Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx zemědělství xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 zákona č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 xxxx. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné xxxxxxxx Xxxxxxxx unie¹⁾ x xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Smith) Davis xx xx. subsp. xxxxxxxxxxx (Spieckermann et Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx a

c) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Pojmy

Pro xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. původce xxxxxxxxxxxxxx - brambor (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x čeledi xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx potvrzena xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx X.) kromě xxxxx x xxxxx, xxxxx xxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx L.) x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx území xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x k xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx vztahují xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx opatření xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, skladu xxxx jejich xxxxx x veškerých jiných xxxxxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby xx xxxxxxx, v xxxxxxx xxxxx x xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx původcem kroužkovitosti xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) karanténním xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 1 zákona x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby,

j) xxxxxxxxxxxx zónou - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - partie xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx xxxxxxx partie; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzné xxxxxx považují klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx množením x jediné rodičovské xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, které xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx sesterským xxxxxxx xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Průzkum výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx xxxxxxx každoročně x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx ze členských xxxxx Evropské xxxx (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) namátkově vybrané xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx a z xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx bramboru xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(3) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxxxx xxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx vymezeném podle §5 odst. 1 xxxx. x).

(4) Zjišťování xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx zemí a xxxxxxxxxx xx třetích xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ x xxxxxxxxx vybrané partie xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx určené x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx používané x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx odpady x xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx hniloby navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx vodní zdroje xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxx a plevelné xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx pěstební xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx tyto partie xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 xxxx. x) x b), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 písm. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) prohlídkou xxxxxx rostlin xxxxxxxx x xxxx dužninou xxxx, x xxxxxxxxx xxxx ve xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx hlíz xxxxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. c) x x),

x) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx uvedených x xxxxxxxx 5 písm. x),

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx hostitelských rostlin xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 5 písm. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Způsob xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x dobu xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona Xxxxx xx základě uznávaných xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx produkce xxxxxxx x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x x xxxxxxxxxx xx aktuální xxxxxxx ve výskytu xxxxx na xxxx xxxxxx zavlečení původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxxx ve Věstníku Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx ústavu xxxxxxxxxxxx (xxxx jen "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xx provádí xxxxxxxx stanoveným v příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona a xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx.

(9) X průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xxxxx bude xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, xx vzorky xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx vlastní xxxxxxxxxx xxxxxx bramboru xxxx xxxxxxx anebo je xxxxxxxxx xxxx partii xxxxxx xx xxx xxxx xx pěstuje xxxx xxxxxxxxx.

(11) Podrobnosti x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx v souladu x §10 odst. 5 xxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X ostatním xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xx účelem xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxx průzkumů xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Komisi, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ xxxxxxxx xxxxx xxx výsadbu xx pozemcích množitele, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. června. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx předchozího xxxx. Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxx xxxx důvěrné.

§4

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxx ověřené xxxxxxxx xxxxxxxxxx příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a x xxxxxxx původce hnědé xxxxxxx xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxx screeningového xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X číslo 1 x oddílu XX, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x xx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 a xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx v příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx toto podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 odst. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx všech xxxxxx xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx zjistitelné xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx založená xx stupni odhadovaného xxxxxx xxxxxxx možného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx zajištění úředního xxxxxxx xxx přesunem xxxxx ostatních xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Při podezření xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, xxxxx Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x bude s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Xxxxx xxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, které xxxx mít původ x České republice xxxx které xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Pokud xxxxxx xxxxxxxxxxx testování xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 potvrdí xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 zákona a x přihlédnutím k xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ke xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

x) označí xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné objekty xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x něhož byl xxxxxx odebrán, x xxxxx xxxxxx do xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x místo xxxx místa xxxxxxxx xxxxxx těch, kde xx xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány a xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede odborné xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, pěstování, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx písmene x) a bezpečnostní xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x souladu x ustanovením bodu 3 přílohy č. 3.

(2) X xxxxxxx potvrzení xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x ohledem xx xxxxxxxxxx vodu, xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a xxxxxx brambor a x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxxxxx vegetace, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, zalévání xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx odebraných vzorků xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 ve xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, x xxx xxxx odebírány xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx označení xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx a xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx neprodleně xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Komisi v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), popřípadě xxxxxxxx 2 písm. x), x xxxxx podrobnosti x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Podrobnosti x xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx učiněném obdobně xxxxx odstavce 3, Xxxxx odpovídajícím xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx odstavců 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx bezpečnostní xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxx 2 písm. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin

(1) Xxxxx zajistí xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), x xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx zdroje xxxxxx x xxxxxxx možného xxxxxxxx s cílem xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxx xxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxxx 1 Ústav x případě xxxxxxx xxxxxx další xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx zamoření a xxxx vymezí xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), b) x x).

§7

Opatření xxxxx šíření xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx xxxxx hniloby

(1) Xxxxx v souladu x §11 odst. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. a) xxxxx být xxxxxx x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx x bodě 1 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx předem xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx zneškodňování xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx označená jako xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 odst. 1 xxxx. b) smí xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx způsobem xxxxxxxx v xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x že xxxx splněny xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x pokud není xxxx xxxxxx xx xxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx podle §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx jiné xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, označené xx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx xxxxxxxx xxxx pravděpodobně zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), xx xxx zničí xxxx podrobí očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx zamořené xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx stanovená x xxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x případě xxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby x bodě 5 přílohy č. 4.

(2) Xxxxx může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx budou xxxx xxxxxxxx xxxxxxx odůvodněná, xxxxxxxxxx a xxxxxx. Xxxxxxxxxxx o xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 xxxx. x) uvnitř xxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxxxxxxx zóně xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx podle §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. x) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx nařízená xxxxx xxxxxxxx 1 a xxxxxxxx 2 xx xxxxxx xxxxxxx x xx uplynutí doby xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Přechovávání xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x souladu x §7 odst. 1 xxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx diagnostickým xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 zákona, pokud xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx opatření při xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, vypěstovaný xx xxxxx Xxxxx republiky x xxxxxxx xx xxx, musí xxx xxxxxxxx laboratornímu xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxxxx průzkumu podle §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx x §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx hniloby.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru určené x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, x nebo

b) xxxxx byl v xxxxxxxxx uplynulém sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx klonové xxxxxxxxxxx xx zaměřením xx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x případech, x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx žádná xxxxxxx xxxxxxxxxx, nebo

c) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani původce xxxxx hniloby xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce potvrzen x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx republiky.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha x. 1 x xxxxxxxx x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx popisují xxxxx postupy, které xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálů xxxx uvedeny v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože protokoly xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kultur Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Ústavem.

Testovací xxxxxxxxx musí xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nezbytná xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle požadovaných xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. oddělení xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx je xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech.

Pokud xx první screeningový xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx je x xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx, pak xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x musí xx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx považován za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 xxxx. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek IF xxxxx xxxxxxxxx druhým xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x identifikaci xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Postupový xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx bramboru a x xxxxxxxxxx bramboru xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx x xxxxxxxx bramboru x podezřením x xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Zahrnuje xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx identifikaci xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx testy jsou:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx izolace xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x pokročilých xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Proto xx xxxxxxxxxx používat xxxxxxxxxxxx i selektivní xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx xxxxxxxx zkouška xxxxxxxxx, ale xxxxxxxx xxxxxxx xxxx typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx použití xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška xxxxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx xx zjištění xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Pozitivní xxxxxxxx z nejméně xxxx screeningových testů, x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, aby byl xxxxxx považován xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Standardní xxxxxxxx vzorku xx 200 hlíz, ačkoli xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx alespoň xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, že xx xxxxx test pozitivní, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx založených na xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxx imunofluorescence (XX).

Xxx xxxxxxxxx IF xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX činidla x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) XXXX xxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx izolaci Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx nebo XXX-88 xxxxx a xxxxxx resuspendované pelety 1/100. Typické kolonie xxx získat xxxxx 3-10 xxx po xxxxxxxxx xx médium. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx vyčistit x xxxxxxxxxxxxx. Pro xxxxx xxxxxxx potenciálu xxxx xxxxxxxx opatrnou xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Pokud xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx nepodaří, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx biotest (viz xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx melongena). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx XXXX xxxx XXX-88 xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddílu 8.

