxxxxx musí xxx xxxxxxxxxxxx xx zkoumaným xxxxxxx).

Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (xxxxxxxx) vzoru, xx předpokladu, že xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Spolehlivé potvrzení xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s druhou xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx vodě, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. solanacearum x bramborovém extraktu xxxx získány negativní xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xx dvou xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více vzorků xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx být xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx provedena xxxxxxx xxxx XX xxxx. Když xx XXXX test provede xxxx druhý vyšetřovací xxxx x je xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx ml přidané xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale je xxxxx jej xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x glycerolu při xxxxxxx - 16 xx - 24 °X nebo - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01X fosfátovém xxxxx (XX) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx referenčního xxxxx R. solanacearum, xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X.

Xxxxxxx eubakteriálních xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál, xxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx v dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového extraktu

Následující xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx extraktu do Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx xx 200 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx předem. Protřepe xx x xxxxxxxx 1 hodinu v xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 minut xxx 7 000 x, xxxxxxxx xx supernatant x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Kápne se 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx ukazuje xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na jedno xxxxxxx, a to xxxxxxxx x zředěný 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen při xxxxxxx - 20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx množství 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x přidá xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx (xxxx v xxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky v xxxxxxxx xxxxxxxxx řadě 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se vlhká xxxxxxxxx xxxxxx přikrytím xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx ohřeje xxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; viz xxx. 7.1) na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx středová xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 okénka, x xx xxx, xxx xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xx předem xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx hybridizace xx xxxx 5 xxxxx x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx x 958 xx vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Nechají xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx o xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x hybmixem xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 hybmix x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Milli X xxxxx) x xxxxxx na filtrační xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx lehkým xxxxxxxx povrchu filtračním xxxxxxx. Napipetuje se 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x celé sklíčko xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX testu

1. Xxxxxxx xx ihned xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx xxxxxxxx imerzí. S xxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (odst. 6.1.7) musí xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx nejméně 40 xxxx mikroskopu.

2. Hledají xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x okénkách xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat xxxx xxx xxxxx xxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx v xxxxx.

3. Xxx podezření na xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test opakován. Xx xxxx xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx pufru nebo xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxx xxxxxxxx (vně xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x pletiv x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx xx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx mnohem xxxx xxxxxxx než x xxxxx XX.

5. X xxxxx se xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC filtru xxxxx xxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx X. solanacearum x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Výsledek XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxxx xxxxxxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx, jestliže xxxx xxxx typické xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako volitelný xxxx kromě testů XX, XXX nebo XXXX pro jeho xxxxxxxxx nízkou citlivost. Xxx xxxxxxx DAS XXXXX je xxxxxxxxx x xxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx xxxxxx novou xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a použití xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké nebo xxxxxx jakou titru xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx negativní x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx fosfátového xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen NCPPB 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X x B). Xxx srovnání xxxxxxxx xx xxxxx destičce xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxx být na xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x testování.

Standardizované xxxxxxxxx x negativní materiály, xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx xx al., 1995)

1) Xxxxxxx xx 100-200 µx xxxxxxxxxx extraktu. (Xxxxxxx xx 100 °X na 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx topném xxxx xxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx silného xxxxxxxxxxxxxx krycího xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx z jamek. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx PBS-Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxxx xxxxxx (obvykle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Roztok protilátek xx xxxxxx x xxxxx x jamky xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx se vhodné xxxxxx konjugátu alkalické xxxxxxxxx x blokačním xxxxx. Přidá xx 100 µx do xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx x jamek x xxxxx xx vymyjí xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx se 100 µx substrátového xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x pravidelných 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx imunoglobulinu x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X xx dobu 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx jamek xx xxxxx destičce. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx xxx teplotě 4 °C.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx PBS-Tween (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x PBS (dodatek 4) x obsahem 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x nechá xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

5) Jamky xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx fosfatázou v XXX. Xxxxx xx 190 µx xx xxxxx jamky x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Připraví xx roztok 1 xx x-XXX/xx alkalické xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx každé jamky x xxxxxxxx se x temnu při xxxxxxxx xxxxxxx. Absorbance xxx 405 nm xx odečítá v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, jestliže průměrná xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx menší než xxxxxxxxxxx OH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx všechny xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxxx větší xxx 1,0 (po 90 minutách xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x xxxx větší než xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX z xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx OH xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx nebyl proveden xxxxxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxx, xx xxxxx x vzájemné kontaminaci xxxx xxxxxxxxxxxxxx vázání xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx v dodatku 3).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx očekávat při xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx také xxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °C.

