Plné znění - 331/2004 Sb.

Vyhláška

Předmět úpravy §1

Pojmy §2

Průzkum výskytu původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §3

Opatření při zjištění podezření z výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §4

Opatření při potvrzení výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby §5

Testování klonově příbuzných partií hostitelských rostlin §6

Opatření proti šíření původce kroužkovitosti a původce hnědé hniloby §7

Testování rozmnožovacího materiálu bramboru §8

Účinnost §9

Příloha č. 1

Příloha č. 2

Příloha č. 3 - Způsob provádění odborného šetření a stanovení rozsahu pravděpodobného zamoření původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby a rozsahu jejich možného rozšíření a náležitosti oznámení potvrzeného výskytu původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 4 - Opatření po potvrzení přítomnosti původce kroužkovitosti nebo původce hnědé hniloby

Příloha č. 5 - Požadavky na zneškodňování odpadů při průmyslovém zpracování partie hostitelské rostliny označené za zamořenou podle §5 odst. 1 písm. a) nebo pravděpodobně zamořenou podle §5 odst. 1 písm. b)

Příloha č. 6 - Očista a dezinfekce objektů a předmětů zamořených nebo podezřelých ze zamořeni původcem kroužkovitosti nebo původcem hnědé hniloby

INFORMACE

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §88 xxxx. 2 xxxxxx č. 326/2004 Xx., x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx x x změně xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, (dále xxx "xxxxx") k xxxxxxxxx §71 xxxx. 1 písm. i) xxxxxx:

§1

Xxxxxxx úpravy

Tato xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxx¹⁾ a xxxxxxxx xxxxxxxx, která xx uplatňují xx xxxxx Xxxxx republiky xxxxx šíření Clavibacter xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Davis xx al. xxxxx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Davis xx xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, x Xxxxxxxxx solanacearum (Smith) Xxxxxxxx et xx., xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxx xx

x) xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx,

x) zjistilo xxxxx xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxx x

x) xxx xxxxxxxx výskytu se xxxxxxxxx jejich xxxxxx x prováděla se xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxx jejich xxxxxxxxx.

§2

Xxxxx

Xxx účely xxxx xxxxxxxx xx rozumí:

a) xxxxxxxx kroužkovitosti - xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxx xx xx. xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxx) Xxxxx xx xx.,

x) původcem xxxxx hniloby - xxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx xx xx.,

x) hostitelskými xxxxxxxxxx -

1. xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, x ostatní xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxx), x nichž xxxx potvrzena možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x přirozených podmínkách,

2. xxxxxxx hnědé xxxxxxx - xxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx X.) s xxxxxxxx semen xxxxxxxx, xxxxx jedlé (Solanum xxxxxxxxxxxx L.) xxxxx xxxxx x plodů, xxxxx xxxxxxxxx (Solanum xxxxxxxxx X.) x xxxxxxx rostliny x xxxxxx xxxxxxxxxxx (Solanaceae), x xxxxx xxxx xxxxxxxxx možnost xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx - xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxx partii,

e) xxxxxxxxxxx průzkumem - xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx původcem xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx, x xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx x x xxxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxxxx zamořením xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx - xxxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx, zásilce, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, podle §11 xxxx. 1 zákona,

g) xxxxxx rozšířením původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby - xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx pozemku, x xxxxxxx xxxxx x xxxxx, podle §11 xxxx. 1 xxxxxx,

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původcem hnědé xxxxxxx - xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx §11 odst. 1 xxxxxx,

x) karanténním xxxxxx - území xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxx §76 odst. 1 xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxxxxxxx xxxxx - xxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, xx xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §76 xxxxxx x důvodu xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx,

x) xxxxxxx příbuznou xxxxxx - partie hostitelské xxxxxxxx, xxxxx vznikla xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxxxx; xxxxxx xx za:

1. xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxx x témže xxxx xxxxxxxxxxxx množením x jediné xxxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxxxx osiva,

2. rodičovskou xxxxxxx xxxxxxxxx partii xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, které x xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

§3

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti a xxxxxxx hnědé hniloby x xxxxxxx podle xxxxxxxx 2 xx 7.

(2) Detekčnímu xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x původce xxxxx xxxxxxx podléhají

a) xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx²⁾ původem x Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx §8 xxxx. 2,

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx bramboru²⁾ xxxxxxx ze xxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx unie (xxxx jen "xxxxxxx xxxx"),

x) xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx brambor xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx,

x) xxxxxxx partie bramboru xxxxxxxxxxx x bezpečnostní xxxx xxxxxxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x).

(3) Vymezovacímu xxxxxxxx xx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx všechny xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx podezřelé x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx hostitelských rostlin xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. c).

(4) Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx kontrole xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx

x) xxxxxxx xxxxxxxx partie rozmnožovacího xxxxxxxxx bramboru²⁾ x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx,

x) všechny xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x vývozu xx xxxxxxx xxxx.

(5) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx na výskyt xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx podléhají

a) porosty xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x dalšímu xxxxxxxxx,

x) xxxxx xxxxxx používané x závlaze xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, které xxxxxxxxxx zpracovávají hlízy xxxxxxxx, popřípadě xxxx xxxxx odpady x xxxxxx xxxxxxx.

(6) Vymezovacímu xxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxx potvrzení xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx k xxxxxxx xxxxxx podezřelých x xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x místech xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

(7) Výskyt původce xxxxxxxxxxxxxx a původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx

x) laboratorním testováním xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x odstavci 2 písm. x) x x), xxxxxxxx 3 a x xxxxxxxx 4 xxxx. x) x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxx, x xxxxxxx xxxxxxxx x odstavci 4 xxxx. x) x xxxxxxxxxx partií,

b) xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx xxxx, v xxxxxxxxx xxxx xx skládkách, xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx, v xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxx 2 xxxx. x) x d),

c) prohlídkou xxxxxxx rajčete xx xxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx rostlin x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx 5 xxxx. x),

x) laboratorním xxxxxxxxxx xxxxxx vody, xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vegetace x xxxxxxx uvedeném x xxxxxxxx 5 xxxx. x) x v xxxxxxxx 6.

(8) Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx, xxxxx, xxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxx xxx průzkumu, xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 7, xxxxxx tohoto xxxxxxxx x xxxxxx předávání xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx x §10 odst. 1 zákona Xxxxx xx základě xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx a biologie xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx a v xxxxxxxxxx na aktuální xxxxxxx xx výskytu xxxxx xx míře xxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx xx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx kontrolního x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxx xxx "Xxxxxxx"). Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxx x xxxxxx původce kroužkovitosti x původce xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 xxxx stanoveným Xxxxxxx v xxxxxxx x §10 xxxx. 1 zákona x xxxxxxxxxxx ve Xxxxxxxx.

(9) X xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx odstavců 2 x 4 xxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx odebrané xxxxx xxxxxxxxx osobou, xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxx Xxxxxxx, pokud bude xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx dohledu xxxx xxxxxx, že xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx způsobem xxxxxxxxxx xxxxx odstavce 8.

(10) Xxxxxxxx průzkumu xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 6 xxxxxxxx xxxxxxx Xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx anebo xx xxxxxxxxx tuto xxxxxx xxxxxx xx xxx xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 xx 8 xxxxxxxxx Xxxxx x souladu x §10 odst. 5 xxxxxx jednou xxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx A xxxxxxxx xxxxxxxx státům a Xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx srovnatelné xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx hniloby xxxx xxxxxxxxx xxxxx. Výsledky xxxxxxxx xxxxxxxx provedených xxxxx odstavců 2 xx 6 oznamuje Xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx, a xx x xxxxxxx xxxxxxxx x rozmnožovacím xxxxxxxxx xxxxxxxx,²⁾ množeném xxxxx pro xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx 1. xxxx, x xxxxxxxxx případech xx 1. června. Xxxxx oznámení x xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxx hostitelských rostlin, xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx.

§4

Opatření xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x výskytu xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xx xxxxxxxxx z xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx xx x xxxxxxx x §11 xxxx. 1 zákona xxxxxxxx

x) Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx vizuálních příznaků xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x x xxxxxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx přílohy č. 1 xxxxxx X xxxxx 1 x xxxxxx II, xxxx

x) xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx provedeného Xxxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1.

(2) X xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 7 zákona x xxxxxxxxxx právního xxxxxxxx³⁾ xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx, x to xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 x xxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx x příloze č. 2 xxxxx B, s xxxxx xxxx podezření xxxxxxxx nebo xxxxxxxx.

(3) Xxxxx zahájí xxxxxxxxxx xx zjištění xxxxxxxxx x xxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx odborné xxxxxxx xxxxx §76 xxxx. 2 xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx

x) xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxx, ze xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, s xxxxxxxx xxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxx xxxxxxxx pod xxxxxxxx Ústavu, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, x

x) xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx s cílem xxxxxx xxxxxx předejít xxxxxx zákazu xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxxx x v xxxxxxxxx spojených x xxxxxxxxxx x výskytu, xxxxxxxxx x mimo xxxx xxxxxxx x xxxxxxx.

(4) Xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx zamoření xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxxx vod xxxxxxx x jiného xxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx členském xxxxx, sdělí Ústav xxxxxxxxxx xxxxxx rostlinolékařské xxxxxx xxxxxxxxxxx členského xxxxx xxxxxxxxxxx týkající xx xxxxxx podezření x xxxx x xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

(5) Pokud xxxx x xxxxxxxxx x výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx nebo původce xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxx x České xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxx Xxxxxx xxxxxxxxx ohrozit, xxxxxxxxxxx Xxxxx republika, xxxxxx Ústav vhodná xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x 3.

§5

Xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx původce kroužkovitosti xxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx

(1) Xxxxx úřední xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx §3 xxxx. 8 xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx, Xxxxx x souladu x §76 xxxx. 2 xxxxxx x x xxxxxxxxxxxx k xxxxxxxxx vědeckým xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx kroužkovitosti x xxxxxxx hnědé xxxxxxx x ke xxxxxxx pěstování, xxxxxxx xx trh x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx

x) xxxxxx za xxxxxxxx rostliny, xxxxxxx, xxxxx partii, x xxxxxxxx, stroje, xxxxxxxx xxxxxxxxxx, sklady nebo xxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx obalového xxxxxxxxx, x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx, x xxxxx xxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx materiálem, ze xxxxxxx xxx vzorek xxxxxxx, a místo xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxx xx xxxxx xxxxx xxxxxx pěstebního xxxxxxxxx, x pozemek, xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx vypěstovány x xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxx,

x) provede xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx v xxxxxxx x ustanovením xxxx 1 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxx klonově xxxxxxxxxx xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxx §6 x stanoví v xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 2 přílohy č. 3 xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx kontaktu, x xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxx vazby xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxx xxxxx písmene x),

x) xxxxxx xxxxxxxxxx území xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) x xxxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx rozsahu pravděpodobného xxxxxxxx xxxxx písmene x) a xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce hnědé xxxxxxx x xxxxxxx x ustanovením xxxx 3 přílohy č. 3.

(2) V xxxxxxx xxxxxxxxx výskytu xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x ohledem xx xxxxxxxxxx xxxx, odpadní xxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx x x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx, jejichž xxxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, Xxxxx

x) xxxxxxx úřední laboratorní xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx vod x xxxxxxxxx hostitelských xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x příloze č. 1 ve vhodných xxxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx,

x) xxxxxx v souladu x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx laboratorního xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x) xxxxxxxxxx vodu, x xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxxx,

x) xxxxxx karanténní xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx za xxxxxxxxx xxxxx písmene x) x bezpečnostní xxxx na základě xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxx 3 přílohy č. 3.

(3) Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx státům x Xxxxxx x xxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxx 4 přílohy č. 3 xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxxxxx 2 písm. x), x sdělí podrobnosti x vymezení xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x), xxxxxxxxx odstavce 2 xxxx. x). Xxxxxxxxxxx x tomto oznámení xxxx důvěrné.

(4) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx hniloby v xxxxxxxx, zásilce xxxxx xxxxxx původem z Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx odstavce 3, Xxxxx odpovídajícím způsobem x x xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 1 a 2 xxxxxx xxxxxxxx předměty x objekty, xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx.

(5) Ústav stanoví xxxxxxx xxxxxxxx ve Xxxxxxxx xxxxxx pro xxxxxx xxxxxxxxx šetření xxxxx xxxxxxxx 1 xxxx. x) a xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xxxx. x), xxxxxxxx 2 xxxx. c) x xxxxxxxx 4.

§6

Xxxxxxxxx xxxxxxx příbuzných xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx xxxxxxx laboratorní xxxxxxxxx xxxxx §4 xxxx. 2 xxxxx xxxxxxxxxxx partií xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx, které xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x), v xxxxxx xxxxxxx xxxx všechny xxxxxxx xxxxxxxx partie xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾, x xx x xxxxxxx xxxxxxxxx ke stanovení xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x cílem xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx původce xxxxx hniloby.

(2) Podle xxxxxxxx xxxxxxxxx podle xxxxxxxx 1 Xxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx za xxxxxxxx, xxxxxxx rozsah xxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx podle §5 xxxx. 1 xxxx. x), b) x x).

§7

Opatření xxxxx šíření xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

(1) Xxxxx v xxxxxxx x §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx podle §76 xxxx. 2 xxxxxx:

x) xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x) xxxxx xxx sázena x xxx xxxxxxxx Xxxxxx se x xx naloží způsobem xxxxxxxx v xxxx 1 přílohy č. 4, pokud Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx a xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, stanovené x příloze č. 5, v případě xxxxxxxxxxxx zpracování této xxxxxx,

x) xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §5 odst. 1 xxxx. b) xxx xxx použita xxx xxxxxxxx Ústavu způsobem xxxxxxxx x xxxx 2, popřípadě 3 přílohy č. 4, xxxxx Xxxxx xxxxxx xxxxx, xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx odpadů, xxxxxxxxx x příloze č. 5, x xxxxxxx průmyslového xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx, x xxxxx xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx testování xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxx §6 xxxxxxxx jako xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x),

x) xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx prostředky, xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxx včetně xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxx. x) xxxx xxxxxxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 písm. x), xx xxx zničí xxxx xxxxxxx očistě x xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x příloze č. 6 s xxx, že xx xxxxxxxxx očisty x xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x předměty xx xxxxxxxx xxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx,

x) x xxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, vymezených podle §5 odst. 1 xxxx. x), xxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 2 xxxx. x), xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx výskytu původce xxxxxxxxxxxxxx x bodě 4 přílohy č. 4 x x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx hnědé hniloby x xxxx 5 přílohy č. 4.

(2) Ústav může xxxxxxx xxxxx §11 xxxx. 1 xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxx 1, xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxxx. Xxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 písm. x) xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx x v xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxx Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x Komisi xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx dotčených povinných xxxx, registrovaných xxxxx §12 xxxx. 1 xxxxxx.

(3) Ústav xxxxx xxxxx §76 xxxx. 4 xxxx. b) xxxxxx xxxxxxxxx rostlinolékařská xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 1 x xxxxxxxx 2 po xxxxxx xxxxxxx a xx uplynutí xxxx xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx.

(4) Xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxxxxxx xxxxx xxxxxxx je x xxxxxxx s §7 odst. 1 xxxxxx zakázáno x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx, šlechtitelským xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx Ústav xxxxx §8 xxxx. 1 xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx opatření xxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx.

§8

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu²⁾ xxxxxxxx

(1) Rozmnožovací xxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx na xxxxx Xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx na xxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx x rámci xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx §3 odst. 2, x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx 2 x x xxxxxxx s §3 xxxx. 8 x 9, a xxxxxxx prostým původce xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxx.

(2) Xxxxxxxxx xxxxx odstavce 1 xx v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx podrobí

a) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x České xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, a xxxx

x) xxxxx xxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx v partii xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ bramboru xxxxxxx x Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx výskyt xxxxxxx hnědé xxxxxxx, xxx

1. rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx⁴⁾ bramboru x xxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx všech xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx potvrzené xxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx souvislost, xxxx

2. xxxxxxxxxxxxxxx vzorky xxxxx xxxxxx základního xxxxxxxxxxxxxx materiálu bramboru xxxx předstupňů x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx⁴⁾ x xxxxxxxxx, x nichž xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx

x) rostliny xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx⁴⁾ xxxx reprezentativní xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx předstupňů, xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxx xxxxxxxx k xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx výskyt xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx původce xxxxx xxxxxxx xxxxx x posledním xxxxxxxxx xxxxxxxxxx roce xxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx²⁾ xxxxxxxx původem x Xxxxx xxxxxxxxx.

§9

Xxxxxxxx

Xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx č. 1 x xxxxxxxx č. 331/2004 Sb.

A. METODY XXXXXXXX, DETEKCE X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX KROUŽKOVITOSTI

Předložené xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx postupy, které xxxx součástí:

i) xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x hlízách xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx,

xx) xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx.

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxx přípravu xxxxxxxxxxx x kontrolních materiálů xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx a xxxxxxxx protokolů, je x dodatku č. 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx zjištění xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x zahrnují xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx nutné xxxxxxxx za xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx zařízením na xxxxxxxxxxxx odpadů a xx podmínek příslušných xxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx musí zajistit xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx úrovní Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx stanovené xxxxx xxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx příprava xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx x jejich xxxxxxxxxx x všechna xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Xxxx xxx xxxxxxxxx standardní řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, zvláště xxx označování x x dokumentaci.

Podezření z xxxxxxx, jak je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, jak je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx xx první xxxxxxxxxxxx xxxx (XX nebo XXX/XXXX) pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti x xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xxxxx xx i xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxx je xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx, pak xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx.

X xxxx xxxxxx je xxxxxxxxx XX xxxx xxxxx §4 odst. 1 definován xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx IF xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx testem (PCR/FISH).

Potvrzená xxxxxxxxxx vyžaduje xxxxxxx x identifikaci čisté xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx patogenity.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x x rostlinách xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky bakteriální xxxxxxxxxxxxxx

Xxxxxx testování xx xxxxx xxx xxxxx x xxxxxxxx bramboru x xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxx typickými xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva xx xxxxxxxxxxxxx médiu x v případě xxxxxxxxxxx výsledku xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

(1) Xxxxx xxxxxxxx xx x xxxxxx 2.

(2) Xxxxxx xxxxx xxxx:

- XX xxxx (xxxxx 4),

- XXX xxxx (xxxxx 6),

- FISH xxxx (xxxxx 5).

(3) Xxxxxx xxxxxxx patogena x xxxxxxxxxxx materiálu x xxxxxxxxx příznaky xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxx komplikovaná, xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx infekce se xxxxxx xxxxxxx. Saprofytické xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xx infikovaném pletivu, xxxxx přerůst xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx i xxxxxxxxxx xxxxx, xxxxxxx MTNA (xxxxx 8) xxxx xxxxxxx (xxxxx 7).

(4) Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx x xxxxxx 8.

(5) Xxxxx xx izolační xxxxxxx xxxxxxxxx, xxx příznaky xxxxxxx xxxx xxxxxxx, xxxx xxx izolace xxxxxxxxx znovu.

(6) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx dosáhne xx xxxxxxx testů xxxxxxxxx v xxxxxx 9.

(7) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx popsána x xxxxxx 10.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

Xxxxxx testování je xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx. Pozitivní xxxxxxxx z xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx, x xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx být xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, a xxxxxxxx, v xxxxxxx xxxxxxx typických kolonií, xxxxxxxxxx, že xxxxx xxxxxxx je Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx výsledek xxxxx xxxxxxx screeningového xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx k xxxx, aby xxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx x izolační xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx práh 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

(1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx vzorku xx 200 xxxx, ačkoli xxxxxx xxx použít x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx není k xxxxxxxxx.

(2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.1.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx principech xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxxxx. Provede xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xx pro xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx ještě jeden xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx je xxxxx xxxx xxxxx test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

(4) Xxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx (XX).

Xxx vyšetření XX xx xxxx použije xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx přesnost (xxx xxxxx 4).

(5) PCR xxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx (xxx xxxxx 6).

(6) FISH xxxx.

Xxxxxxx se validovaná xxxxxxx a xxxxxxxxx (xxx oddíl 5).

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx může xxx v mnoha xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx přímou xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx použití XXXX xxxxx xxxx XXX-88 xxxxx x xxxxxx resuspendované pelety 1/100. Xxxxxxx kolonie xxx xxxxxx xxxxx 3-10 xxx xx xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx. Xxx úplné xxxxxxx xxxxxxxxxx test xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x pupkové xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx x xxxxx mohou xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx, musí xxx xxxxxxx provedena x xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx (viz xxxxx 8).

(8) Biotest xx xxxxxxx k xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxx bramborových xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xxxxxxxxx). Xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx tuto xxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx XXXX nebo XXX-88 médiu xxxxxxxxxxxxx xxxxx test narušovat xxxxxxx (xxx oddíl 7).

(9) Xxxxxxx morfologie xxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(10) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx selhat z xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pozitivní, xxx xxxxxxxx testy xxxxxxxxx, opakují xx xxxxxxxx testy xx xxxxxx pelety nebo xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxx konce hlíz xxxxxxxx xxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxx.

(11) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx použitím xxxxx popsaných x xxxxxx 9.

(12) Xxxx xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

1.3. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx bakteriální kroužkovitosti xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx

(1) Xxxxxxxxxx velikosti xxxxxx - viz xxxxx 3.2.

(2) Xxxxxx extrakce x xxxxxxxxxxx patogena xxxx popsány v xxxxxx 3.2.

(3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se xxxxxxx jeden xxxxxxxxxxxx xxxx. Pokud je xxxxx xxxx negativní, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. X xxxxxxx, že je xxxxx xxxx pozitivní, xx pro xxxxxxx xxxxxxx pozitivního výsledku xxxxxxxx provedení xxxxxxx xxxx xxxx screeningových xxxxx xxxxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx xxxx další test xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxx nejsou xxxxx.

(4) Xxxxxxxxxx izolační xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxx 8.

(5) XX xxxx xx popsán x xxxxxx 4.

(6) XXX xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.

(7) XXXX xxxx je xxxxxx x xxxxxx 5.

(8) Biotest xx xxxxxx x oddílu 7.

(9) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx testů xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx x x xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx test xxxxxxx xxxxxx.

(10) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxxxxx, u xxxxxxx xx xxxxxxxxx, xx xx xxxxx x Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx pomocí xxxxx xxxxxxxxx v oddílu 9.

(11) Test xxxxxxxxxx xx popsán x xxxxxx 10.

2. Vizuální xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx

2.1. Xxxxxxxx xxxxxxxx

X xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx poli xxxxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxx xx na xxxxx xxxxxx. Xxxxx toho xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx se xxxxxx x xxxxxxxx jiných xxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Proto xxxxx být xxxxxxxx xxx kontrole na xxxx snadno přehlédnuty. Xxxxxxxx vadnutí jsou xxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx hnědé hniloby; xxxxxxx xx obvykle xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxx. Xxxxx infikované xxxxx xxxxx x xxxx infekci xxxxxx xxxxxx, i xxxx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx. Xxx xxxxxxxx neobvykle xxxxxxxxx listy. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx, xxxxx xx oranžové xxxxxxxxxxx xxxxxx. Infikované xxxxxxx xxxxxx, xxxxx x xxxxxxx xxxxxx mohou xxxxxxxxxx odumřít. Xxxxx xxxx xxxxx a xxxxx xxxxx menší. Xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx. Barevné xxxxxx xxxx příznaků xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

2.2. Xxxxx bramboru

Nejranějšími xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx bez xxxxxxx x xxxxx cévního xxxxxxx, xxxxxxx blízko xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx na xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxx nepatrně xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx. Xxxxxx dobře xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx žlutavé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxx, xxx při xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxx xxxxxxx xxxxxxxx hmoty. Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Vodivá xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx x xxxxx xxxxxx podobné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxx tyto xxxxxxxx omezeny xx xxxxx xxxx prstence, xxxxxx se vyskytovat xxx blízko xxxxxxx xxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiv: vnější xxxxxx část xx xxxx oddělit od xxxxxxx xxxxxx xxxxx. X xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx se objevují xx xxxxxxx hlízy xxxxxxxxx, xxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. V xxxxxxxx xxxx xx x Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx kůra hnije x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx, čímž xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx infekce xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx být obtížné, xx-xx nemožné, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx kroužkovitosti xx xxxxxx hnilob xxxxxxxx. Xxxxx xxxx x xxxxxxxx příznaky. Xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/ Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxx

3.1. Xxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx je 200 hlíz xx 1 test. xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Větší xxxxxxxx xxxx ve xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx výsledků. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxxxx x pro xxxxxx x méně xxx 200 hlízami, xxxxx xx k xxxxxxxxx menší množství xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorků x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxx také xxx xxxxxxxx xxxxxxx hnědé xxxxxxx, Ralstonia xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx:

Xxxxx xx omyjí. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx prostředky (x xxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx xxx proveden XXX xxxx, pro xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx, xx xx xx xxxxxx příliš xxxxxx x xxxxxxxx se xx provádět XXX xxxx nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1. Xxxxxx čistého x dezinfikovaného xxxxxxxx xxxx xxxxx či xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx pupkovém xxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx xx vyříznou konické xxxxxxxx vodivého pletiva x pupkových xxxxx xxxxxxx. Xx xxxxxxx xx omezí nadbytečná xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx svazky. Po xxxxxxxx xxxx být xxxxxxxx z pupkových xxxxx xxxxxxxxxx xx 24 xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxx -20 °X xx dobu xxxxxxx xxxx týdnů.

Všechny xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx bakteriální xxxxxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx x testují xx xxxxxxxx.

Xxxxx jsou při xxxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx zjištěny xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx hlízy xx xxxxxxxx konci. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx xxxxxxx x uchovávají xx x karanténě xxx xxxxxxx 4 - 10 °X xx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxx. Xxxxxxx hlízy xx vzorku xx xxxxxxxxxx xxxxx přílohy č. 2.

