Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 odst. 2 xxxxxx č. 326/2004 Sb., x xxxxxxxxxxxxxxxx péči a x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (xxxx xxx "xxxxx") x xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušné předpisy Xxxxxxxx xxxx¹⁾ x xxxxxxxx opatření, která xx uplatňují na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Smith) Davis xx xx. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx., původci xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Xxxxx) Xxxxxxxx et al., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x prováděla xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx:

x) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx et xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx.,

x) původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Yabuuchi et xx.,

x) xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx semen xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx L.) s xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Xxxxxxx xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) a xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x nichž xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx zaměřený na xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxx x původu xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx, x určení xxxxxxx šíření xxxxxxx x x určení xxxxxx xxxxx, na xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 zákona,

f) xxxxxxxxxxxxxx zamořením původcem xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, stroji, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x veškerých xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx anebo v xxxxx, xxxxx §11 xxxx. 1 zákona,

h) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem xxxxx xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxx xxxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se vztahují xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Ústavem, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxxxxx partií - xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx množením x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx považují klonově xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxx vegetativním množením x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx rostliny, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx osiva,

2. xxxxxxxxxxx xxxxxxx příbuznou xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx klonově xxxxxxxxx partiím, xxxxx x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Ústav xxxxxxx každoročně x xxxxxxx s §10 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7.

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx

x) rozmnožovací xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx x Xxxxx republiky x xxxxxxx xxxxx §8 odst. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx²⁾ xxxxxxx xx členských xxxxx Evropské xxxx (xxxx xxx "členský xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx států,

d) xxxxxxx partie xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx a všechny xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx rostlinolékařské xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx vybrané xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx do xxxxxxx xxxx.

(5) Detekčnímu xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x závlaze hostitelských xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx včetně doprovodných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx zpracovávají xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx z xxxxxx podniků.

(6) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx navíc xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx z xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxxxxx substrát x místech produkce, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx

x) xxxxxxxxxxxx testováním xxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxx v případech xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 xxxx. x) x x), xxxxxxxx 3 x x xxxxxxxx 4 xxxx. x) z xxxxxxx xxxx xx skládek, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx xxxxxx,

x) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x řezu xxxxxxxx xxxx, x xxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 2 písm. x) x x),

x) xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete ve xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx napadení původcem xxxxx hniloby x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, pěstebního xxxxxxxxx, xxxxxxx odpadů xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 až 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x způsob xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odebraných x xxxxxxxxxxx vzorcích xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona Ústav xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxx x biologie xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby, x xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx produkce brambor x xxxxxxx hostitelských xxxxxxx x v xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xx míře xxxxxx zavlečení původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx ve Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Věstník"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx vzorků xxx zjištění x xxxxxx původce kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx a xxxxxxxxxxx ve Věstníku.

(9) X průzkumu prováděnému xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx činnosti Xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx základě xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx, xx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx xxxxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxx xxxxxxxx prováděného xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 oznamuje xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx příslušnou xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx ji xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 předkládá Xxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 5 zákona jednou xxxxx x rozsahu xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx a Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx státy. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx Xxxxx jednou xxxxx xxxxxxxx členským xxxxxx x Xxxxxx, x xx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x ostatních případech xx 1. června. Xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin, xx vztahují xxxx x produkci xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx tohoto xxxxxxxx jsou důvěrné.

§4

Xxxxxxxx při zjištění xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xx podezření x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 oddílu X xxxxx 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx výsledek xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx dohledem způsobem xxxxxxxxxx v příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby Xxxxx x rámci odborného xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování, x xx způsobem xxxxxxxxxx podle §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx X, x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx podezření x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx zjištění xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) zakáže xxxxxx všech partií xxxx xxxxxxx, xx xxxxxxx byly odebrány xxxxxx, x xxxxxxxx xxxx, které jsou xxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxx Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, a

b) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx odhadovaného xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x cílem xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx zákazu přesunu xxxx zajištění xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx z xxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxx xxxx pozemky x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, v xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nebo x xxxxxxxx jiném xxxxxxxx xxxxx, sdělí Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx tohoto xxxxxxxxx x xxxx s xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx původ x České republice xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx Xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx podle xxxxxxxx 2 a 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stanoveným xxxxx §3 odst. 8 xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 zákona x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) označí za xxxxxxxx xxxxxxxx, zásilku, xxxxx xxxxxx, x xxxxxxxx, stroje, dopravní xxxxxxxxxx, sklady nebo xxxxxx části x xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxx byl xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx do xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxx xxxxx produkce xxxxxx xxxx, xxx xx možná úplná xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx, na xxxxx xxxx zamořené xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx vzorek xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x prvotního xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx partií hostitelských xxxxxxx podle §6 x xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx pravděpodobného zamoření xxxxxxxxxxxxxxx předsklizňového nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, a xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, zavlažování x zalévání xxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx a),

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx základě xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx písmene x) x xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vodu, odpadní xxxx ze xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x ohledem na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx lilkovitých x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx povrchovou xxxxx xxxxx xxx ohroženo xxxxxxxxx xxxxxxx, Ústav

a) xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx lilkovitých xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx výsledky xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx testování xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx xxxx, z xxx byly xxxxxxxxx xxxxxx, xx zamořenou,

c) xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) a xxxxxxxxxxxx xxxx na xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx pravděpodobného xxxxxxxx xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x jeho xxxxxxx rozšíření xxxxx xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. x), x sdělí xxxxxxxxxxx x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx a bezpečnostní xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. c), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 xxxx. c). Xxxxxxxxxxx x xxxxx oznámení xxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx stát xxxxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx původem z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx obdobně xxxxx xxxxxxxx 3, Xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx zamoření x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, popřípadě xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxx stanoví xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx odborného šetření xxxxx odstavce 1 xxxx. x) x xxx xxxxxxxxx rozsahu xxxxxxxxxxxx území a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), odstavce 2 xxxx. x) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx podle §4 xxxx. 2 všech xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx klonově příbuzných x xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx však všechny xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾, a xx v xxxxxxx xxxxxxxxx ke xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx míru xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Ústav x případě xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, rozšíří xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), b) a x).

§7

Xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé hniloby

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx nařídí xxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx zamořenou xxxxx §5 odst. 1 písm. a) xxxxx xxx xxxxxx x xxx dohledem Xxxxxx xx x xx naloží xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx ověří, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx jsou xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x případě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxx xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx v xxxx 2, xxxxxxxxx 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx riziko xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx požadavky xx zneškodňování odpadů, xxxxxxxxx v příloze č. 5, x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x pokud není xxxx partie xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §6 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, sklady xxxx xxxxxx části x xxxxxxx jiné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxx označené xxxx pravděpodobně zamořené xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. b), xx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxx metod xxxxxxxxx x příloze č. 6 x xxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx ani xx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) v xxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c), popřípadě xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx provedena xxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx výskytu xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav může xxxxxxx podle §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx hniloby xxx xxxxxxxx xxxxxxx x odstavci 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx a účinná. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) xxxxxx karanténního xxxxx a x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx povinných xxxx, xxxxxxxxxxxxxx xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Xxxxx xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nařízená podle xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 xx xxxxxx splnění a xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx k jejich xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx s §7 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx přechovávání x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx účelům, xxxxx povoluje Xxxxx xxxxx §8 odst. 1 zákona, xxxxx xxx nebudou xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxx výskytu xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Testování rozmnožovacího xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxx, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §3 xxxx. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xx x příslušném xxxxxxxxxx roce xxxxxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx, x xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx sklizňovém xxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx

1. xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu⁴⁾ xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx základního rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ v xxxxxxxxx, x xxxxx prokazatelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx partií xxxxxxxxxx rozmnožovacího xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru xxxxxxxx x xxxxxxx x následujícím xxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx ani xxxxxxx xxxxx hniloby xxxxx x posledním uplynulém xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České republiky.

§9

Účinnost

Tato vyhláška nabývá xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Příloha č. 1 x vyhlášce x. 331/2004 Xx.

X. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX PŮVODCE XXXXXXXXXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy popisují xxxxx postupy, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v hlízách xxxxxxxx x rostlinách xxxxxxxx,

xx) detekce Clavibacter xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) identifikace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

OBECNÉ XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x kontrolních xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku č. 1.

Protože xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx karanténního xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx kontrolních xxxxxxxxx, je nutné xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx x reprodukovatelné xxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahrnuje xxxxxxx xxxxxxxxx, údržbu x kalibraci zařízení, xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx administrativním x xxxxx chybám, xxxxxxx xxx označování x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, xxx je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (TF xxxx XXX/XXXX) xxxxxxxxx, existuje xxxxxxxxx xx infekci xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx screeningový xxxx. Xxxxx xx x xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx pokračovat x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak vzorek xxxx považován xx xxxxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XX test xxxxx §4 odst. 1 xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx výsledek XX xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Použití xxxxxxxxxxx diagramů

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx diagnózu xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx x rostliny bramboru x xxxxxxxxxx z xxxxxxx nebo typickými xxxxxxxx kroužkovitosti. Zahrnuje xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx diagnostickém médiu x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x oddíle 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (oddíl 4),

- PCR xxxx (xxxxx 6),

- XXXX xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x rostlinného xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx suspenzí xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce se xxxxxx podařit. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx rostou xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxx médiu. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx, nejlépe XXXX (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je v xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxxxx jsou typické, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx čisté kultury Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se dosáhne xx použití xxxxx xxxxxxxxx x oddílu 9.

(7) Zkouška patogenity xx xxxxxxx x xxxxxx 10.

1.2. Postupový xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxx je xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nichž xxxxx xx založen xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, x xxxxxxxx, x případě xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, aby byl xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontroly x xxxxx sérii xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku je 200 xxxx, xxxxxx xxxxxx xxx použít x xx xxxxx xxxxx, jestliže 200 xxxx xxxx k xxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx izolace x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx je xxxxx test negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. V xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx druhý xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, je xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Test imunofluorescence (XX).

Xxx vyšetření XX xx vždy xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxx 4).

(5) XXX xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 5).

(7) Xxxxxxxxxx izolace.

Toto xxxx xxx x mnoha xxxxxxxxx xxxxxx metoda xxx xxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX xxxxx nebo XXX-88 xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100. Xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxxx 3-10 dní po xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z pupkové xxxxx, xxx se xxxxxxx sekundární xxxxxxxx, xxxxx xxxx konkurencí Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx na xxxxx x které xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx kultivační metoda xxxxx xxxxxxxx, musí xxx izolace xxxxxxxxx x rostlin xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Xxxxxxx xx xxxxxxx k xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx selektivního xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx). Xxxx vyžaduje xxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínky stanovené xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx inhibitory Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX xxxx XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx test xxxxxxxxx xxxxxxx (viz oddíl 7).

(9) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx biotesty xxxxx xxxxxx z xxxxxx konkurence nebo xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx vzorku a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx - xxx oddíl 3.2.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x koncentrace patogena xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx pozitivní, xx xxx ověření xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Selektivní xxxxxxxx xxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) IF test xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx popsán x xxxxxx 6.

(7) XXXX test xx xxxxxx x oddílu 5.

(8) Xxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x důvodů xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Pokud xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx negativní, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx a v xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(10) Spolehlivé xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx je xxxxxxxxx, xx se jedná x Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 9.

(11) Xxxx patogenity xx popsán x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínkách xx xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx pak xx xx xxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx xx zamění x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx odlišné od xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx a zpočátku xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxx nadále xxxxxx, i když xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Listy xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx mezižeberní xxxxxx. Infikované děložní xxxxxx, xxxxx a xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx odumřít. Často xxxx xxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxx rostliny xxxxxxxx. Xxxxxxx snímky xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx jsou xxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Prstenec svazků xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně tmavší xxxxxxxx xxx obvykle. Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx cévních xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx. Tento xxxxxxx xxxxxxxx miliony xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxx xxxxx zhnědnout x xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx hniloby způsobené Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Zpočátku xxxxx xxx xxxx xxxxxxxx omezeny na xxxxx část xxxxxxxx, xxxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxxx pupkové xxxxx x mohou xx xxxxxxxx šířit xx celý xxxxxxxx. X xxxxxxxx infekce xxxxxxx k destrukci xxxxxxxx xxxxxx: xxxxxx xxxxxx část xx xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx objevují xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx s xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx době xx x Xxxxxx objevilo xxxxxxx případů, xxx xxxxxxx kůra xxxxx x prstencem svazků xxxxxxx, čímž xxxxxxx x druhotnému xxxxxxxxx xx vznikem xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx infekce může xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být obtížné, xx-xx nemožné, rozlišit xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x atypické příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx 1 xxxx. lntenzivnější xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx vede k xxxxxxxxx nebo složitějšímu xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx xxxx xxx vhodně xxxxxx x xxx xxxxxx s méně xxx 200 hlízami, xxxxx je x xxxxxxxxx xxxxx množství xxxx.