(10) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů pozitivní, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx ze xxxxxx xxxxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x blízkosti xxxxxxxxx xxxxx hlíz xxxxxxxx vzorku x x xxxxxxx xxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(12) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru

(1) Xxxxxxxxxx velikosti vzorků - xxx xxxxx 3.2.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxxx izolace a xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx je xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx biologických principech. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) PCR xxxx xx xxxxxx x oddílu 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx v xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx v xxxxxx 7.

(9) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou selhat x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx screeningových testů xxxxxxxxx, xxx izolační xxxxx jsou negativní, xxxxxxx xx izolační xxxxx x v xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx se xxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xx xxxxxxx xxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(11) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti

2.1. Xxxxxxxx bramboru

V evropských xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx zamění x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxxx na xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx vadnutí xxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, x xxxx xxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx omezený. Xxx vznikají xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx spodní xxxxx stonku xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx stonky xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxx listy a xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx jsou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x okolí xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx hlízy může xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx a xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx vystupují x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx obsahuje miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx být xxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxx xxxx prstence, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x destrukci xxxxxxxx pletiv: xxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx korové xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se objevují xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx okraji. X xxxxxxxx době xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxxx dochází x xxxxxxxxxx poškození xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxx, xx-xx xxxxxxx, rozlišit xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxxxxxx xx jiných xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx jsou x xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxx řady xxxxxxxx xxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx vzorků

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 hlíz xx 1 xxxx. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx velikosti. Větší xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede k xxxxxxxxx xxxx složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx lze vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx s xxxx xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx.

- Validace všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx založená xx testování xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxxxxxx solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx xxxx přípravou xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx mezi xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Xxxxx xxxxxx xxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx je xx xxxxxx příliš zeminy x jestliže se xx xxxxxxxx XXX xxxx xxxx přímá xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx či xxxxxxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx slupka xx xxxxxxxx konci xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx minimum xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx zpracovány xx 24 hodin xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X po xxxx xxxxxxx dvou týdnů.

Všechny xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, provede xx vizuální vyšetření xxxx hlízy po xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx hlízy x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 4 - 10 °C xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx x nepoužitých xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou uzavíratelné x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx konce okamžitě, xxxxx to není xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx dobu xxxxxxxxx 72 hodin xxxx při pokojové xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Xxxxxxx x xxxxxxxxxx výkrojků x xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitost.

3.1.3. Xxxxxxxx z pupkového xxxxx xx zpracují xxxxxx x následujících xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 hodin xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx homogenizují x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3), xxx v xxxxxx xxxx rozdrcením v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx mlecího zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx mixéru existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx vzorků. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ostří (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx být xxxxxx XXX xxxx, xx xxxxx zamezit xxxxxxx XXX na xxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx se xxxxxx x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x použití xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx nadměrně xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx odstředěním (xxx xxxxxxxxx 180 x xx dobu 10 minut xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx se xxxxxx v 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 3). Xxxxxxx xx 500 µx pro xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx solanacearurn a 500 µx xxx xxxxxxxxxx účely. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx poměrné části x ke xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86°X (měsíce). Extrakty xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě 4-10°X.

Xxxxxxxxx zmrazení a xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolami x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx odděleně, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí i xxx xxxxxxx na XX xxxxx a xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx latentních xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro kombinované xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, měly xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx strany xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x uzavřené xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části xxxxxx xx xxxxxxxx jedním x následujících postupů:

a) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x přiměřeným množstvím xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx nebo vhodného xxxxxxx xxxxxxxx. Pokud xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

3.2.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx není nutná, xxx lze ji xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx extrakt xx xxxxxxx na 2 xxxxxx části, Jedna xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x druhá polovina xx xxxxxxxx x 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné xxxxx xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx byla xxxxxxxxx xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx xxxx PCR xxxx XXXX. Jestliže xx xxxx IF xxxxxxx jako druhý xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, je xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Pokud je xX xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu x xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx proti xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - ATCC33113 (XXXXX 2137) nebo XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx xxxxxx xxxxx xxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx ředění, při xxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 až 106 xxxxx na 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx monoklonální protilátky xx xxxx xxx XX xxxx alespoň 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx ředěni (WD) x blízkosti xxxxx xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa. xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx).

Xxxx xx xxxxxxx na xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx peletového xxxxx (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx stejném xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx pokud xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (viz 4.2).

Xxxxxxxx xx oddělená xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxx ve xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X) xx xx xxxx podle možnosti xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, xxxxxxx x 10 okénky x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

4.1. Sklíčka xx test xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µl - xxx xxxxx xxxxxx objem vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx nezředěné pelety (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxx xx měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µl - xxx větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako duplikát xxxx pro druhý xxxxxx xxxxx xxxxxxx. 2.

4.2. Vysuší xx xxxxx při pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx na sklíčko xxx zahřátím (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °X), nad xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % xxxxxxx xxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx sklíčka xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx možná xxxxxxxxx xxxx (maximálně 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X xxxxx xxxxx xx xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v ostatních xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx titr (2X).

x) Xxxxx přípravy sklíčka xx xxxx x xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxx xxxxxxx xx test xxxxx oddílu 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx papír. Každé xxxxxxxxx okénko se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx protilátky xx každém okénku xxxx být nejméně xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx, postupuje xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx ponořením po xxxx 5 xxxxx x xxxxx XX Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx přenosu xxxxxxx, xxxxx xx mohly xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Xxxxxxx se xxxxxx xx vlhký xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xx pokryjí ředěním xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxx na vlhkém xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx konjugátu xx setřesou xx xxxxxxx x xxxx xx opláchnou x xxxxx jako předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového pufru x glycerolem (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do každého xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx dvou navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx a xxxxx obarvené v xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx pracovním xxxxxx. Xxxxx xx barevnost xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x charakteristickou xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách sklíčka (xxx internetová stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx kontaminace xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx pozitivní xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx sklíček) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx přesnost xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx bramboru x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících buněk x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XX testu:

a) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk s xxxxxxxx morfologií xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx je xxxxx typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XX xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxx XX test. Xxxx se XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx k dokončení xxxxxxxx nutné xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány x xxxxxxxxxx výsledkem.

Následující xxxxxx xx měl xxx xxxxx xxxxx proveden x xxxxxxx připravenými xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx x extraktem, xxxxx xxx xxxxxxx x glycerolu xxx xxxxxxx -16 až -24 xxxx -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (např. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) v 0,01 M xxxxxxxxxxx xxxxx (XX) z 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku.

Test xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx u xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xx dobu 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného max. 24 hodin xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx se přes xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % xxxxxx. Xxx xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. x 50 µl 0,01 X XX x 50 µl 96 % etanolu. Promíchá xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx dobu 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µl 0,01 X XX (xxx dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx xx čisté 10 xxxxxxxx sklíčko, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx se xxxxxxx 2 různé xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, x to xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) xxxx xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx, přidá xx stejné xxxxxxxx 0,01 M XX x zamíchá se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx sklíček xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v hybridizaci xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x v xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 mM Xxxx-XXX, 50 mM XXXX, xX 8,0). Xxxxx xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx xxxxx jednou xxxxxxx x xxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx jednou, a xxxxx filtračním papírem.

Alternativně xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x xxxxx (20 xX Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx xx dobu 1 xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx vlhká xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci při xxxxxxx 55 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx na 1 xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx 5 xxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxx xxx teplotě 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx na xxxxxxx / xxxxxxxxx se xxxxx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, aby xxx ně xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx předehřáté xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 x x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Xxxxxxxx xx 3 kádinky xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 l 1x xxxxxxx (334 xx 3x hybmix x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 xx 3x hybmix a 833 ml UPW). Xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

5.2.9. Xxxxxxxx se nadbytek xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 15 minut x xxxxxxx x 1x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Sklíčka xx xxxxxxxxxx ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx epifluorescenční mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx se xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx obarvené Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx se buněčná xxxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx. Test XXXX (xxxxx 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx je zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx x kolem xxxxxx. U xxxxxx, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx xx xxxxx fluoreskující xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx testovacích sklíček (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx než x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, které xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Xxx xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx pufru xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na xxxxxxx xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx části bramboru x xxxxx xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus, xxxxxx mnohem méně xxxxx xxx u XX testu.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx fluoreskující buňky x xxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx, xxx 5.3.2.

