Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 zákona č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx a x xxxxx některých xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Předmět úpravy

Tato vyhláška xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx opatření, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx bramboru, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx., xxxxxxx bakteriální xxxxx xxxxxxx, xxx se

a) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) při xxxxxxxx výskytu xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx se xxxxxxxx opatření x xxxxx xxxxxx eradikace.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx se xxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Kotthoff) Xxxxx xx al.,

b) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et xx.,

x) hostitelskými rostlinami -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní rostliny x xxxxxx lilkovitých (Xxxxxxxxxx), u xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx původcem kroužkovitosti x xxxxxxxxxxx podmínkách,

2. xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx bramboru, xxxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxxxxx podmínkách,

d) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx xxxxx, na xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx prostředku, xxxxxx xxxx jejich části x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx xxxxxxx, v xxxxxxx anebo v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby,

k) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx původní partie; xxxxxx xx xx:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx xxxxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx klonově xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu průzkumu xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

b) xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru²⁾ xxxxxxx ze členských xxxxx Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx vybrané xxxxxx nesadbových xxxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxx x karanténním xxxxx xxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí x xxxxxxxxxx do třetích xxxx podléhají

a) všechny xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) porosty xxxxxxx xxxxxxx určených x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxx.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k závlaze xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x případech xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x v xxxxxxxx 4 písm. x) x porostů xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx uvedeném x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx bramboru x xxxx xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete ve xxxxxxx dobu x xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx vody, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x x xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx při xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx v souladu x §10 xxxx. 1 xxxxxx Ústav xx xxxxxxx uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x přihlédnutím k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx ve xxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby x xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zemědělského (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx prováděnému xxxxx xxxxxxxx 2 x 4 xxx xxxxxx rovněž xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, že vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Ústav bez xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx na xxx xxxx ji pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx státům x Xxxxxx za xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx nepřítomnosti původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx, a xx v xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx bramboru,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. září, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx 1. xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Podrobnosti xxxxxx xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx se x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx těmito xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x xxxxxx XX, xxxx

x) pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx nebo pod xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X případě xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx odborného xxxxxxx podle §76 xxxx. 7 zákona x zvláštního právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx xxxx vyvrátit.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 zákona xx účelem xxxxxxxx xxxxxx podezřelého xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx opatření založená xx stupni xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx rostlin na xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx.

(4) Xxx podezření xx nebezpečí xxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx úřední rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx podrobnosti xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx x xxxxx xxxxxx vhodným xxxxxxxx spolupracovat.

(5) Xxxxx xxxx o podezření x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx mít xxxxx x Xxxxx republice xxxx které xxxx Xxxxxx republiku xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav xxxxxx xxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odebraných xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx v souladu x §76 odst. 2 zákona a x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, uvádění xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx nebo xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož xxx xxxxxx odebrán, a xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx xxxxx produkce xxxxxx těch, xxx xx xxxxx úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx,

x) provede odborné xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví v xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, zavlažování x zalévání xxxx xxxx pěstitelské xxxxx xx zamořeným xxxxxxxxx xxxx objektem, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x),

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle xxxxxxx x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx bodu 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, odpadní xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx brambor x x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx xxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, za zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx podle písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx základě xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a jeho xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx členským státům x Komisi x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. b), x xxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Pokud xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxxx učiněném xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx odstavců 1 x 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x objekty, stanoví xxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx x xxxxxx karanténní xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav xxxxxxx xxxxxxx sdělením xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného šetření xxxxx odstavce 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), odstavce 2 písm. x) x odstavce 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx hostitelských xxxxxxx

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x partiím, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, a xx v rozsahu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx karanténní xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x) x x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 odst. 1 xxxx. a) xxxxx xxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx xx x xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx rozpoznatelné xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) partie hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. b) xxx xxx xxxxxxx pod xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v bodě 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, že xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x že xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx partie na xxxxxxx výsledku testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 označena xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) zařízení, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx jejich části x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) nebo označené xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b), xx xxx zničí xxxx podrobí očistě x dezinfekci pomocí xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx xx tyto xxxxxxx x předměty xx zamořené xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 odst. 2 xxxx. x), xxxx být provedena xxxxxxxx stanovená v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav xxxx xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxx xxxxxxxx uvedená x odstavci 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x účinná. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx s registračním xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav zruší xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx mimořádná xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx a xx uplynutí doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx hniloby xx x xxxxxxx x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Xxxxx xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx jejich xxxxxx.

§8

Testování xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx materiál²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx šlechtitelského xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x výrobě xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České republiky xxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, a nebo

b) xxxxx xxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx nebo předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx hniloby nebyl x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx vyhláška xxxxxx xxxxxxxxx dnem xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) diagnózy xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx vzorcích hlíz xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx optimalizaci a xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku č. 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro zamezení xxxxxxxxxxx xxxx vzorky, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx postupových xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (XX xxxx XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat v xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx považován za xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx důvodu je xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx (XXX/XXXX).

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xxx hlízy x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx z xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx screeningový test, xxxxxxx patogenu z xxxxxxxxxxxx vodivého pletiva xx diagnostickém médiu x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX test (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx podařit. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx pletivu, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (oddíl 7).

(4) Xxxxx typické xxxxxxxxxx xxxxxxx je v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx xxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x xxxx, aby byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx popsány v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxxx xxxx pozitivní, xx pro ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx protilátka, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxx x protokoly (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx v mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx nebo XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované xxxxxx 1/100. Typické xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní po xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx vyčistit x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx opatrnou přípravu xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx bakterie, xxxxx jsou konkurencí Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx metoda xxxxx nepodaří, xxxx xxx izolace provedena x rostlin xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (xxx xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx používá x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x rostlinách xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx optimální xxxxxxxxx podmínky xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx pravděpodobně xxxxx test narušovat xxxxxxx (viz xxxxx 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx popsána x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo biotesty xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, opakují se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx odebráním vodivého xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx vzorků.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x oddílu 10.