- Validace xxxxx xxxx xxxxxxxxx zjišťovacích xxxxx xx založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Níže xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Ralstonia solanacearum.

Nepovinné xxxxxxxx před xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx xxxxx. Xxxxxxx xx vhodné xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, jestliže xx xxx xxxxxxxx XXX test, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x případě, xx xx xx xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx se xx provádět XXX xxxx xxxx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx brambory xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx hlízy. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vodivého xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx. Na xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx nezahrnující xxxxx xxxxxx. Xx xxxxxxxx musí xxx xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx při -20 °X xx xxxx xxxxxxx dvou xxxxx.

Xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx dají xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx xx xxxxxxxx vyšetření xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny xxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx pokojové xxxxxxx x uchovávají xx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4 - 10 °X až xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Všechny xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx x nepoužitých xxxxxxxx xx jedno xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx důkladně xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x obsahem xxxxxx). Xxxxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx konce xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx, v xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx maximálně 24 xxxxx. Schnutí x xxxxxxxxxx výkrojků a xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx xx xxxxxx dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °X xxxx xx xxxx 16-24 hodin chlazené;

nebo

b) xxxxxxxx xx homogenizují x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x mixéru xxxx rozdrcením v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx maceračním xxxxx za xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení.

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx existuje xxxxxx xxxxxxxxx křížové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Je xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx každý vzorek xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx sterilizovaná xxxxx (xxxx) x xxxxxx. Xxxxx má být xxxxxx PCR test, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx v xxxxxxx xx xxxxx použití x xxxxxxx zkumavky xx jedno xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx se supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, pročistí se xxx pomalým xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x po dobu 10 minut při xxxxxxx 4-10°C) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100µx), xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 x po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx xxxxxxx 4-10°X x odstraní xx supernatant, aniž xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Resuspenduje xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 3). Použije xx 500 µx xxx xxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x 500 µl pro xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xx konečnou koncentraci 10-25 % (v/v) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx zbývající xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 až -86°X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx během xxxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx transport xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 hodin.

3.1.7. Xx nezbytně xxxxx, xxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxx kontaminaci. Xx platí i xxx sklíčka na XX testy x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Postup xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Pokud xx provádí podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx předmětem xxxxxxxxxxx.)

3.2.1 Xxxxxx čistého xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx zahradnických xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Xxxxx xxxxxx xx zpracují jedním x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxx se zalijí xxxxxxxxxxx množstvím (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx v rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx dobu 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) části xx xxxxxxxx rozdrtí x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx použití xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx zařízení. Pokud xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x chladu xxxxxxxxx 72 xxxxx xxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx xx xxxxx 15 minut, se xxxxxxxxx supernatant.

3.2.4 Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx na 2 xxxxxx části, Xxxxx xxxxxxxx xx udržuje xxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X x xxxxx polovina xx xxxxxxxx s 10-25 % (v/v) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx xxxxx další xxxxxxxxx.

4. xX xxxx

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xX xxxx jako xxxxxx screeningový xxxx, xxxxxxx xxxx prokázána xxxx schopnost dosáhnout xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li se xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx IF xxxxxxx xxxx druhý xxxxxxxxxxxx test x xxxx výsledek xx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX test xxxxxxxx xxxx xxxxxx vyšetřovací xxxx, používá xx xxxx polyklonální xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx s xxxxxxxxxxxx protilátkou xxxxxxxxx, xxx méně xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx určovat xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 105 xx 106 xxxxx na 1 xx homologického kmene xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx isothiokyanatanu (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx se měly xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx (XX) x blízkosti titru xxxx na xxxxx. Xxxxxxxxx se validované xxxxxxxxxx (viz internetovou xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx provádí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx - 68 xx - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze vzorku xxxxxxxxx přidáním 1 xx xxxxxxxxxx pufru (dodatek 4), opětovným xxxxxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx xxx 7&xxxx;000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. To xxxxx není xxxxx, xxxxxxx pokud jsou xxxxxxx xx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx kmenem xxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx kmenem xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X) by xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stejném xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx negativní xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx části xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx okénky, nejlépe x 10 xxxxxx x průměru xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

4.1. Xxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx s relativně xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx x xxxxxxx 6 xx xx xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 do xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxxx řadu xxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx množství (pro xxxxxx x xxxxxxx 6 mm xx xxxxxx 15 µx - pro xxxxx xxxxxx xxxxx vyšší) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx 1/100 x xxxxxxx roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu lze xxxxxx jako xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx se xxxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxx zahřátím xx teplotu 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx při xxxxxxx 60 °C), xxx xxxxxxxx xxxx pomocí 95 % etanolu xxxx xxxxx zvláštních xxxxxx dodavatelů xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx potřeby xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Postup XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx na test x oddílu 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx v XX xxxxx. V xxxxx xxxxx xx xxx xxx titr 1/2 (X/2), x ostatních xxxx 1/4 (X/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxxxx 4.1 písm. x):

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx (XX) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. xxxx. x)

4.3.1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici konkrétní xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Podložní xxxxxxx xx inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x tato xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx po xxxx 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx titr. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx použité protilátky.

4.3.5. Xxxxxxx sklíčka se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx po xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (4.3.3.).

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Testovací xxxxxxx se prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x až 1000x. Xxxxxxxx xx okénka xx xxxx navzájem xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx x xxxxxxx xxxx malým počtem xxxxx xx zkoumá xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorek. Xxxxx musí xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx okénkách xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x pozitivním xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx slabou xxxxxxxxxxxx xxxxx brát x xxxxx.

Xxx podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx sklíčka ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. V xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx doprovodné xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx velikostí x morfologií x xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 4.3.

4.4.5. Interpretace xxxxxxxx XX xxxxx:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx morfologií se xxxxxxx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxxx poli x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxxxx XX xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejméně 5x10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x je xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx IF xxxxx xx negativní xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

5. Test FISH

PRINCIP

Když xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx a xx pozitivní, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx XXXX xxxx provede xxxx xxxxx screeningový xxxx x je pozitivní, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx extraktů xx xxxxxx, které xxxx xxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx postup xx měl xxx xxxxx možno proveden x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 nebo -68 xx -86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx část xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx výsledkem.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus na xx (xxxx. xxxx XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (PB) z 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2). Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx homologického xxxxx xxxx jiného xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx oligosond xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx způsobem xxxx x xxxxxx.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx fixační xxxxxx (viz dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx každého xxxxxxxxxx xxxxxxxx do Eppendorfovy xxxxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x.

5.1.3. Odstraní xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx v 500 µx fixačního xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx a xxxxxxxx se přes xxx xxx xxxxxxx 4 °C.

Alternativním xxxxxxxx xxxxxxxx je 96 % etanol. Xxx xxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx 5.1.2. x 50 µx 0,01 X XX x 50 µl 96 % xxxxxxx. Promíchá xx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Odstřeďuje xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µx 0,01 X PB (viz dodatek 3).

5.1.5. Kápne xx 16 µl fixované xxxxxxxx na čisté 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx obrázek 3, přičemž xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx na xxxxx xxxxxxx, a to xxxxxxxx x zředěný 1:100 s xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx vzorku (49 µx) může xxx xxxxxx při xxxxxxx -20 °X xx přidání 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx je xxxxx XXXX xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 M PB x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx sklíčku FISH

5.1.6. Xxxxxxx xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C) x fixují xx xxx plamenem.

V této xxxx xx xxxxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Sklíčka xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x x xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví se xxxxxx lyzozymu xxxxxxxxxx 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 ml pufru (100 mM Xxxx-XXX, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx xxx xx xx pouze xxxxxx xxxxxxx x nechat xxxxxx. Každý xxxxxx xx xxxxx pokryje xxxxxxxxx 50 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po dobu 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx demineralizované xxxx, xxxxx xxxxxx, a xxxxx xxxxxxxxxx papírem.

Alternativně xx xxxxx místo xxxxxxxx 50 µx xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 mM Xxxx-XXx, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx dobu 30 xxxxx.

5.2.2. Xxxxx xx xxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % x 96 % etanolu xxxxxxx po xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxx.

5.2.3. Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxxx v 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx peci xxx xxxxxxx 55 °C xx xxxx xxxxxxx 10 minut.

5.2.4. Připraví xx xxxxxxxxxxxx roztok (dodatek 7) s 45 µx xx 1 xxxxxxx x předinkubuje xx po dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.5. Xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x xx xxxxxxx xx 4 xxxxxx xx xxxxxxx / sklíčcích se xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx roztoku.

5.2.6. Xxxxx xxxxxxx xx přikryje 2 xxxxxxx sklíčky (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x peci xxx xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Xxxxx xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x xxxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 ml XXX) x 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 ml XXX). Xxxxx x xxxx xx přeinkubuje ve xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a podložní xxxxxxx xx umístí xx xxxxxx sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx inkubací po xxxx 15 xxxxx x kádince x 1x xxxxxxxx při xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx sklíček se xxxxxxxx do promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

5.2.11. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx do XXX x xxxxxx xx xxxxxxxxx papír. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. Vectashield, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) xx xxxxx xxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím xxxxxxxx (24 x 60 mm).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí xxxxx x xxxxxxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x pod xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) xx vzorku xxxxxxxx fluorescenčně zeleně. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx obarvené Xx3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx musí být xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx XXXX (oddíl 9.4) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx a xxxxx xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

5.3.2. Hledají xx xxxxx fluoreskující xxxxx x morfologií xxxxxxxxxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší než x pozitivního xxxxxxxxxxx xxxxx. Buňky, xxxxx xxxxxx zcela xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx musí být xxxx zopakován. Xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx sklíčka xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) na povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Existuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx FISH xxxxx. X xxxxxxxx z xxxxxxx části xxxxxxxx x částí xxxxxx xx xxxxx vyskytnout xxxxxxxxxx populace xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx FISH:

a) Výsledky XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx pozorovány v xxxxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách. Xxxxx jsou přítomné xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx a vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4). Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx, které obsahují xxxx xxx 5 x 10³ typických xxxxx na 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, xxxxxxxx jsou xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx xxxxxx screeningový xxxx a xx xxxxxxxxx, musí xxx xxxx druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx XX test. Pokud xx XXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx pozitivní, xx xxx dokončení diagnózy xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxx xxxxxx v xxxxx rozsahu jako xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testu xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx metodou xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxxxx xx xxxxxx extraktů, které xxxx předtím xxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx. Xxx dosažení xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxx laboratořích xxxxx být xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx se xxxxxxxxxx XXX činidla x protokoly. Přednostně xx xxxxxxx metoda x interní xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření, aby xx zabránilo xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX. XXX xxxx xx xxxx provádět zkušení xxxxxxxxx x laboratořích xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S negativními xxxxxxxxxx (u xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx zacházet xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx bylo xxxxx, jestli xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx negativní xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, který xxx xxxxxxx xxxxxxxx na Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- kontroly pufru xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx xx xxx zahrnuty xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x nimž xxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (příprava xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx izolátu (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx použít xxx xxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Metody xxxxxxxxxx DNA

Použijí se xxxx popsané xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Připraví se xxxxxxxxx materiál xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové DNA x komplexních substrátů xxxxxx jsou x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx PCR x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX v xxxxxxxx vzorku.

Následující xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX, uvedenou x dodatku. 6.

6.1.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx se 220 µx xxxxxxxx xxxxx (100 mM XxXx, 10 xX Xxxx-XXx [xX 8,0], 1 xX XXXX [pH 8,0]) xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx.