5.3.6. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx FITC xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve všech xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxx xx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx pravděpodobně xxxxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx další xxxxxxxxx. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx xx negativní, xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. XXX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxx-xx xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, musí být xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Pokud xx XXX test xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx screeningového testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění 10³ xx 10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do xxxxxx extraktů, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx dosažení maximální xxxxxxxxxx a xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx PCR činidla x protokoly. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxx kontaminaci xxxxxx cílovou DNA. XXX xxxx by xxxx provádět zkušení xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxxxxxx možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X negativními xxxxxxxxxx (u průběhu xxxxxxxx DNA x XXX) xx xx xxxx xxxx zacházet xxxx x xxxxxxxxx xxxxxx, aby bylo xxxxx, xxxxxx došlo x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx měl xxxxxxxxx následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx testován na Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx a XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxx xxx xxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- suspenze 10⁶ xxxxx na 1 ml Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx XXX extrahovanou x pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx prostředí xx xxxxxx, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx ze xxxxxx by xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx brambor.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x koncentrující xxxxxxx XXX x xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

a) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxx pufru (100 mM XxXx, 10 mM Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µl extraktu xx vzorku a xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx nebo xxxxx xxxxx x teplotě 95 °X na xxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 xx lyzozymu xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, xX 8,0) a inkubuje xx při xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx při xxxxxxx 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy DNAR xxxxxx B (Invitrogen)a xxxxx se promíchá xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx a xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl chloroformu x míchá xx xxxxxxxx, až xx xxxxxxxxx sníží a xxxx se xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15 000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx.

9. Přenese xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °C), krátce xx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx xx ledu po xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x odstraní xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Odstřeďuje xx xx 15 000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx resuspendujte x 100 µx sterilní xxxx (UPW) x xxxxx xxxx nejméně 20 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Skladuje xx xxx xxxxxxx -20 °X xx xx xxxxxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx odstraní xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx použije 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx DNA.

6.1.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx použít, xxxxx xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx vzorku XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Validovaný xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx interní xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx extraktu DNA xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx negativní kontrolní xxxxxx obsahující xxxxx xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, která xxxx xxxxxxx do směsi XXX namísto vzorku.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx xx stejného xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX x xxxxxxx vzorku smíchané x 3 µx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového gelu x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X xx xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 bp xxxxxx.

6.3.2. Detekují xx xxxxxxx XXX barvením x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, např. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti a xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx amplifikované XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx a xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx pod XX prosvícením xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX testu:

PCR test xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxxx zjištěn v xxxxx xxxxxx, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxxxx interními kontrolními xxxxxxx: xxxxx xxxxxxx XXX očekávané velikosti xxxx být xxxxxxxxxxxx x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx zjištěn xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx x vzoru (xxxxx xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx XXX xxxxxxx (xxxxx 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxx, xxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx byly xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx podezření xx xxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z jedné xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie na 1 xx xxxxxxx x xxxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx byly xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxx při xxxxxxx xxxxxxx připraveného extraktu xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx, které xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx odrůdy lilku xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx vynikající xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x případě xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové podmínky.

Podrobnosti x pěstování xxxx xxxxxxx v Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx podle 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx jednou x xxxx xxxxxxxxx xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxx xx zajistilo xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, bude xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx xxxxxx.

7.2. Inokulace xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (pro květináče x xxxxxxx 10 xx je vhodný xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx šířky x 15 xx xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx mezi xxxxxx x xxxx xxxxxx proužek xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx fixovat xx místě xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx x prvním xxxxxx listem podélný xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 xx x hluboký xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx přidrží xxxxxxxx xxxxxx špičky čepele xxxxxxxx x nanese xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx mezi xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx xx překryje xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem II

7.3.1. Xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx lístky x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (přibližně 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx pelety.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxx sešikmený zářez (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx a xxxxxxx xxxxxxxxx jako 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx v místě xxxxx suspendované pelety.

7.3.3. Xxx se xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku vejcoplodého xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx injekční xxxxxxxxx x xxxxxxxx jehlou (xx xxxx než 23 G). Peleta xx rozdělí xxxx xxxxxxxxx rostliny lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx inokuluje 5 rostlin xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxx kultury původce xxxxxxxxxxxxxx x kde xx xx možné x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx.

7.6. Xxxx negativní xxxxxxxx se xxxxxxxxx 5 rostlin xxxxxxxxx 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Po inokulaci xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Rostliny xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x vysoké xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Buňky Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx při teplotách xxx 30 °X x optimální xxxxxxx xx 21 °X. Xxx xx zamezilo xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x negativní kontroly xx skleníku xxxx xxxxxxx komoře na xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx při nedostatku xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, zalévání, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx tomu, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i xxxxxxx xxxxxx byly xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx hmyzem, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx bakterie x xxxxxxx xxxxxx na xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx u xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Xxxxxx pletivo xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx vodnatý xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx xxxxxx xx objevení xx xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx mohou xxxxxxx xxxxxx. Mladé xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx nízkým xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx nezbytné xxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxx xxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxx xx. Xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx bakterií xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Xxxxx k xxx Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. carotovora subsp. xxxxxxxxxxx, Xxxxx xxxxxx xxx. foveata, jakož x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx rychle xxxxxx xxxx listy xxxx xxxx rostliny. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: xxxxx xxxx rozliší Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Erwinia xxx

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx, měla by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx listů x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX nebo XXX xx šťávě x xxxxx x xxxxxxx xx na xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx podezřelé x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx identifikují x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx optimální, se xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx inkubační xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx po 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx stonků o xxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx odebraných xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx test xxxxxxxxx, xxxx by xxx xxxxxxxxx izolace xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx identifikují x potvrdí xx xxxxxxxxxx (viz oddíl 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, xx-xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx ho xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou xxx xxxx přerůst xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x proto se xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxx hlízy (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx možná za xxxxxxx selektivního média x xxxxxxxx ředění xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx části hlízy xxxx xx stonků xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx nevykazují xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx v testu XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx stonků xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.x.2.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 xxx na xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus (xxxx. XXXXX 4053 nebo XX 406). Aby xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx média xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx xxxxxx.

8.1. Xxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µl xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx z xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Vzhledem x xxxx, xx xxxxxxxx je xxxxxxx x infikovaných pletivech xxxxxxxx ve vysokých xxxxxxxxxxxxx, xxx saprofyty xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µx x každého xxxxxx, x xxxxxx 1/100 xx 1/10 000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxx (xxxxxxx) x techniky xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx xxxxx, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx YGM xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx dříve, xxx xxxx média xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 xxxxx.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- živný xxxxxxxxxx xxxx (xxxxx xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx agar,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx probíhá při xxxxxxx 21-24 °X xx xxxx xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu a xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx špendlíkové hlavičky, xxxxxxxxx, xxxxxxxxx zbarvené.