1.3. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx vzorcích bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden screeningový xxxx. Xxxxx xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx test pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xxxxx je druhý xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx a typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 8.

(5) XX test xx xxxxxx x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx je popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx izolační xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v oddílu 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx xx přítomnost xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx xx xxxxx xxxxxx. Kromě xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, stáří nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být příznaky xxx kontrole xx xxxx snadno xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx často x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx vznikají neobvykle xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, žluté xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx internetové xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez měknutí x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Prstenec xxxxxx xxxxxxx na pupkovém xxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx hlízy xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Vodivá pletiva xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx xx hlízách xxxx x tomto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearurn. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxx xx vyskytovat xxx xxxxxx pupkové xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část se xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx části. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, často s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx se x Evropě xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, kdy xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx může xxxxxxxx maskovat a xxxx xxx obtížné, xx-xx xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Možné xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx bramboru

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx xx 1 test. lntenzivnější xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx vzorcích xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Postup xxxx xxx xxxxxx xxxxxx i pro xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx k xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx xxxxxxxx xx testování vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxx popsaný xxxxxxxxxx extrakt xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx možné xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx oschnout xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš zeminy x jestliže se xx xxxxxxxx XXX xxxx nebo přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx svazky. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxx stranou x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx vizuální vyšetření xxxx xxxxx po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx korkovatět xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xx shromáždí x nepoužitých xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx uzavíratelné x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, že xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx okamžitě, xxxxx xx není xxxxx, uchovávají se x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, x xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) x xxxxxxx se x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot/min) po xxxx 4 xxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx vzorků za xxxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx během extrakce. Xxx každý xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx nutno zamezit xxxxxxx DNA xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx použití x použití zkumavky xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) nebo xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx se xxxxx xxxxxxxxx (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx při 7000 x xx xxxx 15 minut (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) při teplotě 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Použije se 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx zbývající xxxxx vzorku, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) nebo xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Extrakty xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení x xxxxxxxxxx xx nedoporučuje.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v chladícím xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx pozitivními xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx xxxxxxx na XX testy a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup je xxxxxx xxx kombinované xxxxxx až 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, měly xx xxx založeny na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx populace, která xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx se odstraní xxxx o velikosti 1-2 xx xx xxxxxx strany každého xxxxxx přímo nad xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx xxxxxx dezinfikují xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části stonků xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx než 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) části se xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx maceračním sáčku x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Po usazení, xxxxx xx trvat 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx nutná, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx extrakt se xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Jedna xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx polovina xx skladuje s 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. lF xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx test PCR xxxx FISH. Xxxxxxxx xx test IF xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test a xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx analýzy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xX xxxx používán xxxx hlavní vyšetřovací xxxx, xxxxxxx se xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX xxxxx x polyklonální xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx citlivé.

Používají xx protilátky xxxxx xxxxxxx kmenu původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx každou xxxxx xxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 až 106 xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální xxxxxxxxxx xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Během xxxxx xx xx měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx skladovaných xxx - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x resuspenzí xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx použijí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx xxxxxx, nejlépe x 10 xxxxxx x průměru nejméně 6 xx.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx xxxx se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx škrobového xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx okénka. Xxxxxxxx xx napipetuje stejné xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku 1.

x) Pro xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se desetinná xxxxxx (1/10 a 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx množství (xxx xxxxxx x průměru 6 xx je xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx objem xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx xxxx duplikát xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx xxxx xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx lze xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx xxxxxx použitím xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx po xx možná nejkratší xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), x xxxxxxxxx xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx v xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Množství xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní sklíčka xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx přikrytá xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx kapky xx xxxxx podložních xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx vzájemnou xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx okénka xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx musí xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vlhkém xxxxxx po xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx jako xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X xxxxxxxxxxx pufru x glycerolem (dodatek 3) xxxx komerční krycí xxxxxxxx xx každého xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx vhodnými xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x žádnými xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující a xxxxx obarvené x xxxxxxx xxxxx protilátky xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx sklíčka (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx okénka sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx a xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově reagující xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx nebo pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx průměrný počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek XX xx xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx xx potenciálně xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx není xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx IF xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx podle postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů ze xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx x xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 nebo XX 406) x 0,01 X xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx kultury (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx max. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx xx xxxx xxx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx použití xx xxxxxxxx peleta x xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X XX x 50 µx 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním x xxxxxxxx se při xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µx fixované xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (v 0,01 X XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % etanolu. X xxxxxxx, že xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, odstraní se xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx stejné množství 0,01 X XX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Rozmístění xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x fixují xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx x hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx měla xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx L-6876) v 10 ml xxxxx (100 xX Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx xxx skladovat, xxx xxx by xx xxxxx xxxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx lyzozymu x xxxxxxxx po dobu 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Potom xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx filtračním papírem.

Alternativně xx přidá xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx K 40-400 µx.xx^-1 v xxxxx (20 xX Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % xxxxxxx xxxxxxx po xxxx 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxx dna xxxxxxxxxxxx krabice tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx ně nevnikl xxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx water = XX), 1 l 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix a 833 xx XXX). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.10. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx se 5-10 µx xxxxxxx roztoku (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx x xxxx sklíčko se xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx ihned x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx imerzí. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (FITC) xxxx xxxxxxxxxxxxx buňky (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx buňky Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx dvěma xxxxxxx x pravých xxxxxx a kolem xxxxxx. X vzorků, xxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx odpovídat nebo xxx xxxxx xxx x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí xxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xx může xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX testu. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x částí stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx podobnou Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX testu.