2. Přidá xx 100 µx extraktu xx xxxxxx x xxxxxx xx do xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x teplotě 95 °X xx xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx XXx, pH 8,0) a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx Easy DNAR xxxxxx X (Invitrogen), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 65 °C po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Xxxx DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx usazenina xxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x vzorek xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx se 500 µx chloroformu x míchá xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx se xx 15 000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X xxx oddělení xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Přenese se xxxxx xxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 ml 100 % etanolu (-20 °X), krátce xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx xxxx xx xxxx 10 xxxxx.

11. Xxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °X x xxxxxxxx xx x pelety xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °C) x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx dobu 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx xx zachová x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx nechá xxxxxxxx na xxxxxxx xxxx x DNA xxxxx vac.

15. Peleta xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx xxxx xxxxxxx 20 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -20 °X xx xx upotřebení při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx se odstraní xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx použije 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx vzorků obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.2 XXX

6.2.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxx xx xxxxx desetinný xxxxxx xxxxxx DNA (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx reakce, která xxxxxxxx také xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx přidá 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx směs XXX x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx směsi XXX xxxxxxx vzorku.

6.2.5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do stejného xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Nanese xx xxxxxxx 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx XXX z xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X xx xx. Xxxxxxx se xxxxxx xxxxxx DNA, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx XXX xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx (0,5 mg xx x) po xxxx 30-45 minut, xx xxxxxxx xxxxxxxx bezpečnostních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

6.3.3. X obarveném x XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx hledají xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx velikosti x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

6.3.4. X všech nových xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx při optimální xxxxxxx a xxxx x vhodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx x pufrem (xxx dodatek 6). Rozdělí xx naštěpené fragmenty xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem a xxxxxxxxx xx s xxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolou.

Interpretace xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx xxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn x xxxxx vzorku, xxx xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolními xxxxxxx: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx velikosti xxxx xxx xxxxxxxxxxxx x daným xxxxxxx).

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti x xxxxx (pokud xx požaduje), xx xxxxxxxxxxx, že nebyl xxxxxxxxxxxx žádným x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lze xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx x druhou sadou XXX xxxxxxx (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx mít xxxxxxxxx xx inhibici PCR, xxxxx byl očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxx, xxx x xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx negativní. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX i xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxxx nebyl získán xxxxx z xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxx xxxx negativních xxxxxxx.

7. Xxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx testování xxxxx metodou xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie na 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2).

Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití xxxxxxx připraveného xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx však lze xxxxxxx použít x xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx konfirmační xxxx.

Xxx xxxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků by xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx mezi xxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Používají xx xxxxx rostliny xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx se xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x efektivní xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx uvedené xxxxxxx xxxxxxx 15-25 xxxxx xx vzorek.

7.2. Inokulace xxxxxxx I

7.2.1. Každý xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx květináče x průměru 10 xx xx xxxxxx xxxx pěnového xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx částí x rozměrech 5 xx hloubky, 10 xx xxxxx x 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx testovaný xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx možno xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx kolem xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx a prvním xxxxxx listem podélný xxxx mírně xxxxxxxxxx xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x xxxxxxx přibližně xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

7.2.3. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x nanese xx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx linky xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx do pelety. Xxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxx vazelínou aplikovanou xxxxxxxx stříkačkou o xxxxxx 2 xx.

7.3 Xxxxxxxxx zářezem II

7.3.1. Xx stonek xxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje mezi xxxxxxx xxxxxx x xxxxx pravý xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx přibližně 5°), xxxxxx 1,0 xx a hluboký xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx stonku, xxxxxxx x xxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx stříkačky.

7.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (turgoru) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx inokulací nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku vejcoplodého xx xxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx lístky xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx méně xxx 23 X). Peleta xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx.

7.5. Jako pozitivní xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 xxxx 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx kultury xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x kde xx to xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx.

7.6. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx xxxxxxxxx 0,05 M PBS xxxxxxx xxxxxxxxxx metodou (7.2, 7.3 nebo 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx vhodných podmínkách (dodatek 8) xx xxxx xx 4 xxxxx xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) x xxxxxxxx xx xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx teplotách xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °X. Xxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xx skleníku xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx xxxxxxxxxx policích, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxx se zajistí xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Při xxxxxxx, zalévání, kontrole x xxxx manipulaci xx věnuje maximální xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx nezbytné, xxx xxxxxxxx x růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx xxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxx xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx být xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx před xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xxxx žilnatinou mívají xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx pletiva xxxxxx xxxxx jasně xxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; xxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx se xxxxxxxx, xxx je xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx. Rostliny mohou xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx mnohem xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx listů a xxxx xxxxxx xxxx xx. Vadnutí mohou xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxx xxxxx. Xxxxx k xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Tyto xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti, xxxxxxx rychle vadnou xxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx: xxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx xx xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, měla xx xxx provedena xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 70 % xxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxx xX xxxx XXX xx xxxxx x xxxxx a izoluje xx xx vhodném (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9). Xxxxx xxxxxxx podezřelé x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Za xxxxxxxx xxxxxxxxx, zejména xxxxx xxxxxx růstové xxxxxxxx optimální, se xxxx xxxx, xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx i xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx pozorovány xxxxx příznaky, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx xxxxxxxx vzorku xxxxx stonků o xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pokud xx xxxx xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 x 10).

8. Xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x pletiv projevujících xxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxx xxxx přerůst rychle xxxxxxxx saprofytické xxxxxxxx, x proto xx xxxxxxxxxxxx provádět xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx izolace Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx z xxxxxxx části hlízy xxxx xx xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se provádí xx xxxxx xxxx xxxxxxxx nebo částí xxxxxx x x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, ale x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx xxxxx 7.9). Xxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx provedena podle xxxxxx 3.x.2.

Xxxx pozitivní xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 106 cfu xx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx vyloučilo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx nově xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se xxxx xxxx xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx jeho xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx se testuje xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

8.1. Roztěr xx xxxxxxxxxx médium

8.1.1. Xx 100 µx alikvotní xxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx xxxx xxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění x xxxxxxxxx pufru (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx náročným xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxx, xx xxxxxxxx xx obvykle x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx 100 µl x xxxxxxx xxxxxx, x ředění 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx xxxx XXX-88 médium (dodatek 5), xx xxxxxxx pomůcek xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Desky xx xxxxxxxx v temnu xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x kontrolními miskami x počítání xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx provádějí xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx xx 5,7 x 10 xxxxx.

8.2. Čištění podezřelých xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého a/nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xx xxxx xxxxxxxx xx XXX xxxxx; xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xx měly xxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. nejlépe xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxxx xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx agar (pouze xxx xxxxxxxxxx),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový agar,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 21-24 °X xx dobu maximálně 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxx vytváří xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx xx provede xxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxx. U xxxxxxxxx xx rychlost xxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxx, okrouhlé, xxxxxx, xxxxxxxx, konvexně xxxxxxxxx, xxxxxxxxx tekuté, x xxxxxxx xxxxxx x obvykle mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9) xxxx pomoci xxxxxx xxxxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé xxxxxxx xx identifikují (xxx xxxxx 9) a xxxxxxx xx zkouška xxxxxxxxxx (xxx oddíl 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx izolované kultury Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx každý xxxxxxxxx xxxx xxxxx referenční xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxxxx xx následující xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx měla xxxxxxxxx xxx 21 °X a po xxxxx xxxxx xx xxxx xxx vyhodnocena. Xxxxx nedošlo x xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 xxx.

Xxxxxxx xxxxx xxxx zahrnovat xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur živného xxxxx. Morfologická srovnání xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx agaru.

Test Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (X/X) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Aktivita xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Růst x 7% NaCI -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxxxx +

Xxxxxx xxxxxxxx x:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx xx xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx ředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx lF xxxxxx (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx xX xxxxx xx dosaženo, xxxxxxxx xX titr xxxxxxx xxxxxxxx titru pozitivní xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx ml xx xxxxxxxx vodě (XXX)

x) Xxxxxxx xx 100 µx suspenze xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxx při xxxxxxx 100 °X xx xxxx 4 xxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxx podpořit xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Vzorky xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů se xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Xxxxxxx, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Boer, 1995; Xxxxx a xxx., 1997; Xxxxxxx x Rainey, 1999; Xxxxxx x xxx., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxxx amplikony PCR xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx stejnou mnohotvárnost xxxxx fragmentu xxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk na xx x UPW.

b) Xxxxxxx se xxxxxx XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

x) Kultura se xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) po xxxx 72 xxxxx xxx teplotě 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx se vhodný xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

x) Xxxx XXX je xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx mastných kyselin 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 lso, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 lso, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Arthrobacter a Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x těchto xxxxxxx, ale 15:1 Xxxxxxx X xx xxx tyto xxxxxxxx xxxxxxxxx kyselina, xxxxx xx však xxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x rozmezí 1-5 %. U Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx kolem 5 %.

9.6. XXX-XXX

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Xxxx xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x pro xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx patogenity.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ buněk xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx se 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx vejcoplodého xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Xxxxxxxx xx xxx teplotě 18-24 °X xxx dostatečném xxxxxx x vysoké xxxxxxxxx vlhkosti s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxx k přemokření xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx kultur by xxxx xxxxx 2 xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx uplynutí xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx až 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °X. Xxxxxxxx xx xx 3 týdnech xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx z xxxxxxx x příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx části xxxxxx 2 xx nad xxxxxx inokulace. Xxxxxxx xx rozdrtí a xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °C x xxxxxxx se xxxxx kolonií typických xxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Xxxxx	Xxxx
Xxxxxxx xüx Xxxxxxxxxx xxx Ernährangssicherheit	Vídeň x Linec	Rakousko
Departement Gewasbescherming	Merelbeke	Belgie
Plantedirektoratet	Lyngby	Dánsko
Central Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx National xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Unité xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx xx Xxxxx xx Xxxxx	Xx Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx	Xxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Protecção xxx Culturas	Lisabon	Portugalsko
Nacionalni institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main

Dodatek 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX a FISH

Vypěstuje xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. subsp. xxxxxxxxxxx (XXXXX 4053 xxxx PD 406) xx základním xxxxx XXXX x suspenduje xx v 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx hustoty xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx/xx. Toho xx xxxxxxx dosáhne xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx hustotě 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x pupkových xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, že xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 sterilních xxxxxxxxxxxxx o objemu 1,5 ml x 900 µx resuspendované xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx C. x. xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx kontroly. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 kopií xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx-24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx by xxxx xxx nejprve xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Při xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x nejméně x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx pozitivních xxxxxxx x nesmí xxx xxxxxxx x žádné x xxxxxxxxxxx kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx xxx testovací xxxxxxx

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze skladovat xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x extrakci xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x xxxxxxx xx sterilizace v xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx litr)
Lubrolové vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx xxxxxxx (*)	1,0 xx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx činidlo	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX	50 x
(*) xxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx homogenizací

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 xX fosfátový xxxx, xX 7,2)

Tento xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a provede xx sterilizace x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx IF xxxx

2.1. Xxxxx pro IF (10 xX xxxxxxxxx xxxx ve fyziologickém xxxxxxx (XXX), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Složky xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X po xxxx 15 min

2.2. IF-pufr-Tween

Tento xxxx se xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

2.3. Fosfátový xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx jako xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx IF xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Vector Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX x XXXX xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx mikroskopického xxxxxxx (X).

X = x x S/s,

kde X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx x více xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx objektivu.

s = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx pole (v xxxxxxx xx 8 - 24 xxxxx xxxx okuláru),

K = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované pelety (X).

X = X x 1 000/y x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx resuspendované xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx xxxxxxx média

Živný xxxx (Xxxxxxxx agar = NA)

Živný xxxx (Xxxxx)	23 g
Destilovaná voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (Xxxxxxxx dextrose xxxx = XXX)

Xxxxx xxxxx xxxxx xxxx obsahující 1 % X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxxx). Provede xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X po xxxx 20 xxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx agar (Xxxxx peptone xxxxxxx xxxx = YPGA)

Kvasnicový xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 x
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °C po xxxx 15 min.

Médium x kvasnicovým xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx solemi (Xxxxx extract xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) xxxxxxx (monohydrát)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7H2O	0,1 x
XxXX4 . H2O	0,015
NaCl	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x xxxxxxxxx při 115 °X xx xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx selektivní xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx médií x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005 x
Xxxx (Xxxxx x. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xX xx xxxxxx xx 7,2. Xx autoklávování (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) x xxxxxxxxx xx 50 X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 x, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, xxxxxxxxxxxx X 0,01 x.

X xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: trimethoprim (Xxxxx) x xxxxxxxxx xxxx (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % metanolu, xxxxxxxxxxxx X (Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx sterilizované filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx xxxx (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 x
X2XXX4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX na 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx: polymyxin X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 g, xxxxxxxxxxxxx (Sigma) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx následovně: xxxxxxxxx xxxx x 0,01 X NaOH, cykloheximid x 50% etanolu, xxxxxxxxx B sulphate x xxxxxxxxxxx vodě. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost základního xxxxx je 3 xxxxxx. Xx přidání xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx v xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x činidla xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx testování xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx nejméně 10³ xx 10⁴ xxxxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také nemělo xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx vybraných xxxxx xxxxxxxx.

1. Vícenásobný XXX xxxxxxxx x xxxxxxx XXX xxxxxxxxx (Pastrik, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx xxx xxx tgg pa xx -3'

primer XXX-X 5'- tac tga xxx gtt xxx xxx xxx x -3'

xxxxxx NS-7-F 5'- xxx gca xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

primer XX-8-X 5'- tcc xxx ggt tca xxx xxx ga -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x XXX X. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX kontroly 18X xXXX 377 xx (xxxx XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná koncentrace
Sterilní xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX pufr (1) (15 xX XxXx2)	2,5 μx	1x(1,5 mM XxXx2)
XXX (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx x-x XX (20 xX)	0,125 μl	0,1 mM
Primer XXX-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx XXX-X (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx NS-7-F(10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μM
Primer XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μM
Taq xxxxxxxxxx (5 X/μx) (1)	0,2 μx	1,0 X
Xxxxxxxx xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Metody byly xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxx (AmpliTaq nebo Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx primerů XX-7-X x NS-8-R xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx metody x xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XXX xx nutná xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci xxxxxxx.

1.3. Xxxxxxx podmínky pro XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx programu:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 xxxxx ii) 1 minuta xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx DNA matrice)

iii) 1 xxxxxx při xxxxxxx 64 °C (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

25 xxxxx v) 30 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx DNA matrice)

vi) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 62 °X (xxxxxxxxx primerů)

vii) 1 xxxxxx při teplotě 72 °X (xxxxxxxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx xxxx) 5 xxxxx xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx při xxxxxxx 4 °X

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xx optimalizován xxx xxxxxxx x tepelným xxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Při xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), iii), xx), x), vi) a xxx).

1.4. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty XXX xxxxxxxxxxxxx x XXX X. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx charakteristickou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx XX po xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx x fragmentu xxxxxxxxxxxx xxx X. x. xxxxx. sepedonicus xxxx xxxxxxx 282 xx a 220 xx.

2. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx

2.1. Xxxxxxxxxxxx xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 50 xx

Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 xx

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), pH 8,0

XXXX 48,4 g

Ledová xxxxxxxx xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx sůl) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xx 1x.

Také xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX xxxx

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx pro Cms XXX-XX3-01: 5'- ttg xxx ggc xxx xxx ctc xxx xxx -3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc tcc xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX XX XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX SE XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx čisté xxxx (např. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X NaOH x xxxxxxxxx magnetickým xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx se xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1N. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx potřeby xx upraví xxxxxx XXx nebo XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX S XXXXXXXXXXXXXXXXX NEPOUŽÍVAT MĚŘIČ xX!]

xxx) Xxxxxx se xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxx XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx množství xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x tabulce. Pro xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) je xxxxx 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Doporučená xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % SDS	0,9	3,6
sonda XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx objem (μx)	90,0	360,0

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 M xxxxxxxxx xxxx, pH 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje se xX x xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxx xx xx měl xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx následujících podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx délka xxx, xxxxx xx xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Xxxxx Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxxxx modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x xxxxxxxxxx violeti x 20 xx 95 % etanolu.

Rozpustí xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx x 80 xx destilované xxxx.

Xxx roztoky xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx roztok

Jód 1 x

Xxxxx xxxxxxxx 2 g

Destilovaná voda 300 xx

Xxxxx látky xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx xx xx vody x xxxxxxx xx v xxxxxxxx xxxxxx do xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx kontrastního xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin O 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx a xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Připraví se xxxxxxx, vysuší xx xx xxxxxxx x xxxxxx xx zahřátím.

2. Xxxxxxx xx zalije xxxxxxxx krystalové violeti x nechá xx xxxxxxx 1 minutu.

3. Xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx xx xxxx jedné xxxxxx.

5. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xx xxxxx papírem.

6. Odbarvuje xx pomocí xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % etanolu xxx xxxxxx, pokud xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx xx jemného xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxx 30 xxxxxx.

7. Opláchne se xxx xxxxxxx xxxxx x vysuší xx xxxxx papírem.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx roztokem x nechá xx xxxxxxx 10 s.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Mohou xx také xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx roztoky xxxx xxxxxxx soupravy.

LITERATURA

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium sepedonicum xx batches xx xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx. Publ XXX 11&xxxx;288 EN, 21 xx.

2. Bradbury, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx bacteria xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, X. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx sepedonicum xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. X., 1981. Determinative xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxx Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Xxxx, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx bacteria. X. Xxxx., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Xxxxx- xxx xxxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas solanacearum xxxxxxx using whole xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, J. X. x J. Xxx Xxxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx XX xxxxxx for the xxxxxxxxx xx latent xxxx rot xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) xx xxxxxx. XXXX Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Xxxxxxx, X. x X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxx development xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Plant Xxxxxxxx and Xxxxxxxxxx, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx pyocyanea xx xxx xxxxxxx xxxxxxxx. Nature, Xxxx., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, X x X. C. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Lelliott, X. X., 1966. The xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, R. X., X. Xxxxxxx x X. C. Xxxxxxx, 1966. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxx for the xxxxxxxxxxx xxxxx pathogenic xxxxxxxxxxxx J. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, R. A. x X. W., Xxxxxx, 1976. Xxx xxxxxxxxx xx latent xxxx xxx (Corynebacterium xxxxx onicum (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Burkh.) in xxxxxx stocks. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Li, X. x X.X. xx Xxxx, 1995. Selection xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx from XXX intergenic spacer xxxxxx for xxxxxxxx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, D., Xxxxxxx, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Pastrik, X. -X. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxx xx Clavibacter michiganensis xxxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxx reaction-based techniques. X. Xxxxxxxxxxxxxx 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, X.-X., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx host XXX. Xxxxxxxx Joiunal xx Xxxxx Xxxxxxxxx, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Xxxxxxxxxxx xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx their relationship xx xxx Corynebacteria. Xxx. Xxxxxxx xxxxx. Xxx. Sta., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, X., Xxxxxxx, X. x Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Xxxxxxxxxx guide xxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx identification of xxx genera xx xxxxxxxx. 2xx ed., Xxxxxxx and Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Smith, X. X.; Hemiesy, X; Xxxxx, DE., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX profiling using xxx XXX-X1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, P. X. X. and X. X. Collins, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx: xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Leeuweilhoek, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, B. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. X.; Xxxxx, X. X. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Ralslonia xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx in xxxx hybridization xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

B. METODY XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx xxxxx hniloby x xxxxxxx bramboru x bakteriálního vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx dalších xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx vzorcích xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx hostitelských xxxxxxx, a xx xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx protokoly pro xxxxx xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx x dodatcích. Seznam laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, xx x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, je xxxxx pracovat za xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím xxxxxxxxx xx odstraňování xxxxxx x za podmínek xxxxxxxxxxx příslušným povolením Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx stálé x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx X. solanacearum jako xxxxxxxxx prahy xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, údržbu x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx zacházení s xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx xxxxxxxxxx a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx x xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x §4 xxxx. 1, naznačuje xxxxxxxxx výsledek z xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx na xxxxxx, xxx xx xxxxxxxxxx v xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx diagramech. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (test XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx izolace) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu.

Pokud je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx podezření xx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx xx podezření xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle xxxxxx xxxxxxxx. Jestliže je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx X. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xxxxx kultury X. xxxxxxxxxxxx s potvrzením xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx postupových xxxxxxxx

1.1. Postupový diagram xxx diagnózu xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (Ralstonia xxxxxxxxxxxx) xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx hniloby nebo xxxxxxxxxxxxx vadnutí

Postup xxxxxxxxx xx xxxxx xxx xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx bakteriálního xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx x x xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.1.

2) Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxx. Negativní xxxxxxxx naznačuje vždy xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx svazků cévních xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx xx přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.2.

5) Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx extraktů z xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.3.

6) Xxxx XX bakteriálního slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

7) Test XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx nebo xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx ELISA xxxxxxxxxxxxx xxxxx suspendovaného xx xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx snadno izolovatelný x rostlinného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx roztěrů (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

12) Kultivace xxxx xxxxxx při xxxxxxxxxxx xxxxxx infekce x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx růstu xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, musí xx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx půdách.

13) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx provede pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx charakteristika je xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx xxx xxxxx xxxx případ.

14) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx bramboru xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxx je xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx alespoň xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx xxxxx je xxxxxxx xx jiném xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx doplněn xxxxxxx xxxxxxxx a dále, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx čistá xxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx dostačující x xxxx, xxx xxx xxxxxx považován xx podezřelý. Screeningové xxxxx a izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx sérii xxxxx.

1) Standardní velikost xxxxxx je 200 xxxx, ačkoli postup xxx xxxxxx i xx xxxxx počet, xxxxxxxx 200 hlíz xxxx x dispozici.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x oddíle 3.1.1.

3) Pokud xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx považován xx negativní. X xxxxxxx, xx je xxxx xxxxxxxxx, je xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxx nebo další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Další xxxxx xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je popsán x xxxxxx 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

11) Kultivace nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx inhibice xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxx izolační testy xx xxxxxx pelety xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx provést xxxx x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx na X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx pomocí testů xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky, xxxxxxx rajčete xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rostlin xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1) Xxx xxxxx 3.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx testy xxxxxxxx xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx pozitivní, musí xxx xxxxxxxxx izolace x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. V případě, xx je test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxx validaci prvního xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx více xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li druhý xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xx negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Selektivní xxxxxxxx xxxx je popsán x xxxxxx 6.1.4.

5) Xxxx XX xx xxxxxx x oddíle 6.1.5.

6) Xxxxx PCR xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx popsán x oddíle 6.1.7.

8) Xxxxx ELISA xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Xxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x oddíle 2.3.d.

11) Xxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx jsou xxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx kuItur, x xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x X. solanacearum, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x oddíle 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx listů xxxxxx x vrcholu rostliny xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx. V xxxxxx xxxxxx vadnutí xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x xxxxxxx xxxxx xxxx. Vadnutí xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx rostliny se xxxxxx stává xxxxxxxxx x xxxxx kolapsem x uhynutím xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx uříznutého xxxxxx xxxxxx xx vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx napříč x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. X xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx stává xxxxxxxxx xxxxxx a xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xx xxxxxxx xxxxxxx xxx xx xxxxxxxxx xxxxx hlízy a x oček může xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, xx xxxxx se xxxxxxxxx částice xxxx. Xx xxxxxx xx xxxxx objevit xxxxxxxxxxxx, xxxxx propadlá xxxxx xxxx důsledek xxxxxxxxx xxxxxxx cévního pletiva. X pokročilejších fázích xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx bakteriálního a xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x rajčete

Rostlina xxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxxx příznakem xx xxxxxxx vzhled xxxxxxxxxxx xxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota xxxx xxxxx 25 °X, xxx xxxxxxxx vzdušné xxxxxxxx) xx během xxxxxxxx xxxx dní xxxxxxx kroucení xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx na xxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxx rostliny, které xxxxx xxxxx úplným xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxx xxx 21 °X) xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx na xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx pozorovat xxxxx xxxxxxx pruhy xx xxxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Při xxxxxxx řezu xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx nažloutlý bakteriální xxxx.