8.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X subkultur xx rychlost růstu xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx smetanově bílé xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx tekuté, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxx x průměru 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9) x xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (viz xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx kultury xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xx použití xxxxxxx xxxx následujících testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Nutriční x xxxxxxxxxxx identifikační testy

Zjišťují xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx média xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X x xx xxxxx xxxxx xx xxxx být vyhodnocena. Xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx musí zahrnovat xxxxxxxx xx známým xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx provádět xx použití inokula xx subkultur xxxxxxx xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - nebo xxxxx

Xxxx xxx 37 °X -

Růst v 7% XxXX -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- laktózy - nebo xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk/ml v xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Připraví xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Provede xx xX xxxxxx (xxxxx 4).

d) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xX testu xx xxxxxxxx, xxxxxxxx xX xxxx xxxxxxx xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx xx xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xxxxx x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x ohřívacím xxxxx xxxx xxxxx vodní xxxxx při xxxxxxx 100 °C xx xxxx 4 minut. X případě xxxxxxx xx může lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx NaOH xx xxxxxxx koncentrace 0,05 M. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °C xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (xxxx. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Xx x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Identifikace Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony XXX xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na xx x UPW.

b) Xxxxxxx xx xxxxxx XXXX (oddíl 5)

x) Xxxx XXXX je xxxxxxxxx, jsou-li dosaženy xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se xxxxxxx na xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) xx xxxx 72 hodin xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°C).

b) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx FAP xx xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx kultury xxxxxxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Přítomnost xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx kyselin 15:1 Anteiso X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 a 17:0 Xxxxxxx xxxxx svědčí x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter a Xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x těchto xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, která xx xxxx xxxxxxxxx xx všech Xxxxxxxxxxx xxx. x rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml v XXX.

x) Xxxxxxx se xxxx xxxxxxxx xxxxx Xxxxx a kol., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxx provedena xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Připraví xx inokulum přibližně 10⁶ xxxxx na xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 18-24 °X při dostatečném xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx k přemokření xxxx vyschnutí. X xxxxxxx kultur by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, avšak rostliny, xxxxx xx uplynutí xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx příznaky xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx až 3 xxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx nevyskytují, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx se xxxxxxx x xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx části stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx ze xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx na XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx po dobu. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx und Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Laboratory	York	Anglie
Scottish Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Unité de Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Quarantaine xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Xxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Protection Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrol xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXX/XX a FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 až 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Xxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxx z pupkových xxxxx 200 xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx x bílou xxxxxxx, u xxxxx xx xxxxx, xx xx xxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus.

Pupkové xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se peleta x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx s 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx se 100 µx xxxxxxxx X. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použije xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavky xx použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Mikrozkumavky xx opatří xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 xx-24 °X xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx vzorcích xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx prostřednictvím xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx IF x XXXX xxxxx xx xxxxxxxx kvantitativní xxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX musí xxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx kontrol x xxxxx xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx skladovat xx dobu xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Tento xxxx xx používá x extrakci bakterie x xxxxxxxxxxx tkání xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min.

Užitečné mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

	Xxxx	Xxxxxxxx (xx litr)
Lubrolové xxxxxx	Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (*)	0,5 g
DC xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX xxxxxxxxx pufr, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Pufry xxx XX xxxx

2.1. Xxxxx xxx IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx se používá x mytí xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 ml

Destilovaná xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx dostupné, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xX a XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x jednom xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx na sklíčku x xxxx jamkami x

x = plocha xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx fluoreskujících xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx C. x subsp. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxx xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx = XXX)

Xxxxx bakto xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 X xx dobu 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxxxxx glucose xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 g
Baktopepton (Xxxxx)	5,0 g
D(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se sterilizace x xxxxxxxxx xxx 121 °C po xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x minerálními xxxxxx (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx xxx 115 °X xx xxxx 20 xxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015 g
NaCl	0,05 x
XxXX4 . 7H2O	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, pH xx upraví na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.) x ochlazení xx 50 C xx přidají antibiotika: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx roztoky xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) x nalidixic xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) v 96 % xxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) x xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx do 8 +/- 2 °C.

Médium XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 x
XX2XX4	0,5 x
XxXX4 . 7H2O	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí,upraví se xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxx X xxxxxxxx (Sigma) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx se rozpustí xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx v 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx B xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx je trvanlivost 1 xxxxx při xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °C.

Dodatek 6

Validované xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

xxxxxx PSA-1 5'- xxx xxx xxx xxx tgg xx xx -3'

xxxxxx XXX-X 5'- tac tga xxx xxx tca xxx xxx x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx xxx xxx xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost amplikonu x XXX C. xx. subsp. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (sada PSA-primer(i).

Předpokládaná xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx PCR xxxxxxxx 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxx	Xxxxxxxx xx xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 mM XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μl	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μM) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μl
Celkový xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody xxxx xxxxxxxxxx xx použití Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Gibco XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx XXX xxxxx Xxxxxxxx (2000) (viz xxxxx 6.1 xxxx. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná nová xxxxxxxxxxxx koncentraci činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx pro XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 cyklus: x) 3 minuty xxx xxxxxxx 95 °X (denaturace XXX xxxxxxx)

10 xxxxx xx) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 sekund xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 cyklus xxxx) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento program xx optimalizován pro xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Research XXX 200. Xxx xxxxxxx jiných xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), xxx), xx), x), vi) a xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx xxx teplotě 37 °X po xxxx 30 minut. Fragmenty xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µl

Destilovaná xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím se xxxxx na 1x.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx pro Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx tgc xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx eubakteriální xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1N NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (PB; xX 7,0) a 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX x x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx pomocí XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx přes xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x skladuje se xxxxxxxx xxxx prachem xxx xxxxxxx 4 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 M

Tris-HCl 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až 1x, podle xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Hybmix

Sodium xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Sonda XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 ng/µl

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x tabulce. Xxx xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx přípravu xxxxxxxxxxxx xxxxx

	2 xxxxxxx	8 sklíček
Sterilní xxxxx čistá xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x temnu při xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití je xxxxx xx ochraňovat xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx elektrickým xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku vejcoplodého (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxx substrátu. Semenáčky x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního substrátu.

Lilek xx xx xxx xxxxxxxx ve skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx xxx: 14 hodin xxxx přirozená xxxxx xxx, pokud je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °C.

Vhodné odrůdy xxxxx vejcoplodého "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 9

Xxxxxxx barvení x Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx krystalové xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx xxxxxxx x 20 ml 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx destilované xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 x

Xxxxx draselný 2 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 300 ml

Pevné xxxxx xx společně rozetřou xxxxxx xxxxxxx x xxxxx. Nasypou xx xx xxxx x xxxxxxx xx x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, xxxxxx xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx barvivo, xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx etanolu xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxx tekoucí vodou x xxxxxx xx xxxxx papírem.

8. Zalije xx safraninovým xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx pod xxxxxxx xxxxx a xxxxxx xx savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx barvicí xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx the xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx rot xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx the European Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11 288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Rev. Xx. Path., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx xxx diagnosis xx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx potato xxxxxx. EPPO Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, R. X., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Society xxx Microbiology, Washington, 21-23.

5. Xxxx, R. x Xxxxxxx, F., 1953. Xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx gram-negative xxxxxxxx. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, X. X., 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. X. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx rot infections (Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum) xx xxxxxx. XXXX Xxxx., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx xxx Protection, 105, 590-601.

9. Xxxxxx, X., 1956. Identification xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x D. C. Xxxxx, 1990. Methods xx Phytobacteriology. Akadémiai Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx pathogenic coryneform xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. X., X. Xxxxxxx a X. C. Hayward, 1966. A xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx the xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x P. X., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Xxxxx.) Xxxxx. xx Burkh.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x S.H. de Xxxx, 1995. Selection xx Xxxxxxxxxx Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX intergenic xxxxxx xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Hanus, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx by subtraction xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Pastrik, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx multiplex XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Xxxxxxxxxx, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx xx xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell agric. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Xxxxxx, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx B1O-PCR and xx xxxxxxxxx real-time xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Schaad, W. 2001. Laboratory xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; St. Xxxx, Minnesota:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. X., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxx xxxxxx of xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Xxxxxxx, X; Stead, XX., 2001. Repetetive xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. xxx V. X. Collins, 1974. X xxxxx xx xxxx reproductibility xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx party. Xxxxxxx xxx Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Wullings, B. X.; van Beuningen, X. R.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX A XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete x jiných hostitelských xxxxxxx, x xx xxxxxxxx vody a xxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu testovaných x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx uvedeny x dodatcích. Seznam xxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx protokolů, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a zahrnují xxxxxxx životaschopných kultur X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím zařízením xx odstraňování odpadů x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx také xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx od xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, jak xx xxxxxxx v §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek x xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx x níže xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx být potvrzen xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx principu.

Pokud xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx a musí xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Postupový diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x v případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx svazků xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x oddíle 6.1.1.

4) Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx bakteriálního xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vykazujícího xxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx extraktech pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx izolovatelný x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx metodou xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx v xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx při pokročilých xxxxxx xxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu saprofytických xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx infekce typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx xxxxxxx opakovat, xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čistých xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx provede xxxxxx xxxxx popsaných x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx je xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx pro každý xxxx případ.

14) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx hlíz bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ze xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx v xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx x dále, x xxxxxxx izolace xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx x xxxx, xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx podezřelý. Xxxxxxxxxxxx xxxxx a izolační xxxxx musí xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x každé xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx xxxxxx x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx test negativní, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx výsledku nezbytný xxxxx jeden xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech. Xx-xx xxxxx nebo xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxxx považován za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx selektivní izolace xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx FISH je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Testy ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v oddíle 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx testech xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxxxx testy jsou xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx pelety xxxx dodatečným xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx stejného xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. solanacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

13) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Viz xxxxx 3.2.1., kde xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx různých biologických xxxxxxxxxx pozitivní, xxxx xxx provedena xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx alespoň jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx považován xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest je xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx selhat x xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve screeningových xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale izolační xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx izolační xxxxx.

12) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxXxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x bramboru

Rostlina xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx rostliny xxx vysokých teplotách xxxxx dne, přičemž x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx žloutnou x xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Dochází xxxx x ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny xx xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x uhynutím xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx uříznutých xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xx xxxx xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx vlákna xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx třeba xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx přes xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx až xxxxxx xxxxxxx zabarvení xxxxxxx xxxxxxxx, ze kterého xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx výrazněji xxxxxx a odumření xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx rozšíří xxx od pupkového xxxxx xxxxx x x xxxx může xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx který xx xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vnitřního xxxxxxx cévního pletiva. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx rozvoj měkkých xxxxxx bakteriálního x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Příznaky x xxxxxxx

Xxxxxxxx rajčete. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx dolů x xxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx xxxxxxxx, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx tolik xxxxxxx, xxx na xxxxxx se xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx výhonů.. Je xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx od xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx pletiva xxxx xxxx xxxxxxxxx bakteriální xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou x xxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx rostoucí u xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx jako x xxxxxxxx rajčete. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxx, xxxxx xx stonky x xxxxxx xx xxxx, mohou vykazovat xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx části stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxx. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx vytékat xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx testy

Rychlé xxxxxxxxxxxx xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx dostačující. Použije xx xxxxx nebo xxxx následujících testů:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Test xx xxxxxxxxxx granulí xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx granule PHB x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jsou zviditelněny xxxxxxxxx tepelně fixovaných xxxxx bakteriálního xxxxx x infikovaného xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx A xxxx súdánskou černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx oddíl 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx screeningovými xxxxx jsou xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), xxxx FISH (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Postup xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pletiva z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x nechá xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese xx 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx půdu (XX, XXXX nebo XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx tetrazolové xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx médium (xxxx. XXXX, viz dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů. Xxxxxxxx xx případně xxxxxxxxxx misky x xxxxxxxxxx xxxxxxxx suspenzí X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 k xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx bílé, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx krvavě červeně xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. solanacearum x xxxxxxxxxxx izolátech xxxx popsány v xxxx 6.2.

3. Detekce x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx vzorkování vyžaduje xxxx testů na xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx xxxxxx xxxx x zpomalení xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx všech xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx níže xxxx xxx rovněž použit xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti bramboru. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx ošetření xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X po xxxx xx 2 xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx populací R. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má být xxxxxxxx PCR xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Hlízy xx xxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx. Tento xxxxxx xxxx xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx jestliže xx xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxx, xxx aby xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx vyříznou xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx na xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) hlízy x podezřelými xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx hnědou xxxxxxx, provede se xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx na xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x podezřelými xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xx dobu xxxxxxx 2 xxx při xxxxxxxx xxxxxxx, aby xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (suberizaci) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx řádných xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými příznaky xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx utěsnitelné (x xxxxxxx, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x pupkového xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °C) xxxxxxx 24 hodin.

Výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) Zalijí xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X nebo 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx v xxxxxx (xxxx. Xxxxxx xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx xxxxxxx (např. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx homogenizaci xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace vzorků. Xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx aerosolu nebo xxxxxxx během extrakčního xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx použijí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a nádoby. Xxx testu PCR xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx na xxxxx použití x xxxxxxx zkumavek na xxxxx použití.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x po xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °C) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100 µx), filtr xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx frakce xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) při xxxxxxx 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by se xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Použije xx 500 µl xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µl pro Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx koncentraci 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx vzorku, xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxx se xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx extraktu, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x vzorky X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx a zpracovány xxxxxxxx, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx xxx xxxxxxx XX x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

IF xxxx (viz oddíl 6.1.5.)

Xxxxx PCR (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz oddíl 6.1.9.)

3.2. Podrobné xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, měl by xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 xx dlouhé xxxxxx xxxxxx podle xxxxxxxxxxxxx postupu xxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x předpěstírny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země.

Rostliny x xxxx nebo xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným xxxxx xx odebere nejspodnější xxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx spojením x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 cm dlouhý xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské xxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xxxx zahradnickými nůžkami xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx díl x paty xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx. U xxxxx xxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx rostoucích xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx stonku xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx vzorkování xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx plevelnou hostitelskou xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější x xxxxxx pozdního xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxxxxx přirozenou infekci xx možné xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx tocích. Xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx x další xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými xxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxx Xxxxxxxxxxx spp. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Race 3 x xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, zahrnují Atriplex xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx glomeratum,

Chenopodium xxxxx, Xxxxxxxxxx cannabinum, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx spp, Rumex xxx., Xxxxxx alba. X. nutans., Tussilago xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx možné xxxxxxx xxxxxxxx šetření xxxxxxxxx xxxxxxxx (zbarvení cév xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl stonku x xxxxxxxx se xx xxxxxxx atestuje xx xxxxxxxx (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx papírem. Xxxxx xx zpracují xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxxx xx xxxxx dostatečným xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) extrakčního xxxxx (dodatek 4) a xxxxxx xx xxxxxxx třepačce (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx xxxxx xxxxxxxx drcením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx extrakčního xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení (např. Xxxxx). Není-li to xxxxx, xxxxx se xxxxx stonků x xxxxxx nejdéle xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx obvykle xxxx xxxxx, ale xxx xx xxxxxxx filtrací xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x xxxxxx 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný vzorkový xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx xxxxxx xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhý xxx xx skladuje x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 °X (týdny) nebo -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx testů x xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x příslušných xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.)

Testy XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci a xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx vodě

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx xxx patogenu, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx, xxxxxxxx nebrání xxxxxxxxxx xxxxx.

(3) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

(4) Xxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX jsou xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x oddíle 2.3.d.

(8) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Je-li podezření, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx ovlivní xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx xxxxx po xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(10) Xxxx patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované schéma xxxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x detekci xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx xxxx x xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx mnohem xxxx v odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx než x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxxx nebo filtrace), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx saprofytických xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Omezení xxxxxxxxxx testovacího schématu xx xxxx být xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Vzhledem x xxxx, xx xx xxxx schéma xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx výskytu nebo xxxxxxxxxxxxx patogenu v xxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx a x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Zjištění X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx pozdního xxxx, léta a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx povětrnostních xxxxxxxx.

- Vlivem xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx xx značnému xxxxxxx a xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou přítomny.

4.2.1.1. Xx xxxxxxxxx vzorkovacích xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx vody xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, pokud xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx x 2 x xx xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx se odeberou xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx menší xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx pro xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx vzorky x xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx vyberou xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx na xxxxx 3 xx xxxxxxx xxxx x vzorkují xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x xxxxxx x xxxxx (4-10 °C) xxxxxxxx do 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx xxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 xxxxx), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, xxxxx xx kapalina xxx xxxxxxxxxx x resuspenduje xx peleta x 1 xx pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx membránu (xxxxxxxxx velikost xxxx 0,45 µx) s xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx počet xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx x vzorků xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx x vzorků xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx populace konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx diagram x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx a identifikace xxxxxxx xxxxx hniloby x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x půdě

(1) Xxx xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx

(2) Selektivní xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

(5) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx bakteriemi. Xx-xx xxxxxxxxx xx vliv xxxxxxxxxxxx populace na xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx dalším xxxxxxx xxxxxx.