3.1.2. Xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx se shromáždí x xxxxxxxxxxx nádobách xx jedno xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx x/xxxx utěsnitelné (v xxxxxxx, xx xxxx xxxxxx znovu používány, xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x dezinfikovány xxxxxxxxxx s obsahem xxxxxx). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx výkrojky z xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxx, xxxxxxxxxx xx x xxxxxx bez xxxxxxx pufru, v xxxxxx po xxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx xxx pokojové xxxxxxx xxxxxxxxx 24 xxxxx. Schnutí a xxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx v xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx přítomnosti xxxxxxxx způsobující xxxxxxxxxxxxx.

3.1.3. Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.:

x) xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxx xx x xxxxxxx třepačce (50-100 xx/xxx) po xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx nižší xxx 24 °C xxxx xx xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx;

xxxx

x) xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x dostatečným množstvím (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 3), xxx x xxxxxx xxxx rozdrcením x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx nebezpečí xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxx aerosolu xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xxxx být použita xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx) x nádoby. Xxxxx xx xxx xxxxxx PCR xxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxxx nebo mlecí xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xx jedno použití x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.4. Xxxxxxxxx xx supernatant. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxx 180 x xx xxxx 10 xxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X) xxxx xxxxxxxx filtrací (40-100µx), xxxxx xx omyje xxxxxxxxx (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3).

3.1.5. Xxxxxxxxxxx xxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxx 7000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx dobu 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10°X x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, xxxx xx xx xxxxxxxxx xxxxxx.

3.1.6. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1,5 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3). Použije se 500 µl xxx xxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus, 500 µl xxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10-25 % (x/x) x 500 µ1 xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x ke zbývající xxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xx vířením a xxxxx při xxxxxxx -16 xx -24°X (xxxxx) xxxx při xxxxxxx -68 xx -86°X (xxxxxx). Extrakty xx xxxxx testování xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10°X.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx se xxxxxxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.7. Xx xxxxxxxx xxxxx, xxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxx x xxx sklíčka xx XX xxxxx x xxxxxxx xxxxx.

3.2. Rostliny xxxxxxxx

Xxxxxxxx.

Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx kombinovaných xxxxxx. Xxxxxx xx xxxxxx pro xxxxxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxxx xxxxxx. (Xxxxx xx xxxxxxx podrobné xxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx vyšetřování.)

3.2.1 Xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxx 1-2 xx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxx xxxx.

Xxxxx stonků xx krátce xxxxxxxxxxx xxxxxxxx 70 %, xxxxxxxx osuší xxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

3.2.2. Části stonků xx zpracují xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (přibližně 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) a xxxxxxx x rotační xxxxxxxx (50-100 xx/xxx) xx xxxx 4 xxxxx xxx xxxxxxx xxxxx xxx 24 °X xxxx po xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxxx xxxxxxxxxx sáčku x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 3) xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xx není xxxxx, xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxx 72 hodin xxxx maximálně 24 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

3.2.3. Xx usazení, xxxxx má trvat 15 minut, xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

3.2.4 Další xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx ji xxxxxxxxx xxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx x oddílu 3.1.3.-3.1.6.

3.2.5 Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xx 2 xxxxxx xxxxx, Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx 4-10 °C x druhá xxxxxxxx xx xxxxxxxx x 10-25 % (x/x) xxxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx), xxxxx xx nutné další xxxxxxxxx.

4. lF test

XXXXXXX

Xxxxxxxxxx se xxxxxx xX test jako xxxxxx screeningový test, xxxxxxx byla prokázána xxxx schopnost xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx práhů.

Použije-li xx xxxx hlavní screeningový xxxx x xxxx xxxxxxxx je pozitivní, xxxx být jako xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx test XXX xxxx XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xxxx xxxxxxxx je xxxxxxxxx, xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx je xX xxxx používán xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx, používá xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx lF xxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být další xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx přesnější, xxx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx - XXXX33113 (XXXXX 2137) xxxx XXXXX 2140. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx titr xxx každou xxxxx xxxx xxxxxxxxxx. Titr xx stanoven xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dochází x xxxxxxxxx reakci při xxxxxxxxx xxxxxxxx obsahující 105 xx 106 xxxxx xx 1 xx homologického xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx a xxx použití vhodného xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) podle doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx polyklonální xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx měly xxx XX titr xxxxxxx 1:2000. Xxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxxx používat x xxxxxxxxx xxxxxx (WD) x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xx titru. Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx. eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).

Test xx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx vzorkových xxxxxxxxxx. X případě xxxxxxx může být xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx při - 68 xx - 86 °X x xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxx ze xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4), xxxxxxxxx odstředěním xx xxxx 15 xxxxx xxx 7 000 x x xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx pufru. Xx xxxxx xxxx nutné, xxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx plamenem (xxx 4.2).

Xxxxxxxx se oddělená xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x jiným xxxxxxxxxxx xxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx, suspendovaným xx xxxxxx z brambor xxxxx dodatku 2 x xxxxxxxxx x pufru.

Pletivo xxxxxxxxxx přirozenou xxxxxx (xxxxxxxxxx lyofilizací xxxx xxxxxxxxx při teplotě -16 xx -24 °X) xx xx xxxx podle xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx sklíčku.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx testovány x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx sklíčka x xxxx xxxxxx, xxxxxxx x 10 xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxx xxxxxx.

4.1. Xxxxxxx xx test se xxxxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Pro xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx se měřené xxxxxxxxxx xxxxxxxx (pro xxxxxx x průměru 6 xx xx xxxxxx 15 µl - pro větší xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bramborové xxxxxx 1/100 xx xxxxxxx xxxxxx. Následně xx xxxxxxxxxx stejné xxxxxxxx xxxxxxxxx pelety (1/1) xx zbývajících xxxxxx x xxxx. Xxxxxx xxxx lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx podle xxxxxxx 1.

x) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxx (1/10 x 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxx xxxxxx o xxxxxxx 6 mm je xxxxxx 15 µx - xxx xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx) xxxxxxxxxxxxxx pelety 1/100 x xxxxxxx roztoku xx xxxx xxxxxx. Xxxxxx řadu lze xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx pro xxxxx xxxxxx xxxxx obrázku. 2.

4.2. Xxxxxx xx xxxxx při pokojové xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx sklíčko xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), nad xxxxxxxx nebo xxxxxx 95 % etanolu xxxx podle zvláštních xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxx fixovaná sklíčka xxxx dalším xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx boxu po xx xxxxx xxxxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx).

4.3. Xxxxxx XX xxxxx:

x) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx x XX xxxxx. X první xxxxx by xxx xxx xxxx 1/2 (X/2), v xxxxxxxxx xxxx 1/4 (T/4), xxxx 1/2 (X/2), xxxx (X) x xxxxxxxxxxx xxxx (2T).

b) Xxxxx přípravy xxxxxxx xx test x xxxxxx 4.1 xxxx. x):

Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx (WD) xxxxxxxxxx x XX xxxxx. Xxxxxxxx ředění xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Příprava xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxxxx 4.1. xxxx. x) x xxxxxx 4.3. písm. x)

4.3.1. Xxxxxxxx sklíčka xx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx konkrétní xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

4.3.2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx na xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °C).

4.3.3. Xxxxxxxx se xxxxx xx xxxxx podložních xxxxxxx x tato xx pečlivě xxxxxxxxx xxxxxx IF. Umyjí xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 minut x pufru IF Xxxxx (dodatek 3) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Xx třeba xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, x xxxxxxx odstranit xxxxxxxxxxx vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4.3.4. Sklíčka xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací okénka xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxxx konjugátu xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

4.3.5. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

4.3.6. Xxxxx xxxxxxxxx xx setřesou xx xxxxxxx x tato xx xxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxx (4.3.3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

4.3.7. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx 0,1X fosfátového pufru x xxxxxxxxxx (dodatek 3) xxxx komerční xxxxx xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x přiloží xxxxx xxxxxxx.

4.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

4.4.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xx prohlížejí xxxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopem x xxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx XXXX xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxx 500x xx 1000x. Xxxxxxxx se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx. U xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxx počtem xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx zkontroluje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující a xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění. Xxxxx je xxxxxxxxx xxxxxxxx, musí být xxxx IF xxxxxxxx (xxxxx 4).

4.4.2. Pozorují xx jasně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita fluorescence xxxx xxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx kmenem xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x xxxxx.

Xxx podezření x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxxx. To xx xxxx xxxx, xxxx xxxxxxx xxxxxxx ve xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx kontaminaci xxxxx nebo při xxxxxxxx pozitivních xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

4.4.3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx. X xxxxxxxx z pupkové xxxxx bramboru x xxxxx xxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx morfologií x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx bakterie x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

4.4.4. Xxxxx xx x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x morfologií v xxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx protilátek podle xxxxxx 4.3.

4.4.5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx IF testu:

a) Xxx zjištění jasně xxxxxxxxxxxxxxx buněk x xxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxxx průměrný xxxxx xxxxxxxxx xxxxx x 1 mikroskopickém xxxx x vypočítá xxxxx xxxxxxxxx xxxxx na 1 xx resuspendované xxxxxx (dodatek 4).

Výsledek IF xx pozitivní x xxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety nejméně 5x10³. Vzorek je xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx xxxxxxx xxxxx testování.

b) Xxxxxxxx IF testu xx xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5x10³ xxxxx xx 1 xx resuspendované xxxxxx x xxxxxx xx xxxxxxxx xx negativní. Xxxxx testování xxxx xxxxx.

5. Xxxx XXXX

XXXXXXX

Xxxx xx xxxx první xxxxxxxxxxxx xxxx použije XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX xxxx. Xxxx xx FISH xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xx validované xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění xxxxxxx 10³-10⁴ buněk Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xx xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx byly xxxxxx testovány s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx xxx být xxxxx xxxxx xxxxxxxx x čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, ale xx xxxxx xxx úspěšně xxxxxxx s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -16 xx -24 xxxx -68 xx -86 °C.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na xx (xxxx. kmen XXXXX 4053 xxxx XX 406) x 0,01 X fosfátového xxxxx (XX) x 3-5 xxxxx xxxxxxx (xxxxxxxx viz dodatek 2). Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky homologického xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v bramborovém xxxxxxxx podle dodatku 2.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx značených XXXX poskytuje xxxxxxxx xxxxxxx hybridizace, xxxxxxx xxxxxx všechny xxxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx x vzorků.

5.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

5.1.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7)

5.1.2. Xxxxxxxxxx se 100 µx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a odstřeďujte xx xxxx 8 xxxxx xx 7 000 x.

5.1.3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x rozpustí xx xxxxxx x 500 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx se x xxxxxxxx se xxxx xxx při xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx 96 % xxxxxx. Pro xxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx 5.1.2. v 50 µx 0,01 X PB a 50 µl 96 % xxxxxxx. Xxxxxxxx xx protřepáním x xxxxxxxx se xxx xxxxxxx 4 °X xx xxxx 30-60 xxxxx.

5.1.4. Xxxxxxxxxx xx xx xxxx 8 xxxxx xx 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx v 75 µl 0,01 X PB (xxx dodatek 3).

5.1.5. Xxxxx xx 16 µl xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 okénkové xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 3, xxxxxxx xx xxxxxxx 2 xxxxx xxxxxx xx jedno xxxxxxx, x xx xxxxxxxx x xxxxxxx 1:100 s použitím 10 µx (v 0,01 X PB). Xxxxxxxxx roztok vzorku (49 µl) xxxx xxx xxxxxx xxx xxxxxxx -20 °C xx xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx FISH xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx odstředěním, xxxxx xx stejné xxxxxxxx 0,01 X XX x xxxxxxx se xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 3. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx FISH

5.1.6. Sklíčka xx xxxxxxx uschnout xx xxxxxxx (xxxx xxxxxxxx sklíček při xxxxxxx 37 °C) x fixují se xxx xxxxxxxx.

X xxxx xxxx je xxxxxxx xxxxxx přerušit a xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx xxx. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx chráněna před xxxxxxx x v xxxxx xxx pokojové xxxxxxx.

5.2. Předhybridizace x xxxxxxxxxxx

5.2.1. Připraví xx xxxxxx xxxxxxxx obsahující 10 xx xxxxxxxx (Xxxxx X-6876) x 10 xx xxxxx (100 xX Tris-HCI, 50 xX XXXX, xX 8,0). Tento xxxxxx lze xxxxxxxxx, xxx měl by xx pouze jednou xxxxxxx a xxxxxx xxxxxx. Xxxxx vzorek xx dobře xxxxxxx xxxxxxxxx 50 µl xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx po dobu 10 minut xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxx, x xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx 50 µl xxxxxxxxxx X 40-400 µx.xx^-1 x pufru (20 xX Tris-HCl, 2 xX XxXx₂, xX 7,4) do xxxxx xxxxx x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx.

5.2.2. Buňky xx xxxx ve xxxxxxxxxxxx xxxxxxx 50 %, 80 % a 96 % xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx 1 minuty. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxx sklíček.

5.2.3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx zakrytím xxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx tkaninou xxxx filtračním papírem xxxxxxxxx x 1x xxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxxx xx přeinkubuje x xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 55 °X xx dobu xxxxxxx 10 xxxxx.

5.2.4. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 7) x 45 µx xx 1 xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx xx dobu 5 xxxxx xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.5. Xxxxxxx se xxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 45 °X x do xxxxxxx ze 4 xxxxxx xx xxxxxxx / xxxxxxxxx xx xxxxx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5.2.6. Každé xxxxxxx se xxxxxxxx 2 xxxxxxx xxxxxxx (24 x 24 xx) xxx, xxx xxx xx nevnikl xxxxxx. Sklíčka xx xxxxxx do předehřáté xxxxx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xx 14 - 18 h x peci při xxxxxxx 55 °X x xxxxx.

5.2.7. Připraví xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 x xxxxxxxx xxxx (Ultra xxxx xxxxx = XX), 1 x 1x hybmixu (334 xx 3x xxxxxx x 666 xx XXX) a 1 x 1/2 x xxxxxxx (167 ml 3x xxxxxx x 833 xx UPW). Xxxxx x nich xx xxxxxxxxxxx ve xxxxx lázni xxx xxxxxxx 55 °X.

5.2.8. Xxxxxx se xxxxx xxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xx držáku sklíček.

5.2.9. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx s 1x hybmixem xxx xxxxxxx 55 °C.

5.2.10. Xxxxx xxxxxxx se xxxxxxxx xx promývacího xxxxxxx 1/2 xxxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx dalších 15 xxxxx.

5.2.11. Sklíčka xx xxxxxx xxxxxx do XXX x xxxxxx xx filtrační xxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx zakrytím xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx krycího xxxxxxx (xxxx. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, CA, XXX xxxx podobný) xx xxxxx jamky a xxxx xxxxxxx xx xxxxxxx velkým xxxxxx xxxxxxxx (24 x 60 xx).

5.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

5.3.1. Xxxxxxx xx prohlížejí ihned x xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx mikroskopii xx xxxxxxxxx 630x xxxx 1&xxxx;000x xxx xxxxxxxx xxxxxx. X xxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx eubakteriální xxxxx (xxxxxx xxxxxxx gramnegativních xxxxx) ve xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx zeleně. Xxxxxxxx filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx obarvené Cy3 xxxx fluorescenčně xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být xxxxx fluoreskující x xxxxx zbarveny. Test XXXX (xxxxx 9.4) xxxx být xxxxxxxxx, xxxxx je xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxx napříč xxxxx xxxxxxx v xxxxxxx xxxxxx a kolem xxxxxx. U vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx nebo málo xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

5.3.2. Xxxxxxx se xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxxx charakteristickou xxx Clavibacter michiganensis xxxxx. sepedonicus v xxxxxxxx testovacích xxxxxxx (xxx internetová xxxxxxx xxxx:/xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx). Intenzita xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxx lepší xxx x pozitivního kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx, se xxxxxxx x xxxxx.

5.3.3. Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx musí být xxxx zopakován. Při xxxxxxxxx x jakékoli xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xx xx xxxx stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

5.3.4. Xxxxxxxx několik xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx XXXX xxxxx. X xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx stonku xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx a křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxx x XX xxxxx.

5.3.5. X xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx, viz 5.3.2.

5.3.6. Xxxxxxxxxxxx výsledku xxxxx XXXX:

x) Xxxxxxxx XXXX xxxxx jsou xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx jasně zeleně xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx pro Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx jasně xxxxxxx fluoreskující buňky xxxxxxxxxx ve xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx a xxxxxx pozorovány x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou morfologií, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 mikroskopickém xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx buněk x 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4). Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx za pravděpodobně xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, které xxxxxxxx xxxx než 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx považují za xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxxx FISH xxxxx je negativní, xxxxx při použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx jasně červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxxx x morfologií xxxxxxxx pro Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx při xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx x pozitivních xxxxxxxxxx.

6. PCR test

PRINCIP

Použije-li xx XXX xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx druhý povinný xxxxxxxxxxxx test xxxxxxxx XX test. Pokud xx PCR xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test x xx pozitivní, xx xxx dokončení xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Využití xxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx doporučuje xxx xxxxx , je-li xxxxxxxxxx specializovaná xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx mělo xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx na 1 xx přidaných xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxxx maximální xxxxxxxxxx a přesnosti xx všech xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx kontrolou.

Je xxxxx použít xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx zabránilo kontaminaci xxxxxx cílovou DNA. XXX test by xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx na molekulární xxxxxxxx, aby xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx DNA.

S xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (x xxxxxxx xxxxxxxx XXX x XXX) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx xxxx s xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx xxxxx, xxxxxx xxxxx x xxxxxxx XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx testován xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx s xxxxxxxxxx xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x DNA xx xxxxxx,

- reakční xxxx XXX.

Xxxx by xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontroly:

- xxxxxxxxx xxxxx resuspendovaných xxxxx, x xxxx byl xxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2),

- xxxxxxxx 10⁶ buněk na 1 xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. XXXXX 2140 xxxx XXXXX 4053),

- xxxxx xxxxx xxxxxx při xxxxxxxxx XXX xxxxx xxxx DNA extrahovanou x xxxxxxxxxxx kontrolních xxxxxx.

Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx kontaminaci, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x odděleném xxxxxxxxx xx vzorků, které xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx xxxx xxx pokud možno xxx zeminy. X xxxxxxx použití XXX xxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxx extrakty x xxxxxxx xxxxxxx.

6.1 Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxx se xxxx popsané pozitivní x xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx stejným xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

X xxxxxxxxx cílové XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxxx různé xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x jiných enzymatických xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxx metoda xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x validovanou xxxxxxx PCR, xxxxxxxx x dodatku. 6.

6.1.

x) Xxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx lýzového xxxxx (100 xX XxXx, 10 mM Tris-HCl [xX 8,0], 1 xX XXXX [xX 8,0]) xx mikrozkumavky x xxxxxx 1,5 xx.

2. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxxx xx vzorku x xxxxxx xx xx xxxxxxxxxx xxxx vodní xxxxx x teplotě 95 °X na xxxx 10 minut.

3. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xx 5 minut xx xxxx.

4. Přidá xx 80 µl xxxxxxxxx xxxxxxx lyzozymu (50 mg xxxxxxxx xx 1 ml x 10 xX Xxxx HCl, pH 8,0) x xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx 37 °C xx xxxx 30 minut.

5. Xxxxx xx 220 µx Xxxx XXXX xxxxxx X (Xxxxxxxxxx), xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx a inkubuje xx xxx teplotě 65 °X xx xxxx 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx Easy DNAR xxxxxx X (Xxxxxxxxxx)x xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxx poteče xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Přidá xx 500 µx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxx, xx xx xxxxxxxxx sníží a xxxx xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 x xx dobu 20 xxxxx xxx 4 °X xxx xxxxxxxx xxxx a xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxx xxxx xx xxxxx mikrozkumavky.

10. Xxxxx xx 1 xx 100 % xxxxxxx (-20 °X), xxxxxx xx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xx ledu po xxxx 10 minut.

11. Xxxxxxxx se xx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx xxx 4 °C x xxxxxxxx xx x pelety etanol.

12. Xxxxx se 500 µx 80 % xxxxxxx (-20 °X) x xxxxxxxx převracením xxxxxxxxxxxxx.

13. Xxxxxxxxxx xx xx 15&xxxx;000 g xx xxxx 10 xxxxx xxx 4°X, xxxxxx se xxxxxxx x odstraní xxxxxx.

14. Xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx v XXX xxxxx xxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx x 100 µl xxxxxxxx xxxx (XXX) x xxxxx stát xxxxxxx 20 xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

16. Skladuje xx při teplotě -20 °X xx xx upotřebení při XXX.

17. Xxxxxxxxx bílá xxxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxx XXX xx použije 5 µl xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx XXX.

6.1.

x) Jiné xxxxxx

Xxxx xxxxxx extrakce XXX xx xx xxxxx xxxxxx, pokud xx se prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx DNA x xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx stejně xxxxxxxxx.

6.2 PCR

6.2.1. Xxxxxxxx xx testované xxxxxx x xxxxxxxx pro XXX xxxxx validovaného xxxxxxxxx (dodatek 6). Připraví xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX (1:10 xx xxxxxxxx xxxx).

6.2.2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx reakční xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xxx nehrozí xxxxxxxxxxx, podle xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (dodatek 6). Xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx, která xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx XXX.

6.2.3. Xx xxxxxxxxxx PCR xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx 5 µx xxxxxxxx XXX xx 25 µx XXX reakce.

6.2.4. Xxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxxxxx sterilní xxxx XXX, xxxxx xxxx xxxxxxx xx xxxxx XXX xxxxxxx xxxxxx.

6.2.5. XXX mikrozkumavky se xxxxxx do xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x provede xx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX (dodatek 6)

6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

6.3.1. Xxxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxxx xx nejméně 12 µx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx DNA z xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) xx 2,0 % (x/x) xxxxxxxxxxx xxxx x Xxxxxxxxxx-XXXX (TAE) xxxxx (dodatek 6) při 5-8 X na xx. Xxxxxxx xx xxxxxx marker XXX, xxxx. 100 xx xxxxxx.

6.3.2. Xxxxxxxx xx xxxxxxx DNA xxxxxxxx x ethidium xxxxxxx (0,5 xx xx x) xx xxxx 30-45 xxxxx, xx xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pro zacházení x tímto xxxxxxxxx.

6.3.3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx se zdokumentuje.

6.3.4. X xxxxx nových xxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxx amplikonu XXX xxxxxxxxxx restrikční enzymové xxxxxxx ve zbývajícím xxxxxx xxxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxx při xxxxxxxxx xxxxxxx a xxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x agarózovém xxxx x pozoruje xx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentu xxx XX xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx ethidiumbromidem x xxxxxxxxx se x xxxxxxxxxx a štěpenou xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxx:

XXX xxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxxxxxx typický xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx zjištěn v xxxxx xxxxxx, ale xxx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (x případě xxxxxxxxxxx PCR s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx: druhý xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx být amplifikován x xxxxx vzorkem).

PCR xxxx xx xxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx očekávané velikosti x xxxxx (xxxxx xx xxxxxxxx), xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxx potvrzení pozitivního xxxxxxxx xxx dosáhnout xxxx opakováním testu x xxxxxx sadou XXX primerů (oddíl 9.3).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorku xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx ve xxxx, ale z xxxxxxxxx kontroly s Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX s interními xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxx reakce xxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx x xxxx xxxxxxxxx.

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx, pokud xxx očekávaný xxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxx více xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Xxxx xx xxxxx vejcoplodém

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx umožnit reprodukovatelné xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ jednotek Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 ml xxxxxxx x xxxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 2).

Nejvyšší xxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx však lze xxxxxxx xxxxxx i xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx xxxxxxx -68 xx -86 °X.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx růst Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx v případě xxxxxxxxxxxxx příznaků x xxxxxxxxx také xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test.

Pro xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx růstové podmínky.

Podrobnosti x pěstování xxxx xxxxxxx x Dodatku 8.

7.1. Xxxxxx xxxxx 3.1.5. xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx lilku xxxxxx x xxxx uvedených xxxxx (7.2, 7.3, 7.4). Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxx 2-3 xxxxx xx xxxxxxx rozvinutí xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxx využití xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx 15-25 lilků xx xxxxxx.

7.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx X

7.2.1. Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxx xxxxxxxxx x xxxxxxx 10 xx xx xxxxxx xxxx xxxxxxxx polystyrénu x vyhloubenou xxxxx x xxxxxxxxx 5 xx xxxxxxx, 10 xx xxxxx x 15 cm xxxxx). Xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxx xxxxxx x xxxx xxxxxx xxxxxxx sterilní xxxxxxxxx xxxxx. Rostlinu xx možno xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxx.

7.2.2. Xxxxxx skalpelu xx xxxxxxx mezi děložními xxxxxx x xxxxxx xxxxxx xxxxxx podélný xxxx xxxxx úhlopříčný xxx xxxxxx 0,5 xx 1,0 cm x hluboký xxxxxxxxx xxxx tři čtvrtiny xxxxxxx stonku.

7.2.3. Zářez xx přidrží otevřený xxxxxx xxxxxx čepele xxxxxxxx x nanese xx do xxx xxxxxxxx štětečkem na xxxx linky nebo xxxxxx malířským štětečkem xxxxxxxxx xx xxxxxx. Xxxxxx pelety xx xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

7.2.4. Xxx se překryje xxxxxxxx vazelínou xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx 2 ml.

7.3 Xxxxxxxxx xxxxxxx II

7.3.1. Xx stonek rostliny xxxxxx xxxxx xxxxx xx napipetuje xxxx xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxx xxxx xxxxx (xxxxxxxxx 5 xx 10 µx) xxxxxxxxxxxx xxxxxx.