2.1.3. Příznaky x xxxxxx hostitelů

Rostliny Solanum xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Xx normálních xxxxxxxx xxxx u xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx půdy xxxxxxxxxxx 25 °C xxxx xxxx extrémně xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. x xxxxxxxx X. xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx rajčete). Xxx xxxxxxx xxxx příznaky xxxxxx xxxx u xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx S. xxxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxx, xxxxx vykazovat xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx příčném xxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxx stonku xxx xxxxx. X xxxx cévních xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxx slizu, xxxxxxxx xx xxx stonku xxxxxxx svisle xx xxxx, x xx x při absenci xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xxxxxx xxxxxxxxxxx. Použije xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-x-xxxxxxxxxxxxxxx (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x buňkách R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx bakteriálního xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx sklíčku xxxxxxx xxxxx X xxxx súdánskou xxxxx (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx jsou xxxx XX (xxx oddíl 6.1.5.), xxxx FISH (xxx oddíl 6.1.7.), xxxxx XXXXX (viz xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Odebere xx xxxx xxxx vrstva xxxxxxxxxx pletiva z xxxxxxx prstence xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx vláken xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxx vadnoucí xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní destilované xxxx xxxx 50 xX fosfátového pufru (dodatek 4) x xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Přenese se 50-100 il xxxxxxxx x xxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, XXXX xxxx XXX; xxx dodatek 2) x/xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx (xxxx. XXXX, xxx dodatek 2). Xxxxxxx xx xxxxxxx zřeďovacích xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxxx buněčnou xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2 x pozitivní xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx xx 2-6 xxx při xxxxxxx 28°X.

- Na xxxxxxxxxxx xxxxx půdě xxxxxxxxx xxxxxxxxxx izoláty X. solanacearum xxxxxxx xxxxxxx xxxx, ploché, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxxxxx formy X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxx SMSA xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx xxxxxxx nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Xxxxxxxxxxxxx testy Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx popsány x xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx xx xxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx testů na xxxxxxxx této velikosti. Xxxxx xxxxxxxx xxxx xx vzorku vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx výkladu xxxxxxxx. Xxxxxx xxx vhodně xxxxxx i xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx xx x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx testování xxxxxx x velikosti 200 xxxx.

- Extrakt xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx

x) Xxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx xxxxxxx množení xxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxx. Použijí xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx být xxxxxxxx XXX xxxx, xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX) a mycí xxxxxxxxxx mezi každým xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx oschnout na xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxx xxxxxx zeminy xxxx xxxxxxxx xx xxx proveden xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx nože na xxxxxxxx se odstraní xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé xxxxx, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx pletivo. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxx na xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (xxxxxxx) hlízy x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx se xxxx xxxxxxx a xxxxxxx se xxxxxxxx.

Xxxxx xxxx pří xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx, provede se xxxxxxxx vyšetření xxxxxx xxxxx na řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Všechny naříznuté xxxxx x podezřelými xxxxxxxx xx uchovávají xx xxxx nejméně 2 xxx při xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx xxxxx ke xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) a xxxxx se uchovávají x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx podmínek. Xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými příznaky xx měly xxx xxxxxxxx podle xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xx xxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x xxxxxxx, že xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, musí xxx xxxxxxxx vyčištěny a xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx chlóru). Xxxxxxx xx zpracovat xxxxxxxx x pupkového konce xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx; x xxxxxx xxxxxxx 72 xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) xxxxxxx 24 xxxxx.

Xxxxxxxx x xxxxxxxxx konců xx xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Zalijí xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx x xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx chlazené,

nebo

b) xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx množství (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Waring xxxx Xxxxx Xxxxxx) xxxx xxxxxxx v utěsněném xxxxxxxxxx sáčku na xxxxx použití (xxxx. xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx zářením) pomocí xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx).

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx mixéru xxxxxxxx vysoké xxxxxxxxx xxxxxxx kontaminace xxxxxx. Xx nutné zamezit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx nože (xxxxx) x xxxxxx. Xxx xxxxx XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx DNA na xxxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxxxx. X xxxxx XXX se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích xx xxxxx použití a xxxxxxx zkumavek xx xxxxx použití.

3.1.1.3. Supernatant xx dekantuje. Xx-xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (xxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µx), filtr xx xxxxx přídavkem (10 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g xx xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 g xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.1.5. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 1,5 xx peletového xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx X. xxxxxxxxxxxx, 500 µl pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x 500 µx pro referenční xxxxx. Přidá xx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx xx uchovávají xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x rozmrazení xx nedoporučuje.

Je-li xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx do 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx xxxxxxxx nutné, xxx všechny xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx byly xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx vzájemné kontaminaci. Xx xxxxx xxx xxxxxxx IF x xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Testování

Postupové xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx izolace (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Test XXXX (xxx oddíl 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx oddíl 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxxx bezpříznakových xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx

3.2.1. Xxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx smíšené xxxxxx. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx x počtu xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Provádí-li xx xxxxxxx, xxx xx xxx založen xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

3.2.1.1. Xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx se xxxxx 1-2 xx xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx dezinfikovaným nožem xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx každého xxxxxx hned xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx z xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx nejspodnější xxxxxxxxx výhonek x xxxxx xxxxxxxx uříznutý xxxx xxx spojením x xxxxxxx stonkem. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx, 1 xx xxxxxx xxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xxxx zahradnickými xxxxxxx xx odebere 1 xx xxxxxx xxx x paty xxxxxxx xxxxxx hned xxx xxxxxx země. X xxxxx potměchuti (S. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx se xxxxxxxx 1-2 xx xxxx ze xxxxxx xxx xxxxx nebo xxxxxxx x vodními xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x počtu xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 vzorkovací xxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx nejspolehlivější v xxxxxx pozdního xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx možné xxxxxxx xx celý rok x víceleté Xxxxxxx xxxxxxxxx rostoucí xx xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné rostliny xxxxxxxx, Xxxxxxx xxxxxxxxx, X. xxxxxx, Xxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx xxxxxx Solanaceae. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. x Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx xxxxxxxx druhy, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum xxxxxx 2/Race 3 x kořenech a/nebo xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Atriplex xxxxxxx, Xxxxxx xxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx xxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Ranunculus xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Xxxxx xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X této xxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx šetření vnitřních xxxxxxxx (zbarvení xxx xxxx xxxxxxxxxxx sliz). Xxxxxxxx xxx stonku x příznaky xx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odděleně (viz xxxxx 2.).

3.2.1.2. Části xxxxxx xx krátce xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx zpracují části xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx postupů:

a) xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) extrakčního pufru (dodatek 4) x xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx xxx xxxxxxx xx 24 °X xxxx 16-24 hodin xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxxx. Xxxxxxxxx nebo Xxxxxxx) x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) pomocí gumového xxxxxxx xxxx vhodného xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Xxxxx). Není-li to xxxxx, uloží se xxxxx stonků v xxxxxx xxxxxxx xx 72 xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C) na 24 xxxxx.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx má xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx není xxxxx, xxx xxx xx provést xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx vzorkový xxxxxxx se xxxxxxx xx dva xxxxxx xxxx. Jeden díl xx testuje xxx xxxxxxx 4-10 °X x druhý xxx xx xxxxxxxx v 10-25% (x/x) sterilním xxxxxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X (xxxxx) nebo -68 až -86 °X (xxxxxx) pro xxxxxxxx další xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx protokolů xxxx x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (viz xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (viz xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Detekce x identifikace původce xxxxx hniloby xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx diagram xxx detekci a xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Xxx xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování.

(2) Xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxx tehdy, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Selektivní izolační xxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Metody xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx popsány x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx saprofytickými xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx saprofytická xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx vzorku xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x oddíle 6.2.

(10) Test xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. solanacearum xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx vzorcích xxxxxxxxx vody x xxxxxx xxxx být xxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x xxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxx citlivost xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx testu xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx x odpadní xxxx ze zpracování xxxxxxx x odpadní xxxx xxx x xxxxxxxxx xxxx. Zatímco xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx detekci xxx 10³ xxxxx/xxxx povrchové xxxx, xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx vodě xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. X tohoto xxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vodu xx provedení nějakého xxxxxxxxx postupu (např. xxxxxxxxxxx xxxx filtrace), xxx xxxxx dojde xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Xxxxxxx xxxxxxxxxx testovacího schématu xx xxxx být xxxxx x xxxxx xxx xxxxxxxxx spolehlivosti x případě xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Xxxxxxxx x xxxx, xx xx toto xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx výskytu nebo xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx vodě, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xxxx.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx je xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx a xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx překračuje 15 °X.

- Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxx době xxxxx výše uvedených xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx zvýší xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

- Vlivem silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx toku xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x zastření výskytu xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx odebírají v xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx xxx xxxxxxxx a 2 x xx břehu. Xxx xxxxxxxxxx odpadní xxxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x místa xxxxxx xxxxxxx vody. Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx upřednostňována xxxxx xxxxxxxx, doporučuje xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 opakované xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx každé 3 xx xxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx.

4.2.1.2. Xxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx frakce xxxxxx následujících xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx xx 30-50 xx xxxxx xxxxxx xxx 10 000 g xx dobu. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx dobu 15 xxxxx), xxxxx xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C, xxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 ml pufru (dodatek 4).

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx pórů 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 xx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx xx xxxxxx xxx velké xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx zpracování brambor xxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx inhibuje xxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx dodatcích.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx x xxxx

(1) Viz xxxxx 5.2.1., kde xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx test xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.4.

(3) Xxxxxxxxxxx PCR xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie je xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

(6) Kultivace xxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx po xxxxxx xxxxxxx vzorku.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx čistých xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

(8) Test xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x identifikaci X. xxxxxxxxxxxx x xxxx

Xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx oddíle xx použitelné pro xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx půdy, xxx xxxx xxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx odpadu xxx zpracování brambor xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx xxxxx poznamenat, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které se xxxxx vyskytovat x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx substrátů.

Při hodnocení xxxxxxxxxxxxx všech xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x půdě xxxx kalu je xxxxx xxxx v xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx vypěstování xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx sledování, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x při xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx stupeň xxxxxxxx pozornosti.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Xxxxxxxxxx polní xxxx by xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 0,5 až 1 xx xxxx xx 60 míst xx ploše 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Xx-xx xxxxxxxxx xx výskyt xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxx sběrných xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx testováním se xxxxxxxxxx xxxxxx při xxxxxxx 12-15 °C. Xxx ze xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx shromážděním xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx testováním xx xxxxx vzorek xxxxx xxxxxxxx.

5.2.1.2. Dílčí xxxxxx 10-25 x xxxx xxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 ml xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx dobu 2 xxxxx. Je-li xxxxx, xxxxxxx 0,02% sterilního Xxxxx-20 x 10-20 x xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx napomoci xxxxxxxx.

5.2.2. Testování

Postupový xxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx v xxxxxxxxxx dodatku.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x identifikaci R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x detekční xxxxx

6.1.1. Xxxx xx výtok xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. solanacearum ve xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: xxxxxx se xxxxxx xxxxx nad xxxxxx xxxx. Xxx xxxxxx se ponoří xx xxxxxxxx x xxxxxx vodou. Xxxxxxx xx, xxx xx xx několika minutách xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx samovolně xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x přeříznutých xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxx bakteriálního xxxxx x infikovaného xxxxxxx xxxx ze 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx půdě YPGA xxxx XXX (dodatek 2) xx mikroskopické sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx nechají xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx obarví buď xxxxxxx modří nebo xxxxxxxxx černí x xxxxxxx xx mikroskopické xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxx nilskou xxxxx:

x) Obě xxxxxxx xx zakápnou 1 % xxxxxx roztokem xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxx 10 xxxxx při xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx se barvící xxxxxx. Krátce xx xxxxxxxx jemně tekoucí xxxxx z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxx xxxxx papírem.

c) Xxxxxx se xxxxxxx 8% vodním xxxxxxxx xxxxxxxx octové x xxxxx xx inkubovat 1 xxxxxx při xxxxxxxx teplotě.

d) Xxxxxx xx opláchne xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx se xxxxxxx xxxxxx vody x přiloží se xxxxx xxxxxxx.

x) Zkoumá xx obarvený xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx 450 nm pod xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx zvětšením 600x až 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx olejovou xxxx xxxxx xxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx oranžová xxxxxxxxxxxx. Také xx xxxxxxxx x procházejícím xxxxxxxxx světle, xxx xxxx xxxxxxx intracelulární x zda xx xxxxxxxxxx xxxxx typická xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X v 70% etanolu x xxxxxxxx xx 10 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxx se opláchne xxxxx tekoucí vodou x xxxxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xylolu x xxxxxx se xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je xxxxxx xxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) vodným xxxxxxxx xxxxxxxxx a nechají 10 vteřin xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxx dodržet xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx x kohoutku, xxxxxx xx xxxxxxxxxx voda xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx se krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxx x procházejícím světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x při xxxxxxxx 1&xxxx;000x.

x) Hledá xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum s xxxxxx zbarvenými stěnami xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x příznaky xx xxxxxxx pozorovatelná xxxxxx xxxxxxxxxxxx protilátek (viz dodatek 3) označených xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx nebo obarvenými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx komerčně xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx se kapky xxxxxxxx xxxxxxxx protilátky x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

x) Připraví xx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxx použitím xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Pozoruje xx, xxx se x pozitivních vzorcích xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxx

6.1.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx

Xxxxxxxx:

Xxx xx xxxxxxx tato xxxxxx poprvé, xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx R. solanacearum xx 1 ml xxxxxxxxx do xxxxxxxx xx vzorků, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx řádně xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (ve xxxxx Xxxxxxxxxxx et xx., 1996; xxx dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx bakterií xxxxxxxxx na živné xxxx růst vyžaduje xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx mít xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, jestliže Petriho xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxx xxxx rovněž xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx-xx podezření xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx otestován xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx očekávat, že xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx teplotě xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X vyloučení xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx odděleně xx xxxxxx x testování.