5.3.5. V xxxxx se berou xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX testu xxxx xxxxxx, pokud jsou xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x vypočítá xxxxx typických buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx.

x) Výsledek XXXX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX test xxxx xxxxxx screeningový xxxx a je xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx povinný xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxxx xx XXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje jen xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být vyžadovány xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Používají xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Přednostně xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx provádět xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx DNA a XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu DNA.

PCR xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx vodě x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- pokud xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx PCR testu xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx možno xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako vzorky.

K xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx optimalizována xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Pastrika (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM NaCl, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX EDTA [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x xxxxxxx 95 °X xx xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µx xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 mg lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx HCl, xX 8,0) x xxxxxxxx xx xxx teplotě 37 °C xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x inkubuje xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx XXXX xxxxxx B (Xxxxxxxxxx)x xxxxx se promíchá xxxxxxxx, až xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15 000 g xx xxxx 20 xxxxx při 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx promíchá xxxxxxxx x inkubuje se xx ledu xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g po xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní se x xxxxxx xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxxx xx vzduchu xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx resuspendujte v 100 µl sterilní xxxx (XXX) x xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Skladuje xx xxx teplotě -20 °X xx xx upotřebení při XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x pro XXX se xxxxxxx 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx metody xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xx xx xxxxxxxxx, xx jsou při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Připraví xx testované xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, kde xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX je xxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Zahrne xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx obsahující pouze xxxxxxx směs XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx voda XXX, která byla xxxxxxx do xxxxx XXX namísto vzorku.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx produktu PCR

6.3.1. Xxxxxxx se xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx reakční xxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X na xx. Použije xx xxxxxx xxxxxx XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Detekují se xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx na x) xx xxxx 30-45 minut, za xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx zacházení x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (krátké xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX o xxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx se zkontroluje xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx x xxxxxxx restrikčním xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Rozdělí xx naštěpené xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu pod XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX test xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxx vzorku, ale xxx xxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pozitivního xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx získán x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, ale x xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx došlo, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx kontaminaci, xxxxx xxx očekávaný amplikon xxxxxx z xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné testování xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx zjištění xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx vzorku a xxxxxxxxxxx růstových xxxxxxxxxx. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx i xx extrakty, které xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx poskytují xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx vynikající xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí falešně xxxxxxxxxxx výsledků by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování jsou xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx lilku xxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx rostliny ve xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx resuspendované xxxxxx i efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx I

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x průměru 10 xx xx vhodný xxxx xxxxxxxx polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx místě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx tři xxxxxxxx xxxxxxx stonku.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xx do xxx xxxxxxxx štětečkem na xxxx xxxxx xxxx xxxxxx malířským štětečkem xxxxxxxxx xx pelety. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx aplikovanou xxxxxxxx xxxxxxxxxx o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx XX

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx dvěma prsty xx xxxxxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Pomocí xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx zářez (x úhlu přibližně 5°), dlouhý 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x řezem se xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx zakryje xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx lilku den xxxx inokulací nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 X). Xxxxxx xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx suspenzí 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 M XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xx vhodných xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Rostliny se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx vody xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °C x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, inkubují xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx oddělení xxxx xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx musí xxx xxxxxxxx xxx různé xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx kontaminaci. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx by xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Pravidelně po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (ztráta xxxxxxx). Xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxx strakaté, xxx před znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx často xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx období xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx naděje xx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx odrůst. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx citlivější xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx než xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů x xxxx xxxxxx před xx. Xxxxxxx mohou xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x pletiv xxxxx. Xxxxx x xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma exigua xxx. xxxxxxx, xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx případů xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxx rostliny. Může xx také připravit Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxx zvadlých xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % etanolem. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo XXX xx šťávě x xxxxx x xxxxxxx xx na vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx připravit Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx latentní xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 týdnů. Xxxxx xxxxxx xx 4 týdnech pozorovány xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx test IF/PCR xx složeném xxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xx test pozitivní, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace na xxxxxxxx (selektivních) médiích xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují x potvrdí xx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx izolován x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Ačkoliv xx xxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx xxxxxxxxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx projevujících xxxxxxxx napadení.

Mohou jej xxxx xxxxxxx rychle xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx izolaci xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx selektivního xxxxx x vhodného xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx všech xxxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx a z xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxx u xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx maceraci xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako pozitivní xxxxxxxx se připraví xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 cfu xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx selektivního média xx xx xxxx xxxx použitím x xxxxxxxxx obvyklých vzorků xxxxxxxxxx jeho vhodnost xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Ze 100 µx alikvotní xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx pletivech xxxxxxxx ve vysokých xxxxxxxxxxxxx, lze xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x každého xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10 000 na XXXX médium xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx x xxxxxxxx (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx x temnu xxx teplotě 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx podobných Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého x/xxxx xxxxxxxxx identifikaci by xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx se xxxx xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxx x následujících xxxxx (xxxxxxx uvedena x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx,

- xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx s minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 dní.

Původce kroužkovitosti xxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx žluté, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) x xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx izolované xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X případě xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační testy

Zjišťují xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Veškerá média xx xx xxxx xxxxxxxxx při 21 °X x po xxxxx dnech by xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx dobu xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutriční x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx musí provádět xx použití inokula xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx dextrózového agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx oxidázy -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Redukce xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Tvorba xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Xxxx v 7% XxXX -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx barvení (dodatek 9)

9.2. xX test

a) Připraví xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx dvojnásobného ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx pozitivní xxxxxxxx.