(7) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx podezřelých čistých xxxxxx X. solanacearum xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx popsané x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, ale xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx vyskytovat v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxx hodnocení xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků x xxxx při sestavování xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx xxxx xxxx je xxxxx xxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxx hostitelské rostliny x její xxxxxxxxx, xxx xxxx infikována, xxx x xxx xxxxxxx xxxx metody xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xx xxxx xxxxx standardními xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 míst xx xxxxx 0,3 xx x xxxxxxx 10-20 cm. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 ha. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze zpracování xxxxxxx a kanalizace xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 kg x xxxx reprezentujících xxxxxxx objem xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx každý xxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 x xxxx nebo kalu xx xxxxxxxx rotační xxxxxxxxx (250 ot./min) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx jsou v xxxxxxxxxx dodatku.

6. Optimalizované xxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx

6.1. Diagnostické x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx na xxxxx xxxxx ze xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx následující xxxxxxxxxx test xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx xx xxxxxx xx zkumavky x xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, zda xx xx xxxxxxxx minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx svazků.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx bakteriálního slizu x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury na xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx se pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx sp.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxx protáhne nad xxxxxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx xxxxxxx xxxxx:

x) Xxx sklíčka xx xxxxxxxx 1 % xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx inkubovat 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx voda xx xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx opláchne jemně xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Znovu se xxxxxxx xxxxxx xxxx x přiloží xx xxxxx sklíčko.

f) Zkoumá xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem xxx 450 xx pod xxxxxxxx xxxx vodní xxxxxx xx zvětšením 600x xx 1000x x xxxxxxxx objektivu xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxx v procházejícím xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,3% xxxxxxxx súdánské xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Odstraní xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku x xxxxxx se přebytečná xxxx savým papírem.

c) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx xx zdraví xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x pracovat x digestoři.

d) Sklíčka xx zakápnou 0,5% (x/x) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx a nechají 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx je xxxxxx škodlivý, je xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x digestoři.

e) Xxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx papírem x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx zbarvení PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx x pletiv x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (xxx dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Při xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxx xxxxxxx. Jinak xx xxxxxx následující:

a) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x bakteriálního slizu (xxxxxxxxx 5 µx xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx kmenu.

c) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních xxxxxxxx xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx předtím testovány x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx, xxxx. SMSA (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. solanacearum xx jiných xxxxxxxx xxxxxxxxx xx živné xxxx růst vyžaduje xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxx, xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx atypickou xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx jsou přeplněny xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx inhibici, xxx xx být xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx jiného testu.

Pří xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Xxxxxx je xxxx xxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx xx -68 do -86 °C.

Pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx 10⁶ cfu/ml xxxxxxxxxxxx xxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857). X xxxxxxxxx možné xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxxxx od xxxxxx x xxxxxxxxx.

X xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx by xxxx xxx před xxxxx xxxxxxxx k rutinnímu xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx kultivaci patogenu. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Nanese xx 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx každé xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx jejich xxxx x pak xx provádí xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx na xxxxx půdě XXXX xxxx mléčně xxxx, xxxxxx, nepravidelné a xxxxxxx x xx 3 xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx krvavě xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x vnitřními xxxxx xxxx spirálami.

Poznámka:

Někdy xx xx xxxxx médiu xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou zřeďování xx universální živnou xxxx., xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, xxx xxxxxx) xxx pokojové xxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx teplotě -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx selektivní xxxxx.

Xxxx očkování xx xxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , za xxxxxxxxxxx, že xxxxxxx x inhibici xxxxxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx podezřelé xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx testy

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. modifikovaný xxxxx Xxxxxxxx (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx pro selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xx vzorků x xxxxxxx xxxxxxxxxx detekce. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx inhibitorů XXX xxxxx (1:100). Obohacení X. solanacearum xxxx xxxx xxx neúspěšné x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx antagonismu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, které bývají xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxx kultury xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx dojít x rozvoji xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX doporučuje xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se přenese 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 ml xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx xxxxxx připraví xx xxxxxxxxxx zkumavek xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (xxxx. 100 xx x 1,0 xx obohacené xxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx se 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X v xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx s uvolněnými xxxxxxx, které xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se vzorky xx výše uvedených xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu vysoké xxxxxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx docílit xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx jinými postupy xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx XX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxx izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx R. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx je definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde x xxxxxxxxx xxxxxx xxx testování xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ až 10⁶ xxxxx/xx homologického xxxxx X. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Validovaná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Xxxxx testování xx xxxx xxx xxxxxxx protilátky x xxxxxxxxxx ředěních blízkých xxxx xxxxxxxx jako xxxx.

Xxxx by xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Jestliže xx to xxxxx, xxxx xxx úspěšně xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx teplotě - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Glycerol xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx přidáním 1 xx pufru (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx nebo jiným xxxxxxxxxxx kmenem X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °C) by xx mělo podle xxxxxxxx použít jako xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka s xxxx okénky, xxxxx xxxxx x 10 xxxxxx s průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx materiálu se xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx sklíčka x testování jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 mm - x většího xxxxxx xx množství xxxxx x příslušném xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxx množství xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) do xxxxxxxxxxx xxxxxx v xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx jiné xxxxxx:

Xxxxxxxx xx desetinná xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx odměřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx okénka xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx vzorek, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx xx xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx buňky se xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °X), xxxxxxxx, 95 % etanolem xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx dodavatele xxxxxxxxxx.

Xxxxx je potřeba, xxxxxxxx xxxxxxx je xxxxx skladovat ve xxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx dobu (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx x xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx měla xxx 1/2 xxxxx (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x pufru IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.xx) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx uspořádají xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx protilátek. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx vlhkém papíře xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě (18-25 °X).

3. Setřesou se xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček a xxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v pufru XX Tween (dodatek 4) x následně x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx konjugátu XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx do xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

6. Xxxxxxxx xx kapky xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxxxx xx opláchne x xxxxx xxxx xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxx vlhkost.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X fosfátového xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx x xxxxxxx nebo malým xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí xxx jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx morfologií R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx stejném ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx nelze xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx zopakován. Xx xx xxxx xxxx, xxxx všechna xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky díky xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx okénka xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X peletách x xxxxxxx části xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx xx x úvahu xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx resuspendované pelety (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Vzorek xx považován xx xxxxxxxxxxx infikovaný x xx povinné xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Testy XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx a výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxx proveden xxxxx screeningový test, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR použita xxxx druhý screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx další testování xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx x celém rozsahu xxxx xxxxxxxx screeningového xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx vzorků xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená xxxxxxx x protokoly XXX (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx specializovaných na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala možnost xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx extrakce XXX x XXX) by xx mělo vždy xxxxxxxx jako s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx jasné, xxxxxx xxxxx k xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- extraktu xx vzorku, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx extrakci xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx pelet, do xxxxxxx xxxx xxxxxxx X. solanacearum (xxxxxxxx xxx dodatek 3 B);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx XXX použít xxxx DNA xxxxxxxxxxxx x pozitivních kontrolních xxxxxx.

Xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x prostředí odděleném xx xxxxxx, xxxxx xxxxx testovány.

Extrakty ze xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx PCR xxxxx je potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx materiály x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrole, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, jsou xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace DNA

Používají xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx.

X purifikaci xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx metody odstraňující xxxxxxxxxx XXX a xxxxxx enzymových xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX uvedenými x dodatku. 6.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX NaCI, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 mM XXXX (pH 8,0)) xx 1,5 ml Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx se xxxxxx xx termobloku xxxx vodní lázně x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 xxx. xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx xxxxxxxxx roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 ml 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx při teplotě 37 °X xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx se xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx nezačne xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx x směs xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx oddělení fází x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxx. při teplotě 4 °X.

9. Xxxxx xxxx xx převede xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % etanolu (- 20 °X), krátce xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se xx xxxx xx dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx z pelety.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, zachová se xxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °X xx xx použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx odstředěním. 5 µx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx se xxxxx použít, xxxxx xx xx prokázalo, xx xxxx při xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. PCR

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné ředění xxxxxx xxxxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Připraví xx xxxxxxxxx reakční směs xxx XXX v xxxxxxxxx, xx kterém xxxxxxx xxxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx xxxxxx multiplexní xxxxxxxx PCR, který xxxxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (xxx dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx XXX a xxxxx xx xxx xxxxx UM jako xxx ten, xxxxx xxx použit xx xxxxx XXX místo xxxxxx.

5. PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx použit xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxx xx vhodně xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx nanášecího xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Tris-acetát-EDTA (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 V/cm. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX marker, např. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se proužky XXX obarvením v xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx zacházení x xxxxx xxxxxxxxx.

3. V xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové délky xxxx. 302 nm) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx amplifikované xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. X xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové analýzy xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV světlem xx obarvení ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x neštěpenou x xxxxxxxx pozitivní xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu PCR

Test XXX je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx u xxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx primery xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx xxxxxxx XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx vzorkem).

Test PCR xx pozitivní, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický pro X. solanacearum očekávané xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vzorku xxxxxxxxx kontroly. Spolehlivé xxxxxxxxx pozitivního výsledku xxx xxxx získat xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx na xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx ve xxxx, xxxxxxx xx vzorku xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx byly xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx kontrolami XXX xxxxxxxxxx inhibici xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx žádný ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx očekávaný amplikon xx xxxxxx z xxxxxxx nebo více xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx xxxxxxxxx, musí xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, je x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx další testování xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Úvodní xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, které xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx by měl xxx pokud xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, který byl xxxxxxx x glycerolu xxx teplotě - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 až - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M fosfátovém xxxxx (PB) xx 3-5 xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx uvedeno x dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx bramborového xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx vychází x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Připraví xx fixační xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xx dobu 7 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx a rozpustí xx peleta ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx 1 hodinu x chladícím xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx xx 7 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x resuspenduje xx xxxxxx x 75 µ10,01X PB (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx vzorky na xxxxx xxxxxxx, x xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 M XX). Xxxxxxxxx roztok xxxxxx (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx teplotě - 20 °X po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X případě, xx xx třeba XXXX xxxxxx opakovat, xxxxxxxx xx etanol xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 PB (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx na xxxxxxx XXXX

6. Sklíčka xx nechají xxxxxxxx xx vzduchu (nebo x xxxxxxx xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) a xxxxxx xx xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx skladována chráněna xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx inkubační xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx směsí (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx ohřeje xxx x hybridizační xxxx při xxxxxxx 45 °C xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (xxxxxx 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 a 10; xxx xxx. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx pod ně xxxxxxx xxxxxx. Sklíčka xx umístí do xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx v xxxxxx při xxxxxxx 45 °C x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x molekulární xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 ml 3x xxxxxx a 958 xx xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx x xxxxxxx 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx inkubací xx xxxx 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx x nechá xx inkubovat xxxxxxx 15 minut.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx ponoří xx XXX (např. Xxxxx X water) x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Odstraní xx nadbytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Vecta Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx x celé xxxxxxx xx zakryje xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx FISH xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx xxxxxxxx imerzí. X filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) jsou eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Cy3 xxxx xxxxxxxxxxxxx červené. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx odchylné. Xxxxxxxxxx xx okénka xxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx úhlech x xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo buněk, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx podezření xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x případě, xxx všechna sklíčka xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx xxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx jestliže xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, že x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx a pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx x atypickou morfologií x ke xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, x xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. V úvahu xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx použití XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx a morfologií xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x nejsou pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, se xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XXXX testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx typickou xxx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX lze xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX xxx xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx může xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx jiných organismů xx vzorku.

Poznámka:

Použije xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx k xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx protilátek podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x pracovním ředění, xxxxx xx xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xx titr xxxxxxxxxx xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze bakterií xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (PBS) xx použijí xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx použijí alikvótní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 X a X). Xxx srovnání xxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx suspenze 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx destičce xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx tento xxxx, jsou xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx kontrolního xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx jsou xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Xxxxxxx xxxx XXXXX (Robinson Xxxxx xx xx., 1995)

1) Použije se 100-200 µx vzorkového xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 minuty ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx boxu xxxx x některých případech xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Xxxxx se xxxxxx xxxxxxxx dvojnásobně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx do každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx) x nechá xx inkubovat 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Xxxxxxxx xx vylijí z xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx vymyji xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) a xxxxxxxx vymývací roztok xx nechá v xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). X xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxx je xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx vylije x jamek x xxxxx se xxxxxx xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx. Přidá xx 100 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 hodinu xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx se xxxxxx x jamek x xxxxx xx xxxxxx xxxx předtím (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90xxxxxxxxxx intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° C xx xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx se xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µl xxxxxxxx ze vzorku xx xxxxxxx dvou xxxxx. Přidají xx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xx xxxx jamek xx každé destičce. Xxxxx se xxxxxxxxx 16 hodin při xxxxxxx 4 °C.

3) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Připraví xx xxxxxx ředění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum v XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx stát 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Připraví xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx jamky x nechá se xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se roztok 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do každé xxxxx x xxxxxxxx xx x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx odečítá x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx ELISA

Test XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx je xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx OH pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx OH x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx hodnoty OH xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích.

Negativní xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx nebyl xxxxxxxx xxxxxxx nebo xx byl inhibován. Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxxxx xxxxxxx, že xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxxx detekci 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx s negativním xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Xxxxxxxx citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxx xxx xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx extrakty, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Použije xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx odrůdy xxxxxxx (např. kultivaru Xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxx x rovnocennou citlivostí xxxxx testovací xxxxxxxxxx) xx xxxx xxxxx xxxxxxx listů x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Black Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx citlivostí), xxx xxx rostliny xx xxxx 2. až 3. xxxxx xx xx plného rozvinu xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx u lilku xxxx méně xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx injekční stříkačkou

Inokulují xx xxxxxx rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Xxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx zářezem

Rostlina xx xxxxxxx mezi xxxxx prsty a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety na xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx skalpelem se xxxxx xxxxxx xxx xxx 1 xx xxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx začne v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx nainokulujte 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx od xxxxxxxxx rostlin, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací rostliny xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx zařízení 4 xxxxx xxx xxxxxxx 25 - 30 °C a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zavlažováním, xxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx, xxx xxxxxxx z důvodu xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx xxxxxxxxx kontaminaci, xxxx xxx drženy xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxx oddělených xxxxxxx xxxxxxxx nebo vegetační xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorků po xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx zvláštní xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx vegetační xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, epinastie, xxxxxxx anebo krnění xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx čisté xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx IF/PCR/izolace xx xxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 cm x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Je-li test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx čisté xxxxxxx x xxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx biotestu

Platné xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné příznaky.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl organismus xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostlin.

Biotest xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny jsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Identifikační testy

Identifikují xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx známé xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, které xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx chybí x X. solanacearum, xxxxxxxx Xxxxxxxx x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Oxidázový xxxx xxxxx Kovacse +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití citrátů +

Xxxx při 40 °X -

Růst x 1% XxXx +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Ztekucení xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx škrobu -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Xxxxxxx xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx pouze 2 xxxxxxxxxxxxxxx testů xx xxxxxxxxx kromě xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx na 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx ELISA xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx pozitivní, jestliže xxxxxxx jeho xxxxxxxx xxxxxxx x této xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µl xxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °C 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx být uchovány xxx teplotě - 16 až - 24 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX x amplifikaci xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx et xx. (1997), Weller xx al. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx je pozitivní, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx FISH

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Xxxxxxx xx metoda FISH (6.1.7) x nejméně 2 xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Test FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx u kultury x xxxxxxxxx kontroly xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx při xxxxxxx 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx FAP (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx profil xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX x 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3XX xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xx.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxx xxxxx xxxx případ xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx charakteristika xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx referenční xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. solanacearum xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx tří disacharidů x xxx hexosových xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx je popsána x dodatku 2. Test xxx úspěšně xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x inkubací při xxxxxxx 28 °X. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 jamku), xxxxxxxx se xxxx xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx žlutou a xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení dílčích xxxxxxxx biovaru 2

(¹) Viz Xxxxxxxx x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx technikami, xxxx xxx patří:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx sekvenční XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Smith xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů AFLP (Xxx der Xxxx xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx PCR

Specifické primery XXX (Pastrik et xx, 2002; xxx dodatek 6) lze použít x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx do xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 a 5) x skupiny 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2T) R. xxxxxxxxxxxx, jak bylo xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Cook xx xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Konfirmační xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a k xxxxxxxxx virulence kultur xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx.