Následující xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx citlivostí podle xxxxxxxxx laboratoře) ve xxxx třech xxxxxxx xxxxx u každého xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx xx xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx nebo xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), xxx xxx xxxxxxxx xx fázi 2. xx 3. xxxxx xx xx xxxxxx rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Příznaky x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx sazenice xxxxxx.

6.1.9.2. Rozdělí xx 100 µx extraktu xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx listy xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23G). Xxxxxx xx rozdělí xxxx testovací rostliny.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx mezi dvěma xxxxx x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx listy x xxxxxx listem.

Sterilním xxxxxxxxx se udělá xxxxxx xxx asi 1 cm xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx se xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx sterilní xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx technikou xx xxxxxxxxxxxx 5 xxxxxxx vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx, a xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °X x vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zavlažováním, aby xx zabránilo jak xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx nedostatku xxxx. Aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve zcela xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx být xxxxxxxx x různých xxxxxx xx dobu xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx ostatních xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, xxx nedošlo x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prostor xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie mezi xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx, epinastie, xxxxxxx xxxxx krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx provede xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx podezřelé xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže během 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx z xxxxx xxxxxxxxx rostliny, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx se všechny xxxxx kultury x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxxx rostliny vykazují xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx bakteriemi X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx testovací xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx se xxxxx kultury xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (viz dodatek 3).

6.2.1. Výživové x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx chybí x X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx výsledek

Produkce xxxxxxxxxxxxxxx pigmentu -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx O+/F-

Katalázová aktivita +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx v 1% XxXx +

Xxxx v 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení želatiny -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce levanu -

Xxxxx x metody xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx xx řada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX xxxxxx (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx XX je xxxxxxxxx, jestliže titr XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této metody xxxx sérologický test.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 buněk xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx se xxxx ELISA xx xxxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx získaná x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx poloviční x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxx xxxx (UPW = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx lázni xxx 100 °C 4 xxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxx uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (např. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx al. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Identifikace xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, jestliže xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx kontrolní kmen.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 ml x XX.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx dosáhne xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Analýza xxxxxxxx xxxxxxx (FAP)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém agaru (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly. Výskyt xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2OH x absence 16:0 3XX xxxxxxxxx na Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika kmenu xxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx případně xxxxx xxxxxxxxxx kmeny (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx a/nebo oxidace xxx disacharidů x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 a Xxxxxxx et al., 1990). Živná půda xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx očkováním xx xxxxx půdy x xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum a xxxxxxxx xxx teplotě 28 °X. Je-li xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx destičky x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), zbarvení xx mění xxxxx 72 xxxxx od xxxxxxx xxxxxx po xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Genomická xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx restrikčních fragmentů XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Repetitivní xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx primerů REP, XXX x XXXX (Xxxxx xx al., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Analýza xxxxxxxxx polymorfismu xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery PCR (Xxxxxxx xx al, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenů xxxxxxxxx xx skupiny 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A a 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989) x sekvenováním 16X rDNA (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx proveden xxxx patogenity.

1) Připraví xx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxx ve fázi 3 xxxxxxx xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx vystavení xxxxxxxxx xxxx vyprahlosti xxxx. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Xxxxxxxx-xx se xx xxxx xxxx příznaky, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx patogenní xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx 2 cm nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozmělní a xxxxxxxxxx v malém xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx provede xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx vyhodnotí xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx R. solanacearum.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx pro xxxxxxx x kultivaci

Živný xxxx (XX)

Xxxxx xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 minut.