9.3. PCR xxxx

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx ml ve xxxxxxxx vodě (UPW)

b) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx vřící vodní xxxxx při teplotě 100 °C xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx potřeby xx může lýza xxxxx podpořit přidáním xxxxxxx připraveného XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 M. Vzorky xxx xxxxx uložit xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx amplifikaci Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx vhodné xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x de Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx velikosti x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx kmen.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (oddíl 5)

c) Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx reakce xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) po xxxx 72 hodin xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Anteiso A, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxx xxxx jako Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx A xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx xxxx vyskytuje xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x xxxxxxx 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Provede xx xxxx xxxxxxxx podle Xxxxx x kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx mladých semenáčků xxxxx vejcoplodého ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 18-24 °X xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxxx kultur by xxxx během 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx po xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx se měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.4. Izolace se xxxxxxx z xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x YPGA, xxxxxxxx xx po xxxx. 3-5 dní při xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur für Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Linec	Rakousko
Departement Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Agency	Edinburgh	Skotsko
Laboratoire Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx la Xxxxx xx Terre	Le Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Laboratory	Dublin	Irsko
Plantenziektenkundige Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx de Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx biologijo	Ljubljana	Slovinsko
Centro de Xxxxxxxxxxx de Aldearrubia	Salamanca	Španělsko
(1) Xxxxxxxxx osoby: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx xxxxxxxxx médiu XXXX a xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátového xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx schopných xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho se xxxxxxx dosáhne prostřednictvím xxxxx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x produkce xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx se zpracují xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x objemu 1,5 xx x 900 µl resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx xx protřepat. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx kontaminovaných xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx probíhá xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx extrakce XXX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x FISH testy xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nesmí být xxxxxxx x xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 3

Xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1. Extrakční xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0)

Tento xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxx bakterie x rostlinných xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (PVP ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz poté, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do pelety.

Na₂HPO₄.12H₂O 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx pro XX (10 mM xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x mytí xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx pufr x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx pufr se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx roztoky xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = c x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované pelety x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety

Dodatek 5

Xxxxx xxx izolaci x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x provede se xxxxxxxxxxx x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx agar obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx se sterilizace x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxx x kvasnicovým xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx mineral xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005
Baktoagar (Difco)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx růstová xxxxx

Xxxxxx MTNA

Pokud není xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx složky médií x BDH.

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, pH xx upraví na 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) x dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx média xx 3 měsíce. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx skladování v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví xx xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, nalidixic acid (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxx xxxx v 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X xxxxxxxx x destilované xxxx. Xxxxxxx roztoky xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx základního xxxxx je 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx je xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. m. xxxxx. sepedonicus na 1 ml vzorkového xxxxxxxx. Úvodní testování xx také xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kmenů xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s interní XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx tgg pa xx -3'

primer XXX-X 5'- tac xxx xxx gtt xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx tgc -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- tcc xxx xxx tca xxx acg xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX C. xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx = 502 xx (sada XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μl
10x XXX pufr (1) (15 xX MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs x-x TP (20 xX)	0,125 μl	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μl	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx objem	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx za použití Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx nebo Xxxx) a Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X x NS-8-R xxxx optimalizována xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) a 6.2). Xxx použiti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx jinými xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 cyklus viii) 5 minut při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx optimalizován xxx xxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx nutná xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), xx) x xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx x DNA X. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX po inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 minut. Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. subsp. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx činidla pro XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx EUB-338-FITC: 5'- xxx gcc xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx pomocí XXx nebo NaOH.

[UPOZORNĚNÍ: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje xx xxxxxxxx xxxx prachem xxx teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Poznámka:

Alternativní xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (xX 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx sulfát (XXX) 0,01 %

Xxxxx EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx podle výpočtů x tabulce. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 sklíčka	8 sklíček
Sterilní xxxxx čistá voda	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxxxxxx xx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku vejcoplodého (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx lístky (10 xx 14 xxx) xx přepichují do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 15 °X.

Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Tom",

"Rima",

"Balsas".

Dodavatel: xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx barvení v Xxxxxxxxx modifikaci (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx amonného v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxx a xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx O 2,5 x

95 % xxxxxx 100 ml

Zamíchá xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx pracovního xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, xxxxxx se xx xxxxxxx a xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx xx omyje xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Lugolovým xxxxxxx xxxxxxxx a xxxxx se xxxxxxx xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Opláchne se xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Xxxxxxxxx xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx do etanolu xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne xx xxx tekoucí xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Xxxxx xx xxxx použít xxxxxxxx xxxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx diagnosis of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches of xxxxxx tubers. Xxxxxxxxxx xx xxx European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. F., 1970. Xxxxxxxxx xxx preliminary xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Microbiology, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x X. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx the XX xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx latent xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Lond., 178, 703.

10. Klement X.; Xxxxxxx, X x D. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. A., X. Xxxxxxx x X. X. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx rot (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Spiek. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx primers from XXX intergenic xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -X. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx potato xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX with xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on some Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Berthier-Schaad, Y., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx automated xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Disease 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx bacteria. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. xx.; St. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx to xxx identification xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2xx xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Xxxxx, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx XXX-X1 Ralslonia xxxxxxxxxxxx xxxxxx for xxxxx identification of xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. H. X. xxx X. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: report of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Grouping xx plant pathogenic xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

25. Wullings, X. X.; van Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. D. a X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Microbiol. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX HNĚDÉ XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, rajčete x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, rostlin xxxxxxxx, rostlin rajčete x jiných hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) identifikace Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. solanacearum)

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx pracovat xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x odpovídajícím zařízením xx odstraňování xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx nebo screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx screeningový xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx screeningovým testem xxxxxxxxx na jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x musí xxx proveden xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 vyžaduje xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Použití postupových xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx bramboru, rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a rostliny xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x xxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z infikovaného xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Popis příznaků xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx naznačuje xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího příznaky xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Patogen xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x rostlinného materiálu xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx infekce typické, xxx xxxxxxxx test xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika je xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx infekcí x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx screeningových xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx a xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx X. solanacearum. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx dostačující x tomu, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé sérii xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. V xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Test XX xx popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX je xxxxxx x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx izolační testy xx stejné xxxxxx xxxx dodatečným odebráním xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx vzorku, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx vzorky.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. solanacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorků.