7.3.2. Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx sešikmený xxxxx (x xxxx xxxxxxxxx 5°), xxxxxx 1,0 xx x xxxxxxx xxxxxxxxx xxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž x xxxxx xx xxxxx x místě xxxxx suspendované xxxxxx.

7.3.3. Xxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx.

7.4. Inokulace xxxxxxxx xxxxxxxxxx

7.4.1 Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx (xxxxxxx) xx xxxxxxxx xxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx nezalévají.

7.4.2 Xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx xx inokulují xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx stříkačky x xxxxxxxx xxxxxx (xx xxxx xxx 23 G). Xxxxxx xx xxxxxxx mezi xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx.

7.5. Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxx 5 xxxxxxx stejnou xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 nebo 7.4) xxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxx xx xx xxxxx x xxxxxxxx z xxxxxxxxx infikovaných xxxx xxxxxxxx.

7.6. Jako negativní xxxxxxxx xx inokuluje 5 xxxxxxx sterilním 0,05 X XXX xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx (7.2, 7.3 xxxx 7.4).

7.7. Xx xxxxxxxxx xx rostliny xxxxxxx xxxxxxxxx x karanténě xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx (dodatek 8) po xxxx xx 4 týdnů xxx teplotě 18-24 °X. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xx dostatečného xxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx (70-80%) a xxxxxxxx se xxx, xxx xxxxxxx k xxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxx kvůli xxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxx 30 °X x xxxxxxxxx xxxxxxx xx 21 °C. Xxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxx pro xxxxxxxxx x xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx komoře xx xxxxx oddělených xxxxxxxx, xxxxx při xxxxxxxxxx xxxxx se zajistí xxxxxx xxxxxxxx mezi xxxxxxxxx x xxxx. Xxxxx xxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxx, xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxxx xx věnuje xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx, aby xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx. Xx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx i růstové xxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx veškerým xxxxxx, xxxxxxx xx mohl xxxxxxxx xxxxxxxx z xxxxxxx vzorku xx xxxxx.

7.8. Xxxxxxxxxx po xxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Původce xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxx xxxxxxxxxxxx vadnutí listů, xxxxx xxxx začít xxxx okrajová xxxx xxxxxxxxxxx ochablost (ztráta xxxxxxx). Zvadlé xxxxxxx xxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx, xxx xxxx znekrotizováním xxxxxxxx. Xxxxxxx místa xxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx mastně xxxxxxx xxxxxx. Nekrotická xxxxxxx xxxxxx často xxxxx xxxxx okraj. Xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx; čím xxxx xxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx xxxxxx na xxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxx citlivější xxxx xxxxxx koncentracím xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxx rostliny, proto xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx a xxxx xxxxxx před xx. Vadnutí xxxxx xxxx způsobovat xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx z xxxxxx xxxxx. Patří k xxx Erwinia xxxxxxxxxx xxxxx. carotovora a X. xxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx, Phoma xxxxxx xxx. xxxxxxx, xxxxx x velké xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií. Xxxx xxxxxxx vadnutí xxx xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx listy nebo xxxx xxxxxxxx. Xxxx xx xxxx xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení: tento xxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxx spp

7.9. Xxxxxxx se xx xxxxx xxxxxxxxxxx objeví xxxxxxxx, xxxx by xxx provedena izolace xx xxxxxxx částí xxxxxxx xxxxxxxx listů xxxx xxxxxx rostlin. Xxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx otřením 70 % etanolem. Xxxxxxx xx test xX xxxx XXX xx xxxxx z xxxxx x izoluje xx xx xxxxxxx (xxxxxxxxxxx) médiu (xxx xxxxx 8). Xxxx xx také xxxxxxxxx Xxxxxxx barvení (dodatek 9). Xxxxx kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx patogenita (xxx xxxxx 9 x 10).

7.10. Xx xxxxxxxx okolností, zejména xxxxx nejsou růstové xxxxxxxx xxxxxxxxx, se xxxx xxxx, že Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx zůstává x xxxxxxxxxx xxxxx vejcoplodého xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx x po xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xx 4 xxxxx. Xxxxx xxxxxx xx 4 xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xx xxxx XX/XXX xx složeném xxxxxx xxxxx stonků x xxxxx 1 xx x každé xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx nad xxxxxx inokulace. Xxxxx xx test xxxxxxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx (xxxxxxxxxxxx) xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx 8. Čisté xxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 9 a 10).

8. Xxxxxxx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. xxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxx xxx potvrzena xxxxx xxxxx, je-li původce xxxxxxxxxxxxxx izolován a xxxxx identifikován. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx, xx xxxxx xx izolovat x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx napadení.

Mohou jej xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx saprofytické bakterie, x xxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxx xxxxx (3.1.5) xxxx xxxxxx (3.2). Xxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus xx xxxxx xx xxxxxxx selektivního média x xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx ze xxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxx xx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx částí xxxxxx x x xxxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxxxxxx příznaky xxxxxxxx, xxx x xxxxx byl xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx XX/XXX xxxxxxxxx xxxxxx (xxx oddíl 7.9). Xxxxx je xxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxx, xxxx xx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx 3.l.2.

Jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx suspenze 106 xxx xx xx Xxxxxxxxxxx michiganensis xxxxx. sepedonicus (např. XXXXX 4053 xxxx XX 406). Xxx xx xxxxxxxxx nebezpečí xxxxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxxxxx kontroly xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx být xxxxxxxxx.

Xxx xxxxxx xxxx připravenou xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xx se měla xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxx xxxx patogenu.

Kontrolní xxxxxxxx xx testuje xxxxxxx xxxxxxxx jako xxxxxx.

8.1. Roztěr na xxxxxxxxxx xxxxxx

8.1.1. Xx 100 µx xxxxxxxxx xxxxx xx vzorku xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pelety xxxx šťávy x xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x peletovém xxxxx (dodatek 3).

8.1.2. xxxxxxx x xxxxxxxx bramborové xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx saprofytů. Xxxxxxxx x tomu, že xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxx zůstává. Xxxxx se doporučuje xxxxxxxx 100 µx x xxxxxxx vzorku, x xxxxxx 1/100 xx 1/10&xxxx;000 xx XXXX xxxxxx nebo XXX-88 xxxxxx (dodatek 5), xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx k roztěrům (xxxxxxx) x xxxxxxxx xxxxxxx.

8.1.3. Xxxxx se xxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx 21-23 °X.

8.1.4. Xxxxxxxxx kontrola xxxxx zahrnuje xxxxxxxxx x kontrolními miskami x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx podobných Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxxx dnech, x xxxxxx xxxxxxxxx po 5,7 a 10 xxxxx.

8.2. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx kolonií podobných Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx xxx inokulaci xxxxx xxxxxxxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx by xx xxxx xxxxxxxx xx XXX médiu; xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxx xx se měly xxxxxxx dříve, xxx xxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx, xx. xxxxxxx xx 3-5 dnech.

8.2.1. Xxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx (složení xxxxxxx x dodatku 5):

- xxxxx xxxxxxxxxx xxxx (pouze xxx subkultury),

- xxxxxxxxx xxxxxx glukosový xxxx,

- xxxx x kvasničného xxxxxxxx x minerálními xxxxxx.

Xxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx 21-24 °C xx dobu xxxxxxxxx 10 xxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx pomalu x xxxxxxx xxxxxxx kolonie xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx hlavičky, xxxxxxxxx, smetanově xxxxxxxx.

8.2.2. Xxxxxxxx se provede xxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx. X xxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Typické xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxx slonoviny, xxxxx xxxxx, xxxxxxxx, xxxxxx, xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx, slizovitě xxxxxx, x xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx mají x xxxxxxx 1 - 3 xx.

Xxxxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9) xxxx xxxxxx vybrat xxxxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx.

8.2.3 Podezřelé kultury xx xxxxxxxxxxxx (viz xxxxx 9) a xxxxxxx se zkouška xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 10).

9. Xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx se identifikují xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxx xxxxx provedený xxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxx.

9.1. Xxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxx xx xx xxxx xxxxxxxxx xxx 21 °X x po xxxxx dnech xx xxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx nedošlo k xxxxxxx xxxxx, inkubuje xx xx xxxx xxxxxxx 20 dní.

Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx známým xxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus. Nutriční x xxxxxxxxxxxx testy xx xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xx subkultur živného xxxxx. Morfologická xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx-xxxxxxxxxxx (O/F) xxxxxxx xxxx slabě xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx -

Xxxxxxxx ureázy -

Xxxxxx X₂X -

Xxxxxx indolu -

Xxxxxxxxx xxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx - xxxx xxxxx

Xxxx při 37 °X -

Xxxx x 7% NaCI -

Hydrolýza xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx +

Xxxxxx kyseliny z:

- xxxxxxxxx -

- xxxxxxx - xxxx xxxxx

- xxxxxxxx -

- xxxxxxxx -

Xxxxxxx xxxxxxx (dodatek 9)

9.2. xX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx/xx x xxxxx na xX (dodatek 3).

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xX postup (xxxxx 4).

x) Pozitivního xxxxxxxx lF xxxxx xx xxxxxxxx, jestliže xX titr kultury xxxxxxxx titru xxxxxxxxx xxxxxxxx.

9.3. XXX xxxx

x) Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx ve xxxxxxxx xxxx (XXX)

x) Xxxxxxx se 100 µx suspenze buněk x uzavřených xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx bloku xxxx xxxxx vodní xxxxx xxx xxxxxxx 100 °C po xxxx 4 minut. X xxxxxxx xxxxxxx xx xxxx lýza xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XxXX xx xxxxxxx xxxxxxxxxxx 0,05 X. Xxxxxx xxx xxxxx xxxxxx xxx teplotě -16 xx -24 °X xx xx xxxxxxx.

x) Xxx xxxxxxxxxxx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx amplikonů xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx XXX (např. Pastrik, 2000; viz dodatek 4; Li x xx Xxxx, 1995; Xxxxx x xxx., 1997; Xxxxxxx x Xxxxxx, 1999; Xxxxxx a kol., 1999).

x) Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, pokud xxxx xxxxxxxxx PCR xxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xxxxxxx mnohotvárnost xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

9.4. XXXX xxxx

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx x XXX.

x) Xxxxxxx xx postup XXXX (xxxxx 5)

x) Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxx-xx dosaženy xxxxxx reakce xxxxxxx x pozitivní xxxxxxxx.

9.5. Xxxxxxx xxxxxxxx kyselin (XXX)

x) Kultura xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Oxoid) xx xxxx 72 xxxxx xxx xxxxxxx 21 °X (+/- 1°X).

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXX (Xxxxx, 1991; Stead, 1992).

x) Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, pokud xx xxxxxx podezřelé kultury xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 15:1 Xxxxxxx X, 15:0 xxx, 15:0 Xxxxxxx, 16:0 xxx, 16:0 x 17:0 Xxxxxxx jasně svědčí x přítomnosti Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxx xxxx xxxx Xxxxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxxxx x Xxxxxxxxxxx xxxx obsahují xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxx, xxx 15:1 Xxxxxxx X xx xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxx xxxxxxxxx xx xxxxx Clavibacter xxx. x rozmezí 1-5 %. X Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx se hodnota xxxxxxx pohybuje xxxxx 5 %.

9.6. BOX-PCR

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx xx v XXX.

x) Provede xx xxxx postupem xxxxx Xxxxx x xxx., 2001.

10. Test xxxxxxxxxx

Xxx xxxxxxx xxxxxxxxx původce xxxxxxxxxxxxxx a pro xxxxxxxxx virulence xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako Clavibacter xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

10.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx xx x 3-xxxxxxx xxxxxx testované izolované xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

10.2. Xxxxxxxx xx 5-10 xxxxxx xxxxxxx semenáčků xxxxx xxxxxxxxxxxx xx xxxx 3 pravých xxxxx..

10.3. Inkubuje se xxx teplotě 18-24 °X při dostatečném xxxxxx a vysoké xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxx během 2 xxxxx nastat xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxx xxxx doby xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xx měly xxxxxxxxx xx 3 xxxxx xxx teplotách xxxxxxxxxx pro xxxx xxxxx vejcoplodého, xxx xxxxxxxxxxxxxxx 25 °C. Xxxxxxxx xx po 3 xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxx xxx kultura xxxxxxxxxx xx patogenní formu Xxxxxxxxxxx michiganensis subsp. xxxxxxxxxxx.

10.4. Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin x příznaky infekce xxxxxxxxxxx xxxxx stonku 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Pletiva xx xxxxxxx a xxxxxxxxxx x malém xxxxxxxx xxxxxxxx destilované xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx pufru. Xxxxxxx se xx xxxxxxxx rozetřením xxxx xxxxxxxxx xx XXXX x XXXX, xxxxxxxx xx xx xxxx. 3-5 xxx xxx xxxxxxx 21-23 °X x sleduje xx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. sepedonicus.

Dodatek 1

Laboratoře xxxxxxxxxx xx na xxxxxxxxxxxx a validaci xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx (1)	Místo	Země
Agentur xüx Xxxxxxxxxx xxx Xxxäxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxx x Xxxxx	Xxxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxx
Xxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxx	Xxxx	Xxxxxx
Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx xx xx Protection Xxxxxxxx, Xxxxx xx Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxx Xxxxxxxx de xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxx de Quarantaine xx la Xxxxx xx Terre	Le Rheu	Francie
Biologische Xxxxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxxxx	Xxxxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxx Hannover	Hannover	Německo
State Xxxxxxxxxx	Xxxxxx	Xxxxx
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx
Xxxxxxxxx Crop Research Xxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxx	Xxx	Xxxxxx
Xxxxxçãx-Xxxxxxx xx Xxxxxxçãx xxx Xxxxxxxx	Xxxxxxx	Xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxxxx institut xx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
Xxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx	Xxxxxxxxx	Xxxxxxxxx
(1) Xxxxxxxxx xxxxx: xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 2

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx výkrojků xxxxx XXX/XX x XXXX

Xxxxxxxxx xx 72 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx kmene X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx (NCPPB 4053 xxxx XX 406) xx základním xxxxx XXXX x xxxxxxxxxx xx x 10 xX xxxxxxxxxxx pufru xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx 1 xx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx tvorby xxxxxxx/xx. Xxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx optické xxxxxxx 0,20 - 600 xx.

Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx 200 hlíz xxxxxxxxxx z produkce xxxxxx s xxxxx xxxxxxx, x xxxxx xx jisté, xx xx xxxxxx X. x. subsp. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxx způsobem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx.

Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx x 900 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx 100 µx suspenze X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxx rnikrozkumavky. Xxxxx se xxxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx provedou xxxxxxxxx ředění.

Šest xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxx nekontaminované xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx štítkem.

Připraví xx xxxxxxxxx části x 100 µx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx 1,5 xx, čímž se xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxx při xxxxxxx -16 až-24 °X xx xx xxxx použití.

Přítomnost a xxxxxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx imunofluorescence.

Pro XXX test xx xxxxxxx xxxxxxxx DNA x pozitivních a xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x FISH testy xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx pozitivních x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, FISH x XXX xxxx xxx X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx v 10⁶ a 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxx x negativních kontrol.

Dodatek 3

Xxxxx pro xxxxxxxxx xxxxxxx

XXXXXX: Neotevřené sterilizované xxxxx xxx xxxxxxxxx xx xxxx xx xxxxxxx roku.

1. Pufry xxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx xxxx(50 xX fosfátový xxxx, pH 7,0)

Xxxxx xxxx xx používá x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

Xxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx složky:

	Účel	Množství (xx xxxx)
Xxxxxxxxx vločky	Protisrážlivý xxxxxxxxxx (*)	0,5 x
XX xxxxxxxxxx xxxxxxxxx	Xxxxxxxxxx činidlo (*)	1,0 ml
Tetrasodiumpyrofosfát	Antioxidační xxxxxxx	1,0 x
Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-40&xxxx;000 (XXX ‒ 40)	Xxxxxx inhibitorů XXX	50 x
(*) xxx použití xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

1.2. Xxxxxxxx pufr (10 xX fosfátový pufr, xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx x ředění xxxxxxxx z výkrojků x xxxxxxxxx částí xxxxxxxxxxxx xxxx poté, xx xxxx odstřeďováním xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,4 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx se xX x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 °X xx dobu 15 xxx.

2. Xxxxx xxx XX test

2.1. Xxxxx pro XX (10 xX xxxxxxxxx xxxx xx fyziologickém xxxxxxx (XXX), xX 7,2)

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xx xX x provede xx sterilizace v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 min

2.2. XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx. Xxxxx se 0,1 % Tween 20 x pufru pro XX.

2.3. Xxxxxxxxx xxxx x glycerolu, xX 7,6

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx na xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 3,2 g

NaH₂PO₄. 2X₂X 0,15 g

Glycerol 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 ml

Krycí xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx. Xxxxxxxxxxx® (Xxxxxx Xxxxxxxxxxxx) xxxx Citifluor® (Xxxxx).

Xxxxxxx 4

Xxxxxxxxx koncentrace xX x FISH xxxxxxxxxxx xxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x jednom pozorovacím xxxx (x).

2. Vypočítá xx počet typických xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx sklíčka (X).

X = x x X/x,

xxx X = xxxxxx xxxxxxx xxxx xx sklíčku x xxxx xxxxxxx x

x = xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πx²/4X²X²,

xxx x = xxxxxxxxxx xxxx (v xxxxxxx od 8 - 24 xxxxx xxxx xxxxxxx),

X = xxxxxxxx koeficient (1 xxxx 1,25),

G - xxxxxxxx objektivu (100 x, 40 x xxx.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (X).

X = X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx y = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x každém xxxxxx x

X = zřeďovací xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx

Xxxxxxx 5

Xxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx X. x xxxxx. xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxx růstová média

Živný xxxx (Xxxxxxxx xxxx = XX)

Xxxxx agar (Xxxxx)	23 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx se xxxxxxxx x provede xx xxxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxx xxxxxxxxxx agar (Xxxxxxxx dextrose agar = NDA)

Difco xxxxx xxxxx agar xxxxxxxxxx 1 % X(+) xxxxxxx (monohydrátu). Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx při 121 X xx xxxx 20 min.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx = XXXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
Xxxxxxxxxxx (Xxxxx)	5,0 x
X(+) xxxxxxx (xxxxxxxxxx)	10,0 g
Baktoagar (Difco)	15,0 x
Xxxxxxxxxxx voda	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx x xxxxxxx se sterilizace x autoklávu xxx 121 °C xx xxxx 15 min.

Médium x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxx (Xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxx = XXX)

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
X(+) glukóza (xxxxxxxxxx)	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 g
MgSO4 . 7X2X	0,1 x
XxXX4 . X2X	0,015
XxXx	0,05 x
XxXX4 . 7X2X	0,005
Xxxxxxxxx (Xxxxx)	18,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí a xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 0,5 1 xxxxx x autoklávu xxx 115 °C xx xxxx 20 min.

b) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx

Xxxxxx XXXX

Xxxxx xxxx xxxxxxx jinak, xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx x XXX.

Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Xxxxx)	2,0 x
Xxxxx	2,5 x
X2XXX4	0,25 x
XX2XX4	0,25 x
XxXX4 . 7X2X	0,1 g
MnSO4 . X2X	0,015 x
XxXx	0,05 g
FeSO4 . 7X2X	0,005 g
Agar (Xxxxx č. 1)	16,0 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 x

Xxxxxx xx rozpustí, xX xx xxxxxx xx 7,2. Po xxxxxxxxxxxxx (xxx 121 °X xx xxxx 15 xxx.) a ochlazení xx 50 C xx přidají xxxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx 0,06 g, xxxxxxxxx xxxx 0,002 x, amphotericin X 0,01 x.

X xxxxxx xx nechají xxxxxxx xxxxxxxxxx: xxxxxxxxxxxx (Sigma) x xxxxxxxxx acid (Xxxxx) (xxx 5 xx/xx) x 96 % xxxxxxxx, amphotericin X (Xxxxx) (1 xx/xx) v dimethyl xxxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx filtrací.

Poznámka:

Trvanlivost xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx 1 měsíc xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx do 8 +/- 2 °X.

Xxxxxx XXX-88

Xxxxx agar (Xxxxx)	23,0 x
Xxxxxxxxxx xxxxxxx (Difco)	2,0 x
X-xxxxx	5,0 g
K2HPO4	2,0 g
KH2PO4	0,5 x
XxXX4 . 7X2X	0,25 x
Xxxxxxxxxxx xxxx	1,00 l

Složky xx xxxxxxxx,xxxxxx se xX xx 7,2. Xx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx 50 °X se přidají xxxxxxxxxxx antibiotika: xxxxxxxxx X sulphate (Xxxxx) 0,003x, xxxxxxxxx acid (Xxxxx) 0,008 x, xxxxxxxxxxxxx (Xxxxx) 0,2 x.

Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx: nalidixic xxxx x 0,01 X XxXX, xxxxxxxxxxxx x 50% xxxxxxx, xxxxxxxxx X sulphate x destilované xxxx. Xxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xx 3 xxxxxx. Po xxxxxxx xxxxxxxxxx xx trvanlivost 1 xxxxx xxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xx 8 +/- 2 °X.

Xxxxxxx 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx C. m. xxxxx. xxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Úvodní xxxxxxxxx xx také nemělo xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxxx vybraných kmenů xxxxxxxx.

1. Xxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx s xxxxxxx XXX kontrolou (Xxxxxxx, 2000)

1.1. Oligonukleotidní xxxxxxx

xxxxxx XXX-1 5'- xxx xxx gtg xxx xxx pa xx -3'

xxxxxx PSA-R 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx ccc x -3'

xxxxxx XX-7-X 5'- xxx gca ata xxx ggt ctg xxx xxx -3'

xxxxxx XX-8-X 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xx -3'

Xxxxxxxxxxxxx velikost xxxxxxxxx x DNA C. xx. xxxxx. sepedonicus xxxxxxx = 502 xx (xxxx XXX-xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx z xxxxxxx XXX xxxxxxxx 18X rRNA 377 xx (sada XX-xxxxxxx).

1.2. Xxxxxxx xxxx PCR

Činidlo	Množství xx reakci	Konečná xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx xxxx (XXX)	15,725 μx
10x XXX xxxx (1) (15 mM MgCl2)	2,5 μx	1x(1,5 xX XxXx2)
XXX (xxxxxx V) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Směs x-x XX (20 xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx XXX-1 (10 μM)	0,5 μx	0,2 μX
Xxxxxx PSA-R (10 μX)	0,5 μl	0,2 μX
Xxxxxx XX-7-X(10 μX) (2)	0,1 μx	0,04 μX
Xxxxxx XX-8-X (10 μX) (2)	0,1 μl	0,04 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5 U/μl) (1)	0,2 μl	1,0 U
Vzorkové xxxxxxxx	5,0 μx
Xxxxxxx xxxxx	25,0 μx

(¹) Xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx Xxx polymerázy Xxxxxx Xxxxx (XxxxxXxx xxxx Xxxx) x Xxxxx XXX.

(²) Xxxxxxxxxxx xxxxxxx XX-7-X a XX-8-X xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxx pupkové xxxxx xxxxxxxx xx použití xxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxx DNA podle Xxxxxxxx (2000) (xxx xxxxx 6.1 písm. x) x 6.2). Xxx xxxxxxx extrakce xxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx DNA xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx koncentraci činidla.

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx:

1 xxxxxx: x) 3 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °X (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

10 cyklů xx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX matrice)

iii) 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 64 °X (xxxxxxxxx primerů)

iv) 1 xxxxxx xxx teplotě 72 °X (prodlužování xxxxx)

25 cyklů x) 30 xxxxxx xxx xxxxxxx 95 °C (xxxxxxxxxx XXX xxxxxxx)

xx) 30 xxxxxx při xxxxxxx 62 °C (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xxx) 1 xxxxxx při xxxxxxx 72 °X (prodlužování xxxxx)

1 cyklus viii) 5 minut xxx xxxxxxx 72 °C (xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

xx) Xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °C

Poznámka:

Tento xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx MJ Xxxxxxxx XXX 200. Xxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx), iv), x), xx) a xxx).

1.4. Xxxxxxx ampliconu xxxxxxxxxxxxx enzymem

Produkty PCR xxxxxxxxxxxxx x XXX X. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentu x xxxxxxx Xxx XX xx inkubaci xxx xxxxxxx 37 °X xx xxxx 30 xxxxx. Fragmenty xxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro C. x. xxxxx. xxxxxxxxxxx xxxx rozměry 282 xx x 220 xx.

2. Xxxxxxxx nanášecího xxxxx

2.1. Bromfenolová xxxx (10 % zásobní xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx xxxx 5 x

Xxxxxxxxxxx voda 50 xx

Xxxxxxxx pufr

Glycerol (86 %) 3,5 ml

Bromfenolová xxxx 300 µx

Xxxxxxxxxxx xxxx 6,2 ml

3. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

TRIS 48,4 x

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx 11,42 ml

EDTA (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxx použitím xx xxxxx xx 1x.

Xxxx xxxxxxxx dostupné (xxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx xxx XXXX test

1. Oligosondy

Sonda xxxxxxxxxx xxx Xxx XXX-XX3-01: 5'- xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx -3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'- xxx gcc xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: XXXXXXX XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX! XXXXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. XXXXXXXXXX XX XXXXXXXX X DIGESTOŘI.]

i) Xxxxxxx se 9 xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx xxxxxxx xxxxxxxxx 60 °C x přidá xx 0,4 x xxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xx přidání 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX xx 7,0 xxxxxxxx 1 xx xxxxxxxxxxx pufru 0,1 X (PB; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xX a x xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx XXx xxxx XxXX.

[XXXXXXXXXX: X XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX xX!]

xxx) Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx 0,22 µx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx xxx teplotě 4 °X xx dalšího xxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx fixační xxxxxx: 96 % xxxxxx.

3. 3x Xxxxxx

XxXx 2,7 X

Xxxx-XXx 60 xX (pH 7,4)

EDTA (xxxxxxxxxxxxx přes xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 xX

Xxxxx se až 1x, xxxxx potřeby.