U xxxxx nově připravené xxxxx selektivní xxxxx xxxx by měla xxx před xxxxx xxxxxxxx k rutinnímu xxxxxxxxx vzorků xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx týmž xxxxxxxx xxxx xxxxxx (vzorky).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µl extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx 48 xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx xxxxxxx kontrola xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx a xx 3 xxxxx inkubace xx rozvine xxxxxx xx krvavě červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx se xx xxxxx xxxxx xxxxx atypické xxxxxxx X. solanacearum. Xxxxx xxx malé, xxxxxxx, xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx bakterií xxxxxxxxx kolonie.

3. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxx metodou xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx., aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) při xxxxxxxx xxxxxxx v temnu xxxx xxxxxxxxxx ve xxxxxxx ochranném médiu xxx teplotě -68 xx -86 °C xxxx lyofilizované.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (viz oddíl 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (viz oddíl 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx na selektivní xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx po 6 dnech xxxxxx xxxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx xxxx xxxxxx nalezeny xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx média xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx izolovány podezřelé xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx médium pro xxxxxxxxx, např. modifikovaný xxxxx Wilbrink (xxx dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v extraktech xx vzorků x xxxxxxx citlivosti xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx dojde x ke xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx současně xxxx xxxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxx být xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x obohacené kultury xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx může xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx xxxx XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx protilátek xxxxxxxxxx monoklonální xxxxxxxxxx.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX se xxxxxxx 100 xx xxxxxxxx xx xxxxxx do 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), xxxxx xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xx vzorku do xxxxxx (xxxx. 100 xx v 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 27 až 30 °X x xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x uvolněnými xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Xxxx zahájením xxxxx ELISA nebo XXX se xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. X xxxxxxxxxx bujónem xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx se xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x důvodu xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx vzorků xxxx xxxxxxxxx odstřeďováním xxxx jinými xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx testu XX xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x dosažení požadovaných xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx xxxx XX xxxx xxxxxx x xxxxxxxx IF xxxxx je pozitivní, xxxx xxx jako xxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxx test izolace, XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx je xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx šarži xxxxxxxxxx. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx kterém dojde x optimální reakci xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx R. solanacearum x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx všechna xxxx xX nejméně 1:2&xxxx;000. Xxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx xx xxx xxx xxxxxxxx xx xxxxxxx připravených extraktech xx xxxxxx. Xxxxxxxx xx xx xxxxx, xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na vzorcích xxxxxxxxxx při teplotě - 68 až - 86 °C x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 g x xxxxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx to xxxx xxxxxxx, zvláště xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx plamenem.

Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx xxxxxxx v dodatku 3 X, a xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx 24 °C) by xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola na xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní díly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3.

Použijí xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, pokud xxxxx x 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 mm.

Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx vzorků.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx množství (15 µx xx xxxxxx pro průměr xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx x ředění 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx druhý xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (15 µx xx xxxxxx xxx xxxxxx okénka 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx je xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx poměru) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx do xxxx xxxxxx. Druhá xxxx xxxx xxx použita xxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxx, xxx xxxxxxx xxx. 2.

6.1.5.2. Vysuší xx xxxxxxx xxx okolní xxxxxxx xxxx zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °C. Xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), xxxxxxxx, 95 % xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je potřeba, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx skladovat ve xxxxxxxxx stavu x xxxxxx xxxx xx xxxxxxxx krátkou xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx xxxxxx testováním.

6.1.5.3. Xxxxxx lF

i) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x odst. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (T/4), 1/2 xxxxx (T/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2X).

xx) Xxxxx xxxxxxxx sklíčka xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (XX) protilátek x xxxxx XX. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.x) x 6.1.5.3.x)

Obrázek 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.ii) x 6.1.5.3.xx)

1. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx testovací xxxxxx xx xxxxxxx kompletně xxxxxxx protilátek. Množství xxxxxxxxxx xx každém xxxxxx xxxx být xxxxxxx stejné xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx extraktu.

Pokud xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx následovně:

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx inkubují xx vlhkém xxxxxx xxxxxxxx po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Setřesou xx xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx dobu 5 xxxxx x pufru XX Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx xxxxx zabránit xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx způsobit vzájemnou xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx.

4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Množství xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx stejné xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx papíru po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Setřesou xx xxxxx konjugátu xx sklíčka. Xxxxxxx xx xxxxxxxx a xxxxx jako xxxxxxx (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx (dodatek 4) xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx a xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx excitaci XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx průměrech x xxxxx xxxxxx. X vzorků x xxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx mikroskopu.

Nejdřív xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Buňky xxxx xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx xxxx XX xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx kontrolním xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx zbarvením xxxx xxxxxx fluorescencí xxxxx xxxx v xxxxx.

Xxx xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx xxxxxxxxx. Xx xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx skupině xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx díky xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (mimo xxxxxx xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. Existuje několik xxxxxxxx podstatných xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X peletách x xxxxxxx xxxxx bramboru x částí xxxxxx xx mohou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx fluoreskujících xxxxx s xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4. Berou se x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx pracovním xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 6.1.5.3.

5. Interpretace xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx jasně xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx odhadne xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xxxxxxxxxxxxx poli x xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx IF xx xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx buněk xx 1 xx resuspendované xxxxxx nejméně 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx infikovaný x xx xxxxxxx další xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx IF xxxxx je xxxxxxxxx xxx vzorky, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek se xxxxxxxx za xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx xxxx XXX xxxx hlavní xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x xxxx xxxxxxx xxxx XX. Jestliže xx PCR xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu, xxx xxxx analýza xxxxx.

Xxxxxxx xxxx metody x xxxxx xxxxxxx xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx specializovaná expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx mělo umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako negativní. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x přesnosti xx xxxxx xxxxxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, zvolí xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xx xxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx opatření x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x PCR) xx xx mělo xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX test xx xxx zahrnovat následující xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx extrakci bakterií x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pozitivní xxxxxxxx:

- alikvotní xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx xxxx přidána X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx X. xxxxxxxxxxxx ve xxxx x virulentního xxxxxxx (např. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- xxxxx xxxxx, xxx PCR použít xxxx XXX xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, připravují xx pozitivní kontroly x xxxxxxxxx odděleném xx vzorků, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx xxxxx xxxxx xxx zeminy. V xxxxxxx xxxxxxx XXX xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx pro xxxxx test, jsou xxxxxxx x dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx purifikace XXX

Xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky (viz dodatek 3). Xxxx kontrolního xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxx způsobem jako xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxxx xxxxxx XXX z xxxxxxxxxxx substrátů xxxxxx xxxx x dispozici xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx enzymových xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX ve xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xx schválenými xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µl xxxxxxxxxx pufru (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (pH 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x mikrozkumavka xx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxxx 95 °X na 10 xxx.

3. Xxxxxxxxxxxxx se xxxxx xx 5 xxx. xx ledu.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního xxxxxxx xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) x xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx se 220 µx xxxxxxx Easy XXX® A (Invitrogen), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X po xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µl xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), důkladně xxxxxxxx třepáním, xxxxx xxxxxx nezačne být xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µl xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx xxxxx a xxxx xx stane xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření mezifáze xx směs odstřeďuje xxx 15 000 x xx xxxx 20 xxx. xxx xxxxxxx 4 °C.

9. Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Přidá xx 1 xx 100 % etanolu (- 20 °X), krátce xxxxxxxx třepáním x xxxxxxxx xx na xxxx xx xxxx 10 xxx.

11. Odstřeďuje xx xxx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X x xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x po xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X, zachová se xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Xxxxxx se xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX odparce.

15. Peleta xx resuspenduje x 100 µx xxxxxxxx XX x xxxxx xx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 minut.

16. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx - 20 °C xx do xxxxxxx xxx XXX.

17. Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx xxxxxxxxxxxx obsahujícího XXX xx použije xxx xxxx XXX.

x) Xxxx metody

Jiné metody xxxxxxxx DNA, např. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, xx xx xxxxx použít, xxxxx xx xx prokázalo, xx jsou xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk xx 1 xx xxxxxx xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx testované vzorky x xxxxxxxx xxx XXX xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Xxxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx extraktu XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx xxxxx, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx interní xxxxxxxx XXX.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx reakční xxxx XXX x xxxxx se týž xxxxx XX xxxx xxx ten, xxxxx xxx xxxxxx xx xxxxx PCR xxxxx xxxxxx.

5. XXX xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx termocykleru, který xxx použit xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program PCR (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx produktu XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx xxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) agarózového xxxx x Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) pufru (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx xx xxxxxx XXX marker, xxxx. (xxxxxx) 100 xx.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx dobu 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx s xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx x XX (xxxxxx vlnové xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx produkty XXX o očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx nálezů/případů xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx PCR provedením xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx xxx optimální xxxxxxx x xxxx shodným xxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx gelu x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx UV xxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx PCR

Test XXX xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx velikosti xxxx x zkoumaného xxxxxx xxxxxxx, xxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx rostlinu: xxxxx produkt XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx amplifikován se xxxxxxxxx xxxxxxx).

Xxxx XXX xx pozitivní, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický xxx X. xxxxxxxxxxxx očekávané xxxxxxxxx a (xxxxxxxx) xxxxx, xx xxxxxxxxxxx, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x žádného xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx získat xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx sadou xxxxxxx XXX dodatek 6).

Poznámka:

Lze xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, jestliže je xxxxxx očekávaný amplikon xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx ze xxxxxx xxxxxxxxx kontroly R. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx protokolech XXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje inhibici xxxxxx, jestliže xxxx xxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx.

X případě, xx očekávaný amplikon xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více xxxxxx negativních xxxxxxx, xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Xxxx XXXX

Xxxxxxx

Xxxx xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx XXXX xxxx x xx pozitivní, musí xxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx izolace xxxx XX xxxx. Když xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx oligosondy xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx X xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx vzorku, xxxxx xxxx předtím testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx xxx pokud možno xxxxxxxx s xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx možné xxx xxxxxxx provést x xxxxxxxxx, který xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °C.

Jako xxxxxxxxx kontrola se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx na 1 xx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, xxx dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 denní xxxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, suspendovaného v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx v dodatku 3 X.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených FITC xxxxxxxxx xxxxxxxx procesu xxxxxxxxxxx, protože zbarví xxxxxxx xxxxxxxxxx přítomné xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx x xxxxx xxxxx, xx uveden x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxxxx xx xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx roztok (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µx xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxxxx xx xx xxxx 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx xx peleta xx 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx 1 xxxxxx x chladícím zařízení.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx xxx 7 000 x, odstraní se xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx peleta v 75 µ10,01M XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx neředěný a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µl (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx - 20 °C po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx množství 0,01 XX (xxxxxxx xx protřepáním).