Sacharózopeptonový xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

pH 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kelmanovo xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 g

Bacto-Pepton (Xxxxx) 10,0 g

Dextróza 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx x sterilují x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se na 50 °X x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), xx xx xxxxxxxx konečné koncentrace 50 mg na xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Englebrecht 1994 xx xxxxx Elphinstone xx xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx půda

Casamino kyseliny (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 g

Glycerol 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x xxxxx filtrem sterilizovaný xxxxx xxxxxx následujících xxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Sigma) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Sigma X1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 mg)/l

Bacitracin (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx C-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx uvedených xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx použit Xxxxx Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx to také xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum se xxxxx tvořit o 1-2 dny déle x červené xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x rozptýlenější xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 U/l xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií bez xxxxxxxxx růstu

Ralstonia solanacearum.

Roztoky xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C x xxxxx a xxxx se xxxxxxxxxxx xx 1 měsíce. Xxxxx s médiem xx xxxx být xxxx použitím zbaveny xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vysušení xxxxx.

Xxxxx xxxx připravená xxxxx živné půdy xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kvality xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční kultury X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) a pozorováním, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Validované xxxxxxxxx živné půdy

Xxxxx půda SMSA (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Bacto-Agar a 2,3,5- trifenyltetrazolium xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Wilbrink (Xxxxxx et al., 2002)

Xxxxxxxxx 10 g

Proteázový xxxxxx 5 g

K₂HPO₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °X. Xxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

A. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované bakteriální xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx doporučují xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' k xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx během xxxxxxxxxxxx testů, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx sbírka xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx laboratoř Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx ochrany xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXX), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx uvedených kmenů xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx testů.

Mražené xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx tyto xxxxxx xxxx standardy x testech xxxxxxx x testech xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 xx k xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxxxxx testy vodivých xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48hodinová xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx SMSA xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx tvořících xxxxxxx xx 1 ml. Xxxxxxx xx jí xxxxxxx jemně zakalenou xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx z xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx x produkce xxxxxx x bílou xxxxxxx, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx se pupkové xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx se 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx mikrozkumavky a xxxxxxxx xx. Provede xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx pěti xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví se xxxxxxxxx xxxxx z 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °C xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx XX a XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx zkušebních xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx být X. solanacearum zjištěna x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx xxxx až xxxxxxx xxxx.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1 Extrakční xxxx (50 xX xxxxxxxxx pufr, pH 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné xxxxx xxx následující xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx pro xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx z výkrojků x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX fosfátový pufr xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Tento xxxx xx používá x ředění protilátek.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx sklíček.

Přidá se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x zvýšení xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx voda 100 ml

Krycí roztoky xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Vectashield® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry pro xxxxx nepřímého xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C po xxxx 15 minut.

Pokud xxxxxxx xxxxxxxx vysoký xxxxx xxxxxxxxxxxx molekul, xx xxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x PBS), xX 7,4

NaCI 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx pufr (musí xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x PBS 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Tween 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit do 100 ml

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxxxxx XXx xx xxxxxx pH xx 9,8.

Xxxxxx se xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x MgCI₂.

Rozpustí xx xxx 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) v 15 xx roztoku.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI ELISA

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1 000 xx

Xxxxxxxx xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1 000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 ml

Destilovaná xxxx 950 xx

4.4 Substrátový xxxx, xX 9,8

Diethanolamin 100 ml

Destilovaná xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx poli (x).

2. Xxxxxxxx xx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (X).

X = x x X/x,

xxx X = plocha xxxxxxx xxxx na xxxxxxx x xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx pole (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = objem xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx také xxxxxx xxxxxxxxx žádné xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx X-2: 5'-XXX XXX XXX XXX TCC XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum = 288 bp

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Reakční xxxxxxxx PCR

Provede se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: ii) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx při 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx amplifikací x R. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x enzymem Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Maisse (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx ggg x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx tcg xxx xxx ca -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA R. xxxxxxxxxxxx DNA = 553 bp.