2) Metody xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Je-li xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V případě, xx xx test xxxxxxxxx, vyžaduje xx xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, považuje xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx IF je xxxxxx v xxxxxx 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx selhat x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx dosáhne xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx u xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Raná xxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx xxxxxxxx teplotách xxxxx dne, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x zotavení. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx později xxxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x končí xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stonků xxxxxxxx xxxxxxx obvykle xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx do xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx bramboru. Hlízy xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč u xxxxxxxxx konce x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx několika xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx a odumření xx může xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxxx částice půdy. Xx xxxxxx se xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá místa xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxx původu.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx kroucení listů xxxxxx dolů x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxx jejím úplným xxxxxxxxx. Za xxxx xxxxxxxxxx podmínek xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx než 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Je xxxxx xxxxxxxxx vodou xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx hnědě zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Solanum xxxxxxxxx x X. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx u xxxxxx plevelných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx vadnutí, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx 25 °X xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Při xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx rajčete. Nevadnoucí xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle hnědé xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx řezu xxxxxx části xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx vodou. Z xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx mohou xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx řez xxxxxx xxxxxxx svisle do xxxx, x xx x xxx absenci xxxxxxxx xxxxxxx.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé screeningové xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Xxxxxxx xx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx stonku

(Viz 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx xxxxx A xxxx xxxxxxxxx xxxxx (xxx oddíl 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx testy

Dalšími xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.) atesty XXX (viz xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx se xxxx nebo vrstva xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx nebo z xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx v malém xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) a nechá xx 5-10 minut xxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxx desetinásobných ředění xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx se 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) a/nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. SMSA, viz dodatek 2). Rozetře xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx a fluidní xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Aviruletní formy X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- U Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx XXXX xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxx temně xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx solanacearum

Testy xxxxxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx hniloby xx xxxxxxxx xxxx bramboru

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx této xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx lze vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx x xxxx xxx 200 hlízami, xxxxx xx x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x velikosti 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx xxxxxx použit xxx zjištěni xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx

x) Inkubace xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °C xx xxxx až 2 xxxxx před xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx XXX xxxx, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé hlízy, xxx aby bylo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx takové xxxxx xx xxxx xxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxxxx (suberizaci) a xxxxx xx xxxxxxxxxx x chladu (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx části se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxxxx anebo xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx znovu xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Xxxxxxx xx zpracovat výkrojky x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; v xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx jedním z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx se x rotační xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Thurax) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx sterilované nože (xxxxx) a xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx nebo x xxxxxx přístroji. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Bakteriální xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10 °X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx se xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Peleta xx xxxxxxxxxxxx v 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µl xxx R. xxxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx xxx referenční xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xx při xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx boxu s xxxxxxxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

XX xxxx (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx PCR (viz xxxxx 6.1.6.)

Xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Podrobné metody xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely detekce xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx xx xxxxxxx, měl by xxx založen na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx postupu vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx xxxxxxx kousek xxxxxx 1 xx x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním stonkem. Xxxxxxx se nejspodnější, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské rostliny: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx xxxxxxxxxxxxx nůžkami xx xxxxxxx 1 xx dlouhý xxx x xxxx každého xxxxxx hned nad xxxxxx země. U xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx s xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx representativní xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 rostlin xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější v xxxxxx pozdního jara, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx rostliny xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxx hostit xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Galinsoga xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této fázi xx xxxxx provést xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx xxx xxxxxx x příznaky se xx stranou xxxxxxxx xx xxxxxxxx (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se krátce xxxxxxxxxxx 70% etanolem x xxxxx vysuší xxxxx papírem. Xxxxx xx zpracují části xxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx drcením x xxxxxx maceračním sáčku (xxxx. Stomacher xxxx Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) pomocí xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, uloží se xxxxx stonků x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle není xxxxx, xxx xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx xxxxxxxxxxxxx popsaným x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx testuje při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx xxx xx xxxxxxxx x 10-25% (v/v) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 až -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.4.)

Xxxx XX (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx vodě

(1) Viz xxxxx 4.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx jen tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testu XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Metody xxxxxxx x identifikace X. solanacearum ve xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody a xxxxxx může xxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx vody. Xxxxxxxxx citlivost detekce xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxxxxx populacemi xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx x odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x odpadní xxxx než v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx 10³ buněk/litr povrchové xxxx, citlivost detekce x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx vodě xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx nichž xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx získání xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, že xx toto schéma xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx výskytu xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx si uvědomit xxxx xxxxxxx při xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x období pozdního xxxx, léta x xxxxxxx, xxx teplota xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx určených xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx zjištění snížením xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x geografie xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke značnému xxxxxxx x xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x od xxxxx. Xxx vzorkování xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxx odpadní vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, doporučuje se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx každý xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx nejméně 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 km vodního xxxx a vzorkují xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální frakce xxxxxx následujících metod:

a) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx xxxxx vzorky xxx 10 000 x xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 minut), xxxxx xxxxx při xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 1 ml xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, které obsahují xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, protože xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x popis xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx popsáni v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx izolace, opakují xx testy xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx popsané x tomto xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx patogenu xx xxxxxxxx xxxx, ale xxxx být rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxx xx xxxxx vzít x xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx přítomnosti xxxxxxxx v xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx není xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování xxxxx xxxx by se xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx používanými pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Na xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 až 1 kg xxxx xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z hloubky 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx na výskyt xxxxxxxx, zvýší se xxxxx sběrných xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorky při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x míst xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Před testováním xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx nebo kalu xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx kamínků xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx na výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx právě xxx xxxxxx xxxx. Řez xxxxxx xx ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx, zda se xx několika xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx XXXX xxxx XXX (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxx roztěr kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Roztěry xx nechají xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx obarví xxx xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx se mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test nilskou xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx modři x xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx se xxxxxxx 8% vodním roztokem xxxxxxxx octové x xxxxx xx inkubovat 1 minutu při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Krátce xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx vody x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 nm xxx xxxxxxxx nebo vodní xxxxxx se xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx se xxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X x 70% etanolu a xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx x xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxx se ponoří xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx třeba xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx a pracovat x digestoři.

d) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx, xxxxxx xx přebytečná voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx PHB xxxxxxx v buňkách X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) označených příslušnými xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx buňkami Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx postupuje xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx postup xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx se x pozitivních xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx objeví xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx použije tato xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x zajištění reprodukovatelné xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x negativním výsledkem.