Obrázek 7.1 Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx vzduchu (xxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx fázi xx xxxxx xxxxxx přerušit x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx další xxx. Xxxxxxx by xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

6.1.7.2. Hybridizace

1. Xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % a 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší se xxxxxxxx v držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X xx xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Použije xx 10 µx hybridizačního xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 xxxxxx (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx každém sklíčku, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx xxxxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx xxxxx x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x xx xxx, xxx xxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx a xxxxx xx proběhnout xxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxx 5 hodin x xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °C x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx obsahující 1 x xxxx x xxxxxxxxxxx kvalitou (Xxxxx Q), 1 x 1x xxxxxx (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx xxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) x 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 xx xxxx x molekulární xxxxxxxx). Xxxxxxx xx inkubovat xx xxxxx lázni x xxxxxxx 45 °X.

6. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku xxxxxxx.

7. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 15 xxxxx v xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Držák xxxxxxx xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx roztoku 1/8 xxxxxx a nechá xx xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

9. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx xx UPW (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí na xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx papírem. Napipetuje xx 5-10 µx xxxxxxx xxxxxxx (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX nebo xxxxxxx) xx xxxxxxx xxxxxx a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx krycím sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Hodnocení XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx vhodným pro xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1&xxxx;000 x xxx olejovou xxxxxx. X filtrem vhodným xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (včetně většiny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx zbarveny fluorescenčně xxxxxx. Xxxxxxxx filtru xxx tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat xx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Porovnává xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx xxxxxxxxx, xxxxx xx zbarvení odchylné. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx průměry x pravých xxxxxx x kolem xxxxxx. X xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx pozoruje xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx nebo být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního kmene. Xxxxx, které nejsou xxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxx slabou xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxx test xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx kontaminace xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx xxxxxxx) xx krytu xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx FISH x xxxxx nese xxxxxxx problémů. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxx xx xxxxxxxxxx partií xxxxxxxx xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxx fluorescenčních xxxxx na xxxxxx x atypickou xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxxx xx saprofytickými xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx xxx x testu XX.

5. X úvahu xx xxxxx pouze xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx výsledků xxxxx XXXX

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx filtru xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx kontrolách x xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, se xxxxxxxx za xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Nutné xx xxxxx xxxxxxxxx. Vzorky, xxxxx xxxxxxxx méně xxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx FISH testu xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx pozorovány xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. solanacearum, xxxxxxxx xxxx tyto xxxxxxx jasně xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Testy XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx ELISA xxx xxxxxx pouze xxxx xxxxxxxxx test xxxxx xxxxx XX, XXX xxxx XXXX pro xxxx relativně nízkou xxxxxxxxx. Při xxxxxxx XXX XXXXX xx xxxxxxxxx a použití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx vzorků před xxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx, xxx xxxx xx rovněž setkat x xxxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx protilátek X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx titru xxx xxxxxx xxxxx xxxxx protilátek. Titr xx xxxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxx, při xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 10⁵ až 10⁶ xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx výrobce. Xxx xxxxxxxxx by měly xxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx ředění, xxxxx xx blízké xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, který byl xxxxxxx otestován xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x suspenze bakterií xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx x solném xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx xxxxxxx xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrolní vzorky xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx xx 1 xx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, xxx dodatek 2 A a X). Xxx srovnání xxxxxxxx xx každé xxxxxxxx xx použije xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x PBS X. xxxxxxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx odděleny od xxxxxx x xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx se xxxxxxxxx xxx tento xxxx, xxxx xxxxxxx x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx provede týmž xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et al., 1995)

1) Xxxxxxx se 100-200 µl vzorkového xxxxxxxx. (Zahřátí xx 100 °X na 4 xxxxxx ve xxxxx xxxxx nebo xxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx nespecifických xxxxxxxx).

2) Xxxxx xx xxxxxx množství xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx xx xxxxxxxx.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx každé xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Nunc-Polysorp xxxx xxxxxxxxxx) a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X xxxx 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °C.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx xx xxxxxx ředění protilátek xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x blokačním pufru (dodatek 4). U xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx xx xxxx).

6) Xxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X.

7) Xxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx x jamek a xxxxx xx xxxxxx xxxx xxxxxxx (bod 4.).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µl xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx teplotě 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z xxxxx x xxxxx xx xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Xxxxx xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx a odečítá xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových xxxxxxxxxxx.

x) XXX-XXXXX

1) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x uhličitanovém xxxxx pH 9.6 (dodatek 4). Xxxxx xx 200 µl xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx inkubovat xxx xxxxxxx 37 °X 4 až 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 hodin.

2) Xxxxx xx třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xx nejméně xxxx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xx xxxx jamek xx xxxxx destičce. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx při xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx použitím XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx vhodné xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (XXX), xxxxx se 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx stát 2 xxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx použitím PBS-Tween (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx imunoglobulinu xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x PBS. Xxxxx xx 190 µx xx každé xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do každé xxxxx x xxxxxxxx xx v xxxxx xxx pokojové teplotě. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx xx xxxxxxx x pravidelných xxxxxxxxxxx 90 minut.

Interpretace výsledků xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx negativní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx optické xxxxxxx (XX) x xxxxx xx stejnými xxxxxx xx xxxxx xxx dvojnásobek XX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx) x jsou větší xxx xxxxxxxxxxx OH xxxxxxx x negativních xxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxx XXXXX xx pozitivní, jestliže xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx XX v xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx všech negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxx XXXXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorcích ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx správně xxxx xx xxx inhibován. Xxxxxxxxx hodnoty ELISA x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx nespecifickému xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Xxxxxxx

Xxxxxxxx.:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx do xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx předtím xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx viz x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx lze xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu ze xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx xxx xxxx xxxx xxxxxxx použít xx extrakty, které xxxx uchovány v xxxxxxxxx v teplotě - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx x rovnocennou citlivostí xxxxx xxxxxxxxx laboratoře) xx fázi xxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx lilek (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Beauty xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx xx xxxx 2. xx 3. listů až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx listu. Xxxxxxxx u lilku xxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxxx se xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx použít xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx xx xxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xx stonky rostlin xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx pomocí xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx testovací xxxxxxxx.

2. Inokulace xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx x xxxxxxx xx kápne xxxxxxxxx 5-10 µx xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxx příčný xxx xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx xx xxxxx v xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se utěsní xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Stejnou xxxxxxxxx se nainokulujte 5 sazenic xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, a xxxxxxxxx pufrem (dodatek 4) xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx rostlin, aby xx xxxxxxxxx vzájemné xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx nechají xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °X a xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x přiměřeným xxxxxxxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxx přemokření, tak xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx. Xxx xx zabránilo kontaminaci, xxxx být xxxxxx xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx místech xxxxxxxx xxxx vegetační xxxxxx nebo xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx rostliny z xxxxxxx vzorků po xxxx xxxxxxxx drženy xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx zástěnami. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, xxx xxxxxxx x vzájemné xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx udržovat xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxx, protože xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxx vadnutí, xxxxxxxxx, xxxxxxx anebo xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (xxxx. 2.3) x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Jestliže xxxxx 3 týdnů xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, provede xx xxxx XX/XXX/xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx 1 xx x xxxxx testovací xxxxxxxx, xxxxxxxxxx nad xxxxxx xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x podezřením xx X. solanacearum (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx, jestliže xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx příznaky, xxxxxxxx mohou xxx x těchto rostlin xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích xxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum xxxxxxxx xxxxxxx xxxx následujících xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech.

Zahrnou xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Výživové x enzymatické xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx vesměs xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott a Xxxxx (1987), Klement xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Očekávaný xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Oxidačně xxxxxxxxxxx xxxx X+/X-

Xxxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Redukce xxxxxxxxx +

Využití citrátů +

Xxxx xxx 40 °X -

Xxxx x 1% XxXx +

Xxxx x 2% XxXx -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza škrobu -

Xxxxxxxxx eskulinu -

Xxxxxxxx xxxxxx -

Xxxxx x xxxxxx xxx Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx XX

6.2.2.1. Xxxxxxxx se suspenze xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 ml x xxxxx XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx zředění xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx IF metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Test XX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx IF xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx této xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Provede xx xxxx XXXXX xx specifickou monoklonální xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, jestliže xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx přibližně 10⁶ xxxxx na 1 xx xxxxxxxx xxxx (XXX = xxxxx xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Xxxxxx xx 100 µx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxx 100 °X 4 minuty. Vzorky xxxxx být xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xx xxxxxxx použití.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx XXX k xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx et xx. (1993); Xxxxxxx x Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Weller xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony XXX xxxx stejnou xxxxxxxx x xxxx stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxx pozitivní kontrolní xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x XX.

6.2.5.2. Použije xx xxxxxx FISH (6.1.7) x xxxxxxx 2 oligosondami specifickými xxx X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx FISH xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Pěstuje se xxxxxxx xx tryptikázo-sójovém xxxxx (Oxoid) 48 xxxxx xxx teplotě 28 ^xX.

6.2.6.2. Xxxxxxxx xx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Test XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx podezřelé xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2XX, 16:1 2XX a 18:1 2XX x xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx sp.

6.2.7. Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx použitím jedné x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X xxxxxxx provedeného testu xx zahrnou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx

X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x tří xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx xx xx., 1990). Xxxxx xxxx pro test xxxxxxx je xxxxxxx x dodatku 2. Test xxx úspěšně provést xxxxxxxxx xx xxxxx xxxx s xxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx půda xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µl xx 1 xxxxx), xxxxxxxx se mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní výsledek xxxxx.

Dodatečné xxxxx xxx xxxxxxxxx dílčích xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Xxx Lelliott x Xxxxx (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx komplexu R. xxxxxxxxxxxx xxx dosáhnout xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, mezi xxx xxxxx:

1. Analýza xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx RFLP (Cook xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxxx XXX, XXX x XXXX (Louws xx xx., 1995; Xxxxx xx al., 1995).

3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx fragmentů XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; viz dodatek 6) lze xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (biovary 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) R. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx xx xx., 1989) x xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx et xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx xxxx (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxxx patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx kultur x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx pozitivní kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 až 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx lilku ve xxxx 3 xxxxxxx xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx inkubovat xx 2 xxxxx xxx xxxxxxx 25-28 °C x xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, bez xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx. X xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx během 14 xxx. Xxxxxxxx-xx xx xx xxxx době xxxxxxxx, xxxxxxx nemůže xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx forma X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx vody xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx možno xx xxxxxxxxxx xxxxx půdě (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx při teplotě 28 °C se xxxxxxxxx výskyt xxxxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Živné půdy xxx izolaci x xxxxxxxxx

Xxxxx xxxx (NA)

Živný xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx tlakem xxx teplotě 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx-xxxxxx-xxxxxxxxx xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Difco) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxx (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 g

Bacto-Peptone (Difco) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7X₂X 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx

xxxxxx xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °C x xxxxx se xxxxxxx sterilizovaný xxxxxx 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Sigma), až xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 50 mg xx litr.

b) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx 1994 ve xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (viz xxxx. 2) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx teplotě 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí xx xx 50 °X x přidá filtrem xxxxxxxxxxxxx xxxxx roztok xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx získala xxxxxxxxx xxxxxxx koncentrace:

Krystalová violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx P1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 X (xxxxxxxxx 25 mg)/l

Chloramfenikol (Signa X-3175) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X (Xxxxx X-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Sigma) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx než xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx může xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. V xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx může to xxxx xxxxxx růst xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx mohou xxxxxx x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx může xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx použití Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx antibiotik xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxx teplotě 4 °X x xxxxx x musí xx xxxxxxxxxxx xx 1 xxxxxx. Xxxxx s xxxxxx xx měly xxx před xxxxxxxx xxxxxxx povrchové xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné xxxx xxxxxxxx suspense xxxxxxxxxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 až 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °X xxxxxx xxxxxxx kolonie.

c) Xxxxxxxxxx obohacené xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996)

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx SMSA, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx xx xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx pepton 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx xx na 50 °C. Xxxxx xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx půdu SMSA.

Dodatek 3

X. Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx materiál

a) Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx materiál bud' x xxxxxxxxx kontrole (xxxxxxx 1) nebo xxxxx optimalizace testů, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Všechny kmeny xxxx komerčně dostupné x lze xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Národní xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXXX), Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx (PD), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Francouzská xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (XXXX), xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx INRA, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx bakteriálních xxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX xxxxxxxxxxx xxxx geneticky xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx extraktu xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx x negativní xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) xxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x XXX testů. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx vhodné xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a testech xxxxxxxxxx.