4. Xxxxxxxxxxxx roztok

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (SDS) 0,01 %

Sonda EUB 338 5 ng/µl

Sonda XXXXX301 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxxx (obsahující xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxx: Xxxxxxxxxx množství xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

	2 xxxxxxx	8 xxxxxxx
Xxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx	50,1	200,4
3x xxxxxx	30,0	120,0
1 % XXX	0,9	3,6
xxxxx XXX 338 (100 xx/μx)	4,5	18,0
xxxxx CMSCY301 (100 xx/μx)	4,5	18,0
Xxxxxxx xxxxx (μl)	90,0	360,0

Poznámka.:

Všechny xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx uchovávají x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx xxxxxxx je xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx přímým xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

5. 0,1 X xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxx xx xxxxxxxx, zkontroluje xx xX a xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx při xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxxx lilku vejcoplodého (Xxxxxxx melongena) xx xxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx substrátu. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 xx 14 dní) xx xxxxxxxxxx do xxxxxxxxxxxxxxx pěstebního substrátu.

Lilek xx se xxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka xxx: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, pokud je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 15 °X.

Xxxxxx odrůdy xxxxx xxxxxxxxxxxx "Black Xxxxxx",

"Xxxx Xxx",

"Xxxx",

"Xxxxxx".

Xxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx

Xxxxxxx 9

Xxxxxxx xxxxxxx v Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxx, 1981) (¹)

Xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx 2 x krystalové xxxxxxx x 20 xx 95 % xxxxxxx.

Xxxxxxxx xx 0,8 x xxxxxxxxx xxxxxxxx v 80 xx xxxxxxxxxxx xxxx.

Xxx xxxxxxx xx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx

Xxx 1 g

Jodid xxxxxxxx 2 g

Destilovaná xxxx 300 xx

Xxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx tloučku x xxxxx. Xxxxxxx se xx xxxx x xxxxxxx se x xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxx roztok:

Safranin X 2,5 g

95 % xxxxxx 100 xx

Xxxxxxx xx x xxxxx xx.

Xxxxxx: 1:10 pro xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxx xxxxxxx

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx, vysuší se xx vzduchu x xxxxxx xx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx krystalové xxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 1 xxxxxx.

3. Xxxxxx se xxxxx xxx tekoucí vodou.

4. Xxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxxx xx dobu xxxxx xxxxxx.

5. Xxxxxxxx se xxx xxxxxxx vodou x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

6. Odbarvuje xx xxxxxx po xxxxxxx xxxxxxxxxxx 95 % xxxxxxx tak xxxxxx, xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxx xxxxxxxxx za xxxxxxx xxxxxxxxxx do xxxxxxx xx dobu 30 xxxxxx.

7. Xxxxxxxx se xxx tekoucí xxxxx x vysuší xx xxxxx xxxxxxx.

8. Zalije xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx se xxxxxxx 10 x.

9. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx xxxxx a xxxxxx se savým xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx fialově xxxxx, xxxxxxxxxxxxx bakterie se xxxxxx růžovočerveně.

(¹) Mohou xx xxxx xxxxxx xxxxxxxx dostupné xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxxxxxx, 1987. Xxxxxx xx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx of xxx xxxx xxx xxxxxxxxx Corynebacterium xxxxxxxxxxx xx xxxxxxx of xxxxxx xxxxxx. Commission xx xxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx, Luxembourg. Xxxx XXX 11 288 XX, 21 xx.

2. Xxxxxxxx, X. X., 1970. Xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx of xxxxxxxx xxxx xxxxxx. Xxx. Xx. Xxxx., 49, 213-218.

3. Xxxxxxx, I. X., 1984. Xxx xxxxxxxxxx and xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx diseased xxxxxx xxxxxx. XXXX Xxxx. 14 (2), 147-152.

4. Xxxxxxx, X. N., 1981. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxx microscopy. X: Xxxxxx xx xxxxxxx for general xxxxxxxxxxxx, American Society xxx Xxxxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx, 21-23.

5. Hugh, X. x Xxxxxxx, X., 1953. The taxonomic xxxxxxxxxxxx of fermentative xxxxxx xxxxxxxxx metabolism xx xxxxxxxxxxxxx by xxxxxxx xxxx-xxxxxxxx xxxxxxxx. X. Bact., 66, 24-26.

6. Janse, J. X., 1991. Infra- xxx xxxxx-xxxxxxxx classification xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

7. Xxxxx, X. D. x J. Van Xxxxxxxxxxx. Xxx interpretation xx xxx EC xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx) in xxxxxx. EPPO Bull., x. 17, 1987, xx. 1-10.

8. Jansing, X. a X. Xxxxxxx, 1998. Physiological xxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxx and Protection, 105, 590-601.

9. Kovacs, X., 1956. Xxxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxx xx xxx oxidase xxxxxxxx. Xxxxxx, Lond., 178, 703.

10. Xxxxxxx X.; Xxxxxxx, K x X. X. Xxxxx, 1990. Methods xx Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Xxxxxxxx, 568 xx.

11. Xxxxxxxx, X. X., 1966. Xxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. X. xxxx. Xxxx., 29, 114-118.

12. Xxxxxxxx, X. A., X. Xxxxxxx a X. X. Xxxxxxx, 1966. X determinative xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx X. xxxx. Xxxx., 29, 470-489.

13. Xxxxxxxx, X. X. x X. X., Xxxxxx, 1976. The xxxxxxxxx of xxxxxx xxxx xxx (Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx (Xxxxx. xx Kotth.) Skapt. xx Xxxxx.) xx xxxxxx xxxxxx. EPPO Xxxx., 6 (2), 101-106.

14. Xx, X. x X.X. de Xxxx, 1995. Xxxxxxxxx xx Polymerase Xxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx xxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxx specific xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx subsp. sepedonicus. Xxxxxxxxxxxxxx, 85, 837-842.

15. Xxxxx, X., Russell, X., X. x X., X. Xxxxx, 1997. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx by xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx, 87, 8, 853-861.

16. Xxxxxxx, X. -H. a X.X. Xxxxxx. 1999. xxxxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx-xxxxx xxxxxxxxxx. X. Phytopathology 147; 687-693.

17. Xxxxxxx, K.-H., 2000. Xxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx XXX xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxx DNA. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Pathology, 106, 155-165.

18. Ramamurthi, X. X., 1959. Comparative xxxxxxx on xxxx Xxxx-xxxxxxxx phytopathogenic xxxxxxxx xxx their xxxxxxxxxxxx xx the Xxxxxxxxxxxxxx. Xxx. Cornell xxxxx. Xxx. Xxx., 366, 52 xx.

19. Schaad, X., Xxxxxxxx-Xxxxxx, Y., Xxxxxxx, A. a Xxxxx, X. (1999) Xxxxxxxxx xx Clavibacter xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx X1X-XXX xxx xx xxxxxxxxx xxxx-xxxx xxxxxxxxxxxx detection system. Xxxxx Xxxxxxx 83; 1095-1100.

20. Xxxxxx, X. 2001. Laboratory xxxxx xxx identification of xxxxx pathogenic bacteria. Xxxxxx [Hrsg.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx:, 373 xx.

21. Xxxxxxx, X. X. D., 1967. X xxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxx xx xxxxxxxx. 2nd xx., Xxxxxxx xxx Xxxxxxx Xxxxxxx, Xxxxxxxxx.

22. Xxxxx, X. X.; Hemiesy, X; Stead, XX., 2001. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx-xxxxxxx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxx BOX-A1 Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx primer xxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx of xxxxx xxxxxxxx Clavibacler xxxxxxxxxxxxx subsp. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx Journal xxXxxxxXxxxxxxxx, 107 (7), 739-748.

23. Xxxxxx, X. H. X. xxx V. X. Collins, 1974. X xxxxx in xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx between xxxxxxxxxxxx: xxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx van Xxxxxxxxxxxx, 40, 481-527.

24. Stead, X.X. 1992. Grouping xx xxxxx xxxxxxxxxx xxx some other Xxxxxxxxxxx spp. using xxxxxxxx xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Journal xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

25. Xxxxxxxx, X. X.; xxx Xxxxxxxxx, X. R.; Xxxxx, X. D. x X. X. X. Xxxxxxxxx, 1998. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx of xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx 23x xXXX-xxxxxxxx probes. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64, 4546-4554.

X. XXXXXX XXXXXXXX, XXXXXXX X XXXXXXXXXXXX XXXXXXX XXXXX XXXXXXX

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx diagramy xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx:

x) xxxxxxxx hnědé xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx vadnutí xxxxxxxx, xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx,

xx) detekce Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx bramboru, xxxxxxx xxxxxxxx, rostlin rajčete x xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, a ve xxxxxxxx xxxx x xxxx,

xxx) xxxxxxxxxxxx Ralstonia xxxxxxxxxxxx (X. xxxxxxxxxxxx)

XXXXXX XXXXXX

Xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxx metody, xxxxxxxxx xxxxxxx x podrobnosti xxx přípravu xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v dodatcích. Xxxxxx laboratoří, xxxxx xx podílely xx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx, je x dodatku 1.

Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx materiálů, je xxxxx pracovat xx xxxxxxxx karanténních xxxxxxxx x odpovídajícím zařízením xx xxxxxxxxxxxx xxxxxx x xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx příslušným xxxxxxxxx Xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx zjištění úrovní X. xxxxxxxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxx vybraných xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxx podle xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx nastavení, xxxxxx x xxxxxxxxx zařízení, xxxxxxx zacházení x xxxxxxx a xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx zamezení xxxxxxxxxxx mezi xxxxxx, xxxx. xxxxxxxx pozitivních xxxxxxx xx testovaných xxxxxx. Musí xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx řízení xxxxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxx, xxxxxxx xxx označování a x xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx z xxxxxxx, jak je xxxxxxx x §4 xxxx. 1, xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxx xxxx screeníngových xxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxx, xxx je xxxxxxxxxx x xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx (xxxx XX, XXX/XXXX, xxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxx xxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx na xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xx xxxxx screeningový test xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx a xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx. Xxxxx xx x druhý xxxxxxxxxxxx xxxx pozitivní, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx podle daného xxxxxxxx. Xxxxxxxx je xxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx, xxx vzorek xxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx R. solanacearum.

Potvrzená xxxxxxxxxx xxxxx §5 xxxx. 1 xxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

1. Xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx

1.1. Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx x bakteriálního xxxxxxx (Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx) xxxx bramboru x xxxxxxx xxxxxxxx, rajčete x jiných xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxx testování xx určen pro xxxxx a xxxxxxxx xxxxxxxx s xxxxxxxxxx x výskytu xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Zahrnuje rychlý xxxxxxxxxxxx test, xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva na xxxxxxxxxx xxxxx půdě x x případě xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

1) Xxxxx příznaků xx xxxxxxx x xxxxxx 2.1.

2) Rychlé xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxxx xxxxxxxxxx diagnózu, xxx xxxxxx dokonalé. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx patogenu.

3) Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx cévních xxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.1.

4) Xxxx na přítomnost xxxxxxx poly-β-hydroxyburyrátu je xxxxxx x xxxxxx 6.1.2.

5) Sérologické xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky xxxx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.3.

6) Test XX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.5.

7) Xxxx XXXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx pletiva xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxx XXXXX bakteriálního xxxxx xxxxxxxxxxxxxx ve xxxx xxxx extraktech xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Test XXX xxxxxxxxxxxxx slizu xxxxxxxxxxxxxx xx vodě xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx příznaky je xxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

10) Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx materiálu xxxxxxxxxxxx příznaky xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx (postupným xxxxxxx) (xxx x xxxxxx 2.3.).

11) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxx x oddíle 2.3.x.

12) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxx pokročilých xxxxxx xxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxx typické, xxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxx, xxxx xx izolace xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

13) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxx 6.2. Xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxx xx pro xxxxx xxxx xxxxxx.

14) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxx 6.3.

1.2. Xxxxxxxxx xxxxxxx pro xxxxxxx a xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx příznaky

Testování xx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxx bramboru. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxxx testů (xxx xxxxxxxx x xxxxxxxx 3), x xxxxx každý xx xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx principu, xxxx xxx doplněn izolací xxxxxxxx x xxxx, x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxxx, xx xxxxx kultura xx X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx x jednoho xxxxxxxxxxxxxx xxxxx není dostačující x xxxx, xxx xxx vzorek xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxx 10³ xx 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx zahrnutý xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxx xxxxx.

1) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 200 xxxx, xxxxxx postup xxx použit x xx menší xxxxx, xxxxxxxx 200 xxxx xxxx x xxxxxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxxxx 3.1.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx dva testy xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxx. Xxxxxxx se nejméně xxxxx screeningový xxxx. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx vzorek xxxxxxxxx xx negativní. X xxxxxxx, xx xx xxxx pozitivní, xx xxx validaci xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx nebo xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Je-li xxxxx xxxx další xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx testy xxxxxx nutné.

4) Xxxx XX je popsán x oddíle 6.1.5.

5) Xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsán x xxxxxx 6.1.4.

6) Xxxxx XXX xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.6.

7) Xxxx XXXX xx xxxxxx v xxxxxx 6.1.7.

8) Testy XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.8.

9) Biotest xx popsán x xxxxxx 6.1.9.

10) Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx v xxxxxx 2.3.x.

11) Kultivace xxxx xxxxxxx mohou xxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx výsledky, ale xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, je xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xx stejné xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx pletiva x xxxxxxxxx pupkového xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx test x xxxxxxx xxxxxx.

12) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx xx popsán v xxxxxx 6.3.

Xxxxxxxxx diagram xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx vzorcích rostlin xxxxxxxx nevykazujících xxxxxxxx, xxxxxxx rajčete nevykazujících xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxxxxxx příznaky

1) Viz xxxxx 3.2.1., xxx xxxx uvedeny xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx.

2) Xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx popsány x xxxxxx 3.2.1.

3) Xxxxx xxxx xxxxxxx xxx xxxxx založené xx xxxxxxx biologických xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x potvrzení. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test. Xx-xx xxxx xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxxxx za xxxxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxx xxxxxxxx prvního xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Jsou-li xxxxx xxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx za negativní. Xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxx.

4) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x oddíle 6.1.4.

5) Xxxx XX je xxxxxx x xxxxxx 6.1.5.

6) Testy XXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.6.

7) Test XXXX xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.7.

8) Xxxxx XXXXX jsou xxxxxxx v oddíle 6.1.8.

9) Biotest xx xxxxxx x oddíle 6.1.9.

10) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

11) Xxxxxxxxx xxxx biotest xxxxx selhat z xxxxxx xxxxxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx-xx ve xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx získány xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx, xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxx.

12) Xxxxxxxxxx identifikace xxxxxxx xxXxxx, x xxxxxxx xx podezření, xx xx jedná x X. xxxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxx 6.2.

13) Test xxxxxxxxxx je popsán x xxxxxx 6.3.

2. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx

2.1. Příznaky

2.1.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx fáze xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xx rozpozná xxxxxxxx listů xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxx vysokých xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxxxx x noci xxxxxxx x xxxxxxxx. X xxxxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx listy xxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxx nekrózy. Xxxxxxx xxxx x ohýbání xxxxx dolů. Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx nebo xxxx rostliny xx xxxxxx xxxxx nevratným x končí xxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx. X cévních xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx rostlin xxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxx bakteriální xxxx xxxx xx možné xxxx vymáčknout. Xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx stonku xxxxxx do vody xx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxxxx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx je xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxx. V xxxx xxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx cévního xxxxxxxx, xx xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx bledý xxxxxxx bakteriální xxxx. Xxxxxxx xx cévní xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxx xx parenchymatického xxxxxxx. X pokročilejších xxxxxx xx infekce rozšíří xxx xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxx a x oček xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx sliz, xx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx půdy. Xx slupce xx xxxxx objevit červenohnědá, xxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx cévního xxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxxx fázích xxxxxxx je obvyklý xxxxxxxxxx xxxxxx měkkých xxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx.

2.1.2. Xxxxxxxx x xxxxxxx

Xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxx viditelným xxxxxxxxx xx povadlý xxxxxx xxxxxxxxxxx listů. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (teplota půdy xxxxx 25 °X, xxx nasycené vzdušné xxxxxxxx) xx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx xx jedné xxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx rostliny, které xxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx (xxxxxxx xxxx xxxx xxx 21 °X) rostlina xxxxx xxxxxxx, ale na xxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.. Xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxx, které xxxx dokladem odumírání xxxxxxx systému. Při xxxxxxx xxxx stonkem xxxxxxxx xxxxx zbarvená xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx.

2.1.3. Xxxxxxxx u xxxxxx xxxxxxxxx

Xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx x S. xxxxxx. Za xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx u xxxxxx plevelných hostitelských xxxxxxx zřídkakdy xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, pokud xxxxxxx xxxx nepřevyšují 25 °X xxxx xxxx xxxxxxxx vysoká xxxxxxxxxxx xxxxxxx (např. x rostliny X. xxxxxx rostoucí x xxxxxxx rostliny xxxxxxxx xxxx xxxxxxx). Xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxxx rajčete. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx X. dulcamara, xxxxx xx xxxxxx x kořeny xx xxxx, xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx světle xxxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx příčném řezu xxxxxx části stonku xxxx xxxxx xxxxxx xxx vodou. X xxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx bakterie xxxx mohou tvořit xxxxxx xxxxx, jestliže xx xxx stonku xxxxxxx xxxxxx do xxxx, x to x xxx xxxxxxx xxxxxxxx vadnutí.

2.2. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxx screeningové xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx diagnóze, xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx jeden nebo xxxx xxxxxxxxxxxxx testů:

2.2.1. Xxxx na xxxxx xxxxx xx xxxxxx

(Xxx 6.1.1.)

2.2.2. Xxxx xx xxxxxxxxxx granulí poly-b-hydroxybutyrátu (XXX)

Xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX x xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx zviditelněny xxxxxxxxx tepelně xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x infikovaného xxxxxxx xx mikroskopickém xxxxxxx xxxxxxx modří X xxxx xxxxxxxxx černí (xxx xxxxx 6.1.2.).

2.2.3. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (Xxx xxxxx 6.1.3.) 2.2.4. Xxxx xxxxx

Xxxxxxx xxxxxxxx rychlými xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxx XX (xxx xxxxx 6.1.5.), test XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.), xxxxx ELISA (xxx xxxxx 6.1.8.) xxxxxx XXX (viz oddíl 6.1.6.).

2.3. Xxxxxx xxx xxxxxxx

x) Xxxxxxx xx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx z xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx nebo x xxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx bramboru, xxxxxxx xxxx jiné xxxxxxxx xxxxxxxxxxx rostliny. Suspenduje xx x xxxxx xxxxxxxx sterilní xxxxxxxxxxx xxxx nebo 50 xX xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) a xxxxx xx 5-10 xxxxx xxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxx desetinásobných xxxxxx xxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx 50-100 xx xxxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx (XX, YPGA xxxx XXX; viz dodatek 2) x/xxxx Kelmanovo xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2) x/xxxx xxxxxxxxxx selektivní xxxxxx (xxxx. SMSA, xxx dodatek 2). Rozetře se xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx X. solanacearum biovar 2 x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

x) xxxxxxxx se 2-6 dní xxx xxxxxxx 28°X.

- Xx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxx, xxxxxx, xxxxxxxxxxxx x fluidní xxxxxxx, často x xxxxxxxxxxxxxxxxxx spirálkami ve xxxxxx. Aviruletní formy X. xxxxxxxxxxxx tvoří xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela krémově xxxx.

- X Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx a xxxxx XXXX jsou xxxxxxxx xxxxxx červeně xxxxxxxx. Aviruletní xxxxx X. solanacearum xxxxx xxxx kruhové nefluidní xxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx zcela xxxxx xxxxxxx.

2.4 Identifikační xxxxx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x podezřelých xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx v xxxx 6.2.

3. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx hniloby xx xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx

3.1. Xxxxxxxx metody xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx

3.1.1. Xxxxxxxx vzorků

Poznámka:

- Xxxxxxxxxx velikost xxxxxx xx 200 xxxx xx jeden xxxx. Xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx vyžaduje xxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx hlíz xx vzorku vede x xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx lze xxxxxx xxxxxx i xxx xxxxxx x méně xxx 200 xxxxxxx, xxxxx je x xxxxxxxxx menší xxxxxxxx xxxx.

- Xxxxxxxx xxxxx xxxx uvedených xxxxxxxxxxxx xxxxx je založená xx xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx 200 xxxx.

- Xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxx rovněž xxxxxx xxx xxxxxxxx původce xxxxxxxxxxx kroužkovitosti xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx vzorku

a) Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 2-30 °X xx xxxx xx 2 xxxxx xxxx testováním xx podporu xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx.

x) Hlízy xx xxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxx desinfekční prostředky (x xxxxxxx chlóru, xxxxxxxx má být xxxxxxxx XXX test, xxx odstranění xxxxxxxxx XXX) x xxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx. Xxxxx postup xxxx xx vhodný xxxxxxx x xxxxxxx, xxxx je ve xxxxxxxx xxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxx má xxx xxxxxxxx xxxx XXX nebo xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.1. Xxxxxx čistého x xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxx na xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx každé hlízy, xxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx vodivých xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx cévní xxxxxx xx xxxxx xx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx (hnijící) xxxxx x xxxxxxxxxxx příznaky xxxxx xxxxxxx xx xxxx stranou a xxxxxxx se odděleně.

Pokud xxxx pří vyříznuti xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xx řezu xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxx 2 dnů xxx xxxxxxxx teplotě, xxx xxxxx dojít xx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxx) x xxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxxx (4-10 °X) xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Všechny xxxxx xxxxxx xxxx x podezřelými příznaky xx xxxx xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX.

3.1.1.2. Výkrojky x xxxxxxx části se xxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx jsou xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx (x případě, xx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx, xxxx být xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx prostředky x xxxxxxx xxxxxx). Nejlépe xx xxxxxxxxx výkrojky x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxxxxxxx se x xxxxxx xxx xxxxxxx pufru; x xxxxxx nejdéle 72 xxxxx xxxx při xxxxxxxx xxxxxxx (18 -25 °X) nejdéle 24 xxxxx.

Xxxxxxxx z xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) x xxxxxx xx x rotační xxxxxxxx (50-100 ot./min) 4 xxxxxx xxx teplotě xxxxx xxx 24 °X xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xxxxxxxxxxxx xx dostatečným xxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 ml) xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxx x mixéru (xxxx. Xxxxxx nebo Xxxxx Xxxxxx) nebo xxxxxxx x utěsněném xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxx polyethylenový sáček Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx, 150xx x 250xx, xxxxxxxxxxx xxxxxxx) xxxxxx xxxxxxxx tloučku xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. Homex).

Poznámka:

Při xxxxxxxxxxxx xxxxxx pomocí xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků. Xx nutné xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx (xxxxx) a xxxxxx. Xxx testu XXX xx nutno xxxxxxxx xxxxxxx XXX na xxxxxxxx nebo x xxxxxx xxxxxxxxx. U xxxxx PCR se xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx x sáčcích na xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx.

3.1.1.3. Supernatant xx xxxxxxxxx. Je-li xxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xx buď pomalým xxxxxxxxxxxxx (nejvýš 180 x xx xxxx 10 minut xxx xxxxxxx 4-10 °X) xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx (40-100 µm), xxxxx xx xxxxx přídavkem (10 xx) xxxxxxxxxxx xxxxx.

3.1.1.4. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xx zahustí xxxxxxxxxxxxx, 7&xxxx;000 g po xxxx 15 xxxxx (xxxx 10 000 x xx xxxx 10 xxxxx) xxx teplotě 4-10 °X x xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx, xxxx by xx xxxxxxxxx peleta.

3.1.1.5. Peleta xx resuspenduje x 1,5 ml xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Xxxxxxx xx 500 µx xxx R. solanacearum, 500 µl xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx. xxxxxxxxxxx a 500 µx xxx xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx glycerol xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx 10 - 25% (x/x) x 500 µx xxxxxxxxxx xxxxxxx části x xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx, promíchá xx xxxxxxx x xxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až -24 °C (xxxxx) xxxx -68 až -86 °X (xxxxxx). Xxxxxxxx se uchovávají xxxxx testování xxx xxxxxxx 4-10 °C.

Opakované xxxxxxxx a rozmrazení xx xxxxxxxxxxxx.

Xx-xx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, zajistí xx přeprava v xxxxxxxxx boxu x xxxxxxxxx xx 24 xx 48 xxxxx.

3.1.1.6. Xx nezbytně xxxxx, xxx xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx x xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx, aby se xxxxxxxxx xxxxxxxx kontaminaci. Xx xxxxx pro xxxxxxx XX a xxxxxxx xxxxx.

3.1.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x xxxxxxxxxxx dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

XX xxxx (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Testy XXXXX (xxx xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (viz xxxxx 6.1.9.)

3.2. Xxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx bramboru, rajčete xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

3.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxx účely xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx se xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx vzorky. Xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx na xxxxxxx xxxxxx x xxxxx xx 200 xxxxxxxxxx xxxxx. Xxxxxxx-xx se xxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx reprezentativním vzorku xxxxxxxx xxxxxxxxx populace.

3.2.1.1. Xx uzavřené xxxxxxxx xxxxxx xx uloží 1-2 cm xxxxxx xxxxxx stonků xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx vzorkování:

Rajčatové xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx nožem xx odebere xxxxxx xxxxxx 1 xx x paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx.

Xxxxxxxx x xxxx xxxx xxxxxxxx: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx výhonek x xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx x hlavním xxxxxxx. Xxxxxxx xx nejspodnější, 1 cm xxxxxx xxx z xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx hostitelské rostliny: Xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx zahradnickými xxxxxxx xx xxxxxxx 1 xx xxxxxx xxx x paty každého xxxxxx xxxx xxx xxxxxx země. X xxxxx potměchuti (X. xxxxxxxxx) xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx rostlin xxxxxxxxxx xx vodě xx xxxxxxxx 1-2 xx xxxx xx xxxxxx xxx xxxxx xxxx xxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx.