Použije xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx by xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného xxxxx.

Xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx bude xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 xx -86 °C.

Pozitivní kontroly xx připraví xxxx xxxxxxxxx ředění xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx kmene biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857). X vyloučení možné xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx k testování.

U xxxxx xxxx připravené xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxx x rutinnímu xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx se xxxxxx x xxxxx xxxxxxxx, xxx všechny populace xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx xxxxxxxx xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky xx xxxxxxx inkubovat xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx SMSA xxxx mléčně bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 dnech xxxxxxxx xx rozvine xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx ve xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx atypické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx rozeznatelné xx saprofytických bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., xxx xx xxxxxxx izolované kolonie (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx ochranném xxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx identifikace podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) a test xxxxxxxxxx (xxx oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx podezřelé kolonie xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx nedošlo x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx lze xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x extraktech xx xxxxxx x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx být neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx toho, xxxxxxx může xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx polyklonálních xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx xxxxxxx 100 ul extraktu xx xxxxxx xx 10 xx obohaceného xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx být použit xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx promíchá.

4. X xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx R. solanacearum x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx hlavního screeningového xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x dosažení xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx se xxxx XX jako xxxxxx x výsledek IF xxxxx je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx jako xxxxx screeningový xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx úplná.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx nejvyšší xxxxxx, xxx kterém xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktech xx vzorků. Xxxxxxxx xx to xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx být ze xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j jsou xxxxxx fixovány xx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx uvedeno x dodatku 3 B, x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx použít xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx kontroly se xxxxxxx alikvotní díly xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx lze xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou uvedeny x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxx, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx pelety s xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl je xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nezředěné xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx duplikát xxxx xxx xxxxx vzorek, xxx ukazuje obr. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx. Druhá řada xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx při okolní xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxxxx, xxxxxxxx sklíčka je xxxxx skladovat xx xxxxxxxxx stavu x xxxxxx boxu xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx sada xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. První xxxxx xx xxxx xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se pracovní xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x xxxxx XX. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.i)

Obrázek 2. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Podložní sklíčka xx uspořádají na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použitého xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx papíře xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením xx dobu 5 xxxxx x xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx IF. Je xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx způsobit xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx osušením.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx pokryjí xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx se xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx být stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx kapky konjugátu xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx opláchne x xxxxx jako předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového pufru x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx a přiloží xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Zkoumají xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx buněk xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxx IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx porovnání s xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx stejná xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx všechna sklíčka xx skupině vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx saprofytické bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace výsledků xxxxx IF:

i) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF je xxxxxxxxx u xxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml resuspendované xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx považován za xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx xxx vzorky, které xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx test PCR xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx izolace xxxx XX. Jestliže xx PCR použita xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x je xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, je-li xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako negativní. Xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pokusy.

Použijí xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x xxxxxxxxx kontaminace xxxxxx cílovou DNA. Xxxx XXX by xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx cílovou DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) xx xx xxxx vždy xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, aby xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x přenosu XXX.

XXX test xx xxx zahrnovat xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- extraktu xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX ze xxxxxx,

- xxxxxxx xxxx XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, xx xxxxxxx xxxx přidána X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx x virulentního xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud xxxxx, xxx XXX xxxxxx xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx se zabránilo xxxxxxxx kontaminaci, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x prostředí xxxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxx xxxxxx pro xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (xxx dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx enzymových reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx podle Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Tris-HCI (pH 8,0), 1 xX XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x mikrozkumavka xx xxxxxx do termobloku xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx na 5 xxx. xx xxxx.

4. Xxxxx se 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 mg xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Invitrogen), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, pokud xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx viskózní.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a směs xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs odstřeďuje xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °X.

9. Xxxxx xxxx se xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 ml 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xx xxxx po dobu 10 min.

11. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x po xxxx 20 minut při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x promíchá xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx resuspenduje x 100 µl xxxxxxxx XX x xxxxx xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx do xxxxxxx xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx test PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx schválených xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX (1:10 ve xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx kontaminace podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxx xxxxx XX xxxx xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. PCR mikrozkumavky xx umístí xx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx s 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX xxxxxx, xxxx. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx xx proužky XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxx a výsledek xx zdokumentuje.

4. X xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX provedením xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA inkubací xxx optimální xxxxxxx x čase shodným xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxx xx obarvení xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx xxxx u xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, xxx xx xxxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován xx xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx PCR xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx zjištěn xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx také získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou primerů XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. V xxxxxxxxxxxxx protokolech PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, jestliže není xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx získán x xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace nebo XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx na xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní část xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxx xx R. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx připraví suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx kultury. Xxxxxxxx se samostatná xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x dodatku 3 B.

Použití eubakteriálních xxxxxxxxx značených XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx zbarví xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx pozitivní x negativní kontrolní xxxxxxxx, který se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, je xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx provede xxxxxxx xxxxxxxx jako u xxxxxx(x).