1) Xxxxxxxx se inokulum x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 xx ze 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; viz dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx se 5 až 10 xxxxxxxxxx sazenic xxxxxxx xxxx xxxxx ve xxxx 3 pravých xxxxx (xxx xxxx. 6.1.9).

3) Xxxxxxxx xx xxxxxxx inkubovat xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx xxxxxx by xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, kultura nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx se xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx příznaky odebráním xxxxxxxx ze xxxxxx xxx 2 xx xxx místem xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx rozmělní x xxxxxxxxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx na xxxxxxxxxx živné půdě (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 xx 72 xxxxx xxx teplotě 28 °X xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné xxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx

Xxxxx agar (NA)

Živný xxxx (Xxxxx) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x sterilují tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový agar (XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Xxxxx) 5,0 g

K₂HPO₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °C xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °X x přidá xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 xx xx xxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půdy

Živná xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X po dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx se xx 50 °C x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx vodný xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (přibližně 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx X-0125) 1&xxxx;250 U (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx reagenci může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Xxxxx Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx růst X. solanacearum pomalejší, xxx může xx xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxxxx x 1-2 xxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxx při použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2 500 X/x xxxx xxxxxx xxxxxxxx konkurenčních bakterií xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik se xxxxxxxxxx a skladují xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx x xxxxxx xx xxxx xxx před xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx média.

Každá nově xxxxxxxxxx šarže xxxxx xxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Živná xxxx XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx jako xxx xxxxxxxxxx agarovou xxxxxx xxxx XXXX, xxx xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx půda Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Sacharóza 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut x xxxxxxx xx na 50 °C. Přidá xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx pro xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxxxxx izolované xxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx testů, xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Xxxxxxx kmeny xxxx xxxxxxxx dostupné x lze xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Nizozemsko.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Angers, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx, xx pocházejí x xxxxxxxxx sbírek xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx pelety xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. solanacearum (kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Příprava xxxxxxxxxxx x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) xx XXXX xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx v 10 xX xxxxxxxxxx xxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx. Obvykle se xx xxxxxxx jemně xxxxxxxxx xxxxxxxx rovnající xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx se xxxx x pupkových konců 200 xxxx x xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx xx, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 ml. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek o xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x protřepe xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx xxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 N1 xx xxxxxxxxxx zkumavkách x objemu 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx kontrolního xxxxxx. Xxxxxxxx xx při xxxxxxx -16 až - 24 °C xx do xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx a xxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx být nejprve xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx extrakce DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH testy xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

OBECNĚ: Neotevřené xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx používá k xxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx bramborových xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx pro IF xxxx

Xxxx xxx IF (10 mM fosfátový xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx pufr xx používá xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Pufry xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Dvojnásobný xxxxxxxxxxxx potahovací pufr, xX 9,6.

Na₂CO₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX x xxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx, je xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx sodného xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx voda 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 g

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx xxxxx 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 ml

Destilovaná xxxx 800 xx

Xxxxxxxx xx x koncentrovanou XXx se upraví xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 x

Xxxxxxxxxxx voda 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) xX 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2X₂X 4 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Tween 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a xxxxxxx xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (x).

2. Vypočítá xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (C).

C = c x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho xxxx xx xxxxxxx s xxxx xxxxxx x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G = zvětšení xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx počet xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx (X).

X =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx resuspendované xxxxxx x každém xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového extraktu. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx nemělo vykazovat xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx PCR Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX AGC XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Y-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX XXX AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx velikost amplikonu xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 2 xxxxxx xxx 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 sekund xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 xxxxxx při 68 °C (hybridizace xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx II xx xxxxxxxx při teplotě 37 °C.

2. Xxxxxxxx XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx x -3'

Reverzní xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové DNA X. xxxxxxxxxxxx XXX = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μM
Taq polymerasa (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Xxxxxx xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx BRL. Poznámka: Původně xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx MJ Xxxxxxxx PTC 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Xxxxxx Xxxxx AmpliTaq x xxxx xxxxx být xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx koncentracích.

2.3 Reakční xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °C (denaturace xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: v) 5 xxxxx při 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx bude xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx 457 bp a 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx et al., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-XXX TTA XXX GAA TTG XXX GAA G-3'

Reverzní xxxxxxXX-6-X: 5'-XXX XXX XXX ACC TGT XXX TGC XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx xxxxxxx RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X rRNA = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Xxxxxxx jiných přístrojů xxxx vyžadovat xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) a xx).

3.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx al, 2001)

4.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX GCA XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX TCG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Reakční xxxx XXX

x) Xxxxxxxx XXX specifický xxx xxxxxx 1/2

x) Protokol XXX specifický xxx Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: ii) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 sekund xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx při 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná xxxxxxx)

xx) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Použití jiných xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx primerů Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X nemají xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 xx

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (např. xxxxxxxxxx xxxx rovnocenné).

Dodatek 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx caa xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX OBSAHUJE PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX. XXXXXX RUKAVICE A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (např. Xxxxx xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 g xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (XX; pH 7,0) x 5 xxxxx HCl 1N. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx proužkem a x xxxxxxx potřeby xx xxxxxx xxxxxx XXx nebo NaOH. [XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx chráněný před xxxxxxx při xxxxxxx 4 °C do xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x autoklávovaný) 15 xX

Xxxxx xx xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx OLI2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 různé xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. XXXXXXXXXX: XXXXXXXX XX XXXXX XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT POTŘEBNÁ XXXXXXXXXXXX OPATŘENÍ!

Tabulka 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx obsahující světlocitlivé xxxxxxxxxx xx uchovávají x temnu xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx zářením nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1X xxxxxxxxx pufr, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Dodatek 8

Xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx

Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx escadentum) xxxx xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx lilku x xxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 hodin nebo xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °C,

noc: 14 xx 18 °C.

Vhodná xxxxxx xxxxx vejcoplodého: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Moneymaker"

Dodavatelé: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx whole xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx xxx enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX of 20 Xxxx 1998 xx xxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi etal. Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx L235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, X., X.X. Le Xxxx, X. Xxxx, P. Xxxxxxx and X. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx the xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Gorris, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Assay Xxxx Uses x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, D., Xxxxxx, X. and Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx with XXX xxxxxx xxxx xxxxxxx virulence xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum iru xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Englebrecht, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx quantification of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, X.X. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Journal xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, U. and Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism xx xxxxxxx ofYseudomonas solanacearum. Xxxxxxx xx Applied Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Fujii, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, S. Xxxxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx in xxxx xxxxx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx and x XXX xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, X.X. (1988) X xxxxxxxxx xxxxxx xxx Pseudomonas solanacearum xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. Xxx xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xx a tetrazolium xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx xxx diagnosis xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx plants. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, M., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx selective isolation, xxxxxxxxxxx xxx molecular xxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx bacteria. Xx: X.X. Delme xx xx., (xxx). Klewer Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. and De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Bruijn, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Tavner, X. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, X. Xxxxxxxxx, M. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, V. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. X xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxx strain-specific DNA xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Pastrik, K.H. xxx Maiss, X. 2000. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx intergenic xxxxxx region with xxxxxxxx positive control. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Xxxxxxxx-Xxxxx, X., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum, the xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx wilt. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx for xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Minnesota: 373 xx.

24. Xxxx, X.X., L.A. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Blood Xxxxxxx Xxxxxxxxx by partial 16X rRNA xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx oligonucleotide xxxxxxx xxx sensitive xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx reaction. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Snith, X.X., Xxxxxx, L.C., Xxxxxxxxxx, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx Burkholderia xxxxxxxxxxxx (synonym Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Sly, XX, Xxxxx, M. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx phylogenetic xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx xxxxxxx bacterium xx xxxxxx xxxxx xx 16X rRNA xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Trigalet, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Genetic diversity xx Ralstonia solanacearum Xxxx 3 xx Xxxxxxx Xxxxxx as xxxxxxxxxx by XXXX, XX-XXXX and xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, C. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx using an xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., A.R. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx brown xxx xx potato, by xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23s xXXXxxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.