Xxx xxxxxxxxxx určité xxxxxxx se doporučuje xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxx o xxxxx xxxxxxx 10 xxxxxxx xx 1 xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxx jara, xxxx a xxxxxxx, xxxxxx xxxxxxxxxx infekci xx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxx x xxxxxxxx Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxx xxxxxx. Mezi xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx plevelné xxxxxxxx xxxxxxxx, Solanum dulcamara, X. xxxxxx, Datura xxxxxxxxxx a xxxxx xxxxxxxx čeledi Xxxxxxxxxx. Xxxxxxx hostitelskými rostlinami xxxx xxxxxxxx xxxx Xxxxxxxxxxx xxx. a Xxxxxxxxx xxxxxxxx. Některé xxxxxxxx plevelné xxxxx, xxxxx mohou xxxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2/Xxxx 3 x xxxxxxxx a/nebo xxxxxxxxx xx specifických xxxxxxxx, xxxxxxxx Xxxxxxxx xxxxxxx, Bidens pilosa, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx,

Xxxxxxxxxxx album, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, Xxxxxxx xxx, Rumex xxx., Xxxxxx xxxx. X. xxxxxx., Xxxxxxxxx xxxxxxxx x Xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

X xxxx xxxx xx xxxxx provést xxxxxxxx xxxxxxx vnitřních xxxxxxxx (xxxxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxx). Xxxxxxxx díl stonku x příznaky se xx xxxxxxx xxxxxxxx xx odděleně (xxx xxxxx 2.).

3.2.1.2. Xxxxx xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxx 70% xxxxxxxx x ihned xxxxxx xxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxx jedním x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) zalijí xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxxx 40 xx) xxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4) x třepou xx xxxxxxx xxxxxxxx (50-100 xx./xxx) 4 xxxxxx při xxxxxxx xx 24 °C xxxx 16-24 xxxxx xxxxxxxx,

xxxx

x) xx ihned xxxxxxxx drcením x xxxxxx maceračním sáčku (xxxx. Xxxxxxxxx xxxx Xxxxxxx) x přiměřeným xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx (např. Xxxxx). Xxxx-xx xx xxxxx, xxxxx xx xxxxx stonků x xxxxxx nejdéle xx 72 hodin xxxx xxx pokojové teplotě (18-25 °C) xx 24 hodin.

3.2.1.3. Xx xxxxxxx, xxxxx xx xxxxx 15 xxxxx, xx xxxxxxxxx supernatant.

3.2.1.4. Xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxx, xxx xxx xx provést xxxxxxxx xxxxx odstřeďováním xxxxxxxx x oddíle 3.1.1.3. xx 3.1.1.5.

3.2.1.5. Xxxxx xxxx koncentrovaný xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxx stejné xxxx. Xxxxx xxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °C x xxxxx díl xx xxxxxxxx x 10-25% (x/x) xxxxxxxxx xxxxxxxxx při xxxxxxx -16 až -24 °X (xxxxx) xxxx -68 xx -86 °X (xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

3.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx jsou x příslušných dodatcích:

Selektivní xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.4.)

Xxxx IF (xxx xxxxx 6.1.5.)

Xxxxx XXX (xxx xxxxx 6.1.6.)

Xxxx XXXX (xxx xxxxx 6.1.7.)

Xxxxx ELISA (viz xxxxx 6.1.8.)

Xxxxxxx (xxx xxxxx 6.1.9.)

4. Xxxxxxx x identifikace původce xxxxx xxxxxxx xx xxxx

4.1 Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx detekci x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

(1) Viz xxxxx 4.2.1., xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx.

(2) Metody xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx x xxxxxx 4.2.1. Koncentrace xxxxxxxx xxxxxxxx jak xxxxxxxx, xxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x doporučuje xx xxx xxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx izolačnímu xxxxx.

(3) Selektivní xxxxxxxx xxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(4) Xxxxxxx xx popsán x oddíle 6.1.9.

(5) Xxxxxx obohacovacího testu XXX jsou xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. x 6.1.6.

(6) Xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXXXX xxxx xxxxxxx x xxxxxx 6.1.4.2. a 6.1.8.

(7) Typická xxxxxxxxxx xxxxxxx xx popsána x xxxxxx 2.3.x.

(8) Xxxxxxxxx může xxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx spolehlivost xxxxxxx, xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx.

(9) Spolehlivá xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx X. solarcacearum se xxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxx v xxxxxx 6.2.

(10) Test patogenity xx xxxxxx x xxxxxx 6.3.

4.2. Xxxxxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxx

Princip

Validované xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxxxx je xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx vody x xxxxxx může xxx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx odpadní xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní vody. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx je xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx bakterií, kterých xx obecně mnohem xxxx x xxxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xxx v xxxxxxxxx xxxx. Xxxxxxx xxxx xxxxxxx schéma xxxxxxxxxxx xxxxxxx asi 10³ xxxxx/xxxx xxxxxxxxx xxxx, xxxxxxxxx detekce x xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx brambor x odpadní xxxx xxxx pravděpodobně xxxxxxxxx xxxxx. Z xxxxxx xxxxxx xx doporučuje xxxxxxxx odpadní vodu xx provedení xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (např. xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx), xxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx populací. Omezení xxxxxxxxxx testovacího xxxxxxxx xx xxxx xxx xxxxx v xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků. Vzhledem x tomu, že xx xxxx xxxxxx xxxxxxx úspěšně x xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx, je xxxxx xx xxxxxxxx xxxx omezení xxx xxxxxxx x podobnému xxxxxxxx v odpadní xxxx xx zpracování xxxxxxx x x xxxxxxx vodě.

4.2.1. Příprava xxxxxx

Xxxxxxxx:

- Xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxx xx nejspolehlivější x xxxxxx xxxxxxxx xxxx, xxxx x xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx 15 °X.

- Opakované vzorkování x xxxxx xxxx xxxxx výše xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx místech xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx snížením xxxxx výkyvů povětrnostních xxxxxxxx.

- Xxxxxx silných xxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx xxxxx ke xxxxxxxx xxxxxxx x xxx x zastření xxxxxxx xxxxxxxx.

- Xxxxxx xxxx xx odebírají x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx.

4.2.1.1. Xx vybraných vzorkovacích xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, xxxxx xxxxx 30 xx pod xxxxxxxx a 2 x od xxxxx. Xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxx xx xxxxxxxx xxxxxx z xxxxx xxxxxx odpadní xxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xx 500 xx. Xx-xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 3xxxx xxx xxxxx xxxxxxxxxx místo, x xxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx 2 xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx o xxxxxxxxx xxxxxxx 30 xx. Xxx intenzivním xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx 3 xxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxx 3 xx vodního xxxx a xxxxxxxx xx xxxxxx přítoky.

4.2.1.2. Xxxxxx xx přepravují x chladu a xxxxx (4-10 °X) xxxxxxxx xx 24 xxxxx.

4.2.1.3. Xx-xx potřeba, xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx bakteriální xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx:

x) Xxxxxxxxxx se 30-50 xx dílčí vzorky xxx 10&xxxx;000 g xx xxxx. 10 xxxxx (xxxx 7000 x xx xxxx 15 minut), pokud xxxxx xxx xxxxxxx 4-10 °X, slije xx xxxxxxxx nad xxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 1 xx xxxxx (dodatek 4).

x) Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx (xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx 0,45 µx) x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx x 5-10 ml xxxxxxxxxx xxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxx xxxxxx je vhodná xxx xxxxx xxxxxx xxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx saprofytů.

Koncentrace xx xxxxxxx nedoporučuje x xxxxxx xxxx xx zpracování xxxxxxx xxxx x xxxxxx xxxxxxx vody, xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx konkurenčních xxxxxxxxxxxxxx bakterií inhibuje xxxxxxx Xxxxxxxxx solanacearum.

4.2.2. Xxxxxxxxx

Xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxx x xxxx

5.1. Xxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx v půdě

(1) Viz xxxxx 5.2.1., xxx xxxx xxxxxxx doporučené xxxxxxx vzorkování

(2) Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xx xxxxxx x xxxxxx 6.1.4.

(3) Obohacovací XXX xxxxx xxxx xxxxxxx x oddíle 6.1.4.2. x 6.1.6.

(4) Biotest xx xxxxxxx v xxxxxx 6.1.9.

(5) Xxxxxxx xxxxxxxxxx kolonie xx xxxxxxx x xxxxxx 2.3.x.

(6) Xxxxxxxxx může xxxxxx z xxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxxxx izolace, xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

(7) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxxx xxxxxx R. solanacearum xx xxxxxxx pomocí xxxxx popsaných x xxxxxx 6.2.

(8) Xxxx xxxxxxxxxx je xxxxxx x xxxxxx 6.3.

5.2. Xxxxxx xxx xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x půdě

Principy

Platné xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx ve xxxxxxxx xxxx, xxx xxxx xxx rovněž xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx pevného xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxx x xxxxxxx xxxx. Xx xxxx nutné xxxxxxxxxx, xx xxxx metody xxxxxx xxxxxxxxxx citlivé, xxx zaručovaly detekci xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx populací Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, které se xxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxxxx infikovaných vzorcích xxxxxx substrátů.

Při xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledků a xxxx při sestavování xxxxxxxx určujících přítomnost xxxxxxxx v xxxx xxxx kalu je xxxxx xxxx v xxxxx omezenou xxxxxxxxx xxxxxx testovacího xxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxxxxx testem přítomnosti xxxxxxxx x xxxxx xxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx x její xxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxxxxx, xxx x xxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx nízký xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx.

5.2.1. Příprava xxxxxx

5.2.1.1. Vzorkování polní xxxx xx xx xxxx řídit xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx hlístů. Xx xxxxx xxxxxx se xxxxxxxxx 0,5 xx 1 kg půdy xx 60 xxxx xx xxxxx 0,3 xx z xxxxxxx 10-20 xx. Je-li xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx se xxxxx xxxxxxxx xxxx xx 120 z xxxxxx 0,3 xx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxx 12-15 °X. Xxx ze zpracování xxxxxxx a xxxxxxxxxx xx navzorkuje xxxxxxxxxxxx xxxxxx 1 xx x xxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx xxxxx promíchá.

5.2.1.2. Xxxxx xxxxxx 10-25 g xxxx nebo kalu xx rozptýlí xxxxxxx xxxxxxxxx (250 xx./xxx) x 60-150 xx xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4) xx xxxx 2 xxxxx. Je-li třeba, xxxxxxx 0,02% xxxxxxxxxx Xxxxx-20 x 10-20 x sterilních xxxxxxx xxxx xxxxxxxx disperzi.

5.2.2. Xxxxxxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxx x popis xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx dodatku.

6. Optimalizované xxxxxxxxx pro xxxxxxx x xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx

6.1. Xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxx

6.1.1. Xxxx xx xxxxx xxxxx xx xxxxxx

Xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxx vadnoucích xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxx nebo xxxxxx hostitelských xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx: uřízne xx xxxxxx xxxxx xxx xxxxxx země. Xxx xxxxxx se ponoří xx zkumavky x xxxxxx xxxxx. Sleduje xx, zda xx xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx.

6.1.2. Xxxx xx přítomnost granulí xxxx-β-xxxxxxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxx slizu x infikovaného xxxxxxx xxxx xx 48 xxxxxxxx kultury xx xxxxx půdě XXXX xxxx SPA (dodatek 2) xx xxxxxxxxxxxxx sklíčko.

2. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx kmenu xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní roztěr x xxxxxx XXX xxxxxxxxxx xx.

3. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxx povrch xxxxxxx sklíčka xx xxxxxx xxxxxxxx nad xxxxxxxx, xxx se xxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxx xx xxxxxx buď xxxxxxx modří xxxx xxxxxxxxx černí a xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx popisu:

Test nilskou xxxxx:

x) Xxx xxxxxxx xx zakápnou 1 % vodným xxxxxxxx xxxxxx xxxxx x xxxxxxx se xxxxxxxxx 10 minut xxx xxxxxxx 55 °X.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxx xxxxx tekoucí xxxxx x kohoutku. Xxxxxxxxxx xxxx se xxxxxx xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxx 8% vodním roztokem xxxxxxxx octové x xxxxx xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou z xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxx xx odsaje xxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxx x xxxxxxx se xxxxx sklíčko.

f) Xxxxxx xx xxxxxxxx roztěr xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx při 450 xx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxx 600x xx 1000x x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx nebo xxxxx imersi.

g) Xxxxxxxx xx, xxx se xxxxxx xx XXX xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Také se xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxx granule intracelulární x xxx je xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx černí:

a) Xxxxxxxx xx xxxxxxx sklíčka 0,3% xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx X x 70% xxxxxxx x xxxxxxxx se 10 xxxxx při xxxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx se xxxxxxx roztok x xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxx vodou x kohoutku x xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx savým xxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx: Xxxxx je zdraví xxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx xxxxxxxx 0,5% (x/x) xxxxxx roztokem xxxxxxxxx a xxxxxxx 10 xxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxx teplotě. Xxxxxxxxxx: safranin je xxxxxx škodlivý, je xxxxx xxxxxxx nezbytná xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx a xxxxxxxx x xxxxxxxxx.

x) Xxxxxxx xx opláchnou xxxxx xxxxxxx vodou x xxxxxxxx, odsaje xx přebytečná xxxx xxxxx xxxxxxx x xxxxxxx xx krycí xxxxxxx.

x) Zkoumá se xxxxxxxx xxxxxx mikroskopem x xxxxxxxxxxxxx světlem xxx xxxxxxxx xxxxxx x xxx zvětšení 1&xxxx;000x.

x) Xxxxx xx xxxxxxxxxx zbarvení PHB xxxxxxx x xxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx.

6.1.3. Xxxxxxxxxxx aglutinační xxxxx

Xxxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x bakteriálním xxxxx xxxx x xxxxxxxxxx x xxxxxx x xxxxxxxx je xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx (viz dodatek 3) xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx značkovači, xxxx. xxxxxxxxx xxxxxxx Staphylococcus xxxxxx xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx xxxxxxxx dostupného xxxxxxxx (xxx dodatek 3) xx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx:

x) Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx označené xxxxxxxxxx x bakteriálního xxxxx (xxxxxxxxx 5 µl xxxxx látky) xx xxxxxx testovacího víceokénkového xxxxxxx.

x) Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx a negativní xxxxxxxxx vzorky xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx.

x) Xxxxxxxx xx, xxx xx x pozitivních vzorcích xx jemném xxxxxxx xx xxxx 15 xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.4. Xxxxxxxxxx izolace

6.1.4.1. Očkování xx xxxxxx půdu

Poznámka:

Než xx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxx, xxxxxxx xx předběžný test x xxxxxxxxx reprodukovatelné xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxxxx do extraktů xx vzorků, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx půda, xxxx. XXXX (xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx xx., 1996; viz dodatek 2).

Xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx na živné xxxx xxxx vyžaduje xxxxxx pozornost. Xxxx, xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxxxxx Petriho xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxx antagonistické xxxxxxxx. Xx-xx xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx, xxx xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx znovu xxxxxx xxxxxx xxxxx.

Xxx xxxxxxx čerstvě xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze xxxxxx xxx xxxxxxxx, xx xxxxxxxxx detekce xxxxx xxxxxxx xxxx velmi xxxxxx. Metoda xx xxxx xxxxxxxxxx i xxx xxxxxxxx, které xxxx uchovány x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx xx -68 do -86 °X.

Xxxxxxxxx kontroly xx xxxxxxxx jako xxxxxxxxx ředění ze xxxxxxxx 10⁶ xxx/xx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = XX 2762 = XXXX 3857). X xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xx připraví xxxxxxxxx xxxxxxxxx vzorky xxxxx odděleně od xxxxxx x testování.

U xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx xx xxxx xxx před jejím xxxxxxxx k xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxx vhodnost xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx materiál xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxx (xxxxxx).

1. Xxxxxxx xx ředění x xxxxx zajistit, xxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxx xx 50-100 µx extraktu xxxxxx xx 1 xxxxx xxx xxxxx xxxxxx.

2. Misky se xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 28 °X. Xx 48 hodinách xx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx x xxx xx provádí xxxxxxxx xxxxx xx 6 xxx. Xxxxxxx kolonie X. solanacearum xx xxxxx xxxx XXXX xxxx mléčně bílé, xxxxxx, nepravidelné a xxxxxxx x xx 3 xxxxx inkubace xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx červené xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xx xx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx. Mohou xxx xxxx, xxxxxxx, xxxxx červené x xxxxxxxxx nebo jen xxxxxxxx xxxxxxx, x xxxxx obtížně xxxxxxxxxxxx xx saprofytických bakterií xxxxxxxxx xxxxxxx.

3. Předpokládané xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx rozetřou nebo xxxxxx xxxxxxx zřeďování xx xxxxxxxxxxx živnou xxxx., aby se xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx (xxx dodatek 2).

4. Kultury xx uchovávají krátkodobě xx xxxxxxxx vodě (xX 6-8, bez xxxxxx) xxx xxxxxxxx xxxxxxx v xxxxx xxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx médiu xxx teplotě -68 xx -86 °X xxxx xxxxxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx podezřelých xxxxxx (xxx xxxxx 6.2.) x xxxx xxxxxxxxxx (xxx xxxxx 6.3).

Xxxxxxxxxxxx výsledků testu xxxxxxxxx na xxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxx xxxxxxxx na xxxxxxxxxx média je xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx 6 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx nejsou xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx , xx xxxxxxxxxxx, xx xxxxxxx x xxxxxxxx jinými xxxxxxxxxx x v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xx pozitivní, jestliže xxxx izolovány xxxxxxxxx xxxxxxx X. solanacearum.

6.1.4.2. Xxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxx, xxxx. xxxxxxxxxxxx xxxxx Xxxxxxxx (viz dodatek 2).

Xxxxx xxxxxx xxx xxxxxx xxx selektivní xxxxxxxx xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxx xxxxx x xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX xxxxx (1:100). Obohacení X. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx xxx xxxxxxxxx x xxxxxx konkurence xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx. X tohoto xxxxxx může xxx xxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx. Kromě xxxx, xxxxxxx xxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xx xxx test XXXXX xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx monoklonální protilátky.

1. X xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX xx přenese 100 xx extraktu xx xxxxxx xx 10 xx xxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 2), který xx předem xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxx. U xxxxxxxxxxxxx xxxxx ELISA xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx extraktu xx xxxxxx xx xxxxxx (např. 100 xx x 1,0 xx xxxxxxxxx xxxxx xxxx).

2. Inkubuje xx 72 hodin xxx xxxxxxx 27 xx 30 °X x xxxxxxx nebo statické xxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxx, xxxxx umožní xxxxxxxxxxxxxx.

3. Před zahájením xxxxx XXXXX nebo XXX xx xxxxx xxxxx xxxxxxxx.

4. S xxxxxxxxxx bujónem se xxxxxxx xxxx způsobem xxxx xx xxxxxx xx výše xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx-xx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx X. solanacearum x xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx saprofytických xxxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx obohacením xxxxxxxx ze vzorků xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.5. Xxxx xX

Xxxxxx

Xxxxxxx xxxxx IF xxxx hlavního xxxxxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx dokázané xxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx-xx xx test XX jako hlavní x výsledek XX xxxxx je xxxxxxxxx, xxxx xxx xxxx xxxxx screeningový test xxxxxx test izolace, XXX nebo XXXX. Xxxxxxxx xx xxxx XX xxxxxx xxxx xxxxx screeningový test x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx X. solanacearum. Xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxx. Xxxx xx definován xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx xxxxx x optimální xxxxxx xxx xxxxxxxxx suspenze xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk/ml homologického xxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxxx doporučení xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx mají xxxxxxx xxxx xX xxxxxxx 1:2&xxxx;000. Během testování xx xxxx být xxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx ředěních xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxxx.

Xxxx by xxx xxx proveden xx xxxxxxx připravených extraktech xx vzorků. Jestliže xx xx xxxxx, xxxx být úspěšně xxxxxxxx na xxxxxxxx xxxxxxxxxx při xxxxxxx - 68 xx - 86 °C x glycerolu. Xxxxxxxx xxxx xxx xx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx 1 ml xxxxx (dodatek 4), 15xxxxxxxxx odstřeďováním xxx 7000 x x resuspenzí xx xxxxxxx množství xxxxxxxxxx xxxxx. Často to xxxx xxxxxxx, xxxxxxx xxxxx j xxxx xxxxxx xxxxxxxx na xxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxxx x homologickým xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx suspendovaným v xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, jak xx xxxxxxx x dodatku 3 X, x xxxxxxxxx v xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx cestou (xxxxxxxxxx lyofilizací nebo xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 až 24 °C) xx xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx se xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx, které lze xxxxxx xxx xxxxx xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxx okénky, xxxxx xxxxx s 10 xxxxxx x průměrem xxxxxxx 6 xx.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx týmž způsobem xxxx xxxx xxxxxx.

6.1.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx:

x) Xxx xxxxxx s xxxxxxxxx nízkým xxxxxxxxx xxxxxxxxx škrobu:

Napipetuje se xxxxxxxx standardní množství (15 µl xx xxxxxx xxx průměr xxxxxx 6 xx - x xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxxxxxx xxxxxx v xxxxxx 1/100 xx prvního xxxxxx.

Xxxxxxxx xx napipetuje xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (1/1) xx xxxxxxxxxxx okének x xxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx xxx druhý xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 1.

xx) Xxx xxxx xxxxxx:

Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxx (1/10, 1/100) xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx. Napipetuje xx xxxxxxxx standardní xxxxxxxx (15 µl xx xxxxxx xxx xxxxxx xxxxxx 6 xx - u xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxx xxxxx v xxxxxxxxxx xxxxxx) resuspendované xxxxxx pro každé xxxxxx do xxxx xxxxxx. Xxxxx řada xxxx být xxxxxxx xxxx xxxxxxxx nebo xxx xxxxx xxxxxx, xxx ukazuje xxx. 2.

6.1.5.2. Xxxxxx se xxxxxxx při xxxxxx xxxxxxx nebo zahřátím xx xxxxxxx 40 xx 45 °X. Xxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxx xx xxxxxxx xxx xxxxxxxx (15 xxxxx xxx xxxxxxx 60 °C), plamenem, 95 % etanolem xxxx podle konkrétních xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxx je potřeba, xxxxxxxx sklíčka xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxx po xxxxxxxx xxxxxxx xxxx (xxxxxxxxx 3 xxxxxx) xxxx dalším xxxxxxxxxx.

6.1.5.3. Xxxxxx xX

x) Xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.x):

Xxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxx xxxxx xx xxxx xxx 1/2 titru (X/2), xxxxxxx 1/4 xxxxx (X/4), 1/2 xxxxx (X/2), xxxx (X) a xxxxxxxxxxx xxxxx (2T).

ii) Podle xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx v xxxx. 5.1.xx):

Xxxxxxxx xx pracovní xxxxxx (PŘ) xxxxxxxxxx x xxxxx IF. Xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxx xxxxxxx na xxxx xxxxx odst. 6.1.5.1.i) x 6.1.5.3.x)

Xxxxxxx 2. Xxxxxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxx xxxx. 6.1.5.1.ii) a 6.1.5.3.xx)

1. Podložní xxxxxxx xx xxxxxxxxxx na xxxxxxxxx xxxx xxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx okénko xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx musí být xxxxxxx xxxxxx jako xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxx xxxxxx x dispozici xxxxxxxxx xxxxxx od xxxxxxxxxx protilátek, xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx:

2. Podložní xxxxxxx se inkubují xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx dobu 30 xxxxx xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

3. Setřesou se xxxxx ze xxxxx xxxxxxxxxx sklíček x xxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx XX. Xxxxx xx xxxxxxxxx xx xxxx 5 xxxxx v xxxxx XX Tween (dodatek 4) x xxxxxxxx x xxxxx XX. Je xxxxx xxxxxxxx vzniku xxxxxxxx nebo xxxxxxx xxxxxxx, xxxxx by xxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx přebytečná vlhkost xxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxx xxxxx. Testovací xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx XXXX, xxxxxx xx stanovuje xxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxx xxx xxxxxx xxxx množství xxxxxxx xxxxxxxxxx.

5. Xxxxxxx se xxxxxxxx zakrytá xx xxxxxx papíru po xxxx 30 minut xxx xxxxxxxx xxxxxxx (18-25 °X).

6. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx. Sklíčko xx xxxxxxxx x xxxxx xxxx předtím (3.).

Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

7. Napipetuje xx 5-10 xx 0,1X xxxxxxxxxxx xxxxx x glycerolem (dodatek 4) xxxx komerční krycí xxxxxxxx do xxxxxxx xxxxxx x xxxxxxx xx krycí sklíčko.

6.1.5.4. Xxxxxxxxxxx XX xxxxx

1. Xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x filtry xxxxxxxx xxx xxxxxxxx FITC xxx xxxxxxxx xxxx xxxxx imersí xxx xxxxxxxx 500x xx 1&xxxx;000x. Zkoumají se xxxxxx xx dvou xxxxxxxx kolmých xxxxxxxxx x xxxxx obvodu. X xxxxxx s xxxxxxx xxxx malým xxxxxx buněk xx xxxxxx xxxxxxx 40 xxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx. Xxxxx musí xxx xxxxx fluoreskující x xxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx titru xxxxxxxxxx nebo pracovním xxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxx xxx test IF xxxxxxxx (odst. 6.1.5).

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx musí být xxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx ředění xxxxxxxxxx xxxxxx nebo xxxxx. Buňky x xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx x úvahu.