6.1.7.1. Fixace bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Připraví xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Eppendorfovy mikrozkumavky x xxxxxxxxxx se xx xxxx 7 xxxxx xx 7 000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx xx 200 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx předem. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 hodinu x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky xx xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C xx xxxxxxx 1 objemového xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx třeba XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 PB (zamíchá xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu (nebo x xxxxxxx sklíček xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx a x suchu při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší xx xxxxxxxx v držáku xxxxxxx.

2. Připraví xx xxxxx inkubační komora xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx se xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx při xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx se 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx pod xx xxxxxxx vzduch. Sklíčka xx umístí xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx v xxxxxx při xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x hybmix (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx vody s xxxxxxxxxxx kvalitou) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x hybmix a 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx vodní xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx se xxxxx sklíčka a xxxxxxxx sklíčka se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx vzorku xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx teplotě 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx přemístí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (např. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µl xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, USA nebo xxxxxxx) do xxxxxxx xxxxxx x xxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx fluorescein xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x morfologií pozitivních xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, kde xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, které nejsou xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxx x případě, xxx xxxxxxx sklíčka xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx krytu sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx nese xxxxxxx xxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx populací xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x když xxxxxx méně xxxxxxx xxx u xxxxx XX.

5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH

i) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx jsou xxx xxxxxxx FITC xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx negativních xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx negativní.

ii) Xxxxxxxx XXXX testu xx negativní, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx xxxxx jako xxxxxxxxx xxxx kromě xxxxx XX, PCR xxxx XXXX pro xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx rovněž xxxxxx x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx jiných xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx určení titru xxx každou xxxxx xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných druhotných xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné jakou xxxxx komerční formulace.

Určí xx titr protilátek xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. solanacearum xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx pufru (XXX) xx xxxxxxx jako xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxxxxx alikvótní xxxxxx vzorkových xxxxxxxx, xxxxx byly předtím xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (xxxx. kmen XXXXX 4I56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X a X). Xxx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx musí být xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx kontrolního materiálu xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx ELISA.

a) Xxxxxxx xxxx ELISA (Xxxxxxxx Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxx boxu xxxx x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx se promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp nebo xxxxxxxxxx) a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C nebo 14 - 18 x při xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx vylijí z xxxxx. Jamky xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx xx titr).

6) Xxxxx xx 100 µx do xxxxx xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °C.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx vylije x xxxxx x xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx ředění konjugátu xxxxxxxxx fosfatázy x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Konjugát se xxxxxx x xxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx alkalického xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) do xxxxx jamky. Nechá xx inkubovat v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 nm v xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx polyklonálního xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C 4 xx 5 xxxxx nebo 4 ° X xx xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4). Xxxxx xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum x XXX (dodatek 4) s xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µl do xxxxx xxxxx x xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x pravidelných intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx hodnota optické xxxxxxx (OH) x xxxxx xx stejnými xxxxxx je xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, pokud xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx než 1,0 (xx 90 minutách xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x negativním xxxxxxxx testovaného vzorku, xxxxx xxxxxxx XX xx všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než dvojnásobek xxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx test xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx xxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx protilátek.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx kolonie R. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byl předtím xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (např. kultivaru Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx u xxxxxxx xxxxxx. Podrobnosti xxxxxxxxx xxx x dodatku 8. Xxxx se xxxxxxx xxxxx (např. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. xx 3. listů xx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Pokud xxxxx, xxxxxxxxxxxx proto xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx stonky xxxxxxx xxxx nad xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Vzorek se xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx příčný řez xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx řez xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xx xxxxxx xxxxxxxx vazelínou x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx se nainokulujte 5 xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml, připravenou xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx negativní kontrolní xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací rostliny xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx se zabránilo xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Aby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx hnojení, zalévání, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx kontaminaci. Xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx vzorky.

Hledají se xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X infikovaných xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx pozorovány žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, provedou xx xxxxxxxxx roztěry (xxx 4.1).

6.1.9.7. Identifikují se xxxxxxx čisté xxxxxxx x podezřením xx X. xxxxxxxxxxxx (bod 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx typické xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x xxxxxx rostlin xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxx infikovány xxxxxxxxxx X. solanacearum, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx použitím xxxxxxx dvou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vlastnosti, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx naopak xxxxx x R. solanacearum, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx xxxx xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Využití xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Xxxx x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx aktivita -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Lelliot&Stead (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x xxxxx IF (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx jiný xxxxxxxxxxx xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx test ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx k R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx výsledku xxxxxxx z xxxx xxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx x porovnání x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Testy XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx suspense v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx být uchovány xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx xx xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Weller xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxx velikost x mají xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda XXXX (6.1.7) s xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Test XXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx u xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx metoda FAP (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

6.2.6.3. Xxxx FAP xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3XX, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX poukazuje xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx xxxxxxxx jedné x následujících xxxxx.

X xxxxxxx provedeného testu xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří xxxxxxxxxxx x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx x čistou xxxxxxxx X. solanacearum x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx živná půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx x 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 xxxxx), xxxxxxxx xx xxxx xxxxx 72 hodin xx xxxxxxx zelené xx xxxxxx a xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Viz Lelliott x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, BOX x XXXX (Xxxxx xx xx., 1995; Smith xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx der Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x diferenciaci xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2X x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a x xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako X. xxxxxxxxxxxx musí být xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx přibližně 10⁶ buněk na 1 xx xx 24 až 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Inokuluje xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (xxx odst. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx při xxxxxxx 25-28 °X x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx kultur xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li se xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí a/nebo xxxxxxxxx, chlorózy nebo xxxxxx.