Xx formaldehydu fixované xxxxxxxx biovaru 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ buňkami na 1 ml k xxxxxxxxx kontrole xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrol xxx screeningové xxxxx xxxxxxxx pletiv XXX/XX x FISH

Kultivuje se 48xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx X. solanacearum xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. kmen NCPPB 4156 = XX 2762 = CFBP 3857) xx XXXX xxxxx xxxx a xxxxxxxxxx se v 10 xX fosfátovém xxxxx, aby xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 2 x 10⁸ buněk xxxxxxxxx xxxxxxx xx 1 xx. Xxxxxxx se xx dosáhne jemně xxxxxxxxx suspenzí xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz z xxxxxxxx xxxxxx s xxxxx slupkou, o xxxxx xx xx, xx je xxxxxx X. solanacearum.

Zpracují xx xxxxxxx xxxxx výše xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx se xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx mikrozkumavek x xxxxxx 1,5 ml x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx 100 µl xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx v xxxxxxx xxxx mikrozkumavkách.

Těchto xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx řádně xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x 100 X1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, xxxx xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 xx - 24 °C xx do doby xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx xxxxxx XX.

Xxx XXX xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx vzorků.

Pro XX x XXXX xxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XX, XXXX x XXX xxxx xxx R. solanacearum xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ a 10⁴ buněk/ml xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx v xxxxx x negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx lze xxxxxxxxx po dobu xx xxxxxxx xxxx.

1. Xxxxx pro extrakci

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový xxxx, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx protřepáním.

Na₂HPO₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °C xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM fosfátový xxxx, pH 7,2)

Xxxxx xxxx se používá xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx hlíz xxxx, xx byly xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 g

Destilovaná xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro IF (10 mM fosfátový xxxx ve fyziologickém xxxxxxx (PBS), pH 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 g

NaCl 8,0 g

Destilovaná voda 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min.

IF-pufr-Tween

Tento xxxx xx xxxxxxx k xxxxxxxxxxx podložních sklíček.

Přidá xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx IF.

Fosfátový xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx používá jako xxxxx roztok na xxxxxx sklíček na XX testy x xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx komerčně xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx účely xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací pufr, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX CO3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx autoklávováním při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx extrakt obsahuje xxxxxx xxxxx aromatických xxxxxxx, xx možné xxxx xxxxxxxxxxx přidat xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12X₂X 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Xxxxxxxx xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (XXX-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx x koncentrovanou XXx se xxxxxx xX xx 9,8.

Xxxxxx xx do 1 x xxxxxxxxxxxx vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx dvě 5 xx tabletky xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (Sigma) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx testu XXXX XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Xx₂XX₃ 1,59 x

XxX XX₃ 2,93 g

Destilovaná xxxx 1&xxxx;000 xx

Xxxxxxxx se xxxxxx a zkontroluje xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

XxXx 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1&xxxx;000 ml

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 ml

4.4 Xxxxxxxxxxx xxxx, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx a xxxxxxx xx xxxxxxx xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx typických xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá se xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx S = xxxxxx jednoho xxxx xx sklíčku x xxxx okénky x

x - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx xxxxxxxxxx (1 xxxx 1,25),

X = xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Vypočítá xx xxxxx charakteristických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X =C x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x každém okénku x

X = xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx protokoly x xxxxxxx pro PCR

Poznámka:

Úvodní xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx reprodukovatelné zjištěni xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx X. xxxxxxxxxxxx na 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxxx 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx al. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XXX-1 : 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx X-2: 5'-CCC XXX GCT XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 cyklus: x) 2 xxxxxx při 96 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 20 sekund xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx syntéza)

vi) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx program xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx přístrojů může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) a xx).

1.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX vzniklé xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx XXX vytvářejí xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x enzymem Xxx II po xxxxxxxx xxx teplotě 37 °C.

2. Protokol XXX Pastrika x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer Xx-1: 5'-xxx cga xxx xxx xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-2: 5'-xxx xxx ttc xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx templátové DNA X. solanacearum DNA = 553 xx.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx koncentrace
Sterilní XXX	16,025 μx
10x pufr XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 xX MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Xx-1 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μl	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μl
(1) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx) a Xxxxx BRL. Poznámka: Původně optimalizovaná xxx xxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200 x polymerasou Xxxxx Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx být xxxxxx použity xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx cyklický proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx xxx 95 °X (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx primerů x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °C (syntéza xxxxx)

1 cyklus: v) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kroků xxxxx xx), iii) x xx).

2.4. Restrikční enzymová xxxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx restrikčních fragmentů x enzymem Xxx X po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Xxxxxxxxxx fragmenty xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 bp a 96 xx.

3. Protokol xxx multiplexní PCR x xxxxxxx kontrolou (Xxxxxxx xx xx., 2002)

3.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer XX-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX AGA XXX X-3'

Xxxxx xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC TTA XXX XXX TTG XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX XXX CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx amplikonu xxxxxxxxxx XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 bp (xxxx xxxxxxx XX). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx xxxxxxxx XXX 18X xXXX = 310 xx (sada xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx XXX

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx následující xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 5 xxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

iii) 30 xxxxxx při 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxx)

1 cyklus: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxx xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX R. solanacearum xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Xxx 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Mva 1269 X) po xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. solanacearum (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX GAA XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-XXX XXX CAC XXX AGA XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Rs-1-F/Rs-3-R = 716 bp

4.2. Xxxxxxx xxxx XXX

x) Protokol XXX xxxxxxxxxx pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx podmínky XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx xxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 1/2- a xxxxxxx 3/4/5:

1 cyklus: x) 5 minut xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx při 95 °X (denaturace templátové XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx při 72 °X (syntéza xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (konečná syntéza)

vi) xxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx byl optimalizován xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Použití xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací XXX X. solanacearum xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Rs-1-R xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx délky xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Xxx X xxxx Isoschizomere (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx xxxx 30 minut xxx xxxxxxx 65 °X. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x XXX X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Xx-1-X a Xx-3-X xxxxxx žádná xxxxxxxxxx místa.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx roztok)

Bromfenolová xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) voda (xxxxxxxxxx) 6,2 ml

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Před xxxxxxxx xx xxxxx xx 1 X.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (např. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx XXx-1-XX3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx acc ccc-3'

Nespecifická xxxxxxxxxxxxx sonda XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx agg agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX PARAFORMALDEHYD, XXXXX JE TOXICKÝ. XXXXXX XXXXXXXX A XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX V DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx xx 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Ultra xxxx xxxxx = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x xxxxx xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx xx rozpustí xx přidání 5 xxxxx 1N XxXX x zamíchání xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxx xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx XXx 1X. Xxxxxxxxxxx xx pH xxxxxxxxxx xxxxxxxx a x případě xxxxxxx xx upraví pomocí XXx nebo XxXX. [XXXXXXXXXX: X ROZTOCÍCH X PARAFORMALEDHYDEM XXXXXXXXXX XXXXX PH!]

iii) Přefiltruje xx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4 °C xx xxxxxxx xxxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Sonda XXX 338 5 ng/µl

Sonda XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx hybridizačního xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx 1. Xxx xxxxx sklíčko (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx xxxxx 90 µx hybridizačního xxxxxxx. XXXXXXXXXX: FORMAMID XX XXXXX JEDOVATÝ, XXXXX XXXXXXXX XXXXXXXX X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační směsi

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx světlocitlivé xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °C. Xxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná voda 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, zkontroluje xX x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X xx dobu 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx semena xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) nebo xxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx) xx xxxxxxxxxxxxxxx výsevního xxxxxxxxx. Sazeničky x xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 xxx) se xxxxxxx xx pasterizovaného xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx by xx měly pěstovat xx skleníku xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

Xxxxx dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx dne, xxxxx xx delší;

Teplota: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, R.i., X. Xxxxxxxx and D.A. Xxxxx. 1990. Xxxxxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx of whole xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx microbiology. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Council Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 July 1998 xx the control xx Ralstonla xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Xxxxxxxx, G., X.X. Xx Xxxx, X. Xxxx, X. Xxxxxxx xxx B. Xxxxx. 1999. Xxxxxx xx division xxxxxxxx xxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx and application xx xxx identification xx Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Pathology 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, X., Xxxxxx, J.L., Xxxxxx, X xxx Xxxxx, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Indirect Xxxxxx-Xxxxxx Inununosorbent Xxxxx Xxxx Xxxx x Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Antibody xxx xxxxxxxxx Detection xx Ralstonia solanacearum xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Xxxxxxx and Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 68, 3634-3638.

5. Xxxx, X., Xxxxxx, X. xxx Xxxxxxxx, X. 1989. Xxxxxxx diversity of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx: detection xx restriction fragment xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx hypersensitive xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Plant-Microbe Interactions 1:113-121.

6. Elphinstone, J.G., Xxxxxxxx, J., Wilson, X.X. xxx Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx tuber xxxxxxxx. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Xxxxxxxxxxx, X.X. (1994) Modification xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx isolation xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx solanacearum. Tn: X.X. Xxxxxxx (xx.) Xxxxxxxxx Xxxx Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxx, A.C. 1964. Characteristics xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Bacteriology 27; 265-277.

9. Xxxxxxx, X.X., Xx-Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X. and Xx Xxxxx, L. 1990. Xxxxxxxxx in xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxXxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, S., Y. Xxxxxxxx, T. Xxxxx, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Xxxxxxxxx xxx F. Kishi. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx using x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR technique. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X xxxxxxxxx method xxx Pseudomonas solanacearum xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx and xxxx xxxx xx xxx xxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx OEPP/EPPO Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Janse, X.X. 1991. Infra- xxx intra-specific classification xxXxxxxxxxxxxx solanacaerum strains xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx analysis. Xxxxxxxxxx xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx of xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx appearance xx a xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Xxxxxxx Z.; Xxxxxxx, X and X.X. Xxxxx, 1990. Xxxxxxx in Phytobacteriology. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 pp.

15. Lelliott, X.X. xxx Stead, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Publications Xxx., Xxxxxx. 216 xx.

16. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxx, X., Xxxxxx, J., Xxxxxx, X., Xxxxxx, X., 1997. Selective xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Xxxxx xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Publishers. xx. 117-121.

17. Louws, X.X., Xxxxxxxxx, D.W., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxx Pseudomonas xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx sequences xxx PCR. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Stephens, C.T. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx rep-PCR fingerprinting xx xxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Xxxxx, N., X. Xxxxxx, G. Xxxxxxxx, X.-X Xxxx, X.-X Xx, R. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Hayward, V. Xxxxxxxxxxxxx, W.F. Xxxx, X.X. Xxxxxxxx, J.N. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxxx of species xxx xxxxxx-xxxxxxxx DNA xxxxxx and XXX xxxxxxx for xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx). As Xxx. J. Mol. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Detection xx X. xxxxxxxxxxxx in xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx cham xxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxx 148; 619-626.

21. Pastrik, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx and xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by multiplex XXX xxxxxxxxxxxxx xx 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx positive xxxxxxx. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, X., Elphinstone, X.X. xxx Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx agent xx xxxxxxxxx xxxx. Food xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Schaad [Xxxx.]. - 3. xx.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, and X.X. Xxxxxxx. 1993. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xx xxxx, Pseudomonas xxxxxxxxx xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx by partial 16X xXXX xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx for xxxxxxxxx xxxxxxxxx by xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. X. Xxx. Microbiol. 139: 1587-1594.

25. Xxxxx, X.X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxx, X. xxx Saddler, X.X. 1995. Xxxxxxx xxxxxxxxx of Burkholderia xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) race 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx xxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx fatty-acid profiles. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, M., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Xxxxx, X. 1996. Xxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx strains of Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxx xxxxx disease xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. International Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Xxx Xxxx, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, X.X.X., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, R. 1998. Genetic diversity xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx XXXX, XX-XXXX xxx xxx-XXX. Xx: Xxxxx, P., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, J. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx and Xxxxxxxxxx Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Xxxxxx) xx. 44-49.

29. Xxxxxx, X.X., Xxxxxxxxxxx, X.X., Xxxxx, N., Stead, X.X. and Xxxxxxx, X. 1999. Detection xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' xxxxxxxx XxxXxx xxxxx. Applied xxx Environmental Microbiology 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. van Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Xxxxxxxxx xx X. solanacearum, xxxxx xxxxxx xxxxx rot xx potato, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.