2.2. Reakční xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní UPW	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μl	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx dNTP (20xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxx polymerasa (5U/μl) (1)	0,1 μl	0,5 U
Množství xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx množství	25,0 μx
(1) Metoda xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx) x Gibco XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Research XXX 200 x xxxxxxxxxxx Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xx stejných xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °X (syntéza extenze)

vi) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx PCR vzniklé xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx době 30 minut při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx velikost 457 xx a 96 xx.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx kontrolou (Pastrik xx al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer RS-1-R: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TGT XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx při 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýzy xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů s xxxxxxx Bsm 1 xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 X) xx inkubační xxxx 30 minut při xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX GCA GAG XXX XXX TA-3'

Reverzní xxxxxx Xx-1-X: 5'-CCC XXX XXX GGC XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX AGA XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. solanacearum:

s Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční směs XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Reakční xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx biovary 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Rs-1-F x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-3-X xxxxxx xxxxx restrikční xxxxx.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx modř (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Nanášecí xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Pufr 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (TAE), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (sodná xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx zředí xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx FISH xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx specifická xxx R. solanacearum XXx-1-XX3: 5'-ggc agg xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Fixační xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX ROZTOK XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX XX TOXICKÝ. POUŽÍT XXXXXXXX X NEVDECHNOUT. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx pure xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C a xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Parafonnaldelryd xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 kapek XXx 1N. Zkontroluje xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx NaOH. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před prachem xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda OLI-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx roztoku podle xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx každé xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx hybridizačního roztoku. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx oligosondy xx uchovávají v xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx xx chrání xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M fosfátový xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx rajčete (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx děložními lístky (10 až 14 xxx) xx přesadí xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx by se xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud xx delší;

Teplota: den: 21 až 24 °X,

xxx: 14 až 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx: "Black Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole cells xxx determinative, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental studies xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 on xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx ofthe Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Xx Roux, K. Xxxx, P. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx of xxxxxxxx xxxxxxxx primers xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx application to xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. European Xxxxxxx of Plant Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Double-Antibody Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Assay Xxxx Xxxx x Specific Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Barlow, X. and Sequeira, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx DNA xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx and the xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Molecular Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. EPPO Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx medium for xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Bacterial Xxxx Newsletter 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Agricultural Xxxxxxxx, Canberra, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Nydegger, X. and De Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Ushijima, X. Xxxxx, S. Xxxxxx, M. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx and X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx viable xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx soli xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx a XXX xxxxxxxxx. J. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxxxxxxxxx potato tubers xxx some xxxx xx its xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Bulletin XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, A. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X xxx D.C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx for xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxx scientific Xxxxxxxxxxxx Ltd., Oxford. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Gorris, X.X., Xxxx, P., Cubero, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, M., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular detection xx plant pathogenic xxxxxxxx. Xx: H.W. Xxxxx xx al., (xxx). Xxxxxx Academic Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Specific xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X. W., Xxxxxxxx, C.T. and Xx Bruijn, F.J. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx to xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., F. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Maghirang, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Tinunis. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx development xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx PCR primers xxx xxxxxxxxxxx Rurkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx spacer xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Forde, S.M.D. (1995) Production of xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx causative xxxxx xx bacterial xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Immunology 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Detection xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy ygii, Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxx Disease Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx primers xxx sensitive detection xx xxxxxxxxxx chain xxxxxxxx. X. Gen. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, D.E. 1992. Xxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx and xxxx other Pseudomonas xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Xxxxxxx, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, J.M., Xxxxxxx, P.J.M., Smith, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, E., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx solanacearum Race 3 xx Western Xxxxxx as xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, X., Allen, X. and Xxxxxxxxxxx, X. (eds.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Molecular xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Boonham, N. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx X.X.X. Xxxxxxxxx. 1998. Xxxxxxxxx of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx fluorescent xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23s rRNAtargeted xxxxxx. Xxxx. Environ. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.