5) Provede xx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ze stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 mM xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx suspense se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Po inkubaci 48 xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx typických xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx xxxxxxx a xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 g

Bacto-Pepton (Difco) 5,0 g

D(+) Glukóza (xxxxxxxxxx) 10,0 g

Bacto-Agar (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (SPA)

Sacharóza 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Difco) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí se xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x přidá se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), xx xx dosažení xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx živná půda

Casamino xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 ml

Bacto-Agar (Xxxxx) (xxx pozn. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C x přidá xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, aby xx získala xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová xxxxxx (Xxxxx) 5 mg/l

Polymixin-B-suIfát (Xxxxx P1004) 600&xxxx;000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Xxxxx X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci xxxx xxxxxxxx růst R. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) může xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. X takovém xxxxxxx xxxx xxxx X. solanacearum pomalejší, xxx může xx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Zvýšení koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx ovlivnění růstu

Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik se xxxxxxxxxx x skladují xxx xxxxxxx 4 °X x temnu x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Misky x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx xxxxx živné xxxx by měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx půdy xxxxxxxx suspense referenční xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) a xxxxxxxxxxx, zda xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx živné xxxx

Xxxxx půda XXXX (Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx jako pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Caruso xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut x xxxxxxx se xx 50 °X. Xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Komerční xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx' x pozitivní kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x lze xx xxxxxx x těchto xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx rostlin (XXXXX), Xxxxxxxx vědecká xxxxxxxxx Xxxx, UK.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Referenční xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx výše uvedených xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx geneticky xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

b) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze 200 zdravých xxxx xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ a 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x testech xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) s 10⁶ xxxxxxx na 1 ml k xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx xx x 10 xX fosfátovém xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx xx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x pupkových konců 200 xxxx z xxxxxxxx odrůdy x xxxxx slupkou, x xxxxx xx ví, xx je prosta X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx pelety. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x dalších xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx sterilních xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx xx doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx IF.

Pro XXX xxxx xx xxxxxxx extrakce DNA x xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx IF, XXXX x XXX xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx pufr (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx používá xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx koncentrovány xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a sterilizuje x autoklávu xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro IF xxxx

Xxxx xxx XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx používá x xxxxxxxxxxx podložních sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx na XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx ELISA

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx podíl aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), pH 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Blokační pufr (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx voda xxxxxxx xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx a koncentrovanou XXx xx xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx se xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 ml xxxxxxx.

4. Xxxxx pro xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 g

NaH XX₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12X₂X 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 ml

Smíchá xx x xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx HCl.

Dodatek 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x okénku xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x rozmezí 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = tubusový xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Seal xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC TTG XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 xxxxxx xxx 96 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 20 sekund při 68 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 30 sekund xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx 9600. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx ii), xxx) x iv).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Pastrika a Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Reagencie	Množství x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μl
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Směs xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx použitím Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (syntéza xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx MJ Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx X xx inkubační xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají velikost 457 xx a 96 xx.

3. Protokol xxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX XXX XXX XXX XXX G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX ACC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. solanacearum = 718 xx (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontroly PCR 18X rRNA = 310 xx (sada xxxxxxx NS).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (hybridizace xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 45 sekund xxx 72 °C (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx jiných xxxxxxxxx xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční enzymová xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx 1 nebo Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Protokol XXX xxxxxxxxxx xxx biovar X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX GAA GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX XXX GAC X-3'

Xxxxxxxx primer Rs-3-R: 5'-XXX ACG GCA XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 bp

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx pro obě xxxxxx specifické xxx xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx se při xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x iv).

4.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu.

Produkty XXX vzniklé xxxxxxxxxxx XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Rs-1-F x Rs-1-R vytvářejí xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Bsm X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx místa.

5. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (redestilovaná) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,001

Xxxx xxxxxxxx se xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro R. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-ggc xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx agg xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx molekulárně čisté xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) na xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1N XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; pH 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x xxxxxxx potřeby xx upraví xxxxxx XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Přefiltruje xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx a xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Formamid 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx množství pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 g

KH₂PO₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Pěstování xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného výsevního xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 hodin xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 July 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division specific xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx application xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, P., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Sandwich Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Ralstonia solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Cook, D., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Interactions 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Sensitivity xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, M.C. (1994) Modification of x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Newsletter 10, 3-5. Australian Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., Y. Xxxxxxxx, X. Xxxxx, X. Tanaka, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Detection xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection xxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx symptomless potato xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and specificity. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum xxxxxxx xxxxx whole xxxx xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Xxxxxx, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx x tetrazolium xxxxxx. Phytopathology 44; 693-695.

14. Klement X.; Xxxxxxx, X xxx X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Kiadó, Xxxxxxxx, 568 xx.

15. Xxxxxxxx, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. In: X.X. Delme et xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Louws, F.J., Xxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, F.J., 1994. Xxxxxxxx genomic xxxxxxxxxxxx xx phytopathogenic Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas pathovars xxx strains xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, D. X., Stephens, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx genomic xxxxxxxxx xx xxx-XXX fingerprinting xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Phytopathology 85; 528-536.

19. Xxxxx, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Xxxx, X.X. Holloway, X.X. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific XXX xxxxxx and XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (fornierly Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Xxxxxxxxxx. 5; 19-33.

20. Pastrik, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham reaction. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X ribosomal intergenic xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, A., Xxxxx, X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies to Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx wilt. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant pathogenic xxxxxxxx. Schaad [Hrsg.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Yotmg, xxx X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx sy xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx polymerase xxxxx reaction. X. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. and Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx pathogenic xxx xxxx other Xxxxxxxxxxx xxx. xxxxx xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Bacteriology 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, A.C., Xxx, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx solanacearum, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx banana based xx 16S rRNA xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, J.J., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Ralstonia solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (eds.) Xxxxxxxxx wilt disease: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Elphinstone, X.X., Xxxxx, X., Stead, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx an xxxxxxxxx xxx quantitative xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx assay. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Detection of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Appl. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.