Při xxxxxxxxx z xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx být xxxx zopakován. Xx xx může stát, xxxx xxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxx vykazují xxxxxxxxx buňky xxxx xxxxxxxxxxx xxxxx nebo xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (xxxx xxxxxx xxxxxxx) xx povrchu xxxxxxx.

3. Xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxxx testu. X xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxx xxxxxxxx x xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx s atypickou xxxxxxxxxx x křížově xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx x velikostí x xxxxxxxxxx podobnou X. xxxxxxxxxxxx.

4. Xxxxx se x xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx xxxx xxxxxxxxx ředění xxxxxxxxxx podle xxxxxx 6.1.5.3.

5. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XX:

x) Xxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x typickou xxxxxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxxx počet typických xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx poli a xxxxxxxx xxxxx typických xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 5).

Xxxxxxxx XX je xxxxxxxxx x xxxxxx, xxx xx počet xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx 5 x 10³. Xxxxxx xx xxxxxxxxx za xxxxxxxxxxx infikovaný a xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

xx) Xxxxxxxx XX xxxxx je xxxxxxxxx xxx xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx méně než 5 x 10³ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx x vzorek se xxxxxxxx xx xxxxxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx.

6.1.6. Xxxxx XXX

Xxxxxxxx

Xxxxxxx-xx xx test XXX xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx x výsledek xx xxxxxxxxx, xxxx xxx povinně xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx, x sice xxxxxxx xxxx XX. Xxxxxxxx xx XXX xxxxxxx xxxx druhý screeningový xxxx x xx xxxxxxxxx, xx xxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx postupového xxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxx této xxxxxx x xxxxx rozsahu xxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxxx xxx xxxxx, xx-xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx expertíza.

Poznámka:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk X. solanacearum xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx jako xxxxxxxxx. Xxxxxxxx xxxxxxxxx citlivosti x přesnosti ve xxxxx laboratořích xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx xx schválená xxxxxxx x xxxxxxxxx PCR (xxx dodatek 6). Xxxxx xxxxx, xxxxx xx xxxxxx x interní xxxxxxxxx.

Xx třeba použít xxxxxx bezpečnostní xxxxxxxx x zabránění xxxxxxxxxxx xxxxxx cílovou DNA. Xxxx XXX xx xxx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx minimalizovala xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX.

X xxxxxxxxxxx kontrolami (x xxxxxxx extrakce DNA x PCR) by xx xxxx xxxx xxxxxxxx jako x xxxxxxxxx vzorky, xxx xxxx xxxxx, jestli xxxxx x přenosu XXX.

XXX xxxx by xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx x negativním xxxxxxxxx,

- xxxxxxxx xxxxx používaného xxx xxxxxxxx xxxxxxxx x XXX xx xxxxxx,

- xxxxxxx směs XXX.

Xxxx xx xxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx:

- xxxxxxxxx části xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxx, xx xxxxxxx byla xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx dodatek 3 X);

- xxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx X. solanacearum xx xxxx z xxxxxxxxxxxx xxxxxxx (xxxx. NCPPB 4156 = PD 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3 X);

- pokud možno, xxx XXX použít xxxx XXX extrahovanou x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx se xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxx xxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxx xx měly xxx xxxxx xxxxx xxx xxxxxx. X xxxxxxx použití PCR xxxxx xx potřeba xxxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxx xxx xxxxx test, xxxx xxxxxxx v dodatku 3.

6.1.6.1. Xxxxxx xxxxxxxxxx XXX

Xxxxxxxxx xx výše xxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 3). Test xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx jako xxxx vzorků.

K xxxxxxxxxx xxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx k xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxx xxxxxxxxxx reakcí x xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx XXX xx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx použití xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX xxxxxxxxx x dodatku. 6.

x) Metoda xxxxx Xxxxxxx (2000)

1. Xxxxxxxxxx xx 220 µx xxxxxxxxxx xxxxx (100 xX XxXX, 10 xX Xxxx-XXX (xX 8,0), 1 xX XXXX (xX 8,0)) xx 1,5 xx Xxxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

2. Přidá xx 100 µx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xx xxxxxx xx termobloku xxxx vodní xxxxx x xxxxxxxx 95 °X xx 10 xxx.

3. Mikrozkumavka xx xxxxx na 5 xxx. do xxxx.

4. Xxxxx xx 80 µx zásobního roztoku xxxxxxxx (50 xx xxxxxxxx/xx 1 xx 10 xX XxxxXXx, xX 8,0) a xxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X po xxxx 30 xxxxx.

5. Xxxxx xx 220 µx xxxxxxx Xxxx XXX® X (Xxxxxxxxxx), xxxxx promíchá xxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxx teplotě 65 °X po dobu 30 xxxxx.

6. Xxxxx xx 100 µx xxxxxxx Xxxx DNA® X (Xxxxxxxxxx), xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

7. Xxxxx xx 500 µx xxxxxxxxxxx a xxxxxxxx, xx se xxxxxxxxx xxxxx a směs xx xxxxx xxxxxxxxx.

8. Xxx xxxxxxxx xxxx x vytvoření xxxxxxxx xx směs xxxxxxxxxx xxx 15&xxxx;000 g xx xxxx 20 xxx. při xxxxxxx 4 °X.

9. Horní xxxx xx xxxxxxx xx xxxx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

10. Xxxxx se 1 xx 100 % xxxxxxx (- 20 °X), xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxx se na xxxx po dobu 10 xxx.

11. Xxxxxxxxxx xx xxx 15&xxxx;000 x xx xxxx 20 xxxxx při xxxxxxx 4 °X x odstraní xx xxxxxx x xxxxxx.

12. Xxxxx xx 500 µx 80 % xxxxxxx (- 20 °X) x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx mikrozkumavky.

13. Xxxxxxxxxx xx při 15&xxxx;000 x xx xxxx 10 xxxxx xxx teplotě 4 °X, xxxxxxx se xxxxxx a xxxxxxxx xxxxxx.

14. Peleta se xxxxx uschnout xx xxxxxxx xxxx x XXX xxxxxxx.

15. Xxxxxx xx xxxxxxxxxxxx x 100 µx xxxxxxxx XX x nechá xx stát xxx xxxxxxxx xxxxxxx nejméně 20 xxxxx.

16. Skladuje xx xxx teplotě - 20 °X xx do použití xxx PCR.

17. Xxxxxxxxx xxxx sraženina xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. 5 µx supernatantu xxxxxxxxxxxx XXX xx xxxxxxx xxx test PCR.

b) Xxxx xxxxxx

Xxxx xxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxx. Xxxxxx XXxxxx Xxxxx Xxx, by xx xxxxx xxxxxx, pokud xx xx prokázalo, xx xxxx xxx xxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxx obsahujících 10³ až 10⁴ xxxxxxxxxxx buněk na 1 ml stejně xxxxxxxxx.

6.1.6.2. XXX

1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorky x xxxxxxxx pro XXX podle xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx (6.1.6). Připraví xx desetinásobné xxxxxx xxxxxx extraktu DNA (1:10 xx sterilní xxxx).

2. Xxxxxxxx se xxxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxx XXX x xxxxxxxxx, xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx protokolů (dodatek 6). Xxxxx možno, doporučuje xx použít xxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX, xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx PCR.

3. Xx xxxxxxxxxx XXX mikrozkumavek xx xxxxx 5 µx extraktu XXX xx 25 µx XXX reakce xxxxx xxxxxxxxx XXX (viz dodatek 6).

4. Přidají se xxxxxxxxx kontrolní xxxxxx xxxxxxxxxx pouze xxxxxxx xxxx XXX x xxxxx xx xxx xxxxx XX xxxx xxx xxx, xxxxx xxx použit xx xxxxx XXX xxxxx xxxxxx.

5. XXX mikrozkumavky xx xxxxxx do xxxxx xxxxxxxxxxxx, který xxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx testování, x xxxxxx se xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx program XXX (dodatek 6).

6.1.6.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

1. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx v xxxxxxxxxx gelu. Xxxxxx xx xxxxxxx 12 µx směsi xxxxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxx xxxxxx x 3 µx xxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 6) do 2,0 % (w/v) xxxxxxxxxxx xxxx v Xxxx-xxxxxx-XXXX (XXX) xxxxx (dodatek 6) xxx 5-8 X/xx. Xxxxxxx se vhodný XXX xxxxxx, např. (xxxxxx) 100 bp.

2. Xxxxxxxx se xxxxxxx XXX xxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxxxx (0,5 mg/l) xx xxxx 30-60 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx opatření xxx xxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx.

3. X xxxxxxxxx a XX (xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxx. 302 xx) xxxxxxxxxxx gelu se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX x očekávané xxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx.

4. U xxxxx xxxxxx xxxxxx/xxxxxxx xx zkontroluje pravost xxxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx enzymové xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx XXX xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx enzymem a xxxxxx (xxx dodatek 6). Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx elektroforézou x xxxxxxxxxx xxxx a xxxxxxxx xx charakteristický xxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů xxx XX xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xx x neštěpenou a xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx testu XXX

Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikon XXX xxxxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxxxx xxxxxx zjištěn, ale xx zjištěn x xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx (v xxxxxxx xxxxxxxxxxx XXX x xxxxxxxxx kontrolními primery xxxxxxxxxxxx pro xxxxxxxx: xxxxx xxxxxxx PCR xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx vzorkem).

Test XXX xx xxxxxxxxx, jestliže xx xxxxxxx xxxxxxxx XXX specifický pro X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x (případně) xxxxx, za předpokladu, xx xxxx xxxxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx výsledku xxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxx testu x xxxxxx xxxxx xxxxxxx XXX dodatek 6).

Xxxxxxxx:

Xxx xxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxx XXX, xxxxxxxx je xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx xxxx, xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx x bramborovém xxxxxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. X xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx PCR x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX nasvědčuje inhibici xxxxxx, xxxxxxxx není xxxxxx xxxxx ze xxxx xxxxxxxxx.

X xxxxxxx, xx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx xxxx více xxxxxx negativních kontrol, xx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx.

6.1.7. Test FISH

Princip

Když xx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx test použije XXXX xxxx a xx xxxxxxxxx, xxxx xxx jako druhý xxxxxxx screeningový xxxx xxxxxxxxx izolace nebo XX test. Když xx XXXX xxxx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxx x xx xxxxxxxxx, xx x dokončení xxxxxxxx xxxxx další testování xxxxx xxxxxxxxxxx diagramu.

Poznámka:

Používají xx schválené xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (dodatek 7). Xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 10³-10⁴ xxxxx R xxxxxxxxxxxx xx xx xxxxxxx do xxxxxxxx xx xxxxxx, které xxxx xxxxxxx testovány x negativním výsledkem.

Následující xxxxxx xx xxx xxx xxxxx možno xxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxx xx xxxxx jej xxxxxxx provést s xxxxxxxxx, xxxxx byl xxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X xxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx alikvotní xxxx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx na R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx kontrola xx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 ml R. xxxxxxxxxxxx xxxxxx 2 (xxxx. kmen XXXXX 4156 = XX 2762 = CFBP 3857, viz dodatek 3) x 0,01M xxxxxxxxxx xxxxx (XX) xx 3-5 denní kultury. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxx s pozitivními xxxxxxxxxxx vzorky xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx extraktu, xxx xx uvedeno x dodatku 3 B.

Použití xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX xxxxxxxxx kontrolu xxxxxxx xxxxxxxxxxx, protože xxxxxx xxxxxxx eubakterie xxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xx xxxxxxx v xxxxx xxxxx, xx xxxxxx x dodatku 3 bodu X.

Xxxx xxxxxxxxxxx materiálu xx xxxxxxx stejným xxxxxxxx jako x xxxxxx(x).

6.1.7.1. Xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxxxxx protokol xxxxxxx x Xxxxxxxxx et xx. (1998).

1 Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx (xxx dodatek 7).

2. Xxxxxxxxxx xx 100 µl xxxxxxx vzorkového xxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx x odstřeďuje xx xx dobu 7 xxxxx na 7&xxxx;000 x.

3. Xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxx ve 200 µx xxxxxxxxx xxxxxxx připraveného xxx. 24 xxxxx xxxxxx. Xxxxxxxx xx x xxxxxxxx 1 xxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxx se 7 xxxxx při 7&xxxx;000 x, xxxxxxxx se xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 75 µ10,01M XX (xxx dodatek 7).

5. Xxxxx xx 16 µx xxxxxxxx xxxxxxxx na xxxxx 10 xxxxxxxx xxxxxxx, xxx xxxxxxx xxxxxxx 7.1, xxxxxxx xx použijí 2 xxxxx xxxxxx xx xxxxx xxxxxxx, a xx xxxxxxxx a xxxxxxx 1:100 x xxxxxxxx 10 µx (x 0,01 X XX). Xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx (49 µx) xxxx xxx uložen xxx xxxxxxx - 20 °C po xxxxxxx 1 xxxxxxxxxx xxxxxxxx 96 % xxxxxxx. X xxxxxxx, xx xx xxxxx XXXX metodu xxxxxxxx, xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxx xx xxxxxx xxxxxxxx 0,01 XX (xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7.1 Xxxxxxxxxx xx sklíčku XXXX

6. Xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx (xxxx x sušičce xxxxxxx xxx teplotě 37 °X) x xxxxxx xx xxx plamenem.

V xxxx xxxx je xxxxx xxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxx den. Xxxxxxx xx xxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx prachem x x xxxxx xxx xxxxxxxx teplotě.

6.1.7.2. Xxxxxxxxxxx

1. Xxxxxxxxxxx se buňky x xxxxxxxx etanolové xxxx 50 %, 80 % x 96 %, xxxxxxx xx xxxx 1 xxxxxx. Osuší se xxxxxxxx x držáku xxxxxxx.

2. Xxxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx komora xxxxxxxxx xxx vzduchotěsného xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx papírem xxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx (1x xxxxxx, dodatek 7). Před xxxxxxxx xx xxxxxx xxx v xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxx 45 °X po xxxx xxxxxxx 10 xxxxx.

3. Xxxxxxx xx 10 µx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (dodatek 7) xx 8 okének (okénka 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 x 10; xxx obr. 7.1) xx xxxxxx xxxxxxx, xxxxxxx dvě xxxxxxxx xxxxxx (3 x 8) xx nechají xxxxxxx.

4. Přiloží se xxxxx xxxxxxx (24 x 24 mm) xx první x xxxxxxxx 4 xxxxxx, x to xxx, xxx xxx xx xxxxxxx vzduch. Xxxxxxx xx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx vlhké xxxxxx x nechá xx xxxxxxxxxx proces xxxxxxxxxxx po dobu 5 hodin v xxxxxx při xxxxxxx 45 °X x xxxxx.

5. Xxxxxxxx xx 3 xxxxxxx xxxxxxxxxx 1 l vody x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx X), 1 x 1x xxxxxx (334 ml 3x xxxxxx x 666 xx xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx) a 1 x 1/8x xxxxxxx (42 xx 3x xxxxxx x 958 ml xxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx). Xxxxxxx se inkubovat xx xxxxx xxxxx x teplotě 45 °X.

6. Sejmou xx xxxxx sklíčka x xxxxxxxx sklíčka se xxxxxx do xxxxxx xxxxxxx.

7. Spláchne xx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xx xxxx 15 xxxxx x xxxxxxx x 1 x xxxxxxxx při xxxxxxx 45°X.

8. Xxxxx sklíček xx xxxxxxxx do xxxxxxxxxxx xxxxxxx 1/8 xxxxxx x xxxxx xx xxxxxxxxx xxxxxxx 15 xxxxx.

9. Xxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xx XXX (xxxx. Xxxxx X xxxxx) x položí xx xxxxxxxxx xxxxx. Odstraní xx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx povrchu xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx 5-10 µx xxxxxxx roztoku (např. Xxxxxxxxxxx, Xxxxx Xxxxxxxxxxxx, XX, XXX xxxx xxxxxxx) do každého xxxxxx a celé xxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx sklíčkem (24 x 60 xx).

6.1.7.3. Xxxxxxxxx XXXX xxxxx

1. Xxxxxxx xx xxxxx prohlížejí pod xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx 630 x xxxx 1 000 x xxx olejovou xxxxxx. X filtrem xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx (XXXX) xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx (xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx) xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Použitím filtru xxx xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-5-xxxxxxxxxxxxx xx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx Xx3 xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx morfologie x xxxxxxxxxx pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxx být jasně xxxxxxxxxxxxx a zcela xxxxxxxx. Xxxx FISH (xxxx. 6.1.7) xxxx xxx zopakován, xxxxx xx zbarvení xxxxxxxx. Xxxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxx x pravých xxxxxx x xxxxx xxxxxx. X vzorků, xxx xxxxxx pozorovány xxxxx xxxx xxxx xxxxx, xx xxxxxxxx xxxxxxx 40 polí xxxxxxxxxx.

2. Xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx pro X. solanacearum v xxxxxxxx xxxxxxxxxxx sklíček. Xxxxxxxxx fluorescence musí xxxxxxxxx xxxx být xxxxx xxx x xxxxxxxxxxx kontrolního xxxxx. Xxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx fluorescenci, xx neberou x xxxxx.

3. Xxx xxxxxxxxx xx jakoukoli xxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxxx. Xx může xxxxxx x xxxxxxx, xxx všechna xxxxxxx xx xxxxx ukazují xxxxxxxxx buňky x xxxxxx kontaminace pufru xxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx buňky zjištěny (xxx xxxxxx sklíčka) xx xxxxx sklíčka.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxx XXXX x xxxxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxx. Je xxxxxxxxxxxxx, xx x xxxxxx z bramborových xxxx a pelet xx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx na pozadí x xxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xx křížové xxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxx xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx, i xxxx xxxxxx méně častěji xxx x xxxxx XX.

5. V xxxxx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx s xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx.

6. Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXX

x) Výsledky XXXX xxxxx xxxx xxxxxx, xxxxx xxxx xxx xxxxxxx XXXX xxxxxx xxxxx zeleně xxxxxxxxxxxxx buňky x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxx červeně fluoreskující xxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx jsou xxxxxxxx xxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxx, odhadne xx xxxxxxxx počet xxxxxxxxx xxxxx x 1 xxxxxxxxxxxxx xxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx v 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety (dodatek 4).

Xxxxxx, xxxxx obsahují xxxxxxx 5 x 10³ xxxxxxxxx xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxxx pelety, xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxx testování. Xxxxxx, xxxxx xxxxxxxx xxxx xxx 5 x 10³ typických buněk xx 1 ml xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx, xx xxxxxxxx za negativní.

ii) Xxxxxxxx FISH testu xx negativní, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxx nejsou xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx fluoreskující xxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx jsou tyto xxxxxxx xxxxx červeně xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxx rhodaminového xxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.8. Xxxxx XXXXX Xxxxxxx

Xxxxx XXXXX xxx xxxxxx pouze jako xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxx XX, PCR xxxx XXXX xxx xxxx xxxxxxxxx nízkou xxxxxxxxx. Xxx xxxxxxx XXX ELISA xx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx povinné. Xxxxxxxxx xxxxxx před xxxxxxxx testu XXXXX xxxx zvýšit citlivost xxxxx, ale xxxx xx xxxxxx xxxxxx x xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx.

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx se xxxxxxxxxx zdroj xxxxxxxxxx X. solanacearum. Doporučuje xx určení titru xxx xxxxxx novou xxxxx protilátek. Xxxx xx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxx, xxx xxxxxx dojde k xxxxxxxxx reakci xxx xxxxxxxxx suspense obsahující 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene X. solanacearum x xxxxxxx vhodných xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx podle xxxxxxxxxx xxxxxxx. Xxx xxxxxxxxx xx xxxx xxx použity protilátky x xxxxxxxxx ředění, xxxxx je xxxxxx xxxx stejné xxxxx xxxxx xxxxxxxx formulace.

Určí xx xxxx protilátek xxx suspenzi 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx xxxxxxxxxxxxx kmene R. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx otestován jako X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxxx působeni x xxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx (XXX) xx použijí xxxx xxxxxx negativní xxxxxxxx.

Xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx, xxxxx xxxx předtím xxxxxxxxxx xxxx negativní, x xxxxxxx 10³ xx 10⁴ buněk xx 1 ml xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx (např. xxxx XXXXX 4X56 = XX 2762 = XXXX 3857, viz dodatek 2 A x X). Pro srovnání xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x XXX X. xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxx xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx xx xxxxxx k xxxxxxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx, které xx xxxxxxxxx pro tento xxxx, xxxx uvedeny x dodatku 3 xxxx X.

Xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx test xxxxxx(x).

Xxxxxxxxxx xxxx dva xxxxxxxxx XXXXX.

x) Nepřímý xxxx XXXXX (Xxxxxxxx Xxxxx et xx., 1995)

1) Použije se 100-200 µx xxxxxxxxxx xxxxxxxx. (Xxxxxxx xx 100 °X xx 4 xxxxxx xx xxxxx lázni xxxx xxxxxx boxu může x některých xxxxxxxxx xxxxxxxxx vznik xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx).

2) Přidá xx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx uhličitanového xxxxxxx xxxxx (dodatek 4) a xxxx se promíchá.

3) Xxxxxx xx 100 µx xx xxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxxx destičky (xxxx. Xxxx-Xxxxxxxx nebo xxxxxxxxxx) x nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X nebo 14 - 18 x xxx xxxxxxx 4 °X.

4) Extrakty xx xxxxxx x xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4) x xxxxxxxx vymývací xxxxxx xx xxxxx x xxxxx xxxxxxx 5 xxxxx.

5) Xxxxxxxx se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx xxxxx R. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). U validovaných xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxx doporučená xxxxxx (xxxxxxx dvojnásobné xxxxxxxxxxx, xxx je titr).

6) Xxxxx se 100 µx xx každé xxxxx a nechá xx xxxxxxxxx 1 xxxxxx při teplotě 37 °X.

7) Roztok xxxxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxx a xxxxx xx vymyjí xxxx xxxxxxx (xxx 4.).

8) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx pufru. Přidá xx 100 µx xx xxxxx jamky x xxxxx se xxxxxxxxx 1 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X.

9) Xxxxxxxx xx xxxxxx z jamek x jamky se xxxxxx jako xxxxxxx (xxx 4).

10) Přidá xx 100 µl xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx roztoku xxxxxxxxx (dodatek 4) xx xxxxx xxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxxx x xxxxx při pokojové xxxxxxx x xxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxx 405 xx x xxxxxxxxxxxx 90minutových intervalech.

b) XXX-XXXXX

1) Připraví se xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxxxx xxxxx xX 9.6 (dodatek 4). Přidá xx 200 µx xx xxxxx jamky. Xxxxx xx xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 37 °X 4 xx 5 xxxxx xxxx 4 ° X po xxxx 16 xxxxx.

2) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4). Přidá xx 190 µx xxxxxxxx xx vzorku xx nejméně dvou xxxxx. Přidají xx xxxxxx pozitivní a xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xx dvou xxxxx xx xxxxx destičce. Xxxxx xx inkubovat 16 xxxxx xxx xxxxxxx 4 °X.

3) Xxxxx se třikrát xxxxx vypláchnou xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

4) Xxxxxxxx xx xxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx monoklonálních xxxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x XXX (dodatek 4) x xxxxxxx 0,5 % xxxxxxxx xxxxxxxx albuminu (XXX), xxxxx xx 190 µx xx xxxxx xxxxx a xxxxx xxxx 2 xxxxxx xxx xxxxxxx 37 °C.

5) Xxxxx xx třikrát xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

6) Xxxxxxxx xx xxxxxx protimyšího xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx alkalickou xxxxxxxxxx x XXX. Přidá xx 190 µx xx xxxxx xxxxx x xxxxx se xxxxxxxxx 2 hodiny xxx xxxxxxx 37 °X.

7) Xxxxx xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXX-Xxxxx (dodatek 4).

8) Xxxxxxxx se xxxxxx 1 xx x-XXX/xx xxxxxxxxx xxxxxxxxx v xxxxxxxxxxxx pufru (dodatek 4). Xxxxx se 200 µx do xxxxx xxxxx a xxxxxxxx xx x xxxxx xxx pokojové xxxxxxx. Xxxxxxxxxx xxx 405 xx se odečítá x xxxxxxxxxxxx intervalech 90 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx XXXXX

Xxxx XXXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx (XX) z xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxx xx xxxxx xxx xxxxxxxxxxx OH x negativního kontrolního xxxxxx, xxxxx xxxxxxx xxxxxxx XX xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx vzorků jsou xxxxx xxx 1,0 (xx 90 xxxxxxxx xxxxxxxx xx substrátem) x xxxx xxxxx xxx dvojnásobek XX xxxxxxx z negativních xxxxxxxxxx extraktů.

Test ELISA xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx XX x xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx XX x xxxxxxxxxx xxxxxxxx testovaného xxxxxx, xxxxx xxxxxxx XX xx xxxxx negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxx než xxxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX v pozitivních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx ukazují, xx xxxx xxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xx byl xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx hodnoty XXXXX x negativních xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx, xx xxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx.

6.1.9. Biotest

Poznámka.:

Předběžné xxxxxxxxx touto xxxxxxx xx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx 10³ xx 10⁴ xxxxxxxx xxxxxxxxx kolonie X. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx xxxxxxx xx xxxxxxxx ze xxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx xxxxxxxxx (xxxxxxxx xxx x dodatku 3).

Nejvyšší citlivost xxxxxxxx xxx xxxxxxxx xxx použití čerstvě xxxxxxxxxxxx extraktu xx xxxxxx x x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx podmínkách. Xxxxxx lze xxxx xxxx úspěšně xxxxxx xx xxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxxxx v xxxxxxxxx v xxxxxxx - 68 xx - 86 °X.

Xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx x Xxxxxxx (1988):

6.1.9.1. Xxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxx xxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxx Xxxxxxxxxx xxxx kultivaru x rovnocennou citlivostí xxxxx testovací laboratoře) xx fázi xxxxx xxxxxxx listů u xxxxxxx vzorku. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx viz v dodatku 8. Nebo xx xxxxxxx xxxxx (xxxx. xxxxxxxx Xxxxx Xxxxxx xxxx xxxxxxxxx s xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx), ale xxx xxxxxxxx ve xxxx 2. až 3. listů až xx xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxx. Xxxxxxxx x xxxxx xxxx méně xxxxxxx x xxxxxxxx xx xxxxxxxx. Xxxxx xxxxx, xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxx xxxxxx.

6.1.9.2. Xxxxxxx xx 100 µx xxxxxxxx ze xxxxxx xxxx xxxxxxxxx rostliny.

1. Xxxxxxxxx xxxxxxxx stříkačkou

Inokulují xx stonky xxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxx x podkožní xxxxxx (xx xxxx než 23X). Vzorek xx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

2. Xxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx prsty a xxxxxxx se xxxxx xxxxxxxxx 5-10 µl xxxxxxxxxxxx pelety xx xxxxxx mezi děložními xxxxx a prvním xxxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxx xxxxxx řez xxx 1 xx xxxxxx x xxxxxxx xxxxxxxxx 2/3 xxxxxxxx xxxxxx, přičemž xxx xx začne v xxxxx xxxxx resuspendované xxxxxx.

Xxx se xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxx stříkačky.

6.1.9.3. Xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx 5 sazenic vodní xxxxxxxx 10⁵ xx 10⁶ buněk na 1 xx, xxxxxxxxxxx xx 48 xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxx 2 R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx, x xxxxxxxxx xxxxxx (dodatek 4) xxxx negativní xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxx se xxxxxxxxx x negativní xxxxxxxxx rostliny xx xxxxxxxxx xxxxxxx, xxx xx zabránilo xxxxxxxx xxxxxxxxxxx.

6.1.9.4. Testovací xxxxxxxx xx xxxxxxx růst x xxxxxxxxxxx zařízení 4 týdny xxx xxxxxxx 25 - 30 °C x xxxxxx xxxxxxxxx vlhkosti x xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xx zabránilo xxx přemokření, xxx xxxxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxx vody. Xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx nebo xxxxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx izolovány. Xxxxxx-xx xxx xxxxxxxx z xxxxxxx xxxxxx po xxxx inkubace xxxxxx xxxxxx xxxx, oddělí xx vhodnými xxxxxxxxx. Xxx hnojení, xxxxxxxx, xxxxxxxxxx x xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx se xxxxxx xxxxxxxx pozornost xxxx, xxx nedošlo x xxxxxxxx xxxxxxxxxxx. Xxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx hmyzích xxxxxx, protože by xxxxx přenést xxxxxxxx xxxx xxxxxx.

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxx, xxxxxxxxx, xxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxx.

6.1.9.5. X xxxxxxxxxxxx xxxxxxx se xxxxxxx xxxxxxx (odst. 2.3) x identifikují xx xxxxxxxxx čisté kultury (xxx 6.2.).

6.1.9.6. Xxxxxxxx xxxxx 3 xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxx žádné xxxxxxxx, xxxxxxx se xxxx XX/XXX/xxxxxxx na xxxxxxxx vzorku xx xxxxxxxx stonků xxxxxxxx 1 cm x xxxxx testovací rostliny, xxxxxxxxxx xxx místem xxxxxxxxx. Xx-xx test xxxxxxxxx, xxxxxxxx se xxxxxxxxx roztěry (bod 4.1).

6.1.9.7. Xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxx kultury x xxxxxxxxxx xx X. xxxxxxxxxxxx (xxx 6.2.).

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx jsou xxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxx xxx x těchto xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx.

Xxxxxxx xx negativní, xxxxxxxx xxxxxxxx nejsou infikovány xxxxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxxxxx u xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx testovacích rostlin.

Biotest xx pozitivní, xxxxxxxx xxxxxxxxx rostliny jsou xxxxxxxxxx bakteriemi X. xxxxxxxxxxxx.

6.2. Xxxxxxxxxxxxx xxxxx

Xxxxxxxxxxxx xx čisté xxxxxxx xxxxxxxxxxx podezřelého xxxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx založených xx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xx případně xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx pro xxxxx xxxxxxxxx test (xxx dodatek 3).

6.2.1. Xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx identifikační xxxxx

Xxxxxx xx následující xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxxx xxxx xxxxxx přítomny xxxx naopak chybí x R. xxxxxxxxxxxx, xxxxxxxx Lelliott x Xxxxx (1987), Xxxxxxx xx xx. (1990), Xxxxxx (2001).

Text Xxxxxxxxx xxxxxxxx

Xxxxxxxx fluorescenčního xxxxxxxx -

Xxxxxxx XXX +

Xxxxxxxx xxxxxxxxxxx test O+/F-

Katalázová xxxxxxxx +

Xxxxxxxxx test xxxxx Xxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxxxx +

Xxxxxxx xxxxxxx +

Xxxx xxx 40 °X -

Růst x 1% NaCl +

Růst x 2% NaCl -

Xxxxxxx-xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Hydrolýza xxxxxx -

Xxxxxxxxx xxxxxxxx -

Produkce xxxxxx -

Xxxxx a xxxxxx viz Xxxxxxx&xxx;Xxxxx (1987).

6.2.2. Xxxx IF

6.2.2.1. Xxxxxxxx xx suspenze xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 ml x pufru XX (dodatek 4).

6.2.2.2. Připraví xx xxxx dvojnásobných xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.2.3. Použije xx XX metoda (6.1.5.).

6.2.2.4. Xxxx IF xx xxxxxxxxx, jestliže xxxx XX xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.3. Xxxx XXXXX

Xxxxxxxx:

Xxx xxxxxxxxx xxxxx 2 xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx se xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx xxxx sérologický xxxx.

6.2.3.1. Připraví xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 108 xxxxx xx 1 xx x 1X XXX (dodatek 4).

6.2.3.2. Xxxxxxx xx xxxx XXXXX xx specifickou xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x R. xxxxxxxxxxxx.

6.2.3.3. Xxxx ELISA xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xxxxxxx jeho výsledku xxxxxxx x xxxx xxxxxxx xx nejméně xxxxxxxxx x xxxxxxxxx x hodnotou z xxxxxxxxx xxxxxxxx.

6.2.4. Xxxxx XXX

6.2.4.1. Xxxxxxxx se xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx sterilní vody (XXX = ultra xxxx xxxxx).

6.2.4.2. Ohřeje xx 100 µx xxxxxxx suspense v xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx v xxxxxxxxx xxxxx xxxx xxxxxx vodní lázni xxx 100 °X 4 xxxxxx. Vzorky xxxxx xxx xxxxxxxx xxx xxxxxxx - 16 xx - 24 °X do xxxxxxx xxxxxxx.

6.2.4.3. Xxxxxxx xx příslušné postupy XXX x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx pro X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxxx xx xx. (1993); Xxxxxxx a Xxxxx (2000); Xxxxxxx xx xx. (2002); Xxxxxxxx et xx. (1999); Xxxxx xx xx. (1997), Xxxxxx xx xx. (1999).

6.2.4.4. Xxxxxxxxxxxx organismu X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx amplikony PCR xxxx xxxxxxx xxxxxxxx x mají stejnou xxxxxxxxxxxxx xxxxx fragmentů xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxx.

6.2.5. Xxxx XXXX

6.2.5.1. Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxx 10⁶ xxxxx xx 1 xx x UM.

6.2.5.2. Použije xx metoda FISH (6.1.7) s xxxxxxx 2 oligosondami xxxxxxxxxxxx xxx R. solanacearum (dodatek 7).

6.2.5.3. Xxxx XXXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx x kultury x pozitivní kontroly xxxxxxx xxxxxxxx reakcí.

6.2.6. Xxxxxxx mastných xxxxxxx (XXX)

6.2.6.1. Xxxxxxx xx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx-xxxxxxx xxxxx (Xxxxx) 48 xxxxx xxx xxxxxxx 28 ^oC.

6.2.6.2. Použijte xx metoda XXX (Xxxxx, 1991; Xxxxx, 1992).

6.2.6.3. Xxxx XXX xx xxxxxxxxx, xxxxxxxx xx profil podezřelé xxxxxxx xxxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx charakteristických xxxxxxxx xxxxxxx: 14:0 3OH, 16:0 2OH, 16:1 2XX x 18:1 2XX a xxxxxxx 16:0 3OH xxxxxxxxx xx Ralstonia sp.

6.2.7. Xxxxxx charakteristiky kmenů

Pro xxxxx xxxx xxxxxx xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx jedné x xxxxxxxxxxxxx metod.

U xxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx (xxx dodatek 3).

6.2.7.1. Stanovení xxxxxxx

X. solanacearum tvoří xxxxxxx lišící xx xxxxxxxxxx využití x/xxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx x xxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxxxx, 1964 x Xxxxxxx et xx., 1990). Xxxxx xxxx xxx xxxx xxxxxxx xx popsána x dodatku 2. Xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx do xxxxx xxxx s čistou xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx x inkubací xxx xxxxxxx 28 °C. Xx-xx xxxxx xxxx xxxxxxxxx xx sterilní xxxxxxxx s 96 xxxxxxx (200 µx xx 1 jamku), xxxxxxxx se mění xxxxx 72 xxxxx xx xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxx pozitivní xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxxxxxx xxxxx xxx rozlišení xxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2

(¹) Viz Lelliott x Stead (1987).

6.2.7.2. Xxxxxxxxx variabilita

Molekulární xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx R. xxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx, xxxx xxx xxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxxx xx al., 1989).

2. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx PCR x xxxxxxxx primerů XXX, BOX x XXXX (Xxxxx et xx., 1995; Xxxxx xx xx., 1995).

3. Xxxxxxx délkového xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx XXXX (Xxx xxx Wolf xx xx., 1998).

6.2.7.3. Xxxxxx XXX

Xxxxxxxxxx primery XXX (Xxxxxxx xx xx, 2002; xxx dodatek 6) xxx xxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxx 1 (xxxxxxx 3, 4 x 5) x xxxxxxx 2 (xxxxxxx 1, 2A x 2X) X. xxxxxxxxxxxx, xxx xxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx XXXX (Xxxx et xx., 1989) a xxxxxxxxxxxx 16X xXXX (Xxxxxxx xx xx., 1996).

6.3. Xxxxxxxxxxx test (xxxx xxxxxxxxxx)

Xxxx závěrečné xxxxxxxxx diagnózy X. xxxxxxxxxxxx x x xxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxxx jako R. xxxxxxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxx test patogenity.

1) Xxxxxxxx xx xxxxxxxx x hustotě xxxxxxxxx 10⁶ buněk xx 1 xx xx 24 xx 48 xxxxxxxxxx xxxxxx x xxxxxxxxx x příslušný xxxx xxxxxxxxx kontroly X. xxxxxxxxxxxx (xxxx. XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857; xxx dodatek 3).

2) Xxxxxxxxx xx 5 xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxx rajčete xxxx lilku ve xxxx 3 pravých xxxxx (viz xxxx. 6.1.9).

3) Sazenice xx xxxxxxx xxxxxxxxx xx 2 týdny xxx xxxxxxx 25-28 °X x vysoké relativní xxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx zaléváním, xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx půdy. U xxxxxxx xxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxx xxxx xxxxxx xxxxx 14 xxx. Neobjeví-li xx xx xxxx xxxx xxxxxxxx, xxxxxxx xxxxxx xxx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

4) Xxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxx x/xxxx xxxxxxxxx, chlorózy xxxx xxxxxx.

5) Xxxxxxx xx xxxxxxx x rostlin xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx odebráním xxxxxxxx ze stonku xxx 2 xx xxx xxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxx xx xxxxxxxx x xxxxxxxxxx x xxxxx množství xxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxx xxxx 50 xX xxxxxxxxxxx xxxxx (dodatek 4). Izolace xx xxxxxxxx xx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxx (dodatek 2). Xx xxxxxxxx 48 až 72 xxxxx při xxxxxxx 28 °C se xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx 2

x) Xxxxx xxxx xxx izolaci a xxxxxxxxx

Xxxxx agar (XX)

Xxxxx xxxx (Difco) 23,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx se xxxxxx x sterilují xxxxxx xxx teplotě 121 °X xx dobu 15 minut.

Kvasnično-pepton-glukózový xxxx (XXXX)

Xxxxxxxxxx extrakt (Xxxxx) 5,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 5,0 x

X(+) Xxxxxxx (xxxxxxxxxx) 10,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx a xxxxxxxxx tlakem xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxxxxxxxxxxx agar (XXX)

Xxxxxxxxx 20,0 x

Xxxxx-Xxxxxxx (Xxxxx) 5,0 x

X₂XXX₄ 0,5 x

XxXX₄. 7H₂O 0,25 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

xX 7,2-7,4

Xxxxxxxx xx xxxxxx a xxxxxxxxx x autoklávu xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxxxx letrazoliové médium

kasein xxxxxxxxxx (Difco) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Xxxxx) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 x

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx složky a xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx xx xx 50 °X x přidá se xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx roztok 2,3,5-xxxxxxxx-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx (Xxxxx), až xx xxxxxxxx konečné xxxxxxxxxxx 50 mg xx xxxx.

x) Validované xxxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx SMSA (Englebrecht 1994 xx xxxxx Xxxxxxxxxxx xx al., 1996)

Xxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxxxxx xxxxxxxx (Xxxxx) 1,0 x

Xxxxx-Xxxxxx (Difco) 10,0 x

Xxxxxxxx 5,0 xx

Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) (xxx xxxx. 2) 15,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx x xxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °X xx xxxx 15 minut.

Ochladí se xx 50 °X x xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx složek, aby xx xxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxxx:

Xxxxxxxxxx violeť (Xxxxx) 5 xx/x

Xxxxxxxxx-X-xxXxxx (Xxxxx X1004) 600 000 X (xxxxxxxxx 100 xx)/x

Xxxxxxxxxx (Xxxxx B-0125) 1&xxxx;250 U (přibližně 25 xx)/x

Xxxxxxxxxxxxxx (Signa X-3175) 5 mg/l

Penicilín-G (Xxxxx P-3032) 825 X (xxxxxxxxx 0,5 xx)/x

2,3,5-xxxxxxxxxxxxxxxxxxx chlorid (Xxxxx) 50 xx/x

Xxxxxxxx:

1. Použití xxxxxx xxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx xxxx X. xxxxxxxxxxxx.

2. Místo Xxxxx-Xxxx (Xxxxx) xxxx xxx xxxxxx Oxoid Xxxx #1. X xxxxxxx xxxxxxx bude xxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxx xxxx xx xxxx omezit xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx. Typické xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx xxxxx tvořit x 1-2 xxx xxxx x xxxxxxx xxxxxxxx xxxx xxx xxxxxxxxx a xxxxxxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxx Xxxxx-Xxxxx.

3. Xxxxxxx koncentrace xxxxxxxxxxx xx 2&xxxx;500 X/x xxxx omezit xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx bakterií xxx ovlivnění xxxxx

Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx a skladují xxx xxxxxxx 4 °X x xxxxx x xxxx xx xxxxxxxxxxx do 1 xxxxxx. Misky s xxxxxx xx měly xxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx kondenzace. Xxxxx xxxxxxxx přílišnému xxxxxxxx xxxxx.

Xxxxx nově xxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xxxx xx měla xxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx živné půdy xxxxxxxx xxxxxxxx referenční xxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx xx médium (xxx xxxxxxx 3) x xxxxxxxxxxx, xxx xx xx 2 xx 5 xxxxx xxx xxxxxxx 28 °C xxxxxx xxxxxxx xxxxxxx.

x) Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx

Xxxxx xxxx XXXX (Elphinstone xx xx., 1996)

Xxxxxxx se xxxxxxxx xxxx pro xxxxxxxxxx xxxxxxxx živnou xxxx XXXX, ale xxxxxxx xx Xxxxx-Xxxx x 2,3,5- xxxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxx živná xxxx Xxxxxxxx (Xxxxxx et xx., 2002)

Xxxxxxxxx 10 x

Xxxxxxxxxx xxxxxx 5 x

X₂XXX₄ 0,5 g

MgSO₄ 0,25 x

XxXX₃ 0,25 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxx teplotě 121 °X po dobu 15 minut x xxxxxxx xx na 50 °C. Přidá xx antibiotický xxxxxxx xxxxxx jako xxx xxxxxx xxxx XXXX.

Xxxxxxx 3

X. Xxxxxxxx standardizovaný xxxxxxxxx xxxxxxxx

x) Izolované xxxxxxxxxxx kultury

Následující xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxx xx xxxxxxxxxx jako xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx bud' x xxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 1) xxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxx (xxxxxxx 2). Všechny xxxxx xxxx xxxxxxxx xxxxxxxx x xxx xx xxxxxx x xxxxxx xxxxxx:

1. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxx bakterií rostlin (XXXXX), Ústřední xxxxxxx xxxxxxxxx Xxxx, XX.

2. Xxxxxx xxxxxx sekce xxxxxxx xxxxxxx (XX), Xxxxxxxxxx, Xxxxxxxxxx.

3. Xxxxxxxxxxx xxxxxx patogenních xxxxxxxx xxxxxxx (CFBP), ústav xxxxxxxxxxxxxxxxx XXXX, Xxxxxx, Xxxxxxx.

Xxxxxxx 1: Xxxxxxxxxx xxxxx izolovaných xxxxxxxxxxxxx xxxxxx SMT X. xxxxxxxxxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxxx být xxxxxxxx pouze v xxxxxxx, xx xxxxxxxxx x původních xxxxxx xxxxxx.

Xxxxxxx 2: Xxxxxxxxxx xxxxx XXX sérologicky xxxx xxxxxxxxx příbuzných xxxxxxxx x xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx testů

x) Komerční xxxxxxxxxxxxxxx kontrolní xxxxxxxx

Xxxxxxx sušené xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx ze 200 xxxxxxxx xxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxx xxxxx.

Xxxxxxx xxxxxx xxxxxx bramborového xxxxxxxx xx 200 xxxxxxxx hlíz xxxxxxxx xxxxxxxxxx 10³ xx 10⁴ x 10⁴ xx 10⁶ buněk xxxxxxx 2 X. xxxxxxxxxxxx (kmen NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857) jako xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx a XXX xxxxx. Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buňky xx xxxxxxxxx lyofilizací, xxxxxx xxxx xxxxxx jako xxxxxxxxx x xxxxxxx xxxxxxx a xxxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx 2 X. solanacearum (xxxx XXXXX 4156 = XX 2762 = XXXX 3857) x 10⁶ xxxxxxx xx 1 ml k xxxxxxxxx xxxxxxxx sérologických xxxxx.

X. Xxxxxxxx pozitivních x negativních xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxx testy xxxxxxxx xxxxxx PCR/IF x FISH

Kultivuje se 48xxxxxxxx xxxxxxx virulentního xxxxx X. xxxxxxxxxxxx xxxx 3/xxxxxxx 2 (xxxx. xxxx XXXXX 4156 = PD 2762 = XXXX 3857) na SMSA xxxxx půdě a xxxxxxxxxx se x 10 mM xxxxxxxxxx xxxxx, xxx xx xxxxxxx xxxxxxx hustota xxxxxxxxx 2 x 10⁸ xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx na 1 xx. Xxxxxxx se xx xxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xx optické xxxxxxx 0,15 xxx 600 xx.

Xxxxxxx xx xxxx x xxxxxxxxx konců 200 hlíz x xxxxxxxx odrůdy x xxxxx xxxxxxx, o xxxxx xx ví, xx xx xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx.

Xxxxxxxx xx xxxxxxx konce xxxx xxxxxxxx postupem x xxxxxxxxxxxx xx xxxxxx x 10 xx. Xxxxxxxx xx 10 xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx o xxxxxx 1,5 ml x 900 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxx. Přenese xx 100 µx xxxxxxxx R. solanacearum xx xxxxx mikrozkumavky x xxxxxxxx xx. Xxxxxxx xx desetinásobné xxxxxx x xxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxxxxxx.

Xxxxxx šest xxxxxxxxxxxxxxx mikrozkumavek xx xxxxxxx jako xxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx se použijí xxxx xxxxxxxxx negativní xxxxxx. Mikrozkumavky xxxx xxx xxxxx označeny.

Připraví xx alikvotní části x 100 X1 xx sterilních zkumavkách x objemu 1,5 xx, čímž xx xxxxx 9 xxxxx xxxxxxx kontrolního vzorku. Xxxxxxxx xx xxx xxxxxxx -16 až - 24 °X xx xx xxxx xxxxxxx.

Xxxxxxxxxx x xxxxxxxx X. xxxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xx xxxx být nejprve xxxxxxxxx testem XX.

Xxx XXX xxxx se xxxxxxx xxxxxxxx XXX x pozitivních x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou sérii xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx XX x XXXX testy xx provede xxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxxxx kontrolních vzorků xxx každou xxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx.

Xxx kvantitativních xxxxxxxxx XX, XXXX x PCR xxxx xxx R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxx v xxxxxxx x 10⁶ x 10⁴ xxxxx/xx xxxxxxxxxxx xxxxxxx x xxxxx xxx zjištěn x xxxxx z negativních xxxxxxx.

Xxxxxxx 4

XXXXXX: Xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxx po xxxx xx jednoho xxxx.

1. Xxxxx xxx xxxxxxxx

1.1 Xxxxxxxxx xxxx (50 xX fosfátový pufr, xX 7,0)

Xxxxx pufr xx xxxxxxx x xxxxxxxx xxxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄ (xxxxxxx) 4,26 x

XX₂XX₄ 2,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

Xxxxxxxx xx xxxxxx, xxxxxxxxxxx pH x xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx dobu 15 xxx.

Xxxxxxxx mohou xxx xxxxxxxxxxx xxxxxx:

1.2. Xxxxxxxx xxxx (10 mM xxxxxxxxx xxxx, xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx xxx xxxxxxxxxx a xxxxxx extraktů x xxxxxxxx x xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxx xxxx, co xxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx do xxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje xX a xxxxxxxxxxx x xxxxxxxxx xxx 121 °X xx xxxx 15 min.

2. Xxxxx xxx XX xxxx

Xxxx pro IF (10 xX fosfátový xxxx ve xxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (PBS), xX 7,2)

Xxxxx xxxx se xxxxxxx k xxxxxx xxxxxxxxxx.

Xx₂XXX₄.12X₂X 2,7 x

XxX₂XX₄. 2X₂X 0,4 x

XxXx 8,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 l

Rozpustí se xxxxxx, xxxxxxxxxxx xX x sterilizuje v xxxxxxxxx při 121 °X xx xxxx 15 xxx.

XX-xxxx-Xxxxx

Xxxxx xxxx xx xxxxxxx x xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxx.

Xxxxx xx 0,1 % Xxxxx 20 x xxxxx xxx XX.

Xxxxxxxxx xxxx v xxxxxxxxx, xX 7,6

Tento xxxx xx xxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxx xx xxxxxx xxxxxxx xx XX xxxxx k xxxxxxx fluorescence.

Na₂HPO₄.12H₂O 3,2 x

XxX₂XX₄. 2H₂O 0,15 x

Xxxxxxxx 50 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 100 xx

Xxxxx xxxxxxx jsou xxxxxxxx xxxxxxxx, např. Vectashield® (Xxxxxx Laboratories) xxxx Xxxxxxxxx® (Xxxxx).

3. Xxxxx xxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxx XXXXX

3.1. Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx potahovací xxxx, xX 9,6.

Xx₂XX₃ 6,36 x

XxX XX3 11,72 x

Xxxxxxxxxxx voda 1,00 x

Xxxxxxxx se složky, xxxxxxxxxxx xX a xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx 121 °C xx xxxx 15 xxxxx.

Xxxxx xxxxxxx obsahuje xxxxxx podíl aromatických xxxxxxx, xx xxxxx xxxx xxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx (0,2 %).

3.2. Desetinásobný xxxxxx xxxxxxxx xxxxxxx pufrovaný xxxxxxxx (10 x XXX), xX 7,4

XxXX 80,0 x

XX₂XX₄ 2,0 x

Xx₂XXX₄. 12H₂O 29,0 x

XXX 2,0 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,00 x

3.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 100 ml

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 895 xx

3.4. Blokační xxxx (xxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxx).

10 x XXX 10,0 xx

Xxxxxxxxxxxxxxxxxxx-44000 (PVP-44) 2,0 x

10 % Xxxxx 20 0,5 xx

Xxxxxx mléko 0,5 x

Xxxxxxxxxxx xxxx doplnit xx 100 xx

3.5. Xxxxxx pro substrát xxxxxxxxx xxxxxxxxx, pH 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 97 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 800 ml

Rozpustí xx a xxxxxxxxxxxxxx XXx xx upraví xX xx 9,8.

Doplní xx xx 1 x destilovanou vodou.

Přidá xx 0,2 x XxXX₂.

Xxxxxxxx xx xxx 5 xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx substrátu (Xxxxx) x 15 xx xxxxxxx.

4. Xxxxx xxx xxxxx xxxxx DASI XXXXX

4.1. Xxxxxxxxxx xxxx, pH 9,6.

Na₂CO₃ 1,59 g

NaH CO₃ 2,93 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 ml

Rozpustí xx xxxxxx x xxxxxxxxxxx xX 9,6.

4.2. 10 x xxxxxxxxxxxx xxxx (XXX) pH 7,2 - 7,4

NaCl 80,0 x

Xx₂XXX₄ .12H₂O 27 x

XxX₂XX₄ . 2H₂O 4 g

Destilovaná voda 1&xxxx;000 xx

4.3. XXX-Xxxxx

10xXXX 50 xx

10 %Xxxxx 20 5 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 950 xx

4.4 Xxxxxxxxxxx pufr, xX 9,8

Xxxxxxxxxxxxx 100 xx

Xxxxxxxxxxx xxxx 900 xx

Xxxxxx xx x nastaví xx hodnota xX 9,8 xxxxxxxxxxxxxx XXx.

Xxxxxxx 5

1. Vypočítá xx xxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk v xxxxxx pozorovacím xxxx (x).

2. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxx x xxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx (C).

C = x x X/x,

xxx X = xxxxxx jednoho pole xx sklíčku x xxxx okénky a

s - xxxxxx xxxx xxxxxxxxx.

x = πi²/4G²K²,

kde x = xxxxxxxxxx xxxx (x xxxxxxx 8 - 24 xxxxx typu xxxxxxx),

X = tubusový koeficient (1 nebo 1,25),

G = xxxxxxxx xxxxxxxxx (100 x, 40 x atd.).

3. Xxxxxxxx xx xxxxx xxxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxxx buněk na 1 xx resuspendované xxxxxx (N).

N =X x 1&xxxx;000/x x X,

xxx x = xxxxx xxxxxxxxxxxxxx pelety x xxxxxx xxxxxx x

X = xxxxxxxxx xxxxxx resuspendované pelety.

Dodatek 6

Xxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx xxx XXX

Xxxxxxxx:

Xxxxxx xxxxxxxxx by mělo xxxxxxx reprodukovatelné zjištěni xxxxxxx 10³ až 10⁴ xxxxx R. xxxxxxxxxxxx xx 1 xx vzorkového xxxxxxxx. Xxxxxx xxxxxxxxx xx xxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxxx falešné pozitivní xxxxxxxx se skupinou xxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx (xxx dodatek 3).

1. Xxxxxxxx XXX Xxxx xx xx. (1993)

1.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx primer XXX-1 : 5'-GGG XXX XXX XXX XXX XXX GCC-3'

Reverzní xxxxxx Y-2: 5'-CCC XXX XXX XXX XXX CGT AGG XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA X. xxxxxxxxxxxx = 288 xx

1.2. Xxxxxxx xxxx XXX

1.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx:

1 xxxxxx: i) 2 xxxxxx xxx 96 °C (denaturace xxxxxxxxxx XXX)

35 xxxxx: xx) 20 xxxxxx xxx 94 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 20 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s templátovou XXX)

xx) 30 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 10 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxxxx xxxxxxx)

xx) ponechá xx xxx xxxxxxx 4 °C.

Poznámka:

Tento program xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx xxxxxxxxxxxx Perkin Xxxxx 9600. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých xxxxx xxxxx xx), xxx) x xx).

1.4. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx analýza xxxxxxxxx.

Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx z X. xxxxxxxxxxxx DNA xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx XX xx xxxxxxxx při xxxxxxx 37 °X.

2. Protokol XXX Xxxxxxxx x Xxxxxx (2000)

2.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx primery

Přímý xxxxxx Xx-1: 5'-xxx xxx xxx gca xxx xxx x -3'

Xxxxxxxx xxxxxx Ps-2: 5'-ggg xxx ttc xxx xxx xxx ttg xx -3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX X. solanacearum DNA = 553 bp.

2.2. Xxxxxxx xxxx XXX

Xxxxxxxxx	Xxxxxxxx x xxxxxx	Xxxxxxx xxxxxxxxxxx
Xxxxxxxx XXX	16,025 μx
10x xxxx XXX (1)	2,5 μx	1x (1,5 mM MgCl2)
BSA (xxxxxx X) (10 %)	0,25 μx	0,1 %
Xxxx xXXX (20xX)	0,125 μx	0,1 xX
Xxxxxx Ps-1 (10 μX)	0,5 μl	0,2 μM
Primer Xx-2 (10 μX)	0,5 μx	0,2 μX
Xxx xxxxxxxxxx (5X/μx) (1)	0,1 μx	0,5 X
Xxxxxxxx xxxxxx	5,0 μl
Celkové xxxxxxxx	25,0 μx
(1) Metoda xxxx validována xxxxxxxx Xxx xxxxxxxxxx Perkin Xxxxx (AmpliTaq) x Xxxxx XXX. Xxxxxxxx: Xxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxx termocykler MJ Xxxxxxxx PTC 200 x xxxxxxxxxxx Gibco Xxx Xxxxxxxxxx. Perkin Xxxxx XxxxxXxx x xxxx xxxxx xxx xxxxxx použity ve xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx.

2.3 Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx proces:

1 xxxxxx x) 5 xxxxx při 95 °X (xxxxxxxxxx templátové XXX)

35 xxxxx: xx) 30 sekund při 95 °C (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 68 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx x templátovou XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut při 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx teplotě 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx byl xxxxxxxxxxxxx pro xxxxxxx xxxxxxxxxxxx XX Research XXX 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxx xxxxxxxxx úpravu xxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxx xx), xxx) a xx).

2.4. Xxxxxxxxxx enzymová xxxxxxx amplikonu

Produkty PCR xxxxxxx amplifikací x X. solanacearum DNA xxxxxxxxx zřetelný xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx x xxxxxxx Xxx X xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx teplotě 65 °X. Restrikční xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx mají xxxxxxxx 457 xx x 96 xx.

3. Xxxxxxxx xxx multiplexní XXX x interní xxxxxxxxx (Xxxxxxx et xx., 2002)

3.1. Oligonukleotidové xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AAC XXX XXX XXX XXX XXX XX-3'

Xxxxxxxx xxxxxx XX-1-X: 5'-XXX AGT XXX GGC XXX XXX T-3'

Přímý xxxxxx XX-5-X: 5'-AAC TTA XXX XXX XXX XXX GAA X-3'

Xxxxxxxx xxxxxxXX-6-X: 5'-GCA XXX XXX XXX XXX XXX TGC XXX-3'

Xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxx templátové XXX R. xxxxxxxxxxxx = 718 xx (xxxx primerů RS). Xxxxxxxxx xxxxxxxx amplikonu xxxxxxx kontroly PCR 18X xXXX = 310 xx (xxxx xxxxxxx XX).

3.2. Xxxxxxx xxxx PCR

3.3. Xxxxxxx xxxxxxxx XXX

Xxxxxxx xx xxxxxxxxxxx cyklický xxxxxx:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

35 cyklů: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °C (xxxxxxxxxx templátové XXX)

xxx) 30 sekund při 58 °C (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx XXX)

xx) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxx)

1 xxxxxx: x) 5 minut xxx 72 °C (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) nechá xx xxx teplotě 4 °C.

Poznámka:

Tento xxxxxxx xxx optimalizován xxx xxxxxxx termocykleru MJ Xxxxxxxx PTC 200. Xxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxx cyklu xx), xxx) x xx).

3.4. Restrikční xxxxxxxx xxxxxxx amplikonu

Produkty XXX xxxxxxx amplifikací x XXX R. xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx zřetelný polymorfismus xxxxx xxxxxxxxxxxx fragmentů x xxxxxxx Bsm 1 xxxx Xxxxxxxxxxxxx (xxxx. Xxx 1269 X) xx xxxxxxxxx xxxx 30 xxxxx xxx xxxxxxx 65 °X.

4. Xxxxxxxx PCR xxxxxxxxxx pro xxxxxx X. xxxxxxxxxxxx (Xxxxxxx xx xx, 2001)

4.1. Xxxxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx

Xxxxx xxxxxx Xx-1-X: 5'-ACT XXX XXX XXX XXX ATG XXX XX-3'

Xxxxxxxx primer Xx-1-X: 5'-XXX XXX XXX XXX XXX XXX X-3'

Xxxxxxxx primer Xx-3-X: 5'-XXX XXX GCA XXX TCG CTC-3'

Očekávaná xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX X. xxxxxxxxxxxx:

x Xx-1-X/Xx-1-X = 718 xx

x Xx-1-X/Xx-3-X = 716 xx

4.2. Xxxxxxx xxxx PCR

a) Xxxxxxxx XXX specifický pro xxxxxx 1/2

x) Xxxxxxxx XXX xxxxxxxxxx pro Xxxxxx 3/4/5

4.3. Xxxxxxx xxxxxxxx PCR

Provede xx následující cyklický xxxxxx xxx obě xxxxxx specifické pro xxxxxxx 1/2- x xxxxxxx 3/4/5:

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx DNA)

35 xxxxx: xx) 30 xxxxxx xxx 95 °X (xxxxxxxxxx xxxxxxxxxx XXX)

xxx) 30 xxxxxx xxx 58 °X (xxxxxxxxxxx xxxxxxx s xxxxxxxxxxx DNA)

iv) 45 xxxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx kopie)

1 xxxxxx: x) 5 xxxxx xxx 72 °X (xxxxxxx xxxxxxx)

xx) xxxxxxx xx xxx xxxxxxx 4 °X.

Xxxxxxxx:

Xxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxx xxx xxxxxxx termocykleru XX Research PTC 200. Použití jiných xxxxxxxxx může xxxxxxxxx xxxxxx jednotlivých kroků xxxxx ii), xxx) x xx).

4.4. Restrikční xxxxxxxx analýza amplikonu.

Produkty XXX vzniklé amplifikací XXX X. xxxxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxxx Xx-1-X x Xx-1-X xxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxx s xxxxxxx Bsm I xxxx Xxxxxxxxxxxxx (např. Xxx 1269 1) xx xxxxxxxxx době 30 xxxxx při xxxxxxx 65 °C. Xxxxxxxx XXX xxxxxxx xxxxxxxxxxx x DNA X. xxxxxxxxxxxx pomocí xxxxxxx Rs-1-F x Xx-3-X xxxxxx xxxxx xxxxxxxxxx xxxxx.

5. Příprava xxxxxxxxxx xxxxx

5.1. Bromfenolová xxxx (10 % xxxxxxx xxxxxx)

Xxxxxxxxxxxx modř 5 g

Destilovaná (redestilovaná) xxxx 50 ml

5.2. Xxxxxxxx xxxx

Xxxxxxxx (86 %) 3,5 xx

Xxxxxxxxxxxx xxxx (5,1) 300 µx

Xxxxxxxxxxx (xxxxxxxxxxxxx) xxxx (xxxxxxxxxx) 6,2 xx

6. Xxxx 10x XXXX-xxxxxx-XXXX (XXX), xX 8,0

XXXX 48,4 x

Xxxxxx kyselina xxxxxx 11,42 xx

XXXX (xxxxx xxx) 3,72 x

Xxxxxxxxxxx xxxx 1,001

Xxxx xxxxxxxx se zředí xx 1 X.

Také xxxxxxxx xxxxxxxx (xxxx. xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxxxx).

Xxxxxxx 7

Xxxxxxxxxx xxxxxxx pro XXXX test

1. Xxxxxxxxxx

Xxxxx xxxxxxxxxx xxx X. xxxxxxxxxxxx OLl-1-CY3: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx xxx xxx-3'

Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxx XXX-338-XXXX: 5'-xxx xxx xxx xxx xxx agt-3'

2. Xxxxxxx xxxxxx

[XXXXXXXXXX: FIXAČNÍ XXXXXX XXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXX, XXXXX JE XXXXXXX. XXXXXX XXXXXXXX X XXXXXXXXXXX. DOPORUČUJE XX XXXXXXXX X XXXXXXXXX.]

x) Xxxxxxx xx 9 xx molekulárně xxxxx xxxx (xxxx. Xxxxx xxxx water = (XXX)) xx teplotu xxxxxxxxx 60 °X x přidá xx 0,4 x parafonnaldehydu. Xxxxxxxxxxxxxxxx se xxxxxxxx xx xxxxxxx 5 xxxxx 1X XxXX x xxxxxxxxx xxxxxxxxxxx xxxxxxxxx.

xx) Upraví xx xX na 7,0 xxxxxxxx 1 ml xxxxxxxxxxx xxxxx 0,1 X (XX; xX 7,0) x 5 xxxxx HCl 1X. Xxxxxxxxxxx xx xX xxxxxxxxxx xxxxxxxx x x xxxxxxx potřeby xx upraví pomocí XXx xxxx XxXX. [XXXXXXXXXX: V XXXXXXXXX X XXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXX XXXXX XX!]

xxx) Xxxxxxxxxxx xx xxxxxx přes xxxxxxxxxx filtr 0,22 µx a xxxxxxxx xx xxxxxxxx před xxxxxxx při xxxxxxx 4 °X xx xxxxxxx použití.

3. 3x Xxxxxx

XxXX 2,7 X

Xxxx-XXX 60 xX (xX 7,4)

XXXX (sterilizovaný xxxx xxxxx x xxxxxxxxxxxxx) 15 mM

Zředí se xx x, xxxxx xxxxxxx.

4. Xxxxxxxxxxxx xxxxxx

1x Xxxxxx

Xxxxxx xxxxxxx xxxxxx (XXX) 0,01 %

Xxxxxxxx 30 %

Xxxxx XXX 338 5 xx/µx

Xxxxx XXX-1 xxxx XXX2 5 xx/µx

Xxxxxxxx xx xxxxxxxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx výpočtů x xxxxxxx 1. Pro xxxxx sklíčko (xxxxxxxxxx xxxxxx 2 xxxxx xxxxxx) xx třeba 90 µl xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx. UPOZORNĚNÍ: XXXXXXXX XX VELMI XXXXXXXX, XXXXX XXXXXXXX RUKAVICE X UČINIT XXXXXXXX XXXXXXXXXXXX XXXXXXXX!

Xxxxxxx 1. Xxxxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxx hybridizační xxxxx

Xxxxxxxx:

Xxxxxxx xxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx x xxxxx xxx xxxxxxx -20 °X. Xxxxx použití xx xxxxxx před xxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxx nebo xxxxxxxxxxx světlem.

5. 0,1M xxxxxxxxx xxxx, xX 7,0

Xx₂XXX₄ 8,52 x

XX₂XX₄ 5,44 g

Destilovaná xxxx 1,00 l

Rozpustí xx xxxxxx, zkontroluje pH x xxxxxxxxxxx autoklávováním xxx xxxxxxx 121 °X po xxxx 15 xxxxx.

Xxxxxxx 8

Xxxxxxxxx xxxxx x rajčete

Vysejí xx xxxxxx xxxxxxx (Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx) xxxx xxxxx (Solanum xxxxxxxxx) xx pasterizovaného xxxxxxxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxx x xxxx rozvinutými xxxxxxxxx xxxxxx (10 až 14 xxx) xx xxxxxxx do pasterizovaného xxxxxxxxxx substrátu.

Rostliny xxxxx x xxxxxxx by xx měly xxxxxxxx xx xxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx podmínek:

Délka dne: 14 xxxxx xxxx xxxxxxxxx xxxxx xxx, xxxxx je xxxxx;

Xxxxxxx: xxx: 21 xx 24 °X,

xxx: 14 xx 18 °X.

Xxxxxx xxxxxx lilku xxxxxxxxxxxx: "Xxxxx Xxxxxx"

Xxxxxx xxxxxx xxxxxxx: "Xxxxxxxxxx"

Xxxxxxxxxx: viz xxxxxxxxxxx stránka xxxx://xxxxx.xxxxxx.xx.xxx/Xxxxxx/xxx/xxxxx/Xxxx/xxxx.

XXXXXXXXXX

1. Xxxxx, X.x., X. Xxxxxxxx xxx X.X. Xxxxx. 1990. Fluorescent-oligonucleotide xxxxxxx xx whole xxxxx for xxxxxxxxxxxxx, xxxxxxxxxxxx and enviromnental xxxxxxx xx xxxxxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxx. 172-.762-770.

2. Xxxx. 1998. Xxxxxxx Xxxxxxxxx 98/57/XX xx 20 Xxxx 1998 xx the xxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (Xxxxx) Xxxxxxxx etal. Xxxxxxxx Journal xxxxx Xxxxxxxx Communities X235, 1-39.

3. Boudazin, X., X.X. Xx Xxxx, X. Josi, P. Xxxxxxx xxx X. Xxxxx. 1999. Design xx xxxxxxxx specific xxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx and xxxxxxxxxxx xx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx European isolates. Xxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxx Xxxxxxxxx 105;373-380.

4. Xxxxxx, X., Xxxxxx, X.X., Xxxxxx, M., Xxxxxx, X.X., Collar, X xxx Lopez, X.X. 2002. Xxxxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxx-Xxxxxx Xxxxxxxxxxxxxx Xxxxx Xxxx Xxxx a Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxx xxx sensitive Detection xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxx Xxxxxx. Applied xxx Xxxxxxxxxxxxx Microbiology, 68, 3634-3638.

5. Cook, X., Xxxxxx, E. and Xxxxxxxx, L. 1989. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxxxx solanacearum: detection xx xxxxxxxxxxx xxxxxxxx xxxxxx xxxxxxxxxxxxx xxxx XXX probes tkat xxxxxxx xxxxxxxxx xxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx-Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 1:113-121.

6. Elphinstone, X.X., Xxxxxxxx, X., Wilson, X.X. and Stead, X.X. 1996. Xxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxx of Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx iru xxxxxx xxxxx extracts. XXXX Xxxxxxxx 26; 663-678.

7. Englebrecht, M.C. (1994) Xxxxxxxxxxxx xx x xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx xxx xxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Tn: X.X. Hayward (xx.) Xxxxxxxxx Wilt Xxxxxxxxxx 10, 3-5. Xxxxxxxxxx Xxxxxx for huternational Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxx, Xxxxxxxx, Xxxxxxxxx.

8. Hayward, X.X. 1964. Xxxxxxxxxxxxxxx of Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx. Xxxxxxx xx Applied Bacteriology 27; 265-277.

9. Hayward, X.X., Xx-Xxxxxxx, H.M., Xxxxxxxx, X. xxx Xx Xxxxx, X. 1990. Xxxxxxxxx xx xxxxxxx metabolism in xxxxxxx ofYseudomonas solanacearum. Xxxxxxx of Xxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 69; 269-280.

10. Xxx, X., X. Xxxxxxxx, T. Fujii, X. Xxxxxx, X. Xxxxxx-xxxxx, X. Yoshiwara xxx X. Xxxxx. 1998. Xxxxxxxxx xx xxxxxx xxxxx xx Xxxxxxxxx solanacearum xx xxxx using a xxxx-xxxxxxxxx xxxxxx xxx x PCR xxxxxxxxx. X. Xxxxxxxxxxxxxxx 146-1379-384.

11. Xxxxx, J.D. (1988) X detection method xxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xx symptomless xxxxxx xxxxxx xxx xxxx xxxx on xxx xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxx XXXX/XXXX Xxxxxxxx 18, 343-351.

12. Xxxxx, X.X. 1991. Xxxxx- xxx intra-specific xxxxxxxxxxxxxx xxXxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xxxxx cell xxxxx-xxxx xxxxxxxx. Systematic xxx Applied Xxxxxxxxxxxx 14; 335-345.

13. Kelman, X. 1954. The xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxx xx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx xx colony xxxxxxxxxx xx x xxxxxxxxxxx xxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 44; 693-695.

14. Klement Z.; Xxxxxxx, X and X.X. Sands, 1990. Xxxxxxx in Xxxxxxxxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxx Xxxxx, Budapest, 568 pp.

15. Xxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X. 1987. Xxxxxxx xxx the xxxxxxxxx xx bacterial xxxxxxxx xx xxxxxx. Blackwell xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx Xxx., Xxxxxx. 216 pp.

16. Xxxxx, M.M., Xxxxxx, X.X., Llop, P., Xxxxxx, X., Vicedo, X., Xxxxxx, X., 1997. Xxxxxxxxx enricliment xxxxxxxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx, xxxxxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx of plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xx: X.X. Delme xx xx., (xxx). Xxxxxx Xxxxxxxx Xxxxxxxxxx. xx. 117-121.

17. Xxxxx, X.X., Xxxxxxxxx, X.X., Stephens, X.X. and De Xxxxxx, X.X., 1994. Xxxxxxxx xxxxxxx fingerprints xx xxxxxxxxxxxxxxx Xanthomonas xxx Xxxxxxxxxxx pathovars xxx strains xxxxxxxxx xxxx repetitive xxxxxxxxx xxx XXX. Applied xxx Environmental Microbiology, 60, 2286-2295.

18. Xxxxx, X.X., Fulbright, X. X., Xxxxxxxx, X.X. xxx Xx Xxxxxx, X.X. 1995. Xxxxxxxxxxxxxxx xx xxxxxxx structure xx xxx-XXX xxxxxxxxxxxxxx xx rapidly xxxxxxxx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxx pv. xxxxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxxx 85; 528-536.

19. Opina, X., X. Xxxxxx, X. Xxxxxxxx, J.-F Xxxx, X.-X Li, X. Xxxxxxxxx, X. Xxxxx, X.X. Xxxxxxx, X. Xxxxxxxxxxxxx, X.X. Hong, X.X. Xxxxxxxx, X.X. Xxxxxxx. 1997. A xxxxx method xxx xxxxxxxxxxx xx species xxx xxxxxx-xxxxxxxx XXX xxxxxx xxx XXX xxxxxxx xxx identifying Xxxxxxxxxxxx solanacearum (xxxxxxxxx Xxxxxxxxxxx solanacearum). Xx Xxx. X. Xxx. Xxxx. Biotechnol. 5; 19-33.

20. Xxxxxxx, X.X. xxx Xxxxx, X. 2000. Xxxxxxxxx of X. solanacearum xx xxxxxx xxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxx xxxxxxxx. X. Phytopathology 148; 619-626.

21. Xxxxxxx, K.H., Xxxxxxxxxxx, X.X. xxx Xxxxxx, X. 2002. Xxxxxxxx xxxxxxxx xxx xxxxxxxxx xx Ralstonia xxxxxxxxxxxx by xxxxxxxxx XXX amplification of 16X-23X xxxxxxxxx xxxxxxxxxx xxxxxx xxxxxx with xxxxxxxx xxxxxxxx control. Xxxxxxxx Journal xx Xxxxx Xxxxxxxxx 108, 831-842.

22. Robinson-Smith, A., Xxxxx, P., Xxxxxxxxxxx, X.X. and Xxxxx, X.X.X. (1995) Xxxxxxxxxx xx antibodies xx Xxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, xxx xxxxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx xxxx. Xxxx xxx Xxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxx 7, 67-79.

23. Schaad, X. 2001. Xxxxxxxxxx xxxxx xxx xxxxxxxxxxxxxx xx plant xxxxxxxxxx xxxxxxxx. Xxxxxx [Xxxx.]. - 3. ed.; Xx. Xxxx, Xxxxxxxxx: 373 xx.

24. Seal, X.X., X.X. Xxxxxxx, X.X.X. Xxxxx, xxx X.X. Daniels. 1993. Xxxxxxxxx of Pseudomonas xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas sy xxxx, Pseudomonas pickettii xxx Xxxxx Xxxxxxx Xxxxxxxxx xx xxxxxxx 16X xXXX sequencing: xxxxxxxxxxxx xx xxxxxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxx xxxxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxxxxxx xxxxx xxxxxxxx. J. Xxx. Xxxxxxxxx. 139: 1587-1594.

25. Snith, J.J., Xxxxxx, X.X., Holderness, X. xxx Xxxxxxx, X.X. 1995. Genetic xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx (xxxxxxx Pseudomonas xxxxxxxxxxxx) xxxx 3 xx Kenya. Xxxxxxx xxx Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 61; 4262-4268.

26. Xxxxx, X.X. 1992. Xxxxxxxx xx plant pathogenic xxx some xxxxx Xxxxxxxxxxx xxx. using xxxxxxxx fatty-acid xxxxxxxx. xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx xx Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 42; 281-295.

27. Taghavi, X., Xxxxxxx, X.X., Xxx, XX, Fegan, M. 1996. Xxxxxxxxx of xxx xxxxxxxxxxxx relationships xx xxxxxxx xx Xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx, Pseudomonas xxxxxxx, xxx the xxxxx xxxxxxx xxxxxxxxx xx xxxxxx based xx 16X xXXX xxxx xxxxxxxxx. Xxxxxxxxxxxxx Xxxxxxx of Xxxxxxxxxx Xxxxxxxxxxxx 46; 10-15.

28. Xxx Der Wolf, X.X., Xxxxxxx, X.X.X., Xxxxx, X.X., Hagenaar, X., Xxxxxxx, X., Xxx Xxxxxxxxx, J.R.C., Xxxxxxx, X.X., Xxxxxxxx, X., Xxxxxxxxx, X. 1998. Xxxxxxx diversity xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx Xxxx 3 in Xxxxxxx Xxxxxx xx xxxxxxxxxx xx AFLP, XX-XXXX and rep-PCR. Xx: Xxxxx, X., Xxxxx, X. xxx Xxxxxxxxxxx, X. (xxx.) Xxxxxxxxx xxxx xxxxxxx: Xxxxxxxxx xxx Ecological Xxxxxxx. Xxxxxxxx (Berlin) xx. 44-49.

29. Weller, X.X., Xxxxxxxxxxx, J.G., Xxxxx, X., Xxxxx, X.X. xxx Xxxxxxx, X. 1999. Xxxxxxxxx xx Xxxxxxxxx xxxxxxxxxxxx xxxxxxx xxxxx xx xxxxxxxxx and xxxxxxxxxxxx xxxxxxxxxxx 5' nuclease XxxXxx xxxxx. Xxxxxxx xxx Environmental Xxxxxxxxxxxx 66; 2853-2858.

30. Xxxxxxxx, X.X., X.X. xxx Xxxxxxxxx, X.X. Janse xxx A.D.L. Akkennans. 1998. Detection of X. xxxxxxxxxxxx, xxxxx xxxxxx xxxxx xxx xx xxxxxx, xx xxxxxxxxxxx xx xxxx xxxxxxxxxxxxx with 23x xXXXxxxxxxxx xxxxxx. Xxxx. Xxxxxxx. Xxxxxxxxx. 64: 4546-4554.